1. Microbiologia. Obiectul de studiu. Disciplinile microbiologice si obiectele de studiu.

Etapele istorice de dezvoltare a

microbiologiei. Rolul savantilor A. Leeuwenhoek, L. Pasteur, R. Koch, I.Mecinicov in dezvoltarea microbiologiei.
Obiectul de studiu:
1. mi/o si activitatea lor vitala (forma, structura, metabolism, crestere si multiplicare) identificare
2. relatiile mi/o cu mediul ambiant si cu organismul-gazda
Scopurile studierii mi/o:
1) patogene, oportuniste = prevenire maladii infectioase
2) utile, inofensive = productie AB, medicamente prin ADNrec (streptokinaza, insulina), alimente (unt, brinza)
3) insecticide biologice
4) fabricare plastic biodegradabil ???
5) decompunere deseuri, metan
Disciplini microbiologice:
particularitati biologice mi/o
bacteriologie
virologie
protozoologie
micologie, etc
habitat mi/o
microbiologia solului
... marina
... cosmica
implicatii in activitatea umana
microbiologia medicala
... veterinara
... alimentara, etc
Genetica microbiana
Ecologia microbiana
Microbiologia medicala studiaza:
a) relatia mi/o-gazda umana
b) capacitatile patogene mi/o
c) capacitatile antiinfectioase organism uman
d) metode de diagnostic etiologic al bolilor infectioase
e) metode de terapie/profilaxie antimicrobiana
Etape istorice in dezvoltarea microbiologiei:
I. empirica (pina in sec. 15)
II. morfologica (sec. 16-18)
A. von Leewenhoek: 1673 prima observare si descriere a mi/o
III. fiziologica (sec. 19)
L. Pasteur: prepararea vaccinurilor contra antraxului, turbarii, holerei; sustine necesitatea sterilizarii instrumentelor, bandajelor
R. Koch: introducerea mediilor de cultura solide; izolare agent antrax, tbc; elaborare teorie despre rolul etiologic al mi/o in bolile infectioase
(postulatele lui Koch)
I. Mecinicov: argumentare rolul florei intestinale (antagonism); descoperire fagocitoza si rolul antimicrobian al inflamatiei
2. Tipurile de laboratoare microbiologice si sarcinile lor. Regimul si regulile de lucru in laboratorul microbiologic. Clasificarea
laboratoarelor in functie de exigenta sigurantei antiinfectioase.

3. Notiune de microorganisme. Categoriile taxonomice, tipuri acelulare si celulare. Deosebirile dintre microorganismele
procariote si eucariote.
Mi/o = organisme microscopice (micro-nano- metri) + alge, protozoare, virusuri, agenti subvirali (prioni), cipuerci microscopice (fungi, micete)
Clasificari mi/o:
fenotipica (prima tentativa Carl von Linne)
genotipica
filogenetica (bazata pe studiul fosilelor sau al HLA)
Grupe taxonomice: domeniu regn increngatura clasa ordin familie gen specie
Taxoni infraspecifici din cadrul speciei, care prezinta anumite diferente:
biovar (activitate biochimica/fiziologica)
serovar (structura Ag)
patovar (grad de patogenitate)
lizovar (sensibilitate la bacteriofagi)
antibiovar (sensibilitate la AB)
Rolul taxonilor infraspecifici: markeri epidemiologici!
Clasificare mi/o:
forme acelulare (virusuri, viroizi, prioni)
forme celulare:
bacteria = procariote, eubct
1) G-
2) G+
3) micoplasme (lipsite de PC)
archaea = procariote, PC fara peptidoglican, habitat in conditii extremale
eucarya = eucariote (fungi, protozoare)

1
4. Metodele microbiologice de diagnostic si esenta lor. Metoda microscopica in diagnosticul bolilor infectioase. Tipurile de
microscoape, utilizarea practica, particularitatile si rolul uleiului de emersie.
Metode microbiologice de diagnostic:
diagnostic direct (detectare agent patogen sau a produselor lui)
1. microscopic (orientativ) prezenta bct, nr, forma, structura
2. bacteriologic izolare culturi pure de bct, identificare si testare la AB
3. biologic (experimental) inoculare produs patologic la animale de laborator, provocare maladie tipica
4. depistare Ag mi/o in lichide biologice
5. identificare AN mi/o prin tehnici de biologie moleculara
diagnostic indirect (imunologic)
1. serodiagnostic detectare si titrare Ac specifici in serul bolnavului
2. intradermoreactie introducere alergen microbian epidermal/intradermal; reactie pozitiva = aparitie eritem
hipersensibilitate specifica (intilnire repetata cu Ag)
5. Morfologia bacteriilor. Grupurile morfologice de bacterii. De desenat. Caracterele tinctoriale ale bacteriilor. Colorantii de
baza utilizati in microbiologie. Metodele de colorare. Aplicarea practica.
Bct = mi/o, unicelular, procariot, autonom
Grupe morfologice de bct:
coci:
1. micro
2. diplo (neisseria=bob de cafea, pneumococi=lanceolati)
3. tetra
4. strepto (lant) + enterococcus, lactococcus
5. stafilo (gramezi)
6. sarcine (pachete 8-16-32 coci)
bastonase
1. bacterium capete rotunjite, nu formeaza spori (ex. E. coli)
2. bacillus capete retezate, formeaza spori ce nu depasesc diametrul celulei (ex. B. anthracis); posibilitate formare lanturi =
streptobacili
3. clostridium capete rotunjite, formeaza spori ce depasesc diametrul celulei (ex. C. perfringens)
spiralate/incurbate
1. vibrio (ex. V. cholarae)
2. campylo-/helico- bacter = 2 apire. aspect de pasare in zbor (ex. C. jejuni)
3. spirillum = cel. spiralate rigide
4. spirochaeta = cel. spiralate flexibile, 5-25 spire (ex. Treponema, Leptospira, Borrelia)
polimorfe (Actinomyces, Rickettsia, Chlamydia, Mycoplasma)
6. Etapele si tehnica de pregatire a frotiurilor din culturile bacteriene crescute pe medii lichide. Tehnica de pregatire a
frotiurilor din biosubstrate: sputa si frotiuri amprente. Metodele de fixare.
Pregatirea frotiurilor examen microscopic
Etape in pregatirea frotiului:
1) etalare material microbian
2) uscare
3) fixare oamoara bct, mareste afinitatea pt colorant
4) colorare asigura contrast intre mi/o si fundal
5) examinare (microscop optic cu imersie)
Caracter tinctorial = capacitatea mi/o de a fixa colorantul
7. Etapele si tehnica de pregatire a frotiurilor din culturile bacteriene crescute pe medii solide. Tehnica de pregatire a frotiurilor
din biosubstrate: singe, puroi. Metodele de fixare.

8. Structura celulei bacteriene. Enumerati elementele permanente (obligatorii) si nepermanente (neobligatorii) de structura.
Membrana citoplasmatica si citoplasma. Structura, compozitia chimica si functiile biologice. Metodele de evidentiere.
Elemente permanente: PC, MCt, Ct, nucleoid, ribosomi, mezosomi G+ (E, citocromi)
Elemente nepermanente: capsula, spor, flageli, fimbrii, plasmide, incluziuni celulare
MCt:
mozeic fluid Singer
lipsa colesterol, contin sterol-like molecules hopanoizi
mai bogata in prot. decit eucariotele fctii multiple (la eucariote indeplinite de organite)
PBP catalizare transpeptidare si sinteza PC
permeaze transport
prot. sist. de secretie
receptori
E lant respirator
Rol MCt:
1. Bariera semipermeabila, selectiva difuziune simpla, facilitata
2. Permeaze transport activ
3. E activitate metabolica
4. Metabolism energetic
5. Participa la diviziunea celulara
6. Sinteza PG si fosfolipidelor
7. Chemotaxis (R specifici)
Mezozomi: cresc S MCt cresc activitatea metabolica, energetica
2
Ct:
Lipsesc organitele
Prezenta: ribozomi, nucleoid, inclusiuni, plasmide
pH acid
Rol Ct: sediul proceselor metabolice
9. Peretele celular bacterian, functiile. Particularitatile de structura ale peretelui celular al bacteriilor gram pozitive. Coloratia
Gram. Tehnica si mecanismul de colorare. Importanta practica. Exemple de bacterii gram pozitive.
PC = invelis rigid ceinconjoara protoplastul; e constituit din PG.
PG = mureina = heteropolimer macromolecular, format din 2 parti:
Partea glicanica (PZ) = catene liniare paralele: NAG + NAM
Partea peptidica = peptide 4*aa (izoforme D si L) legate de NAM protectie de proteaze
G-: tetrapeptidele unite direct (bidimensional)
G+: tetrapeptidele unite prin punti interpeptidice 5*Gly (tridimensional)
Structuri prezente doar la procariote:
1. ac. diaminopimelic (tetrapeptid, la G+)
2. izoforma D aa
3. NAM
Fragmente solubile de mureina (PG) interactiune cu toll-likeR/CD14R de pe macrofage secretie citokine soc septic!
Rol PC:
1. Protectie de liza osmotica
2. Forma
3. Factor de patogenitate (soc septic)
4. Protectie contra subst. toxice (AgO, E din spatiul periplasmatic)
5. Tinta de atac a unor substante:
Lizozim scindare legaturi din catena glicanica (intre NAG si NAM)
AB inhibitie proces de transpeptidare
PC G+:
Componente:
PG (tridimensional) 40-80%
ac. teichoici (fixati de NAG), ac. lipoteichoici (fixati de MCt) = polimeri de ribitol, glicerol-fosfat;
o sarcina electrica negativa
o transfer de ioni
o fctie Ag
o activare complement pe cale alternativa
o stimulare secretie citokine
o adeziune intercelulara
prot. asociate PC
o Streptococcus pyogenes = prot. M
o Staphylococcus aureus = prot. A (clumping factor), prot. fixatoare de fibronectina
Uniform
Grosime 80 nm

10. Peretele celular bacterian, functiile. Particularitatile de structura ale peretelui celular al bacteriilor gram negative. Coloratia
Gram. Tehnica si mecanismul de colorare. Importanta practica. Exemple de bacterii gram negative.
PC G-:
Componente:
PG (bidimensional) 1-10%
MEx: existenta situsuri de comuniune intre MEx si MCt rol in transport
o Prot. majore: porine, receptori (pili, fagi)
o Prot. minore: E de captare si transport a subst.
LP Braun = uneste Mex si PG stabilizare MEx
LPZ (cel mai neobisnuit component) stabilizare MEx
o Lipid A localizat in MEx; endotoxina (stimuleaza secretia citokinelor)
o Miex PZ transport unele subst.; AgR specificitate de gen
o Lant O (OZ) sarcina negativa, impiedica fagocitoza; AgO specificitate de specie
N.B. Bct au capacitatea de a modifica structura AgO capacitate de a amagi apararea imuna
Neomogen
Grosime 12 nm
Spatiul periplasmatic: E si prot. fixate de MCt
Rol e: hidroliza, sinteza PC, detoxifiere (ex. Beta-lactamaze)

Coloratia GRAM
1. Violet de gentiana Ct violeta
2. Spalare cu apa, tratare cu sol. Lugol (iodin) formare complex insolubil violet-iodin fixare colorant in celule
3. Tratare cu alcool 95%
o eliminare colorant din bct G- pori mai mari in PG, continut mai mare de lipide (solubile in alcool), pH slab acid
o mentinere colorant in bct G+ pori mai mici, continut scazut de lipide alcoolul dehisrateaza peretele si reduce diametrul
porilor
4. Recolorare cu fuxina apoasa
3
Rezultat: G-: rosu, G+: violet
Utilizarea coloratiei Gram: Diagnostic, Sensibilitate la AB
Forme particulare, osmotic sensibile:
Protoplast = G+, fara PG
Sferoplast = G-, MCt+MEx, partial fara PG
Forme L = bct lipside de PC, din cauza AB, (i)reversibile
Mycoplasma lipsite de PC, osmotic rezistente rezistenta marita MCt; forma pleiomorfa

11. Particularitatile de structura si compozitia chimica a peretelui celular al bacteriilor acidorezistente. Coloratia Ziehl-Neelsen.
Componentele, tehnica si mecanismul de colorare. Exemple de bacterii acidorezistente.
Coloratia Ziehl-Neelsen:
1. Colorare cu fuxina fenicata + incalzire lama pina la aparitia vaporilor
2. Spalare cu apa, tratare cu sol. ac. sulfuric 5%
3. Spalare cu apa, recolorare cu albastru de metilen
Rezultat: Acidorezistente: rosu; Acidonerezistente: albastru

12. Aparatul nuclear al bacteriilor. Compozitia chimica si functiile biologice. Metodele de evidentiere. Plasmidele bacteriene,
tipurile si functiile lor.
Aparatul nuclear = nucleoid, ADN bicatenar circular 1 crs
N.B. date recente ca V. cholerae contine > 1 crs
ADN: pliat n bucle, stabilizat prin ARN i proteine (diferite de histone). Fiecare bucl hiperspiralizat sub aciunea ADN-girazei i
topoizomerazei IV (se ntlnesc doar la bacterii). Pe ADN sunt fixate enzime de sintez (ADN - , ARN polimeraze).
Metode speciale de colorare (Feulgen): HCl.aldehida.react. Shiff.culoare rosie ???

Plasmide: elemente genetice (ADN) extracromozomiale, capabile de replicare autonom. Confer bacteri ei caractere suplimentare. Se transmit
celulelor-fiice la diviziunea bacteriei. Plasmidele conjugative F se transmit prin conjugare.
Episom - plasmida integrat
integrat n cromosom
Tipuri de plasmide:
F factor de fertilitate, conjugative (sinteza pililor F)
R rezisten la antibiotice
Ent producerea enterotoxinei
Hly producerea hemolizinei
Col producerea de bacteriocine
Utilizarea practic: n tehnologii de ADN-recombinant

13. Sporii bacterieni. Compozitia chimica si functiile biologice. Etapele sporogenezei. Amplasarea sporului in celula. Exemple de
specii patogene sporulate, de desenat. Metodele de evidentiere a sporilor.
Bacterii sporogene, G+: Bacillus, Clostridium.
F. vegetativa = activa metabolic
Spor:
Inactiv metabolic
Coninut sczut de ap liber
Coninut mare (pn la 10%) n dipicolinat de calciu
Rezistent la temperaturi i pH extreme, desicare, radiaii, ageni chimici i fizici
n condiii favorabile sporul germineaz, dezvoltndu-se forma vegetativ.
Forma sporului (sferic, oval) i poziia n celul (central, subterminal, terminal) sunt caractere utile n identificarea bacteriilor.
Pozitia sporului in celula: central; subterminal; terminal; terminal, cu deformarea celulei
Structura sporului:
exospor
tunica externa = straturi proteice rezistenta la subst. chimice (ex. apa oxigenata)
tunica interna ???
cortex = PG inlaturare osmotica a apei dehidratare
PC sporal
protoplast = nucleoid + ribosomi + E de reparare ADN
15% masa uscata spor = dipicolinat de Ca, localizat in protoplast stabilizare ADN
ADN asociat la DNA binding proteins protectie contra temperaturii inalte, radiatiilor, desicatiei

Stadiile sporogenezei (durata 36-72 ore); stimul carenta alimetara

Stadiul I se formeaz filamentul axial, compus din ADN
Stadiul II divizarea asimetric a citoplasmei printr-un sept, formarea presporului,
presporului, care conin
conine un filament de ADN. MCt nglobeaz
presporul.
Stadiul III nglobarea complet a presporului, care este limitat de 2 membrane
Stadiul IV formarea cortexului de PG ntre cele 2 membrane
Stadiile V-VI formarea tunicii proteice la exterior i maturarea sporului. Uneori se formeaz un nveli extern suplimentar - exosporiu
Stadiul VII sporul matur este eliberat iar celula-mam se dezintegreaz
Germinarea sporului: activare (reversibil); germinatie; crestere
Evidenierea sporilor:
sporilor: colorarea dup AUJESZKY

14. Capsula bacteriilor. Compozitita chimica si functiile biologice. Metodele pozitive si negative de colorare a capsulei. Exemple de
bacterii capsulate, de desenat.
Capsula formata din polimeri organici sintetizati in mediul natural de existenta al bct.
4
Se disting:
Capsula adevrat (peste 0,2
0,2m), vizibil la microscopul optic
Microcapsula,
Microcapsula, detectat la microscopul electronic
Capsula flexibil (slime, glicocalix), o reea lax de fibre poliz
polizaharidice, care difuzeaz n mediu. Nu se evideniaz microscopic.
microscopic. Asigur
Asigur
formarea biofilmelor bacteriene ansamblu structurat de celule bacteriene nglobate ntro matrice de polimeri de origine bacterian, care
poate adera la suprafee inerte (ex.: cateter, stimulator cardiac, endoproteze, sonde de intubare, etc) sau esuturi vii.
Compoziia chimic:
chimic: ap i substane organice (poliz
(polizaharide, mucopolizaharide, peptide)
Bacillus anthracis acid glutamic
Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae PZ
Streptococcus pyogenes acid hialuronic
Funciile capsulei:
capsulei:
1. Impiedic desicarea bacteriei ([apa] marita)
2. Barier de permeabilitate pentru substane toxice (antibiotice
(antibiotice,, ioni metalici)
3. Barier protectoare faa de factori antiinfecioi (complement, fagocite), bacteriofagi, protozoare
4. Rezerv nutritiv
5. Aderarea bacteriei la substrat esuturi sau suporturi inerte
6. Specificitate Ag de specie sau tip (Ag
(Ag K)
K)
S. pneumonia: patogenitate marita in prezenta capsulei
Evidenierea capsulei
Coloraia Burri-Hinss coloratie negativ
Pe lam se amestec suspensia bacterian cu tu de China, se etaleaz, se usuc
Frotiul se fixeaz cu alcool
Se coloreaz frotiul cu fucsin apoas
apoas
Rezultatul:
Rezultatul: capsula apare ca un halou incolor pe fondul negru. Citoplasma bacteriilor se coloreaz n rou.
Coloraia Romanovski Giemsa (capsula se coloreaz n roz) coloraie pozitiv

15. Flagelii. Structura si compozitia chimica. Clasificarea bacteriilor dupa amplasarea si numarul flagelilor. Metodele directe de
studiere si evidentiere a flagelilor. Coloratia Loeffler. Pilii bacterieni, tipurile.
Flageli = structuri filamentoase proteice.
Rol: mobilitate; Ag H
Tipurile de bacterii dup dispoziia flagelilor
monotriche (Pseudomonas)
lofotriche = un mnunchi de flageli la o extremitate (Spirillum)
amfitriche = cte un flagel sau un mnunchi de flageli la fiecare extremitate
peritriche = flageli pe toat suprafaa celulei (Proteus vulgaris)
La spirochete flagelii se plaseaz n spaiul periplasmic flageli interni, periplasmatici.
Structura flagel
1. filament = helicoidal, alcatuit din flagelina
2. cirlig de articulatie
3. corp bazal
G+
inel intern (MCt)
inel extern (PG)
G-
disc M (Mct)
disc S (spatiu periplasmatic)
disc P (PG)
disc LPZ (MEx)
Sinteza flagel = proprietate de autoasamblare
Rotire flagel E. coli = 270/s
Motilitatea e determinate de chemotaxis. Bct nu allege directia de miscare, cid oar determina daca trebuie sau nu sa continuie miscarea in aceeasi
directie.
Evidentierea flagelilor:
microscopie electronic
coloratie Loeffler (mordansarea cu tanin, sruri de aluminiu, fer, apoi colorarea cu fucsin sau albastru de metilen)
Pilii comuni (fimbriile) elemente proteice fine, rigide, scurte, pe bct G-.
Structura: prot. pilina, fixate de MEx. Numrul fimbriilor per celul:
celul: sute.
Rol pili:
1. adeziunea bacteriilor la suprafee inerte, la celule sau alte bacterii
2. Ag F
Pili conjugativi structuri capiliforme de natur proteic, prezeni n numr de 1-10 per celul (codificati de plasmide conjugative F).
Rol pili conjugativi:
1. transferul de ADN prin conjugare
2. R pentru unii bacteriofagi
Evidenierea pililor:
pililor: microscopia electronic

16. Metodele indirecte de studiere a mobilitatii bacteriilor. Pregatirea preparatelor native. Metodele de examinare. Principiul
microscopiei cu fond negru si contrast de faza.
Studierea preparatelor native pictur suspendat sau ntre lam i lamel (microscopia cu contrast de faz sau pe fond negru).
nsmnarea culturii bacteriene n medii semisolide (se
(se observ
observ turbiditate) .

5
Creterea culturii n vl pe suprafaa mediului solid.

17. Granulatiile de volutina. Compozitia chimica si functiile biologice. Metodele de evidentiere. Coloratia Loeffler si Neisser.
Mecanismul si tehnica de colorare. Exemple de bacterii cu granulatii de volutina. Importanta practica.
Tipuri de incluziuni Ct:
glicogen sau PHB (poli-beta-hidroxibutirat)
vacuole de gaz plutire (ex. cianobacterii)
magnetosomi = incluziuni de Fe sub forma de magnetit --. orientare in cimpul magnetic al pamintului
granule de volutina (polimetafosfat) = granule metacromatice
La tratarea cu unii colorani bazici granulele de volutin se coloreaz n alt culoare, de ex. n rou-violet la colorarea cu albastru de metilen
fenomenul metacromaziei.
Rol granule de volutina:
1. rezerva energetic
2. sursa de fosfati sinteza AN
3. scadere presiune osmotic
Interesul medical:
medical: la agentul
agentul difteriei, Corynebacterium diphtheriae, granulele de volutin se localizeaz la extremitile celulei, iar la
corynebacterii nepatogene sunt repartizate neuniform n citoplasm.
Evidenierea:
Evidenierea: metoda Loeffler, metoda Neisser

18. Morfologia si ultrastructura spirochetelor. Clasificarea. Metodele de studiere. Speciile patogene si diferenierea lor.
Sunt germeni helicoidali,mobili.au corpul compus din mai multe spire. Miscarile sunt datorate unui aparat locomotor,care consta din fibrile
dispuse pe toata lungimea corpului intre perete si membrana. Peretele este elastic, format din glucide, lipide, polipeptide. Nu sunt rezistente in
mediul extern. (Nu rezista la variatii de temperatura,sunt sensibile la peniciline si cefalosporine)
Familia Spirochaetaceae, cuprinde 3 genuri, toate avind importanta in patologia umana.
1. Genul Treponema(se subdivid in specii patogene,si saprofite.)Cele patogene...
Treponema pertenue
Treponema carateum
Treponema pallidum
2. Genul Leptospira
Din specii saprofite.Leptospira biflexa
Din specii patogene-L.Icterohaemorrhagiae(rezervorul soarecele)
-L.grippotyphosa(rezervorul soarecele)
-L.pomona(rezervorul porcul)
-L.canicola(rezervorul cainele)
3. Genul Borrelia
Patogenitatea.
Treponema este patogena prin multiplicarea intracelulara si prin invazivitate.Boala se numeste Sifilis.
Leptospirele sunt patogene prin multiplicare.Produc boala numita Leptospiroza,care este o antropozoonoza.
Borrelia sunt patogene prin multiplicare si invazivitate.Produc borrelioze,care sunt boli generalizate.
Caractere morfologice
Treponema. Are 10-15 spire regulate, rigide cu capetele drepte. Intre perete si membrana are fibrile, care ii confera mobilitate,prezinta
miscari de rotatie si flexie. Se coloreaza Giemsa slab,dar se coloreaza prin impregnare argentica, coloratia Fontana-Tribondeau,
germenii apar bruni pe fond bej.
Leptospira. Corpul are 10-12 sppire,nedeformabile,mici,regulate,cu capete rasucite. Aparatul locomotor este alcatuit dintr-o singura
fibrila dispusa intre membrana si perete,care este foarte elastic. Se coloreaza Giemsa,dar foarte greu. Nu se coloreaza cu Gram
Borrelia. Corpul alcatuit din 5-6 spire neregulate sideformabile in cursul miscarilor,avind capete drepte.
Aparatul locomotor este alcatuit dintr-un manunchi de 30 de fibrile dispuse intre membrana si perete
Se coloreaza Gram,fiind Gram-negative

19. Morfologia si ultrastructura micoplasmelor si chlamidiilor. Metodele de studiere. Speciile patogene.

Micoplasmele sunt bacterii:
Delimitate numai de o membrana trilaminata si lipsite de perete celular rigid ca si de informatia genetica necesara sintezei
precursorilor specifici peretelui.
Forme mici si polimorfe
Se cultiva pe medii acelulare ,iar cultura este inhibata de anticorpii specifici.
Se inmulteste intr.un ciclu care include alternativ,elongarea si fragmentarea unor forme filamentoase in forme cocoide si diviziunea
acestora.
Se examineaza in functie de localizarea infectiei,sputa sau exudatul nazofaringian,urina,prelevate prin laparoscopia pelvina. Microscopia directa
este fara valori,coloratiile uzuale nu pot depista micoplasmele din cauza dimensiunilor reduse...iar coloratia imunofluorescenta nu a dat rezultate
satisfacatoare.
Izolarea si identificarea. Coloratia Dienes,coloniile de micoplasme se coloreaza in violet si acoperite cu o lamele pot fie examinate cu imersie.
Specii patogene. Din cele 80 de specii de Mzcoplasme,gazduite de cele mai diverse vertebrate,omul gazduieste numai 10,din care doar 3 sunt
patogene. Din cele 3 specii= M. Genitalum (tractul urogenital inferior) M. hominis, M. Pneumoniae (cai respiratorii).
Chlamidiile sunt minuscule bacterii cocoide, parazite energetic, total dependente de ATP-ul oferit de celula gazd, dar capabile de biosinteze
proprii. Nu cultiv pe medii artificiale. Se reproduc lntr-un ciclu complex In care identificm: forma infectiva extracelular, corpul elementar cu
diametrul de 200300 nm i perete gros, endocitat de
celula gazd, unde se transform in forma vegetativ, corpul reticulat. Acesta crete pn la 6001000 nm in diametru i se divide repetat,
formnd microcolonii (incluziuni citoplasmice) in care corpii reticulai se matureaz in noi corpi elementari eliberai prin liza celulei gazd.
Microscopia este cea mai uzual metoda de diagnostic direct al infeciilor cu C.trackomatiSy biovarul trahomului. Se urmrete prezena
incluziunilor citoplasmice prin coloraia Giemsa, coloraia cu iod sau coloraia imunofluorescent.
6
Coloraia Giemsa are sensibilitate bun pentru diagnosticul trahomului in faza acut i al conjunctivitelor neonatale. Este mai puin
satisfctoare pentru diagnosticul trahomului In faza cronic, a conjunctivitei, uretritei i cervicitei cu incluziuni. Nu are valoare pentru
diagnosticul limfogranulomatozei veneriene i a infeciilor cu C. pneumoniae sau C. psittaci.
Coloraia cu soluie Lugol este cel mai puin sensibil, pentru c glicogenul apare in matricea incluziunilor numai lntr-o anumit faz a ciclului
evolutiv. Poate da rezultate fals pozitive din cauza prezenei glicogenului n celulele scuamoase. Are indicaii pentru triajul suspecilor in zonele
cu trahom endemic.
Coloraia imunofluorescent cu anticorpi monoclonali specifici de specie este cea mai sensibil i specific metod. Depisteaz nu numai
incluziunile citoplasmice, ci i corpii elementari prezeni in exsudate sau epicelular.

20. Notiuni de sterilizare, obiect steril si nesteril. Sterilizarea cu vapori fluizi si sub presiune. Obiectele si regimurile sterilizarii.
Controlul eficienei sterilizrii.

Sterilizarea este distrugerea sau indepartare tuturor microorganismelor,inclusiv a sporilor.

Sterilizarea prin caldura umeda,se face cu ajutorul autoclavului prin vapori sub presiune,care realizeaza 115C,la 0,5atmosfere,121C la o
atmosfera si 134c la 2 atmosfere.
Autoclavul este un cazan cu pereti rezistenti in care dupa inchiderea cu un capac masiv,presat cu buloane sau sistem cabestan,vaporii de apa se
comprima la presiunea necesara sterilizarii.
Autoclavele cu peretele simplu pot fi verticale si orizontale.Se sterilizeaza sticlaria pentru culturi de celule si aparatele de filtrare.
Procedura
Se toarne apa in cazan,pina la 2-3 cm,prin incinta de sterilizare
Se aseaza pe suport obiectele de sterilizat in ambalajul lor.(flacoane,eprubete,cosuri din sirma,cutii,casolete...)cu capacele semideschise
Se inchide etans capacul autoclavului
Se conecteaza sursa de caldura
Se deschide robinetul pentru evacuarea aerului.dupa ce aerul este complet evacuat din incinta de sterilizare...
Se inchide robinetul de evacuare a aerului
Cind presiunea ajunge la valoarea aleasa se regleaza sursa de caldura,pentru a mentine o presiune constanta,pe toata durata timpului de
sterilizare.
Se intrerupe sursa de caldura,pentru a se raci aparatul,se deschid lent robinetul de vapori,apoi capacul.
Se lasa materialele pentru uscare in autoclava deschisa

21. Notiuni de sterilizare, obiect steril si nesteril. Sterilizarea cu aer fierbinte. Obiectele si regimurile sterilizarii. Controlul
eficienei sterilizrii.
Sterilitate este distrugerea sau indepartarea tuturor microorganismelor, inclusiv al sporilor.
Obiect steril- obiect care a fost prelucrat special si au fost distruse sau indepartate toate microorganismele(inclusiv sporii) de pe el si la
insamantare prezinta lipsa cresterii.
Obiect nesteril- obiect care a intrat in contact cu mediul inconjurator sau cu bolnavul si care la insamantare prezita prezenta crestii
Sterilizarea cu aer fierbinte(cald):
Indicatii: Obiecte din sticla (eprubete, flacoane, pipete) sau din portelan (mojare, pistile), seringi Luer din sticla, instrument chirurgical,
substante grase, pulberi termostabile.
Se realizeaza in etuva la temperature de 160-180 grade Celsius timp de o ora. Suplimentar inca o ora in cazul ambalajelor voluminoase sau
obiectelor care se incalzesc greu. Etuva e o incinta cilindrica cu pereti dubli din table termoizolati.Un thermostat care mentine temperature. Un
sistem de ventilare care uniformizeaza temperature.
Procedura: Obiectele sterilizarii se pun pe rafturi cu spatii intre ele pentru libera circulatie al aerului cald. Se inchide etuva. Se deschid orificiile
de ventilare si se conecteaza la retea. Se marcheaza timpul de sterilizare. Obiectele se scot numai dupa racirea aparatului.
Controlul eficientei sterilizarii: 3 tipuri de indicatori; fizici (manometru, termometru), chimici (floare de sulf (autoclave) se topeste la 115
grade C, acid benzoic(autoclava) se topeste la 121-122 grade C, tiouree (etuva) se topeste la 180 grade) si biologici: tuburi cu fire de bumbac cu
spori, dupa sterilizare se insemanteaza.

22. Notiuni de sterilizare, aseptica si antiseptica. Metoda mecanic de sterilizare. Aplicarea practica. Tipurile de filtre.
Conservantii.
Asepsia inseamna manipularea la adapost de microorganism. Antisepsia inseamna distrugerea microorganismelor de pe instrumentele de
manipulare.
Filtrarea este trecerea unui fluid printr-un corp poros filtru.Filtrele cu porozitati convenabilepot debarasa de microorganism fluidul filtrate,
acestea fiind retinute mechanic si electrostatic in porii filtrului.
Se aplica pentru sterilizarea aerului, a unor medii de cultura pentru microbe, a medicamentelor care nu suporta incalzirea.
Tipuri de filtre: Clasice Din portelan, sau pamant de infuzorii cu forma unor lumanari goale pe dinauntru si inchise la un capat (bujii filtrante)
placi filtrante din azbest impregnate cu caolin (filter Seitz sau sticla poroasa (filter Schott). Sau membrane filtrante din acetat de celuloza cu
porozitati intre 8 si 0,025 m. Filtrarea se face prin aspiratie sau presiune pozitiva(adaptata la o seringa). Pentru a evita colmatarea porilor
suspensiile cu densitate mare a particulelor sunt prefiltrate printr-un material fibros sau granular.
Conservanti (agenti chimici) Substante utilizate la pastrarea preparatelor
Substanta Domeniu de utilizare Concentratia%
Fenol Seruri immune, Vaccinuri 0.3-0,5 %
Mertiolat de Sodiu Seruri immune, preparate injectabile 0,004-0,02
Feniol +mertiolat Seruri immune, Colire 0,2+0,005 ; 0,002+0,01
Benzoat de sodium Unguente, Emulsii, Alimente 0,2-1
Conservarea prin agenti fizici: Pasteurizarea - Incalzirea la 62-85 distruge formele vegetative si nu sporii. Refrigerarea imediata la 4C prin
soc termic completeaza efectul microbicid. Refrigerarea la 4c se foloseste pe larg.
Congelarea - Efect antimicrobian minim la racirea sub punctual eutectic (-21,3C) seevita formarea cristalelor de ghiata. Sau in azot lichid (-
196C). Liofilizarea - Desicarea se foloseste in microbiologie pentru conservarea indefinite al tulpinilor unor bacteria sporulate. Liofilizarea se
foloseste pentru conservarea microorganismelor, serurilor immune si al unor reactivi biologici. In esenta e o criodesicare.

7
23. Metabolismul microbian. Particularitile. Enzimele bacteriene. Clasificarea, rolul in fiziologia microbian. Aplicarea practic
in microbiologie.
Metabolismul bacterian = ansamblu de reacii biochimice care au loc n celula vie, format din cata- si ana- bolism.
Particularitile metabolismului bacterian:
1. metabolism unicelular, necompartimentat (toate procesele metabolice intr-o singur celul)
2. foarte flexibil, diverse ci metabolice (adaptare rapida la condiiile mediului)
3. foarte intens (viteza reaciilor este mare)
4. produsele intermediare din procesele catabolice pot fi utilizate direct n calitate de precursori pentru reaciile anabolice (amfibolism)
5. prezenta catalizatori proteici specifici enzime
Caracter special al E bct: active n limite largi de temperaturi (0-65C) i de pH (2-9)
Clasificare E:
Constitutive, permanente
Inductive, adaptive, se sintetizeaz n prezena substratului (ex.: lactaza)
Represive, sinteza lor este inhibat de acumularea n exces a produsului reaciei catalizate
Dup locul de aciune (exoenzime, endoenzime)
Dup tipul reaciei catalizate (oxido-reductaze, hidrolaze, transferaze, liaze, izomeraze, ligaze)
Dup impactul asupra ma/o
Enzime metabolice
Enzime de patogenitate (hialuronidaza, colagenaza, plasmocoagulaza, hemolizina, fibrinolizina, lecitinaza)
Importana practic a studierii enzimelor
1. Identificarea i clasificarea bacteriilor (enzimele determin activitatea biochimic specific a bacteriilor)
2. Substrat pt unele AB
3. Determinarea mecanismelor patogenezei infeciilor (unele enzime sunt responsabile de producerea leziunilor n esutul gazdei)
4. Aplicarea industrial a enzimelor
24. Nutriia bacteriilor. Tipul nutriiei si mecanismele transportului nutrienilor in celula bacterian. Clasificarea m/o dupa
sursele de carbon. Notiune de m/o saprofite si parazite.
Nutriia modalitile prin care bacteriile asimileaz din mediu substanele necesare pentru metabolism.
Modul (tipul) de nutriie = absorbtiv.
Nutritii se obtin prin solvire (sruri minerale, CO2, O2) sau dup o digestie prealabil (proteine, polizaharide, lipide).
Digestia: G+ extracelular; G- n spaiul periplasmic
Transportul transmembranar:
1. Difuzie simpl: O2, CO2, AG, nutrieni liposolubili
2. Difuzie facilitat (permeaze): molecule mari
3. Transport activ (proteine de transport specifice = ABCtransportori)
4. Translocaie substratul este modificat (ex.: fosforilat) n timpul transportului membranar; necesit energie.
5. transport Fe = secretie siderofori
Excreia metaboliilor difuzie, proteine de transport, liza bacteriei
Necesitile nutritive ale bacteriilor
Necesiti elementare, de baz: C, H, O, N n cantiti importante, S, P, Fe, Ca, Mg, K n cantiti mici i urme de Co, Cu, Zn, Mo
Necesiti specifice:
bct prototrofe = capabile a-i realiza integral sinteza metaboliilor eseniali
bct auxotrofe - solicit suplimentar compui organici preformai (factori de cretere), care nu pot fi sintetizai de bacterie
(ex.: AA, baze purinice, pirimidinice, vitamine). Prezena lor n mediul de cultur este indispensabil creterii acestor
bacterii.
Clasificarea bacteriilor dup sursa de carbon
Bacterii autotrofe utilizeaz CO2 ca unic surs de carbon (nepatogene)
Bacterii heterotrofe utilizeaz carbonul din compuii organici (glucide, acizi grai, alcooli, etc)
Bacteriile care utilizeaz materia organic moart sunt saprofite (reciclarea materiei organice)
Bacteriile parazite (obligate, facultative) triesc pe contul organismelor vii, aducndu-le prejudicii
Bacteriile patogene reprezint parazite care afecteaz grav gazda, provocnd maladie sau moarte.

25. Clasificarea m/o dupa sursele de energie. Mecanismele de obtinere a energiei la bacteriile chemoorganotrofe. Clasificarea m/o
dupa tipul de respiratie. Exemple.
Clasificarea bacteriilor dup sursa de energie
fototrofe utilizeaz energia solar (fotosint)
chemotrofe folosesc energia degajat din reaciile chimice de oxido-reducere. Ele necesit un substrat donor de hidrogen (e- i H+)
i un substrat acceptor de hidrogen.
chemolitotrofe donorul de H = substan anorganic
chemoorganotrofe donorul de H = substan organic (glucoza, lipide...)
Bacteriile patogene sunt chemoorganotrofe
Mecanismele de obinere a energiei la chemoorganotrofe n funcie de acceptorul final de H :
Respiraie aerob. Acceptorul final este oxigenul gazos. Implic lanul respirator de transport al electronilor asociat MCt. Produs
final H2O sau H2O2 .
Respiraie anaerob. Acceptori finali compui anorganici (nitrat, sulfat, S). Transportul de electroni prin lanul respirator.
Produse finale nitritul, amoniacul, sulfura (n prezena O H2O2).
Fermentaie. Substratul organic este metabolizat fr intervenia unui agent oxidant extern. Const n procese de ox-red care
realizeaz numai o oxidare parial a substratului, donorul i acceptorul de H + fiind substane organice. Astfel se ajunge de la un

8
 substrat mai redus la o molecul mai oxidat (ex.: fermentare lactic, fermentare alcoolic, acid mixt, acetoinic, etc).
Fermentaia se poate desfura n prezena O2, dar fr intervenia acestuia.
Clasificarea bacteriilor dup sursele de energie i carbon: fotoautotrofe (energie solar, CO2); fotoheterotrofe (en. sol., subst.org);
chemoautotrofe; chemoheterotrofe (chemolitoheterotrofe, chemoorganoheterotrofe).

26. Cresterea si multiplicarea bacteriilor. Fazele multiplicarii culturilor periodice (discontinue) de bacterii. Cultivarea bacteriilor
si conditiile (principiile) necesare pentru cultivare.
Creterea mrirea coordonat a masei i volumului structurilor bacteriene ca rezultat al proceselor de sintez.
Multiplicarea creterea numrului de celule pe o unitate de suprafa sau de volum.
Diviziune binar; nmugurire (levuri, ciuperci levuriforme); Autoreproducere (virusuri); Spori (micete); Fragmentare (actinomicete)

Ciclul celular procesele care au loc de la formarea celulei pna la urmtoarea diviziune.
Faza C replicarea ADN
Faza G de laten, segregarea cromozomilor
Faza D de diviziune, formarea septului
Replicarea ADN depinde de masa critic a celulei, iar separarea cromozomilor i diviziunea intervin n momentul cnd celula atinge o lungime
limit.
Perioada dintre 2 diviziuni reprezint timpul (perioada) de generaie (TG). Durata TG depinde de specie i de condiiile de cretere (condiii
optime vitez maxim).
Creterea bacteriilor n laborator cultivare izolare
Rolul izolarii bct:
1. Identificarea mi/o (scop de diagnostic)
2. Testatea sensibilitii lor fa de AB
3. Obinere produi de biosintez (AB, aa), bioconversie (hormoni steroizi), fermentare (alcooli, acizi organici, etc), producerea
vaccinurilor, probioticelor...
Pentru cretere bacteriile au nevoie de nutrieni i condiii fizico-chimice adecvate.
Condiiile (principiile) de cultivare: Surs nutritiv adecvat; Surs de energie; Ap; Temperatura potrivit; pH adecvat; Concentraie optim a
oxigenului i a CO2; Presiune osmotic adecvat
Temperatura de cretere
Exist temperaturi minime, maxime i optime de dezvoltare a bacteriilor. n raport cu temperatura optim deosebim:
psichrofile t optim 10-20 C. Cresc i la 0 C.
mezofile optimum 30-37 C (limite 15-45 C)
termofile optimum 50-60 C (pn la 95 C)
hipertermofile (cresc la 70110 C)
pH
neutrofile (majoritatea, inclusiv cele patogene) pH 6-7,5
acidofile pH 2-6 (Lactobacillus)
alcalofile pH >8 (Pseudomonas, Vibrio)
Presiunea osmotic
halotolerante (osmotolerante) cresc n concentraii reduse de NaCl (mediu izotonic cu mediul intern al gazdei) mi/o patogene
halofile prefer concentraii mari de NaCl (1-30%) stafilococi, vibrioni (Vibrio parahaemolyticus)
Oxigenul
strict aerobe cresc doar n prezena O2. Obin energia prin respiraie aerob
microaerofile necesit concentraii reduse de O2 i 2-10% CO2. Obin energia prin respiraie sau fermentaie. Neisseria,
Brucella, Campylobacter
strict anaerobe cresc doar n absena O2. Obin energia prin fermentaie sau uneori respiraie anaerob. Absena catalazei,
superoxid dismutazei, peroxidazei. Clostridium, Bacteroides
anaerobe aerotolerante pot crete n prezena O2, obin energia prin fermentaie, posed peroxidaz Lactobacillus, streptococi
facultativ anaerobe cresc n orice condiii, obin energia prin respiraie sau fermentaie

27. Mediile de cultura. Principiile de clasificare. Mediile uzuale. Componenta. Destinatia lor. Manifestarea cresterii bacteriilor in
medii lichide si solide.
MC = soluii/substrate solide, asigur nutrienii i condiiile fizico-chimice pt cultivarea bct.
Pot fi utilizate pt: cultivarea (izolarea) bacteriilor; testarea sensibilitii la AB; stocarea sau transportul culturilor bacreiene.
Cerinele fa de MC:
a. necesitile nutritive i energetice bct
b. umiditate optimal
c. pH optimal (7,2-7,4) i constant (caracter de tampon)
d. potenial de oxido-reducere optimal (anaerobi - rH2<5, aerobi rH2>10)
e. izotonic (0,5% NaCl)
f. steril i transparent

Clasificarea MC:
Dup provenien
Empirice, naturale. Au la baz produse de origine animal sau vegetal (snge, ser, lapte, ou, cartof, extracte din carne, cord,
creier, ficat, pete, levuri, etc). Compoziia chimic precis nu poate fi controlat.
Sintetice includ ingrediente chimice pure, compoziia chimic este cunoscut cu exactitate
Semisintetice
Dup consisten
Lichide (bulion) utilizate pentru obinerea biomasei bacteriene i a produselor lor (AB, E, toxine)
9
 Solide conin 10-15% gelatin sau 2-3% agar-agar (polizaharid extras din alge roii, t topire 80-100C, solidificare 42C).
Placa de geloz n cutii Petri izolarea culturilor pure; geloza nclinat (n pant) acumularea culturilor pure.
Semisolide 0,2 0,5 % agar-agar. Se utilizeaz pentru studierea activitii biochimice sau a mobilitii bacteriilor.
Dup compoziia chimic (complexitate) i destinaie
Medii uzuale (universale, simple)
Ap peptonat (ap+1% pepton+0,5% NaCl)
Bulion peptonat BP (extract apos din carne + 1% pepton+0,5% NaCl)
Geloza nutritiv (BP + 2-3% agar-agar)
Gelatina nutritiv (BP + 10-15% gelatin)
Sunt utilizate pentru creterea bacteriilor nepretenioase la cultivare
Sterilizarea prin autoclavare: 120C, 20 min
Medii complexe:
elective
selective:
pe mediu solid
pe mediu lichid = mediu de imbogatire
diferential-diagnostice (DD)
izolare cultura pura
multitest, pt acumulare cultura pura si identificare preliminara
identificare finala
speciale
de transport
Medii elective formate din medii simple cu adaos de componente care permit creterea mi/o exigente nutritiv (bulion-ser, bulion glucozat,
geloz-snge streptococi, neisserii; ser coagulat corinebacterii, etc)
Medii selective medii solide cu adaos de componente sau cu condiii fizico-chimice particulare care stimuleaz creterea unor specii i inhib
creterea altor specii (geloza salin - stafilococi, geloza alcalin - vibrioni, mediul Ploskirev - Salmonella, Shigella, etc)
Mediile de mbogire reprezint medii selective lichide, utilizate pentru mbogirea florei patogene i inhibarea florei de asociaie dintr-un
prelevat plurimicrobian (ex: materii fecale)
a. Mediul Muller (BP+Lugol+CaCO 3+hiposulfit)
b. Mediul Kauffmann (mediul Muller+bil+verde de briliant) Salmonella
c. Bulion cu selenit Shigella, Salmonella
d. Ap peptonat alcalin (pH=8) Vibrio cholerae
e. Kitt-Tarrozzi (BP+0,5% glucoz+buci de ficat) pentru anaerobi
Medii diferenial-diagnostice (DD) permit diferenierea speciilor bacteriene n baza activitii lor biochimice (zaharolitice, proteolitice,
lipolitice, de oxido-reducere)
Sunt construite dup urmtoarea schem: Baz nutritiv+substrat+indicator (la necesitate)
Medii DD pentru izolarea culturii pure
Studierea proprietilor zaharolitice
Endo (geloz+lactoz+fucsin+hiposulfit de Na)
Levin (geloz+lactoz+eozin+albastru metilen)
Ploskirev (geloz+lactoz+rou neutru+sruri de acizi biliari+verde de briliant)
Coloniile lactozo-pozitive vor fi colorate (roii pe Endo, Ploskirev, albastru-violete pe Levin)
Studierea proprietilor de oxido-reducere
Mediul cu sulfit de Bi pentru Salmonella (colonii negre reducerea sulfitului n sulfura de Bi)
Mediul Klauberg (geloz-snge cu telurit de K) pentru Corynebacterium diphtheriae
Studierea proprietilor lipolitice
Geloza cu glbenu de ou bacteriile cu lecitinaz formeaz un halou opac n jurul coloniei
Studierea proprietilor hemolitice
Geloza-snge (geloza+5-15% snge defibrinat) in cazul hemolizei n jurul coloniilor apare o zon clar
Medii DD multitest pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar
Russel geloz+1% lactoz, 0,1% glucoz, indicator
Kligler identic Russel+sulfat de Fe (detectarea H 2S)
Olkeniki identic Kligler+1% zaharoz+uree
Indicatorul Andrede fucsin+NaOH
Scindarea glucidelor (acid - A, acid i gaz - AG) duce la modificarea pH i virajul culorii mediului din rou n galben. n pant
se apreciaz lactoza/zaharoza (oxidare), n coloan-glucoza (fermentare).
Producerea H2S nnegrirea mediului
Medii DD pentru identificarea final
irul pestri Hiss (lichid sau semisolid): tuburi ce conin soluii 0,5% de diferite glucide i indicator. Aprecierea dup modificarea culorii (acid
- A) i apariia bulelor de gaz (acid i gaz - AG)
Medii cu AA (lizin, arginin, ornitin) i indicatori
Medii speciale pentru izolarea unor anumite bacterii (Finn, Popescu, Lowenstein-Jensen pentru agenii tuberculozei, Sabouraud fungi)
Medii de transport transportare/stocare material (prelevat). Menine n via bacteriile, fr a favoriza multiplicarea lor. Mediul cu glicerin
30%; Soluie tampon-fosfat; Soluie NaCl 3%; Mediul Cary-Blair; Mediul Stuart (NaCl, 0,5% agar, tioglicolat de Na, albastru de metilen)
pentru anaerobi, neisserii, etc

Pentru cultivarea bacteriilor o cantitate mic de material ce conine bacterii (inoculum) se ntroduce ntr-un mediu de cultur (nsmnare,
inoculare), care ulterior va fi incubat n termostat (pentru asigurarea temperaturii optime).
n timpul incubrii (18-24-48 ore..) bacteriile cresc i se divid, formnd o cultur bacterian (totalitatea bacteriilor acumulate prin
multiplicare intr-un mediu).
10
M.tuberculosis 3-5 sptmni
V.cholerae 6-12 ore

Cultur pur format din bacterii de aceeai specie (indispensabil identificrii)

Cultur mixt compus din bacterii de specii diferite
Tulpin populaie microbian constituit din descendenii unei singure izolri n cultur pur, care va fi studiat ulterior.
Clon populaie care rezult din multiplicarea unei singure celule

Manifestarea creterii i multiplicrii bacteriilor

n mediu lichid
Turbiditate uniform
Formarea unei pelicule la suprafaa mediului (vibrioni, yersinia - agentul pestei)
Formarea unui sediment la fundul tubului sau pe perei (streptococi, Bacillus anthracis)
n mediu solid formarea coloniilor
Colonie o aglomerare de bacterii care se dezvolt dintr-o singur celul sau un grup de celule (UFC - unitate formatoare de colonii) pe
suprafaa unui mediu solid. Fiecare specie bacterian formeaz colonii specifice (caracter util n identificare).
Caracteristica coloniilor
a. Dimensiuni colonii mici (0,1-1mm), medii (1-2mm), mari (2-3mm)
b. Contur (margini) neted, ondulat, zimat, lobat, etc
c. Suprafa plat, bombat, convex, ombilicat, etc
d. Form punctiform, circular, filamentoas, neregulat
e. Culoare (pigmentaie) alb, galben, aurie, etc
f. Densitate opac, transparent, etc
g. Consisten cremoas, untoas, uscat, mucoid
Tipurile de colonii: Colonii S (smouth) rotunde, netede, umede, lucioase; Colonii R (rough) margini neregulate, suprafaa uscat, rugoas

Caracterele de cultur ale bacteriilor = exigenele nutritive (medii, temperatur, pH, aerare, etc), viteza i manifestarea creterii pe medii lichide
i solide

Dinamica multiplicrii bacteriilor n culturi

n funcie de modul de dezvoltare a culturilor bacteriene se disting:
Culturi discontinue
Culturi continue
Culturi sincrone
Culturile discontinue se obin la cultivarea bacteriilor n volum limitat de mediu. Astfel de culturi sunt obinute i utilizate n laboratorul
microbiologic
Fazele dezvoltrii unei culturi discontinue
I. Faza de lag faza de adaptare la condiiile mediului, bacteriile sunt active metabolic, cresc n dimensiuni, dar nu se divid. Durata este variabil
(2-4 ore); depinde de starea bacteriei, condiiile mediului, etc
II. Faza logaritmic bacteriile cresc i se divid cu vitez maximal constant, curba evolueaz exponenial. Bacteriile sunt foarte sensibile la
ageni antimicrobieni (culturi utile pentru testarea sensibilitii la antibiotice). Durata 8-10 ore.
III. Faza staionar rata celulelor care se multiplic scade treptat, numrul celulelor vii rmne constant mai multe ore. Cauza consumarea
nutrienilor, acumularea metaboliilor toxici. Morfologia bacteriilor este tipic speciei, apar incluziuni, spori (culturi utile pentru identificare).
Sensibilitatea la agenii antimicrobieni scade. Durata 10-12 ore.
IV. Faza de declin (letalitate) bacteriile mor progresiv.

Cultura continu se realizeaz cnd mediul de cultur este continuu rennoit i mbogit cu oxigen cu evacuarea unei cantiti de cultur. Se
realizeaz n chemostate sau turbidostate, cultura aflndu-se permanent n faza exponenial. Se utilizeaz n microbiologia industrial. n
intestin culturi continue.
Culturi sincrone culturi n care bacteriile se divid n acelai timp. ???

28. Metoda bacteriologic in diagnosticul bolilor infecioase. Scopul. Prelevate de la pacieni si din mediul ambiant. Principiile de
recoltare, ambalare si transportare in laborator. Pregatirea probelor pentru investigatiile de laborator.
Examenul bacteriologic const n inocularea prelevatelor pe medii de cultur pentru izolarea culturilor pure de bacterii (tulpinilor) care
vor fi ulterior identificate, testate vis-a-vis de antibiotice, eventual conservate.
Examenul bacteriologic const din cteva etape succesive, de la prelevarea (recoltarea) probelor biologice pn la remiterea rezultatelor
Faza pre-analitic (responsabilitatea medicului)
Prescrierea investigaiei (n funcie de datele examenului clinic i paraclinic). n ordonan se fixeaz identitatea medicului, a
pacientului, scopul analizei, manifestrile patologice, locul, data apariiei, alte date: imunosupresie, tratament cu antibiotice, graviditate,
etc.
Prelevarea probelor
- Alegerea prelevatului (de la poarta de intrare, locul multiplicrii sau/i din cile de eliminare a agentului patogen)
Materiale de examinat (prelevate) de la pacieni: Secreii rino-faringiene, Sput, Puroi, Exudate, Snge, LCR, Urin, Mase fecale,
Bioptate, Material cadaveric
Materiale de examinat din mediul extern: Ap, Alimente, Sol, Aer, Lavaje, Vectori
Modul de prelevare (recoltare)
- n recipiente sterile
- Respectnd regulile de autoprotecie
- La debutul bolii
- Pn la administrarea antibioticelor
Transportarea
- Imediat sau utiliznd medii de transport, cu respectarea condiiilor speciale dup necesitate
11
 - n ambalaj special (cutii metalice, pungi din plastic...)
n fia de nsoire s fie indicat identitatea pacientului, vrsta, sexul, natura prelevatului, data, ora prelevrii, scopul investigaiei.

29. Examenul bacteriologic. Etapele de izolare a culturilor pure de bacterii aerobe. Volumul de lucru la fiecare etapa. Principiile de
identificare a culturii pure.
Examenul bacteriologic = inocularea prelevatel pe MC izolare cultura pura identificare, testare sensibilitate la AB, eventual conservare.
Etape examen bacteriologic:
1. Faza pre-analitic (responsabilitatea medicului)
Prescrierea investigaiei (n funcie de datele examenului clinic i paraclinic). n ordonan se fixeaz identitatea medicului, a pacientului, scopul
analizei, manifestrile patologice, locul, data apariiei, alte date: imunosupresie, tratament cu antibiotice, graviditate, etc.
2. Prelevarea probelor
Alegerea prelevatului (de la poarta de intrare, locul multiplicrii sau/i din cile de eliminare a agentului patogen)
Modul de prelevare (recoltare) :
n recipiente sterile
Respectnd regulile de autoprotecie
La debutul bolii
Pn la administrarea antibioticelor
3. Transportarea
Imediat sau utiliznd medii de transport, cu respectarea condiiilor speciale dup necesitate
n ambalaj special (cutii metalice, pungi din plastic...)
n fia de nsoire s fie indicat identitatea pacientului, vrsta, sexul, natura prelevatului, data, ora prelevrii, scopul investigaiei)
Materiale de examinat (prelevate) de la pacieni: Secreii rino-faringiene; Sput; Puroi; Exudate; Snge; LCR; Urin; Mase fecale; Bioptate;
Material cadaveric
Materiale de examinat din mediul extern: Ap; Alimente; Sol; Aer; Lavaje; Vectori, etc
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURILE AEROBE
Prelevatul este supus examenului macroscopic (modificarea aspectului, a mirosului, etc) - orientare n diagnostic
Dup necesitate, probele sunt supuse pregtirii pentru investigaie (diluare, omogenizare, centrifugare, etc)
Examinarea microscopic (preparate native, Gram, Ziehl-Neelsen, Burri-Hinss...) prezena mi/o, forma, cantitatea, G+/-.
I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE
Scopul izolrii - de a obine o cultur pur dintr-un melanj de celule bacteriene sau dintr-un produs patologic.
Tehnici utilizate:
o Prin epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei din cutia Petri (nsmnare n striuri paralele, nsmnare n cadrane, etalarea
consecutiv pe trei cutii).
o Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n geloz topit i rcit la 50 C (10 -1, 10-2,...), apoi turnate n cutii Petri sau eprubete.
Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h (n funcie de TG).
Metode speciale de izolare n culturi pure: bct sporulate: nclzirea prealabil a prelevatului 80 C 20 min; bct acido-rezistente: tratarea
prealabil cu acid a prelevatului i neutralizarea ulterioar cu o baz; bct din asociaii cu numr minim de mi/o patogene: mbogirea prealabil
a florei patogene utiliznd medii de mbogire; bct cu virulen nalt i pretenioase la cultivare: inocularea la animalele de laborator sensibile
II etap ACUMULAREA CULTURII PURE
Examinarea macroscopic a coloniilor crescute (form, culoare, dimensiuni, etc)
Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte confirmarea puritii culturii
Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n pant acumularea culturii pure
Termostat, 37 C, 18-24 ore
III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE
Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)
Identificarea culturii pure const n evidenierea unor caractere specifice ale acestei culturi pentru a o include ntr-o familie, gen, specie, variant
Se studiaz caracterele: Morfologice; Tinctoriale; De cultur; Biochimice; Antigenice (seroidentificarea); De patogenitate; Sensibilitatea la
bacteriofagi (fago-identificarea); Sensibilitatea la AB
IV etap EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA SI ELIBERAREA RSPUNSULUI
Compararea rezultatelor obinute cu caracterele speciilor bacteriene cunoscute pentru a gsi asemnri.
Exemplu de rspuns: Din proba examinat a fost izolat tulpina de Corynebacterium diphtheriae, biovar gravis, tox+, sensibil la ...., rezistent
la .....
STUDIEREA ACTIVITII BIOCHIMICE A BACTERIILOR
Activitatea zaharolitic (irul Hiss, coagularea laptelui, etc)
Activitatea proteolitic
Degradarea proteinelor native (lichefierea gelatinei sau a serului coagulat, peptonizarea laptelui, etc)
Evidenierea enzimelor specifice (ureaz, decarboxilaze, dezaminaze, etc) prin detectarea produsele finale ale reaciilor: H 2S, NH3, indol
o Depistarea producerii H2S: formarea sulfurii de fer de culoare neagr n mediile multitest Kligler, Olkeniki, etc; plasarea unei benzi de
hrtie de filtru mbibat cu acetat de Pb deasupra BP n care crete cultura studiat (formarea sulfurii de Pb nnegrete hrtia)
o Depistarea indolului (produs al metabolizrii triptofanului) benzi de hrtie mbibate cu acid oxalic. n prezena indolului indicatorul
vireaz n roz.
o Depistarea amoniacului (ureaza) hrtia de turnesol se coloreaz n albastru.
o Depistarea catalazei (H2O2 .... H2O + O2): cultura se amestec cu o pictur de ap oxigenat apariia bulelor de gaz
o Depistarea oxidazei (detectarea prezenei citocromoxidazei din lanul respirator)
Reactiv di (tetra)metil-parafenilen-diamin (benzi sau rondele de hrtie mbibate cu reactiv, creioane, etc)
Oxidarea reactivului culoare violet-neagr
Oxidazo+ : Neisseria, Vibrio, Pseudomonas
Oxidazo- : Enterobacteriaceae
o Depistarea lecitinazei mediu cu glbenu de ou 10% - formarea unui halou opac n jurul coloniilor
o Depistarea lipazei mediu cu Twin 80 1% halou opac n jurul coloniilor (precipitarea acizilor grai)
12
o Depistarea hemolizinei geloz-snge 5-10% - zon clar n jurul coloniei
o Depistarea ADNazei, fosfatazei, etc
Probele sunt incubate la 37 C, 18-24 h
Identificarea rapid
Utilizarea galeriilor miniaturizate standarde (economie de timp, spaiu, material)
Sistemul API o galerie din plastic format din numeroase alveole care conin fiecare un mediu deshidratat diferit (glucide, AA, etc). Alveolele
sunt inoculate cu o suspensie bacterian testat i incubate. Ulterior la necesitate se adaug reactive pentru detectarea metaboliilor particulari.
Lectura conform unui cod de cifre sau computerizat

30. Metodele de creare a condiiilor de anaerobioz pentru cultivarea anaerobilor. Izolarea culturilor pure prin metoda Zeissler.
Volumul de lucru la fiecare etapa. Particularitatile de identificare a culturilor pure.
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURI ANAEROBE (clostridiene, neclostridiene)
Condiia principal cultivare n absena oxigenului
Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi regenerat - 100 C, 20 min, rcit, acoperit cu vazelin; nsmnarea n geloz n coloan)
Crearea condiiilor de anaerobioz
Metoda fizic utilizarea anaerostatului
Metoda chimic n exicator se ntroduc substane ce fixeaz oxigenul (pirogalol+baz); utilizarea gas-pachetelor
Metoda biologic Fortner cultivarea concomitent a aerobilor i anaerobilor
Recoltarea cu precauie, evitnd contactul cu aerul (n seringi, utiliznd medii speciale)
I etap MBOGIREA ANAEROBILOR
nsmnarea prelevatului n 2 eprubete cu mediul Kitt-Tarrozzi regenerat
nclzirea unui tub la 80 C, 20 min distrugerea florei nesporogene
Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc nmulirea anaerobilor)
II etap - IZOLAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI
Studierea caracterelor de cultur tulburarea mediului, descompunerea bucilor de ficat, etc
Izolarea culturii pure de anaerobi prin metoda Zeissler (nsmnarea a 0,1 ml din mediul K-T pe 3 cutii cu geloz-snge glucozat
consecutiv). Incubarea n anaerostat/exicator/gas-pack, 24-48 h
Metoda Weinberg diluii succesive a culturii n geloz glucozat lichefiat i aspirarea n tuburi lungi i nguste, nchise ermetic. Incubarea n
termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE
Studierea macroscopic a coloniilor
Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte
Repicarea n mediul K-T regenerat pentru acumularea culturii pure
Incubarea n termostat, 24 h
IV etap - IDENTIFICAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI
Verificarea puritii culturii pure (frotiu Gram)
Studierea caracterelor culturii pure izolate (cu respectarea condiiilor de anaerobioz)
V etap - EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA I ELIBERAREA RSPUNSULUI

31. Antagonismul microbian. Tipurile. Mecanismele. Metodele de studiere. Aplicarea practica. Eubioticele. Exemple.
BIOTOP spaiu cu condiii de via particulare (conjunctiva, mucoasa intestinal, orofaringe, vagin, tegument, etc), populat i transformat de
asociaii de fiine vii.
MICROBIOCENOZ (comunitate microbian) asociaii microbiene ce populeaz un biotop.
Microorganismele prezente ntr-un biotop particular constituie microflora acestui habitat (m/f cutanat, intestinal, etc). Aceasta joac un rol
important n protejarea gazdei fa de o invazie microbian ulterioar, actionnd prin urmtoarele mecanisme:
1. competiia pentru aceiai nutrieni;
2. competiia pentru aceiai R de pe celulele gazdei;
3. producia de bacteriocine; vitamine;
4. producerea de acizi grai volatili sau ali metabolii;
5. stimularea continu a sistemului imun;
6. stimularea producerii unor factori imuni de protecie (anticorpii naturali).
ntre microorganismele unui biotop se pot stabili relaii:
Indiferente (neutralism)
Favorabile (comensalism/satelitism, simbioz/mutualism, sinergism)
Defavorabile (parazitism, antagonism)
Antagonism o specie inhib sau omoar alt specie prin mecanisme specifice sau nespecifice
Mi/o care manifest activitate inhibitoare antagonist (A), mi/o care sufer concurent (C).
Antagonism nespecific:
Antagonistul este mai activ, utiliznd nutrienii, oxigenul.
Antagonistul produce metabolii toxici (acizi, indol, H2S, amoniac, peroxid, etc).
Antagonism specific antagonistul produce substane cu aciune specific asupra unui sau mai multor concureni (AB, bacteriocine).
Efectul aciunii unui antagonist asupra concurentului poate fi bacteriostatic sau bactericid (uneori bacteriolitic).
Utilizarea practic a antagonismului microbian:
1. depistarea mi/o produceni de antibiotice (micete, actinomicete, bacterii)
2. obinerea produselor biologice curative de origine microbian (probiotice, eubiotice/sinbiotice): Lactobacterina, Colibacterina,
Bifidumbacterina, Bificol, etc
3. crearea biocenozelor favorabile organismului
METODELE DE STUDIU AL ANTAGONISMULUI
n mediu solid (metoda traneei) antagonistul se nsmneaz n centrul cutiei, concurenii perpendicular. Termostat 24h. Aprecierea
dup dimensiunea zonei de inhibiie a creterii culturii concurentului.
n mediu semisolid I strat antagonistul, II strat concurentul. Termostat 24h. Aprecierea zon clar ntre straturi.
13
 nsmnarea n mediu lichid (BP) a unui numr egal de A i C. Dup 24 h de incubaie se rensmneaz 0,1 ml pe placa cu geloz. Se
compar numrul coloniilor de A i C.

32. Antibioticele. Notiune. Clasificarea dupa producent, spectrul si efectul de actiune asupra celulei bacteriene. Mecanismele de
actiune a antibioticelor. Exemple.
ANTIBIOTICE (AB) (AB) produse de origine natural (microbian, animal sau vegetal), derivai semi-sintetici sau produse sintetice care inhib
sau omoar selectiv unele mi/o sau/i celule tumorale,
tumorale, fr
fr a exercita ca regul efecte toxice asupra macroorganismului.
Clasificarea AB
Dup efectul asupra celulei
Bacteriostatic (tetraciclina, cloramfenicol
cloramfenicol)
Bactericid (streptomicina, polimixina)
Bacteriolitic (peniciline, cefalosporine)
Dup spectrul de activitate
spectru restrns (ngust) de aciune (AB anti-G+, anti-G-, anti-tuberculoase, anti-micotice, anti-tumorale)
spectru larg de aciune (G+ i G-)
Dup producent (origine)
fungic (peniciline, cefalosporine,...)
actinomiceta (aminoglicozide, macrolide, cloramfenicol, etc)
microbian (bacitracina din Bacillus subtilis,
subtilis, gramicidina din Bacillus brevis,
brevis, polimixina din Bacillus polimyxa)
polimyxa)
vegetal fitoncidele (alicina, rafanin, imanin)
animal (lizozimul din albu de ou, ecmolina din oase de pete, eritrina din mas eritrocitar, splenocitina din splin)
Dup compoziia
compoziia chimic (beta-lactamice, macrolide, aminoglicozide, fenicoli, polipeptide, poliene, sulfamide, chinolone i
fluorochinolone, nitrofurani, etc)
Mecanismul de aciune al AB
o AB cu aciune asupra sintezei peretelui celular (dereglarea sintezei peptidoglicanului)
Beta-lactamice (peniciline, cefalosporine). Deregleaz procesul de sintez a PG, inhibnd transpeptidazele (inta - PFP)
Vancomicina, teicoplanina (blocheaz transferul pentapeptidului din MCP spre peretele celular)
Bacitracina (blocheaz reciclarea moleculelor de transport transmembranar - bactoprenol)
Fosfomicina (blocheaz piruviltransferaza, implicat n sinteza acidului N-acetil muramic)
Efectul acestor AB este bactericid/litic, doar celulele metabolic active sunt omorte. Nu afecteaz
afecteaz celulele eucariote (lipsa PG).
o AB cu aciune asupra MEx i a MCt
AB polipeptidice (polimixina, colistina). Se fixeaz pe membrane bacteriene (n special pe lipidul A (ME la bacterii G-), provocnd
dezorganizarea lor. Efect bactericid.
AB polienice (nistatina, levorina, amfotericina B, etc). Se fixeaz pe sterolii MCP ale micetelor, perturbnd respiraia i dezorganiznd MCP
(permeabilitate excesiv i moartea celulei).
Aceste AB acioneaz i asupra celulelor n repaos. Relativ toxice, n special nefro.
o AB cu aciune asupra ribozomilor
30S (aminoside: streptomicina, kanamicina, gentamicina, tobramicina, amikacina; tetracicline)
50S (cloramfenicol, triamfenicol; macrolide: eritromicina, oleandomicina; lincosamide: clindamicina, lincomicina).
Se leag pe receptori specifici de pe subunitile 30S sau 50S, perturbnd sinteza proteic (inhibiia transpeptidazei, a translocaiei peptidelor,
etc). Rezult inhibiia sintezei proteice sau sinteza proteinelor nefuncionale. Efectul este bacteriostatic (aminosidele bactericid), doar asupra
celulelor active metabolic.
o AB cu aciune asupra acizilor nucleici
Rifampicina inhib ARN-polimeraza ADN-dependent. Rezult stoparea sintezei ARNm
Novobiocina , Chinolonele (acidul nalidixic, ciprofloxacina, ofloxacina) blocheaz activitatea topo-izomerazelor, intervenind n conformaia
ADN-ului. Efect bactericid.
Sulfamidele i trimetoprimul perturb sinteza acidului folic i folailor (cofactori n sinteza AN). Activitate bacteriostatic.
Producerea AB: Metoda biologic; Metoda sintetic; Metoda semi-sintetic
Etapele metodei biologice:
1. Cultivarea tulpinilor-producente (ex.: Penicillium notatum, Actinomyces griseum, etc) etc) n mediu lichid adecvat
2. Extragerea AB
3. Purificarea i concentrarea AB
4. Controlul toxicitii
5. Determinarea activitii AB
Activitatea AB se msoar n uniti de mas (g, mg, g) sau de aciune (UA). 1 UA cantitatea minimal de AB care inhib creterea unei
tulpini de referin n condiii standarde. Penicilina 1UA = 0,6 g de substan pur
Cerinele fa de AB: Toxicitate selectiv; Efect terapeutic cu doze minime; Activitate de lung durat; Spectru restrns de aciune; S fie
solubile i absorbite uor; S nu provoace efecte secundare; S nu se dezvolte rezistena contra AB; S fie ieftine

33. Rezistena microbilor la antibiotice, tipurile. Mecanismele rezistenei dobindite si manifestatea ei. Combaterea rezistenei.
Cauzele: Factori genetici, proprii bacteriilor; Factori ce favorizeaz selecia i difuzarea tulpinilor bacteriene rezistente
Tipurile de rezisten:
o Natural, ereditar, de specie, prezent la toi membrii unei specii sau gen
lipsa intei ex.: micoplasme, micete;
imposibilitatea de a atinge inta ex.: Mycobacterium (cerurile, lipidele mpiedic ptrunderea AB n citoplasm);
bacteriile nu efectueaz procesul inhibat de AB ex.: acidul folic este preluat din mediu rezisten la sulfamide
o Achiziionat, dobndit, afecteaz tulpinile unei specii sensibile. Depinde de aciunea de selecie exercitat de AB utilizate n
tratament, urmat de rspndirea ei (ntre bacterii, interuman,
interuman, transmisie de origine animal).
Diminuarea permeabilitii membranare
Modificarea intei moleculare
14
 Eliminarea excesiv a AB
Inactivarea enzimatic a AB, care poate fi hidrolizat (penicilinaz, cefalosporinaz) sau modificat structural (acetilaze,
adenilaze, fosforilaze), etc.
Rezistena dobndit se poate manifesta fenotipic (bacteriile n faza de repaos, formele L de bacterii) sau genetic (genotipic)
Rezistena genetic poate fi:
Cromozomial,
Cromozomial, determinat de mutaii (10%)
Mecanisme:
Mecanisme: modificarea intei moleculare, diminuarea permeabilitii membranare
Plasmidic,
Plasmidic, epidemic, realizat prin transfer de gene prin intermediul plasmidelor R (poate fi rezisten multipl).
Mecanisme: inactivarea enzimatic, modificarea intei, substituia/supraproducia intei, excreie excesiv a AB.
Prevenirea rezistenei
1. Supravegherea epidemiologic a tulpinilor rezistente
2. Politic strict de prescriere a AB
3. Respectarea dozelor terapeutice corecte i a timpului de tratament necesar
4. Asocierea AB cu mecanisme de aciune diferite
5. Prescrierea AB care nu sunt sensibile la beta-lactamaze, utiliznd inhibitori (acidul clavulanic, sulbactamul, tazobactamul). Ex.:
augmentina amoxicilina+acid clavulanic
6. Reciclarea AB
7. Producerea AB noi
Efectele negative ale antibioticoterapiei
1. Efect toxic (streptomicina surditate, cloramfenicolul toxic pentru mduva osoas, polipeptidele nefrotoxice, etc)
2. Efect teratogen
3. Aciune sensibilizant (penicilina, etc)
4. Disbacterioz
5. Dereglarea imunogenezei
6. Selecia suelor rezistente
Bacteriocinele substane proteice bactericide produse de numeroase specii bacteriene i active asupra altor tulpini ale aceeai specii sau asupra
speciilor nrudite. Producerea bacteriocinelor este determinat plasmidic (plasmide Col).
Tipuri de bacteriocine: colicine (secretate de Escherichia coli),
coli), corinecine (Corynebacterium), vibriocine (Vibrio), piocine (Pseudomonas), etc.
Studiul sensibilitii unei tulpini la bacteriocine (bacteriocinotipia
(bacteriocinotipia)) se utilizeaz n scopuri epidemiologice.

34. Notiuni de tulpini bacteriene sensibile, intermediare si rezistente la antibiotice. Metodele de determinare a sensibilittii
microbilor la antibiotice: difuzimetrica (rondelelor), diluiilor succesive. Noiune de concentraie minim de inhibiie (CMI) si
concentraie minim bactericid (CMB).

Sensibilitatea microbilor la AB
n funcie de rezultatele clinice, bacteriile se divizeaz n 3 clase: sensibile la AB (S), rezistente (R) i intermediare (I, moderat sensibile).
Tulpinile S efectul terapeutic este obinut cu doze terapeutice uzuale
Tulpinile R efectul terapeutic nu poate fi obinut cu doze terapeutice
Tulpinile I succesul terapeutic este imprevizibil. Ar fi posibil cu doze mari sau la administarea local a AB.
Fiecare tulpin izolat manifest sensibilitate particular. Ea poate fi studiat n laborator pentru determinarea profilului de sensibiliti al acestei
tulpini, ceea ce constituie o antibiogram.
antibiogram.
Testarea sensibilitii bacteriilor la AB
o Metoda difuzimetric (rondelelor).
Utilizat uzual n infecii banale.
Condiii: mediu standard, concentraie standard de mi/o (10 5/ml), rondele/discuri (comprimate) cu % standarde de AB, condiii standarde.
Mediul este inoculat cu suspensia bacterian. Dup uscare n termostat se aplic rondelele 24h, 37 C.
Lectura diametrul zonei de inhibiie a creterii culturii bacteriene este comparat cu diametrele standarde pentru fiecare AB. Valori sub acest
diametru tulpina este R, dac este depit S.
o Metoda diluiilor
ntr-un ir de tuburi cu 1 ml BP se efectueaz diluia AB (256 UA, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, etc). Se adaug n fiecare tub (cu excepia celui
martor) 0,1 ml de suspensie bacterian 105/ml. Termostat - 24h.
Lectura cea mai mic doz de AB care inhib creterea culturii dup 24h de incubare (mediu clar) constituie Concentraia Minim de Inhibiie
(CMI) a AB pentru tulpina testat. CMI msoar efectul bacteriostatic.
Concentraia Minim Bactericid (CMB) cantitatea minim de AB care omoar 99,9% din inoculum dup 18h de incubare. Determinarea
CMB din ultimele tuburi fr cretere se repic 0,1 ml de mediu pe placa cu geloz. Dup 24h se compar numrul celulelor ce au supravieuit
cu nr iniial de bacterii (105/ml).
Corelaia dintre studii in vitro i rezultate in vivo
n studii in vitro parametrii (densitatea suspensiei bacteriene, concentraia AB, etc) nu se modific n timp. In vivo,
vivo, la pacieni, concentraia AB
variaz n timp i n funcie de esut.
Pentru a stabili dac tulpina izolat este sensibil sau rezistent la un AB se cere cunoaterea Concentraiei Terapeutice (CT) CT) (cantitatea de AB
prezent n focarul infecios n cursul tratamentului cu doze terapeutice) a fiecrui AB testat.
Tulpini Sensibile CMI/CT <1, ex.: 2/8, 2/16 - efect terapeutic posibil cu doze uzuale
Tulpini Rezistente CMI/CT>
CMI/CT>1, ex.: 8/2, efect terapeutic imposibil
Tulpini Intermediare CMI/CT=1, efect terapeutic imprevizibil. Pot fi utilizate doze maxime de AB sau administrarea lor local
Testarea CMI / CMB este indicat n tratamentul infeciilor grave : meningite, septicemii, endocardite, infecii cronice sau la persoane cu
imunosupresie.
Monitorizatea (supravegherea) tratamentului cu AB. Verificarea eficacitii antibioterapiei.
1. Determinarea concentraiilor umorale sau tisulare ale AB
Indicaii: Utilizarea unui AB toxic; n caz cnd bolnavul sufer de deficiene metabolice sau excretoare (renale, hepatice)
Se compar concentraiile obinute cu CMI a antibioticului testat (sau cu CT).
2. Studiul activitii inhibitorii a lichidelor biologice (NEI)
Indicaii: infecii grave care nu rspund rapid la tratament.
15
Efectuarea: la diluii duble (1/2, ...) ale
ale lichidului examinat (ser, LCR, urin) se adaug suspensia bacterian (din tulpina izolat de la bolnav).
Lectura: dup 24h de incubaie la 37
37 C se apreciaz diluia maxim cu efect bacteriostatic/cid.
NEI 1:8 reflect eficiena antibioticoterapiei

35. Bacteriofagul. Natura. Caracterele morfobiologice. Profagul. Lizogenia. Aplicarea practica a bacteriofagului.
Bacteriof
acteriofagi
agi = virusuri
virusuri ce infecteaz
infecteaz bacteriile
bacteriile.. Paraz
Parazii
ii intracelulari
intracelulari obligatorii
obligatorii ai bct.
bct.
Toate bacteriil
bacteriilee po
pot fi infectat
infectatee de c
ctre bacteriof
bacteriofagi
agi.
In majoritatea cazurilor,
cazurilor, un fag anume infecteaz
infecteaz doar celulele
celulele unui
unui singur
singur gen, unei
nei anumite specii
specii sau a unei
unei tulpini - specificitat
specificitateea fagului
agului
prez
prezena
ena R pt acest
cest fag la sup
suprafaa
faa bct-gazd
bct-gazd.
.

Structura
Structura bacteriofagului
Structura
tructura fagilor corespunde regulilor regulilor generale ce se refer refer la structura
structura virusurilor
virusurilor..
1. Acid nucleic
nucleic (ADN sau ARN, ARN, mai frecvent dublu dublucatenar).
atenar).
2. Inveli
Inveli proteic
proteic = capsid protec protecie a materia
materialului genetic
genetic. Poseda R la suprafa infecia infecia gazdei.
gazdei. Capsida este este constituit
constituit din
din
sub
subuniti
uniti proteice
proteice,, capsomere,
capsomere, aranjate
aranjate simetric ntr-o ordine distinct distinct, conferind forma fagului. fagului.
3. Unii fagiagi pot conine i enzi enzime (ex.: lizozim, neuraminidaza).
neuraminidaza).
Exist 3 forme morf morfologic
ologice principale de fagi agi:
Fag icosaedri
icosaedricc: form sf sferic
eric, 20 fee
fee triu
triungi
ngiulare,
ulare, 30 muchii i 12 v vrfuri (simetrie cubic
cubic a capsidei).
Fag cilindri
cilindric:c: bastona
bastonae proteic
proteice formate
formate din capsomer
capsomere, e, asa
asamblate
mblate ntr-o
ntr-o structur tubular (simetrie helicoidal a capsidei).
Fag complex:
complex: constituit
constituit din din cap icosaedric
icosaedric ataatataat la o coad
coad helicoidal.
helicoidal. Coada este este format
format din doua doua tuburi
tuburi concentric
concentrice, un tub intern
rigid - canalul
canalul axial,
axial, care este este inconjurat de teaca cozii, cozii, un man manon contractil. Gulerul cozii (colul) se afl afl la jonc
jonciunea capului cu
coada. La La partea
partea distal a cozii se afl afl o plac
plac hexagonal, placa placa baz bazal,
al, la fiecare apex fiind ancorate cte un croet i i o fibr.
fibr. Ele
reprez
reprezent si sistemul
stemul de fixare
fixare a fagului
agului pe bacteria
bacteria receptoa
receptoare re i
i contribui
contribuie la injecia
injecia materia
materialului genetic
genetic nn celul.
Nu to toi fagii au o astfel de morf morfologie. Unii au coad coad lu lunga
nga i i non-
non-contractila
contractila, alalii - coada scurt,
scurt, sau
sau far coad.
coad. Exist i i fagi
agi filamento
filamentoi.
Interaciunea dintre bacteriof bacteriofag i celula-gazd
Bacteriofag
Bacteriofagii ii exist nn stare de virioni
virioni extracelulari
extracelulari, iar iar la infectarea
infectarea unei unei bacterii
bacterii ei pot duce la doua doua ti tipuri de
de infecii
infecii:
Infecie
nfecie li litic
tic fagiiagii viruleni
viruleni. La finelefinele ci ciclului
clului de multiplicare
multiplicare bacteriabacteria infectat
infectat este lizat elibernd
libernd fagii
agii nou-formati.
nou-formati.
Infectie
nfectie nelitica sau liz lizogen
ogen fagii agii tempera
temperai (modera
(moderai). i). Ei infecteaz
infecteaz bacteriil
bacteriilee fr a le distru
istrugge.
INFECTIA
INFECTIA LI LITIC
TIC (ci (ciclul
clul biologic
biologic al fagului
agului virulent)
Adsorb
Adsorbia. ia. ciocnire int intmpl
mpltoare fagul agul se fixeaz
fixeaz prin intermediul
intermediul plcii plcii bazbazale (la
(la inceput prin fibrele
fibrele sale,
sale, apoi
apoi prin cro
croete)
ete) dede un R
specific
specific de pe PC bacteria bacterian (uneori flageli sau pili). pili).
Penetrarea
Penetrarea.. fixare ireversibil
ireversibil a fag fagului
ului pe PC aciu aciune E (ex.(ex. liz
lizoz
oziim) perforare PC contracie contracie man
manon apropiapropiere
ere cap de placa
placa baz
bazal
canalul
canalul axial penetreaz
penetreaz MCt ADN fagic agic este
este injectat
injectat in bacterie.
Expresia
Expresia genomului
genomului viral (biosinteza componentelor fagice, maturizarea). maturizarea). penetrare penetrare ADN viral n n bacterie (fag vegetativ)
vegetativ) timp de
aproximativ 12 minute virionul virionul nu este depistat n bacteria bacteria infectat
infectat = faza de de eclips.
eclips. Ea coincide
coincide cu si sinteza
nteza enzi
enzimelor
melor virale care vor asigura
ulterior:
ulterior:
replicarea
replicarea ADN fagic agic;
sinteza
nteza proteinelor
proteinelor fagice agice;;
asamblar
mblarea acestor elemente elemente.
Asa
Asamblar
mblarea fagilor agilor.. sinteza compu
compui capsida i AN n cantit cantitii suficiente asamblarea spontan spontan a particulelor noi de fagi, prin incorporarea
acidului nucleic
nucleic n n capsid.
capsid.
Elibera
Eliberarea rea.. Majoritatea fag fagiilor, dup
dup maturizare
maturizare,, su sunt elibera
liberai n n urma liz lizeei pe
peretelui bacteria
bacterian cu enzime ale bacteriofagului
Timp
Timpul ul dintre
dintre infectie
infectie i i eliberare
liberare (ciclul de reproducere) este este dede 20-60 minute la 37C, fagii agii su
sunt elibera
liberai n
n val
valuri de 50-1000 fagi agi pe
per celul.
INFECTIA
INFECTIA NON LI LITIC
TIC SAU LIZ LIZOGEN
OGEN : FAGII AGII TEMPERA
TEMPERAI
Fagii
agii tempera
temperai (moderai) atunci cand infecteaz infecteaz o bacterie po pot:
1. sau induce un ci i
c clclu
u complet de multiplicare,
multiplica re, ce duce la liza bacteriei
bacteriei,
2. sau, mai frecvent, dup dup injectarea
injectarea ADN-uluiDN-ului,, s integreze
integreze ace acestst ADN n n cromoz
cromozomul
omul bacteria
bacterian prin recombinare specific,
specific,
formnd
formnd un prof profag (lizogenizare)
3. sau sa ram ramn n Ct sub sub form de plasmid.
plasmid.
In ultimele dou dou cazuri bacteria
bacteria nu nu moa
moarre i, multiplic
multiplicndu-se
ndu-se,, replic
replic genomul
genomul viral concomitent cu propriul propriul ssu genom: bacteria
bacteria (cultura) esteeste
numit
numit lizogen
izogen.. Ea posed i i transmi
transmite descende
descendenilornilor capacitatea de a produc produce fag fagi n absena
absena infeciei
infeciei..
Proprietile
Proprietile culturilor liz lizogene
ogene
Induc
Inducia ciclului litic. litic. Profagul p pstreaz
streaz virulen
virulena poten
potenial
ial. Meni
Menin nerea st strii de liz
lizogen
ogenieie implic
implic sinteza unui represor proteic, codificat de
fag.
ag. Dispariia
ispariia lui duce la induciainducia cicl ciclului
ului lilitic.
tic. Inducia
nducia se poat oate declan
declana spontan la un numar limitat de celule sau poa poatte fi provocat
provocat la
majoritatea
majoritatea celulelor
celulelor,, de ex. ex., la acaciunea unor mutageni,
mutageni, ca ca razele
razele ultraviolete
ultraviolete sau mitomi mitomicinacina C.
Sistem
Sistemul ul SOS activat
activat prot. RecA scindeaza represo represorul proteic
proteic al fagului
agului expresia
expresia ci ciclului
clului li
litic
tic. Pentru acea
aceasta
sta prof
profagul
agul trebuie sa fie
excizat
excizat - operaie
operaie invers integrrii
integrrii.. Excizxcizia esteeste efectuat
efectuat de ctre proteina
proteina xis,xis, codificat
codificat de fag. Urmeaz
Urmeaz replicarea genom genomuluiului,, sinteza
componen
componenttelor fagului agului i i fagii
agii asa
asambla
mblai susunt elibera
liberai prin
prin liza
liza celulei
celulei (pr(profagul - gen potenial letal!) !).
n timpul replicrii fagului moderat fragmente de ADN bacterian pot fi ntroduse din eroare n particulele virale. Aceti fagi pot n continuare
ntroduce n cromosomul altor bacterii ADN bacterian capturat = proces de transfer genetic = transducie. transducie. Natura genelor bacteriene transferate
poate fi diferit: gene din apropierea locului de inserie a fagului (transducie specific) sau fragmente de ADN bacterian ntroduse din
ntmplare n capsida fagului (transducie generalizat)
Imunitate
munitate contra contra supra
suprainfecti
infectiei ei.. Bacteri
Bacteriile
ile liz
lizogene
ogene su sunt imune la fagul agul virulent omolog profagului g gzduit.
zduit. Ace
Acest fag se se adsoa
soarbe, injecteaza
injecteaza
ADNul
DNul,, dar fr a se replica sau provoca liza. liza.
Conversie fagic fagic (modificarea fenotipului celulei cauzat de genele profagului). profagului).
Bacteriile
acteriile infectate
infectate cu un fag po pot prez
prezenta
enta unele caractere absente la celulele celulele ne neinfectat
infectate.e.
Conversie
onversie fagic agic cauzat
cauzat de:
1. expresia
expresia unor gene ale fagului agului de c ctre celule
2. inactivarea
inactivarea unor gene cromoz cromozomaleomale la integrarea
integrarea pro profagului
agului..

16
De ex.
ex., tulpinile de Corynebacterium diphtheriae care provoac provoac dif
difteria
teria su
sunt liz
lizogeni
ogenizate
zate de un anumit titip de fagi
agi care codeaza
codeaza i
i exprim o
toxin puternic
puternic;; toxina eritrogen a Streptococcus pyogenes,
pyogenes, etc
Cultura
ultura ii titrarea
titrarea bacteriofag
bacteriofagilor
ilor.. Efec
fectul fagilor
agilor viruleni
viruleni asup
supra culturilor
culturilor bacteriene
Bacteriofagii sunt cultiva
cultivai n laborator n mediu de cultur
cultur lichid sau solid n prezena bacteriilor omologe.
omologe.
Cultivarea n mediu lichid:
Bacteriile sensibile i fagii se ntroduc ntr-un bulion nutritiv (nr (nr fagi < nr bct).
bct). Amestecul este incubat pentru a permite bacteriilor s s se
multiplice i de a fi infectate de c ctre fagi num
numrul fagilor cre
crete mai rapid dec
dect cel al bacteriilor p
pn la un punct critic c
cnd num
numrul fagilor
prezen
prezeni este suficient pentru a infecta toate bacteriile culturii. Toate celulele bacteriene sunt lizate n acela acelai timp, ce duce la disparii
dispariiaa
complet
complet a turbidit
turbiditii
ii culturii (clarificarea mediului).
Cultivarea fagilor n mediu solid: Amestecul
Amestecul bacterii-fagi poate fi ad
adugat la geloza topit i rcit la 45
45 C i apoi turnat n cutia Petri.
Bacteriile cresc,
cresc, se multiplic, formnd o pelicul fin, iar fagii continu
continu ss infecteze provoc
provocnd liza confluent
confluent a culturii bacteriene. Aceste
colonii de fagi se manifest sub forma unor pete sterile (plaje). Numrul plajelor indic numrul fagilor infecioi n prelevat (fiecare colonie
se formeaz pe contul multiplicrii unui virion fagic).
Bacteriofagii
Bacteriofagii pot fi intlnii n diferite prelevate umane sau din mediul extern. Fagii indic prezena bacteriilor sensibile.
IZOLAREA BACTERIOFAGILOR
Prelevate: ap, sol, materii fecale, puroi, etc
Izolarea direct filtrarea prelevatelor prin filtre bacteriene, ultracentrifugare.
Izolare prin metoda de mbogire fr nsmnare materialul de examinat se inoculeaz ntr-un mediu nutritiv lichid (pentru multiplicare
bacteriile omologe fagului cutat). Peste 10 ore de incubare la 37 37 C bulionul este supus filtrrii. In filtrat s-au acumulat fagii care s-au inmulit
pe contul bacteriilor omologe din prelevat.
Izolare prin metoda de mbogire cu nsmnare inocularea prelevatului ntr-o suspensie bacterian omolog fagului cutat. Cultura
bacterian asigur mbogirea fagilor. Peste 10 ore de incubare la 37 37 C bulionul este supus filtrrii.
INDICAREA BACTERIOFAGILOR
Metoda OTTO.
OTTO. Pe placa de geloz din cutia Petri se nsmneaz n gazon suspensia de bacterii omologe fagului. n continuare se aplic o
pictur de filtrat care conine fag (cutia poate fi nclinat ca pictura s se preling). Cutia se incubeaz la 37 C timp de 24 ore.
Aprecierea:
Aprecierea: dac n filtrat se aflau fagi omologi culturii bacteriene, n locul aplicrii filtratului se observ o zon de liz (colonie negativ de
fag).
Metoda FURT. Filtratul ce conine fagi se amestec cu geloz topit i se toarn n cutia Petri. Suprafaa cutiei se mparte n 4 sectoare. n
fiecare sector se nsmneaz n striuri culturi cunoscute de diferite bacterii. Incubare la 37 C 24 ore.
Aprecierea:
Aprecierea: lipsa creterii bacteriilor ntr-un sector indic prezena fagului omolog.
Metoda FISHER
Similar cu metoda Furt, doar c suprafaa cutiei se mparte n 10 cadrane, astfel pot fi nsmnate 10 culturi bacteriene i pot fi indicai
concomitent mai muli fagi.

TITRAREA BACTERIOFAGILOR
Este utilizat pentru determinarea numrului de fagi viruleni n prelevat sau cultur.
Metodele de titrare a bacteriofagului
Titrarea bacteriofagului n mediu lichid (metoda Appelman)
Titrarea bacteriofagului n mediu solid (metoda Gratia)
APPELMAN la diluii logaritmice a culturii de fag (10-1.....10-10) n bulion peptonat se adaug suspensie bacterian omolog fagului examinat.
Dup 24 ore de incubare la 3737 C se apreciaz titrul fagului:
fagului: dilu
diluia maxim a fagului care nc mai provoac liza bacteriilor (mediu clar).
GRATIA. Dup diluia logaritmic a fagului i adugarea culturii bacteriene,
bacteriene, coninutul fiecrui tub se amestec cu geloz topit i amestecul se
toarn n cutii Petri.
Petri. Dup 24 ore de incubare la 37
37C se numr plajele formate (coloniile negative de fagi). Numrul plajelor corespunde cu nr
de fagi viruleni din materialul de examinat.
APLICAREA PRACTIC A FAGILOR
n domeniul terapeutic
Tratamentul i profilaxia maladiilor infecioase
n domeniul diagnostic
Fago-identificarea identificarea tulpinilor bacteriene necunoscute cu ajutorul fagilor omologi (metoda Otto, Furt, etc)
Lizotipizarea (fagotipajul). Permite diferenierea unor tulpini din cadrul aceleeai specii (subdivizarea speciei n lizotipuri/fagovaruri). Este
utilizat pentru tulpini de Staphylococcus aureus, Salmonella Typhi, .a.
Lizotipul reprezint un marker epidemiologic.
Fagii reprezint un model de studiu pentru geneticieni, fagii temperai se utilizeaz n ingineria genetic (ei pot asigura transferul de
material genetic prin transducie).

36. Virusurile. Natura. Particularitile biologice. Principiile de clasificare. Forma si dimensiunile virusurilor. Metodele de studiu.
Virusuri = gene vagabonde = particule infectioase autonome, caracterizate prin :
1. Reprezint structuri acelulare cu potenial infecios
2. Dimensiuni de rangul nm (20-400 nm)
3. Genomul viral este constituit dintr-un singur tip de AN (ADN sau ARN)
4. Sunt lipsite de metabolism propriu, fiind parazii obligai intracelulari
5. Nu cresc i nu se divid, se reproduc n celule vii
6. Nu cultiv pe medii artificiale, numai pe celule vii
7. Rezisten natural la antibiotice
myxovirusuri : AN + capsida = nucleocapsida; reovirusuri : ARN dublu catenar
Rol capsida: protecia AN, rol antigenic, adeziune
Virusurile cu supercapsida realizeaza absorbtia prin intermediul ei utilizarea detergentilor pt inlaturararea supercapsidei inlaturare
virulenta.
CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Dup tipul AN (cu genom ARN/ADN)
Dup dimensiuni (mici 20-50 nm, medii 50-150 nm, mari peste 150 nm)
Dup tipul de simetrie a capsidei (helicoidal, cubic, mixt)

17
 Dup gazd (om, animal, insect, bacterie)
Dup sensibilitatea n mediul extern, etc
Virusuri ADN : Parvoviridae, Hepadnaviridae, Adenoviridae, Herpesviridae, Poxviridae
Virusuri ARN+: Picornaviridae, Caliciviridae, Togaviridae, Flaviviridae, Coronaviridae, Retroviridae
Virusuri ARN- : Rhabdoviridae, Paramyxoviridae, Orthomyxoviridae, Bunyaviridae, Arenaviridae, Filoviridae
Virusuri ARNd.c. : Reoviridae
Virion unitate structural infecioas a virusului
Viroid ARNm.c., circular, asociat cu boli la plante
Prion protein termostabil infecioas, cauzeaz la om boala Kuru, Creutzfeldt-Jacob, sindromul Gerstmann-Straussler, scrapie la oi
COMPOZIIA CHIMIC I STRUCTURA VIRIONULUI
Virusurile simple AN i nveli proteic capsida (nucleocapsid)
Virusurile complexe nucleocapsid i un nveli extern, lipoglicoproteic (supercapsid, peplos)
AN ADN sau ARN, mono- sau bicatenar, linear, circular sau fragmentat.
ARN monocatenar : ARN+ (caten cu sens, ARNm) sau ARN- (caten fr sens)
Funcia AN asigurarea replicrii i expresia genomului pentru sinteza proteic
Capsida format din uniti proteice, capsomere, aranjate simetric.
Simetrie helicoidal capsomerele se fixeaz pe catena de AN, form de bastona
Simetrie cubic (icosaedric) capsomerele se aranjeaz n jurul AN, formnd un icosaedru (poliedru regulat cu 20 fee triungiulare i 12
vrfuri), eikos=20
Simetrie mixt (bacteriofagii, poxvirusurile)
Funcia protecia AN, rol antigenic, adeziune
Supercapsida structur glucido-lipido-proteic, derivat din membrana celulei gazd (lipidele din membrana celular,
glicoproteinele proprii)
Funcie protecie, antigene de suprafa, adeziune
Unele virusuri conin enzime polimeraze, transcriptaze, etc.
Aciunea factorilor fizici, chimici. Virusurile sunt foarte sensibile la cldur, desicare, UV. Detergenii i solvenii inactiveaz
virusurile cu supercapsid. Pot fi conservate prin liofilizare sau la -80 C
REPRODUCEREA VIRUSURILOR
I ADSORBIA virusului la celula-gazd prin intermediul receptorilor specifici (tropism)
II PENETRAREA n celul: Pinocitoz (viropexis); Fuziunea membranelor; Translocare; Injectarea AN n citoplasm
III DECAPSIDAREA (enzime celulare)
IV BIOSINTEZA (sinteza proteinelor i replicarea AN)
Are loc n citoplasm (virusuri cu ARN) sau nucleul celulei (virusuri cu ADN)
Biosinteza virusurilor ADN: ADNdc transcrierea ARNm, translaia (precoce, tardiv), replicarea, sinteza proteic
Biosinteza virusurilor ARN: ARN+ translaie, replicare, sinteza proteic; ARN- transcriere, ARNm, translaie, replicare, sinteza proteic;
Retrovirusuri (ARN+) transcriere, ADN-, ADNdc, transcriere, ARNm, replicare, translaie, sinteza pr. (sau integrare n cromosom)
V. MORFOGENEZA (asamblarea) virionilor
Proteinele capsidale particip la formarea nucleocapsidei (nucleu,citoplasm), glicoproteinele sunt inserate n MCP, substituind proteinele
celulare. Contribuie la apariia incluziunilor sau a corpusculilor elementari.
VI. ELIBERAREA virionilor (liza celulei, nmugurire, exocitoz)
Interferena viral fenomen n care, consecutiv infeciei unei celule cu 2 virusuri, multiplicarea unuia este inhibat (virus interferat / virus
interferent)

37. Virusurile simple si complexe. Structura virionului. Etapele de interactiune a virionului cu celula gazda.
RELAII VIRUS-CELULA GAZD
Infecie viral productiv, citocid
Virusul este infecios iar celula permisiv. La nivelul ma/o corespunde infeciilor acute, aparente sau inaparente (grip, rujeol)
Infecii virale persistente
Celulele infectate supravieuiesc cu producerea permanent sau intermitent a virusului.
Infecii abortive cu virioni defectivi infecia nu se exprim, are loc transformarea celulelor prin proteine virale. Ele devin int pentru
efectorii imunitii (macrofage, T-limfocite) n cursul unor infecii cronice (PESS post-rujeolic)
Infecii integrate (virusuri ADN sau copii ADN ale Retrovirusurilor)
Transformarea malign a celulei gazd
Manifestarea infeciei dup o perioad de incubaie ndelungat cu expresia integral a genomului viral (HIV-SIDA) infecii lente
Reactivri ocazionale, repetate ale infeciei cu exprimarea integral a informaiei genetice virale (infecia herpetic) infecii latente
Infecii cronice perioade de remisie i acutizare, virusul este prezent permanent, chiar n absena simptomelor (hepatita viral B)

38. Culturile celulare. Tipurile. Izolarea virusurilor pe culturi de celule. Metodele de indicare si identificare a virusului izolat.
Virusurile sunt cultivate pentru: Stabilirea diagnosticului etiologic; Testarea infeciozitii virusurilor; Testarea preparatelor antivirale;
Producerea vaccinurilor
SISTEME DE CULTIVARE: Culturi de celule; Ou embrionat de gin; Animale de laborator
Animalele de laborator se utilizeaz limitat (receptivitate selectiv, preexistena infeciilor, cost avansat). Se recurge numai cnd nu exist
alte posibiliti (VHB, HIV, Coxsackie, etc). Constituie modele de cercetare sau de control al vaccinurilor. Animalele utilizate curent
oriceii albi nou-nscui, dar pot fi utilizai obolani, cobai, maimue, etc.
Regulile de lucru cu animalele de laborator (selectare, inoculare, examinare) sunt identice cu cele din infeciile bacteriene.
Oul embrionat de gin (5-13 zile) reprezint un mediu de celule nedifereniate, cu multiplicare activ, steril i lipsit de mijloace de aprare
antiinfecioas. Se utilizeaz n prepararea unor vaccinuri virale (ex.: gripal)
Iniial se verific viabilitatea embrionului la ovoscop n camera obscur.
Prelevatul se inoculeaz steril cu seringa n cavitatea amniotic sau alantoidean, sau pe membrana chorioalantoidean (utiliznd metoda
deschis sau nchis). Orificiul se parafineaz i se incubeaz la 35-37 C timp de 48-72 ore
Culturile de celule. Celulele provenite din esuturi adulte sau embrionare, normale sau tumorale, plasate ntr-un mediu adecvat (nutrieni,
pH, t) rmn viabile i se multiplic. Pentru cultivarea virusurilor se utilizeaz culturile n monostrat celular.

18
 Tipurile de culturi de celule:
Culturi primare (primar tripsinizate). Sunt obinute din esuturi adulte sau embrionare de origine animal sau uman. Suport 4-6 pasaje
(subcultivri)
Culturi diploide. Obinute din esut embrionar (MRS5, fibroblaste umane). Pot fi subcultivate 40-50 generaii
Linii continui de celule. Obinute din esut tumoral. Pot fi subcultivate nelimitat.
Obinera culturilor de celule primar tripsinizate:
Prelevarea esutului (ex.: rinichi de maimu)
Fragmentarea i splarea cu sol fiziologic
Dezagregarea tisular cu enzime proteolitice
Separarea celulelor prin centrifugare
Dozarea suspensiei 105 106 celule/ml
ntroducerea celulelor n mediu nutritiv i repartizarea n recipiente sterile
Incubarea pn la formarea monostratului celular (inhibiie de contact)
Monostratul poate fi infectat cu virus sau servete drept surs de celule pentru o nou cultivare (pasaj)

Mediile de cultur pentru culturi de celule conin AA, Vit, factori de cretere, sruri minerale (Eagle, Hanks, 199, hidrolizat de
lactalbumin, etc), rou fenol pentru monitorizarea pH (vireaz n galben n mediu acid)
Mediile de cretere sunt mbogite cu ser sangvin (uman, animal) pentru cultivarea CC
Mediile de ntreinere se utilizeaz pentru meninerea monostratului n procesul reproducerii virale. Nu conin ser.
CC reprezint sistemul virus-gazd predilect n virologia clinic i cercetare.
Inocularea CC; Se aleg tuburi cu monostrat bine format; Se nltur mediul de cretere, se spal cu sol. Hanks
Se inoculeaz 0,1 0,2 ml de prelevat; Peste 30-60 min n tuburi se toarn cte ; 1 ml mediu de ntreinere
Se ntroduc n termostat la t adecvat 3-4 zile

39. Izolarea virusurilor in ou embrionar de gaina. Metodele de infectare. Indicarea si identificarea virusului izolat.
Oul embrionat de gin (5-13 zile) reprezint un mediu de celule nedifereniate, cu multiplicare activ, steril i lipsit de mijloace de aprare
antiinfecioas. Se utilizeaz n prepararea unor vaccinuri virale (ex.: gripal)
- Iniial se verific viabilitatea embrionului la ovoscop n camera obscur.
- Prelevatul se inoculeaz steril cu seringa n cavitatea amniotic sau alantoidean, sau pe membrana chorioalantoidean (utiliznd metoda
deschis sau nchis).
- Orificiul se parafineaz i se incubeaz la 35-37C timp de 48-72 ore
Indicarea virusului n oul embrionat de gin
Oule se rcesc 18 ore la +4 grade C pentru o vazoconstricie maxim, apoi aseptic se taie coaja, se recolteaz lichidul alantoic sau amniotic, iar
MCA i embrionul se ntroduc n cutii Petri sterile. Se observ:
1. Moartea embrionului
2. Apariia modificrilor (hemoragii, pustule) pe MCA
3. Acumularea de HA n lichide
40. Metoda virusologica in diagnosticul virozelor. Materiale de examinat (prelevate) de la bolnav. Regulile de recoltare, ambalare
si conditiile de transportare in laborator. Pregatirea pobelor pentru examinare in metoda virusologica. Etapele si esenta lor.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL VIROZELOR
Indicaii:
Boli cu msuri terapeutice sau profilactice speciale (SIDA, hepatite, rubeola, etc)
Elucidarea etiologiei virale a unor izbucniri epidemice (meningite, gastro-enterite, pneumonii, etc)
Supravegherea epidemiologic
Prelevate: LCR, snge, exsudate, secreii nazale, rino-faringiene, mase fecale, urin, vezicule i ulceraii cutaneo-mucoase, bioptate, etc.
Eficacitatea diagnosticului este condiionat de:
Alegerea corect a prelevatelor, calitatea lor i transportarea n laborator
Examinarea precoce (la debutul bolii)
Transportarea rapid a probelor sau utilizarea mediului de transport
Respectarea regulilor de autoprotecie i de protecie a anturajului la recoltare, transportare i examinarea probelor
METODELE DE DIAGNOSTIC AL VIROZELOR
METODE DIRECTE
Examenul virusoscopic (evidenierea direct a virionului sau a componentelor lui n prelevate)
Examenul virusologic (izolarea i identificarea virusului)
Detectarea Ag virale n prelevat
Identificarea genomului viral (hibridizarea AN, amplificarea genic PCR)
METODE INDIRECTE
Serodiagnosticul (creterea de cel puin 4 ori a titrului Ac n dinamic)
EXAMENUL VIRUSOSCOPIC
Microscopia optic depistarea n prelevat a incluziunilor virale specifice (corpusculii Guarnieri n variol, Babe-Negri n rabie) sau
nespecifice, citoplasmatice sau nucleare. Se prepar frotiuri sau frotiuri-amprente colorate Romanovschi-Giemsa sau cu fluorocrom
Microscopia electronic
Imunoelectronomicroscopia mai sensibil, mai specific. Se examineaz complexele imune virus Ac
Imunofluorescena (direct i indirect) utilizat n diagnosticul rapid al virozelor
EXAMENUL VIRUSOLOGIC
Prelucrarea prealabil a prelevatelor:
Omogenizarea (dup necesitate)
nlturarea elementelor celulare, inclusiv bacteriene (centrifugare, ultrafiltrare)
Tratarea cu antibiotice pentru prevenirea creterii bacteriilor i fungilor contaminani (penicilin - 500 UA/ml, streptomicin 500 UA/ml,
nistatin - 20 UA/ml)
Etapele diagnosticului virusologic: Izolarea virusului; Evidenierea (indicarea) reproducerii virale; Identificarea virusului

19
 Izolarea virusului se realizeaz prin inocularea cu material de examinat a animalelor de laborator, embrionilor de gin sau a culturilor de
celule. Alegerea sistemului de cultivare se efectueaz n funcie de particularitile biologice ale agentului etiologic probabil i posibilitile
laboratorului.
INDICAREA VIRUSULUI
n culturi de celule
ECP modificri degenerative i distrugere celular, rezultat al multiplicrii virale (rotunjire sau retracie celular, citoliz, apariia
vacuolelor sau granulelor n citoplasm, picnoza nucleului, fuziunea membranelor, etc). ECP poate fi studiat la microscopul optic pe celule
necolorate sau colorate cu hematoxilin-eozin, Giemsa, fluorocrom.
Incluziuni virale
Reprezint acumulri paracristaline de virioni sau de componente virale n aria de replicare i asamblare a virusurilor (citoplasm, nucleu).
Coloraia Giemsa, hem-eozin, fluorocrom. Localizarea, forma i afinitatea tinctorial (bazofile, acidofile) sunt particulariti diagnostice
pentru unele viroze.
Interferena
Ex.: V.rubeolic nu produce ECP, dar determin fenomenul de interferen. Pentru detectarea V.rubeolei se infecteaz CC cu virus
citopatogen. Lipsa multiplicrii acestui virus confirm prezena V.rubeolei.
Hemadsorbia (RHAd) pentru virusuri cu HA. Unele virusuri posed n componena capsidei, n special supercapsidei, glicoproteine
care pot adera la suprafaa hematiilor HA. n timpul eliberrii din celul prin nmugurire a acestor virusuri, HA lor se afl deja nserate n
MCP la nivelul mugurelui. Dac la aceasta etap n recipientul cu monostrat celular se adaug suspensie de hematii i se menine 15-20 min
la t caracteristic fiecrui virus, la microscop pot fi urmrite hematiile fixate la suprafaa celulelor infectate (RHAd).
Hemaglutinarea (RHA) Pentru virusurile cu HA acumulate n mediul de ntreinere. n acest caz mediul de ntreinere aglutineaz
eritrocitele unor specii de mamifere sau psri.
Formarea plajelor Reprezint focare de celule alterate n monostratul celular acoperit cu agar. Numrarea plajelor permite cuantificarea
virusului infectant.
Proba culorii Metabolismul celular neafectat virajul culorii mediului din rou n galben (pH acid). Metabolismul celular inhibat
culoarea mediului nu se modific
Indicarea virusului n oul embrionat de gin
Oule se rcesc 18 ore la +4 grade C pentru o vazoconstricie maxim, apoi aseptic se taie coaja, se recolteaz lichidul alantoic sau
amniotic, iar MCA i embrionul se ntroduc n cutii Petri sterile. Se observ: Moartea embrionului; Apariia modificrilor (hemoragii,
pustule) pe MCA; Acumularea de HA n lichide; Indicarea virusului pe animale de laborator; Boala manifest a animalului, deces
Urmrirea virusului n organele-int: Hemaglutinare; Infeciozitatea omogenatelor; Examene histopatologice (leziuni inflamatorii,
degenerare, incluzii virale specifice: corp. Babe-Negri n neuronii infectai cu V.rabic, etc) Identificarea virusurilor; Determinarea genului,
speciei i serotipului de virus prin stabilirea structurii antigenice.
Se efectueaz cu ajutorul serurilor imune specifice antivirale n diferite reacii serologice: RN; RIHA/RIHAd; RFC; RIF; RIE (ELISA) ;
ARI, etc
DETECTAREA AG VIRALE N PRELEVATE
Avantaje: simplitatea i rapiditatea examenului, nu necesit meninerea infeciozitii virusului
Dezavantaje: sensibilitate direct proporional cu cantitatea virusului din prelevat
Se utilizeaz Ac policlonali de origine uman (seruri imune) sau Ac monoclonali (de origine murin)
Reacii: RHAI, RLA, RIF, RIE, Western-blot, ARI, etc.
IDENTIFICAREA GENOMULUI VIRAL (punerea n eviden a AN virali din prelevate n cursul infeciilor virale acute sau cronice i
monitorizarea tratamentului). Pot fi examinate toate esuturile i lichidele biologice. Hibridizarea acizilor nucleici fr amplificare.
Hibridizarea dup amplificare (PCR i variantele ei)
DIAGNOSTICUL SEROLOGIC
Esena: depistarea Ac sintetizai de gazd n rspuns la o infecie viral.
Dup o primo-infecie are loc inducerea formrii Ac, iar dup o reinfecie sau reactivare titrul Ac crete n dinamic. n serodiagnosticul
virozelor este obligator de a examina 2 probe de ser de la bolnav : prima prelevat la debutul bolii, al doilea prelevat peste 15 zile. Ac sunt
depistai n ser, uneori n LCR, exsudate, lichid articular, etc. Pentru depistarea Ac se utilizeaz Ag virale de referin (suspensie viral
inactivat, proteine virale native sau recombinante, oligopeptide sintetice).
Tehnici utilizate: RFC, RIHA, RHAI, RN, RIFI, ARI, AIE (ELISA), etc.
Semnificaie diagnostic prezint trecerea titrului de Ac de la 0 la pozitiv (seroconversie, primo-infecie) sau creterea titrului Ac de cel
puin 4 ori n cursul infeciei. Ambele seruri vor fi testate n aceeai zi, prin tehnici identice i n acelai laborator.

41. Rolul microorganismului in procesul infectios. Notiune de mi/o patogene. Patogenitatea si virulenta mi/o. Unitatile de
virulenta. Utilizarea practica a atenuarii dirijate a virulentei.
INFECIA totalitatea proceselor biologice care se produc n ma/o n urma penetrrii mi/o patogene sau p oten otenial patogene (PP).
(PP).
PROCESUL INFECIOS interaciunea dintre mi/o i ma/o n diverse condiii ale mediului ambiant. Manifestarea lui poate fi inaparent /
asimptomatic (stare de portaj sntos, eliminarea rapid a mi/o) sau simptomatic.
simptomatic.
MALADIA INFECIOAS manifestarea suprem a procesului infecios diferite simptome efectele metaboliilor microbieni (toxine,
enzime,
enzime, etc)
etc) sau de reacia imun a gazdei la prezena bacteriei.
Particularitile bolii infecioase
1. provocata de ageni patogeni
2. Contagiozitate (capacitatea de a se transmite de la o surs la o persoan receptiv)
3. Specificitate (un agent provoac o infecie, ex.: Clostridium tetani este agentul tetanosului, etc.)
4. Evoluie clinic stadial; Imunitate la reinfecie (durat variabil)
5. Apariia maladiei depinde de multipli factori, n special de capacitatea agentului cauzal de a provoca maladia i de gradul de
rezisten al
al gazdei la aceast invazie
ROLUL MICROORGANISMULUI N PROCESUL INFECIOS. PATOGENITATEA I VIRULENA
Relaiile dintre mi/o i ma/o gazd: Comensalism (flora bucal, intestinal, etc); Parazitism (prezena mi/o este nociv pentru ma/o). Orice mi/o
parazit capabil s provoace o infecie (condiii adecvate) este considerat patogen.
Exist 2 tipuri de mi/o patogene:
Obligat (cert) patogene,
patogene, care infecteaz persoane imunocompetente cu doze mici

20
 Potenial patogene (oportuniste), care pot cauza infecie numai cu doze mari sau la persoane imunocompromise (deseori fac parte din flora
normal a organismului)
Mi/o patogene pot fi gzduite uneori fr a provoca maladia, astfel de persoane sunt numite purttori sntoi de germeni.
Microorganismele patogene se caracterizeaz prin:
Patogenitate capacitatea unei bacterii de a declana infecia. Este un caracter de specie determinat genetic (cromozom, plasmide,
bacteriofagi). n cadrul unei specii patogene pot exista tulpini cu manifestare variat a patogenitii de la absena total pn la foarte
nalt.
Virulen gradul de patogenitate alal unei tulpini (msur cantitativ a patogenitii). Se apreciaz prin infectarea animalelor de
laborator cu cantiti diferite de mi/o.
Unitile de virulen:
DLM numrul de bacterii necesar pentru a ucide 80% din animalele
animalele infectate
DL50 50% letalitate
DCL 100% letalitate
DI50/DI provoac boala la 50% / 80% animale
Modificarea virulenei:
Amplificarea prin transfer i recombinare genetic, condiii optime pentru cretere
Reducerea (atenuarea) prin meninerea bacteriilor n condiii nefavorabile (t, factori chimici, etc) , mutaii
mutaii

42. Caracteristica mi/o patogene. Factorii de patogenitate. Clasificarea. Rolul factorilor de patogenitate de structura si al
enzimelor de patogenitate in evolutia infectiei.
Bacteria patogen trebuie:
1. S fie capabil de a se transmite ntre gazde
2. S penetreze n organismul-gazd
3. S se rspndeasc prin organism
4. S se multiplice i s persiste (evitnd sau distrugnd sistemul imun al gazdei)
5. S produc leziuni
Aceste capaciti sunt asi
asigurate de factorii de patogenitate.
Factorii de patogenitate ai bacteriilor
Factori structurali (somatici)
Adezine - fimbriile, glicocalixul, proteine de adeziune ale peretelui celular. Asigur aderarea bacteriilor la receptorii de pe suprafaa
celulelor-int sau la proteine matriciale extracelulare (colagen, fibronectin, laminin, elastin, etc)
Proteine ale sistemelor de secreie (tipuri I-IV)
Capsula antifagocitar, anti-complement Ag K
Antigenul O - antifagocitar
Peptidoglicanul (adeziune, agresie tisular)
Acizii teichoici/lipoteichoici (adeziune, toxicitate)
Proteina A la stafilococi (aciune antifagocitar prin fixarea Fc a IgG)
Proteina M la streptococi (adeziune, antifagocitar)
Enzime de patogenitate (responsabile de persisten, diseminare i producerea leziunilor)
Plasmocoagulaza (formarea
(formarea trombilor septici-efect
septici-efect antifagocitar, propagare n organism)
Fibrinolizina (eliberarea bacteriilor din trombi)
Hialuronidaza (diseminar
(diseminare,
e, leziuni tisulare
tisulare)
Colagenaza (identic)
Neuraminidaza (lichefierea mucusului)
Proteaze (ex.: distrugerea Ig A secretorii)
Dezaminaze
Decarboxilaze
Fosfataze, etc
Toxine bacteriene (responsabile de leziuni): Exotoxine (proteice, secretate n mediul extracelular); Endotoxine (LPZ, legate de celula
bacterian)
Moduline i invazine: Injectate la suprafaa sau direct n interiorul celulei-int; Induc penetrarea (internalizarea) i propagarea bacterian. Se
ntlnesc la Yersinia, Shigella, Salmonella, Escherichia
Ali factori ce asigur persistena mi/o: Variaii antigenice; Mimicria antigenic

43. Toxinele microbiene. Tipurile de toxine si caracteristica lor. Rolul in patogeneza infectiei.
Caracteristica exotoxinelor:
exotoxinelor:
Proteine produse de bacterii G+/G-
Pot fi secretate n mediul extern, eliberate n spaiul periplasmic sau fixate pe suprafaa celulei
Termolabile (excepie enterotoxina stafilococic i TS (toxina termostabil) a E. coli)
coli)
Hidrosolubile i acioneaz la distan
Efectul se instaleaz dup o perioad de incubaie
Manifest tropism (specificitate de aciune)
Toxicitate nalt (DLM de ordinul ng/kg)
Exotoxinele sunt imunogene (induc sinteza anticanticorpilor - antitoxine)
Antitoxinele neutralizeaz activitatea exotoxinei (faza de fixare pe receptorii celulari)
Exotoxinele tratate cu formol 0,4% i meninute la 39-40C timp de 3-4 sptmni se transform n anatoxine. Ele sunt lipsite de toxicitate dar
pstreaz imunogenitatea (utilizate n calitate de vaccin).
Suportul genetic al exotoxinelor: cromozom (dizenteric), plasmide (toxina antraxului, toxina tetanic), profagi (toxina difteric, botulinic).

21
Tipurile de exotoxine:
Toxine citolitice. Deregleaz membranele celulare prin aciune enzimatic (fosfolipaza /lecitinaza, sfingomielinaza) sau prin formarea porilor
(streptolizina O, -toxina/hemolizina S.aureus,
S.aureus, leucocidina)
Toxine citotoxice,
citotoxice, de tip A-B (acioneaz n interiorul celulei). Ex.: toxina difteric, botulinic, tetanic, holeric, etc
Au structur bipartit: fracia polipeptidic B (cell binding)
binding) este responsabil de legarea de receptorii specifici din membrana celulei-int,
fracia polipeptidic A (active
(active)) ptrunde n celul (prin endocitoz sau translocare) i determin activitatea toxic.
Fiecare citotoxin acioneaz strict specific:
specific: toxina difteric inhib sinteza proteinelor, toxina botulinic i tetanic neurotoxine, inhib
eliberarea neurotransmitorilor, toxina holeric i pertusic activeaz adenilat-ciclaza membranar, etc
Obinerea exotoxinelor bacteriene
Cultivarea tulpinii toxigene n mediu lichid
Filtrarea culturii pentru separarea toxinei
Purificarea toxinei
Concentrarea toxinei
Determinarea activitii toxinei (se m msoar
soar in unit
unitii de floculare Lf )

Caracteristica endotoxinelor:
Complexe LPZ din peretele celular G- (cel mai toxic component este lipidul A).
Este eliberat n urma lizei bacteriilor (sub influena sistemului imun al gazdei sau a unor AB).
Termostabil
Ne-imunogen
Nu poate fi transformat n anatoxin
DLM de ordinul mg/kg
Efectul se manifest imediat
Determin efecte generale, indiferent de provenien

Mecanismul de aciune al endotoxinei : LPZ induce secreia unor substane biologic active (citokine pro-inflamatoare: IL-1, IL-6, IL-8, IL-12,
TNF-a) de ctre macrofage i alte celule. Iniial LPZ se leag de o protein seric (LPS-binding protein) acest complex interacioneaz cu CD
14 de pe membrana macrofagului. Exist i molecule solubile de CD 14, astfel endotoxina poate s acioneze asupra altor celule, de ex.: celulele
epiteliale. Un alt receptor macrofagic poate interaciona cu LPZ receptorul toll-like (TLR4).
n doze mari citokinele pot provoca ocul endotoxinic (septic), comun pentru toate bacteriile G-:
Febr (eliberarea pirogenilor IL-1, TNF de ctre celulele care au captat endotoxina)
Leucopenie, urmat de leucocitoz
Tulburri de coagulare (activarea factorului XII formarea fibrinei i obstrucia capilarelor sanguine coagulare intravenoas
diseminat)
Hemoragii (consumarea factorilor de coagulare) n diverse organe (rinichi, suprarenale, plmni, creier)
Vazodilatare, urmat de colaps vascular (sechestrarea periferic a sngelui, hipovolemie, acidoz metabolic, scderea brusc a presiunii
sanguine)
n consecin au loc leziuni hemoragice i necroz n diverse organe (rinichi, suprarenale, plmni, creier...).
Pronosticul este foarte sever.

44. Rezistenta nespecifica a macroorganismului. Notiune. Factorii care asigura rezistenta nespecifica. Rolul factorilor tisulari (de
bariera) si umorali in prevenirea infectiei.
Sursa de infecie:
infecie: omul bolnav, reconvalescent, purttor sntos (infecii antroponoze) sau animalele (infecii zooantroponoze).
Mecanismele de transmitere
Prin contact (direct, indirect)
Fecal-oral (alimentar, hidric, etc)
Aerogen (aer-praf, aer-picturi)
Transmisiv
Transmisiv (prin
(prin intermediul vectorilor
vectorilor))
Vertical (transplacentar)
Microbii penetreaz prin tegument, mucoase sau direct n snge (pori de intrare). Un microb poate avea una sau mai multe pori de intrare.
Doza critic ex.: dizenterie 102 mi/o, febr tifoid 105 , holer 109 .
La poarta de intrare bacteria ader la celule (adeziunea
(adeziunea)) i se multiplic local (colonizarea
(colonizarea),
), formnd focarul primar de infecie.
infecie. Infecia poate
rmne localizat sau poate s se rspndeasc (invazia) pe cale limfatic, sanguin,
sanguin, pe calea nervilor sau prin continuitate (din aproape n
aproape). n esutul afectat mi/o se multiplic i provoac leziuni direct prin intermediul enzimelor sau toxinelor sau indirect, via mecanisme
imune.
Mi/o se elimin cu diferite secrete sau excrete ale ma/o, prin care are loc contaminarea altor gazde sau obiecte.
Dinamica evoluiei bolii infecioase
1. Perioada de incubaie (de la penetrarea mi/o pn la apariia primelor simptome). Durata variabil (ore ani). Microbul se adapteaz, se
multiplic, produce toxine, enzime, etc.
2. Perioada de invazie (prodromal, de debut). Apar primele semne clinice, nespecifice (febr, frison, inapeten, astenie, etc). Durata 2-3
zile.
3. Perioada de stare (a manifestrilor clinice specifice). Durata variabil.
4. Perioada terminal (convalescen i vindecare, sau cronicizare, sau stare de portaj, sau deces)
Criteriile de apreciere a rolului etiologic al agentului cauzal n survenirea infeciilor specifice (postulatele lui Koch)
Bacteria trebuie s fie prezent la toate persoanele bolnave.
Bacteria trebuie s fie izolat de la bolnav i meninut n cultur pur.
Cultura pur inoculat la un voluntar sau la un animal experimental trebuie s reproduc simptomele bolii.
Aceeai bacterie trebuie s fie reizolat de la voluntarul
voluntarul sau animalul infectat.

22
Actualmente se insist pe genomul bacterian (prezena genelor de patogenitate).
Rolul mediului ambiant i social n infecie (condiiile economice, condiiile de via, catastrofe ecologice sau naturale, progresul n igiena
public, etc). Maladii sociale: tuberculoza, pediculoza (tifosul exantematic), sifilisul, etc.
Rolul macroorganismului n procesul infecios. Rezistena nespecific a ma/o.
Pentru meninerea coerenei celulelor i esuturilor i pstrarea integritii sale ma/o pune n joc 2 categorii de procese aprute succesiv n cursul
evoluiei:
Rezistena nespecific, nnscut dezvoltat filogenetic, asigurat de factori constituionali. Rspuns maxim imediat, nespecific, antigen-
independent.
Imunitatea (rezistena specific) s-a dezvoltat ontogenetic, Ag-dependent i Ag-specific, rspuns maxim peste cteva zile de la agresie, se
caracterizeaz prin memorie imunologic.

Rezistena nespecific: Rezistena nespecific este asigurat de factori tisulari (de barier), factori celulari i umorali.
Factori tisulari (de barier)
1. Tegumentul (barier
(barier mecanic - integritatea, descuamarea stratului cornos; barier biologic -flora normal, chimic - pH acid al
tegumentului)
2. Mucoasele (barier
(barier mecanic - integritatea, micarea cililor, scurgerea secretelor; chimic -secreiile digestive, pH acid al urinei;
biologic -flora normal; barier enzimatic enzimele din secreiile mucoaselor, ex.: lizozimul, lactoferina)
Dac barierele au fost depite, atunci organismul dispune de ali factori de rezisten nespecific: factori celulari i umorali.
Factori umorali de rezisten nespecific
Reactivi de faz acut organismul supus unei agresiuni reacioneaz prin sinteza i secreia crescut a unor proteine plasmatice:
inhibitori de proteaze
proteine ale sistemului complement i ale coagulrii
proteina C reactiv
protrombina, fibrinogenul, etc.
Acestea mresc rezistena gazdei, limiteaz leziunile tisulare si favorizeaz vindecarea.
1. Complementul reprezint un sistem complex de proteine termolabile solubile i membranare. Se ntlnesc n plasma sangvin, limf i
exsudate. Nu se detecteaz n saliv, lacrimi, urin, transsudate.
Exist peste 30 de fracii ale C. C1-C9 sunt solubile, celelalte au rol de receptori membranari.
Fraciile C1-C9 circul n ser sub form inactiv, care n procesul activrii capt proprieti enzimatice.
Activitatea biologic a complementului:
Opsonizarea bacteriilor
Aciune citolitic
Activitate anafilactic stimulare chimiotaxis activare neutrofilele, degranularea mastocitelor,bazofilelor
Activarea limfocitelor B
2. Properdina proteine serice care particip la activarea complementului pe cale alternativ.
3. -lizinele proteine serice termostabile (63 grade) cu activitate antimicrobian asupra bacteriilor G+ n special
4. X lizina,
lizina, protein seric termostabil (70-100 grade), produce liza bacteriilor G
5. Lizozimul prezent n lacrimi, saliv, ser sanguin, favorizeaz liza bacteriilor
6. Anticorpii normali
7. Interferonii (glicoproteine cu aciune antiviral, antiproliferativ i imunomodulatoare)

45. Rezistenta nespecifica a macroorganismului. Notiune. Factorii celulari de rezistenta nespecifica. Fagocitoza: celulele
fagocitare, etapele fagocitozei. Notiune de opsonine si opsonizare. Rolul fagocitozei in initierea raspunsului imun.
Factori celulari de rezisten nespecific:
Reacia inflamatoare.
inflamatoare. mpiedic multiplicarea i rspndirea microbilor i asigur distrugerea lor.
Fagocitoza (component al reaciei inflamatoare). Asigur captarea i distrugerea substanelor strine, inclusiv a mi/o, celulelor infectate,
celulelor tumorale.
Celulele fagocitare (fagocitele)
1. Leucocitele PMN
2. Macrofagele (monocite
(monocite n snge, macrofage fixe cel. Kupffer, macrofage alveolare, osteoclaste, microglia, macrofage din
splin i ganglioni limfatici).
Pentru a interveni, fagocitele trebuie s recunoasc bacteriile ca particule strine.
Exist molecule solubile i membranare care pot recunoate componente bacteriene:
Solubile lectinele care se pot lega de manoza din PC; proteine plasmatice ce leag LPZ bacterian
Membranare pe macrofage exist receptori de manoz, receptorul CD 14 pentru LPZ, receptori Toll-like (TLR). TLR pot recunoate
diferite molecule bacteriene: LPZ, PG, lipoproteine, acizi lipoteichoici, flagelina.
Ali receptori:
receptori: receptori pentru Fc al IgG, pentru complement (CR1, CR3, CR4), pentru interferon, limfokine, lectine, fibronectin, .a.
FAZELE FAGOCITOZEI
1. Chemotaxisul (atractani proteine bacteriene, fragmente de PC, capsule, LPZ, chemokine, etc)
2. Adeziunea mi/o la fagocit (fagocitul recunoate
recunoate molecule strine de pe suprafaa bacteriilor monomeri de PG, acizi teichoici, LPZ,
acid micolic,
micolic, ADN
ADN bacterian,
bacterian, ARNd.c. viral,
viral, manoza, glicani din fungi, etc )
Inhibitori capsula, Ag O, prot. M, prot. A, plasmo-coagulaza,
plasmo-coagulaza, etc.
etc. Bacteriile patogene care nu pot fi fagocitate se numesc extracelulare.
Stimulatori cationi de Ca2+, prot. C - reactiv, opsonine (fracii de complement (C3b), fibronectina, unii Ac). Datorit receptorilor opsoninele
acoper suprafaa bacteriilor (opsonizare). Fagocitele de asemenea posed receptori pentru opsonine i astfel faciliteaz adeziunea i ingestia
mi/o.
3. Ingestia (nglobarea) i formarea fagosomei.
4. Distrugerea (digestia) intracitoplasmatic. Fagosoma fuzioneaz cu Lz fagolizosom mi/o va fi omort sub aciunea E, anionilor
superoxizi, H2O2, pH acid, apoi digerat de E hidrolitice.
5. Produsele degradate pot fi eliminate din celul (PMN, macrofagele) sau dup o selecie i pregtire prealabil (processing) unele
peptide vor fi expuse pe membrana macrofagelor n asociaie cu molecule ale CMH. Ele vor contribui la stimularea imunitii prin
interaciunea cu receptorul pentru Ag de pe limfocitele T. Aceasta este fagocitoza complet.
complet.

23
Fagocitoza incomplet agentul persist i se multiplic n fagocit (micobacterii, gonococi). Cauze: inhibiia formrii fagolizosomei,
eliminarea bacteriei din fagosom nainte de fuziunea cu lizosoma, etc). Acetia sunt patogeni facultativ intracelulari.
Aprecierea strii funcionale a fagocitelor: Procentul fagocite
fagocitelor
lor active
active (N - 30-60%) ponderea fagocitelor care au nglobat cel puin un
mi/o. Numrul fagocitar (N - 4 - 24) nr de mi/o nglobate n mediu de un fagocit
Alte celule cu activitate nespecific: celulele K i NK

46. Notiune de antigen. Proprietatile de baza ale antigenelor (imunogenitatea si antigenitatea). Antigenele complete si incomplete
(haptenele), caracteristica lor. Antigenele T-dependente si T-independente. Determinantele antigenice (epitopii), tipurile. Valenta
antigenului.
ANTIGENELE substane strine (non-self) de natur endo-/exo-gen capabile s declaneze un rspuns imun (umoral, celular, toleran
imunologic, memorie imunologic, paralizie imunologic).
Proprietile de baz ale Ag:
Imunogenitatea capacitatea Ag de a fi recunoscut ca strstrin i de a induce rspuns imun specific
Antigenitatea (specificitatea) capacitatea Ag de a interaciona specific cu Ac sau cu receptorul pentru Ag complementar al limfocitelor
sensibilizate
Antigenele care posed ambele caractere sunt Ag complete.
complete.
Cerinele fa de Ag complete:
S fie substane strine
S fie formate din gruparea carrier (purttor) i epitopi (determinante antigenice)
S aib o greutate molecular de peste 10 kDa
S aib structur chimic complex (proteine,
(proteine, PZ,
PZ, LPZ, etc)
S aib o conformaie spaial stabil
Antigenele incomplete (haptenele) posed antigenitate dar sunt lipsite de imunogenitate.
Cerinte fata de Ag incomplete (haptenele):
Au mas molecular mic
Pot deveni imunogene combinndu-se cu macromolecule purttoare (proteine sau polizaharide)
Exemple de haptene:
haptene: sruri ale metalelor grele (Cr, Ni), substane de origine vegetal, medicamente, colorani, oligonucleotide.
SuperAg molecule proteice particulare (enterotoxinele stafilococice, toxina ocului toxic stafilococic,
stafilococic, toxina exfoliativ a stafilococilor,
nucleocapsida virusului rabic), capabile s stimuleze un numr mare de limfocite T (10-40%). N 0.01%. SuperAg provoac reacii
imunopatologice.
Se disting arbitrar:
Ag solubile:
solubile: proteine plasmatice, toxine, enzime, hormoni, etc
Ag figurate (celulare, corpusculare): celule, bacterii, parazii, etc.
n funcie de provenien se deosebesc:
Ag heterofile Ag comune mai multor specii animale. Ex.: Ag polizaharidice Forssman,
Forssman, prezente
prezente n hematiile de cal, cine, oaie,
cobai; sistemul Rh al eritrocitelor se ntlnete la om i maimuele Macaccus rhesus, etc
Ag heterologe (xeno-Ag, hetero-Ag) Ag provenite din organismul altei specii
Izo-Ag (alo-Ag) Ag de grup n cadrul unei specii (sistemul ABO i Rh, Rh, clasele de Ig)
Idioantigene antigenele specifice unui individ. Corespund moleculelor CMH
Autoantigene Ag proprii unui organism, devenite imunogene n anumite condiii (spermatozoizii, tiroglobulina, insulina, cristalinul,
esutul nervos, etc)
Exoantigene (provenite
(provenite din compartimentul extracelular - bacterii, fungi, protozoare fagocitate)
fagocitate)
Endoantigene (provenite
(provenite din citoplasma celulelor, reprezint proteine proprii modificate sau proteine virale sintetizate de celulele
macroorganismului)
Structura antigenic a celulei bacteriene
Ag structurale (Ag O/R somatice, LPZ, termostabile; Ag H flagelar, proteic, termolabil;
termolabil; Ag K capsular, termovariabil;
termovariabil; Ag F fimbrial)
Ag solubile (enzime de patogenitate, exotoxine)
Antigene virale: proteine/GP de invelis,
invelis, nucleoproteine, enzime
Determinantele
Determinantele antigenice
antigenice (epitopii). Imunogenitatea este o caracteristic a ntregii macromolecule Ag. Antigenitatea (specificitatea) este
determinat de anumite secvene ale Ag. Suprafee limitate din macromolecula Ag apte s se combine cu Ac specifici sau cu receptorii de pe
limfocitele sensibilizate se numesc determinante
determinante antigenice
antigenice sau epitopi.
La glucide epitopul este format din 4-6 monozaharide. Polizaharidele sunt formate dintr-un epitop repetat sau dintr-un numr redus de epitopi
diferi
diferii. Polizaharidele sunt Ag T-independente, pot induce sinteza Ac fr intervenia TL.
Epitopul proteic este constituit din civa aminoacizi (AA (AA)).
Epitopii lini
liniari (secveniali) sunt determinai de structura primar a AA (8-30
(8-30 AA)
Epitopii conformaionali sunt determinai de structura secundar sau teriar a moleculei proteice (juxtapoziia n spaiu a AA situai la
distan). Se modific la denaturarea proteinei.
Fiecare molecul proteic reprezint un mozaic de epitopi, fie diferii, fie identici.
Proteinele sunt Ag T-dependente, deoarece ele induc sinteza Ac doar prin cooperarea dintre T i B limfocite.
Numrul de epitopi de pe o molecul imunogen reprezint valena Ag.

47. Sistemul imun, functiile. Organele sistemului imun. Rolul organelor centrale si periferice ale sistemului imun. Celulele
sistemului imun si functiile lor.
IMUNITATE nereceptivitatea organismului la orice ageni strini din punct de vedere genetic, inclusiv la mi/o i toxinele lor.
IMUNITATE capacitatea de aprare specific a organismului fa de agresori externi (virusuri, bacterii, fungi, protozoare , toxine)
toxine) ct i fa
de propriile molecule i unele celule degradate sau modificate.
Sarcina fundamental a imunitii distincia dintre moleculele i celulele proprii (self
(self)) i cele strine (non-self
(non-self))
TIPURILE DE IMUNITATE
Ereditar (natural, de specie). Poate fi absolut (lipsa intei) sau relativ.
Dobndit (achizitionata, adaptativa)
Activ
Activ - Natural
Natural (postinfecioas); Artificial
Artificial (n urma vaccinrii)
vaccinrii)
24
Pasiv
Pasiv - Natural
Natural (transplacentar, prin laptele
laptele matern);
matern); Artificial
Artificial (administrarea Ac/
Ac/seruri imune sau a limfocitelor)
Imunitatea dobndit se caracterizeaz prin:
1. Dezvoltare lenta si manifestare tardiva (cteva zile, sptmni dupa contactul cu un Ag)
2. Specificitate fa de Ag (capacitatea de a recunoaste si raspunde specific la numeroase substante straine, inclusiv agenti infectiosi)
3. Memorie imunologic (capacitatea de a elabora raspuns mai rapid, mai intens si eficace la intalniri repetate cu un Ag)
Imunitatea dobndit poate fi:
Imunitate antibacterian, antiviral, antimicotic, antitoxic, antitumoral, etc.
n funcie de mecanismele reaciilor imune:
Imunitate umoral,
umoral, exercitat
exercitat prin intermediul unor proteine numite anticorpi (Ac, Ig) limf. B. B. Fiind secretate in sange si lichide
biologice neutralizeaza si elimina microbii extracelulari si toxinele lor.
Imunitate celular,
celular, eficienta in eliminarea parazitilor intracelulari sau a celulelor tumorale. Este exercitat prin intermediul limf. T
(citotoxicitate directa, activarea macrofagelor, celulelor NK, secre
secreia citokinelor).
n dependen de persistena mi/o:
Imunitate steril se manifest dup eliminarea
eliminarea agenilor patogeni din organism (ex.: rujeol)
Imunitate nesteril nereceptivitatea se pstreaz doar n perioada aflrii mi/o n organism (tbc, sifilis).
Sistemul Imun reprezinta un ansamblu de celule,
celule, molecule i tesuturi (organe
(organe)) distribuite n tot organismul,
organismul, care participa la instaurarea
imunitatii.
imunitatii.
Functiile Sistemului Imun: Aparare contra infectiilor; Recunoasterea tesuturilor si proteinelor straine si raspunsul la ele; Protectie contra
tumorilor

Organele centrale (primare) ale SI mduva osoas i timusul la vertebrate (ficatul n perioada embrionar), bursa Fabricius la psri. Apar
primele n timpul vieii embrionare.
Rolul sursa celulelor-stem, instruirea, maturizarea i selectia celulelor imunocompetente (limfocitele T i B).
n mduva osoas se afl celulele-stem, precursori ai T i B-limfocitelor. Pre-T limfocitele migreaz ulterior n timus, unde va avea loc
instruirea i maturizarea lor, devenind celule imunocompetente, capabile s recunoasc specific un singur Ag (prin achiziionarea unor receptori
specifici). Instruirea si maturizarea B-limfocitelor are loc n mduva osoas. Aceste procese sunt independente de orice stimulare antigenic a
organismului.
Dup prsirea organelor centrale limfocitele nu mai revin aici, ele se stabilesc n organele limfoide secundare, recircul
recirculnd
nd prin snge, limf.
Organele periferice (secundare) ale SI. n ele se realizeaz contactul dintre Ag, celulele prezentatoare de antigen ( CPA) i celulele imuno-
competente, cucu inducerea unui raspuns imun.
imun. Ganglionii limfatici (raspuns imun contra Ag transportate cu limfa). Splina (raspuns imun contra
Ag transportate cu sangele). Formaiunile limfoide ale mucoaselor digestive i respiratorii (amigdale, plci Peyer, apendice), esutul limfoid
asociat tegumentului (raspuns imun contra Ag ce penetreaza prin epitelii)
Ariile timo-dependente (populate de limfocite T) sunt: zona paracorticala a ganglionilor limfatici (paracortex), manonul limfoid periarteriolar
al pulpei albe a splinei i zonele interfoliculare ale plcilor Peyer.

48. Celulele imunocompetente. Dezvoltarea limfocitelor T si B, receptorii de suprafata. Diferentierea limfocitelor T si B naive la un
stimul antigenic. Functiile celulelor efectoare.
Limfocitele (celule imunocompetente, recunoasterea Ag)
Celulele efectoare (eliminarea microbilor)
Celulele prezentatoare de Ag (CPA) (captarea si prezentarea Ag microbiene )

LIMFOCITELE
Toate limfocitele provin din celule-stem ale maduvei osoase, cu o etapa ulterioara de maturizare si selectie.
Limfocitele T si B sunt unicele celule ce poarta receptori specifici de Ag (celule imuno-competente)
imuno-competente), fiind mediatorii principali ai imunitatii
adaptative
Maturizarea limf. B are loc n mduva osoas prin intermediul interaciunii directe cu celulele stromei, iar n stadiile tardive sub aciunea
citokinelor secretate de celulele stromale (n special IL-7). Limf. B sunt supuse unei selectii pozitive in favoarea expresiei de receptori intacti si
unei selectii negative contra recunoasterii puternice a antigenelor proprii.
In organelor limfoide secundare limf. B se localizeaza in foliculii cortexului extern din ganglionii limfatici, foliculii din plcile Peyer i foliculii
zonei periferice din pulpa alb a splinei (arii timo-independente).

Limf. B mature se caracterizeaz prin prezena urmtorilor receptori de suprafa:

1. Receptorul pentru Ag (BCR). Este reprezentat de molecule de Ig monomeri de Ig M i Ig D. Interacioneaz cu molecule antigenice
din soluii sau fixate pe membrane celulare (macromolecule native proteine, glucide, AN, etc)
2. Receptorul pentru fragmentul Fc al IgG
3. Receptor pentru fraciunea C3b a complementului
4. Receptori pentru interleukine (IL)
5. Proteine ale Complexului Major de Histocompatibilitate - CMH
6. Alte proteine specifice CD79, CD19 asociate BCR
Organismul contine 107-109 clone diferite de limf.B, fiecare cu BCR unic. BCR recunoate antigenele dup configuraia lor. Limf. B stimulate de
Ag se multiplic i se difereniaz n celule efectoare - plasmocite secretoare de Ig (Ac) i n celule B-memorie.
Precursorii limf. T migreaz n timus, unde sub influena celulelor stromale i a corpusculilor Hassal se difereniaz n limf. T mature. Migraia
limf. T din cortex spre medulara timic este nsoit de achiziia unor proteine de suprafa specifice (receptori : TCR, CD3, CD4, CD8, etc).etc). La o
etapa precoce de selectie doar limfocitele cu TCR functional vor supravietui. Dezvoltarea ulterioara a limf. T este caracterizat printr-o selecie
pozitiv (supravieuiesc TL care recunosc moleculele CMH propriu). Aceste molecule sunt prezente pe suprafata celulelor dendritice si a
macrofagelor din timus. Limfocitele T care au trecut selec
selecia pozitiv
pozitiv, dar care sunt capabile s
s recunoasc
recunoasc cu afinitate inalta peptide proprii
asociate cu CMH suport o selecie negativ (moarte programat prin apoptoz). Selecia const n eliminarea clonelor de limfocite potenial
autoreactive (potenial reactive fa de moleculele proprii). Timusul selecioneaz utilul, ignor inutilul i distruge nocivul. ( Von
Boehmer ). ).
La etapa finala limf. T care sunt capabile sa recunoasca peptide in asociatie cu moleculele CMH I pierd receptorul CD4 (devenind celule TCD8),
iar cele ce recunosc complexe peptid-CMH II pierd receptorul CD8 (devenind celule TCD4)
Receptorii TL:
25
 1. TCR,
TCR, receptorul pentru Ag - format din 2 catene polipeptidice i (90%) sau i . TCR poate recunoate doar peptide antigenice
asociate cu molecule ale CMH, localizate pe suprafaa unei CPA. Nu interacioneaz cu Ag solubile .
2. CD3 (Cluster Differentiation 3) asociat TCR
TCR, ajut la transmiterea n celul a semnalului de recunoatere a Ag si de activare a
limfocitului.
limfocitului.
3. CD2 prezent la toate limf. T, fixeaz hematii, poate fi dep
depistat
stat prin testul de formare a rozetelor.

Unii markeri (rece

(receptori) de suprafa definesc 2 varieti
varieti principale de LT
LT: limf. T CD4+ i TCD8+
CD4 exprimat pe 60% din TL. TL. Recunosc Ag peptidice legate cu moleculele CMH II (exprimate pe celulele dendritice, macrofage i limf. B).
Limfocitele TCD4 (T4) au funcia de coordonator central al rspunsului imun i la activare se difereniaz
difereniaz n subpopulaia de Thelper (Th
(Th).
). Th
acioneaz prin producerea citokinelor. n funcie de profilul de citokine elaborate se disting 2 grupe de Th: Th1 i Th2.
Diferenierea n Th1 este favorizat de IL-12 produs de macrofage.
macrofage. Citokinele secretate de Th1 (IL-2, TNF i IFN-
IFN-) favorizeaz rspunsul
imun celular i hipersensibilitatea tardiv (activarea macrofagelor pentru distrugerea mi/o intracelulare, proliferarea i diferenierea limf. T
citotoxice (Tc
(Tc))).
Th2 recunosc Ag prezentate n special de limf. B. B. Secret IL-4, IL-5, IL-10 i IL-13, responsabile de imunitatea umoral. Favorizeaz
proliferarea si diferentierea limf. B i producerea anticorpilor (Ac,
(Ac, Ig)
Ig).
Exist o competiie ntre cele dou tipuri de Th: IFN-
IFN- inhib diferenierea i proliferarea Th2, iar IL-4 inhib activitatea Th1.
CD8 exprimat pe 40% LT. LT. Recunosc Ag peptidice asociate cu moleculele CMH I (exprimate pe toate celulele nucleate). Pot produce citokine,
dar n special manifest activitate citotoxica
citotoxica. La activare se difereniaz n limf. T citotoxice (Tc
(Tc)) i T-
T- supresoare (Ts
(Ts).
). Tc distrug celulele
infectate cu virus, cu bacterii intracelulare sau celulele canceroase, intervin n respingerea grefelor (imunitatea celular). Ts suprim rspunsul
imun fiind responsabile de tolerana imunologic. T-memorie asigur memoria imunologic. Raportul limfocitelor CD4/CD8 este de 1,5

Limfocitele B i T naive sunt celulele care inca nu s-au ntlnit

ntlnit cu un Ag. Dup interaciunea cu Ag urmeaza activarea lor, proliferarea i
diferenierea n celule efectoare (LB n plasmocite, LT n Th, Tc),
Tc), care vor elimina microbii sau neutraliza toxinele lor prin diferite mecanisme.
LBreprezint 10-15% din populaia limfocitar, cu o durat de via scurt, de 3-5 zile, iar LT constituie 70% cu o durat de via lung (luni,
ani).

Alte celule limfocitare (nule, neimuno-competente) 15%

Celule NK,
NK, capabile s distrug spontan celule canceroase i celule infectate cu virus.
Celule K,
K, posed pe membrana lor receptori pentru fragmentul Fc al Ig. Distrug celulele-int acoperite cu Ac (Ig) fenomen de citotoxicitate
Ac-dependent.

49. Recunoasterea antigenului de catre T si B limfocite. Celulele prezentatoare de antigen, functiile lor. Complexul major de
histocompatibilitate. Clasele moleculelor CMH si implicarea lor in raspunsul imun umoral si celular.
CELULELE
CELULELE PREZENTATOARE DE ANTIGEN (CPA)
BL recunosc direct prin intermediul BCR epitopi antigenici conformaionali solubili sau fixai pe membrane celulare.
TL pot recunoate numai epitopi proteici lini
liniari asociai cu molecule ale CMH expui pe suprafaa unor celule specializate CPA (restricie
CMH).

CPA profesioniste includ celulele dendritice foliculare i tisulare,

tisulare, monocitele / macrofagele
macrofagele i limfocitele
limfocitele B
Func
Funciile CPA
1. Captarea,
Captarea, fragmentarea
fragmentarea (processing
(processing-ul
-ul)) Ag proteice, selectia i expunerea
expunerea pe suprafaa sa a peptidelor
peptidelor antigenice (epitopi liniari) asociate
cu moleculele CMH.
2. Transportarea acestor complexe
complexe spre tesutul limfoid periferic, unde complexul CMH-peptid va fi prezentat LT naiv cu TCR specific,
declanand
declanand activarea lui.
lui.
3. CPA care exprima peptide asociate cu CMH I vor interactiona cu limfocite TCD8, iar CPA care exprima peptide in asocoatie cu CMH II
cu TCD4.
4. Producerea semnalelor secundare de activare a LT (secreia
(secreia unor citokine).
citokine).

COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE

Moleculele CMH reprezint un ansamblu unic de glicoproteine exprimate pe suprafaa celulelor organismului, care sunt veritabili markeri /Ag de
identitate ai
ai fiecrui individ.
Rolul moleculelor CMH:
1. Particip la prezentarea Ag peptidice TL.
2. Responsabilitate n respingerea grefelor.
CMH este transmis genetic. Genele CMH sunt situate pe cromozomul 6 la om, locus numit HLA (Human (Human Leukocyte Antigen).
Antigen). Moleculele CMH
sunt formate din 2 catene polipeptidice, constituite din domenii extracelulare, un fragment transmembranar i o regiune intracitoplasmatic.
Structura tridimensional a moleculei duce la formarea unei
unei caviti, la fundul creia se afl
afl R care vor interaciona cu peptide antigenice proprii
sau strine. Ali
Ali receptori ai CMH interacioneaz cu moleculele CD4 sau CD8 de pe TL.

Se disting molecule (antigene) CMH de clasa I i de clasa II.

Moleculele CMH I sunt exprimate pe toate celulele nucleate ale organismului. CMH I recunoaste si interacioneaz cu receptorul CD8 de pe
TL.
CMH I particip
particip la prezentarea peptidelor antigenice scurte (9 AA) obinute n cursul degradrii in citoplasma (de ctre proteasome) a Ag
endogene (molecule proprii sau proteine virale sintetizate de CPA)
CPA).
Complexul peptid/CMH I de pe suprafaa CPA (macrofage, celule dendritice) poate fi recunoscut de complexul TCR/CD8 complementar de pe
TCD8 naive activarea limfocitelor, diferenierea lor n limf. Tc - iniierea rspunsului imun celular)
celular)
Complexul peptid /CMH I de pe suprafaa celulelor infectate sau a celulelor tumorale poate fi recunoscut de complexul TCR/CD8
complementar de pe limfocitele efectoare Tc distrugerea
distrugerea celulelor ce conin Ag endogen.
endogen.

Moleculele CMH de clasa II sunt exprimate pe celulele specializate n prezentarea Ag pt TCD4

CD4: limf. B, celule dendritice, monocite,
macrofage. Ele pot prezenta peptide din 12-30
12-30 AA derivate din degradarea n
n fagolizosome a Ag exogene (bacterii,
(bacterii, protozoare, fungi,
fungi, virioni
liberi).

26
Complexul peptid/CMH II de pe celulele prezentatoare de Ag interacioneaz cu complexul TCR/CD4 de pe limfocitele CD4
CD4 naive sau efectoare
(Th1, Th2).
Astfel moleculele CMH II sunt implicate n ambele tipuri de imunitate: umoral i celular.

Prezentarea Ag limfocitelor T. Ag este prezentat receptorului TCR sub form de peptide asociate moleculelor CMH de clasa I sau II de pe CPA. CPA.
Limf. TCD8 recunosc n special Ag endogene,
endogene, provenite din proteine citoplasmatice (molecule proprii modificate sau proteine virale) degradate
de ctre proteasome. Aceste peptide din 9 AA sunt prezentate n asociaie cu moleculele CMH de clasa I de pe macrofage, celule dendritice,dendritice,
dar i de pe suprafaa tuturor celulelor nucleate ale organismului.
Limf. TCD4 recunosc Ag exogene (provenite
(provenite din bacterii, protozoare,
protozoare, virusuri libere)
libere). Prezentarea este asigurat de ctre celule dendritice
tisulare, celule Langerhans din epiderm, limf. B, monocite/macrofage (celule fagocitare).
fagocitare).
Dup
Dup captarea Ag i fragmentarea lor (n fagolizosome) peptidele antigenice selectate (15-30 AA) sunt ata ataate de moleculele CMH II i expuse
pe suprafa
suprafaa CPA pentru a fi prezentate limf. TCD4 naive activarea i diferenierea lor n celule efectori Th1 sau Th2
Prezentarea Ag limfocitelor B poate fi realizata prin intermediul celulelor
celulelor dendritice foliculare din splin i ganglioni limfatici. Aceste celule
nefagocitare fixeaz prin intermediul receptorilor membranari Ag polizaharidice sau proteice prezentndu-le ulterior limfocitelor B.

50. Imunoglobulinele (Ig) si anticorpii. Structura monomerului de Ig. Valenta Ig, anticorpii completi si necompleti. Clasele de Ig si
proprietatile lor.
IMUNOGLOBULINELE (ANTICORPII) = glicoproteine din fracia -globulinelor. Se disting Ig membranare (BCR) i Ig solubile (secretate (secretate))
Ac ca atare.
Ac = molecule glicoproteice produse de plasmocitele derivate din limf. B activate de Ag. Ac circul n snge i ptrund n esuturi. Sunt eficieni
contra bacteriilor, toxinelor microbiene i virusurilor n poziie extracelular.

STRUCTURA I PROPRIETILE Ig
UNITATEA DE STRUCTUR a Ig (monomerul) este constituit din 2 lanuri glicoproteice (catene) identice uoare L (Light (Light)) i 2 catene grele
H (Heavy
(Heavy),), legate ntre ele prin puni disulfidice.
Exist 2 tipuri de catene L i , identice ntr-o molecul de Ig.
Se disting 5 clase de lanuri H: , , , , , ce corespund celor 5 clase (izotipuri) de Ig: Ig G, Ig A, Ig M, Ig D, Ig E.
n componena lanurilor se disting regiuni variabile (aminoterminale) i regiuni constante (carboxilterminale).
Regiunile variabile ale catenelor L i H formeaz o cavitate tridimensional - centrul activ (paratopul) al moleculei de Ig, care va reaciona
specific cu determinanta antigenic (epitopul) Ag corespunztor,
corespunztor, constituit din 5-7 AA sau 3-4 reziduuri glucidice. Regiunea variabil
variabil constituie
fragmentul Fab (a (antigen binding)
inding) al moleculei de Ig.
Regiunea constant
constant corespunde fragmentului Fc (constant, cristalizabil). Este purttor de receptori i responsabil de activitatea biologic a Ig:
1. Transportul transplacentar al unor Ig (Ig G)
2. Fixarea
ixarea pe diferite celule (mastocite, bazofile, fagocite, limfocite, etc.)
etc.)
3. Capacitatea de a fixa complementul
4. Capacitatea de fixare a prot. A a stafilococilor
5. Definete clasele i subclasele de Ig (specificitatea antigenic a catenei H)
Monomerul de Ig este constituit din 2 fragmente Fab i unul Fc. ntre ele se afl zona balama,balama, responsabil de flexibilitatea moleculei de Ig.
Numrul paratopilor determin valena Ig. Ac cu 2 sau mai muli paratopi se numesc Ac complei, cei cu un singur paratop Ac incomplei.
Ig G, Ig D i Ig E sunt monomeri, Ig A din ser monomeri, din secretele mucoaselor dimeri, Ig M sunt pentameri.

Proprietile claselor de Ig
Ig G (4 subclase IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) 75% din ansamblul Ig serice. CS = 7S, GM = 150kDa. Sunt unicele Ig capabile s traverseze
bariera placentar. Fc alal IgG are
are centre de fixare a complementului (activarea C pe cale clasic), a macrofagelor i neutrofilelor (rol n
opsonizare), a prot. A a stafilococilor. Perioada de semi-via 21 zile.
Manifest activitate opsonizant, antibacterian, antitoxic, antiviral.
antiviral.
Ig M 5-6% din totalul Ig. Pentamer. CS = 19S, GM = 900kDa. Se distrug sub aciunea mercapto-etanolului sau cisteinei. Semi-viaa 5 zile.
Fixeaz si activeaz complementul pe cale clasic. Nu traverseaz placenta, prezena Ig M la nou-nscut denot infecie intrauterin. Sunt
primele care apar dup un stimul antigenic primar i indic un proces infecios acut. Monomeri de IgM constituie BCR pe B-limfocite.
Ig A 15% din totalul Ig. CS = 7S, GM = 160 kDa. Bogate n glucide. Se disting 2 subclase: IgA1 (93%) i IgA2 (7%). Semiviaa 6 zile, nu
traverseaz placenta, nu activeaz complementul pe cale clasic.
clasic.
Ig A serice (monomeri) 6% din totalul Ig serice. Agregate de IgA pot activa complementul pe cale alternativ.
Ig A secretoare (sIg A) saliv, lacrimi, colostrum, lapte, secreii gastro-intestinale, nazale, bronhice. Dimer. Asigur protecia mucoaselor,
blocnd ataarea bacteriilor i virusurilor de receptorii mucoaselor.
Ig D 0,2% din totalul Ig. CS 6,5S, GM 170 kDa. Semi-viaa 3 zile. Rolul receptor pentru Ag (BCR) pe LB; posibil particip la
eliminarea limfocitelor B care produc autoAc (Ac autoreactivi).
Ig E 0,002 - 0,01%, CS 7,9S, GM 185 kDa. Semiviaa 2-3 zile. Nu traverseaz placenta, nu fixeaz complementul. Termolabile
(inactivate la 56
56C n 30 min). Se pot fixa pe suprafaa mastocitelor i bazofilelor, determinnd degranularea lor cu eliberarea unor amine vazo-
active (oc anafilactic, dereglri alergice). Eficiente n afeciuni parazitare (opsonizarea helminilor i artropodelor) .

51. Raspunsul imun, consecintele. Etapele raspunsului imun. Notiuni de imunitate umorala si celulara. Functiile si efectorii.
RI = proces complex, indus de ptrunderea unui Ag. Are loc n organele limfoide secundare i prevede implicarea mai multor celule (CPA,
limfocite T, B, .a.) i substane solubile (citokine).
Consecinele unui rspuns imun: Imunitate (umoral, celular); Hipersensibilitate (imediat, tardiv); Memorie imunologic; Toleran
imunologic; Paralizie imunologic
Ac sunt efectorii principali ai imunitii umorale,
umorale, iar limfocitele Tc i macrofagele activate ale imunitii celulare.
celulare.
Imunitatea umoral este eficace contra bacteriilor non-invazive (extracelulare) , virusurilor libere i contra toxinelor.
Imunitatea celular intervine n special contra paraziilor intracelulari (bacterii, virusuri) i celulelor proprii modificate (tumorale)

Etapele unui rspuns imun

1. ntlnirea Ag cu CPA, T-, B-limfocite. Are loc n organele limfoide secundare.
secundare.

27
 2. Recunoaterea specific a Ag, asigurat de limfocitele B i T nave prin receptorii pentru Ag (BCR, TCR). BL pot recunoate epitopi
superficiali conformationali ale moleculelor de Ag native. TL recunosc doar epitopi lineari din Ag proteice prezentate de CPA in
asociatie
asociatie cu moleculele
moleculele CMH.
3. Activarea, proliferarea i diferenierea T sau B limfocitelor n celule efectoare i celule B sau T-memorie.
T-memorie. Coordonarea acestor procese
este asigurat de contacte celulare directe i de citokine, eliberate de diverse celule.
4. Realizarea efectului (neutralizare, opsonizare, liz, etc).

52. Raspunsul imun umoral (RIU). Destinatia. Factorii implicati in declansarea si dezvoltarea RIU. Fazele RIU. RIU primar si
secundar.
RIU = form a imunitii achiziionate asigurat de Ac. Are funcia de a neutraliza i elimina microbii extracelulari i toxinele microbiene. In
acest proces particip
particip Ag, CPA, limf T4, limf B.
Fazele rspunsului imun umoral:
umoral:
1. Intalnirea Ag cu limfocitele B. Are loc in organele limfoide secundare.
Ag patrunde direct n n s
snge int
intlnirea are loc n splin.
splin.
Ag penetreaz
penetreaz prin tractul respirator amigdale i esutul limfoid asociat bronhilor i mucoaselor
Ag penetreaz
penetreaz n tractul intestinal pl
plcile Peyer, foliculii solitari
Ag patrunde
patrunde prin tegument esutul limfoid asociat tegumentului.
2. Recunoa
Recunoaterea epitopilor unui Ag de c ctre receptorul
receptorul specific (B
(BCR) de pe suprafa
suprafaa B limfocitelor naive (selec
(selecia clonala) i activarea
lor.
Limf B nave recunosc epitopii prin intermediul moleculelor de Ig M i Ig D (BCR) de pe suprafata lor, capabile s s lege epitopi omologi cu
forma complementara.
Antigenele T-independente (polizaharide, LPZ) la fixarea lor pe BCR activeaza direct limf B.
La interactiunea BCR/Ag T-dependent (proteine), limf B naiv se comporta ca o CPA (inglobarea Ag, degradarea lui, selectarea peptidelor
antigenice si prezentarea pe suprafata celulara a complexului peptid/CMH II pentru a fi recunoscute de limf TCD4).
Primul semnal activator reprezinta interactiunea BCR cu epitopul Ag corespunzator. Semnale secundare intervin ulterior (ex.:fixarea pe limf B a
frac
fraciei C3d a complementului). Astfel limf B naiv este activat, fiind capabil sa produc
produc cantitati mari de molecule CMH II, molecule co-
stimulatoare i receptori pentru citokinele produse de limf Th.
3. Proliferarea limfocitelor B activate si diferentierea lor
Dup
Dup activarea LB LB de un Ag T-independent urmeaza proliferarea lui intr-o clona de celule identice (expansiunea clonala) i diferenierea n
plasmocite, care vor sintetiza si secreta Ac din clasa (izotipul) Ig M, memoria imunologica lipseste.
Dac LB a fost activat de un Ag T-dependent,
T-dependent, stimularea proliferrii se va produce numai prin interaciunea dintre LB activat si limfocitul
limfocitul Th
activat de acelai Ag.
Ag. LB i LT au aceeai specificitate antigenic, doar ca LB recunoate epitopi nativi (conformationali), iar L Th recunoate
fragmente peptidice ale acestui Ag.
Producerea limf Th are loc de asemenea n organele limfoide secundare (zonele timo-dependente),
timo-dependente), unde limfocitele TCD4 naive interacioneaz
cu peptidul antigenic de pe CPA, urmnd proliferarea i diferenierea lor n limf efectoare (Th1, Th2), productoare de citokine. Th2 migreaz
spre foliculii limfoizi, unde are loc ntlnirea lor cu limf B activat.
Complexul TCR/CD4 de pe limf Th recunoate complexul peptid/CMH II de pe limf B activat.
Ulterior se formeaza alte legaturi co-stimulatoare. Astfel limf Th devin capabile sa secrete citokine: IL- 4, 5, 10, 13, care vor actiona asupra LB
activat . Aceste citokine induc proliferarea LB activate, stimuleaza diferentierea lor in plasmocite secretoare de Ac Ig M cu paratopul (centrul
activ) identic cu BCR de pe LB (2000 Ac/sec sintetizate de un plasmocit).
plasmocit). Sub influena citokinelor produse de limf Th unele LB pot s se
diferenieze n plasmocite secretoare de Ig din alte clase (IFN IgG 2; IL-4 Ig Ig G4, IgE;
IgE; TGF beta- IgA).
Plasmocitele rmn n organele limfoide periferice, iar Ac secretai ptrund n circulaia sangvin. Unele plasmocite migreaz spre mduva
osoas, continund s produc Ac mult timp (luni, ani), chiar dup eliminarea Ag. In caz de infectie a mucoaselor, plasmocitele se vor afla la
nivelul mucoaselor (n Lamina propria),
propria), producand Ac (sIg A) care vor fi transportati la suprafata mucoaselor.
O parte din LB activate se transform n celule memorie. Limf B memorie nu secret Ac, ele circul prin snge i supravieuiesc mai multe luni
sau ani fiind gata sa reacioneze la o ptrundere repetat a Ag.
4. Efectul interaciun
interaciuniiii dintre Ag i Ac in vivo depinde de natura Ag i de tipul de Ac i se poate manifesta prin:
Opsonizarea bacteriilor i intensificarea fagocitozei
Activarea complementului pe cale clasic citoliz (inclusiv bacterioliz)
Neutralizarea toxinelor, enzimelor
Inhibiia adeziunii bacteriilor, virusurilor (IgA)
Neutralizarea virusurilor extracelulare
Imobilizarea bacteriilor si protozoarelor
Citotoxicitatea mediat celular Ac-dependent (celulele acoperite de Ac sunt distruse de celulele K)
Rspunsul umoral primar la primul contact cu Ag
I faz de laten dureaz 4-7 zile, pn la apariia primilor Ac. In acest timp are are loc recunoaterea, degradarea Ag, diferenierea T,B
limfocitelor.
II faz logaritmic Titrul Ac crete, atingnd max n a 10-15 zi. Iniial are loc producerea Ig M, peste 4-5 zile - IgG sau alte izotipuri de Ig
(prin comutatie de clasa sub influenta citokinelor produse de Th). Th).
III faz de producere maxim a Ac Durata variaz n funcie de Ag.
IV faz de diminua
diminuarere a titrului de Ac (declin)
(declin) n cazul Ag proteice dureaza sptmni, Ag polizaharidice luni, Ag virale ani).
Rspunsul umoral secundar (la un contact repetat cu acelai Ag).
Este asigurat de LB-memorie
Perioad de laten scurt (ore)
Ascensiune rapid a titrului Ac
Titru maxim de Ac meninut o durat mai mare
Afinitate crescut a Ac fa de Ag
Producerea anticorpilor Ig G
Serul sangvin obinut de la un organism imunizat cu un Ag conine o mare varietate de molecule de Ac, produi de diferite diferite clone de LB. Aceti
Acetia
sunt Ac policlonali.
policlonali. Ac monoclonali sunt absolut identici. Se obin prin fuzionarea LB cu o celul tumoral. Hibridomul obinut se multiplic ca
o celul tumoral i secret Ac omogeni, ide identici cu BCR. Servesc la detectarea receptorilor de pe suprafaa celulelor,
celulelor, tratament etc.
etc.
28
53. Raspunsul imun celular (RIC). Destinatia. Factorii implicati in declansarea si dezvoltarea RIC. Fazele RIC.
Rolul RIC = a elimina microbii care pot supravieui n vacuole fagocitare sau n citoplasma celulelor infectate. Ac est tip de imunitate este
asigurat de limfocitele T.T.
Principalii efectori ai RIC sunt limfocitele Tcitotoxice (Tc) derivate din limf TCD8 (T8), (T8), care au capacitatea de a distruge celulele infectate cu
virus sau tumorale i de a liz
liza macrofagele
macrofagele infectate
infectate cu bacterii facultativ intracelulare. Ambele tipuri de limfocite (TCD8 naive si Tc) poseda
TCR si molecule CD8.
Macrofagele
Macrofagele activate
activate reprezint ali efectori ai RIC. Ele
Ele sunt atrase
atrase n focarul infecios, apoi activate
activate,, devenind capabile
capabile s distrug bacteriile
intracelulare.
Celulele K i NK particip de as asemenea la realizarea citotoxicitii (nu sunt angajate imun).
imun).
Limfocitele TCD4+ participa indirect la dezvoltarea raspunsului imun celular, celular, deoarece n urma recunoaterii Ag vor produce un numr mare de
citokine care vor aciona asupra diferitor celule:
celule: monocite, limfocite TCD8, TCD4, celule NK, etc.
Dezvoltarea rspunsului imun celular:
I etapa Prezentarea Ag LT nave. nave. Procesul are loc n organele limfoide periferice (OLP).
CPA profesioniste (macrofage, celule dendritice)
dendritice) capteaza Ag (ex.: celule infectate cu virus sau celule tumorale) fagocitoza unele proteine
virale pot fi transferate din fagosome in Ct ele vor fi fragmentate de catre proteasome asamblarea cu moleculele CMH I complexul
peptid/CMH I este scos la suprafata CPA (peste 250.000 complexe per celula) CPA cu limfa sunt transportate in ganglionii limfatici, unde ele
vor fi capabile sa prezinte Ag limfocitelor TCD8 nave.
II etapa Recunoasterea epitopilor Ag de catre TCR unui LT CD8 naiv si activarea lui. Limf T8 nave vor recunoaste peptide asociate cu
CMH I de pe suprafata CPA care au captat celule infectate cu virus. Epitopul trebuie sa corespunda cu TCR de pe limfocitul T8, iar CMH I va
recunoaste situsuri de pe CD8. Aceaste interactiuni, precum si alte legaturi moleculare intre CPA si limf T8, participa la activarea limf T8 nave
(costimulare). Citokinele eliberate de CPA se implica de asemenea.
III etapa Proliferarea limfocitelor T8 (expansiunea
(expansiunea clonala) si diferentierea lor.lor. Dupa activare, sub influenta unor citokine eliberate de limf
Th1 (in special IL-2), are loc proliferarea limf T8 si diferentierea lor in celule efectoare Tc, Tc, capabile sa lupte cu infectia intracelulara sau
celulele tumorale. Proliferarea incepe la 2 zile de la activarea limfocitelor i se produce rapid (peste o sptmn dup infectare pn la 10-20%
din toate limf din OLP pot fi specifice pentru un Ag. N 1:106 ). Diferentierea in celule Tc are loc in paralel cu proliferarea.
Celulele efectoare Tc prsesc OLP i migreaz spre tesutul infectat
infectat,, unde, recunoscnd Ag, vor elimina infecia. Unele limfocite T se
difereniaz n limfocite T memorie,
memorie, durat de via lung, inactive funcional, dar sunt gata s reacioneze rapid la o nou expoziie la acelasi
microb (rspuns celular secundar).
IV etapa Realizarea efectului IC.
Citotoxicitatea este rezultatul contactului specific direct dintre clona de Tc i inta lor (celule infectate cu virus sau bacterii intracelulare, celule
tumorale). Celulele infectate prezint pe suprafaa sa peptide antigenice asociate cu moleculele CMH I, fiind recunoscute de ctre TCR i CD 8
de pe limf Tc.
Reacia citotoxic: contact membranar dintre Tc i celula-int limfocitele Tc elibereaz perforine care se insereaz n membrana celulei-int
formare pori. Paralel, limf Tc secret enzime (granzime) care penetreaz n Ct celulei prin pori apoptoza ei.
IFN produs si secretat de Th1 este un activator puternic al macrofagelor, stimuland capacitatea lor de a distruge patogeni intracelulari. De
asemenea, citokinele mentionate activeaza limf Tc si celulele NK, promoveaza proliferarea limf T4, stimuleaza producerea opsoninelor
(intensificarea fagocitozei), activeaza neutrofilele, stimuleaza cresterea productiei de monocite in maduva osoasa, etc.
Memorie imunologica Capacitatea sistemului imun de a elabora raspuns mai rapid, mai intens si mai eficace la intalniri repetate cu acelasi Ag.
Toleranta absenta raspunsului imun la antigene proprii (self). Este determinata de inactivarea si eliminarea limfocitelor autoreactive in
procesul de maturizare a limfocitelor T si B.

Citokinele sunt molecule care permit diferitor celule s comunice ntre ele n producerea unei reacii.
Citokinele reunesc un grup heterogen de molecule: interleukine (IL), limfokine, monokine, interferoni (IFN), factori de stimulare a coloniilor
(CSF), factori de necroz a tumorilor (TNF), etc.
Citokinele permit celulelor Sistemului Imun s se multiplice i s se diferenieze (ex.: IL-2 este un factor de cretere al TL, iar IL-4 stimuleaz
BL i diferenierea lor n plasmocite productoare de Ig E)
Citokinele sunt glicoproteine care acioneaz asupra celulelor prin intermediul receptorilor membranari, care nu sunt ntotdeauna activi. Expresia
lor poate fi indus de o alt citokin (ex.: IL-1 induce receptorul pentru IL-2 pe T i BL) . Receptorii citokinelor sunt prezente i pe alte celule
ale organismului. Astfel ele ar putea servi la comunicarea ntre Sistemul Imun i alte sisteme ale organismului, ca SNC i sistemul endocrin.

54. Reactiile de hipersensibilitate (RHS). Definitie. Particularitatile RHS. Clasificarea RHS in functie de mecanismele imunologice
efectuate.
Hipersensibilitate raspunsuri imune excesive sau anormale, capabile sa provoace leziuni tisulare si maladii. Aceste reacii se pot dezvolta n
cadrul mecanismelor de aprare fa de un microb patogen. n acelai timp, reacii similare pot fi dirijate contra substanelor de origine ne-
infectioasa.
infectioasa.
Particularitile RHS:
RHS sunt specifice de Ag/alergen.
RHS sunt induse de un contact primar cu Ag/alergenul care provoac rspunsul imun specific (umoral, celular).
RHS sunt declanate la contacte ulterioare repetate cu acelai Ag/alergen.
Clasificarea RHS dup mecanismele imunologice efectuate (Gell, Coombs)
Hipersensibilitatea de tipul I (reacii imediate, anafilactice)
Hipersensibilitatea de tipul II (citolitic-citotoxic)
Hipersensibilitatea de tipul III (prin complexe imune)
Hipersensibilitatea de tipul IV (tardiv)
Hipersensibilitatea de tipul V (prin autoAc)

55. Reactiile de hipersensibilitate de tip I (imediate, anafilactice). Factorii implicati, alergenii. Anafilaxia locala si generala,
mecanismul reactiilor. Depistarea RHS de tipul I. Combaterea reactiilor anafilactice.
RHS imediate mai sunt numite alergie sau atopie. Persoanele predispuse la astfel de reactii sunt numite atopice. Antigenele care
declanseaza o hipersensibilitate imediata sunt calificate ca alergeni.
Manifestrile patologice survin timp de 15-30 min dup rentroducerea alergenului n organismul sensibilizat.
29
n reaciile anafilactice particip Ig E. la persoanele predispuse la alergii intalnirea cu unele Ag determina activarea limf Th2 si producerea Ac Ig
E. Fiind sintetizate n timpul primului contact cu alergenul, IgE se fixeaz pe receptori ai mastocitelor (n special din esutul conjunctiv sau din
mucoase), persistnd mai multe luni.
La ptrunderea repetat (percutan, prin mucoase, intravenos) antigenul omolog leag ncruciat fragmentele Fab ale Ig E vecine de pe
mastocite.
mastocite. Aceasta duce la eliberarea din celule a unor mediatori, substane biologic active (histamin, serotonin, Factorul de Necroz al
Tumorilor, prostaglandine, leucotriene). Ele se fixeaz pe receptorii terminaiilor nervoase inducnd contracia musculaturii netede
(bronice, intestinale, uterine)
uterine), vasodilataie, creterea permeabilitii vasculare cu edem, reacie urticarian n tegument i hipersecreie de
mucus la nivelul bronic. Aceste reactii survin la cateva minute de la reintroducerea Ag.
Alti mediatori ai mastocitelor citokinele recruteaza, pe parcursul al catorva ore, neutrofile si eozinofile la nivelul localizarii reactiei.
Acest proces inflamator al RHS imediate reprezinta faza tardiva a reactiei. Este responsabila de leziunile tisulare provocate de catre
atacurile repetate de hipersensibilitate imediata.
Anafilaxia general (ocul anafilactic)
Este cea mai brutal i grav reacie declanat de un Ag/alergen. Se manifest n cteva secunde dup administrarea parenteral a dozelor
mari de Ag/alergen cu semne clinice sistemice: urticarie, asfixie, colaps circulator i oc. Poate duce la deces subit.
Ag responsabile de ocul anafilactic: medicamente (analgezice, anestetice, AB, seruri sangvine de animale, enzime), venin de viespi, de
albine, alimente.
Anafilaxia local (alergenul administrat n doz foarte mic sau depus pe o mucoas)
La nivelul mucoaselor: conjunctivita alergic, rinita, astmul i traheita spasmodic (alergeni: polenuri, dejecte de acarieni din praful de
cas)
Forme cutanate:
cutanate: dermatita atopic i urticaria
Alergia alimentar:
alimentar: manifestri extradigestive (urticarie, edem Quincke, astm, anafilaxie) i digestive (diaree, vome)
Depistarea RHS tipul I:
Teste cutanate prin aplicarea cutanat sau administrarea intradermic a alergenilor. Reacie pozitiv peste 15 min local apare o reacie
eritemo-papuloas.
Teste de provocare se efectueaz la astmatici, prin administrarea alergenului n aerozol (pe cale nazal, ocular, oral) i msurnd
modificrile imediate i tardive a volumului expirat maxim.
Dozarea imunoenzimatic sau radioimun a Ig E
Principii de tratament:
tratament: Evitarea alergenului; Desensibilizarea prin administrarea repetata a dozelor mici de Ag, Ag, care induce sinteza Ac Ig G;
Tratament simptomatic (inhibitori ai degranulrii mastocitelor, anti-histaminice, etc)

56. Reactiile de hipersensibilitate de tip II (citolitic-citotoxice). Factorii implicati, consecintele. Diagnosticul si combaterea RHS de
tipul II.
Implic Ac (Ig G sau Ig M) dirijai contra unui Ag natural sau exogen fixat pe suprafaa unei celule sau a unui esut. Se dezvolt n cteva
minute sau ore. Afecteaz n special celulele sngelui, provocnd citoliza prin activarea complementului sau prin opsonizare i fagocitoz
de ctre macrofage. Celulele K de asemenea pot distruge celulele opsonizate. Aceste mecanisme cauzeaz citopenie.
Reacii transfuzionale (prezena Ac anti-hematii n timpul unei transfuzii sanguine poate induce hemoliz intravascular prin activarea C pe
cale clasic).
Maladia hemolitic perinatal prin incompatibilitate Rhesus. Mama Rh- se imunizeaz n cursul primei graviditi contra ftului Rh+ la
trecerea hematiilor fetale n sngele matern (la natere, n timpul unui avort). La o graviditate ulterioar, mama pre-imunizat contra
factorului Rh+ poate sintetiza Ig G anti-Rh+, dac ftul este iari Rh+. Aceti Ac pot traversa bariera placentar i liza hematiile ftului la
finele graviditii, provocnd o hemoliz grav.
Prevenirea:
Prevenirea: administrarea Ac anti-Rh+ tuturor femeilor Rh- n primele 48 ore de la naterea unui copil Rh+ sau a unui avort. Aceti Ac
opsonizeaz hematiile fetale din sngele matern i provoac eliminarea lor rapid. Hemoliza imun de origine medicamentoas
(medicamentul se depune pe membrana eritrocitar i Ac anti-medicament distrug eritrocitele acoperite de acest medicament). 4.
Trombocitopenii i granulocitopenii.
Diagnostic:
Diagnostic: Depistarea Ac contra celulelor (esuturilor) implicare; Prezena Ac i C n leziuni, depistai prin RIF

57. Reactiile de hipersensibilitate de tip III (mediate de complexe imune solubile). Factorii implicati. Mecanismul, manifestarile
patologice. Depistarea RHS de tipul III.
RHS de tipul III (mediate de complexe imune Ag-Ac solubile)
n mod normal CI sunt eliminate repede din organism. n unele circumstane CI persist perioade ndelungate. Cauze: Infecii cronice:
angine streptococice, endocardite bacteriene, hepatite virale, parazitoze, etc
esuturi proprii devenite auto-reactive n urma unor procese distructive (ex.: colagenoze)
Introducerea albuminei serice n cantiti mari (tratament cu seruri imune)
Mecanismul: Complexele Ag-Ac solubile activeaz C i determin leziuni n locul formrii sau depunerii lor n esuturi sau pe endoteliul
vascular.
Fenomene patologice locale:
locale: reacia Arthus, glomerulonefrita, artrit, poliatrerite. Se produc n exces de Ac dup 3-10 ore de la contactul cu
Ag.
Fenomene patologice generale:
generale: boala serului (n exces de Ag).
Depistarea RHS de tipul III: Evidenierea CI n biopsii tisulare. Se efectueaz utiliznd RIF, RIE sau ARI; Titrarea Complementului seric
(diminuarea titrului)

58. Reactiile de hipersensibilitate de tip IV (mediate celular, tardive). Tipurile. Factorii implicati, alergenii. Depistarea RHS de
tipul IV.
RHS de tipul IV (mediate celular, tardive, ntrziate)
Sunt determinate de limfocite T CD8 (Tc) sau TCD4 (Th1) activate la contactul secundar cu Ag sensibilizant.
Sunt cunoscute 3 modele de hipersensibilitate tardiv: Hipersensibilitatea tuberculinic; Reacia granulomatoas; Dermatitele de contact

Hipersensibilitatea tuberculinic este indus de infecii bacteriene, virale, fungice sau parazitare, prin vaccinare cu vaccinuri vii atenuate
sau cu proteine fixate pe un adjuvant complet.

30
 Ptrunderea repetat a Ag activeaz limdocitele Th1 specifice de acest Ag, ducnd la activarea Tc i eliberarea unor citokine, responsabile
de acumularea local a celulelor mononucleate cu apariia eritemului i formarea unui infiltrat, n unele cazuri chiar i necroz. Leziunea
apare peste 48 ore i dispare n 3-5 zile.

Hipersensibilitatea granulomatoas apare n cursul sensibilizrii cu substane insolubile sau greu digerabile (constituienii unor parazii,
compui lipoidici ai micobacteriilor, brucelelor, etc). n aceste cazuri RHS se prelungete i se manifest prin formarea, n cteva sptmni
sau luni, a unui granulom.
n componena granulomului se disting 3 zone: central, din celule epitelioide, intermediar din limfocite i fibroblaste i periferic din
leucocite PMN, limfocite B i plasmocite. Granulomul poate fi supus fibrozei i calcifierii, persistnd mai muli ani.

Hipersensibilitatea de contact este determinat de haptene (metale grele - Ni, Cr, substane chimice cauciuc, clei, pesticide, vopsele,
produse cosmetice, medicamente).
Aplicate percutan se combin cu proteinele membranare, n special ale celulelor Langerhans din epiderm. Aceasta duce la expansiunea
clonal a limfocitelor TCD8+. La contacte repetate cu aceeai hapten, citokinele eliberate de limfocitele activate determin infiltrarea
celular a glandelor sudoripare, sebacee, a foliculilor piloi, a epidermei. Peste 48-72 ore local se observ eritem, edem i formarea
veziculelor.
Explorarea hipersensibilitii tardive:
T e s t e c u t a n a t e (in vivo)
Dermatitele de contact se depisteaz prin aplicarea cutanat a haptenelor i examinarea eritemului, infiltratului cutanat i a veziculelor
aprute peste 48 ore.
Hipersensibilitatea tuberculinic se exploreaz prin introducerea intradermic a alergenilor microbieni: tuberculina (derivat proteic al unei
culturi de Mycobacterium tuberculosis),
tuberculosis), brucelina, tularina, antraxina, dizenterina, etc. Peste 48 ore se msoar diametrul eritemului i
induraiei. Reacia pozitiv denot c organismul a fost n contact cu alergenul (infecie anterioar sau actual, vaccinare) i c acesta
persist n macrofagele organismului. Pentru confirmarea maladiei sunt necesare investigaii suplimentare.
Teste in vitro
Testul de transformare limfoblastic (limfocitele unei persoane cu hipersensibilitate tardiv cultivate in vitro n prezena Ag /alergenului
suport o transformare blastic cu proliferare ulterioar).
Testul de inhibiie a migrrii leucocitelor (activarea limfocitelor T de ctre Ag specifice duce la secreia citokinelor care inhib migrarea
leucocitelor)

59. Imunizarea artificiala activa. Vaccinurile. Caracteristica imunitatii postvaccinale. Vaccinarea primara si de rapel. Cerintele
fata de vaccinuri. Notiuni de vaccinoterapie si vaccinoprofilaxie.
Prevenirea maladiilor infecioase depinde de controlul (sau eliminarea) sursei de infecie (aceasta prevede ntreruperea lanului de transmitere) i
ridicarea rezistenei individuale (utilizarea apei potabile, alimentaie sntoas, respectarea igienei personale, etc.). Cea mai eficace strategie
imunizarea artificial.
Formele imunizrii artificiale:
- Imunizare activ prin administrarea n organism a unor Ag microbiene (vaccinuri)
- Imunizare pasiv bazat pe ntroducerea n organism a unor preparate ce conin Ac specifici
Imunoprofilaxia o metod specific de prevenire colectiv sau individual a maladiilor infecioase, ce are la baz crearea imunitii
artificiale specifice.
Imunoterapia metode specifice de tratament prin intermediul vaccinurilor, serurilor imune, etc.
Vaccinurile sunt produse biologice cu proprieti de imunogen, constituite din microorganisme vii sau omorte, din componentele lor sau din
toxine modificate. Fiind administrate la om sau animale induc o imunitate artificial activ IAA - (umoral, celular, mixt) fr s provoace
efecte nocive. Imunitatea postvaccinal (IAA) se instaureaz relativ lent, la 15-20 zile de la ultima inoculare, i dureaz timp variabil (luni-ani-
toat viaa).
Vaccinarea primar (de baz) confer organismului memorie imunologic. Vaccinrile de rapel (revaccinarea) se utilizeaz pentru stimularea
unui rspuns imun secundar, mai rapid si mai intens
Calitile unui vaccin ideal: Imunogenitate nalt; Lipsit de efecte secundare; Uor disponibil; Stabil ; Ieftin; Simplu la administrare i eficace
(s creeze imunitate stabil de lung durat)
Eficiena vaccinrii depinde de: Calitile imunogene ale vaccinului; Durata persistenei vaccinului n organism; Capacitatea organismului
vaccinat de a elabora rspuns imun eficient.
Clasificarea vaccinurilor: T R A D I I O N A L E (clasice) - Corpusculare (vii atenuate, inactivate), Subunitare (vaccinuri chimice,
anatoxinele). D E P E R S P E C T I V Sintetice, Ribosomale, Anti-adezive, Recombinante, Vaccinuri hibride, Vaccinuri nucleotidice.

60. Vaccinurile vii atenuate. Obtinerea, avantajele si dezavantajele vaccinurilor vii. Exemple.
Vaccinurile vii atenuate reprezint tulpini de bacterii sau virusuri vii cu virulena redus, dar cu capacitate imunogen pstrat.
Cile de obinere: A. Selecia tulpinilor naturale cu virulena redus - Vaccinul E (contra tifosului exantematic); Vaccinul EV (antipestos);
Vaccinul Brucella N19 (antibrucelos). B. Utilizarea mi/o nrudite genetic, avirulente pentru specia uman - (ex.: virusul vacciniei utilizat n
profilaxia variolei)
C. Atenuarea dirijat a virulenei prin:
- Factori fizici (cultivarea la t neadecvate vaccinul anti-antrax (42 C), vaccinul anti-pestos (16 C))
- Cultivarea n prezena unor compui chimici nefavorabili (ex.: BCG obinut de Calmette i Guerin prin cultivarea tulpin ii de
Mycobacterium bovis timp de 13 ani pe medii cu bil)
- Prin factori biologici pasaje multiple pe animale sau pe culturi celulare (Pasteur a efectuat 133 pasaje a suspensiei de creier de la
cine turbat intracerebral iepurilor, obinnd un virus atenuat)
- Prin inginerie genetica (inactivarea genelor de patogenitate - mutaii la nivelul genelor de patogenitate)
Alte vaccinuri vii atenuate: anti-tularemic, anti-poliomielitic, anti-gripal, anti-rujeolos, anti-rubeolic, anti-parotidit epidemic, etc.
Avantajele vaccinurilor vii: Imunogenitate nalt, o inoculare unic induce imunitate solid i de lung durat; Se administreaz pe cale
natural (intranazal, per os, percutan, etc); Induce imunitate local i general
Dezavantaje: Pot provoca complicaii postvaccinale (accidente alergice, efect teratogen); Revenirea la forma virulent cu riscul bolii infecioase
induse (ex.: poliomielit paralitic, etc); Pericol de inducere a maladiei la persoane cu imunodeficiene (BCG-ita, etc); Multiple contraindicaii;
Durat de pstrare limitat.

31
61. Vaccinurile inactivate (omorate). Obtinerea, avantajele si dezavantajele vaccinurilor inactivate. Exemple. Autovaccinul,
utilizarea practica.
Vaccinurile inactivate (omorte) constau din culturi bacteriene sau virale nalt virulente inactivate prin cldur (60 C 1 or), prin ageni
chimici (formaldehid, fenol, aceton), radiaii, ultrasunet, etc. Exemple de vaccinuri inactivate: anti-tifoidic, anti-dizenteric, anti-choleric, anti-
pertusic, anti-stafilococic, anti-gripal, anti-poliomielitic, etc.
Autovaccinul este un vaccin inactivat preparat din tulpina microbian izolat de la un bolnav i inoculat aceluiai bolnav pentru stimularea
imunitii specifice. Autovaccinul este indicat pacienilor care sufer de procese cronice: stafilodermii, streptodermii, candidoze, dizenterie
cronica, etc.
Avantajele vaccinurilor inactivate: Exclud riscul infeciei post-vaccinale; Stabile la pstrare.
Dezavantaje: Imunogenitate redus (sunt necesare inoculri repetate); Durat limitat a imunitii 6 12 luni; Eficacitate variabil; Necesitatea
unei concentraii mari de Ag; Administrarea prin injecii (stimuleaz slab sau deloc imunitatea local).
Obtinere: 1. Se izoleaza din prelevatul d ela bolnav bacteria cu semnificatie clinica
2. Se obtine cultura pura si se identifica bacteria izolata
3. Se replica abundant cultura pe geloza nutritive si geloza sange si peste noapte la 37 grade.
4. Se extrage cu pipeta Pasteur in solutie salina izotona fara a include impuritatile, Se ajusteaza densitate.
5. Se inactiveaza suspensia in baie de apa 60 grade o ora.
6. Se controleaza sterilitatea prin replicare in bulion 4 zile 37 grade, apoi se insamanteaza pe placa.
7. Se adauga fenol pt conservative. Si se elibereaza strict aseptic cu numele pacientului varsta etc.

62. Vaccinurile subunitare (fragmentate, chimice) si anatoxinele. Obtinerea, avantajele si dezavantajele vaccinurilor subunitare.
Notiune de adjuvant. Vaccinurile adsorbite.
Vaccinurile subunitare (acelulare, chimice) constau din componente antigenice majore, capabile s induc un rspuns imun protector, extrase
prin diferite metode din celulele bacteriene (digestie enzimatic, hidroliz cu acidul tricloracetic, etc). Ex.: vaccinul anti-pneumococic, anti-
meningococic, anti-hemofilus (conin polizaharide capsulare), etc.
Anatoxinele sunt vaccinuri subunitare obinute din exotoxine bacteriene.
Etapele de obinere a anatoxinelor:
1. Cultivarea tulpinii toxigene n mediu lichid
2. Separarea exotoxinei prin filtrare
3. Tratarea cu formol 0,3-0,4 % timp de 3-4 sptmni la 39-40 C. Toxinele pierd toxicitatea, dar i pstreaz capacitatea imunogen
4. Purificarea anatoxinei (salinizare cu sruri de amoniu, precipitare cu alcool...)
5. Concentrarea
6. Determinarea puterii anatoxinei n RN (floculare) cu seruri antitoxice specifice
7. Anatoxinele se utilizeaz n profilaxia specific a infeciilor cauzate de mi/o toxigene stimulnd producerea antitoxinelor.
Exemple de anatoxine: difteric, tetanic, gangrenoas, botulinic, holeric, stafilococic, etc.
Avantajele vaccinurilor subunitare: sunt lipsite de efecte secundare; stabilitate la pstrare
Dezavantaje: imunogenitate redus, necesitatea inoculrilor repetate
Pentru sporirea imunogenitii vaccinurilor inactivate i subunitare se utilizeaz substane speciale - adjuvani.
I. Adjuvanii minerali (hidroxidul de Al, fosfatul de Ca, emulsii uleioase) genereaz o reacie inflamatoare care reine eliminarea Ag i
favorizeaz prezentarea lui limfocitelor T
II. Adjuvanii biologici (unele bacterii: Bordetella pertussis, Corynebacterium parvum, Mycobacterium tuberculosis, sau componente
bacteriene ex. ribosomi bacterieni ) induc expresia moleculelor de co-stimulare pe suprafata CPA, stimuland aceste celule sa secrete
citokine care vor activa limfocitele T.
Vaccinuri adsorbite (deponente, conjugate) au Ag fixate pe adjuvani (AD, ADT, ADTP, etc)
63. Imunizarea artificiala pasiva, caracteristica. Preparatele biologice cu anticorpi, tipurile, cerintele fata de ele.
Imunizarea artificial pasiv se realizeaz cu preparate biologice ce conin Ac (seruri imune, Ig, gamma-globuline, etc), utilizate cu scop de
seroterapie sau seroprofilaxie. Imunitatea artificial pasiv se instaleaz imediat dup administrarea preparatului, fiind limitat n timp ( max. 3
sptmni). Din momentul n care Ac exogeni sunt eliminai, organismul redevine receptiv la infecie.
Serurile imune sunt preparate biologice ce conin Ac specifici fa de diferii ageni patogeni i produse ale acestora.
Dup provenien exist:
1. Seruri imune omologe - De la convalesceni; De la voluntari imunizai activ (seruri hiperimune, specifice); Din sngele
donatorilor i snge placentar (seruri standarde, normale)
2. Seruri imune heterologe, obinute prin hiperimunizarea animalelor (cai, cmile, lame)
- Dup modul de aciune se disting:
1. Seruri antibacteriene (anti-meningococic, anti-antrax), ridic sensibilitatea bacteriilor la aciunea fagocitelor i complementului.
Se dozeaz n ml (seruri netitrate)
2. Seruri antivirale (ex.: ser anti-rabic). Neutralizeaz infeciozitatea virusurilor.
3.Seruri antitoxice (anti-difteric, anti-tetanic, anti-botulinic, etc). Neutralizeaz exotoxinele bacteriene (blocheaz fixarea de
receptorii celulari). Activitatea lor este apreciat prin titrare i msurat n UA (UI).
4. Seruri mixte (ex.: antigangrenos)
Serurile imune native conin pe lng Ig i alte proteine ale sngelui (albumine) responsabile de reacii alergice. Serurile imune purificate i
concentrate sunt lipsite de albumine, care sunt eliminate prin procedee speciale (precipitare cu sulfat de amoniu, prin digestie enzimatic,
electroforez)
Imunoglobulinele (gamma-globulinele). Se obin din seruri omologe rafinate prin procedee care extrag numai gamma-globulinele i realizeaz o
concentraie a Ig de 15-20 ori fa de serul nativ. Ig normale sunt extrase din amestecuri de plasm de la sute-mii de donatori sau snge
placentar. Se utilizeaz n seroprofilaxia rujeolei, hepatitei A i n terapia pacienilor cu deficit umoral primar. Ig hiperimune (specifice) se obin
din seruri de convalesceni sau ale persoanelor imunizate (Ig anti-antrax, Ig anti-leptospirozic)
Cerinele fa de preparatele biologice ce conin Ac: Sterilitate; Inofensivitate; Apirogenitate ; Aviditate nalt; Activitate de lung durat.
64. Clasificarea serurilor imune curative dupa provenienta si modul de actiune. Caracteristica lor, avantajele si dezavantajele
serurilor omoloage si heteroloage.

65. Utilizarea practica a preparatelor biologice cu anticorpi. Modul de administrare, reactiile adverse si prevenirea lor.

32
Serurile antibacteriene i antivirale se aplic contra unei serii de boli sub form de globuline i imunoglobuline (gama-globuline): contra
antraxului, pestei, variolei, rabiei, rujeolei, poliomielitei, hepatitei A, scarlatinei etc. Serurile antitoxice sunt utilizate contra difteriei,
botulismului, tetanusului, contra infeciei anaerobe, antidotul catre veninul de arpe.
Imunoglobulinele din sngele uman se folosesc n scopuri profilactice contra rujeolei, poliomielitei, tusei convulsive, hepatitei A, parotiditei
epidemice, varicelei, scarlatinei, variolei i altor infecii.
Modul de administrare
- Serurile imune omologe, Ig se administreaz n doz unic fr precauii
- Serurile heterologe, administrate parenteral, pot provoca reacii adverse (reacii anafilactice, boala serului, febr).
Cauza: albuminele se comport ca un alergen
Combaterea reaciilor serice:
1. Utilizarea serurilor imune purificate i concentrate
2. Utilizarea Ig (gamma-globulinelor)
3. Anamneza pentru recunoaterea unei eventuale stri de sensibilizare
Efectuarea testrii pentru depistarea sensibilitii la serul heterolog. n acest scop se utilizeaz testul intradermic cu 0,1 ml din diluia 1:100 a
serului prescris.
Dac testul este negativ (peste 20-30 minute reacie local pn la 9 mm) se ntroduce subcutan a doua doz de 0,1-0,5 ml de ser nediluat. Peste
30-60 minute n lipsa reaciei se recurge la ntroducerea ntregii doze curative.
Dac testul este pozitiv (reacie local peste 10 mm) exist pericolul reaciilor alergice. n acest caz se recurge la metoda de desensibilizare acut,
propus de Besredca. Ea const n administrarea repetat, la interval de 20 min., a dozelor crescnde din serul respectiv, la nceput diluat 1:100
subcutan, trecndu-se treptat la ser nediluat intramuscular.
Mecanismul: la ntroducerea dozelor mici de ser se evit acumularea cantitilor mari de substane biologic-active (histamin, serotonin,
bradikinin, etc), responsabile de declanarea anafilaxiei.
n caz de necesitate administrarea serului va fi nsoit de administrarea preparatelor anti-histaminice sau serul va fi administrat sub narcoz
(scoaterea din funcie a scoarei cerebrale).
66. Rectiile antigen (Ag) anticorp (Ac) in vitro. Caracteristica legaturii Ag-Ac. Fazele interactiunii Ag-Ac. Aplicarea practica a
reactiilor serologice. Serurile imune diagnostice, diagnosticurile: obtinerea, aplicarea practica.
Studiul i aprecierea imunitii poate fi efectuat prin intermediul diferitor teste realizate in vitro sau in vivo (reacii imunologice).
Pentru aprecierea rspunsului imun umoral se studiaz interaciunea dintre Ag i Ac, iar pentru aprecierea imunitii celulare se determin
numrul total de limfocite, subclasele limfocitelor T, se evalueaz citokinele, etc.
REAC
REACIILE ANTIGEN-ANTICORP in vitro (REAC (REACIILE SEROLOGIC
SEROLOGICE)
Reac
eacia Ag-Ac esteeste determinat
determinat de interac
interaciunea specific
specific dintre epitopii
epitopii Anti
Antig genului i paratopii
paratopii Anti
Anticcorpilor.
orpilor. n acest proces intervin patru
tipuri de legturi
legturi:: legturi
legturi de hi hidrogen, legturi
legturi electrostatic
electrostatice, for
forele Van der Waals i legturi
legturi hi
hidrof
drofobe.
Legtura Ag-Ac are are tre
trei caracteristici
caracteristici:: este
este exotermic
exotermic,, specific
specific i reversibi
reversibil.
Afinitat
finitateea unui
unui Ac pentru
pentru un Ag specific
specific caracteriz
caracterizeaz intensitat
intensitateea for
forelor de legtur
legtur a complexului
complexului Ag-Ac. Ea Ea depinde de
complementaritat
omplementaritateea steric
steric dintre
dintre paratop i epitop.
epitop.
Aviditat
viditateea unui Ac pentru
pentru un Ag specific
specific reprezint
reprezint rapiditat
rapiditateea apari
apariiei manifestrii reac
reaciei Ag-Ac (precipitare
precipitare,, aglutinare,
aglutinare, etc.).
etc.). Ea
Ea
depi
depinde
nde de constanta
constanta de de asociere
asociere,, de valena
alena Ac, de
de nu
numrul de de epitopi
epitopi, de temperatur
temperatur, de de pH, de fora
fora ionic
ionic a mediului
mediului..
Un paratop se poate combina cu un singur epitop, numit specific specific. Astfel,
Astfel, dac este cu cunoscut unul
unul din
din elementele
elementele reac
reaciei - Ag sau Ac,
poat
oate fi identificat
identificat cellalt.
Reaciile Ac-Ac (reaciile serologice) au dou direcii de aplicare practic:
Seroidentificare:
eroidentificare: Detectarea
etectarea i dozdozarea Ag (element necunoscut - tulpinitulpini microbiene izolate din diferite prelevate) cu ajutorul Ac specifici specifici
cunoscui.
cunoscui.
Pot
Pot fi utilizate
utilizate dou
dou surs
surse de Ac: Ac monoclonali
monoclonali,, absolut omogeni,
omogeni, dar care recurecunosc doar un singur epitop i Ac poli policlonali
clonali,, ce se conin
conin n
seruri imune (antiseruri
(antiseruri)), care permi
permit legturi
legturi de aviditat
aviditatee nalt cu Ag.
Serurile imune se obin prin injectarea
injectarea la un animal de laborator a antigenelor
antigenelor cun
cuno oscu
scute.
te. Dup o perioad de ti timp, serul
serul animalului
animalului va
con
conine anticorpi
anticorpi contra
contra aces
acestor antigene. Dar natura exact a Ac din acest ser nu poate fi cunoscut cu exactitate (Ac policlonali) .
Specificitat
pecificitateea serului
serului trebuie s fie permanent controlat i Ac nedorii trebuie s fie eliminai eliminai prin
prin adsorb
adsorbiie.
Serodiagnostic:
erodiagnostic: Detectarea
etectarea i titrar
titrarea Ac din serul bolnavilor (component necunoscut) fa de un un Ag specific
specific cuncuno
oscut (coninut
(coninut n
diagnosticuri)
diagnosticuri).
Unele reac
reacii Ag-Ac se manifest
manifest direct i pot fi observate
observate de experimentato
experimentator: de exemplu
exemplu precipitarea
precipitarea sausau aglutinarea
aglutinarea complexelor
complexelor Ag-Ac,
Ag-Ac,
liza unor celule purttoare de Ag pe membrana lor (hemoliz (hemoliz,, bacterioliz
bacterioliz,, etc).
Alte reac
reacii Ag-Ac nu nu se viz
vizualiz
ualizeaz spontan in vitro. n acest caz se va recurgerecurge la nite artificii
artificii experimentale,
experimentale, cum ar fi utilizarea Ac
marcai
marcai: :
Ac marcai
marcai cu un fluorocrom: imunofluorescena
imunofluorescena..
Ac marcai
marcai cu un iz izotop radioactiv: analiza radio-imun
radio-imun.
Ac marcai
marcai cu o enzi
enzim: analiza imunoenzi
imunoenzimatic
matic..
INTERACIUN
INTERACIUNEA EA ANTIGEN-ANTICORP
Faza specific:
specific: are loc interaciunea dintre Ag i Ac specific corespu corespunztor.
nztor. Este un fenomen rapid, inviz invizibi
ibil, comun pentru toate
toate reac
reaciile
Ag-Ac. Decurge la temperatura de 37 C, n prezena unui electrolit (sol. fiziologic).
Faza nespecific,
nespecific, viz vizibi
ibil a uniunii Ag-Ac, se manifest prin precipitar
precipitaree, aglutinare
aglutinare,, liz, etc - fenomene determinate de anumite condiii
(valena Ac, dimensiunile Ag, etc).

67. Reactia de aglutinare (RA). Componentele, mecanismul. Reactiile de aglutinare directa (pe lama, in tuburi). Lectura si
aprecierea rezultatelor reactiilor. Aplicarea practica.
REACIA DE AGLUTINARE
Din latin agglutinatio - ncleiere
Reacia Ag-Ac se poate manifesta prin aglutinare atunci cnd determinantele antigenice sunt purtate de particule figurate (Ag insolubile,
corpusculare), iar Ac specifici sunt complei (cel puin bivaleni).
Aglutinarea este determinat de formarea unei reele ntre Ag i Ac, ce permite apropierea unui numr suficient de particule figurate pentru
a constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac IgM cu 10 epitopi poteniali aglutineaz mai activ dect Ac IgG.

Clasificarea reaciilor de aglutinare

33
 Aglutinare activ
activ sau direct
direct, , n care particula figurat (Ag corpuscular) este el nsui purttor de determinante antigenice specifice
(hematii, leucocite, trombocite, spermatozoizi, bacterii)
Aglutinare pasiv
pasiv sau indirect
indirect, , n care particula servete doar de suport pentru un determinant antigenic solubil fixat artificial pe
suprafaa sa. Frecvent sunt utilizate ca suport hematii formolate, particule de latex sau microcristale de colesterol.
Reactii
Reactii dede aglutinare
aglutinare activa
activa (directa
(directa)
Aspect calitativ.
alitativ. Reactia
eactia poate
poate fi efectuata
efectuata pe lama
lama de sticla sau inin tuburi
tuburi..
Reacia de aglutinare pe lamel: pe lamela degresat se aplic cu pipeta Pasteur cteva picturi de ser n diluii mici (1:10 1:20) i o pic
de sol izotonic de clorid de natriu pentru control. n fiecare pictur de ser, nclusiv n cea de control se introduce o ans de cultur vie de
microorganisme de 24 ore de pe suprafaa mediului solid sau se adaug cu pipeta Pasteur cte o pic de suspensie de microorganisme omorte
(diagnosticum). Cultura aplicat se amestec minuios pentru a obine o suspensie tulbure omogen. Reacia decurge la temperatura
camerei. Rezultatul ei se citete cu ochiul liber peste 5-10 min, uneori este folosit lupa. Dac lamele se introduc n camera umed nchis,
pentru a evita uscarea picturilor rezultatul reaciei se citete i peste 30-40 min.
La reacia pozitiv n pictura de ser apar flocoane (mari sau mici), uor vizibile la cltinarea lamei. La reacia negativ lichidul rmne
tulbure omogen. Dac cantitatea de microorganisme este mic i citirea rezultatului reaciei este dificil, pictura de ser cu amestecul de
cultur se usuc, preparatul se fixeazse coloreaz cu fuxin Pfaiffer si se examineaz la microscop. La reacia pozitiv toate cmpurile de
vedere sunt libere. Aceasta este reacia de microaglutinare.
Reacia de aglutinare n tuburi se folosete pentru determinarea serogrupului i serovarului microorganismelor. Toate ingredientele
se repartizeaz succesiv n eprubete. Serul este diluat n proporiile 1:100, 1:200, 1:400 etc. n fiecare tub cu serul diluat se adaug 1-2
picturi de antigen (suspensie de 1-2mlrd de microorganisme la 1ml), se agit energic i se incubeaz n termostat la 37C-2 ore, apoi se
citesc rezultatele prealabile ale reaciei, ncepnd cu cele de control(al serului i antigenului). Absena aglutinrii n tuburile de control i
prezena de flocoane suspendate n tuburile de experien se apreciaz ca reacie pozitiv. Tuburile se menin la temperatura camerei 18-20
de ore i dup aceea se constat rezultatul definitiv al reaciei. Intensitatea reaciei se exprim prin semne de plus. La aglutinarea complet
(++++) lichidul este absolut transparent, iar la fundul tubului se depune sediment din flocoane de microorganisme aglutinate. Cu ct mai
puine microorganisme snt aglutinate, cu att este mai tulbure lichidul i cu att mai puin sediment floconos se nregistreaz la fundul
eprubetei (+++, ++, +). La reacia negativ (-) sedimentul lipsete, suspensia rmne uniform tulbure i dup aspect nu difer de coninutul
de control al antigenului. RA se utilizeaz pentru diagnosticul serologic al bolilor infecioase febrelor tifo-paratifoide (reacia Widal),
brucelozei (reacia Wright, Huddleson), tularemiei i altor boli.
Aprecierea:
Aprecierea: cea mai mare dilutie a serului in care se manifesta aglutinare de cel putin 3 + (+++) se numeste titrul anticorpilor
aglutinanti (titrul serului aglutinant).
aglutinant).
Aglutinarea
glutinarea directa
directa este
este utilizata
utilizata pent
pentrru determina
determinarea grupelor
grupelor sangv
sangvineine sau
sau in diagnosticul
diagnosticul unor maladii
maladii infectioa
infectioase
se (seroidentificarea Ag
sau depistarea i titrarea Ac din serul bolnavilor) .
Reactile
Reactile dede aglutinare
aglutinare pasiva
pasiva (indirecta
(indirecta)
Aglutinarea
glutinarea pasiva
pasiva consta
consta in fixa
fixarea unui
unui Ag solubi
solubil (sa
(sauu al unui Ac) pe un suport corpuscular inert, inert, care nu intervi
intervine in reactia
reactia Ag-Ac. In
calitate de suport inert pot servi hematiile, particule de latex, cristale ristale de colesterol. Suspensia
uspensia de particule sensibilizate cu Ag sau Ac este este
pusa in contact cu serul
serul imun (respectiv
(respectiv cu Ag), ca si in cazul aglutinarii directe.
Avantajele reactiilor
reactiilor indirecte:
indirecte: facilitat
facilitateea lecturii
lecturii si sensibilitat
sensibilitateea inalta.
inalta.
Reactia
eactia de
de hemaglutinare
hemaglutinare indirecta
indirecta (pasiva
pasiva) RHAI / RHAP. Unele antigene de origine polizaharidica se fixeaza fixeaza prac
practic
tic spontan,
spontan, dupa o
scurta
curta incubatie
incubatie, pe suprafata hematiilor.
hematiilor. Antigene
Antigenele le proteice
proteice se fixeaza
fixeaza doar dupa o preg pregatire
atire prealabi
prealabila a hematiilor
hematiilor (de
(de ex.: tratarea cu
tanina
tanina,, formol). RHAI se efectueaz in godeurile unei unei placi
placi din polistiren.
polistiren. Reactia
eactia poz
pozitiva
itiva se manifesta prin
prin aglutinarea
aglutinarea eritrocitelor
sensibilizate (umbrela inversata de culoare bruna la fundul godeurilor) godeurilor).
n reacia de latex-aglutinare Ac sau Ag sunt fixai pe particule de latex. Reacia se efectueaz pe lama de sticl.
Reacia de latex-aglutinare este utilizata
utilizata in identificarea facto
factorului
ului re
reumatoid la bolnavi suspecti
suspecti de poli
poliartrita
artrita re
reumatoida
umatoida, in bacteriologie
pentru identificarea rapid a mi/o sau Ag lor n prelevate, sau identificarea tulpinilor izolate, de asemenea pentru serodiagnosticul unor
infecii.
Reacia de Co-aglutinare.
Co-aglutinare. La baza acestei reacii se afl proprietatea unei bacterii Staphylococcus aureus (tulpina Cowan) Cowan) - ce are n
componena peretelui celular proteina A - s fixeze Ig G prin intermediul fragmentului Fc. Astfel se formeaz diagnosticuri cu Ac, cu
ajutorul carora pot fi identificare Ag respective necunoscute. Reacia se efectueaz pe lam.
REACIA COOMBS. Unii Ac (monovaleni) nu sunt aglutinani n condiii normale, normale, fiind monovalenti (ex.: anticorpii anti-Rh,
responsabili de incompatibilitatea materno-fetal n sistemul Rh). Ei pot fi depistai graie testelor Coombs. Sunt posibile 2 tehnici, n
funcie de prelevat: snge de la nou-nscut sau de la femeia gravid.
Tehnica Coombs direct. La un nou-nscut se caut prezena Ac materni anti-Rh fixai pe hematii, dac mama este Rh-. La aceste hematii
suspecte se adau
adaug un ser anti-Ig uman. Acest ser nu aglutineaz hematiile normale, din contra, el provoac aglutinarea hematiilor pe care
sunt fixai Ac anti-Rh.
Tehnica Coombs indirect. La o femeie gravid Rh- Ac anti-Rh sunt prezeni n ser. Iniial la acest ser se aga ug hematii Rh+ (pentru
formarea complexului Ag-Ac), apoi se aplic serul anti-Ig.
68. Reactia de hemaglutinare indirecta (RHAI) cu scop de seroidentificare. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea
rezultatelor RHAI. Aplicarea practica.
Uneori Ag folosite n reacia de aglutinare sunt att de microdispersate c complexul aglutinogen-aglutinin nu se observ cu ochiul liber.
Pentru ca aceast reacie s poat fi vzut s-au propus diferite ci de absorbire a acestor Ag pe particule mai mari cu aglutinarea lor ulterioar cu
Ac specifici. Ca adsorbani se folosesc diferite specii de bacterii, corpuscule de talc, dermatol, colodii, coalin, carmin, latex .a. Aceast reacie
a cptat denumirea de reacie de aglutinare indirect sau pozitiv. O capacitate mai pronunat de adsorbie au eritrocitele. Reacia n care se
folosesc eritrocitele se numete hemaglutinare indirect sau pasiv (RHAI sau RHAP). Pentru efectuarea RHAI se folosesc eritrocite de berbec,
cal, iepure, gin, oarece, om .a. care n prealabil sunt prelucrate cu formalin sau glutaraldehid. Capacitatea de adsorbie a eritrocitelor crete
la prelucrarea lor cu soluie de tanin sau clorid de crom.
n RHAI ca antigene pot servi Ag polizaharidice, extractele vaccinurilor bacteriene, Ag virusurilor i rickettsiilor i alte substane de natur
proteic.
Eritrocitele sensibilizate cu antigene se numesc diagnosticumuri eritrocitare. Pentru prepararea diagnosticumurilor eritrocitare se folosesc
frecvent eritrocite de berbec, care au o capacitate mare de adsorbie.
RHAI se efectueaz mai uor n micropanourile aparatului Tacaci, folosind pentru diluia materialului microtitratorul. Serurile de examinat se
nclzesc 30min la temperatura de 56C, pentru a nltura hemaglutininele nespecifice, se prepar diluii duble n serie n soluie stabilizant i
cte o pictur de suspensie de 1% de eritrocite sensibilizate, n rndul 2 aceeai cantitate de eritrocite de control. Plcile se agit minuios i se
introduc n termostat pentru 30-40 min la temperatura 37C.

34
 Rezultatele reaciei se citesc dup prezena hemaglutinrii. Ea este pozitiv (umbrel inversat de culoare brun la fundul godeurilor) n
cazul, c titrul de hemaglutinare cu eritrocite de experien predomin cel puin de 4 ori fa de titrul cu eritrocitele de control. E obligatoriu
controlul cu eritrocitele sensibilizate pentru excluderea aglutinrii spontane.(conform compendiului)
Conform la cartea mic neagr(Cerkes):
Metodica: serul cercetat se nclzete 30 min la t 56C, se dilueaz consecutiv n coraport de 1:10 1:1280 i se toarn cte 0,25ml n
eprubete sau alveole, unde apoi se adaug cte 2 picturi de diagnosticum eritrocitar. n calitate de control servesc: suspensia de diagnosticum
eritrocitar cu ser imun; suspensia de diagnosticum cu ser normal; suspensia de eritrocite normale cu serul cercetat. n primul control urmeaz s
aib loc aglutinarea, iar n controalele doi i trei aglutinarea va lipsi.
Cu ajutorul la RHAI poate fi determinat Ag necunoscut, dac pe suprafaa eritrocitelor vom adsorbi anticorpii deja cunoscui.
Reacia de hemaglutinare poate fi efectuat i n volume mai mici 0.025ml (micrometoda), folosind microtitratorul Tcaci.
69. Reactia de hemaglutinare indirecta (RHAI) cu scop de seroidiagnostic. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea
rezultatelor RHAI. Aplicarea practica.
Acela principiu ca i mai sus doar c se determin Ac necunoscut, iar pe suprafaa eritrocitelor se adsorb Ag deja cunoscui.
70. Reactiile de aglutinare pasiva (indirecta). Reactiile de latexaglutinare si de co-aglutinare. Componentele, mecanismul. Lectura
si aprecierea rezultatelor reactiilor. Aplicarea practica.
Reacia n care se folosesc eritrocitele se numete hemaglutinare indirect sau pasiv (RHAI sau RHAP).
Reacia de latex-aglutinare este utilizata in identificarea factorului reumatoid la bolnavi suspecti de poliartrita reumatoida, in bacteriologie pentru
identificarea rapid a mi/o sau Ag lor n prelevate, sau identificarea tulpinilor izolate, de asemenea pentru serodiagnosticul unor infecii.
Reacia de Co-aglutinare. La baza acestei reacii se afl proprietatea unei bacterii Staphylococcus aureus (tulpina Cowan) - ce are n
componena peretelui celular proteina A - s fixeze Ig G prin intermediul fragmentului Fc. Astfel se formeaz diagnosticuri cu Ac, cu ajutorul
carora pot fi identificare Ag respective necunoscute. Reacia se efectueaz pe lam.
71. Reactia Coombs. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea rezultatelor reactiilor. Aplicarea practica.
Unii Ac (monovaleni) nu sunt aglutinai n condiii normale, fiind monovaleni (ex. Ac anti-Rh, responsabili de incompatibilitatea
materno+fetal n sistemul Rh). Ei pot fi depistai graie testelor Coombs. sunt posibile 2 tehnici, n funcie de prelevat: snge de la nou-nscut
sau de la femeia gravid.
Tehnica Coombs direct: la un nou-nscut se caut prezena Ac materni anti-Rh fixai pe hematii, dac mama este Rh- . La aceste hematii
suspecte se adaug un ser anti-Ig uman. Acest ser nu aglutineaz hematiile normale, din contra, el provoac aglutinarea hematiilor pe care sunt
fixai Ac anti-Rh.
Tehnica Coombs indirect: la o femeie gravid Rh- Ac anti-Rh sunt prezeni n ser. Iniial la acest ser se adaug hematii Rh+ (ptr formarea
complexului Ag-Ac), apoi se aplic serul anti-Ig.
Demonstrarea prezentei de imunoglobuline sau a complementului pe suprafata hematiilor sustine diagnosticul de distructie eritrocitara mediata
imun.
Exista doua clase majore de anticorpi care reactioneaza cu eritrocitele. Anticorpii completi sau salini aglutineaza eritrocitele suspendate in
solutie salina; acestia sunt de obicei de tip IgM (cel mai bun exemplu de aglutinare salina la temperatura camerei este cea utilizata in grupajul
ABO). In vivo anticorpii IgM fixeaza complementul si produc hemoliza imediata intravasculara. Anticorpii care nu reactioneaza vizibil in mediu
salin si produc reactii de aglutinare numai prin utilizarea de tehnici speciale sunt numiti aglutinine incomplete si sunt de obicei de tip IgG (cel
mai bun exemplu sunt anticorpii anti-Rh, care, daca sunt prezenti in serul primitorului de sange incompatibil, produc o reactie hemolitica
transfuzionala intarziata, extravasculara).
Pentru a certifica faptul ca hematiile unui pacient sunt invelite (sensibilizate) cu imunoglobuline, complement sau ambele, se adauga la o
suspensie de eritrocite provenite de la pacient antiser cu reactivitate fata de moleculele de Ig si/sau complement umane, care va determina
aglutinarea acestora. Initial testarea se face cu antiseruri polispecifice, care contin anti-IgG, anti-C3d si ocazional si activitate anti-lant usor.
Reactivii monospecifici diferentiaza in continuare intre IgG, C3d, existand si seruri monospecifice pentru C3b, C4b, C4d si lantul greu al IgG.
Antiseruri specifice pentru IgM sau IgA sunt rar utilizate, deoarece IgM nu mai sunt gasite de obicei inca atasate pe suprafata celulara, iar IgA
sunt foarte rar intalnite pe suprafata eritrocitelor.
Utilizand sange recoltat pe EDTA sau pe citrat activarea in vitro a complementului de catre autoanticorpii la rece benigni este inhibata. Spalarea
eritrocitelor indeparteaza globulinele solubile sau atasate nespecific, ceea ce permite detectia imunoglobulinelor si factorilor complementului
specific legate de eritrocite in vivo. Se foloseste metoda de hemaglutinare pe lama. Specimen recoltat - sange venos. Stabilitate proba - testul
se efectueaza imediat, daca acest lucru nu este posibil, proba se pastreaza 48 ore la 2-8 o C. Prelucrare necesara dupa recoltare - o parte din
eritrocite se spala de trei-patru ori cu solutie salina normala, urmata de prepararea unei suspensii eritrocitare in ser fiziologic steril 5 %.

72. Reactiile de precipitare. Mecanismul. Conditiile formarii retelei de precipitare. Reactia de precipitere inelara. Componentele.
Lectura si aprecierea rezultatelor reactiilor. Aplicarea practica.
Reacie de precipitare (R.P.) se numete sedimentarea antigenului (pretipitinogenului) din soluie la aciunea serului imun (precipitinei) i a
electrolitului asupra lui. Cu ajutorul reaciei de precipitare antigenul poate fi evideniat n aa cantiti minime, care nu se determin pe cale
chimic.
In reacia de precipitare se folosesc antigene lichide i transparente, care prezint corpuscule ultramicroscopice ale soluiei coloidale de
protein, polizaharide etc.n calitate de antigene se folosesc extracte din celulele microbiene, organe i esuturi, produsele dezintegrrii celulelor
rnicrobiene - lizate, filtrate . a. Rezistena precipitinogenelor la temperaturi nalte se folosete la obinerea antigenelor din agenii cauzali ai
antraxului, pestei . a. (metoda de fierbere). Serurile precipitante se pregtesc centralizat prin hiperimunizarea animalelor (iepurilor) cu suspensie
de bacterii, filtrat al culturilor bulionice, autolizate, extracte saline ale microorganismelor, proteine serice etc.
Titrul serului precipitant, spre deosebire de titrul altor seruri diagnostice, se determin prin diluia maxim a antigenului care se precipit cu
serul dat. Aceasta se explic prin faptul, c antigenul care particip n R.P. are dimensiune ultramicroscopic i se conine ntr-o unitate de volum
n cantiti mai mari dect anticorpi n acelai volum de ser. Serurile precipitante se elaboreaz cu titru nu mai mic de 1:100000.
Metodica. Intr-o eprubet ngust (d. 0,5 cm) se toarn 0,3-0,5 ml de ser precipitant nediluat. Cu pipeta Pasteur antigenul lent se prelinge pe
peretele eprubetei (n poziie nclinat) n acelai volum. Apoi evitind amestecul lichidelor, eprubeta se aranjeaz vertical. La suprapunerea
corect a antigenului pe ser se observ clar hotarul dintre cele dou straturi de lichide. R.P. este nsoit obligatoriu de controlurile serului i ale
antigenului. Rezultatele reaciei se citesc, n dependena de tipul antigenului i anticorpilor, peste 5-10 min, 1-2 ore sau 20-24 ore. n cazul
reaciei pozitive n tubul de experien la hotarul serului i al extractului de examinat apare un precipitat sub form de inel de culoare alb.
Reacia de precipitate se folosete pe larg n practica de laborator pentru diagnosticul bolilor infecioase bacteriene (antrax, pest, tularmie . a.)
i de natur virotic (variol, infecia respiratorie acut . a.),
In medicina judiciar R.P. se folosete pentru determinarea apartenenei de specie a proteinei (pete de snge, sperm etc.).

35
Cu ajutorul R.P. se va determina att specificitatea de specie, ct i de grup a proteinei. Prin intermediul ei s-a determinat, de exemplu, gradul de
nrudire a diverselor specii de animale i plante.
Aplicarea R.F. n controlul sanitaro-igienic al produselor alimentare permite de a depista falsificarea fabricatelor de carne, pete, finoase,
adaosurile a lapte . a.
Dezavantaje ale R.P. snt instabilitatea precipitatului (inelar), care dispare ia o agitare uoar, precum i imposibilitatea de a evidenia cantitatea
diferitor antigene ce iau parte la formarea precipitatului. Aceste neajunsuri nu le are reacia de precipitare n gel.
Reacia de precipitare inelar. In eprubeta de precipitare, cu ajutorul pipetei Pasteur, se toarn 0,20,3 ml (5 6 picturi) de ser (serul nu
trebuie s nimereasc pe peretele eprubetei). Pe peretele eprubetei, n ser, foarte atent, cu ajutorul pipetei subiri Pasteur, se adaug acelai volum
de antigen. In acest timp eprubeta se ine n poziie nclinat. La stratificarea corect ntre ser i antigen se distinge o limit clar. Atent, pentru a
evita amestecarea straturilor, eprubeta se trece n stativ, n caz de reacie pozitiv, la hotarul dintre antigen i anticorp se formeaz un inel
tulbure, care reprezint precipitatul Reacia este nsoit de un ir de controale.Un rol deosebit de important aparine consecutivitii introducerii
ingredienilor reaciei n eprubeta. Nu se admite stratificarea serului pe suprafaa antigenului (n control pe soluia izotonic), deoarece
densitatea serului este mai mare dect cea a antigenului i el se va aeza la fundul eprubetei, iar hotarul dintre antigen i anticorp nu se for-eaz.
Evidena rezultatelor se efectueaz peste 530 min, iar n unele cazuri peste o or, ntotdeauna ncepnd cu controlul. Inelul din eprubeta a
doua inidic capacitatea serului imun de a intra n reacia specific cu antigenul corespunztor, n eprubetele nr. 35 nu trebuie s apar
inele de precipitare, deoarece lipsesc anticorpii i antigenii omologi. Prezena inelului n eprubeta nr. l indic rezultatul pozitiv al reaciei i
faptul c antigenul cercetat corespunde serului imun folosit n reacie. Lipsa inelului (inelul e prezent doar n eprubeta nr. 2) indic
necorespunderea antigenului cu anticorpul, deci a fost obinut rezultatul negativ al reaciei.
73. Reactiile de precipitare in gel. Clasificarea. Reactia de imunodifuzie dubla (tehnicile Elek, Ouchterlony). Componentele,
mecanismul. Lectura si aprecierea rezultatelor reactiilor. Aplicarea practica.
Ag i Ac difuzeaz unul spre altul prin geloz i n zona de concentraie optim a acestora dou reactive se produce precipitarea sub form de
linii albe-cenuii. Dac exist mai multe sisteme Ag-Ac, se vor forma linii de precipitare distincte. Poate fi utilizat n analiza calitativ a unui
amestec de Ag ntr-o soluie.
componentele: gelul agaros, Ag, Ac. ptr control se folosesc test-sistemul compus din Ac i Ag cunoscute omoloage.
Clasificare: imunodifuzia radial simpl (tehnica Mancini); imunodifuzia dubl radial (tehnica Ouchterlony); test Eleck; imunoelectroforeza;
contraimunoelectroforeza
imunodifuzia dubl radial (Tehnica Ouchterlony ). Ag i Ac difuzaz radial di godeuri practicate la distan convenabil n statul de gel.Dup
cca 24 ore de incubare, n zona dintre godeuri, unde reactivii corespondeni n difuziune au realizat proporii echivalente, apare o linie de
precipitare. Tehnica Ouchterlony este utilizate ptr caracterizarea Ag n amestec.
testul Eleck: se poate demonstra toxigeneza bacilului difteric. ntr-o plac Petri cu mediu de cultur adecvat se aplic n lungul diametrului o
band din hrtie de filtru cu antitoxina difteric. Perpendicular pe direcia benzii de hrtie se nsmneaz, n striu, tulpina de cercetat i cte o
tulpin toxigen i netoxigen de bacilul difteric (respectiv martorul pozitiv i cel negativ). Plcile se ncurbeaz la 37C. Dup 24 i 48 ore se
urmrete apariia n unghiul dintre striul de cultur i depozitul de antitoxin a unei linii de precipitare, care continu de precipitare toxin-
antitoxin a martorului pozitiv.
Aplicare practic: 1)ptr diagnosticul bolilor, cauzate de virusuri, rickettsi i bacterii ce elimin exotoxine. 2)ptr determinarea toxigenezei
corinebacteriilor difterice.
PRECIPITAREA N MEDIU SOLID (N GEL)
n aceste reacii Ag i Ac difuzeaz unul spre altul prin geloz i n zona de concentraie optim a acestor dou reactive se produce precipitarea
sub form de linii albe-cenuii. Dac exist mai multe sisteme Ag-Ac,
Ag-Ac, se vor forma linii de precipitare distincte. Poate fi utilizat n analiza
calitativ a unui amestec de Ag ntr-o soluie.
Imunodifuzia simpl radial (tehnica Mancini)
Se efectueaz pe o plac acoperit cu geloz, n care sunt ncorporai Ac specifici. Ag este depus n godeurile din stratul de geloz. Ag difuzeaz
radial n geloz pe parcursul a 48 ore. Dac Ag corespunde Ac, atunci are loc formarea de discuri de precipitare, cu suprafaa proporional
concentraiei Ag din godeu. Se utilizez pentru depistarea i cuantificarea Ig, hormonilor, enzimelor, etc.
Imunodifuzie dubl (tehnicile Ouchterlony i Elek)
Se acoper cu geloz o plac de sticl sau se toarn geloza n cutia Petri.
n tehnica Ouchterlony Ag i Ac difuzeaz din godeurile situate la o distan de 15 mm unul de altul.
n tehnica Elek cele 2 reactive difuzeaz din benzile de hrtie plasate pe suprafaa gelozei.
Moleculele difuzeaz n gel n funcie de greutatea lor i formeaz linii de precipitare pentru fiecare sistem Ag-Ac ce corespund n zona lor de
echivalen. Dac dou Ag sunt identice, liniile lor se unesc, dac sunt diferite se intersecteaz. Utilizarea determinarea toxinelor
(toxigeneza), antitoxinelor, Ag proteice
Contraimunoelectroforeza (CIEF)
Este util la examinarea amestecurilor antigenice complexe. Lectura este posibila peste 90 minute.
Geloza este turnat pe o plac de sticl, Ag i Ac sunt dispui n rezervoare circulare de 2 mm diametru, la o distan de 10 mm. n timpul
electroforezei Ag, ncrcat negativ, migreaz spre polul pozitiv, ntlnind Ac care migreaz spre catod. La interaciunea Ag i Ac omologi are loc
formarea liniei de precipitare. CIEF servete la examinarea componentelor Ag din lichide biologice: LCR, urin, lichid pleural, ascit, etc.

74. Reactia de fixare a complementului (RFC) cu scop de seroidiagnostic. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea
rezultatelor reactiei. Aplicarea practica.
RFC se bazeaz pe fenomenul , conform cruia complexul specific dintre Ag i Ac ntotdeauna leag complementul.
RFC cu scop de serodiagnostic prevede identificarea Ac cu ajutorul Ag.
componentele: ptr sistemul de baz: antigen (de regul lizat), extract, hapten, mai rar suspensia de microorganisme, anticorp: serul bolnavului,
complement: serul cobaiului. ptr sistemul hemolitic: antigen: eritrocite de berbec; anticorp: hemolizina fa de eritrocitele berbecului; soluie
izotonic.
Pregtirea ingredienelor:
1. Serul (bolnavului sau diagnostic) n ajunul efecturii reaciei se nclzete n baie de ap ia temperatura de 56C (30 min) pentru inactivarea
propriului complement.
Unele seruri, mai ales de ia animalele imunizate, posed capacitatea anticomplementar, adic suit capabile de a fixa complementul n lipsa
antigenului omolog. Activitatea anticomplementar a serurilor se lichideaz prin prelucrare cu bioxid de carbon, prin nclzire la 57-58'C,
congelare la -20C sau -70C i nlturarea sedimentului prin centrifugare, prin adaos n ser a complementului n raport 1:10 i nclzirea
acestuia dup 18-20 ore de pstrare la rece. Pentru a preveni activitatea anticomplementar a serurilor, ele se pstreaz n stare liofilizat sau
congelat la temperaturi joase.

36
2. Ca antigen pentru R.F.C. pot fi diferite culturi <ie microorganisme omorte, lizatele lor, componentele bacteriene, ale organelor modificate
patologic i normale, lipidelor tisulare, virusurile i materialul ce conine virusuri. Multe antigene microbiene se obin centralizat,
Aciunea anticomplementar a antigenelor este atenuat prin aa metode ca: termoliza (congelare i decongelare multipl), tratarea cu substane
care dizolv grsimile (eter, cloroform, aceton), alcooli (metanol, etanol . a.).
3. In calitate de complement se utilizeaz serul cobailor, proaspt recoltat, precum i complementul liofilizat. Pentru cptarea soluiei de baz i
titrarea ulterioara complementul se dilueaz 1:10 cu soluie izotonic de NaCl.
4. Eritrocitele de berbec se folosesc n suspensie da 3% n soluie izotonic de NaCl. Sngele (100-150 ml) recoltat din vena jugular se
introduce n borcan steril cu perle de sticl, se defibrineaz prin agitare timp de 10-15 min i se filtreaz prin 3-4 straturi de tifon steril pentru a
nltura fibrina. Eritrotitele se spal de 3 ori cu soluie izotonic de NaCl, adugnd-o la sedimentul eritrocitelor pn la volumul iniial de strige.
Eritocitele pot fi pstrate 4-6 zile la temperatura de 5-6C, Timpul de pstrare se mrete la conservarea lor cu formalin (0,1 rol de formlin
nediluat la 80 ml de snge defibrinat) sau prin alte metode.
5. Serul hemolitic se obine: Iepurii se imunizeaz prin vena auricular cu suspensie (prealabil splate) de eritrocite de berbec (cte 1 ml 4-6 ori
peste o zi). Peste 7 zile de la ultima injectare se obine ser de prob. Dac titrul este nu mai mic de 1:1200, se recurge la sngerare. Serul se
nclzete 30 min la temperatura de 56C. Pentru a preveni contaminarea bacterian n serul hemolitic se include conservrii (mertiolat 1:10000
sau 1% de acid boric).
6. Sistemul hemolitic const din amestec de volume egale ale serului nemobilic (n titru ntreit) i 3% de eritrocite de berbec. Sensibilizarea
eritrocitelor cu hemolizine are loc la incubarea amestecului n termostat la temperatura de 37C, 30 min.
De asemenea se efectueaz titrarea componentelor:
Titrarea serului hemolitic. Serul este titrat prin amestec 0,5 ml (n diluiile 1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200 , a.) cu 0,5 ml de 3% suspensie de
eritrocite i 0,5 ml de complement proaspt n diluia 1:10. Volumul amestecului pentru reacie n tuburile de control se aduce la 1,5 ml, adugind
0,5 ml de soluie izotonic de NaCl. Rezultatele reaciei se citesc peste l or de incubare la. temperatura de 37C. Titrul serului hemolitic este
apreciat prin diluia maxim a lui, care manifest o hemoliz deplin. Serul se pstreaz n stare liofilizat.
Titrarea complementului. Anterior de efectuarea experienei de baz soluia iniial a complementului (1:10) este repartizat n tuburi de la 0,05
ml pn la 0,5 ml i n fiecare tub volumul se completeaz cu soluie izotonic NaCl pn la 1,5 ml. Eprubetele se includ n termostat la
temperatura 37C pentru 45 min, apoi n tuburi se adaug sistemul hemolitic i din nou se menine n termostat 30 min, dup ce se apreciaz
titrul complementului.
Titrul complementului reprezint cea mai mic cantitate a acestuia, la adugarea creia n sistemul hemolititc, se nregistreaz hemoliza
complet n decurs de 1 or, la 37C. In reacie se folosete doza de lucru a complementului, care se ia urmtoarea mai mare dup titru deoarece
n experien activitatea complementului poate ss cad pe contul adsorbiei nespecifice a acestuia de ctre ali componeni ai reaciei.
Titrarea antigenului. Pentru determinarea titrului antigenului se repartizeaz n tuburi n cantiti descrescnde de la 0,5 la 0,05 ml aducnd
volumul n ele la 1 ml prin adaosul soluiei izotonice de NaCl. Apoi, n fiecare tub se adaug 0,5 ml complement n doz de lucru i se menine
n termostat l or la temperatura de 37C. Ulterior n toate tuburile se adaug cte l ml de sistem hemolitic, din nou se ncubeaz 1 or n
termostat i se citesc rezultatele reaciei Titrul antigenului se determin prin cantitatea lui minim, n prezena creia are loc hemoliza deplin, n
R.F.C. antigenul se folosete n doz de lucru, ce constituie 1/2 - 1/3 din titrul lui.
Efectuarea experienei de baz a R.F.C. Volumul total al ingredientelor reaciei este de 2,5 ml, iar volumul dozei de lucru a fiecrui din ele - 0,5
ml. n tubul l se introduce serul n diluia respectiv, antigenul si complementul, n tubul 2 - serul n diluia respectiv, complementul si soluie
izotonic de NaCl (controlul serului), n tubul 3 - antigen, complement i soluie izotonic de clorid de natriu (controlul antigenuui). Concomi-
tent se prepar sistemul hemolitic, amestecnd 2 ml de ser hemolitic n titru ntreit (n comparaie cu cel indicat pe etichet) si 3% suspensie
eritrocite de berbec (referitor la volumul iniial al sngelui). Tuburile se pstreaz n terrnostat la temperatura 37C (l or), apoi n primele 3
tuburi (sistemul nti), se adaug cte l ml de sistem hemolitic (sistemul doi). Dup o agitare minuioas a ingredientelor tuburile din nou snt
incubate n termostat (l or) la temperatura de 37C. Rezultatele reaciei se citesc n prealabil dup scoaterea tuburilor din termostat i definitiv -
dup o meninere timp de 15-18 ore n frigider sau la temperatura camerei.
Lectura: intensitatea reaciei se exprim n plusuri: (++++) - reacie evident pozitiv, se caracterizeaz prin reinerea complet a hemolizei
(lichidul n tub e incolor, toate eritrocitele se depun la fund); (+++, ++) - reacie pozitiv,' se manifest prin coloraia accentuat a lichidului n
urma hemolizei si reducerii cantitative a eritrocitelor n sediment, (+) - reacie slab pozitiv (lichidul e intens colorat, n sediment se observ o
cantitate nensemnat de eritrocite). In reacia negativ (-) se observ hemoliza complet, lichidul n tub are aspect intens roz (snge lact).
Aplicarea practic: Prin intermediul R.F.C. se determin anticorpii fixatori de complement n serul sanguin al bolnavilor de sifilis (reacia
Wassermann), morv, gonoree cronic, rickettsioze, viroze . a.
REACII DE CITOLIZ IMUN (cu participarea complementului)
Activarea fraciilor complementului (C) duce la liza particulei purttoare de Ag (hematii, bacterii, diverse celule...)
Activarea complementului: Calea clasic; Calea alternativ; Calea lectinic
Activarea C pe cale clasic
Activatorul ll constituie complexe Ag-Ac (IgG, IgM)
Consecutivitatea activrii C: Ag-Ac fixeaz fracia C1qrs, care ca capt ulterior activitate esterazic (n prezena obligatorie a Ca ++). C1 activeaz
C4, cu formarea complexului AgAcC1C4b. Este apoi activat C2 (AgAcC1C4bC2a), complexul C4bC2a devenind convertaz ce acioneaz
asupra C3. Urmeaz clivarea C3 n C3a (anafilotoxin) i C3b, care se unete de complex (AgAcC1C4bC2aC3b) , formnd C5-convertaza, care
cliveaz C5 n C5a i C5b. C5b se leag de membrana celulei-int. Urmeaz fixarea simultan a C,6,7. La final se fixeaz C8, apoi C9, formnd
complexul de atac membranar. Fixarea lor produce leziuni ireversibile liza celulei.
Calea alternativ de activare a C
Activatori: endotoxine, celule infectate cu virus, levuri, parazii, venin de cobr, agrega
agregate de IgA sau IgE.
IgE. C1,4 i 2 nu intervin i reacia ncepe
cu C3. Properdina, factorul B i ionii de Mg++ sunt obligatorii n procesul de activare pe cale alternativ.
Calea lectinic de activare a C este determinat de legarea unor lectine pe unele grupri de manoz, carbohidrat prezent n componena multor
mi/o i absent la ma/o. Lectina este echivalent fraciei C1q. Alte 2 molecule se asociaz, formnd o enzim similar C1, ceea ce duce la
formarea complexului C4bC2a (C3-convertaza) Componentele reaciilor de liz: Ag (celule bacteriene, hematii, etc). Ac (lizine - IgG i IgM);
Complement ser proaspt de cobai sau ser de cobai liofilizat
Reacia de bacterioliz (RBL). Ag suspensie de bacterii vii (vibrioni, leptospire...); Ac serul imun sau serul bolnavului; Complement
RBL in vitro: Se efectueaz diluia succesiv a serului; Se adaog suspensie microbian vie; Se adaog complement (martor: Ag+ser
fiziologic+C); Incubare 2 h la 3737C; Rensmnare pe cutii cu geloz cte 0,1 ml din fiecare diluie (24h 37 37 C). Lectura se compar nr
coloniilor crescute din martor i probele studiate. Titrul cea mai mare diluie a serului n care au fost lizate cel puin 50% din celule
RBL in vivo: Amestecul dintre Ag i Ac se inoculeaz intra-peritoneal la animale de laborator (ex.: oareci albi); Peste fiecare 10 min, timp de o
or, se extrage lichidul peritoneal, se pregtete un preparat nativ i se examineaz pe fond negru sau cu contrast de faz. Rezultat pozitiv
numrul bacteriilor scade treptat pn la dispariie. Utilizarea RBL diagnosticul holerei (RVL), leptospirozelor (RALL)

37
Reacia de hemoliz (RHL): Ag hematii de berbec, suspensie de 3%; Ac ser imun de iepure anti-hematii de berbec (serul hemolitic)
Complement: Principiul reaciei:
reaciei: complexele Ag-Ac formate fixeaz C i-l activeaz pe cale clasic, provocnd hemoliza. Intensitatea
hemolizei se apreciaz vizual (++++) sau prin msurarea densitii optice a hemoglobinei eliberate. Utilizarea practic a RHL:RHL: pentru dozarea C,
precum i n montarea reaciei de fixare a complementului.
REACIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI (RFC). Este o reacie complex, constituit din 2 sisteme Ag-Ac i cu participarea C. n
RFC particip Ig capabile s fixeze C IgM i IgG. RFC se utilizeaz n diagnosticul virozelor, infeciilor bacteriene, etc Toate componentele
RFC sunt utilizate n acelai volum fiind titrate n prealabil pentru aprecierea dozelor de lucru. Reacia este nsoit de martori ai tuturor
componenilor
Reacia se efectueaz n 2 etape utiliznd 2 sisteme.
I etap Sistemul de baz este constituit din Ag1 (diagnosticuri sau Ag necunoscute), Ac1 (serul bolnavului sau serul imun) i complement
n doza de lucru. Amestecul este incubat 1h la 37
37 C sau meninut 16-18 ore la 4
4 C. Dac Ac se combin cu Ag omolog va avea loc i
fixarea C (efect frecvent invizibil).
II etap la sistemul de baz se adaog sistemul indicator (hemolitic), constituit din hematii de berbec (Ag2) combinate cu Ac specifici
(Ac2). Peste 1h incubare la 37
37 C reacia este terminat.
Evaluarea rezultatelor dac complementul a fost fixat de primul sistem Ag-Ac hemoliza nu se observ (rezultat pozitiv). Dac Ag1 nu
corespunde cu Ac1, complementul rmne disponibil pentru fixare pe sistemul indicator Ag2-Ac2, provocnd hemoliza (rezultat negativ)
Complement Fixation

75. Reactia de fixare a complementului (RFC) cu scop de seroidentificare. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea
rezultatelor reactiei. Aplicarea practica.

76. Reactia de imunofluorescenta (RIF, reactia Coons) directa. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea rezultatelor
reactiei. Aplicarea practica.
Marcanii utilizai uzual: fluorocromi(rodamina, fluoresceina), care emit respectiv o lumin rou-oranj sau verde-galben la tratarea lor cu raze
UV.
Reacia de imunofluorescenta direct este folosit numai n scop de seroidentificare. Din materialul ce conine Ag (material nativ, cultura
pur, biopsie tisular) se prepar un frotiu, peste care se aplic serul imun specific cu Ac marcai cu fluorocrom. Peste 20 min de incubare ntr-o
camer umed, preparatul este studiat la microscopul luminescent. n caz de reacie pozitiv se observ luminiscen local.
Inconvinient:necesitatea de a avea seruri imune marcate specifice ptr fiecare Ag.
Are la baz folosirea fluorocromilor, chimic conjugai cu anticorpii. Anticorpii marcai i pstreaz specificitatea imunologic si reacioneaz
strict cu anumite antigene. Complexele antigenelor cu anticorpii marcai se evideniaz uor dup intensitatea de luminiscen galben-verzuie la
studierea frotiului n microscopul luminiscent.
R.I.F. direct prevede folosirea serurilor imunofluorescente fa de fiecare antigen examinat.
R.I.F. poate fi aplicat pentru examinarea diferitor antigene: culturi de bacterii, ciuperci, protozoare; frotiuri din materialul bolnavului; celulelor
infectate, seciuni de esut . a. Materialul de examinat se aplic pe lam i se fixeaz (deseori n aceton (10 min) la temperatura camerei), apoi
ss usuc 20 min la temperatura de 37C. Prelucrarea preparatelor n continuare depinde de varianta R.I.F. folosite.
Preparatul n R.i.F. direct se coloreaz cu antiser specific marcat n camer umed 30 min la temperatura 25C, apoi se spal cu soluie tampon
(pH 7,2) 10 min a temperatura de 25C.
Pentru a evita rezultate fals-pozitive reacia este nsoit de un ir de controluri, printre care un rol deosebit i revine controlului cu antigen
eterogen (de exemplu, cu cultura bacterian ce nu corespunde anti-genic antiserului folosit). La studierea culturilor celulare infectate se folosete
obligatoriu controlul cu cultura normal neinfectat (pentru excluderea autofluorescenei i fixarea nespecific a anticorpilor marcai de suprafaa
celulelor). Pentru a frna autofluorescena preparatelor poate fi folosit albumina bovin, marcat cu sulfarodamin.
Reacia de imunofluorescena, pstrnd specificitatea reaciilor imunologice, se caracterizeaz prin simplitatea i rapiditatea execut rii. Totodat
R.I.F. nu poate fi calificat ca reacie extrem de sensibil. Deasemenea, nu se exclude posibilitatea de adsorbie nespecific a anticorpilor marcai
pe preparat cu apariia rezultatelor pseudopozitive.
Tehnici serologice cu utilizarea Ac marcai
n unele cazuri este imposibil de a detecta o reacie Ag-Ac: unii Ac nu precipiteaz, alii nici nu precipiteaz, nici nu aglutineaz, exist
complexe Ag-Ac care nu fixeaz C. n aceste cazuri pot fi utilizai Ac marcai pentru a vizualiza Ag respectiv. Conjugarea Ac cu marcani nu
afecteaz proprietile lor imunologice.
Aceste reacii se monteaz pe suport solid (lam, plci din plastic)
Marcanii utilizai uzual:
Fluorocromi (rodamina, fluoresceina), care emit respectiv o lumin rou-oranj sau verde-galben la tratarea lor cu raze UV (Reacia de Imuno-
Fluorescen)
Enzime (fosfataza alcalin, peroxidaza), capabile s modifice culoarea unui substrat (Reacia Imuno-enzimatic)
Radio-izotopi (125J sau 3H), care emit respectiv raze gamma i beta (Analiza Radio-Imun)
Reacia de imunofluorescen (RIF, reacia COONS)
Metoda direct (numai n scop de seroidentificare). Din materialul ce conine Ag (material nativ, cultur pur, biopsie tisular) se prepar un
frotiu, peste care se aplic serul imun specific cu Ac marcai cu fluorocrom. Peste 20 min de incubare ntr-o camer umed preparatul este studiat
la microscopul luminiscent. n caz de reacie pozitiv se observ luminiscen local. Inconvenient necesitatea de a avea seruri imune marcate
specifice pentru fiecare Ag.
Metoda indirect.
indirect. Poate fi utilizat pentru sero-identificare i sero-diagnostic.
Pe frotiul ce conine Ag se aplic Ac corespunztori nemarcai. Peste 20 min se spal minuios preparatul, apoi se adaog anti-Ig fluorescent,
care se va combina cu Ac din complex. Acest reactiv poate fi utilizat n numeroase reacii.
Anti-Ig se obine prin imunizarea iepurilor (sau altor animale) cu Ig.
Tehnica fondat pe fixarea C: Markerul fluorescent este un ser anti-complement care se va lega de complementul fixat pe complexul Ag-Ac.
RIF se utilizeaz pentru identificarea rapid a Ag din biosubstrate sau pentru serodiagnostic.
Reacia Imuno-Enzimatic (RIE, ELISA -Enzyme -Enzyme Linked Immunosorbent Assays).
ssays).
RIE direct (metoda sandwich). Utilizat doar n sero-identificarea Ag. n godeurile din placa de polistiren n care sunt fixai Ac cunoscui se
toarn soluia de Ag necunoscut. Se incubeaz 1h. Dup o splare minuioas a godeurilor se adaog Ac marcai cu enzime, care se fixeaz pe
epitopii liberi ai Ag polivalent. Dup incubare de 30 min-1h se spal iari godeurile. Prezena complexului Ac-Ag-Ac-marcat se depisteaz cu
ajutorul substratului cromogen (substan iniial incolor, dar care se coloreaz sub aciunea enzimei, ex. apa oxigenata si orthofenilendiamina).

38
RIE indirect. Utilizat n serodiagnostic.
serodiagnostic. Ag cunoscut este fixat la fundul godeurilor. Ac (serul testat) se ntroduce n godeu, dup 1h se spal
totul i se adaog ligandul marcat cu enzim (anti-Ig sau proteina A cuplate cu enzim). Acest ligand se fixeaz pe Ac testai. Se adaog apoi
substratul cromogen. Cantitatea de Ac se msoar dup densitatea optic a lichidului din godeuri.
Tehnica imunoblot (western blot) permite identificarea Ag dintr-un amestec.
amestec.
I etap electroforeza n gel a probei de Ag
II etap transferul electric al Ag pe membrana de nitroceluloz
III etap pe membran sunt aplicai succesiv Ac dirijai contra Ag, apoi conjugatul marcat cu enzim, care permite depistarea Ac fixai.
Dup o splare se adaog substratul cromogen. Fiecare complex Ag-Ac formeaz zone colorate distincte. Utilizare:Utilizare: depistarea Ac anti-HIV,
caracterizarea Ac monoclonali...
Proteinele sunt separate electroforetic n gel poliacrilamid. Sub aciunea cmpului electric are loc difuzia proteinelor conform greutii
moleculare, aranjndu-se n zone liniare subiri diferite: mai aproape de start se aranjeaz proteinele cu mas molecular mare (120-150
kDa), la final se aranjeaz proteinele cu mas molecular mic (5-10kDa). Apoi lamela de gel este transferat pe o foaie de nitroceluloz
amplasat ntre electrozii unei surse de curent continuu. Sub aciunea cmpului electric are loc trecerea proteinelor din gel pe nitroceluloz,
unde se fixeaz foarte bine pe hrtie. Proteinele fixate sunt marcate cu o enzim (e.g. alkaline phosphatase sau peroxidase) incolor.
Procedura ulterioar de montare a reaciei este similar tehnicii ELISA.
Analiza radioimun (ARI). Principiul este identic cu cel al RIE. Ag se fixeaz la fundul godeurilor din placa de plastic. Se adaog Ac testai
care se vor combina cu Ag omolog. Dup splarea godeurilor, se adau adaug un ligand radiomarcat (anti-Ig). Dup eliminarea excesului de izotopi
prin splare, se msoar radio-activitatea: ea este proporional cu concentraia Ac dozai.

77. Reactia de imunofluorescenta (RIF, reactia Coons) indirecta. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea rezultatelor
reactiei. Aplicarea practica.
RIF indirect poate fi utilizat ptr seroidentificare i serodiagnostic. pe frotiul ce conine Ag se aplic Ac corespunztori nemarcai. Peste 20
min se spal minuios preparatul, apoi se adaug anti- Ig fluorescent, care se va combina cu Ac din complex. Acest reactiv poate fi utilizat n
numeroase reacii. Anti-Ig se obine prin imunizarea iepurilor(sau altor animale) cu Ig umoane.
R.I.F. indirect are la baz folosirea a dou antiseruri diferite. La nceput se aplic anticorpii nemarcai fa de antigenul studiat, iar n etapa a
doua a reaciei complexul format antigen-anticorp este prelucrat cu antiser marcat cu F.I.T.C (fluresceinizotiocianat., ce conine anticorpi contra
gama-globulinelor acelui animal, de la care s-au obinut antiserurile folosite n prima etap a reaciei (ser antigen de specie).
De exemplu, n caz c antiserul folosit n prima etap a fost obinut prin imunizarea iepurilor, n etapa a doua se folosete serul antispecie fa de
iepure obinut prin imunizarea mgarilor sau a altor animale cu gama-globulin de iepure, n acest caz anticorpii antiglobuliniti marcai acoper
cu un al doilea strat antigenul examinat (primul strat, datorit anticopilor nemarcai, care la rndul lor servesc ca antigene pentru serul
antiglobulin (antispecie). Prin urmare, antigenul devine vizibil n microscopul luminiscent, Valoarea R.I.F. indirecte i anticomplementare
const n folosirea unui singur ser luminiscent (de antispecie i corespunztor anticomplementar) pentru studierea diferitor antigene, ceea ce
evident simplific reacia. Materialul de examinat se aplic pe lam i se fixeaz (deseori n aceton (10 min) la temperatura camerei), apoi ss
usuc 20 min la temperatura de 37C. Prelucrarea preparatelor n continuare depinde de varianta R.I.F. folosite.
In R.I.F. indirect preparatul a nceput se prelucreaz cu antiser specific nemarcat n camer umed (30 min), la temperatura 25C, ulterior se
spal cu soluie tampon (ca i Ia R.I.F. direct). In continuare preparatul se coloreaz cu ser antispecie marcat n camera umed (30 min). la
temperatura 25C i se spal cu soluie tampon.
Pentru a evita rezultate fals-pozitive reacia este nsoit de un ir de controluri, printre care un rol deosebit i revine controlului cu antigen
eterogen (de exemplu, cu cultura bacterian ce nu corespunde anti-genic antiserului folosit). La studierea culturilor celulare infectate se folosete
obligatoriu controlul cu cultura normal neinfectat (pentru excluderea autofluorescenei i fixarea nespecific a anticorpilor marcai de suprafaa
celulelor). Pentru a frna autofluorescena preparatelor poate fi folosit albumina bovin, marcat cu sulfarodamin.
Reacia de imunofluorescena, pstrnd specificitatea reaciilor imunologice, se caracterizeaz prin simplitatea i rapiditatea execut rii. Varianta
R.I.F. indirect poate fi folosit nu numai pentru studierea antigenelor, ct i la determinarea cantitii de anticorpi n serul imun. Totodat R.I.F.
nu poate fi calificat ca reacie extrem de sensibil. Deasemenea, nu se exclude posibilitatea de adsorbie nespecific a anticorpilor marcai pe
preparat cu apariia rezultatelor pseudopozitive.

78. Reactia imunoenzimatica (RIE, ELISA) directa (tehnica sandwich). Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea
rezultatelor reactiei. Aplicarea practica.

RIE reprezint o interaciune a Ag cu Ac care este asociat cu o enzim. Complexul format capt o activitate enzimatic i scindeaz substratul
respectiv, exterioriznd efectul de coloraie pregnant.
RIE direct aprecizeaz prezena Ag prin intermediul Ac. cantitatea de enzim fixat de substrat corespunde cantitii de Ag.
componentele: Ag, Ac, enzima (peroxidaza de hrean sau fosfataza bazic)
RIE direct (metoda sandwich) este utilizat doar n sero-identificarea Ag. n godeurile din placa de polistiren n care sunt fixai Ac cunoscui se
toarn soluia de Ag necunoscui. se incurbeaza pe 1 or. dup splare minuioas a godeurilor se adaug Ac marcai cu enzime, care se fixeaz
pe epitopii liberi ai Ag polivalent. Dup incurbare de 30 min.-1 or se spal iari godeurile. Prezena complexului Ac-Ag-Ac-marcat se
depisteaz cu ajutorul substratului cromogen (substan iniial incolorp,dar care se coloreaz sub aciunea enzimei,ex. apa oxigenat i
orthofenilendiamina).
rezultatele reaciei se areciaz vizual sau instrumental. la citirea vizual se determin diluia maxim a materialului de examinat, n care
intensitatea coloraiei este mai pronunat fa de cea de control (albumina seric bovin).la citirea rezultatelor cu spectrofotometrul ca pozitiv
se consider diluia maxim a materialului examinat, unde nivelul extinciei prevaleaz cel puin de 2 ori nivelul extinciei din diluia respectiv
a componentului eterolog al reaciei. Aplicarea practic: pot fi detectai Ag n diferite afeciuni umane.

79. Reactia imunoenzimatica (RIE, ELISA) indirecta. Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea rezultatelor reactiei.
Aplicarea practica.
RIE indirect este utilizat n serodiagnostic.
Ag cunoscut este fixat la fundul godeurilor. Ac(serul testat) se introduce n godeu, dup 1h se spal totul i se adaug ligandul marcat cu
enzim(anti-Ig sau proteina A cuplate cu enzim). Acest ligand se fixeaz pe Ac testai. se adaug apoi substana cromogen. Cantitatea de Ac se
msoar dup densitatea optic a lichidului din godeuri.
Metoda indirect detecteaz anticorpul. Antigenul de referin, fixat pe suprafaa de polistiren, este incubat cu serul testat, apoi cu anticorpi
antiimunoglobulin marcai cu enzim. Dup fiecare etap, reactivii necuplai sunt ndeprtai prin splarea suportului, n final se adaug
substratul cromogen, iar culoarea dezvoltat in interval de 30 minute este msurat (figura 10.12, a).

39
 Metoda competitiv detecteaz de asemenea anticorpi. Anticorpul din serul testat i anticorpul omolog monoclonal marcat cu peroxidaza din
hrean, pipetai n ordinea enunat, intr n competiie pentru antigenul fixat pe suprafaa de polistiren. Anticorpii necuplai sunt ndeprtai prin
splare, apoi este adugat substratul cromogen pentru testarea enzimei restante pe suprafaa de reacie. Intensitatea culorii, msurat dup
stoparea reaciei la 30 minute, deci activitatea enzimei de marcaj este invers proporional cu concentraia anticorpului din serul pacientului
testat.

80. Reactiile de hemaglutinare (RHA) si de inhibare a hemaglutinarii (RIHA). Componentele, mecanismul. Lectura si aprecierea
rezultatelor reactiilor. Aplicarea practica.
In practica de laborator se ntrebuineaz dou tipuri de reacii de hemaglutinare (RHA), care se deosebesc dup mecanismul de aciune.
Prima RHA face parte din reaciile serologice. In aceast reacie eritrocitele se aglutineaz la interaciunea cu anticorpi corespunztori
(hemaglutinine). Aceast reacie se aplic pe larg pentru determinarea grupelor de snge.
A doua RHA nu este serologic. In aceast reacie aglutinarea eritrocitelor e condiionat nu de anticorpi, ci de substane deosebite, formate n
cazul infeciei virotice. De exemplu, virusul gripei aglutineaz eritrocitele de gin i cobai, iar virusul poliomielitei eritrocitele de berbec.
Aceast reacie permite de a constata prezena unui sau altui virus n materialul de cercetat.
Metodica. Reacia se efectueaz n eprubete sau pe plci speciale cu adncituri. Materialul de cercetat se dilueaz n soluie izotonic de la 1:10
pn la 1:1280; 0,5 ml din fiecare diluie se amestec cu volum egal de suspensie de l2% de eritrocite. In control, 0,5 ml suspensie de eritrocite
se amestec cu 0,5 ml de soluie izotonic Eprubetele se amplaseaz n termostat pe 30 min, iar plcile se in la temperatura camerei timp de 45
min.
Evidena rezultatelor. In cazul rezultatului pozitiv al reaciei, pe fundul eprubetei sau al adnciturii din plac se formeaz sediment de eritrocite n
form de umbrel, care astup tot fundul. In cazul rezultatului negativ, eritrocitele formeaz un sediment compact cu margini netede, care se
aseamn cu un nasture. Sediment asemntor se formeaz i n control. Intensitatea reaciei se indic cu ajutorul semnului plus. Titrul
virusului indic diluia maxim a materialului, n care mai are loc aglutinarea.
Reacia de inhibare a hemaglutinrii. Aceasta reprezint o reacie serologic, n care anticorpii antivirotici specifici, interacionnd cu virusul
(antigenul), asigur neutralizarea acestuia i exclud capacitatea de a aglutina eritrocite, adic inhib reacia de hemaglutinare. Specificitatea
nalt a reaciei de inhibare a hem aglutinrii (RIHA) permite de a determina, cu ajutorul ei specia i chiar tipul de virusuri nregistrate n timpul
RHA
Metodica. 0,25 ml de ser antiviral se dilueaz consecutiv de h; 1:10 pn la 1:2560 i se amestec cu volume egale de material ci conine virus i
este diluat de 4 ori n comparaie cu titrul determina prin RHA. Amestecul se agit i se termostateaz 30 min, dup cars se adaug cile 0,5 ml
suspensie de l2% de eritrocite. Reacia e nsoit de 3 controale. Evidena rezultatelor se efectueaz dup incubarea repetata i termostat, n
decurs de 30 min, sau meninerea timp de 45 min 1; temperatura camerei. La pregtirea corect a experienei, n controlu serului i eritrocitelor
trebuie s se formeze nasturele, deci lipseti factorul ce condiioneaz aglutinarea eritrocitelor, iar n controlul anti genului se formeaz
umbrela, deci virusul a dus la aglutinare; eritrocitelor. In experien, dac serul este omolog cu virusul cercetat. s< formeaz nasturele, deci
serul a neutralizat virusul, n acest caz titrul serului reprezint diluia maxim, n care se mai nregistreaz inhibarea hemaglutinrii.

81. Infectiile stafilococice. Clasificarea stafilococilor (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Habitatul, infectiile cauzate.
Diagnosticul microbiologic. Prelevatele. Metoda microscopica, izolarea si identificarea culturii pure. Markerii epidemiologici. Profilaxia
si tratamentul specific al infectiilor stafilococice.
CARACTERISTICA GENERAL A GRUPULUI COCILOR PIOGENI
Familia Staphylococcaceae
Genuri: Staphylococcus; Gamella; Macrococcus; Salinicoccus
Familia Streptococcaceae
Genuri: Streptococcus; Lactococcus
Familia Neisseriaceae
Genul: Neisseria
Caracter comun capacitatea de a condiiona procese supurative-distructive.
Morfologic reprezint coci (sferici, lanceolai, riniformi), imobili, nesporogeni, unele specii formeaz capsule.
n funcie de caracterele tinctoriale se disting: Coci G+ (Staphylococcaceae, Streptococcaceae); Coci G- (Neisseriaceae)
Cocii piogeni se deosebesc prin: Caractere de cultur (exigene nutritive, tipul de respiraie, etc); Caractere biochimice; Factori de patogenitate
Rolul n patologia uman: Infecii nespecifice ; Infecii specifice (gonoreea, scarlatina, etc)
GENUL STAPHYLOCOCCUS
Se disting 2 grupuri (varieti):
Stafilococi coagulazo-pozitivi - SCP foarte viruleni (S.aureus, S.intermedius)
Stafilococi coagulazo-negativi SCN potenial-patogeni (aproximativ 30 specii: S.epidermidis, S. saprophyticus, S. capitis,
S.haemolyticus, S.hominis, etc)
Habitat: 20-70% din populaie sunt purttori: S.aureus - cavitatea nazal, intestin, S.epidermidis narine, tegument, S.saprophyticus - tegument.
Staphylococcus aureus
Caracterele morfobiologice: Caractere morfo-tinctoriale: coci gram+, n frotiu se aranjeaz n grmezi neregulate (greac: staphylos-ciorchine,
kokkos grunte), n perechi sau izolat . Imobili, nesporogeni, necapsulai (uneori microcapsule)
Caractere de cultur: facultativ anaerobi, nepretenioi la cultivare, cresc pe medii uzuale. Temperatura optima 37C, pH-7,07,5.
n BP turbiditate uniform
Geloza salin cu glbenu de ou-GGO (3 % NaCl)
Mediul Chapman (7,5 % NaCl, manitol)
Geloz-snge
Colonii S, opace, pigmentate (auriu, citric, alb), pe geloz-snge cauzeaz hemoliz. Pe GGO coloniile sunt nconjurate cu un halou opac
(aciunea lecitinazei).
Caractere biochimice: catalazo-pozitivi, fermenteaz manitolul

Factori de patogenitate
I. Factori structurali:
peptidoglicanul (induce secreia citokinelor de ctre celulele limfocitare, responsabile de starea de oc)
acizii lipoteichoici (induc o hipersensibilitate tardiv)
proteina A (asigur fixarea Fc al IgG, mpiedic opsonizarea i fagocitoza)
40
 adezine, care permit fixarea S.aureus pe diverse molecule plasmatice ale gazdei:
Fibronectin i laminin. Fibronectina este prezent pe suprafee epiteliale i endoteliale, precum i n chiaguri sanguine.
Fibrinogen. Fixarea de fibrinogen asigur aderarea la chiaguri i esuturi lezate.
Colagen. Tulpinile ce posed astfel de adezine cauzeaz osteomielite i artrite septice
Microcapsula, rol antifagocitar
II. Toxine
1. Alfa-toxina (alfa-hemolizina). Efect citolitic fa de trombocite, monocite, hematii, cu eliminarea citokinelor, care pot fi cauza ocului
septic stafilococic.
2. Beta-toxina (sfingomielinaza). Prezent la tulpinile izolate de la bovine cu mastit.
3. Gamma i delta-toxine. Efect leuco- i hemolitic.
4. Leucocidina, efect litic fa de leucocite i macrofage, factor important n procese dermonecrotice
5. Exfoliatine (epidermolizine) A i B. Manifest tropism cutanat.
6. Mecanism: se fixeaz de unele proteine cutanate (profilagrin i filagrin), inducnd desprinderea intra-epidermic dintre stratum
granulosum i stratum spinosum, cu formarea leziunilor buloase (impetigo bulos, sindromul pielii oprite).
7. Enterotoxine: A, B, C1, C2, C3, D, E, G. Termostabile, rezistente la aciunea enzimelor proteolitice ale tubului digestiv. Determin
intoxicaii alimentare (enterotoxina B poate cauza oc toxic).
8. Toxina sindromului toxic stafilococic (TSST-1). Determin stare de oc stafilococic.
Toate toxinele sunt imunogene.
Enterotoxinele, TSST-1 reprezint superantigene, activnd 20% de limfocite T (particip la declanarea strii de oc)
III. Coagulazele
Coagulaza liber - protein extracelular care se leag de protrombina gazdei cu formarea unui complex. Astfel activat, trombina determin
conversia fibrinogenului n fibrin cu coagularea plasmei. Reprezint cauza tromboflebitelor septice i protejeaz cocii de fagocitoz.
Coagulaza legat (clumping factor) este un determinant superficial al S.aureus fixator de fibrinogen. Antifagocitar. Provoac fenomenul de
aglutinare a stafilococilor n prezena fibrinogenului.
IV. Stafilokinaza (fibrinolizina) activator al plasminogenului (asociat cu bacteriofagi lizogeni). Complexul stafilokinaz-plasminogen
manifest activitate proteolitic, cauznd dizolvarea trombilor (responsabil de localizri septice secundare).
V. Enzime de patogenitate:
Hialuronidaza faciliteaz diseminarea bacteriilor
Alte enzime: proteaze, lipaze (inclusiv lecitinaza), ADN-aze, fosfataze, etc.
Rol n diseminarea infeciei i producerea leziunilor.

Se disting multiple serotipuri de S.aureus, iar receptorii pentru bacteriofagi permit clasificarea n lizotipuri (fago-variante).

Epidemiologia infeciilor stafilococice

Sursa de infecie: omul bolnav sau purttori sntoi de germeni.
Rareori bovinele bolnave de mastit.
Mecanismele i cile de transmitere:
Contact direct sau diseminare manuportat
Contact indirect (alimente, praf, mbrcminte, etc)
Factori favorizani: diabet, tratament imunosupresiv, arsuri, plgi, etc

Formele clinice ale infeciilor cu S.aureus

Infecii supurative
Infecii cutanate: foliculite, furuncule, carbuncule, abcese, panariiu, infecie de plag (frecvent de origine nosocomial). Exfoliatina determin
sindromul pielii oprite (sindromul Lyel) la copii, pemfigus epidemic la nou-nscui (boala Ritter) i impetigo bulos la maturi.
Infecii ale mucoaselor: mastoidite, sinusite, otite, angine...
Infecii ale seroaselor: artrite, pleurezie, peritonit, meningit...
Infecii osoase: osteomielit, spondilodiscit, infecie de protez
Infecii viscerale: abces pulmonar, cerebral, flegmon perirenal, pielonefrite, etc
Septicemii i endocardite. Cauzate i ntreinute de un focar infecios primar complicat de tromboflebit. n mediu spitalicesc au caracter
nosocomial (catetere intravasculare, proteze valvulare cardiace, articulare, stimulatoare cardiace...)
Manifestri digestive
Intoxicaii alimentare (doza toxic - 1g la 100 g aliment). Vome, diaree, deshidratare, absena febrei
Enterocolite consecutive unei antibioterapii
Sindromul ocului toxic stafilococic: febr, hipotensiune arterial, erupie cutanat scarlatiniform, stare de oc, leziuni viscerale (cerebrale,
renale, hepatice, musculare). Descris n 1978 n SUA la femei care utilizau tampoane periodice i sufereau de vaginit cu S. aureus. Tulpini
responsabile de acest sindrom pot fi izolate din diverse leziuni stafilococice.

Infecii cauzate de SCN

S.epidermidis determin infecii asociate cu proteze i catetere, frecvent de origine nosocomial (endocardite, endoftalmii, peritonite la pacieni
cu dializ peritoneal, bacteriemii). S.epidermidis produce un polizaharid de adeziune, care-l fixeaz pe implante din plastic.
S.saprophyticus i S.haemolyticus pot cauza infecii ale tractului urinar
S.lugdunensis infecii de plag, endocardite
Imunitatea antistafilococic este mixt: celular i umoral
Diagnostic de laborator
Materiale de examinat n funcie de forma clinic
Diagnostic direct:
Examen microscopic direct (Gram, RIF)
Examen bacteriologic. La interpretare se ine cont de datele clinice. n caz de infecii nosocomiale sau otrvire alimentar se identific
markerii epidemiologici (lizotip, serotip, antibiotip). Determinarea antibiogramei este obligatorie (tulpini multirezistente).
Identificarea acizilor nucleici prin tehnici de biologie molecular

41
 n cazuri particulare se caut prezena toxinelor (reacia de latex-aglutinare, ELISA)
Diagnostic indirect (serologic): Se examineaz seruri sanguine pentru depistarea anticorpilor anti-stafilolizine-alfa (titru> 2 UI/ml) n caz de
infecii profunde sau cronice, sau anti-acizi teichoici (titru> 1:16) n caz de endocardite sau focare inaccesibile.
Tratamentul specific al infeciilor stafilococice: autovaccinuri, vaccinuri inactivate, seruri imune (n infecii cronice)
Antibiotice: peniciline semi-sintetice (oxacilin), augmentin, imipenem, aminoside, macrolide, fluorochinolone, glicopeptide (vancomicin,
teicoplanin) cotrimoxazol, fosfomicin, rifampicin, acidul fuzidic, etc
Profilaxia specific: plasm antistafilococic, Ig anti-stafilococic, ser hiperimun, anatoxin stafilococic

82. Infectiile streptococice. Clasificarea streptococilor (familie, gen, sp.). Clasificarea dupa aspectul hemolizei si structurii
antigenice. Factorii de patogenitate (structurali,exotoxinele, enzimele de patogenitate). Infectiile cauzate de S.pyogenes. Diagnosticul
microbiologic. Prelevate patologice. Metoda microscopica, izolarea culturii pure, identificarea. Serodiagnosticul scarlatinei si
reumatismului.

FAMILIA STREPTOCOCCACEAE: Genul Streptococcus (fragili i exigeni la cultivare); Genul Lactococcus (anterior streptococi din grupul
N)
Genul Streptococcus. Reunete specii facultativ anaerobe caracterizate prin morfologie tipic (coci gram+ n lanuri, imobili, nesporogeni,
capsulai), metabolism fermentativ i lipsa catalazei.
Clasificarea streptococilor
Dup aspectul hemolizei pe geloz-snge
Streptococi beta-hemolitici (hemoliz complet, zon clar n jurul coloniilor)
Streptococi alfa-hemolitici (hemoliz incomplet, zon verzuie n jurul coloniilor)
Streptococi nehemolitici (gamma-hemoliz)
Clasificarea imunologic Lancefield
Dup antigenul polizaharidic C din peretele celular se disting 20 grupe serologice (A H, K W). Streptococii care nu posed acest Ag nu se
ncadreaz n clasificarea Lancefield (ex.: S.pneumoniae). Ei se identific dup caractere de cultur i biochimice.
Dup habitat i patogenitate
Streptococi piogeni, viruleni, beta-hemolitici (aparin grupurilor A,B,C,G)
Streptococi orali, comensali, nehemolitici sau alfa-hemolitici, negrupabili dup Lancefield
Streptococi fecali, specii comensale sau condiionat patogene ale tractului digestiv uman i animal
Streptococi lactici, reprezint flora laptelui i produselor lactate
Diferenierea streptococilor patogeni de cei saprofii se efectueaz de asemenea n baza criteriilor Cherman:
Creterea la 10 i 45 C
Creterea n bulion cu 6,5% NaCl
Creterea n mediu cu pH 9,6
Hidroliza esculinei pe mediu cu 40% bil
Liza culturii n bulion biliat
Sensibilitatea la bacitracin i optochin
Hidroliza hipuratului de sodiu
Streptococcus pyogenes (gr. A). Bacterie strict uman, posibil portaj oro- i nasofaringean (20%).
Caractere morfologice: lanuri scurte sau perechi de coci sferici gram+, imobili, capsulai, nesporogeni.
Caractere de cultur: facultativ-anaerobi, cultiv pe medii elective. Pe geloz-snge, dup 18-24 ore incubare la 37 C colonii S mici, cu
zon de -hemoliz. n bulion glucozat, bulion-ser formeaz depozit la fundul i pe pereii tubului. S.pyogenes este sensibil la bacitracin.
Factori de patogenitate. Factori de structur: Capsula din acid hialuronic, neimunogen. Efect antifagocitar
Proteina M, adeziune, antifagocitar. Acizii lipoteichoici, adeziune la celule epiteliale. Proteina F, receptor de fibronectin
Toxine: Streptolizinele O (oxigen-labil) i S (oxigen-stabil). Sunt toxine citolitice. SLO manifest efect cardiotoxic, hemolitic. Inhib
chimiotactismul PMN i reduce activitatea celulelor imunocompetente. Induce formarea Ac neutralizani antistreptolizine (ASLO). SLS nu este
imunogen. Manifest activitate citolitic i leucotoxic.
Toxinele eritrogene (pirogene) A, B i C sunt determinate de fagi moderai. Au activitate de superantigen, producnd inflamaie asociat cu stare
de oc. Mitogene i imunosupresive. Tulpinile lizogene determin scarlatina.
Enzime de patogenitate: hialuronidaza, streptodornaza B (ADNaza), lipoproteinaza, streptokinaza (fibrinolizina)
Epidemiologia infeciilor provocate de S.pyogenes
Sursa de infecie: bolnavii i purttorii sntoi (faringe i amigdale, mai rar anus, vagin, tegument).
Mecanismele i cile de transmitere: Aerogen (picturi Pflugge); Contact direct (leziuni cutanate)
Patogenia i formele clinice ale infeciilor provocate de S.pyogenes
Infecii ale mucoaselor. Sfera ORL: rinite, faringite, angine eritematoase (risc de reumatism articular acut), abcese periamigdaliene, adenite
cervicale, sinusite, otite, mastoidite.
Scarlatina (angin streptococic nsoit de erupie cutanat).
Infecii cutanate i subcutanate: erizipel, impetigo, celulit, fasciit necrozant, mionecroz (sindromul Meleney), eritemul nodos, infecii ale
plgilor i arsurilor
Septicemii. Sindromul ocului toxic streptococic, secundar unei infecii locale, n special subcutanat
Alte infecii: endometrite, pneumonii
Infecii post-streptococice. RAA (reumatismul articular acut), mai frecvent la copii de vrst colar. Apare dup infecii faringiene i este
determinat de aciunea direct a streptolizinei, depozite de complexe imune (RHS III), precum i prin interaciunea autoAc i al Ac anti-
streptococici cu autoantigene din miofibrile, valvule cardice i sinoviale (RHS II). Glomerulonefrita acut (GNA)- Maladie a copilului de vrst
precolar. Survine dup 10-20 zile de la o infecie cutanat, mai rar faringean. Se caracterizeaz prin perturbarea funciei renale, edem i
hipertensiune arterial. Patogenie: efect toxic direct, reacii autoimune, bazate pe asemnarea unor Ag streptococice din MCP i membrana
bazal glomerular (RHS II i III), persistena formelor L.
Imunitatea antistreptococic este specific de tip, asigurat de Ac anti-proteina M. Ac anti-eritrotoxin protejeaz de eritemul scarlatinos.

83. Infectiile pneumococice. Clasificarea agentului (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Infectiile cauzate. Diagnosticul
microbiologic. Prelevatele. Microscopia directa, izolarea si identificarea culturii pure, diferentierea de S.pyogenes. Profilaxia specifica a
infectiilor pneumococice.

42
Streptococii negrupabili (lipsii de antigene de perete)
Streptococcus pneumoniae (prezent pe mucoasele omului i ale unor mamifere, n special n nasofaringe)
Ali streptococi negrupabili (S.mitis, S.mutans, S.oralis, S.sanguis). Prezeni n cavitatea bucal, joac rol n geneza cariei dentare, n infecii
materno-fetale, bacteriemii i endocardite
Streptococcus pneumoniae
Caractere morfo-tinctoriale: diplococi ovoizi sau lanceolai, gram+, imobili, nesporogeni, capsulai.
Caractere de cultur: cultiv pe medii elective (geloz-snge, geloz-ser, bulion-ser), pH optimal 7,8. Pe geloz-snge, peste 18-24 ore de
incubare la 35-37 C n atmosfer cu 5-10% CO2, formeaz colonii S mici, cu o zon de hemoliz alfa (verzuie). Din cauza autolizei
pneumococilor centrul coloniilor se deprim. Tulpinile necapsulate formeaz colonii R.
Structura antigenic: Antigene capsulare, de origine polizaharidic. Permit clasificarea pneumococilor n 90 serotipuri. Antigenul proteic R,
mascat de Ag capsulare. Antigenul proteic M, specific de tip.
Factori de patogenitate: Capsula (rol antifagocitar); Adezine; sIgA proteaz; Acidul lipoteichoic (implicat n reacii inflamatoare cu semne
generale i leziuni tisulare, posibil oc); Autolizinele (eliberarea unor factori bacterieni cu rol n virulen); Pneumolizina (hemolizina). Efect
citotoxic asupra celulelor epiteliale i endoteliale. Reduce activitatea bactericid a PMN; Hialuronidaza; Neuraminidaza
S.pneumoniae se difereniaz de ali streptococi prin: Sensibilitatea la optochin; Liza culturii de pneumococi n prezena srurilor biliare
(activarea autolizinelor) testul de solubilitate n bil; Patogenitatea pneumococilor pentru oarece; Prezena capsulei; Hidroliza inulinei
Epidemiologia infeciilor cu pneumococi
Sursa de infecie purttorii sntoi (naso-faringe) sau bolnavii
Calea de transmitere aerogen
Infeciile cauzate de S.pneumoniae
Infecii respiratorii: pneumonia franc lobar acut, broncho-pneumonii, bronite, otite, sinusite, mastoidite. Meningite (n special la copii).
Bacteriemii cu artrite, peritonit, pericardit, endocardit.
Imunitatea antipneumococic este specific de tip, prin Ac anti-capsulari.
Diagnosticul de laborator al infeciilor streptococice
Prelevate n funcie de forma clinic (tampon faringean sau cutanat, puncie a esutului sub-cutanat, LCR, puroi, snge, etc)
Diagnosticul direct
Examenul microscopic (frotiu Gram orientativ, RIF)
Examenul bacteriologic (de baz)
Detectarea serologic a Ag specifice
Identificarea ADN prin tehnici de biologie molecular
Diagnosticul indirect (util n infecii post-streptococice)
Evidenierea Ac ASLO n cazul RAA (titru diagnostic > 200 UA/ml)
Ac antistreptodornaz B (titru diagnostic > 240 UA/ml) + ASLO n cazul GNA
Dozarea Ac anti-hialuronidaz (titru diagnostic > 350 UA/ml) i anti-streptokinaz (titru diagnostic > 160 UA/ml)
Diagnosticul scarlatinei
Pentru identificarea eritemului scarlatinos se utilizeaz reacia Schultz-Charlton (anti-eritrotoxina inoculat n erupie determin dispariia
exantemului). Reacia Dick pentru depistarea Ac anti-eritrotoxin (determinarea receptivitii la scarlatin). I/dermic se inoculeaz 0,1 ml
eritrotoxin. Rezultat pozitiv: peste 24 ore eritem local peste 10 mm (lipsa anti-eritrotoxinei, receptivitate). Rezultat negativ: absena eritemului
(anticorpi prezeni, persoan imun la scarlatin)
Profilaxia specific a infeciilor streptococice
Vaccin contra S.pyogenes nu exist (variabilitatea proteinei M, Ag comune cu esuturile umane)
Femeile purttoare de S.agalactiae sunt imunizate cu vaccin din polizaharide capsulare
Exist un vaccin anti-pneumococic, constituit din antigene capsulare mai frecvent ntlnite n regiune
Tratamentul infeciilor streptococice
S.pyogenes este sensibil la penicilina G i macrolide. Tratamentul anginelor previne complicaiile post-streptococice.
S.pneumoniae este sensibil la peniciline i cefalosporine. Exist tulpini rezistente la tetraciclin, eritromicin, macrolide.

84. Infectiile meningococice. Clasificarea meningococilor (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Infectiile cauzate.
Diagnosticul microbiologic. Prelevatele. Metoda microscopica. Izolarea si identificarea culturii pure. Depistarea antigenelor
meningococice in LCR. Profilaxia specifica.
Clasificarea (Bergey's 2001) :
Familia Neisseriaceae
Genurile - Neisseria, Kingella, Chromobacterium, Aquaspirillum
Genul Neisseria include dou specii patogene umane importante N. gonorrhoeae i N.meningitidis (neisserii pretenioase).
Specii comensale, gzduite pe mucoasele tractului respirator i digestiv, conjunctiv, vagin, uretra distal (neisserii nepretenioase):
Neisseria flava; Neisseria flavescens; Neisseria subflava; Neisseria perflava; Neisseria lactamica; Neisseria mucosa; Neisseria pharyngis;
Neisseria polysaccharea; Neisseria sicca; Neisseria sp. In unele condiii se pot comporta ca patogeni oportuniti.
Caractere generale ale genului Neisseria. Coci gramnegativi, asociai n diplococi, uneori tetrade, imobili. Bacterii carboxifile, cu
metabolism respirator. Catalazo- i oxidazo-pozitive. Sunt gzduite pe mucoasele omului i animalelor. Speciile patogene sunt exigente la
cultivare

N.meningitidis se prezint sub form de coci imobili, gram-, in frotiu se aranjeaz in diplococi cu suprafeele adiacente aplatizate sau puin
concave (aspect riniform, de boabe de cafea). Posed capsul i fimbrii.
Structura antigenic a N.meningitidis: Ag polizaharidice capsulare permit caracterizarea a 13 serogrupe: A, B, C, D, X, Y, Z, 29E, W135,
H, I, K et L. Mai frecvent intlnite sunt serogrupele A, B, C, Y i W135. Ag proteice din membrana extern (cinci proteine majore) permit
distincia tipurilor serologice. Ag lipo-oligozaharidice (serotipuri). Aceste antigene servesc n calitate de markeri epidemiologici.
Caractere de cultur. N.meningitidis este un mi/o carboxifil, foarte exigent la cultivare. Se cultiv doar pe medii mbogite cu snge sau
ser: geloz-ser, geloz-snge, geloz-ciocolat, mediul Mueller-Hinton i prenclzite n termostat. Coloniile S, mici (1-2 mm), cu marginile
netede, bombate, translucide apar peste 24-48 ore de incubare la 37 C n atmosfer umed mbogit cu 5-10% CO2.
Activitate biochimic. N.meningitidis posed catalaz i oxidaz, scindeaza glucoza i maltoza fr a produce gaz.
Rezistena n mediul extern: N.meningitidis este o bacterie deosebit de fragil, sensibil n special la desicare, radiaii solare, variaii de
pH i refrigerare; temperaturi sub 37 C determin autoliza bacteriilor.

43
 Factorii de patogenitate: Adezine (fimbriile i proteine ale ME); Capsula rol antifagocitar; sIg A-proteaza descompune sIg A de pe
mucoase; Endotoxina declaneaza secreia diferitor cytokine; Receptori i captatori de Fe (receptori membranari pentru transferin i
lactoferin, care permit captarea directa a Fe din aceste substane, precum i extragerea lui direct din hemoglobin)
Epidemiologia infectiilor meningococice
Sursa de infecie bolnavii cu meningit sau rinofaringit meningococic sau purttorii de germeni
Transmiterea aerogen, prin picturi Pflugge, prin obiecte contaminate (jucrii) - exceptional
Patogeneza infectiilor meningococice
Meningococul ader la epiteliul rinofaringelui, provocnd sau o infecie local (rinofaringita), sau o infectie inaparent. In caz de diminuare
a rezistenei organismului, bacteria trece n submucoas i apoi n circulaia sanguin general (meningococcemia). Aceast translocaie
este favorizat de inflamaii rinofaringiene, n special virale. In circulaia general, graie capsulei, bacteria este protejat de mijloacele de
rezisten a organismului. Prin tropism pentru celulele plexului choroid, meningococul ader la acest nivel i, prin translocaie, trece n
spaiul meningean, inducnd meningita cerebrospinal. Odat cu dispariia anticorpilor materni, N. meningitidis devine principala bacterie
responsabil de meningite la nou-nscui. Ulterior, imunitatea antimeningococic se instaleaz progresiv i frecvena meningitelor
meningococice diminueaz.
Formele clinice de infectii meningococice
Rinofaringita (forma clinic cea mai frecvent, deseori asimptomatic)
Septicemia (meningococcemia). Reprezint etapa a doua a maladiei. Complicaii: meningococcemie fulminant (sindromul Waterhouse-
Friderichsen) n 10 - 20 % de cazuri (oc endotoxinic, purpur extensiv indus de coagulopatie de consumare (coagulare intra-vascular
diseminat)).
Meningita cerebrospinal epidemic. Este precedat de o faringit i nsoit de bacteriemie. Este caracterizat prin febr nalt, cefalee,
vom, fotofobie, hiperestezie cutanat. Poate fi prezent poziia caracteristic n "coco de puc" dat de sindromul de contractur.
Frecvent se ntlnete herpesul labial, peteii cutanate sau artralgii. Afectarea sistemului nervos se face n grade variabile, cu delir, agitaie
psihomotorie, somnolen, uneori com, pareze i paralizii, convulsii. Evoluia n absena tratamentului se face spre deces n 80-90% din
cazuri, restul prezentnd sechele grave.
Alte forme: infecii bronhopulmonare, endocardite, pericardite, osteomielite, artrite (determinate de formarea de complexe imune),
conjunctivite, angine.
Diagnosticul de laborator al infectiilor meningococice
Prelevate: in funcie de forma clinic se prelev exsudatul nasofaringean, snge pentru hemocultur, LCR, lichidul articular, etc. Probele se
prelev nainte de a se administra antibiotice i se transport rapid la laborator, ferite de variaii de temperatur i lumin. La necesitate se
utilizeaz mediul de transport Stuart
Diagnosticul direct
Examenul LCR este primordial pentru diagnosticul meningitei. Prelevat n condiii aseptice prin puncie lombar, n volum de 4-6 ml n 2
eprubete de centrifug. LCR este tulbure, conine mii sau zeci de mii de elemente celulare, cu predominana de 95-100% a neutrofilelor.
Aceast reacie celular este insoit de hipoglicorahie, de hiperalbuminorahie i pH acid prin acumularea de acid piruvic i lactic.
Examenul microscopic al sedimentului LCR.Frotiuri colorate cu albastru de metilen sau Gram: diplococi Gram-negativi riniformi n
pozitie intra i extracelular, dar densitatea bacterian este sczut, i examenul este negativ n 1/3 cazuri. Prezena leucocitelor n numr
mare pledeaz pentru un prognostic favorabil. b) RIF
Examenul bacteriologic
Sedimentul din LCR se nsemneaz pe medii de cultur mbogite, cum sunt geloza-snge, geloza-ciocolat, mediul Mueller-Hinton
prenclzite la 37 C.
Exsudatul nazofaringean se nsemneaz imediat dup recoltare pe medii cu adaos de antibiotice (lincomicin, vancomicin, ristomicin)
pentru inhibarea altor specii microbiene existente n exsudat.
Sngele pentru hemocultur se nsemneaz direct pe medii de cultur lichide (bulion glucozat 2% respectnd proporia de 5 % snge).
Examinrile se fac zilnic timp de 5-7 zile prin subculturi.
Identificarea i diferenierea de neisseriile comensale se bazeaz pe aspectul morfologic pe frotiuri colorate Gram, prin testul oxidazei care
este pozitiv, scindarea numai a glucozei i maltozei, identificarea serologic prin RA cu seruri imune specifice de grup.
Decelarea direct n snge i LCR a antigenelor polizaharidice capsulare, utiliznd reaciile de contraimunoelectroforez, ELISA, latex i
coaglutinare cu antiseruri specifice de grup.
Detectarea acizilor nucleici
Diagnosticul indirect
Diagnosticul serologic. Pot fi titrai Ac antimeningococici utiliznd RA sau RHAI. Are valoare diagnostic redus

Tratamentul trebuie instituit extrem de urgent, imediat dup internare i efectuarea punciei lombare.
Tratamentul etiotrop const n administrarea de antibiotice timp de 7-10 zile: Penicilin, Ampicilin, Cloramfenicol, Cefalosporine.
Profilaxia specific: imunizare activ cu vaccin polizaharidic antimeningococic monovalent sau polivalent (A, C, Y, W), care se poate
administra intradermic sau subcutanat, dup vrsta de 3 luni (pentru grupul A), oferind protecie de 95-100% pentru o durat de 2-3 ani;
polizaharidul capsular de grup B este un homopolimer al acidului sialic i nu este imunogen pentru oameni.
Contacii vor fi supravegheai clinic timp de 10 zile. Chimioprofilaxia cu Penicilin V, timp de 7 zile, sau cu Rifampicin, 3 zile, se aplic
n familii sau n colectiviti de precolari
Purttorii, depistai n focar, vor fi tratai timp de 7-10 zile cu Penicilin V.
Cazurile de meningit sau meningococcemie vor fi declarate n 24 de ore de la depistare

85. Infectia gonococic. Clasificarea gonococilor (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Infectiile gonococice acute si cronice.
Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Microscopia directa, izolarea si identificarea culturii pure. Particularitatile de recoltare a
prelevatelor si de diagnostic a gonoreei cronice.
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL GONOREEI
Gonoreea este o uretrit specific, cu eliminare masiv de puroi, mai aparent la barbati dect la femei.
Termenul "gonoreea", a fost utilizat prima data de Galen n secolul II i nseamn scurgerea seminei". Multe secole gonoreea i sifilisul erau
confundate. Paracelsus (1530) credea ca gonoreea este un simptom precoce al sifilisului. Aceasta confuzie a fost ntrit de medicul englez John
Hunter, n 1767. Hunter intenionat i-a inoculat puroi de la un bolnav cu simptome de gonoree, mbolnavindu-se de sifilis!
Agentul cauzal al gonoreei, Neisseria gonorrhoeae, a fost descris pentru prima oar de A. Neisser n 1879 n puroi de la un bolnav de gonoree.
Neisseria gonorrhoeae

44
Caractere morfobiologice
Neisseria gonorrhoeae este un coc gram-negativ, cu diametrul de 0.6 - 1.0 m, uzual observat n perechi cu suprafeele concave alturate. In
prelevate patologice (puroi, exsudate) se localizeaz frecvent intracelular n leucocite polimorfonucleare (neutrofile). Imobil, posed fimbrii cu
lungimea de civa micrometri. n funcie de prezena fimbriilor se cunosc patru tipuri de N. gonorrhoeae : T1, T2, T3, T4
Caractere de cultura
Gonococul este exigent la cultivare. Pentru izolarea lui se utilizeaz medii mbogite cu ser sangvin, extract de drojdii, lichid ascitic, etc (mediul
HYL, Thayer-Martin, geloz-ciocolat). Culturile cresc la 35-36 C n atmosfer umed cu 5-10 % CO2. Peste 24-48 ore apar colonii mici (0,5-
1mm), netede, translucide.
Dup aspectul coloniilor pot fi descrise 4 tipuri: Colonii de tipul I i II apar la izolare, corespund tulpinilor virulente, purttoare de pili (fimbrii),
Colonii de tipul III i IV, apar la repicare, mai mari, corespund tulpinilor fr pili
Structura antigenic: 3 proteine majore din ME (Por / PI, Opa/PII, PIII) definesc multiple serotipuri (variante). Opa prezint o mare
variabilitate antigenic, chiar n interiorul unei tulpini. Lipopolizaharidul din ME. Proteina fimbriilor, cu o mare diversitate antigenic.
Caractere biochimice: gonococii sunt oxidazo-pozitivi, scindeaza doar glucoza pna la acid, nu atac maltoza

Factorii de patogenitate: Adezinele (fimbriile, unele proteine din membrana extern Opa). sIgA-proteaze, cu rol in colonizarea mucoaselor.
Proteine ale ME (Por), care inhib formarea fagolizosomei (supravieuirea i multiplicarea gonococilor n fagocite). Endotoxina (rezisten la
complement, secreia citokinelor). Sisteme de captare a Fe (receptori membranari pentru transferin i lactoferin). Variaia antigenic rapid a
fimbriilor de adeziune i a proteinei Opa (conversie, hipermutaie, transformare)
Gonococul este inhibat de bumbacul din tampoane (hipoclorit...). Pentru prelevri sunt indicate tampoane cu alginat de Ca sau din dacron.
Epidemiologia infeciei gonococice
Sursa de infecie unica surs este bolnavul cu gonoree, n special cu infecie inaparent
Transmiterea - la maturi exclusiv prin contact sexual; la nou-nscut la trecerea prin canalul de natere al mamei bolnave
Patogeneza infeciilor cauzate de N.gonorrhoeae
Infecia gonococic este n general limitat la mucoasele cu epiteliu columnar. Mai frecvent implicat este uretra, cervixul, rectul, faringele i
conjunctiva. Epiteliul scuamos al vaginului nu este sensibil la infecia cu N. gonorrhoeae. Totui, la fetie gonococul poate provoca
vulvovaginite. Infeciile mucoaselor sunt caracterizate uzual prin secreii purulente.
Patogeneza gonoreei - Prin intermediul fimbriilor i a unor proteine din ME (Opa) gonococii ader la vilozitile celulelor epiteliale columnare
neciliate. Urmeaz penetrarea lor n celul (prin endocitoz), apoi vacuola este transportat la baza celulei, unde bacteria este eliberat prin
exocitoz n esutul subepitelial. Pe parcursul infeciei, lipopolizaharidul bacterian (LPZ/LOZ) i peptidoglicanul sunt eliberate prin autoliza
celulelor. Ambele substane activeaz complementul pe calea alternativ, LPZ de asemenea stimuleaz producia factorului de necroz a
tumorilor (TNF), care provoac distugerea celulelor. Neutrofilele sunt imediat atrase n focar i inglobeaza bacteriile. Muli gonococi sunt
capabili s supravieuieasca n interiorul fagocitelor pn la moartea lor, cu eliberarea bacteriilor ingerate.
Particularitaile gonoreei la brbai: In majoritatea cazurilor decurge acut (85-95%), fiind manifestat clinic: Uretrita (secreie uretral alb
galbuie, durere i usturime la mictiune, dizurie) ; Prostatita; Orhita; Epididimita
Particularitile gonoreei la femei: In majoritatea cazurilor infecia decurge asimptomatic (80% de cazuri), cu evoluie spre cronicizare.
Formele clinice: Cervicita, Uretrita, Bartolinita, Salpingita, Ovarita, Endometrita, Peritonita
Alte forme clinice: Faringita i proctita gonococic. Diseminarea infeciei gonococice (1-3%) determin artrite, leziuni cutanate, septicemii,
endocardite, meningite. Tulpinile de N. gonorrhoeae care cauzeaza infecii diseminate sunt uzual rezistente la complement i la reacia
bactericid a serului. La nou-nscut conjunctivita purulent cu extinderea rapid a infeciei la globul ocular (ophtalmia neonatorum) poate fi
urmare a contaminrii la trecerea prin canalul de natere
Diagnosticul de laborator al gonoreei
Prelevate:
La brbai - secreiile uretrale
La femei - secreiile uretrale, vaginale, din endocol sau orificiile glandelor vulvare
Pot fi examinate coninutul leziunilor cutanate, exsudat articular, nasofaringean, snge, puroi din conjunctiv, LCR, tampon rectal. Pentru
recoltarea acestor secreii se foloseste un tampon de alginat de Ca (sau ansa bacteriologic), care este apoi trimis imediat n laborator pentru
testare (dupa necesitate se foloseste mediul de transport Stuart cu tioglicolat i crbune activat).
Daca eliminrile sunt srace, se procede la stimularea secreiei (reactivare, provocare): Alimentar (cu bauturi alcoolice bere); Chimic
(instilaii cu nitrat de Ag sol. 1% in uretr, 10% n colul uterin); Biologic (inocularea gonovaccinului, recoltarea secreiilor imediat dupa
menstre la femei); Mecanic (masaj al prostatei); Termic (diatermie sau inductotermie)
Examenul microscopic (elocvent doar n cazul uretritelor acute la brbai).
In frotiuri din puroiul uretral colorate Gram sau cu albastru de metilen se observ diplococi gram- situai intra- sau extracelular. RIF
Examenul bacteriologic (este obligator n forme asimptomatice sau cronice)
Gonococul fiind o bacterie foarte fragil, este obligator de a nsmna imediat prelevatele sau de a utiliza un mediu de transport adaptat. Pentru
izolare se folosesc medii mbogatite (ex.: mediul Thayer-Martin, care este bogat n factori de cretere i conine antibiotice (vancomicina,
colistina, amfotericina) care inhib alte bacterii din prelevat, geloza-ciocolata). Coloniile apar peste 18 - 24 h de incubare in atmosfer cu CO2.
Identificarea N.gonorrhoeae se efectueaz n baza caracterelor morfotinctoriale, aspectul coloniilor crescute pe medii selective, oxidaza +,
scindarea doar a glucozei pn la acid. Seroidentificarea cu Ac monoclonali n reacia de Co-aglutinare
Depistarea direct a N. gonorrhoeae n prelevate poate fi realizat prin tehnici ELISA sau RIF
Detectarea acizilor nucleici prin hibridare sau amplificare genic
Examenul serologic (serodiagnosticul) RFC
Tratamentul gonoreei: Peniciline, Cefalosporine de generaia III, Fluorochinolone, Cotrimoxazol
Profilaxia gonoreei: Nespecifica (individual sau general), Prevenirea oftalmiei gonococice se efectueaza prin instilarea intraconjunctival la
nou-nscui a soluiei 1% de nitrat de Ag

86. Bruceloza. Clasificarea agentilor (familie, gen, sp.). Patogeneza brucelozei. Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Metoda
microscopica, izolarea si identificarea speciilor de brucele. Diagnosticul imunologic (reactiile Huddelson, Wright), intradermoreactia
Burnet. Profilaxia specifica a brucelozei.

87. Tularemia. Clasificarea agentului patogen (familie, gen, sp.). Patogeneza, formele clinice ale infectiei. Diagnosticul
microbiologic. Prelevate. Metoda microscopica, metoda biologica, izolarea si identificarea agentului. Metodele alergica si serologica.
Profilaxia specifica a tularemiei.

45
Zooantroponozele = maladii ale animalelor care pot fi transmise oamenilor n rezultatul unui contact direct sau indirect cu populaii animale
infectate. Unele dintre aceste infecii - antraxul, tularemia, pesta, bruceloza fac parte din categoria infeciilor extrem de periculoase. Sunt foarte
contagioase (transmitere aerogen, alimentar, prin contact direct, receptivitate general). Se manifest nu doar ca epidemii, ci i ca pandemii.
Reprezint infecii cu evoluie foarte grav. Agenii cauzali sunt rezisteni n mediul extern.
Clasificarea
Familia Francisellaceae
Genul Francisella
Specii: F.tularensis (agentul cauzal al tularemiei)
F.philomiragia (infectii sistemice)
Se cunosc 4 biovaruri (subspecii) de F.tularensis, care difer dupa activitatea biochimic, virulen i rspndire geografic:
1. F.tularensis tularensis (nearctica) (tip A; foarte virulent, raspndit n America de Nord)
2. F. tularensis holarctica (palearctica) (tip B; mai puin virulent, cu raspndire n Europa)
3. F. tularensis mediasiatica: virulen similar cu F. tularensis holarctica
4. F. tularensis novicida: virulen redus, cauzeaza infecie numai la gazde imunocompromise. Izolat n SUA.
Caracterele morfobiologice ale F.tularensis
Morfologia: F.tularensis reprezint o cocobacterie foarte mic (0.2-0.5 m x 0.7-1.0 m), gram-negativ, uneori se coloreaz mai intens la poli,
pleomorf, imobil, asporogen, tulpinile virulente posed capsul.
Caractere de cultur: bacteria nu poate fi cultivat pe medii uzuale. Pentru izolare se utilizeaz medii mbogite: mediul Francis (geloz +
snge de iepure + cistein + glucoz); mediul McCoy (cu glbenu de ou); geloz-ciocolat
Cultiv la 35 - 37 grade, n aerobioz. Peste 2-4 zile apar colonii S, mici (1 - 2 mm n diametru), albe-cenuii, mucoide, cu marginile regulate i
suprafaa lucioas.
Caractere biochimice: F.tularensis este catalazo+ i oxidazo-, nu descompune ureea, produce H2S, unele biovaruri fermenteaz glicerolul.
Rezistena n mediul extern:
Mi/organismele pot supravieui perioade ndelungate de timp n ap, nmol, cadavre de animale (mediu umed).
F.tularensis este distrus la 56 grade n 10 minute, dar congelarea permite conservarea bacteriei.
Factorii de patogenitate : Capacitatea de a penetra n macrofage, supravieuind i multiplicndu-se n interiorul celulelor pn la moartea lor
(parazitism facultativ intracelular); Capsula (rol protector); Endotoxina (LPZ)
Sursa de infecie animale bolnave sau cadavre de animale, transmiterea de la om la om nu are loc.
Rezervorul principal mamifere mici i medii (iepuri, veverie, obolani, oareci, roztoare acvatice, lemingi). Omul, pisicile, cinii, anumite
specii de psri, peti i amfibii pot fi gazde accidentale
Vectori insecte (tuni, nari, cpue )
Pori de intrare tegumentul (chiar intact), mucoasele, conjunctiva
Transmiterea: Contact cu animale infectate, cadavre sau cu apa contaminat (lacuri, bazine, etc); Aerogen prin inhalare (vntori...); Alimentar,
prin consum de ap sau alimente infectate; neptura artropodelor hematofage
Francisella tularensis este una dintre cele mai virulente bacterii. Cteva zeci de mi/o (10-50) pot provoca suferine grave.
Patogeneza i formele clinice de tularemie: Francisella tularensis este o bacterie facultativ intracelular. Iniial infecteaz macrofagele, cu
diseminarea mi/o i afectarea diferitor organe, inclusiv plmnii, ficatul, splina, ganglionii limfatici. Un rol important n patogeneza leziunilor l
joac hipersensibilitatea tardiv.
Formele clinice de tularemie sunt n relaie cu calea de ptrundere:
1. Forma ulceroganglionar (70-85% de cazuri), penetrarea agentului patogen prin tegument sau mucoase. Mi/o se multiplic local i
determin apariia, peste 3-5 zile de la expoziie, a unei papule la locul de inoculare. Peste cteva zile se transform n pustul, care se
ulcereaz rapid. Ulcerul are 2 - 4 cm n diametru i marginile neregulate. Uneori ulcerul poate fi acoperit cu o crust neagr
(asemntoare cu escara n antrax). Bacteriile se rspndesc spre ganglionii limfatici regionali, unde cauzeaz limfadenite necrotice,
nconjurate de infiltrate granulomatoase (bubonul tularemic). Ganglionii limfatici afectai devin fluctuani, uneori crend canale de
drenare n tegument. Mi/o pot disemina hematogen infectnd multiple organe, cu dezvoltarea septicemiei.
2. Forma ganglionar se manifest prin afectarea ganglionilor limfatici regionali, leziunea de la poarta de intrare lipsete.
3. Forma oculoganglionar apare la ptrunderea agentului cauzal prin conjunctiv. Se dezvolt necroza i ulceraia conjunctivei, cu
infiltraie limfocitar. Din conjunctiv bacteriile trec n ganglionii limfatici preauriculari, submandibulari sau cervicali, provocnd
leziuni similare cu cele din tularemia ulceroganglionar.
4. Forma orofaringean (angino-ganglionar). Mi/o intr prin mucoasa orofaringelui n urma ingestiei sau inhalrii lor. Uzual se
dezvolt faringite sau tonzilite exsudative, cu ulceraie ulterioar. Ptrunderea n ganglionii limfatici cervicali determin necroz i
supuraie.
5. Forma tifoidic (abdominal), cu afeciuni generalizate. Mi/o ptrund n snge prin tegument sau mucoase i afecteaz plmnii i
organele reticulo-endoteliale. Determin frecvent septicemie i oc
6. Forma pneumonic, foarte grav. Mi/o ptrund n plmni aerogen sau hematogen.
Prelevate: n funcie de forma clinic: serozitate din leziunea cutanat sau conjunctiv, exsudat faringean, punctat din ganglionul limfatic afectat,
sput, snge.
Diagnosticul direct
Examenul microscopic direct este foarte dificil, aproape imposibil. RIF are o sensibilitate mai mare
Examenul bacteriologic. Izolarea F.tularensis direct din prelevate este practic imposibil. Uzual se utilizeaz inocularea prelevatelor la animale
experimentale sensibile (oareci, cobai). La necropsii se studiaz frotiuri-amprente din organele afectate (Giemsa, RIF), se fac nsmnri pe
medii speciale (Francis, Mc Coy). Tulpinile izolate sunt identificate morfologic, cultural, biochimic, antigenic (RA cu seruri anti-F.tularensis).
Diagnosticul indirect
Serodiagnosticul. Detectarea Ac este un element esenial n diagnosticul tularemiei. Ac apar dup ziua a 7 de boal, ating titrul maxim peste 1-2
luni (1:1000 sau mai mult) i persist mai muli ani. RA cu suspensie de bacterii omorte este cea mai utilizat. Titrul diagnostic 1:80, cu
creterea lui n dinamic de cel puin 4 ori.
ELISA este posibil.
Intradermoreacia cu tularin. Hipersensibilitatea poate fi testat peste 5 zile de la debutul bolii.
Tratamentul tularemiei: Antibiotice: aminozide (streptomicin, gentamicin), tetracicline, cloramfenicol, fluorochinolone, eritromicin (exist
i tulpini rezistente).
Profilaxia tularemiei: Informarea persoanelor expuse contaminrii; Supraveghere sanitar; Vaccinarea contingentelor de risc cu vaccin viu
atenuat asigur imunitatea pe o durat de 5-7 ani.

46
88. Antraxul. Clasificarea agentului patogen (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Formele clinice de antrax. Diagnosticul
microbiologic. Prelevate. Metoda microscopica. Izolarea si diferentierea de antracoizi. Metoda biologica, metodele rapide (reactia
Ascoli), proba alergica. Profilaxia si tratamentul specific al antraxului.

Clasificarea:
Familia Bacillaceae
Genul: Bacillus
Specii: Bacillus anthracis (patogen, agentul antraxului)
Bacillus cereus (intoxicaii alimentare),
Bacillus polymyxa (genul Paenibacillus), Bacillus brevis (genul Brevibacillus), Bacillus subtilis bacili antracoizi, produceni de AB
Bacillus anthracis a fost prima bacterie la care a fost demonstrat rolul ei n patogenia unei infecii.
n 1877, Robert Koch a izolat microorganismul n cultur pur, demonstrnd capacitatea lui de a forma endospori i a produs antraxul
experimental inoculndu-l la animale.

Caracterele morfobiologice ale B.anthracis

Bacil mare (5-6 m x 1 m), cu extremitile drepte (tiate), gram-pozitiv, imobil (antracoizii sunt mobili), n produse patologice se prezint sub
form de lanuri scurte, iar n cultur lanuri lungi (tulpin de bambus).
Tulpinile virulente formeaz capsul polipeptidic (acidul D-glutamic).
Sporul este ovoid, n poziie central, nu deformeaz celula. Sporogeneza are loc n cultur, n sol i n esuturi i exsudate din animale moarte
(n prezena oxigenului), dar nu n snge sau esuturi de animale vii.
Caractere de cultur
B.anthracis nu este exigent nutritiv, cultiv pe medii uzuale. Facultativ-anaerob, t optim 35-37 grade, pH 7-7,4.
Peste 24 ore de incubare formeaz colonii R, mari, cu contur neregulat, opace, plate, uscate, rugoase (coam de leu, cap de meduz).
Nehemolitice pe geloz-snge (antracoizii sunt hemolitici). Pe geloz-ser, n exces de CO2, formeaz colonii S (producerea capsulei). Pe mediu
cu 0,5-1 UI de penicilin B.anthracis formeaz lanuri din forme globulare - colier de perle (proprietate absent la antracoizi).
n bulion peptonat formeaz flocoane la fundul eprubetei, cu supernatantul clar.
B.anthracis este sensibil la fagul gamma.
Caractere biochimice: Activitate proteolitic lichefiaz gelatina n form de brad inversat, peptonizeaz laptele, diger serul coagulat, nu
produce H2S. Activitate zaharolitic fermenteaz unele glucide: glucoza, maltoza, zaharoza, tregaloza, etc. Nu fermenteaz lactoza i
arabinoza.
Rezistena n mediul extern: formele vegetative sunt slab rezistente, sporii rmn viabili n sol decenii, se distrug la fierbere n 30-40 min.
Factori de patogenitate
Capsula polipeptidic, codifict de plasmida pX02. Inhib fagocitoza i puterea bactericid a sngelui. Capsula joac un rol important n
etapele iniiale ale infeciei. Formarea capsulei are loc in vivo i in vitro, pe medii cu ser i n atmosfer cu 5 % CO2.
Exotoxina antraxului, codificat plasmidic (pX01). Este constituit din 3 componente: Factorul I, edematogen (EF), care este o adenilat-
ciclaz. Acumularea de cAMP duce la modificarea permeabilitii membranare cu producerea edemului. inta celulele endoteliale (efect - oc
hipovolemic, oc septic). Factorul III, letal (LF), responsabil de efectele letale ale toxinei anthrax. Este o proteaz Zn++ dependent care
induce producerea citokinelor de ctre macrofage i limfocite (efect recie inflamatoare, oc septic). Factorul II, antigen protector (PA),
induce sinteza Ac antitoxici protectori. PA este responsabil de fixarea toxinei pe receptorii celulelor sensibile.
Aparte, aceti factori exercit activitate biologic nesemnificativ la animal. Din contra, combinaii din doi sau trei factori toxici determin
urmtoarele consecine la animale experimentale: PA+LF = activitate letal; PA+EF = produce edem ; PA+LF+EF = edem i necroz cu efect
letal; EF+LF = inactiv
Acest experiment sugereaz c toxina antraxului are structur clasic de citotoxin bacterian de tip A-B cu PA n calitate de B-fragment (de
fixare pe receptori celulari) i cu factorii EF i LF cu funcie de fragment A (activ), care acioneaz n interiorul celulei.
Structura antigenic a B.anthracis: Ag polipeptidic capsular (induce Ac neprotectori); Ag polizaharidice somatice termostabile (depistate n
reacia de precipitare Ascoli); Toxina (componentul PA), induce formarea Ac protectori, neutralizani
Sursa de infecie animalele erbivore bolnave de antrax (ovine, caprine, bovine, suine). Solul contaminat cu spori este un rezervor de germeni
important i permanent (decenii).
Transmiterea: prin contact direct cu animalele bolnave sau produse contaminate (carne, piei, ln, blan, etc), puni i nutreuri contaminate,
cu ptrunderea agentului prin tegumentul lezat. aerogen, prin inhalarea sporilor de B.anthracis. pe cale alimentar (consum de carne de la
animale bolnave de antrax insuficient prelucrate termic)
n majoritatea cazurilor antraxul se manifest ca boal profesional a ngrijitorilor de animale, personalului de la abatoare, ntreprinderi de
prelucrare a produselor animaliere, veterinarilor, zootehnicienilor, mcelarilor, tbcarilor, etc.
Formele clinice de antrax
Antraxul cutanat , pustula malign (forma cea mai frecvent). Sporii intr printr-o leziune a tegumentului, germineaz i prolifereaz la
poarta de intrare, cu dezvoltarea unui edem gelatinos local caracteristic.
La poarta de intrare, peste 12-36 ore de la penetrare, apare o papul, care evolueaz rapid ntr-o vezicul, apoi n pustul cu coninut
sanguinolent. La spargerea pustulei se formeaz o leziune necrotic, prezentnd n centru o escar neagr nconjurat de vezicule satelite.
Leziunea se localizeaz mai frecvent pe mini, fa, ceaf, etc.
Ptrunderea n snge determin diseminarea sistemic a bacteriei.
Antraxul pulmonar apare la inhalarea sporilor de B. anthracis , care sunt nglobai de macrofagele alveolare unde ei germineaz i se
multiplic, determinnd o pneumonie foarte grav cu edem.
Urmeaz infectarea ganglionilor limfatici mediastinali cu dezvoltarea unei necroze hemoragice. Pacientul manifest febr, stare de ru, mialgie,
tuse ne-productiv. Din ganglionii limfatici infecia poate trece n snge.
Decesul poate surveni n 24 h.
Antraxul digestiv apare n urma consumului de carne infectat. n mucoasa intestinal se dezvolt procese identice cu cele din antraxul cutanat
(enterocolit ulceroas). Clinic: vom i diaree, cu snge n masele fecale.
Poate urma invazia ganglionilor limfatici mezenterici i a sngelui, asociat cu prostraie profund, oc i moarte.
Meningita poate apare (foarte rar) ca urmare a oricrei forme de antrax.
Prelevate (n funcie de forma clinic): exsudat din leziunea cutanat, sput, snge, LCR, materii fecale, bioptate din ganglioni limfatici, probe
necroptice, probe de la animalul suspect i elemente din mediul extern

47
Examenul microscopic: direct, RIF. n frotiuri pregtite din prelevate i colorate Gram sau cu albastru de metilen se observ bacili mari cu
morfologia caracteristic, izolai sau n lanuri scurte. Sporii sunt rareori prezeni.
Examenul bacteriologic Prelevatele monomicrobiene se nsmneaz pe geloz i geloz-snge, iar cele polimicrobiene se nclzesc n
prealabil 10 min la 75 grade C. Incubarea la 37 C timp de 24 ore. Sngele n bulion glucozat, repicri zilnice timp de 7 zile pe geloz-snge.
Examinarea coloniilor crescute, selecia celor suspecte i acumularea lor. Identificarea culturii pure acumulate i diferenierea de antracoizi.
Examenul biologic - Se inoculeaz prelevatele la cobai sau oareci, care sunt foarte sensibili la infecie. Dup moartea lor (36-48h) bacilii sunt
depistai n frotiuri din snge i organe. Depistarea Ag polizaharidice termostabile n prelevate (reacia de precipitare inelar Ascoli)
Diagnosticul serologic. Ac anti-antrax pot fi depistai la convalesceni n RP sau RFC
Diagnosticul imunologic (proba cutanat alergic). Se pune n eviden starea de hipersensibilizare prin inocularea intradermic a 0,1 ml de
antraxin (extract din tulpina vaccinant de B.anthracis). Reacie pozitiv edem i hiperemie cu diametrul de peste 8 mm.
Tratamentul antraxului: Antibiotice (peniciline, cefalosporine, fluorochinolone); Imunoglobulina antiantrax
Profilaxia specific a antraxului Depistarea i izolarea animalelor bolnave, incinerarea animalelor moarte sau ngroparea adnc a cadavrelor i
acoperirea cu var nestins. Vaccinarea animalelor. Imunizarea personalului expus cu vaccin viu atenuat , vaccin acelular (elaborat din tulpini
acapsulate avirulente, coninnd proteina PA). n curs de elaborare vaccin cu PA i antigen capsular.

89. Pesta. Clasificarea agentului patogen (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Formele clinice de pesta. Diagnosticul
microbiologic. Prelevate. Regulile de recoltare, transportare si examinare a prelevatelor. Metodele microscopica, bacteriologica si
serologica. Profilaxia specifica a pestei.
Pesta (din latin pestis, maladie contagioas) este o maladie cu multiple faete mortale pentru om. Ea este cauzat de Yersinia pestis, descoperit
de Alexandre Yersin de la Institutul Pasteur n 1894.
Clasificare Familia Enterobacteriaceae, Genul Yersinia, Specia Yersinia pestis. Se disting 3 varieti de tulpini - oriental, medieval i antic.
Caractere morfotinctoriale yersiniile reprezint bastonae drepte, uneori coco-bacterii Gram negative, uneori colorate bipolar, acapsulate,
asporulate, imobile la 37 C.
Caractere de cultur yersiniile sunt mi/o anaerobe facultative, cultiv pe medii uzuale la 25-28 C.
n BP cultura se manifest printr-un voal la suprafa i un aspect floconos n interior. Pe geloz peste 48h apar colonii R mari, cu margini
neregulate
Activitate biochimic catalaza+, oxidaza-, fermenteaz glucoza, reduce nitra ii n nitri i.
Rezistenta: Yersiniile sunt rezistente n mediul extern i n cadavre de animale.
Dup neptura unui purice infectat, germenul se multiplic la locul de inoculare cu formarea unei vezicule-pustule apoi ptrund n sistemul
limfatic i colonizeaz ganglionii regionali n care se multiplic. Peste 2-5 zile apar semne de limfadenit hemoragic (bubonul pestos). Pesta
bubonic 90% din cazurile de pest.
Diseminarea hematogen permite bacteriilor s ating ansamblul organelor cu apariia semnelor clinice de septicemie. Afectarea plmnilor
duce la pesta pulmonar secundar, cu expectoraii sanguinolente bogate n germeni, foarte contagioase. Contactul cu ace ti pacien i duce,
prin contact direct, la apariia pestei pulmonare primare care prezint o mortalitate de 90-100% n lips de tratament.
Prelevate: punctat din bubon, sput, snge. Toate prelevatele de la o persoan infectat sunt foarte contagioase i manipularea lor cere msuri
special de precauie.
Examenul direct Examenul microscopic al punctatului din bubon colorat Gram sau Giemsa poate fi evocator (bacterii Gram-, ovoide, cu
coloraie bipolar). RIF nu este destul de semnificativ, deoarece exist recii ncruciate cu alte yesinii. Examenul bacteriologic (izolarea culturii
pure cu identificarea ei ulterioar) este o investigaie de baz.
n pesta pulmonar, diagnosticul este confirmat prin izolarea culturii din sput sau din aspirat bronic. Hemocultura (izolarea culturii din snge)
reprezint examenul-cheie n forma septicemic. Pot fi examinate i probe necroptice, deoarece germenul este foarte rezistent n cadavre n curs
de putrefacie. Depistarea rapid a antigenelor F1.
Tratamentul pestei: Antibiotice (streptomicin, gentamicin, doxiciclin, cloramfenicol)
Profilaxia pestei: Izolarea bolnavilor; Persoanele de contact carantin 6 zile

90. Gangrena gazoasa. Clasificarea agentilor etiologici (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate (exotoxine, enzime).
Manifestarile clinice in dependenta de specia microbiana. Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Metoda microscopica, izolarea si
identificarea culturii pure. Diagnosticul rapid. Profilaxia si tratamentul specific al gangrenei gazoase.
Particulariti ale bacteriilor anaerobe: Oxigenul este toxic (lipsa superoxid dismutazei/catalazei, peroxidazei); Cresc n lipsa
oxigenului/potenial redox sczut; Energia este obinut prin fermentare
Circumstane ce favorizeaz infeciile cu anaerobi: Hipoxii tisulare (ateroscleroz, necroz, tumoare malign, corp strin...); Tratament prelungit
cu aminozide; Stri de imunosupresie sau imunodepresie
CLASIFICAREA ANAEROBILOR
Bacterii telurice (sporogene). Prezente n sol, supravieuesc graie sporilor termorezisteni.
Familia Bacillaceae, Genul Clostridium, C. perfringens, C.septicum, C.novyi (oedematiens), C.histolyticum agenii gangrenei gazoase;
C.tetani agentul tetanosului; C.botulinum agentul botulismului; C.difficile agentul colitei pseudomembranoase. Patogene, provoac infecii
specifice necontagioase
CLOSTRIDIILE GANGRENEI GAZOASE
Agenii cauzali: C.perfringens (serotipuri A, B, C, D, E); C.novyi (oedematiens); C.septicum; C.histolyticum
Caractere morfotinctoriale: C. perfringens - bastona gram+ imobil, capsulat, sporogen (sporul oval sau rotund, central sau subterminal,
deformeaz celula bacterian). Alte clostridii mobile, necapsulate
Medii de cultur: Kitt-Tarrozzi regenerat, geloz-snge glucozat, geloz cu glbenu de ou i lactoz, Wilson-Blair
Colonii C.perfringens lenticulare, hemolitice, clostridiile mobile colonii R, pufoase. Manifest activitate proteolitic (digestia cazeinei,
producerea H2S, gelatinaza) i zaharolitic cu producere abundent de gaz.
TOXINE: Toxina alfa (lecitinaza) mionecroz, hemoliz, trombocitoliz, dereglri de coagulare, creterea permeabilitii vasculare,
inactivarea ATPazei musculare, hipotensiune, bradicardie, oc; Toxina teta necrozant, hemolitic; Toxina beta necroza epiteliului intestinal;
Enterotoxina perturb transportul apei, ionilor i a glucozei prin membrana enterocitelor
ENZIME DE PATOGENITATE: colagenaza (toxina kappa), proteinaza (toxina lambda), elastaza, hialuronidaza (toxina Mu), ADN-aza (toxina
Nu), etc. CAPSULA rol antifagocitar
HABITAT sol, ap, aer, praf; Intestin, vagin, tract respirator superior (om i animale)
Forme clinice: Gangrena gazoas (post-traumatic, post-operatorie); Mionecroze ; Celulite, fasciite; Septicemii; Toxiinfecii alimentare; Enterita
necrozant

48
Patogenia gangrenei gazoase - Pori de intrare tegumentul sau mucoasele lezate.
Omul se contamineaz: Exogen - bacteria sau sporul ptrunde n plaga contaminat cu sol, ap, praf (accidente rutiere, de munc, etc.)
gangrena gazoas post-traumatic; gangrena gazoas uterin (urmare a avortului septic).
Endogen flora intern a bolnavului contamineaz plaga (chirurgie septic visceral, chirurgia ortopedic, etc) - gangrena gazoas post-
operatorie. Gangrena spontan in cancer intestinal.
Condiii suplimentare pentru apariia infeciei:
1. Traumatisme cu necroz tisular, hematom, corpuri strine
2. Penetrare profund a germenului
3. Potenial rH2 sczut (- 0,5 V)
4. Multiplicarea bacteriilor aerobe asociate (enterobacterii, enterococi, stafilococi)
5. Imunitate deficitar (radioterapie, imunosupresori, antibioticoterapie neadecvat, etc)
6. Injecia substanelor vasoconstrictive
Multiplicndu-se bacteriile degradeaz esuturile, distrugndu-le din aproape n aproape, fiind responsabile de extensia infeciei i de toxemie.
Produsele gazoase formate produc disecia esuturilor.
Clinic: durere local, edem, mionecroz, crepitaie la palpare, scurgeri sero-hemoragice, stare general grav (febr, hipotensiune, bradicardie,
perturbri de coagulare, oc, posibil deces)
Alte forme clinice cauzate de C. perfringens celulite, fasciite, enterit necrozant, toxiinfecii alimentare

DIAGNOSTICUL GANGRENEI GAZOASE

Clinic crepitaie, miros fetid, scurgeri hemoragice din plag. Confirmare prin diagnostic microbiologic
Prelevate: puroi, snge, lichid seros, bioptate. Precauii la prelevare: excluderea contactului cu aerul, transportare imediat sau utilizarea
mediilor de transport lipsite de oxigen.
Examenul microscopic bastonae gram+, n cantiti mari, asociate cu reacie leucocitar slab Intervenie chirurgical imediat !!!!!
Examenul bacteriologic condiii anaerobe (anaerostat, gaz-pachete, medii anaerobe), metode clasice (Zeissler, Weinberg). Important: bacterii
aerobe sau facultative asociate
Tehnici de amplificare genic
Diagnostic rapid Mediul Kitt-Tarrozzi, mediul cu lapte, mediul Wilson-Blair
Tratament: Chirurgical (debridarea plgilor, eliminarea maselor necrotizate i a corpurilor strine, drenarea); Administrarea serului antitoxic
polivalent (anti-C.perfringens, C.novyi, C.septicum); Antibioterapia cu asociaii de antibiotice (beta-lactamine, aminozide, metronidazol);
Oxigenoterapia hiperbar incizii cutanate
Profilaxia: prelucrarea minuioas a plgilor, eliminarea corpurilor strine i a esuturilor necrotice, seroterapie preventiv, anatoxina,
antibioterapie, supravegherea bolnavilor

91. Tetanosul. Clasificarea agentului (familie, gen, sp.), factorii de patogenitate. Patogeneza tetanosului, evolutia simptomelor
clinice. Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Metoda microscopica, izolarea si identificarea culturii pure. Profilaxia si tratamentul
specific al tetanosului.
Agentul cauzal C.tetani
Caractere morfotinctoriale bastona mobil, cu flageli peritrichi, sporogen. Sporul rotund este plasat terminal (bastona de tob). Gram+. Inert
biochimic.
Rezistena forma vegetativ este sensibil, sporul supravieuiete n sol decenii.
Toxina tetanic: Tetanolizina hemoliz; Tetanospasmina contracturi ai muchilor striai. Compus din 2 fragmente proteice: fragmentul A
(toxic, neimunogen) i fragmentul B (atoxic, imunogen).

Habitat sol, intestinul omului, animalelor

Pori de intrare tegumentul, mucoasele lezate (plgi, arsuri, mucoasa uterin post-partum, intervenii chirurgicale, ulcere varicoase, focare
dentare, droguri intravenoase, etc.), cordonul ombilical la nou-nscui.
C. tetani este o bacterie ne-invaziv, multiplicndu-se la poarta de intrare i elabornd toxina, care difuzeaz n organism.
Mecanismul de aciune al toxinei: la nivelul plcii motrice neuro-musculare toxina complet penetreaz ntr-o vezicul de endocitoz, fiind
transportat pe calea retro-axonal pn la prima sinaps a mduvei spinrii. Aici toxina traverseaz spaiul intersinaptic i urmeaz calea spre
SNC. Locul de atac al toxinei l constituie sinapsa dintre motoneuron i neuronii cilor de inhibiie. Tetanospasmina blocheaz eliberarea
glicinei (inhibitor al motoneuronului) de ctre interneuron i permite contracia simultan a perechilor de muchi protagonist-
antagonist, producnd paralizie spastic (rigid)
Clinica tetanosului: Incubaia 6-15 zile (3 zile-3 sptmni). Semne clinice trismus (contractur dureroas a muchilor masticatori), facies
sardonicus (contracii ale muchilor feei), anxietate, contracturi generalizate cu paroxisme spontane sau declanate de stimuli externi (zgomot,
lumin, etc), poziia corpului n form de arc (opistotonus), dereglri de vorbire. Febra lipsete. Moarte prin asfixie (spasm laringean) sau stop
cardiac.
Diagnostic de laborator. Prelevate: secreii din plag, material de pansament, medicamente, etc. Examenul microscopic (de orientare).
Examenul bacteriologic (tardiv, de confirmare). Examenul biologic (depistarea toxinei prin infectarea oriceilor cu apariia semnelor clinice ale
maladiei peste 24-48 ore), identificarea toxinei prin RN cu anti-seruri. Examenul serologic dozarea antitoxinelor pentru studierea imunitii
populaiei (RP, RLA, RHAI, ELISA)
Tratament: Ser imun antitetanic (gama-globulin specific) intramuscular, intravenos; Anatoxin tetanic; Tratament simptomatic (sedative,
miorelaxante, antibioterapie, respiraie asistat, etc)
Profilaxie: Imunizarea activ cu anatoxin tetanic (conform calendarului vaccinrii ADTP, ADT, AT); n caz de plag: prelucrarea corect,
anatoxin, ser imun antitoxic

92. Botulismul. Clasificarea agentului cauzal (familie, gen, sp.), factorii de patogenitate. Patogeneza botulismului, principalele
simptome clinice ale intoxicatiei botulinice. Diagnosticul microbiologic. Materiale de examinat. Depistarea si identificarea toxinelor
botulinice. Izolarea si identificarea C.botulinum. Profilaxia si tratamentul specific al botulismului.
Agentul cauzal C.botulinum
Caractere morfotinctoriale bastona mobil, sporogen, gram+. Sporul este ovoid, subterminal (aspect de rachet de tenis), termorezistent,
distrus la 120 grade 15 minute (autoclavare). Scindeaz proteinele i glucidele cu formare de gaze i acizi (acetic, butiric, lactic, etc).

49
Factori de patogenitate toxina botulinic serotipuri A,B,C,D,E,F,G. Este de natur proteic, antigenic, specific de tip, transformabil n
anatoxin. Doza letal pentru om 1-2 g. Stabil n mediu acid i la aciunea enzimelor digestive. Poate fi distrus prin nclzire 15 min la 80
grade sau 10 min la 100 grade.
Habitat mixt sol, ape i flora comensal a omului i animalelor
Transmiterea: Alimentar (alimente conservate n cas: crnai, unc, jambon, pete srat sau afumat, conserve de fructe i legume)
Condiii favorabile toxigenezei: Salinitate insuficient (mai mic de 10 %); -Temperatura peste 16 grade; Anaerobioz (alimente compacte sau
ambalaje ermetice); -Prezena glucidelor (conserve de fructe, legume); Timp suficient pentru producerea toxinei (cel puin 8 zile)
Botulismul infantil apare la sugari sub 6 luni (germinarea n intestin a sporilor vehiculai prin alimente)
Perioada de incubaie 18-96 ore
Toxina ingerat este absorbit n sistemul limfatic intestinal, apoi n snge. Acioneaz la nivelul periferic asupra sinapselor cu acetilcolina ca
mediator (jonciunile neuro-musculare).
Mecanismul aciunii botulotoxinei: inhib eliberarea acetilcolinei din veziculele sinaptice rezultnd blocarea stimulrii nervoase a muchiului
(paralizii flasce).
Semne clinice : Paralizii n sfera nervilor cranieni: diplopie, ptoz palpebral, midriaz, disfagie, disartrie, senzaie de sete; Paralizii descendente;
Dereglri digestive: nausee, vom, constipaie; Lipsa febrei i a dereglrilor cardiace
Cauza decesului: paralizie flasc a muchilor respiratori sau stop cardiac
Diagnostic microbiologic
Prelevate: ser sangvin, extract din alimente, mase vomitive, mase fecale
Depistarea toxinei (RN pe oareci, RP, RHAI, RCoA, RLA, ELISA)
Tehnici de biologie molecular
Examenul bacteriologic este suplimentar!

TRATAMENTUL I PROFILAXIA BOTULISMULUI

Tratament specific: seroterapie precoce (ser polivalent, apoi monovalent) asociat cu anatoxinoterapie
Profilaxie: nespecific

93. Difteria. Clasificarea agentului patogen (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Patogeneza difteriei si formele clinice.
Diagnosticul microbiologic. Prelevate patologice. Microscopia directa, izolarea si identificarea culturii pure (proba Pizu, Zacs,
determinarea toxigenezei, diferentierea biovariantelor). Profilaxia si tratamentul specific al difteriei.
DIFTERIA toxiinfecie acut, caracterizat printr-o angin pseudo-membranoas cu efecte toxice la distan (miocardul, SNC i rinichii).
Este provocat de mi/o din genul Corynebacterium.
Genul Corynebacterium se caracterizeaz prin prezena in componena peretelui celular:
o Acidului mezo-diaminopimelic
o Acizilor micolici cu caten scurt (22-38 atomi de C)
o Coninutul GC ntre 46-74 %.
Prezint asemnri cu mi/o din genurile Mycobacterium i Nocardia.

Clasificarea genului Corynebacterium

Corinebacterii fitopatogene
Corinebacterii patogene pentru animale, care afecteaz accidental omul: C.pseudotuberculosis, C.ulcerans
Corinebacterii cu tropism uman:
Specie patogen: C.diphtheriae (biovaruri gravis, mitis, intermedius)
intermedius)
Specii comensale (specii pseudodifterice, difteroizi): C.xerosis, C.pseudodiphthericum, C.jeikeium,
C.jeikeium, etc
Caractere morfotinctoriale ale C.diphtheriae
Bacterii (bastonae) drepte sau puin ncurbate, cu extremitile rotunjite sau ngroate (aspect de halter sau de mciuc). n frotiuri se aranjeaz
ungiular, n palisade sau sub forma caracterelor chinezeti, cifre romane sau litere majuscule: Y, M, N, V... Imobile, asporogene, necapsulate.
necapsulate.
Se coloreaz G+,
G+, pentru evidenierea granulaiilor de volutin - Loeffler, Neisser.
Caractere de cultur i biochimice
C.diphtheriae este o specie facultativ anaerob, posed catalaz, citocromi a,b,c, oxidazo-.
Temperatura optim de cultivare 37
37C, pH 7,4.

Medii de cultur elective: Mediul Loeffler (ser bovin coagulat): colonii S, mici, netede, opace, albe-cenuii, apar peste 16-24 ore de cultivare;
Geloz-snge
Medii de cultur selective difereniale: Mediul Clauberg (geloz-snge cu telurit de potasiu). C.diphtheriae gravis: colonii R, mari, negre,
crenelate, aspect de floare de margaret, nehemolitice; mitis:
mitis: colonii S, mijlocii, negre, bombate, cu zon de hemoliz; Mediul Tinsdale
(geloz-ser-cistin-telurit de potasiu-tiosulfat) - colonii negre cu halou brun ; Mediul Bucin (geloz-snge cu hinozol) colonii albastre
Medii de transport: geloz-ser semilichid cu telurit de K; Mediul OCST (ou-cistin-ser-telurit)
Activitatea biochimic a C.diphtheriae:
Proteolitic: Ureaza- (testul Zaks), cistinaza+ (testul Pizu), indol-. Zaharolitic: Gravis:
Gravis: glucoza+, amidon+, zaharoza-; Mitis:
Mitis: glucoza+,
amidon-, zaharoza-. Se disting 22 lizotipuri de C.diphtheriae i multiple serogrupuri (antigen O polizaharidic) i serovaruri (antigen K proteic).
Factori de patogenitate
1. Toxina difteric - origine proteic, secretat de tulpinile lizogene (profagi Tox+), n prezena unor cantiti reduse de Fe. Exotoxin
tipic (fragmente polipeptidice A i B). Mecanismul de aciune - stoparea sintezei proteice prin inactivarea factorului de elongare EF-2
(activitate de ADP-riboziltransferaz). Conduce la moartea celulei afectate. Toxina difuzeaz n organism perturbnd funcionarea
diferitor organe (SNC, cord, rinichi). Poate fi transformat n anatoxin, utilizat n vaccinare.
2. Enzime de patogenitate: hialuronidaza, neuraminidaza

Sursa de infecie:
infecie: bolnavul cu difterie i purttorii sntoi de germeni (colonizeaz rinofaringele, rareori tegumentul sau conjunctiva).
Mecanismele i cile de transmitere:
transmitere: Direct pe cale aerogen (picturi) sau contact cu plgi contaminate. Indirect prin obiecte (jucrii, cri), praf
sau alimente contaminate (lactate).
La poarta de intrare bacteriile se multiplic i provoac un focar inflamator local, determinat de aciunea toxinei, care fiind ulterior difuzat pe
cale limfo- i hematogen provoac starea de intoxicaie general. Focarul inflamator se localizeaz n faringe (angina difteric), mai rar n
50
laringe (crupul difteric), nas, urechi, conjunctiv, mucoasa organelor genitale, plgi cutanate. Leziunile locale se caracterizeaz prin inflamaie
fibrinoas. Exotoxina cauzeaz necroz, dilatarea vaselor i creterea permeabilitii, eliminarea fibrinogenului, care coaguleaz cu formarea
unei pseudomembrane fibrinoase. Ea conine bacterii, hematii, PMN i celule necrozate. Se detaeaz dificil, nu se dizolv n ap, este
reproductibil in situ n cteva ore. Membrana are tendin s se extind. n forma malign difteria este nsoit de edem al gtului, semne toxice
i paralizia vlului palatin. Intoxicaia general afecteaz SN (disfagie, paralizii), sistemul cardio-vascular (miocardite), suprarenalele
(insuficien a suprarenalelor), rinichii (nefroz). Tulpini de C.ulcerans pot produce toxin identic cu cea difteric.
Metode de diagnostic
1. Examenul microscopic (Gram, Loeffler, Neisser),
Neisser), microscopia
microscopia imunofluorescent
2. Examenul bacteriologic (izolarea, identificarea culturii pure). Studierea toxigenezei obligator. Se efectueaz prin RN cu ser antitoxic
in vivo (cobai), in vitro (RP Elek), sau depistarea genei Tox n prelevat sau n cultura pur prin PCR.
3. Examenul serologic retrospectiv,
RA cu seruri perechi (I sptmn i a IIIa) i cultur de C.diphtheriae.
C.diphtheriae. Titru semnificativ
semnificativ 1:100 sau creterea titrului de Ac.
Evaluarea titrului de antitoxine n serul bolnavului. La debutul bolii el este absent sau nu depete 0,5 UI/ml
Receptivitatea la difterie poate fi determinat prin: Testul Schick (in
(in vivo);
vivo); RN in vitro; RHAI; ELISA;
Titru antitoxinelor > 0,1 UI/ml protector
Titru inferior 0,01 UI/ml
UI/ml lipsa proteciei
Tratamentul difteriei: Seroterapie precoce (ser antitoxic antidifteric, Ig). Neutralizeaz activitatea toxinei, blocnd fixarea ei pe receptorii
celulari. Antibioticoterapie (macrolide, tetracicline, cloramfenicol, aminozide, beta-lactamine). Asigur eradicarea germenilor. Tratament
simptomatic
Profilaxia specific a difteriei: Vaccinarea obligatorie a copiilor conform calendarului de vaccinri cu anatoxin difteric. Exist vaccinuri
asociate: ADT, ADTP. Vaccinarea primara cu ADTP la 4-5-6 luni, revaccinarea la 22-24 luni cu ADTP, la 6-7, apoi la 14-15 ani cu ADT. Recent
a fost obinut un vaccin sintetic antidifteric. Reprezint un polipeptid situat la jonciunea fragmentelor A i B a toxinei difterice, o molecul
peptidic purttoare i un adjuvant sintetic.

94. Tusea convulsiva. Clasificarea agentului cauzal (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Patogeneza tusei convulsive, stadiile
bolii. Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Izolarea (metode de insamintare) si identificarea culturii pure, metoda serologica. Profilaxia
si tratamentul specific al tusei convulsive.
Familia Halobacteriaceae
Genul Bordetella
Specii:
Bordetella pertussis (agentul tusei convulsive)
Bordetella parapertussis (agentul parapertusei)
Bordetella bronhiseptica (pneumonii, bacteriemii)
Bordetella avium
Bordetella holmensii (izolat din hemoculturi)
Bordetella hinzii (izolat din prelevate respiratorii)
Bordetella trematum (infecii cutanate i auriculare)

Caractere morfobiologice B. pertussis

Cocobacterii G-,
G-, asporogene, imobile, formeaz microcapsul, n frotiu se dispun separat, n perechi sau lanuri scurte. Reprezint mi/o strict
aerobe, foarte pretenioase la cultivare.
Medii speciale de izolare: mediul Bordet-Gengou (geloz-snge cu amidon i glicerin); geloz-cazein-snge-crbune activat
Mediul de transport Kuzneov (soluie tampon fosfat, 0,5% agar-agar, 0,2% crbune activat)
Peste 3-5 zile de incubare n atmosfer umed la 3737 C apar colonii S mici, bombate, lucioase, cu aspect de picturi de mercur, hemolitice
(corespund bacteriilor virulente faza I), forme R avirulente, faza IV.
B.pertussis manifest activitate biochimic redus: oxidaza+, nu fermenteaz glucidele, ureaza-, nitrat-reductaza- .
Structura antigenic a B.pertussis este complex: Ag capsulare polizaharidice; Ag proteice; Ag fimbrial ; (hemaglutinina); Ag
lipopolizaharidic.
Factorii de patogenitate. Adezine: Hemaglutinina filamentoas (purtat de pili). Permite ataarea bacteriei la mucoasa tractului respirator, de
asemenea se fixeaz pe macrofagi i limfocite. Aglutinogene.
Aglutinogene. Proteine de suprafa situate pe fimbrii. Particip la ataarea B.pertussis la celulele
epiteliale. Pertactina.
Pertactina. Protein a membranei externe, permite fixarea pe membrana celulelor eucariote Subunitatea B a toxinei pertusice.
pertusice. Se
fixeaz pe leucocite i mpiedic migrarea lor spre focarul inflamator. Toxine: Toxina pertussis (citotoxin de tip A-B). Acioneaz asupra
diferitor celule eucariote, mrind concentraia intracelular de AMP ciclic (n special n celulele epiteliale ale TR). Provoac hiperlimfocitoz,
sensibilizare la histamin, hipersecreie de insulin. Adenilat-ciclaza-hemolizin.
Adenilat-ciclaza-hemolizin. Hemolizina provoac moartea macrofagelor i monocitelor,
adenilat-ciclaza perturb activitatea bactericid a PMN, monocitelor i macrofagelor i stimuleaz secreia sero-mucoas a cilor respiratorii.
Toxina dermonecrotic.
dermonecrotic. Se elibereaz n urma lizei bacteriene. Toxina citotraheal.
citotraheal. Glicopeptid care inhib sinteza ADN, provocnd
distrugerea celulelor ciliate Endotoxina

Sursa de infecie omul bolnav, n special n perioada de debut al bolii.

Mecanismul de transmitere aerogen, prin picturi
B.pertussis manifest tropism pentru mucoasa cilor respiratorii: faringe, trahee, bronii, bronhiole, chiar alveole. Alterarea epitelilului ciliat
mpiedic eliminarea mucusului, el fiind eliminat doar prin tuse. Tusea survine din cauza iritaiei mucoasei de ctre endotoxina bacterian.
Excitaia de lung durat a receptorilor terminali ai nervului pneumogastric determin un flux continuu de impulsuri n bulbul rahidian, ce duce
la formarea unui focat de excitaie dominant. El atrage excitaii nespecifice de la ali receptori, fapt ce determin accesele de tuse, care devin tot
mai grave i mai frecvente. Un stimul puternic poate stinge dominanta, cu atenuarea tusei. Focarul este foarte stabil, persist i dup dispariia
bacteriei din organism. n evoluia tusei convulsive se disting 4 stadii (perioade):
Perioada de incubaie (3-15 zile)
Perioada cataral,
cataral, foarte contagioas. Caracterizat prin tuse seac, rinoree (3-14 zile)
Perioada convulsiv (paroxistic). Accese de tuse spasmodic, epuizant, asociat cu cianoz, vom, convulsii. (2-4 sptmni)
Perioada de convalescen (2-4 sptmni)
Complicaii grave sunt posibile la copiii sugari: bronho-pneumonii, encefalite. Imunitatea este durabil, umoral. Rol protector au Ac anti-toxin
pertussis i anti-hemaglutinin filamentoas.
51
Prelevate:
Prelevate: mucoziti nasofaringiene sau bronice, recoltate ct mai precoce.
Metode de diagnostic: RIF; Examenul bacteriologic (nsmnare cu tamponul sau prin tehnic plcilor tuite); Tehnnici de biologie
molecular (PCR); Examenul serologic (RA, RFC, ELISA). Reaciile se pozitiveaz din sptmna a II a perioadei convulsive. Se examineaz
seruri perechi prelevate la interval de 14-21 zile. Semnificativ este o cretere de cel puin 4 ori a titrului Ac.

Tratamentul: Eritromicin sau cloramfenicol cel puin 10 zile (pn la apariia Ac); Imunoglobulin uman antipertussis
Profilaxia specific: Imunizarea artificial obligatorie cu vaccin ADTP. Componentul antipertusic este reprezentat de o suspensie de bordetele
de faza I, adsorbite pe adjuvant. Vaccinul acelular conine unele componente bacteriene (anatoxina pertussis, hemaglutinina filamentoas). Este
mai bine tolerat, dar mai puin eficace. Imunoglobulin uman antipertussis

95. Tuberculoza. Clasificarea agentilor cauzali (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate. Primoinfectia tuberculoasa -
granulomul tuberculos, complexul primar. Evolutia procesului infectios la indivizii cu rezistenta necompromisa. Diagnosticul
microbiologic. Metoda alergica (proprietatile tuberculinei), metodele rapide. Profilaxia specifica a tuberculozei.
Familia Mycobacteriaceae
Genul Mycobacterium
Specii:
o Responsabile de tuberculoza uman: M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum (complex tuberculosis)
o Agentul leprei: M.leprae (strict uman)
o Micobacterii atipice, condiionat patogene: M.avium, M.ulcerans, M.fortuitum,
M.fortuitum, M.kansasii, M.marinum, etc. Cauzeaz
micobacterioze la persoane imunocompromise.
o Micobacterii nepatogene: M.smegmatis, M.gastri, M.phley

Caracteristica general a micobacteriilor:

micobacteriilor: bastonae G+ drepte sau uor ncurbate, necapsulate, asporogene, imobile, acido-alcoolorezistente prin
tehnica de colorare Ziehl-Neelsen.
M.tuberculosis este o bacterie patogen strict uman, responsabil de tuberculoz. Este sensibil la cldur, lumin solar direct, raze UV sau
X. Rezistent la frig sau desicare. Este puin sensibil la acizi, baze (se utilizeaz n decontaminarea prelevatelor) sau detergeni i foarte
sensibil la soluia de alcool de 70
70.
Caractere morfotinctoriale: M.tbc este un bastona fin sau uor ncurbat, n frotiu se observ izolat, n grmezi sau corzi. Se coloreaz in rou
prin tehnica Ziehl-Neelsen.
Caractere de cultur: M.tbc este o bacterie strict aerob, foarte exigent la cultivare. Toate mediile de izolare au la baz ou coagulat. Mediul de
referin Lowenstein-Jensen (ou, glicerin, asparagin). Alte medii solide Popescu (acid glutamic in locul asparaginei),
asparaginei), Finn (glutamat de
Na). Mediul lichid Sauton.
Sauton. Contine saruri minerale, asparagina, glicerina. M.tbc creste in 8-10 zile sub forma de voal. Micobacteriile patogene
cresc lent (perioada de generaie 20 ore), la 37
37C, pH 6,8-7,0. Coloniile de M.tbc apar peste 2-4 sptmni, sunt colonii R, rugoase, friabile,
conopidiforme, opace, de culoare crem-bej. M.bovis i M.africanum formeaz colonii S, mici, netede, nepigmentate, vizibile peste 4-8
sptmni.
Activitatea biochimic a micobacteriilor patogene: Toate micobacteriile patogene produc o catalaz termolabil, distrus la 68 C timp de 20
min. Celelalte micobacterii posed catalaz termostabil. M.tbs i M.bovis hidrolizeaz ureea. M.tbc produce acid nicotinic (niacin), reduce
nitraii n nitrii. M.bovis nu manifest astfel de activitate.

Compoziia chimic i factorii de patogenitate ai micobacteriilor

Lipidele constituie 20-45% din masa celulei. Sunt reprezentate de acizi micolici i ceruri (condiioneaz transformarea macrofagelor n celule
epitelioide i celule gigante Langhans). Cord-factorul (sulfo-lipid) perturba respiraia n mitocondrii, induce cultivarea n corzi (cosie) a M.tbc.
M.tbc.
Polizaharidele joac un rol important n formarea Ac serici, conferind specificitatea imunologic.
Proteinele reprezint suportul imunitii celulare i a hipersensibilitii tardive.

Sursa de infecie omul bolnav cu TBC cu leziuni pulmonare cavitare deschise n bronsii (M.tbc,(M.tbc, M.africanum)
M.africanum) sau bovinele bolnave (M.bovis
(M.bovis).
).
Transmiterea se efectueaz pe cale aerian (picturi, praf). Rareori este posibil contaminarea prin obiecte, alimente (lapte nepasteurizat) sau
mini contaminate. Receptivitatea este influenat de vrst i factorii de mediu: carene nutritive, alcoolism, tratament imunosupresiv, etc
Primoinfecia tuberculoas. Reprezinta un ansamblu de manifestari clinice, umorale si anatomice care se desfasoara in organism in urma
primului contact cu agentul TBC. Dup contaminare (mai frecvent in copilarie),
copilarie), la poarta de intrare (90% - tractul respirator), bacteriile sunt
captate de macrofage n care se multiplic (bacterii facultativ intracelulare, mpiedic formarea fagolizosomei). Apare o leziune inflamatoare
nespecific. Peste cteva sptmni (4-12) se dezvolt o imunitate celular i leziunea exsudativ evolueaz n leziune granulomatoas. Sub
aciunea unor citokine macrofagii activai se difereniaz n celule epitelioide i celule multinucleate gigante. Ele sunt nconjurate de limfocite i
fibroblaste. Acesta este granulomul tuberculos, semn caracteristic primo-infeciei. Infecia se extinde pe cale limfatic, cu afectarea ganglionilor
regionali.
Primoinfecia inaparent.
inaparent. La cca 85% leziunile se vindec i se pot autosteriliza. Nici o expresie clinic sau radiologic.
Tuberculoza primar subclinic.
subclinic. Dac multiplicarea bacteriilor este masiv, n leziunile tuberculoase se realizeaz o necroz cazeoas
(tuberculom). Frecvent are loc calcifierea tuberculomului (leziunea este vizibil radiologic), cu autosterilizarea spontan sau cu persistena unor
bacterii n leziune.
Consecinele primoinfeciei inaparente sau subclinice:
subclinice: dezvoltarea imunitii antituberculoase i a sensibilizrii tuberculinice.
Tuberculoza primar manifest necomplicat. Pacienii au febr, astenie, pierdere n greutate, etc. Etapa ganglionar poate fi depit cu
diseminri hematogene i afectarea pleurei, meningelui, mduvei osoase, parenhimei organelor. Leziunile pot evolua fie spre agravare, fie spre
cicatrizare.
Primoinfecia cu complicaii.
complicaii. Rareori (10% cazuri), evoluia este defavorabil: masele necrotice sunt evacuate n bronii, vase sanguine, pleur
sau pericard cu formarea unei caverne, unde bacteriile se multiplic intens. Fistulizarea ntr-un vas sangvin disemineaz infecia sistemic
(tuberculoza miliar). Starea general este alterat, apare febr, tuse, uneori hemoptizie. Bolnavul este contagios, eliminnd bacterii cu sputa.
Tuberculoza secundar.
secundar. Se manifest n condiii de scdere a reactivitii imune, reinfecii masive sau reactivarea unor focare latente. Focarele
noi apar n ritm lent i evolueaz cronic fr tendin de vindecare spontan.
Alte forme clinice de tuberculoz:
tuberculoz: ganglionar, meningean, osteo-articular, uro-genital.
Imunitatea antituberculoas este celular, nesteril. Hipersensibilitatea tardiv nsoete imunitatea celular. Ac circulani nu au rol protector.

52
96. Tuberculoza. Clasificarea agentilor patogeni, factorii de patogenitate. Evolutia procesului infectios in tuberculoza pulmonara la
gazda inalt receptiva. Diagnosticul microbiologic. Prelevatele: recoltarea, omogenizarea, decontaminarea. Concentrarea micobacteriilor
din sputa. Microscopia directa, izolarea si identificarea micobacteriilor. Determinarea spectrului de sensibilitate la antibiotice si
chimioterapice. Tratamentul specific al tuberculozei. Strategia DOTS.
Diagnosticul de laborator al tuberculozei
Prelevate:
Prelevate: n funcie de forma clinic
n caz de necesitate se efectueaz omogenizarea (decontaminarea) i concentrarea prelevatelor.
Metode de diagnostic
Examenul microscopic frotiuri colorate Ziehl-Neelsen (bastonae purpurii izolate) sau cu auramin (bastonase galbene pe fondul negru). negru).
Examenul bacteriologic izolarea culturii pure pe mediile speciale, identificarea ei, testarea sensibilitii la chimioterapice (prin metoda
diluiilor n mediu solid)
PCR pentru detectarea rapid a micobacteriilor direct n prelevate
Intradermoreacia la tuberculin (reacia Mantoux). Se cerceteaz starea de hipersensibilitate cutanat la tuberculin. Tuberculina reprezint un
filtrat dintr-o cultur bulionic autoclavat de M.tuberculosis.
Pe faa anterioar a antebraului se injecteaz i/dermic 2, 5 sau 10 UI de tuberculin n volum de 0,1 ml. Lectura peste 72 ore. Reacia pozitiv se
manifest printr-o induraie i congestie cu diametrul superior sau egal cu 5 mm. Interpretarea se efectueaz n funcie de contextul clinic
Reacia + indic c subiectul a fost infectat cu micobacterii (primoinfecie), a fost vaccinat cu BCG sau este bolnav de tuberculoz (n acest caz
diametrul depete 10 mm).
Reacia negativ exclude diagnosticul de tuberculoz.
Tratamentul tuberculozei: Antibiotice cu spectru larg: rifampicin, streptomicin, kanamicin; Fluorochinolone; Chimioterapice care inhib
sinteza acizilor micolici (Izoniazida, Pirazinamida, Etambutolul, Etionamida)
Exigenele terapiei antituberculoase: a mpiedica selecia mutanilor rezisteni i a steriliza definitiv focarul.
n acest scop se utilizeaz asocierea a 3-4 droguri pe o perioad de 6-12 luni.
Profilaxia specific: Vaccinarea obligatorie cu vaccinul BCG. El reprezint o tulpin vie avirulent de M.bovis.
M.bovis. A fost obinut de Calmette i
Guerin n 1921 dup multiple repicri (230 pasaje) pe mediu cu cartof, bil i glicerin.
Vaccinul se administreaz i/dermic la vrsta de 4-5 zile de la natere. Revaccinarea la 7 ani, apoi peste fiecare 5 ani (persoanele cu reactia
Mantoux negativa). Revaccinarea se efectueaz la 7 ani persoanelor cu proba Mantoux negativ.

97. Sifilisul. Clasificarea agentului cauzal (familie, gen, sp.), factorii de patogenitate. Patogeneza si stadiile infectiei. Sifilisul
congenital. Diagnosticul microbiologic al sifilisului. Prelevatele in dependenta de stadiile bolii. Metoda microscopica. Metoda serologica.
CLASIFICAREA SPIROCHETELOR
Spirochetele bacterii helicoidale, flexibile i mobile (fibrile interne), rspndite n natur, unele comensale ale mucoaselor umane.
Familia: Spirochaetaceae Familia: Leptospiraceae
Genuri: Treponema, Borrelia, Spirochaeta, Cristispira Genul: Leptospira

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SIFILISULUI

Genul Treponema
Specii : T.pallidum (patogen)
subspecii (variante):
o T.pallidum pallidum (agentul sifilisului)
o T.pallidum endemicum (agentul bejelului, sifilis endemic nevenerian leziuni cutanate)
o T. palidum pertenue (agentul pianului, maladie cutanat, nevenerian, zone tropicale i subtropicale)
o T. carateum (agentul pintei/carate, nevenerian, America Central i de Sud)
Treponeme comensale:
Orale (T.denticola, T.orale, etc)
Genitale (T.phagedenis, T.refringens, etc)

T.pallidum bacterie fin, helicoidal, cu 8-14 spire regulate i capetele ascuite, mobil cu micri de flexie, nurubare i translaie. G -
Evidenierea: preparate native (microscopul cu fond negru, contrast de faz); nu se coloreaz dup Gram; Romanovsky-Giemsa roz-pal;
impregnaie cu sruri de argint (filamente negre-brune pe fondul galben); frotiuri Burri necolorate pe fondul negru

Cultivarea T.pallidum in vitro imposibil. Pasaje succesive n testicule de iepure (tulpina Nichols de T.pallidum). Suspensii de astfel de
treponeme supravieuiesc 72 ore n mediul Mayer-Nelson (la 25 grade n anaerobioz).

Factori de patogenitate: Factori de adeziune; Factori de invazie (hialuronidaza); Factori de sensibilizare; Endotoxina
Supresia rspunsului imun celular n stadiile iniiale ale bolii
Sursa de infecie omul bolnav
Cile de transmitere: Sexual; Contact indirect (srut, obiecte, instrumente chirurgicale recent contaminate, transfuzii de snge, etc.);
Transplacentar (vertical)
Poarta de intrare tegumentul lezat, mucoasa genital, anal, bucal
Perioada de incubaie 2-6 sptmni (3)
Evoluia sifilisului
Sifilisul primar (4-6 sptmni): La poarta de intrare apare ancrul sifilitic: ulceraie cu baza indurat, nedureros, bogat n treponeme (99%
localizare genital i anal, 1% - bucal). Adenopatie satelit. Vindecare spontan a ancrului este posibila (imunitatea local).
Sifilisul secundar (urmare a diseminrii sangvine) dup 6-8 spt. de evoluie: Manifestri cutanate (rozeole, sifilide erozive,etc), foarte
contagioase; Manifestri la nivelul mucoaselor (plci mucoase); Poliadenopatie; Leziuni ale organelor interne (hepatite, nefrite, periostite,
meningite, etc); Rspunsul imun poate duce la dispariia leziunilor n 1-3 luni
Sifilisul latent (persoanele la care treponemele persist n ganglioni limfatici i splin): Lipsa semnelor clinice; Necontagios ; Durata
nedeterminata
Sifilisul teriar (dup 4-30 ani de la contaminare): Afeciuni cardio-vasculare (aortite, anevrisme); Afeciuni neurologice (tabes, paralizie
general); Afeciuni osoase i cutanate (gome); Deces posibil

53
 Sifilisul congenital: n timpul graviditii moartea ftului prin afeciuni poliviscerale. La finele graviditii sau la natere leziuni tardive
(dentare, osoase, oculare)
Imunitatea (nesteril): Umoral ; Celular (protectoare, deprimat n sifilisul primar i secundar)

Prelevate: serozitatea din leziunile primare sau secundare, puncii din ganglioni limfatici, serul sangvin, LCR
Metode de diagnostic: Examenul microscopic (sifilis primar, secundar); Microscopia pe fond negru, contrast faz; RIF; Impregnare argentic,
coloraia Giemsa
Examenul serologic (sifilis secundar, teriar)
I. Reacii nespecifice (cu Ag cardiolipidice): Reacia VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) RP (RF)
Ieftin, facil, specificitate redus; Reacii fals pozitive: viroze, colagenoze, paludism, ciroze, reumatism, graviditate, etc. RFC
(Wassermann)
II. Reacii specifice (cu Ag treponemice): RFC Wassermann sau Kolmer; RHAI (Ag lizat din tulpina Nichols fixat pe hematii); RIFI (Ag
suspensie de T.pallidum fixat pe lam); RIT (testul Nelson) (Ag tulpina Nichols a T.pallidum); RIE (ELISA); PCR (detectarea ADN) n
LCR, lichidul amniotic, esut
EVOLUIA TITRURILOR DE AC
RIFI se pozitiveaz la apariia ancrului (o lun dup infectare)
VDRL dup 6 sptmni
RHAI
RIT n stadiul secundar, 2 luni dup infectare
Dup tratamentul sifilisului: VDRL se negativeaz prima. Alte reacii rmn pozitive.

Tratamentul: beta-lactamine, tetracicline, macrolide (rezisten la aminoside); Reacia Herxheimer este posibil (efectul endotoxinei).
PROFILAXIA depistarea sistematic activ i tratarea bolnavilor.

98. Borreliozele. Clasificarea agentilor cauzali ai febrei (tifosului) recurente epidemice si endemice (familie, gen, sp.). Factorii de
patogenitate. Patogeneza febrei recurente, manifestarile clinice. Diagnosticul microbiologic al febrei recurente. Prelevate. Examenul
microscopic. Metoda biologica.
CLASIFICARE: Familia Spirochaetaceae, Genul Borrelia. Specii: B.recurrentis (transmis prin pduchi); B.duttoni, B.hispanica, B.persica,
B.burgdorferi, etc (transmise prin cpue)

Caractere morfobiologice: filamente spiralate cu 5-8 spire neregulate, flexibile i mobile, cu micri de flexie i nurubare. G-, colorate n
albastru-violet dup Giemsa.
Caractere de cultur: bacterii anaerobe, cultiv in vitro pe medii complexe i in vivo (ou embrionat, artropode, animale de laborator).
Structura antigenic: variabilitate pronunat!
Habitat: Omul bolnav n snge i esuturi infectate; Roztoare; Vectori (pduchi, cpue) n hemolimf, saliv, intestin

Febra recurent epidemic - Agentul cauzal - B.recurrentis, Sursa de infecie omul bolnav, Vector - Pediculus humanus, Contaminare prin
hemolimfa eliberat la zdrobirea pduchilor, Poarta de intrare tegumentul lezat, conjunctiva
Febra recurent endemic - Agenii cauzali - B.hispanica, B.persica, B.duttoni, etc, Sursa de infecie roztoarele slbatice sau peridomestice,
Vectoricpue din genul Ornithodoros, Contaminare prin neptur, prin intermediul lichidului coxal, prin dejecii anale

Patogeneza febrei recurente:

Perioada de incubaie 3-14 zile (borreliile se multiplic n viscere ficat, splin, creier, etc.)
Perioada febril debut brutal, cu febr 40-41 grade i frison (endotoxina eliberat n snge la distrugerea borreliilor). Algii difuze, stare de
tifos, semne meningeale, hepato-splenomegalie, icter. Criza febril dureaz 7 zile.
Urmeaz o perioad afebril de o sptmn, succedat de alt criz termic cu durat mai scurt.
Accesele se repet (2-4-10 recurene).
Mecanismul recurenelor: Borreliile care ptrund n organism prezint variaii antigenice succesive. Sub aciunea anticorpilor bactericizi
formai la sfritul acceselor febrile se selecteaz varianta antigenic responsabil de urmtorul acces. Febra recurent endemic are o evoluie
mai benign, cu recurene mai frecvente.

Prelevate: snge, LCR

Metode de diagnostic:
Examenul microscopic (n perioada febril): preparate native (fond negru, contrast de faz); frotiuri colorate Giemsa; RIF. Examenul biologic
(infectarea cobailor, obolanilor)
Tratament: peniciline, tetracicline, cloramfenicol
Profilaxie: lupta contra vectorilor i protecia individual

99. Borreliozele. Clasificarea agentului cauzal al bolii Lyme (familie, gen, sp.). Patogeneza bolii Lyme, manifestarile clinice.
Diagnosticul microbiologic al bolii Lyme. Prelevate. Examenul microscopic. Izolarea si identificarea B.burgdorferi. Diagnosticul
serologic.
Agentul cauzal Borrelia burgdorferi (B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, B.garinii)
Caractere morfoculturale bacterie helicoidal, mobil, efectueaz micri de flexie i rotaie. Nu se coloreaz prin metoda Gram. Se cultiv lent
(cteva sptmni) numai pe medii speciale.
Habitat i contaminare: Rezervor de infecie: roztoare, animale domestice (cini, cai, etc), psri. Vectori: cpue din genurile Ixodes i
Amblyomma, nari, tuni. Contaminare: prin neptura vectorului infectat

Incubaie 2-4 sptmni

Faza primar (leziune cutanat eritemul cronic migrator, febr, cefalee, astenie). Durata 3-4 spt.
Faza secundar durata 2-6 sptmni manifestri neurologice, cardiace, cutanate, osteo-articulare.
Faza teriar dureaz luni, ani afeciuni cronice cutanate (acrodermatit cronic atrofiant), articulare (artrite cronice), neurologice
(encefalomielite).

54
Prelevate: biopsii cutanate, snge, LCR, lichid articular
Metode de diagnostic: Examenul microscopic (preparate native, coloraia special a biopsiilor, impregnare argentic), Examenul bacteriologic,
Diagnosticul serologic (RIFI, ELISA, Western-blot), PCR
Tratament peniciline, tetracicline
Profilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor

100. Leptospirozele. Clasificarea agentilor patogeni (familie, gen, sp., s/v). Factorii de patogenitate ai leptospirelor. Patogeneza
infectiei. Diagnosticul microbiologic. Prelevate, examenul microscopic, izolarea si identificarea culturii pure. Metoda biologica,
diagnosticul serologic ( RHAI, RFC, RAL). Profilaxia si tratamentul specific al leptospirozelor.
Leptospirele sunt bacterii care pot infecta numeroase specii de animale (n special vertebrate) i accidental omul.
Clasificare
Familia Leptospiraceae
Genul Leptospira
Spp. L.interrogans (patogen pentru om i animale)
L.biflexa (saprofit, ape de suprafa)
L.parva (saprofit, apa de conduct)

Caractere morfologice bacterii fine i spiralate, cu 10-30 spire strnse i regulate, cu capetele ndoite n crlig (aspect de S, C, ?). Realizeaz
micri de nurubare, flexie i translaie. Pot fi examinate la microscopul cu fond negru sau cu contrast de faz. Coloraia Giemsa roz-pal
Caractere de cultur. Medii lichide cu sruri anorganice tamponate cu fosfai i mbogite cu ser de iepure (mediile Korthof, Stuart,
Wervort-Volf), medii semisintetice. Aerobioz. 28-30 grade C. Leptospirele se multiplic n 3-10 zile (pn la o lun) fr a tulbura mediul

Structura antigenic a L.interrogans: Antigene cu specificitate de gen, LPZ, Antigene majore de grup (peste 20 serogrupuri), Ex.:
L.icterohaemorrhagia, grippotyphosa, hebdomadis, canicola, pomona, autumnalis, etc. Antigene proteice minore de tip (peste 200
serotipuri/variante) - proteice

Sursa de infecie: roztoarele slbatice, accidental-roztoarele peridomestice sau animalele domestice (porci, cini, cai, bovine) leptospirele
sunt gazduite in tubii contori proximali renali.
Poarta de intrare: tegument i mucoase
Cile de transmitere: Alimentar (alimente i apa contaminat), Contact direct cu animalele infectate , Contact indirect (cu apa contaminat).
Leptospirele sunt antrenate n circulaia sangvin fr leziuni la poarta de intrare. Incubaia 1-2 sptmni (10 zile)
Evoluia leptospirozelor: Faza septicemic (generalizat) 7 zile: febr, frison, sindrom meningeal. Faza afebril (1-3 zile). Faza organic
(febr, sindrom meningeal, sindrom hepato-renal, sindrom cardio-vascular-hemoragic, icter)
Imunitatea: umoral, specific de tip, durabil

Prelevate: snge, LCR (prima sptmn), urin (din sptmna II de boal), probe necroptice (seciuni histologice renale, hepatice)
Metode de diagnostic
Examenul microscopic (fond negru, contrast de faz, coloraia Giemsa sau impregnaia argentic a seciunilor histologice), RIF
Examenul bacteriologic
Probele sunt nsmnate n cte 3-5 tuburi cu mediu de cultur, incubate n aerobioz la 28 grade pn la 1-3 luni.
Identificarea n baza caracterelor: Microscopice; De cultur; De patogenitate; Serologice (RFC, RAL)
Examenul biologic (inocularea intraperitoneal a cobailor). Peste 1-3 zile leptospirele pot fi depistate n exsudatul din cavitatea abdominal.
Tehnici PCR (detectarea ADN)
Diagnocticul serologic (din spt. II)
Reacii cu specificitate de gen (RFC, RHAI, RIFI, ELISA)
Reacii cu specificitate de tip (de referin)-RAL (Reacia de Aglutinare-Liz)
Titrul diagnostic - 1/400 sau creterea n dinamic de 4 ori
Tratament: penicilin, tetraciclin, gama-globulina antileptospiroas Profilaxie: deratizarea, igiena i protecia muncii, supravegherea bazinelor
de ap, vaccinarea selectiv (vaccin inactivat, durata imunitii-1 an)

101. Escherichiozele. Clasificarea E.coli dupa structura antigenica. Habitatul, rolul in fiziologia omului. Factorii de patogenitate.
Fenotipurile diareigene, bacteriemice, uropatogene. Infectiile intestinale cauzate de categoriile fenotipurilor diareigene. Infectiile
extraintestinale cauzate de E.coli. Diagnosticul microbiologic al colienteritelor la copii. Prelevate. Izolarea, acumularea, identificarea
culturii pure (biochimica, serologica), diagnosticul serologic.
FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE. Peste 30 genuri cu 130 specii. Habitat: intestinul omului, animalelor . Martor al contaminrii fecale a
mediului. Majoritatea constituie flora normal (comensal) intestinal
Enterobacterii patogene: genurile Shigella, Salmonella, Yersinia, unele variante ale speciei Escherichia coli;
Enterobacterii condiionat patogene: genurile Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia,
Edwardsiella, etc.

Teste-cheie ale familiei: Bacterii (bastonae) gramnegative; Nesporogene; Mobile-peritriche/imobile; Facultativ-anaerobe; Fermenteaz glucoza
(A, AG); Catalaza-pozitive; Oxidaza-negative; Reduc nitraii n nitrii
Teste primare (identificarea genurilor): Utilizarea citratului de Na (mediul Simmons); Utilizarea malonatului de Na; Hidroliza ureei (testul
Preus); Decarboxilarea lizinei (LDC); Dezaminarea fenilalaninei (FAD); Producere de H2S n mediul multitest (ex.: Kligler); Fermentarea
glucozei pn la acizi (testul MR); Fermentarea glucozei pn la acetoin (testul VP); Mobilitatea (n geloz semilichid)
Teste secundare (identificarea speciilor/variantelor): Teste biochimice (fermentarea glucidelor, decarboxilarea aminoacizilor (arginin, ornitin),
producerea indolului, etc); Fagoidentificarea i lizotipia; Colicinogenotipia; Seroidentificarea ; Antibiograma
Caractere morfologice: bastonae G-, 1 - 6 m x 0,3 - 1 m, mobile peritriche (Klebsiella, Yersinia pestis, Shigella imobile), nesporogene,
formeaz microcapsule (Klebsiella capsulat), posed fimbrii.
Caractere de cultur: Anaerobe facultativ; Temperatura optim 37 grade C (limite 18 45 grade) ; Nepretenioase nutritiv; Colonii S, apar
dup 18-24 h de incubare, 2 - 3 mm (dup repicri pot apare colonii R), Klebsiella mucoide, Proteus invadeaz suprafaa mediului

55
 MEDII DE CULTUR
De transport: glicerin 30%, soluie salin 3%, soluie tampon-fosfat
De mbogire a bacteriilor patogene: Kauffmann, Muller, bulion selenit, etc
Diferenial-diagnostice:
I. De izolare
ENDO, LEVIN, PLOSKIREV
Componena: baz nutritiv, lactoz, indicator
Coloniile L+ : colorate Coloniile L- : incolore (frecvent flora patogen)
Mediul Wilson-Blair cu sulfit de Bi (Salmonella reduce sulfitul n sulfur de Bi colonii negre pe mediul verde)
II. De acumulare i identificare preliminar (medii multitest)
Russel, Kligler (glucoz, lactoz, sruri de Fe)
Olkeniki (glucoz, lactoz, zaharoz, uree, sruri de Fe)
III. De identificare final (medii cu citrat, malonat, irul Hiss, medii cu aminoacizi, gelatina, etc)

CARACTERE ANTIGENICE
Ag O (R), de perete, LPZ, termostabil i rezistent la alcool, sensibil la formol, specificitate de gen, specie, grup
Ag H, flagelar, proteic, termolabil i inactivat de alcool, rezistent la formol, specificitate de tip (variant)
Ag K, superficial, capsular, termovariabil, specificitate de specie, tip (mascheaz Ag O, inaglutinabilitate cu seruri anti-O). Variante L, A, B la
E.coli, Vi la Salmonella i Citrobacter
Ag F, fimbrial, termolabil, nespecific
ECA antigen comun fam. Enterobacteriaceae (interes taxonomic) Ag Kunin

GENUL ESCHERICHIA
Genul Escherichia
Spp.: E.coli, E.blattae, E.fergusonii, E.vulneris, E.hermanii
Habitat: intestinul omului i animalelor (80% din flora aerob intestinal), 10 7-109 bacterii/gram fecale.
Contamineaz solul i apele de suprafa. Prezena E.coli - indicator de contaminare fecal.
Rolul E.coli n fiziologia uman
1. Manifest activitate antagonist fa de alte bacterii, inclusiv cele patogene.
2. Stimuleaz dezvoltarea esutului limfoid prin intermediul Ag sale
3. Particip la procesele de digestie, inclusiv n metabolismul colesterolului i acizilor biliari
4. Asigur organismul cu vitamine, sintetiznd vitamine B, K, acid nicotinic, acid folic, etc.

CARACTERE MORFOBIOLOGICE
E.coli enterobacterie tipic, mobil, lactoza+, fermenteaz glucidele cu formare de AG (teste primare: MR +, mobilitate +, celelalte sunt
negative)
Structura antigenic: Ag O 180 tipuri (O1, O2, O3......O180); Ag H 60 tipuri (H1, H2, etc); Ag K 100 tipuri
Din combinaii rezult serovariante: ex. O55:H2:K1
Factori de patogenitate
1. Capsula (antifagocitar, Ag K1 camuflaj imunologic datorit epitopilor comuni cu polisialozil-glicopeptide cerebrale la nou-nscui)
2. Proteine din ME i LPZ (anti-complement, protecie de factorii bactericizi ai sngelui, adeziune, invazie)
3. Fimbrii (adeziune)
4. Toxine (endotoxina, enterotoxine termostabile - ST i termolabile - LT, citotoxine Shiga-like toxine (SLT-1, SLT-2)
5. Hemolizina
6. Siderofori (sisteme de captare a Fe)

ROLUL E. COLI N PATOLOGIA UMAN

FENOTIPURI DIAREIGENE
Tulpini enteropatogene: EPEC (O26, O55, O111, O125, O142, etc). Responsabile de gastro-enterite infantile (infecii salmoneliforme). Ader
la mucoasa intestinului subire printr-o protein din membrana extern fr a penetra intracelular.
Tulpini enteroinvazive: EIEC (O28, O124, O143, etc). Responsabile de sindrom dizenteric cu invazia mucoasei colonului, penetrare
intracelular, ulceraii. Factori de patogenitate: adezine, citotoxine.
Tulpini enterotoxigene: ETEC (O6, O8, O20, O25, O115, etc). Responsabile de diareea cltorului, sindrom holeriform. Adeziunea la
enterocitele intestinului subire este asigurat de pili (CFA colonization factor antigen sau CS coli surface factors). Elaboreaz toxine
enterotoxine ST i/sau LT. Activeaz adenilat- respectiv guanilat ciclaza enterocitelor, provocnd o secreie sporit a ionilor de Cl - i inhibiia
absorbiei ionilor de Na+, antrennd o pierdere hidric important.
Tulpini enterohemoragice: EHEC (O157:H7; O26, O111). Responsabile de colite hemoragice cu sindrom uremic-hemolitic (anemie
hemolitic+trombocitopenie+insuficien renal). Posed factori de adeziune i produc citotoxine capabile de difuzie n organism (Shiga-like
toxine SLT 1 i SLT 2). Produc frecvent hemolizin.
Tulpini enteroagregative: EAggEC (O111:H12). Posed adezine, hemolizine i SLT. Provoac diaree persistent (peste 14 zile) la copii. Ader
agregativ la suprafaa culturilor de celule.
Tulpini enteroadezive: EAEC. Ader difuz la celulele intestinale i culturile de celule. Provoac sindroame diareice.
FENOTIPURI UROPATOGENE (O1, O2,O4,O6). Posed afinitate pentru mucoasa uro-genital (fimbrii tipul P sau 1, Ag O i K
specifice, hemolizine, etc).
FENOTIPURI BACTERIEMICE
Alte forme clinice provocate de E.coli: oc endotoxinic; Meningite la nou-nscui (preponderent tulpini cu Ag K1); Infecii ale plgilor
(frecvent de origine nozocomial); Colecistite, peritonite, salpingite, etc.; Toxiinfecii alimentare

DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Prelevate n funcie de forma clinic: materii fecale, urin, snge, LCR, puroi, etc
Metode de diagnostic. Examenul microscopic de orientare (frotiu Gram n infecii extra-intestinale, RIF); Examenul bacteriologic (de baz,
cantitativ); Examenul serologic (retrospectiv, de confirmare); RA cu autotulpini (titru diagnostic 1:200)

56
Tratamentul: Antibiotice (conform antibiogramei); Eubiotice (colibacterin, lactobacterin, bifidumbacterin, bificol, etc). Profilaxia
escherichiozelor - nespecific

102. Dizenteria. Clasificarea agentilor patogeni (familie, gen, spp.). Factorii de patogenitate ai shigelelor. Patogeneza dizenteriei,
simptomele clinice. Diagnosticul microbiologic. Prelevatele. Microscopia (RIF), izolarea, acumularea, identificarea culturii pure
(biochimica, serologica), serodiagnosticul. Profilaxia si tratamentul specific al dizenteriei.
Shigelele strict umane. Cauzeaz infecii intestinale - igeloze, cea mai grav formdizenteria bacterian.
Clasificarea genului Shigella (biochimic i antigenic):
A Shigella dysenteriae (12 s/v, 12 b/v) Manitol -
B Shigella flexneri (6 s/v, 14 ss/v, 23 b/v)
C Shigella boydii (18 s/v)
D Shigella sonnei (1 s/v, 7 b/v)
Subgrupele B, C, D manitol +

Enterobacteriaceea tipice, imobile, lactozo-negative, scindeaz glucoza pana la acizi (testul MR+), celelalte teste primare sunt negative.
Factori de patogenitate:
1. Factori de adeziune la mucoasa colonului (fimbrii, LPZ)
2. Microcapsula (antifagocitar)
3. Factori de penetrare i multiplicare intracelular
4. Toxine:
Shigatoxina - neurotoxic, enterotoxic, citotoxic elaborat de S.dysenteriae 1
Enterotoxine (Shiga-like toxine (SLT), verotoxine)
Endotoxina
Structura antigenic: Ag O i K cu specificitate de gen, specie, subspecie, variant
Rezistena n mediul extern: S.dysenteriae - foarte sensibil (1-2 ore); S.flexneri persist 1-3 sptmni n ap, 2 luni n lactate; S.sonnei
persist i se multiplic n lactate
Sursa de infecie: bolnav, reconvalescent, purttor
Transmiterea fecal-oral: Contact direct (mini murdare); Alimentar (alimente, ap); Doza infectant: 10-10 2 bacterii; Bacteriile se multiplic n
intestin, colonizeaz epiteliul colonului i macrofagele din foliculii limfoizi, penetreaz intracelular (prin macropinocitoz dirijat). Bacteriile se
propag intra- i entercelular graie polimerizrii actinei la un pol al celulei (caracter determinat plasmidic). Urmeaz multiplicarea local
intracelular cu invazia celulelor vecine provocnd moartea lor. Aceasta duce la inflamaie fibrinoas intens a colonului, micro-abcese i
ulceraii, cu apariia mucusului, puroiului i sngelui n materiile fecale.
Perioada de incubaie 2 - 4 zile
Semne clinice febr, dureri abdominale, tenesme (spasme rectale), scaune lichide muco-sanguinolente frecvente.
Vindecarea n 2-5 zile (clinic, apoi microbiologic).
Forme cronice sau portaj sunt posibile.

Prelevate: probe de scaun (elementele muco-sanguinolente), apa, alimente, lavaje de pe suprafee

Metode de diagnostic. Examenul microscopic RIF. Examenul bacteriologic:
Izolarea culturii pure pe medii DD (Endo, Levin, Ploskirev) sau mbogirea ighelelor n bulion selenit
Coloniile L- sunt repicate pe mediile Olkeniki, Kligler pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar
(lactoza/zaharoza -, glucoza A, ureea -, H2S -)
Identificarea definitiv a culturii pure: Caractere morfotinctoriale; Caractere de cultur ; Caractere biochimice (teste primare, secundare);
Caractere antigenice (seroidentificarea prin RA pe lam cu seruri imune anti-Shigella poli- i monovalente); Fagoidentificarea; Virulena (testul
Sereny la cobai); Antibiograma
Diagnosticul serologic (din a 5-7 zi de boal) : RA, RHAI (aduli 1:400 (S.flexneri); 1:200 (S.sonnei); copii 1:100; coproanticorpi (Ig A 1:80);
ELISA; RIFI
Imunitate: specific de tip, 1-2 ani, umoral (IgA)
Profilaxie: vaccinuri ribosomale, inactivate, atenuate (imunitate de scurt durat)
Tratament: antibiotice (trimetoprim, sulfamide, tetraciclin, ampicilina, etc), eubiotice, bacteriofagi, vaccin inactivat (dizenteria cronic)

103. Salmonelozele. Clasificarea salmonelelor (familie, gen, specii, subspecii). Clasificarea Kauffmann-White dupa structura
antigenica. Samonelele tifoparatifoidice. Dinamica titrului de anticorpi in febrele tifoparatifoidice, la purtatori sanatosi si ai
anticorpilor anamnestici. Diagnosticul serologic. Reactia de aglutinare Widal. Tehnica efectuarii, citirea si interpretarea rezultatelor.
Aplicarea practica a reactiilor RHAI, Vi-RHAI.
Genul: Salmonella (Daniel Elmer Salmon, veterinar american, care a descoperit bacteria n 1885)
Specii: Salmonella enterica, Salmonella bongori
Subspecii ale speciei S.enterica: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indica
Se cunosc peste 2500 Serovariante, majoritatea tulpinilor izolate din patologii umane (99,5%) aparin ss. S.enterica enterica: S. London, S.
Enteritidis, S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S.Choleraesuis, etc
Salmonella enterica subspecia enterica serovar Typhi = Salmonella Typhi

CLASIFICAREA KAUFFMANN-WHITE (conform structurii antigenice)

Ag O 67 varieti antigenice (O1, O2, O3, ... O65, etc), permite repartizarea salmonelelor in serogrupe (A, B, C, D, E,...Z, O51,...)
Fracii antigenice majore desemneaz grupa: O2 A; O4 B, O6 C, O9 D, etc
Fracii antigenice minore comune O1, O12,
Ag H definete serovariante n cadrul grupei. Structura flagelinei este determinat de 2 gene cromozomiale diferite, care se exprim alternativ
(variaie de faz, frecvena 10-4).
Ag H faza 1 (specific) Ha; Hb; Hc; Hd; Hg,m
Ag H faza 2 (nespecific) H1,2; H1,5; H1,7;
Serovar monofazic: O1,2,12:Ha (S.Paratyphi A)
Serovar difazic: O1,4,12:HbH1,2 (S.Paratyphi B)
57
Ag Vi (K), termolabil, prezent la S.Typhi, S.Paratyphi C, S.Dublin. Este concentrat la polii bacteriei.
S. Typhi O9,12:HdVi+ / O9,12:HdVi-

Conform patogenitii pentru gazd se disting: Salmonele monopatogene (umane) (S.Typhi, S.Paratyphi A); Salmonele bipatogene (patogene
pentru om i animale, ubicvitare) majoritatea

104. Salmonelozele. Salmonelele tifoparatifoide, clasificarea (familie, gen, specie, subspecii), structura antigenica, factorii de
patogenitate. Patogeneza febrelor tifoparatifoide. Prelevatele si metodele de diagnostic in dependenta de perioada de boala. Izolarea,
acumularea, identificarea hemoculturii si coproculturii (biochimica, serologica, fagoidentificarea). Profilaxia si tratamentul specific.
Caractere de cultur
Medii de mbogire : Muller, Kauffmann (medii cu bil, tetrationat), bulion cu selenit de Na
Medii DD de izolare a culturii pure: Endo, Levin , Ploskirev (colonii S, lactozo-); mediul cu sulfit de bismut Wilson-Blair (colonii
negre)
Medii DD de acumulare i difereniere: Olkeniki, Kligler (glucoza AG, lactoza-, H2S+, ureaza-)
Teste primare: utilizeaz citratul de Na, produc H 2S, MR+, LDC+, mobilitate+, celelalte teste negative.
Teste secundare: scindeaz glucidele AG, indol-, ornitindecarboxilaza+, etc
EXCEPIE: S.Typhi citrat-, H2S-, scindeaz glucoza pn la acid; S.Paratyphi A H2S+/-, LDC-

Factori de patogenitate: Fimbrii (adeziune); Capacitatea de a penetra n celule i de multiplicare intracelular (Macrofage, celule epitel);
Endotoxina ; Citotoxine (SLT) inhib sinteza proteic (necroz); Enterotoxine (LT, ST) activeaz adenilat/guanilatciclazele membranare
(diaree); Siderofori (captarea Fe); Ag Vi (antifagocitar, inhib activarea C, rezisten la activitatea bactericid a serului). Majoritatea
salmonelelor (98%) sunt sensibile la bacteriofagul O1. Exist bacteriofagi cu specificitate de specie i variant.
Habitat: intestinul omului, animalelor, psrilor.
Rezistena n mediul extern: salmonelele rezist la 70C 30 min., rezistente la concentraii mari de sare. Se nmulesc n produse alimentare la
temperatura camerei.

ROLUL SALMONELELOR N PATOLOGIA UMAN

SALMONELOZE:
Febre tifo-paratifoide (S.Typhi, S.Paratyphi A, B, C)
Salmoneloze digestive (toxi-infecii alimentare, gastro-enterite)
Manifestri extra-digestive: bacteriemii nontifoidice; infecii pleuro-pulmonare; afeciuni osteo-articulare (osteite, osteomielite, artrite
septice, etc); infecii cardio-vasculare (pericardite, arterite); infecii urinare; infecii abdominale (colecistite, abces al ficatului, splinei);
infecii ale SNC (meningite, abces al creierului, abces epidural, etc)

FEBRELE TIFO-PARATIFOIDE
Agenii cauzali S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C)
Sursa de infecie omul bolnav, purttorul
Contaminarea fecal-oral (ap, alimente), contact direct
Doza infectant 105 bacterii
PATOGENEZA
a. Traversarea epiteliului intestinal intact
b. Invazia i multiplicarea intracelular la nivelul plcilor Peyer i esutului limfoid al tubului digestiv (perioada de incubaie)
c. Ptrunderea n ganglionii limfatici mezenterici cu multiplicarea salmonelelor (perioada prodromal)
I sptmn de boal (bacteriemie).
Invadarea fluxului sangvin, via sistemul limfatic (diseminarea germenilor cu eliberarea endotoxinei). Endotoxina pe cale sangvin parvine la
centrii neurovegetativi ai ventriculului 3, determinnd febr, stare de tifos, colaps cardio-vascular, leziuni intestinale.
II sptmn de boal (difuzie parenchimatoas)
Bacteriile sunt fixate n organele SRE i se multiplic n ficat, splin, mduv osoas, esut limfoid, etc
III-IV sptmn de boal (faza alergic).
Din ficat salmonelele ptrund n cile biliare, apoi iari n intestin. La nivelul plcilor Peyer se dezvolt o reacie de hipersensibilitate tip 4 -
necroz, ulceraii. Din aceast perioad ncepe eliminarea salmonelelor cu saliva, materiile fecale, urina, bila, etc.

Manifestri clinice
Perioada de incubaie - 1-3 sptmni
Perioada prodromal (de invazie) 1-3 zile
Perioada de stare. Debut brutal, cu frison, febr 39-41 grade, cefalee, stupoare, somnolen, delir, com. Erupii cutanate (rozeole) apar pe
abdomen, torace, spate n ziua a 8-9 de boal (embolii limfatice cu bacterii). Diaree, constipaie, tulburri cardiovasculare. Durata 7-10 zile
Complicaii: hemoragii intestinale, perforarea intestinului, peritonit, miocardit, meningit, psihoz etc.
Perioada de reconvalescen (1-3-6 luni)

Imunitatea celular, umoral. 5-10% convalesceni purttori pn la 3 luni (cu depistarea salmonelelor n bil sau/i urin). 3-5%
convalesceni (cu litiaz biliar) purttori cronici (1-10 ani toat viaa)
Recidive sunt posibile (descrcri bacteriemice din focare profunde, forme L), se caracterizeaz prin simptome atenuate i evoluie de scurt
durat

PRELEVATE: snge (perioada febril, n special I sptmn de boal), urin (ncepnd cu a II sptmn), materii fecale (II-III sptmn de
boal), exudat din rozeole, ser sangvin (din ziua a 7-ea), bil, mduv osoas
METODE DE DIAGNOSTIC
Examenul microscopic RIF
Identificarea final n baza studiului caracterelor morfotinctoriale, de cultur, biochimice, antigenice (RA pe lam cu seruri imune polivalente
ABCDE, seruri monovalente anti-O de grup (O2, O4, O6, O9, etc) , seruri monospecifice anti-H (de variant), seruri anti-Vi, sensibilitatea la
bacteriofagi).
58
Rezultatul definitiv negativ n ziua a 11.

Rozeolocultura (exudatul din rozeole se ntroduce n 3-5 ml bulion biliat).

Mielocultura (0,5 ml mduva osoas din stern n 3-5 ml bulion biliat).
Bilicultura (dup 3-6 luni de la vindecare, 5-10 ml bil se ntroduc n BP).
Se examineaz ca i hemocultura.
Coprocultura (din spt. 2) 3-5 g materii fecale se nsmneaz direct pe medii DD i pe medii de mbogire.
Urocultura (10 ml urin se centrifugheaz, sedimentul se examineaz ulterior ca i coprocultura).
Serodiagnostic (din II sptmn)
RA Widal (la diluii ale serului bolnavului se adaog diagnosticuri OH din S.Typhi, ParatyphiA i B). Titrul diagnostic 1/200 sau creterea n
dinamic a titrului
RA modificarea Felix (utilizarea separat a diagnosticurilor O i H).
Anticorpii anti-O (Ig M) apar primii (ncepnd cu ziua 7-8) i dispar dup 2-3 luni (maximum spt. II-III).
Anticorpii anti-H (Ig M, apoi Ig G) apar mai trziu (10-12 zi) i persist o durat mai lung. n debut de reconvalescen (sptmna a IV) titrul
Ac anti-O i anti-H se egaleaz.
RHAI (cu diagnosticuri eritrocitare O).

Investigarea purttorilor: Coproculturi repetate; Urocultura; Bilicultura ; Serodiagnostic; Reacia de Vi-aglutinare (eritrocite sensibilizate cu
Ag Vi). Titrul diagnostic - 1/40; Reacia de latex-aglutinare; Determinarea claselor de imunoglobuline Ig M sau Ig G

Tratament: Fluorochinolone; Cefalosporine de generaia III; Cloramfenicol; Ampicilin ; Cotrimoxazol

Profilaxia specific: vaccinarea selectiv (zone endemice, militari, personal medical, etc) Vaccinul chimic TABTe; Vaccinul atenuat Ty2
(administrare oral, imunitate local sIg A), contraindicat gravidelor, copiilor, imunodeprimailor; vaccinul subunitar din Ag Vi (areactogen,
imunitate 3-5 ani)

105. Salmonelozele. Salmonelele nontifoidice (bipatogene). Clasificarea (familie, gen, specii, subspecii). Structura antigenica,
clasificarea Kauffmann-White. Serovariante mai frecvent izolate. Factorii de patogenitate. Patogeneza salmonelozelor, formele clinice.
Diagnosticul microbiologic. Prelevate, izolarea, acumularea, identificarea culturii pure (biochimica, serologica). Diagnosticul serologic.
SALMONELOZE DIGESTIVE (gastro-enterite, toxi-infecii alimentare)
Consecutive consumului de alimente contaminate cu salmonele (ou, maionez, patiserie cu crem, carne, etc).
Agenii cauzali: salmonele bipatogene
Gr. B (S. Typhimurium, S. Paratyphi B, S. Heidelberg, S. Derbi)
Gr. C (S. Choleraesuis, S. Newport, S. Paratyphi C)
Gr. D (S. Enteritidis, S. Dublin)
Gr. E (S. Anatum)

PATOGENEZA GASTROENTERITELOR
Sursa de infecie: animalele domestice i psrile (bolnave sau purttori cronici)
Transmiterea pe cale alimentar (alimente contaminate direct de la surs sau pe parcursul procesului tehnologic), prin ap sau contact direct.
Doza infectant 106-108 salmonele
Salmonelele colonizeaz mucoasa intestinului subire, fiind entero-invazive provoac distrugerea epiteliului (SLT) i o reacie inflamatoare
intens (gastroenterit, gastroenterocolit acut). Enterotoxina provoac diaree (activeaz adenilatciclaza sau guanilatciclaza enterocitelor),
endotoxina absorbit acioneaz asupra SNC semne de intoxicaie.
Gastroenteritele pot fi urmate de bacteriemii.
Manifestri clinice:
Perioada de incubaie 8 - 48 ore
Debut brusc i evoluie acut (1-3 zile) cu diaree, vom, febr, cefalee, stare de ru.
Evoluie sever la sugari, btrni, imunodeprimai (n special cu SIDA).
TOXIINFECII ALIMENTARE
Survin ca urmare a ingestiei unui aliment n care s-au acumulat cantiti mari de mi/o (10 5 107). Nimerind n intestin, bacteriile ptrund n
snge, se distrug, iar endotoxina eliberat provoac semnele clinice de intoxicare.
Alte forme de salmoneloze (septicemii, meningite, infecii urinare, etc) se dezvolt la persoane cu rezistena sczut.

Diagnosticul de laborator al salmonelozelor

Prelevate: mase fecale, mase vomitive, snge, splturi gastrice, urin, resturi de alimente suspecte.
Metode de diagnostic: Examenul bacteriologic de baz (coprocultur, hemocultur, urocultur...); RIF pentru diagnostic rapid;
Serodiagnostic - RHAI
Profilaxia salmonelozelor nespecific. Tratamentul simptomatic, antibioterapie la necesitate

106. Holera. Clasificarea vibrionilor (familie, gen, sp.). Criteriile de clasificare a V.cholerae n serogrupe, biovariante, serovariante.
Factorii de patogenitate ai V.cholerae. Patogeneza holerei. Diagnosticul microbiologic. Prelevate. Principiile metodelor rapide, citirea,
interpretarea rezultatelor. Importanta metodei serologice de diagnostic a holerei.
Familia: Vibrionaceae
Genuri: Vibrio
Aeromonas (inf de plag, diaree, septicemii)
Plesiomonas (gastroenterite, septicemii, meningite)
Photobacterium (saprofit)
Enhydrobacter (saprofit)
Caractere generale (cheie): bastonae G-, drepte sau ncurbate, mobile (mono sau lophotrichi), reduc nitraii n nitrii, fermenteaz glucidele,
oxidaza+, catalaza+

GENUL VIBRIO
59
Bastonae G-, ncurbate, nesporogene, necapsulate, mobile monotriche
Clasificarea:
-
Vibrioni halotoleranti - Vibrio cholerae (agenii holerei i diareelor holeriforme)
-
Vibrioni halofili V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.anguillarum, V.vulnificus, V.metschnikovii (oportunisti, cauzeaz toxiinfecii
alimentare, septicemii, meningite, supuraii)
-
Vibrioni free life (saprofii)

VIBRIO CHOLERAE
Clasificare :
Serogrupuri:
Vibrio cholerae O1, O2, ... O155
- V.cholerae O1 i V.cholerae O139 Bengal (descris in 1992, mutant al Ag O, biovarul El Tor) agenii cauzali ai holerei
Biovariante ale V.cholerae O1 :
V.cholerae cholerae (clasic) descoperit in 1817 de catre R. Koch, 6 pandemii
V.cholerae El Tor izolat in 1905 in Lazaret din El Tor, in 1961 determina pandemia a VII
Serovariante ale V.cholerae O1 - Ogawa, Inaba, Hikojima
V.cholerae non O1/non O139 (O2, O3,... etc, vibrioni NAG) responsabili de sindrom holeriform, diaree, toxiinfecii alimentare

HOLERA
Agenii cauzali:
V.cholerae O1 (b/v Clasic i El Tor; s/v Ogawa, Inaba, Hikojima), V.cholerae O139 Bengal
Caractere de cultur: Anaerobi facultativi, temperatura optim de cultivare -- 37 grade. Cresc pe medii simple, dar prefer pH alcalin (8-9) i
concentraii de 3% NaCl. Sensibili la pH acid
Mediu de mbogire Apa peptonat alcalin 1% (AP)
Medii de izolare a culturii pure Geloza alcalin (mediu electiv-selectiv) - GA
Mediul TCBS (tiosulfat-citrat-bil-zaharoz) DD i selectiv
Manifestarea creterii
AP peste 6 ore de incubare vl fin la suprafaa mediului
GA peste 12 ore colonii S (R atipice), transparente, cu nuan albstruie
TCBS peste 12 ore colonii S, opace, galbene (fermentarea zaharozei)
Caractere biochimice: V.cholerae este catalaza+ i oxidaza+, reduce nitraii n nitrii, produce indol, posed gelatinaz i LCD, fermenteaz
glucoza pn la acid.
Conform activitii glicolitice V.cholerae aparine grupului I Heiberg (fermenteaz zaharoza i manoza, nu fermenteaz arabinoza)
Se disting 2 biotipuri (variante) de V.cholerae: clasic (V.cholerae cholerae) i El Tor (V.cholerae El Tor), identice morfologic i antigenic.

Diferenierea biovariantelor
STRUCTURA ANTIGENIC A VIBRIO CHOLERAE
Ag O somatic, LPZ, termostabil (peste 155 serogrupe - O1, O2....O155)
Ag O1 este constituit din 3 fracii - A,B,C 3 serovariante V.cholerae: Ogawa (A,B), Inaba (A, C), Hikojima (A; B; C)
Ag H, proteic, termolabil, comun pentru V.cholerae

FACTORI DE PATOGENITATE
Factori de adeziune (pili, Ag O1, glicocalixul)
Enzime de patogenitate (mucinaza, neuraminidaza, LDC, lecitinaza)
Enterotoxina (toxina holeric, holeragen), constituit dintr-o subunitate A (A1, A2) i 5 subuniti B.
Mecanismul de aciune: Subunitile B servesc la fixarea de receptorul gangliozidic GM1 de pe membrana enterocitului, A2 asigur
ptrunderea intracelular a fragmentului A1. Acesta activeaz adenilatciclaza membranar, ce duce la creterea concentraiei de AMPc
intracelular cu inhibitia absorbtiei bicarbonatului i secreia exagerat a cloridului. Apa i electroliii (Na + i K+) se acumuleaz n lumenul
intestinal. Rezult deshidratare extracelular intens cu hemoconcentraie, oc hipovolemic i acidoz metabolic.

PATOGENEZA HOLEREI I MANIFESTRILE CLINICE

HOLERA toxiinfecie intestinal acut, strict uman.
Agentul cauzal V.cholerae O1/O139
Sursa de infecie bolnav, convalescent, purttor sntos (crustacee acvatice?)
Mecanismul de transmitere: fecal-oral; contact direct (manual); alimentar (apa, alimente)
Doza infectant 109 UFC (104 pentru persoane cu hipoaciditate gastric)
Vibrionii care au supravieuit nimeresc n intestinul subire. Local mucinaza descompune mucusul, ce permite adeziunea la enterocit i
multiplicarea vibrionilor (colonizarea) cu secreia toxinei.

Evoluia clinic a holerei:

I - perioada de incubaie (2-5 zile)
II enterita holeric (scaune frecvente, abundente, apoase, aspect zeam de orez)
III gastro-enterita (scaune frecvente 20 ori pe zi vome abundente. Consecine deshidratare, carene de sruri, acidoz, hipoxie tisular,
hipotensiune, contracii (crampe) musculare.
IV - Algida holeric (stare extrem de grav, hipotermie, asfixie, colaps, com, deces)

Imunitatea umoral (sIgA, IgG), antibacterian i antitoxic, de scurt durat (2 ani), reinfecii sunt posibile

107. Holera. Criteriile de clasificare a V.cholerae (serogrupe, biovariante, serovariante), factorii de patogenitate. Diagnosticul
microbiologic. Prelevatele, recoltarea, conservarea. Metoda microscopica. Metoda bacteriologica: mbogairea, izolarea, acumularea,

60
identificarea culturii pure (teste biochimice, biologice, serologice). Etapele, durata examenului bacteriologic. Profilaxia specifica a
holerei.

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREI

Prelevate: mase vomitive, materii fecale, bil (purttori), de la cadavru 3 fragmente din intestinul subire i vezica biliar, prelevate din mediul
extern (apa, alimente)
Metode de diagnostic
1. Diagnosticul rapid: Studierea mobilitii (preparate native bacterii mobile, ncurbate, grupate n bancuri de peti sau pescrui n zbor;
Frotiu Gram (bacterii G-, ncurbate); Imobilizarea vibrionilor cu serul anti-O1; Imobilizarea vibrionilor cu bacteriofagi C i ET; RIF
2. Examenul bacteriologic (de baz)
Prelevatele se nsmneaz n AP I (mbogire) i GA I (TCBS) (izolarea culturii pure) termostat
Peste 6 ore se examineaz cultura din AP (vl la suprafa), utilizat pentru diagnosticul rapid, apoi se rensmneaz pe AP II i GA II.
Peste 12 ore se examineaz coloniile de pe GA I sau TCBS. Coloniile suspecte (plate i transparente cu nuan albstrie pe GA, galbene pe
TCBS) sunt expuse diagnosticului rapid (5 teste), apoi repicate pe mediul cu lactoz i zaharoz pentru acumularea culturii pure i difereniere
primar. AP II poate fi utilizat pentru efectuarea testelor rapide si nsmnare pe GA III.
Culturile lactoza-/zaharoza+ sunt identificate morfologic, cultural, biochimic, serologic (cu ser O1 polivalent, apoi cu seruri monospecifice
Ogawa i Inaba), diferenierea biovariantelor.
3. Depistarea toxinei
In vivo (ansa ligaturata la iepure, culturi de celule)
In vitro (ELISA, cu utilizarea gangliozidului GM1)
Tehnici de biologie moleculara (PCR, etc)
4. Serodiagnostic (retrospectiv)
Anticorpii (aglutinine, vibriocine) apar dup 10-15 zile de boal.
-
RA (serul bolnavului + diagnostic din V.cholerae O1 (titrul diagnostic 1/80)
-
RHAI (serul bolnavului + diagnostic eritrocitar)
-
Dozarea antitoxinelor (ELISA, RHAI)
-
Reacia de vibrioliz (serul bolnavului + cultur de vibrioni + complement).
-
Titrul diagnostic 10-4
Tratament: Antibiotice (tetraciclin, sulfanilamide, doxiciclina); Rehidratare; Tratament simptomatic
Profilaxie: Igiena individual i colectiv; Vaccinarea (vaccin inactivat, vaccin subunitar, holeragen-anatoxin);
Imunitatea pn la 6 luni; Vaccinul viu este in proces de studiu.

108. Rickettsiozele. Tifosul exantematic. Agentii cauzali (familie, gen, sp.). Patogeneza infectiei. Diagnosticul microbiologic.
Prelevate. Metodele microscopica, biologica. Diagnosticul serologic si diferentierea tifosului exantematic epidemic, endemic, bolii Brill-
Zinsser. Profilaxia specifica.
CARACTERISTICA GENERAL A RICKETTSIILOR
Rickettsiile = bacterii intracelulare obligatorii. Ciclul lor de dezvoltare necesit o gazd vertebrat (om, cine, obolan) i un vector (pduche,
purice, cpu, acarian).
Reprezint mi/o G- de dimensiuni mici, comparabile cu virusurile mari (500 nm). Totui, reprezint bacterii, deoarece se multiplic prin
diviziune binar, posed ADN i ARN, sunt sensibile la antibiotice.

CLASIFICARE
Familia Rickettsiaceae
Genuri: Rickettsia (care include 2 grupuri)
Grupul tifos, constituit din R.prowazekii (responsabil de tifosul exantematic epidemic, vector pduchele) i R. typhi (responsabil de tifosul
exantematic endemic, murin, vector puricele)
Grupul febrelor ptate, transmise prin cpue (R.rickettsii, R.conorii, R.australis, R.akari, R.sibirica, etc)
Genul Orientia, cu unica specie O.tsutsugamushi, agentul febrei de lstri
Genul Coxiella, unica specie C.burnetii, responsabil de febra Q
N.B. Genurile Ehrlichia i Bartonella nu mai aparin familiei Rickettsiaceae.

RICKETTSIA
Caractere morfotinctoriale: bacterii G-, polimorfe (coco-bacterii, bastonae, forme filamentoase, etc), imobile, asporogene, posed
microcapsul. Prin tehnica de colorare Macchiavello-Gimenez (fucsin+verde de malahit) rickettsiile apar colorate n rou pe fondul verde palid
al citoplasmei. Coloraia Giemsa roii n citoplasma albastr.
Caractere de cultur: fiind parazii intracelulari (nu pot fosforila glucoza i folosesc metabolii intermediari din gazd), rickettsiile nu cresc pe
medii artificiale. Ele pot fi cultivate doar pe animale de laborator, vectori, ou embrionat de gin sau culturi de celule.
Rickettsiile se multiplic prin diviziune binar n interiorul celulei-gazd. Imediat dup diviziune, n condiii nutritive bune, rickettsiile sunt
antrenate n micri rapide i parcurg citoplasma celulei-gazd n toate direciile. Aceste deplasri sunt determinate de polimerizarea filamentelor
de actin. Atunci cnd mediul este srac diviziunea se oprete, bacteriile se alungesc, cu apariia formelor filamentoase.

Strategii de multiplicare intracelular:

Reprezentanii genului Rickettsia vieuiesc liber n citoplasm, graie capacitii de a prsi rapid vacuola de fagocitoz. Coxiella burnetii se
multiplica n fagolizosomi cu pH acid.
Structura antigenic a rickettsiilor:
Ag corpuscular cu specificitate de specie
Ag solubil cu specificitate de grup
Fracii Ag comune cu tulpina Proteus OX
o OX 19 pentru grupul tifos exantematic
o OX 2 i OX 19 pentru grupul febrelor ptate
o OX K pentru grupul tifos de lstri
61
Factori de patogenitate: Exotoxina; Hialuronidaza; Hemolizina

Agenii cauzali ai tifosului exantematic:

R.prowazekii provoac tifosul exantematic epidemic.
R.typhi provoac tifosul endemic, murin.

Patogeneza tifosului exantematic epidemic:

Sursa de infecie omul bolnav de tifos exantematic sau de boala Brill-Zinsser
Vectorul pduchele uman. Pduchele se infecteaz de la bolnav n ultimele 2 zile de incubaie, pe parcursul perioadei febrile i 2-3 zile dup
normalizarea temperaturi. Rickettsiile se multiplic n celulele epiteliale intestinale ale pduchelui fiind eliminate cu dejectele. Astfel, omul se
contamineaz nu prin neptura pduchelui, ci prin leziunile cutanate sau mucoase n care au nimerit dejectele insectei. Infectarea este posibil
i prin inhalarea prafului n care se conin rickettsii uscate sau la nimerirea acestui praf pe conjunctiva ochiului. n SUA de la veverie
zburtoare prin intermediul ectoparaziilor acestora.
Dup inoculare rickettsiile trec n snge, penetreaz n celulele endoteliale ale vaselor sangvine mici, se nmulesc i le distrug. Rickettsiile
secret factori procoagulani care determin tromboz cu inflamaie periadventiial a vaselor mici (nodulii Popov-Frankel). Leziunile sunt mai
numeroase n tegument, SNC, miocard.
Perioada de incubaie 6-23 zile (10-12 zile)
Debutul este brusc, cu febr 40-41 grade C, cefalee, insomnie, slbiciuni, excitaie, hiperactivitate nervoas i psihic.
Se observ hiperemia feei i faringelui, sclerele sunt injectate.
n ziua a 4-6 a maladiei apare o erupie cutanat rozeolo-peteial (pe trunchi, apoi pe membre), nsoit de splenomegalie. Febra dispare peste 2
sptmni. Convalescena este lung i astenia durabil. Dup vindecare nu rmn sechele.

Imunitatea anti-rickettsian este mediat celular, anticorpii neutralizeaz efectul toxic al rickettsiilor.
ns imunitatea nu elimin obligatoriu toate rickettsiile prezente n organismul convalescentului. Aceste bacterii latente se manifest la persoane
n vrst n absena pediculozei, atunci cnd imunitatea scade (boala Brill-Zinsser, tifosul de recdere, tifosul fr pduche). Procesul infecios
poate fi reactivat sub influena unor maladii intercurente, a stresului, etc. n timpul maladiei B-Z rickettsiemia este de 10 ori mai rar dect n
forma epidemic a tifosului exantematic i dureaz cel mult 5-8 zile. Evoluia este benign, erupia este mai abundent, roz, intoxicaia este
redus. La btrni pot surveni complicaii vasculare.

Tifosul exantematic endemic: agentul cauzal este R.typhi, sursa de infecie obolanul, iar vectorul puricele. Clinica se aseamn cu cea a
tifosului epidemic, dar gravitatea este redus - simptome mai puin severe, erupia mai srac.

Diagnosticul direct (examenul microscopic, bacteriologic) se efectueaz n laboratoare specializate.

Prelevate: snge, bioptate din esuturile infectate, vectori
Examenul microscopic: se examineaz celulele endoteliale circulante n snge sau frotiuri-amprente din esutul infectat. Frotiurile se coloreaz
Giemsa sau Macchiavello. Rickettsiile apar roii pe fondul albastru (respectiv verde) al citoplasmei celulei-gazd. Poate fi montat RIF.
Examenul bacteriologic: prelevatele sunt inoculate la cobai sau oarece, n cavitatea vitelin a oului embrionat de gin sau pe culturi celulare.
Tulpina izolat astfel va fi identificat prin RIF, RFC, RAR.
Examenul serologic: este bazat pe depistarea Ac din serul bolnavului cu ajutorul Ag din Proteus OX i Ag rickettsiene (de grup sau de specie).
Reacii nespecifice: Reacia de aglutinare Weil-Felix, folosete ca Ag suspensii de Proteus OX 19. Se pozitiveaz la sfritul primei sptmni
de boal. Titrul aglutininelor atinge valoarea maxim la nceputul convalescenei i scade la valori nesemnificative peste cteva luni dup boal.
Valoare diagnostic are creterea titrurilor de cel puin 4 ori pe parcursul bolii.
Reacii cu antigene rickettsiene (specifice): RFC, cu Ag rickettsian total. Devine pozitiv la finele primei sptmni de boal, maxim n
sptmna 3 sau 4 i persist mai muli ani dup vindecare. Sunt semnificative titruri peste 1:16, cu creterea de cel puin 4 ori n evoluia bolii.
RAR (reacia de aglutinare a rickettsiilor). Este foarte sensibil i specific, cu utilizarea Ag corpusculare purificate. Curba aglutininelor
evolueaz paralel cu cea a Ac fixatori de complement. Titrul diagnostic - 1:160 i mai mult. RHAI. Hemaglutininele pot fi detectate din ziua a 4
de boal n titruri 1:20 1:40 care cresc n sptmna a 2 atingnd cifrele 1:160-1:320. Titrul diagnostic este de 1:160. Peste 3 luni de la debutul
bolii titrul acestor Ac scade pn la valori nesemnificative. RIFI. RN a toxinei rickettsiene. Se efectueaz pe oricei. In calitate de toxin se
utilizeaz o suspensie de rickettsii vii, care va fi neutralizat cu ser imun n diferite diluii. Identificarea ADNului rickettsian prin PCR

Diferenierea dintre tifosul exantematic i boala Brill-Zinsser

Pentru boala Brill-Zinsser este caracteristic: Tifos exantematic n anamnez. Absena pediculozei. Evoluie benign. Reacia Weil-Felix negativ.
Titrul Ac n RFC nu crete n dinamic. Ac din clasa Ig G

Diferenierea tifosului exantematic epidemic de cel endemic: Evoluie benign n tifos endemic; Dup titrul Ac n reaciile cu Ag specifice;
Inocularea intraperitoneal la cobai masculi: R.prowazekii provoac febr, iar R.typhi inflamaie scrotal

Tratamentul tifosului exantematic: Antibiotice care penetreaz intracelular: Tetracicline (doxiciclina, minociclina); Cloramfenicol;
Rifampicina, eritromicina, ciprofloxacina
Profilaxia tifosului exantematic: Msuri antiparazitare: despduchere, deratizare, respectarea igienei
Profilaxia specific: exist vaccinuri inactivate (corpusculare i subunitare) preparate din cultur rickettsian izolat n oul embrionat, n
pduchi sau n plmnii oriceilor albi. Aceste vaccinuri confer imunitate de scurt durat.
Vaccinul viu, preparat din tulpina E de R.prowazekii este mai imunogen, dar are proprieti alergizante.

Genul Coxiella reunete bacterii intracelulare G- (coco-bacterii), care se disting de reprezentanii genului Rickettsia prin rezistena la ageni
fizici (formeaz spori) i prin structura lor antigenic diferit. Se caracterizeaz prin variaie antigenic (de faz). Faza I este virulent, faza II
este atenuat.
Specia-tip este C.burnetii, cu repartiie mondial. Provoac febra Q (Query fever).
Rezervorul de germeni i sursa de infecie l constituie animalele (roztoare, ovine, caprine, bovine).
Cile de transmitere la om: Aerogen (picturi, praf); Alimentar (lapte contaminat); Prin vectori-artropode foarte rar
Profesiile expuse riscului: agricultori, veterinari, muncitori la abatoare, mcelari

62
Dup o incubaie de 2-3 sptmni boala debuteaz brutal cu febr iniial n platou, apoi ondulant, cefalee, transpiraii, astenie, semne de
bronho-pneumonie, pneumopatie atipic i/sau hepatit.
Complicaii endocardita subacut sau cronic cu hemoculturi negative.

Diagnosticul de laborator al febrei Q

Izolarea bacteriilor din bioptate (ficat, tegument, valve) sau din snge. Se efectueaz inocularea cobailor, a oului embrionat de gin sau a
culturilor de celule. Tulpina izolat se identific n RIF
Depistarea rapid a C.burnetti n prelevate prin RIF
Detectarea genomului cu ajutorul PCR
Diagnosticul serologic: RFC cu Ag de faza I i II (existena Ac anti-faza I este utill n diagnosticul endocarditelor); RIFI (permite separarea
IgG, IgM i IgA); creterea titrului Ac IgA este specific n endocardite; ELISA.

109. Caracterele morfobiologice ale virusurilor gripale (clasificarea in serogrupuri si serotipuri, morfologia, structura virionului,
structura antigenica, variabilitatea genetica). Patogeneza gripei. Diagnosticul de laborator al gripei. Prelevatele, metodele de diagnostic
(virusoscopica, virusologica, serologica). Profilaxia si terapia specifica a gripei.
FAMILIILE ORTHO- I PARAMYXOVIRIDAE
Mixovirusurile reunesc virusuri ARN- cu afinitate pentru mucoproteine (myxo mucus) repartizate n 2 familii: Orthomyxoviridae;
Paramyxoviridae

FAMILIA ORTHOMYXOVIRIDAE
Genuri: Influenzavirus A (virusul gripal A); Influenzavirus B (virusul gripal B); Influenzavirus C (virusul gripal C); Thogotovirus (virusurile
Dhori i Thogoto)
Agenii cauzali ai gripei infecie respiratorie acut cu simptome sistemice importante.
Tipul A provoac pandemii periodice (1918 20 mln decesuri, 1957, 1968, 1977)
Tipurile A i B epidemii regionale i locale. Anual 3-5 mln cazuri grave, 300 500 mii decesuri
1933 prima cultur de virus gripal uman (Smith, Andrewes i Laidlaw).

MORFOLOGIA, COMPOZIIA CHIMIC A VIRUSULUI GRIPAL tipul A

Particule rotunde, 80-120 nm, sau filamentoase, constituite din:
1. Genom = 8 segmente de ARN
2. Capsida (NC) tubular, de simetrie helicoidal, separat pentru fiecare segment
3. Supercapsida:
Dublu strat lipidic extern (origine celular)
Strat intern proteic (matrice, prot. virale M1, M2) asigur legtura dintre GP de suprafa i NC; M2-canal ionic
2 tipuri de GP nserate n membran: hemaglutinina - HA (H) i neuraminidaza -NA (N), distincte morfologic i biologic (virusul
gripal C doar HA)
Hemaglutinina (HA, H) H1 H16
Trimer compus din 2 polipeptide HA1 i HA2
HA1 fixarea specific a virionilor la receptori glicopeptidici membranari (inclusiv de pe hematii), ce conin acid N-acetilneuraminic/acid sialic
HA2 fuziunea supercapsidei cu membrana celulei-gazd
Anticorpii anti-HA: Inhib fixarea virusului de celula-int; Inhib hemaglutinarea
Neuraminidaza (NA) N1 N9. Tetramer, polipeptid unic. Funcii : Cliveaz legtura dintre acidul sialic i glucidul alturat (tratarea celulelor cu
neuraminidaz impiedic infecia celulei cu virus). Asigur detaarea virionilor nmugurii prin eliminarea acidului neuraminic/sialic din
receptorii celulari
Anticorpii anti-NA limiteaz diseminarea virionilor
STRUCTURA ANTIGENIC: Ag interne NP i M, specifice de tip A,B,C; Ag externe HA i NA, specifice de subtip i de variant. 16
variante de HA (H1-H16) i 9 de NA (N1-N9), asociaiile lor formeaz subtipuri de virus A. La om N1, N2 i H1, H2, H3 (H1N1; H2N2;
H3N2)
Variaii antigenice ale ha i na:
Variaii Ag minore drift (mutaii punctiforme, modific civa AA din HA sau/i NA cu aparitia unor varieti de serotipuri, caracteristic pentru
tipurile A i B) provoac epidemii fiecare 3-4 ani.
Variaii Ag majore shift (recombinaii genetice, schimbarea complet a unui sau ctorva segmente genomice HA, NA, P, M, etc. Determina
mutaii importante, aparitia serotipurilor noi) - provoac pandemii.

Cultivarea virusului gripal: Ou embrionat de gin (cavitatea amniotic i alantoic); Culturi de celule (fibroblati de pui, culturi primare de
rinichi de maimu, etc); Reproducerea infeciei la maimue, dihori
Multiplicarea virusului. Ataarea (adsorbia) HA1+acid neuraminic. Penetrarea endocitoz. Decapsidarea fuziunea supercapsidei i
membranei vacuolei de endocitoz, NC penetreaz n nucleu prin porii membranei nucleare. Biosinteza (eclipsa): Transcrierea ARNm
(transcriptaze P1, P2, P3), Translaia ARNm i sinteza proteinelor virale (Ct), Replicarea genomului (ARNv....ARNc....ARNv). Asamblarea: n
citoplasm: HA i NA se inser n MCt, iar M1 i M2 o cptuesc din interior, n nucleu: NP se asociaz cu ARN-, formnd NC, apoi migreaz
spre zonele modificate ale MCt (via AG). EliberareA nmugurire. NA ajut la desprinderea virionilor de MCt i evit formarea agregatelor.
Celula rmne aparent viabil, dar epuizat i moare. Citoliza este determinat de rspunsul imun citotoxic (NK, LTC).

Virusul gripal A se ntlnete la om i animale: porc, cal, psri, foci, balene, etc. Virusul gripal B om (foci)
Virusul gripal C om (cine, porc). Sursa de infecie omul bolnav (animale? Cazuri sporadice de grip aviar la om (H7N1, H9N2, H5N1)
2003/04 n Vietnam, 1997 Hong Kong).

Virusul este prezent n rinofaringe n primele 2 zile de la debutul bolii. Mecanismul de transmitere aerogen, prin picturi Flugge (tuse, strnut).
Virusul se propag n cile respiratorii superioare i inferioare, inducnd o inflamaie a mucoasei i edem al laringelui, traheii i bronhilor.
Celulele epiteliale ciliate sunt distruse (fr a afecta celulele bazale). Procesul regenerativ ncepe cu ziua a 5 i repararea complet a epiteliului
are loc n 1 lun. Contingent de risc - persoane n vrst, copii, imunodeprimai, bolnavi cu maladii cronice cardiovasculare, respiratorii,
insuficien renal, diabet.

63
Forme clinice:
o Gripa inaparent, asimptomatic
o Gripa comun (benign, durata 4-7 zile). Incubaia cteva ore - 2 zile. Debut brutal, cu frison, febr, cefalee, rinoree, tuse, mialgii,
artralgii, anorexie, astenie (IFN?). Complicaii (infecii secundare bacteriene): otite, sinusite, bronite, bronhopneumonii, etc.
Complicaii rare: sindromul Reye (encefalit acut cu degenerescena ficatului); sindromul Guillain-Barre (poliradiculonevrit).
o Gripa malign (pneumonie viral primitiv cu edem pulmonar i IRA)

Prelevate: lavaje/aspiraii nazale, traheale, expectoraii bronice (n primele 48 ore)

Examenul virusoscopic microscopia electronica, RIF
Examenul virusologic
1. Izolarea n oul embrionat de gin de 10-11 zile sau culturi de celule (MDCK).
2. Indicarea virusului activitate hemaglutinant fa de eritrocite de cobai, gin, curcan a lichidului amniotic i alantoic, hemadsorbia
lor pe cultura de celule.
3. Identificarea RIF, RIHA, RIHAds, RN
Detectarea Ag virale n sedimentul celular (RIF, ELISA)
Detectarea genomului viral
Serodiagnosticul gripei: Retrospectiv, de confirmare. Se examineaz seruri perechi. Se determin creterea titrului de Ac de 4 ori, sau prezena
Ac Ig M. Reacii: RFC cu Ag NP (determinarea tipului), RIHA cu sua viral circulant, ELISA, RN
Imunitatea: celular (LTC, NK), umoral (Ig G, Ig A), specific de subtip.

Tratamentul gripei: Amantadin, rimantadin. mpiedic ptrunderea NC n citoplasma celulei infectate cu virus A. Posibilitate rezistenta
tulpini. Zanamivir, oseltamivir. Au structura similar acidului neuraminic. Inhib activitatea NA, mpiedicnd eliberarea virusurilor A i B i
diseminarea lor prin mucus, determin agregarea virionilor. Interferon, unguent oxolinic.Tratament simptomatic (antipiretice, antibiotice, etc)
Profilaxia specific a gripei: Vaccinuri inactivate: conin 2 tulpini de virus A (H1N1 i H3N2) i o tulpin B, cultivate in ovo i inactivate cu
beta-propiolacton. Inoculare i/m, s/c; Ig G persist 5-6 luni. Vaccinuri vii atenuate: tulpinile sunt cultivate in ovo la 25 C, atenuate prin pasaje
multiple. Administrare intranazal prin aerozol, imunitate local (Ig A). Vaccinuri subunitare: constituite din HA i NA

110. Familia Picornaviridae. Genul Enterovirus. Caracterele morfobiologice ale virusurilor poliomielitice (morfologia, structura
virionului, structura antigenica). Patogeneza poliomielitei. Diagnosticul de laborator. Prelevatele (recoltarea, prelucrarea prealabila),
metodele de diagnostic (virusologica, serologica). Profilaxia specifica a poliomielitei.

FAM. PICORNAVIRIDAE. agenti patogeni ai unor imbolnaviri digestive, respiratorii, uneori nervoase, +/- exantem la om si animale (bovine,
porcine, simiene)
Clasificare: Genul Enterovirus - boli la om, Genul Rhinovirus - boli la om, Genul Cardiovirus, Genul Aphtovirus
Genul Enterovirus
Clasificare: 68 serotipuri (antigenicitate, imbolnaviri): v. Poliomielitice 1, 2, 3; v. Coxsackie: grup A (23 serotipuri), grup B (6 serotipuri); v.
Echo: 32 serotipuri ; Enterov. (Ev): 68- 71; v. Hepatitei A (Ev 72)
Caractere comune
Morfologie
virioni sferic , 27-30nm, neinveliti
capsid : cubica (icosaedric, 60 subunitati (organizate in 12 pentamere); subunitatea are 4 proteine capsidale (VP1, VP2, VP3 in exterior
si VP4 in interior)
genom: ARN m.c., sens +, are atasat o VPg cu rol de initiere replicare
Structura antigenica depinde de epitopii exteriori VP1, VP2 si VP3 induc Ac SN, v.polio VP1 rol in SN. Diferente Ag prin: RSN, imunodifuzie
- in gel, RFC. Reactii incrucisate : v.polio 1 si 2

Actiunea agentilor fizici si chimici: rezista zile la +220C si n sapt. la +40C. distruse la +500C; ionii Mg++ rol protector (Mg Cl2 stabilizator
vaccin ); conservare indelungata : - 700C ; UV, deshidratarea: inactivare rapida; Incorporarea de coloranti (rosu neutru, acridin orange) le
sensibilizeaza la lumina. lipsa invelis: rezistenta la solventi lipidici (eter, cloroform) detergenti. rezistente la: lizol, fenol, derivati de amoniu
cuaternar. sensibile la: formol (0,3%), clor, guanidina

Multiplicare:
1. adsorbtia pe receptori dep. de: pH si electroliti; la om: gena de pe cromozom 19 codifica receptor pentru v. polio
2. patrundere: viropexie
3. decapsidare, pierdere VP4 :
4. eliberare ARNv care devine ARNm, tradus la ribozomi
5. sinteza poliproteina gigant, scindare in P1 apoi clivare in VPO, VP3, VP1 si P1 si P3 (clivare in replicaze si proteaze = VPg care
initiaza sint. ARN si ARN polimeraza)
6. prod. de ARN progen sens + se face cu ARN polimeraza care sintetiz. catene complementare sens- apoi de sens + , concomitent cu
sint. proteine virale
7. asamblarea in reticulul endoplasmatic
ciclu infectant: 5-10 ore (particule/celula = 10 5)

V. POLIOMIELITIC
Poliovirus
Clasificare serotipuri: tip 1: Brunhilde; tip 2: Lansing ; tip 3: Leon

cultivare: culturi primare rinichi maimuta, amnios uman, linii continue: KB, HeLa, Hep2
efect citopatic: rotunjire, crestere refringentei, picnoza, degenerare, desprindere
det. plaje circulare, clare, margini nete folosite la clonarea tulpini atenuate

64
animale: cimpanzei, maimute Rhesus, Cinomoglus: inoculare i. medulara, i. cerebrala sau orala: viremie, eliminare v. fecale, paralizii flasce si r.i.
umoral
manifestare infectie: asimptomatica/imbolnavire minora majoritara. afectare sistem nervos, meningita aseptica si/sau poliomielita paralitica
severa
evolutie: patrundere: orofaringe, transport tesut limfoid (rinof., placi Peyer), multiplicare, diseminare limfatica, viremie tranzitorie cu
manifestari clinice minore (respiratorii, digestive). Uneori multiplicare masiva tesut r.e. cu viremie persistenta si invazia sistemului nervos; virus
prezent sange inainte debut clinic (+/- paralizii); infectare sanguina a sistemului nervos, diseminare pe axoni, clinic: febra, cefalee, redoarea
cefei, paralizii flasce (leziuni neuroni motori coarne ant. maduva = poliomielita paralitica acuta). Posibila invazie a creier, talamus, hipotalamus,
nuclei cerebelosi, trunchi cerebral, cortex motor = poliomielita bulbara/encefalita poliomielitica cu evolutii extrem de grave. Lezare nervi
cranieni: paralizia faringe, paralizia corzi vocale (perechea X), paralizii oculare (perechea V)
leziuni neuronale/extraneuronale: cromatoliza, distructie masiva, neuronofagie; edem, proliferare cel., infiltrat perivacular limfocitar (ggl ., placi
Peyer, miocard). factori predispozanti: traume, efort fizic, sarcina, injectii, amigdalectomie. incubatie 7-14 zile

Imunitate :
dupa boala sau vaccinare: rezistenta indelungata de tip
RIU:
Ac neutralizanti fata de VP1 si VP2 apar inainte debut (multiplicare intestinala si tesut limfoid)
Ac circulanti previn diseminarea, nivel maxim 2-6 sapt., persista toata viata
Ac FC apar mai tirziu si dureaza mai putin
Ac SN si FC trec pasiv la copil = rezistenta 0-6 luni
imunodeficienti: fac boala atipica cu afectare s.n.
imunitatea locala:
IgA impiedica reinfectia la intestin
amigdalectomia scade rezistenta locala

Epidemiologie: raspindire globala; fosta endemica zone calde si epidemica zone remperate; eradicare: 2000; sursa de v.: om cu infectie
inaparenta; transmisie: fecal-orala (direct/indirect: apa, alimente infectate, secretii faringiene);
v. prezent in orofaringe n. zile inainte debut; eliminare fecale: 3-6 sapt dupa imbolnavire; susceptibilitate: generala

Profilaxie:
vaccin inactivat (Salk): preparat culturi rinichi maimuta, inactivat formol
1. confera imunitate umorala (blocheaza v. la orof)
2. elimina posib de mutante si revertanti
3. utilizabil in zone tropicale
4. utilizare imunodepresati
5. necesita rapeluri numeroase
vaccin viu atenuat (Sabin): preparat pe diploide umane sau culturi simiene
1. induce i. locala si umorala persistenta (toata viata)
2. blocheaza multiplicarea intestinala
3. administrare orala
4. posiblie reversii si mutante virulente
5. transmitere v. vaccinale la neimunizati
6. paralizii post vaccinale (1 caz/1milion vaccinari)
vaccin ADN recombinant (de viitor din polipeptide virale VP1 sau genom viral

111. Familia Picornaviridae. Genul Enterovirus. Caracterele morfobiologice ale virusurilor Coxsackie (morfologia, structura
virionului). Clasificarea dupa structura antigenica. Rolul in patologia umana. Diagnosticul de laborator al infectiilor cauzate de
virusurile Coxsackie. Prelevatele (recoltarea, prelucrarea prealabila), metodele de diagnostic.
Coxsackie virus
Relatii virus celula gazda
cultivare: culturi de celule:
V. Coxsackie B: culturi primare rinichi maimuta, rinichi embrionar, amnios uman
V. gr. A: linie continua RD ECP: rotunjire, desprindere
animale: V.C grup A inoc. soarece n.n. (i. cerebral, subcutanat, i. peritoneal) polimiozita, edem/necroza musculaturii striate, paralizii flasce;
VC grup B: meningoencefalita (encefalomalacie), pancreatita, miocardita, hepatita si necroza tesut adipos
Patogeneza clinica
patrundere: respiratorie si digestiva, diseminare sanguina cu localizari diverse:
herpangina: debut brusc, febra, disfagie (vezicule, papule, zone rosii pe pilieri, palat, amigdale). Evolutie benigna (4-6 zile). Afectare copii.
Boala gurii, mainilor si picioarelor: herpangina, exantem maculopapular si veziculos bulos (maini, picioare, fese). Vindecare 7-14 zile
Pleurodinia, mialgia epidemica (boala Bornholm): febra, stare generala alterata, durere retrosternala (diafragm), +/- pericardita
Miocardita: la nou-nascut (transmitere perinatala), frecvent fatala; adult benigna
Menigite aseptice, pancreatite, nefrite, malformatii congenitale (gravide)
Imunitate:
specifica de serotip: evid. prin RSN, IF, ELISA
Ac SN apar la 7 zile, max. 3 saptamini, persista indelungat.

Epidemiologie: raspindire globala. endemo- epidemic (vara toamna); focare epidemice colectivitati (scoli,crese)
sursa: om. transmisie: fecal orala; aerosoli. susceptibilitate: generala

DIAGNOSTIC LABORATOR

65
produse patologice: materii fecale, exsudat faringian, l.c.r., cheag sanguin, lichide veziculare, exsudat conjunctival, probe necroptice (maduva
spinarii, perete continut intestinal, muschi toracici, formatiuni nervoase)
izolare
culturi celulare
v Coxsackie B, V.polio, V.Echo : culturi primare rinichi maimuta, diploide umane
V.Coxsackie A: lina celulara RD
animale:
V.Coxsackie A si B: soarece nou-nascut
identificare :
culturi celulare : SN cu seruri specifice de tip (Polio, Coxsackie B si Echo)
animale : SN la v Coxsackie A
diagnostic serologic:
Det. Ac pe probe duble (0-2/3 sapt) prin: SN, RFC, HAI, ELISA, precipitare in gel, reducerea plajelor
diagnostic de certitudine:
virus izolat si r.i. serc (crestere de 4 ori a Ac)
tablou clinic caracteristic (paralizii)
context epidemiologic pentru enteroviroze

112. Familia Picornaviridae. Genul Enterovirus. Caracterele morfobiologice ale virusurilor ECHO (morfologia, structura
virionului, structura antigenica). Rolul in patologia umana. Diagnosticul de laborator al infectiilor cauzate de virusurile ECHO.
Prelevatele (recoltarea, prelucrarea prealabila), metodele de diagnostic.

Echovirus. Grupa: Grupa IV ((+) ssRNA). Familie: Picornaviridae. Genul: Enterovirus. Specia: Human enterovirus B. Subtipul:
Echovirus

Un echovirus este un tip de virus ARN care aparine Enterovirus gen de familie Picornaviridae. [1] Echoviruses se gsesc n tractul gastro-
intestinal (prin urmare, ea fiind parte din genul enterovirus), precum i expunerea la virusul cauzeaza infecii oportuniste i alte boli. Echovirus
este foarte infecioas, iar obiectul su principal este de copii. Echovirus se numr printre principalele cauze de boli acute febrile la sugari i
copii mici, si este cea mai frecventa cauza de meningit aseptic. [3]In cazul unui sugar infectare cu acest virus dup natere poate provoca boli
sistemice grave, i se asociaza cu o mare rata a mortalitii infantile. Echovirus poate imita simptomele provocate de alte infecii bacteriene
comune i virale.
Structura i infecii virale: echovirus are 24-30 nanometri (nm), i este similar cu alte virusuri, deoarece are o capsid goala de proteine, care
reprezint 75% din particule de virus care nconjoar un nucleu dens central al ARN-unicatenar. Acest ARN-ul are o lungime de aproximativ 7,5
kilobase (KB), conine o replicaza ARN, codificarea de proteinevirale, i un singur polyprotein care este responsabil de formarea de proteine
structurale i alte proteine necesare pentru replicarea celular. Proteinele structurale determina domeniul gazd i joac un rol foarte important n
realizarea genomului ARN-ul n citoplasma celulelor gazd noi.

Unele replicari virale a unui echovirus are loc n nazofaringe dup infecare i apoi se extinde la ganglionii limfatici regionali. Cu toate acestea,
cele mai multe particule virale sunt nghiite i ajunge la nivelul tractului intestinal mai putin, n cazul n care virusul se presupune c se leag de
receptori specifici. Virusul se rspndete apoi la inferior tractului intestinal, replicinduse dar care nu provoac nici un efect major celular de-a
lungul drumului. Apoi, virusul se rspndete la multe siste-uri secundare n organism, cum ar fi sistemul nervos central, ficatul, splina, maduva
osoasa, inima i, n final la plmni. Adiional replicarea virusului va avea loc, provocnd simptome 4 - 6 zile de la infectare
Simptome si diagnostic: Imbolnavirea cu Echovirus apare n mod disproporionat la brbai. Infecia n primele dou sptmni de la natere
poate provoca efecte devastatoare i potenial boli letale . La aceast populaie, decesul de obicei rezulta de la insuficien hepatic copleitoare
sau miocardit, mai degrab dect infeciile sistemului nervos central. Copiii mai mari i adulii au un prognostic mai bun. Miocardit este cea
mai frecvent complicaie la aduli.
Infecii Echovirus pot aprea la oameni de toate grupele de vrst. Cu toate acestea, mai n vrst, scade producerea de anticorpi specifici pentru
a echovirus. Mai multe studii efectuate n timpul epidemiilor arat c sugarii devin infectati cu rate mai mari dect copiii mai mari i aduli.
Prelevate: Spalatura nazofaringiana,singe materii fecale LCR
Diagnostic: Virusoscopia. Se izoleaza in culturi de celule are efect citopatic. Identificarea Rnpe culturi de celule RHAI, RIF,
Serologic:RN<RIF<RFC
Tratament: Nici un tratament specific pentru infecia cu echovirus nu este n prezent disponibila. Aceasta este direcionata la ameliorarea
simptomelor.

113. Virusurile hepatitice. Virusurile hepatitelor A si E. Clasificarea (familie, gen, sp.). Caracterele morfobiologice. Markerii
serologici. Patogeneza hepatitelor A si E. Diagnosticul de laborator al hepatitelor A si E. Prelevatele, metodele de diagnostic. Profilaxia
specifica.
HEPATITE leziuni inflamatoare ale ficatului
ORIGINE infecioas, medicamentoas, toxic, autoimun, etc
Hepatitele virale leziuni determinate de aciunea citopatic direct a virusului n cauz, sau, mai frecvent, de reacia imun contra celulelor
hepatice infectate.
VIRUSURILE HEPATITICE
Virusuri dominant hepatotrope
1. Virusul hepatitei A HAV- (fam. Picornaviridae)
2. Virusul hepatitei B HBV- (fam. Hepadnaviridae)
3. Virusul hepatitei C HCV- (fam. Flaviviridae)
4. Virusul hepatitei D HDV - (neclasificat)
5. Virusul hepatitei E HEV - (fam. Hepeviridae)
6. Virusul hepatitei G HGV?
7. Virusurile TT (Circovirus ?)
8. Virusuri ce afecteaz ficatul ocazional: Coxsackie, virusul citomegalic (CMV), virusul Epstein-Barr (EBV), virusul herpes simplex
(HSV), .a.
66
MANIFESTRI CLINICO-BIOLOGICE ALE HEPATITELOR
Incubaia variabil (15 zile 6 luni)
Gravitatea hepatitele A i E au evoluie benign, hepatitele B, C, D acute i cronice, complicaii grave
Forma clinic clasic febr, artralgii, astenie, erupii, dereglri digestive, urmate de icter (3 sptmni), asociat cu anorexie, oligurie,
decolorarea maselor fecale, bilirubinurie.
Forme anicterice, asimptomatice (80-90% cazuri)
Hepatita fulminant foarte grav
Hepatita cronic persistent i cronic activ (cu citoliz)
Complicaii ciroz, cancer primitiv al ficatului
Manifestri extrahepatice, determinate de complexe imune circulante periarterit nodoas, poliartrit, glomerulonefrit, poliradiculonevrite,
etc.
RM - ar endemic prin hepatitele B i C. Indicele de prevalen a HBV este de peste 8%, iar al HCV de 5%.

VIRUSUL HEPATITEI A
Familia Picornaviridae
Genul Hepatovirus
Specie Virusul hepatitei A (HAV)
Dimensiuni 28-30 nm
Genom ARN+, liniar
Capsid icosaedric, 60 capsomeri, compui fiecare din 4 polipeptide VP1, VP2, VP3, VP4
Rezisten: total la 600C 1 or, parial - 12 ore, rezist la % de clor uzuale. Inactivat de formol, beta-propiolacton, UV, hipoclorit de sodiu.
Se cunosc 7 genotipuri (om, maimue)
Cultivarea : Marmozete, cimpanzei, Celule de hepatocarcinom uman; Celule diploide umane; Celule din rinichi de maimu
Receptorul celular mucina (GP membranar). ECP nu provoac
Surs i rezervor de infecie omul bolnav
Mecanismul de transmitere fecal-oral (mini murdare, alimentele, apa contaminate); cazuistic transfuzional
HAV se multiplic n esutul limfoid intestinal i citoplasma hepatocitelor. Se elimin cu masele fecale dup 2 sptmni de la infectare,
diminueaz odat cu apariia semnelor clinice. Viremia 1-2 sptmni.
Hepatocitoliza este determinat de LT CD8, NK.
Incubaia 30 zile (15 50 zile)
Forme clinice forme asimptomatice (90%), forme benigne (1-2 spt.), rareori forme grave, fulminante. Lipsa cronicizrii!

Markerii virali n cursul maladiei:

HAV (Ag viral) (mase fecale, snge) n ultimele 2 sptmni de incubaie i cteva zile de la apariia icterului
IgM anti-HAV depistate de la debutul fazei icterice, titru maxim peste o sptmn i dispar dup 8-12 sptmni.
IgG anti-HAV persist toat viaa.
ARN viral (n mase fecale, snge, hepatocite).

VIRUSUL HEPATITEI VIRALE E (HEV)

HEV depistat n 1983 prin ME
Familia Hepeviridae
Genul - Hepevirus
Structura HEV
Dimensiuni 27 30 nm
Genom ARN+ (descris n 1990)
Capsid icosaedric (protein unic glicozilat)
HEV se repartizeaz n 3 grupe genomice: I asiatic, II mexican, III nord-american (include i tulpini porcine)
Sursa de infecie omul bolnav
Mecanismul de transmitere fecal-oral (ap, alimente), posibil parenteral (la hemofili, persoane cu transfuzii, hemodializ)
Perioada de incubaie 30 zile
Clinica hepatit acut, asemntoare cu hepatita A. Forme grave la femei gravide, n special n trimestrul III al sarcinii (20-40% mortal). Risc
de avort i natere prematur (12 30% cazuri)

Markerii HEV:
Virusul (Ag viral) prezent n mase fecale n faza acut (ME)
IgM (3 luni de la debut) i IgG anti-HEV
Genomul viral n mase fecale, hepatocite

114. Virusurile hepatitice. Virusul hepatitei B. Clasificarea (familie, gen, sp.). Caracterele morfobiologice. Markerii serologici.
Patogeneza hepatitei B, consecintele. Diagnosticul de laborator al hepatitei B. Prelevatele, metodele de diagnostic. Profilaxia specifica.
Ag Australia a fost detectat n 1964 de Blumberg, actualmente numit Ag HBs
HBV virus ADN, ciclul de replicare comport o etap de transcripie invers
Extrem de contagios i prezent n titruri mari n lichide biologice. Provoac hepatite acute, chiar fulminante, hepatite cronice, ciroz,
hepatocarcinom.
Peste 350 mln persoane infectate n lume.
Peste 1,5 mln decesuri anual.
Clasificare: Familia Hepadnaviridae; Genul Orthohepadnavirus; Specia Virusul hepatitei B (HBV)
Morfologia: Particule sferice de 42 nm (particulele Dane), infecioase virionul complet (10 9 part/ml). Particule sferice, lipsite de acid nucleic,
de 22 nm, neinfectioase; Structuri tubulare, 200-700 nm lungime, neinfectioase

Structura HBV (particula Dane)

67
Genomul: ADN circular bicatenar parial (2/3). Posed catena lung L(-) i catena scurt S(+). Se disting 8 genotipuri (A H).
Nucleocapsida (NC, core) icosaedric, comport Ag HBc, asociat cu Ag HBe (solubil). n NC se afl i ADN-polimeraza i timidin kinaza.
Supercapsida dublu strat lipidic asociat cu proteine virale (Ag HBs). Un receptor pentru albumin din supercapsid intervine la etapa de
penetrare a virusului.
Rezistena : HBV este rezistent la aciunea eterului, la desicare i cldur.
HBV i pstreaz infeciozitatea mai muli ani la -20 grade, cteva luni la +30 grade, cteva ore la +60 grade. Este distrus la fierbere i cu
hipoclorit de sodiu. Animale experimentale maimue cimpanzei.

Structura antigenic a HBV (markeri epidemiologici)

Ag HBs, de suprafa. Posed determinani de grup (a) i de tip (d/y i w/r). Serotipuri ale Ag HBs : ayw, ayr, adw, adr, etc. Anticorpii
anti-HBs au rol protector.
Ag HBc, din NC, nu este detectabil n ser, doar n nucleul hepatocitelor infectate.
Ag HBe, solubil, component al NC. Prezent n ser i martor de infeciozitate (replicare viral).
ADN polimeraza
Timidin kinaza
Ag suscit sinteza Ac anti-HBs, anti-HBc, anti-HBe, anti-ADN polimeraz.

Multiplicarea HBV
Virusul penetreaz n hepatocit debarasat de supercapsid datorit receptorului su pentru albumin. Dup decapsidare ADN este completat de
polimeraza viral, devenind bicatenar. ADN-ul viral ptrunde n nucleul celulei.
ARN polimeraza gazdei transcrie catena ADN L(-) n ARN-pregenomic (+) i ARNm. n citoplasm are loc translarea ARNm i sinteza
proteinelor virale. ARN-pregenomic (+) este ncorporat n capsid i ADN polimeraza viral sintetizeaz catena L (-) activitate de
reverstranscriptaz. Pe matricea catenei L (-) este sintetizat catena S (+). Polimeraza manifest activitate de RNaz H i degradeaz ARN-
pregenomic. NC capt supercapsida la nivelul MCt i virionul nou format este eliberat prin nmugurire (particulele Dane, infecioase).
Proteinele externe (HBs) sunt produse n exces i se asambleaz n ser n particule sferice sau tubulare, neinfecioase. HBV nu este citolitic.
Hepatocitoliza este determinat de rspunsul imun al gazdei. Hepatocitele infectate prezint pe suprafaa lor antigene virale, ce stimuleaz un
rspuns imun. Limfocitele T CD8 i celulele NK atac i distrug celulele bolnave, iar anticorpii specifici neutralizeaz virusul circulant.

DE REINUT !!!
1. ADN viral dublu catenar este extrem de stabil, poate persista sub form de plasmid n hepatocit, fiind la originea portajului cronic i
fenomenelor de reactivare.
2. ADN viral se poate integra n cromozomul hepatocitelor (aciune oncogen posibil).
3. Implicarea transcriptazei inverse se afl la originea unei rate de mutaii crescute (rezisten la chimioterapice, eec n cursul
seroterapiei sau vaccinare, mutante fr Ag HBe).

Patogeneza hepatitei virale B

Sursa de infecie omul. HBV este prezent n sngele bolnavului, secreii genitale i sperm, saliv, lapte, urin, lacrimi.
Cile de transmitere a HBV:
1. Parenteral prin snge i derivate (transfuzii, tratament cu produse sangvine, activitate profesional, injecii cu seringi contaminate
-toxicomani, tatuaj, piercing, acupunctur).
2. Sexual (homo-/hetero-).
3. Vertical de la mam la copil (la natere sau n perioada neonatal).
4. Transmiterea direct (contact, srut) nu este exclus.
5. Riscul infeciei prin injecie 20-30%
6. Contagiozitate sangvin extrem de 10 ori superioar infeciei cu HCV i de 100 ori HIV.
Perioada de incubaie - 30180 zile (10 sptm)
Perioada de stare simptomatic la 20-30% pacieni (forme anicterice 70-80%)
Vindecare 90%
Hepatita viral B poate evolua spre cronicizare (10% la persoane imunocompetente).
Hepatita fulminant 0,1 - 1%
Ciroza hepatic sau cancer 20%

CINETICA MARKERILOR
Hepatita acut
o Ag HBs este primul marker depistat n ser dup 1-3 luni de la contagiu, persist 1-2 luni i dispare peste cteva sptmni dup
normalizarea transaminazelor. Persist la purttorii cronici.
o Ag HBe apare imediat dup HBs, marker de replicare viral, dispare naintea Ag HBs.
o Ac anti-HBc (IgM) apar peste 2-4 spt dup Ag HBs.
o Ac anti-HBe apar dup ncetarea replicrii virale, odata cu dispariia Ag HBe. Marker de pronostic favorabil.
o Ac anti-HBs apar peste 2-3 sptmni dup dispariia Ag HBs (fereastr imunologic). Neutralizani. Markeri ai vindecrii.
Lipsesc la purttorii cronici.
Evoluie favorabil: dispariia Ag HBs i Ag HBe, apariia succesiv a Ac anti-HBc, anti-HBe i anti-HBs.
Hepatita fulminant prezena constant a IgM anti-HBc n titru nalt.
Hepatite cronice (evoluie peste 6 luni).
Hepatit cronic activ (persistena Ag HBs, Ag HBe i Ac anti-HBc - IgG).
Hepatit cronic persistent (Ag HBs, Ac anti-HBe, anti-HBc) - purttor cronic de Ag HBs. (Reactivri sunt posibile, supraveghere
necesar).

115. Virusurile hepatitice. Virusul hepatitei C. Clasificarea (familie, gen, sp.). Caracterele morfobiologice. Markerii serologici.
Patogeneza hepatitei C, consecintele. Diagnosticul de laborator al hepatitei C. Prelevatele, metodele de diagnostic. Profilaxia specifica.
Familia Flaviviridae, Genul Hepacivirus,

68
Dimensiuni 55-65 nm. Genom ARN+, liniar. Heterogenitate genetic - se disting 6 (11 ?) genotipuri i numeroase subgenotipuri. HCV
circul sub forma de un amestec complex i instabil de populaii virale genetic distincte. n Europa predomin genotipul 1, care este mai puin
sensibil la tratamentul cu IFN. Capsida icosaedric, protein unic. Supercapsida derivat din membrana reticulului endoplasmatic, cu 2
glicoproteine virale E1 i E2.
Replicarea HCV are loc in citoplasma hepatocitelor i a celulelor mononucleate din snge
Markeri epidemiologici Ag HCV, Ac anti-HCV, ARN viral
Transmitere: Prin transfuzii, transplant de esut i organe, Droguri administrate i/v, Nozocomial (n mediu medico-chirurgical, stomatologie,
piercing, tatuaj, acupunctur), Vertical , Sexual, Intrafamilial (foarfece, peptene, aparat de ras, etc)
Incubaia 4 12 sptmni
Hepatita C acut: 70-90% - asimptomatic, activitatea seric a transaminazelor (n special ALAT) este moderat crescut i tranzitorie, uneori
oscilant. Se poate vindeca spontan n 20 % cazuri, fr a conferi imunitate complet.
Hepatita C fulminant co-infecie cu HBV sau HAV.
Hepatita C cronic (80% cazuri) persistena HCV peste 6 luni de la infecia acut. Cretere cronic a activitii ALAT, care este moderat i
fluctuant. Co-infecia cu HIV factor stimulator. Complicaii ciroz (20% cazuri), cancer.
116. Virusurile hepatitice. Virusul hepatitei D. Clasificarea (familie, gen, sp.). Caracterele morfobiologice. Markerii serologici.
Patogeneza hepatitei D, superinfectie si coinfectie. Diagnosticul de laborator al hepatitei D. Prelevatele, metodele de diagnostic.
Profilaxia specifica.
Agent viral defectiv, satelit al HBV, 36-37 nm. Descoperit n 1977.
Genul Deltavirus
Genom ARN-, circular (3 genotipuri). Capsida sferic, 2 proteine, Ag Delta. Supercapsid derivat din HBV, cu 3 forme de Ag HBs
Se replic n nucleu, independent de HBV, dar care i asigur supercapsida cu Ag HBs. Manifest efect citopatic direct sau via rspunsul imun
celular.
Markerii HDV Ag HDV, Ac anti-HDV, ARN viral (asociai cu markeri ai HBV).
Mecanismele i cile de transmitere identice cu HBV.
Infecia Delta se poate manifesta n acelai timp cu hepatita B (co-infecie, evoluie acut, risc de forme fulminante) sau survine la un purttor
cronic (suprainfecie, risc de hepatit cronic activ cu evoluie rapid n ciroz, forme fulminante sunt posibile).

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HEPATITELOR VIRALE

Diagnostic paraclinic: dozarea transaminazelor, bilirubinei, raportul albumine/globuline.
Trombopenie, leucocitoz, diminuarea protrombinei factori de alert.
Diagnostic etiologic
Detectarea virionilor (ME, IME) sau Ag virale (ELISA, RIF) n bioptate hepatice sau snge.
Detectarea AN virali ntrahepatic sau n snge (hibridare, PCR).
Evidenierea anticorpilor antivirali n serul sangvin prin tehnici ELISA, ARI, imunoblot, RIFI
Diagnosticul hepatitei A
Evidenierea Ig M anti-HAV (Ig G imunitate)
Diagnosticul hepatitei B
Depistarea Ag HBs, Ag HBe, Ac anti-HBc, anti-HBs, anti-HBe, anti-polimeraz n ser; Ag HBc n hepatocit)
Diagnosticul hepatitei C
Depistarea Ac anti-HCV (80% peste 15 spt de la expoziie, 95% - 5 luni, 97% - 6 luni )
Diagnosticul hepatitei D
Evidenierea Ac anti-HDV

PROFILAXIA HEPATITELOR VIRALE

1. Control eficace al donatorilor de snge, esuturi, organe, sperm, prevenirea MST i nozocomiale, utilizarea materialelor de uzaj unic,
ameliorarea condiiilor sanitare, etc.
2. Imunizarea activ
Anti-hepatita A vaccin inactivat (10-20 ani).
Anti-hepatita B (vaccin recombinant Ag HBs).
Vaccin anti-hepatita D i E n curs de studiu.
3. Imunizarea pasiv
Imunoglobuline specifice anti- HAV, anti-HBV, anti-HEV.

Tratament specific al hepatitelor A i E nu exist.

Tratamentul specific al hepatitei B: Interferon alfa; Vidarabin, lamivudin, entecavir, telbivudin, adefovir (!!! Selecia tulpinilor rezistente);
Imunoterapie
Tratamentul specific al hepatitei C: Interferon alfa; Ribavirin; Imunoterapie

117. Infectia HIV-SIDA. Virusul HIV. Clasificarea (familie, gen, variante). Structura virionului. Markerii serologici. Celulele tinta si
rezervorul celular. Patogeneza infectiei HIV. SIDA. Diagnosticul de laborator al infectiei HIV-SIDA (reste directe si indirecte de
depistare, teste de confirmare, diagnosticul serologic). Terapia specifica.
Retroviridae familie numeroas de virusuri ARN dotate cu o enzim numit reverstranscriptaz: ARN ADNd.c
CLASIFICAREA FAM. RETROVIRIDAE
Subfamilia Orthoretrovirinae
Genurile: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus (induc tumori i leucemii), Lentivirus (virusul
HIV)
Subfamilia Spumaretrovirinae
Genul: Spumavirus (nepatogeni)

CARACTERE MORFOSTRUCTURALE GENERALE ALE FAMILIEI RETROVIRIDAE

Dimensiuni 80-130 nm
Form sferic

69
 Genom dou molecule de ARN+, capacitate de integrare n nucleu sub form de ADN proviral
Enzima reverstranscriptaza
Capsid icosaedric
Supercapsid derivat din MCP, lipidic cu GP virale nserate
Ciclul replicativ este identic.
VIRUSUL HIV. STRUCTURA I ORGANIZAREA GENOMULUI
HIV-1 i HIV-2 responsabili de Sindromului Imuno-Deficienei Achiziionate (SIDA)
HIV-1 repartiie mondial
HIV-2 limitat la Africa de Vest
Structura virusului HIV-1 / HIV-2
Genomul: diploid 2 molecule de ARN+ identice, nu sunt utilizate n calitate de ARNm
Enzime: reverstranscriptaza (RT), integraza, proteaza
Capsida: n form de trunchi de con, constituit din 2 proteine p24/26 CA (intern, major) i p7,9 NC (a nucleocapsidei, asociat ARN)
Supercapsida: dublu strat lipidic de origine celular n care sunt nserate 2 GP virale
Gp120/125, de suprafa, asigur fixarea virusului la receptorul celular CD4. Regiunea V3 este responsabil de ataare i induce
anticorpi neutralizani specifici
Gp41/36, transmembranar, legat de gp120, responsabil de fuziunea supercapsidei cu membrana celular
Proteina p17/16, matrice, cptuete stratul intern al SC, asociat cu proteaza
Genomul, proteinele interne (p24, p7, p17) i enzimele constituie nucleoidul (core) viral.
Structura genomului (apr. 10 mii nucleotide)
Gena gag (group antisens) prot. structurale interne (p24 i p17)
Gena pol (polimerase) 3 enzime: RT (p66), integraza (p31), proteaza (p9)
Gena env (enveloppe) o prot. precursor gp160, clivat ulterior n gp41 i gp120
Gene regulatoare tat, rev, nef, vif, vpr i vpu (HIV-1) sau vpx (HIV-2)
Omologia dintre HIV-1 i HIV-2 este de 42%, mai nalt la nivelul genelor gag i pol (peste 50%) i redus la nivelul genelor env (39%).
Se disting 3 grupe genomice ale HIV-1: M, O i N. Grupul M (major) comport 10 subtipuri (A-H, J i K), repartizate geografic neuniform
(majoritatea n Africa, B Europa occidental si America de Nord, F Romnia, G Rusia, etc).
Structura antigenic toate proteinele i glicoproteinele virale sunt imunogene.
Rezistena HIV: HIV este sensibil la solveni lipidici i detergeni, la 56 grade C este inactivat n 30 min, n 5 minute - 0,2 % hipoclorit de Na,
70% etanol, 0,2% glutaraldehid. Labil la pH-uri extreme, radiaii UV i RX
Cultivarea: Celule mononucleate de la persoane sntoase; Linii celulare din LT MT2; Animale sensibile maimuele cimpanzei (HIV-1),
Rhesus (HIV-2)

Ciclul de replicare. Ataarea HIV la celula-gazd prin legarea gp120 la receptorul celular CD4. Rezult o modificare conformaional a gp120,
ce permite buclei V3 a acestei gp s se fixeze de coreceptori de pe suprafaa celulei: CCR5 i CXCR4, CCR3, CCR2b .a. Penetrarea NC prin
fuziunea supercapsidei (gp41) cu MCt. Decapsidarea i eliberarea ARN viral asociat cu RT. Retrotranscrierea ARN+ n ADN- (RT). RT
degradeaz ARN+, apoi transcrie ADN- n ADNd.c., care va fi circularizat, apoi integrat (integraza) n cromozomul celular, constituind
provirusul. Transcrierea ADNv n ARNm prin intermediul ARN-polimerazei II celulare. Sinteza proteinelor virale sub controlul factorilor
celulari i proteinelor reglatoare. Poliproteina gag/pol 160 kd (p17 MA, p24 CA, p7 NC, p10 (proteaza), p66 (RT), p31 (integraza). Poliproteina
env 160 kd (gp41 i gp120); Transcrierea ARN viral (ARN+); Asamblarea NC; Eliberarea prin nmugurire la nivelul MCt modificat prin
inserarea gp virale: 10 mlrd de virioni/zi/o persoan infectat.
Variabilitatea HIV este determinat de erorile comise de RT (o eroare la fiecare 10 mii baze). Mutaiile survin n special la nivelul genei env
(bucla V3 din gp120, care intervine n fixarea HIV de coreceptori, reprezint epitopul major de neutralizare). Nu exist 2 sue virale identice. La
bolnav este prezent o populaie viral polimorf, cu genomuri diferite.
Consecine: dificultatea de a obine vaccin eficient; selecia mutantelor rezistente la antiretrovirale
Celulele-int i rezervorul celular: Limfocite TCD4+ (Th) (99% de replicare, ECP-sinciii); CPA: monocite/macrofage tisulare (replicare
slab, ECP minim), celulele dendritice (prezente n timus, tegument, mucoase, organe limfoide, SNC i snge perif.). Ele au rol de vector i
rezervor de virus (adsorb HIV la suprafaa lor i il transport n organele limfoide, unde el se replic n celulele CD4+). Se disting sue cu
tropism macrofagic (M, sau R5), utilizeaz coreceptorul CCR5, i sue cu tropism limfocitar (T, sau X4), coreceptorul CXCR4. Limfocitele T
pot fi infectate cu ambele sue (prezint ambii receptori).
n primo-infecie sue R5, n stadiu de SIDA sue X4.
Mecanismele de distrugere a limfocitelor T CD4:
1. Liza direct a celulelor infectate (ECP).
2. Limfocitele T CD8 pot distruge limfocitele T CD4 infectate.
3. Apoptoz n urma stimulrii antigenice a celulelor care au fost n contact cu Ag HIV.
4. Limfocitele infectate, acoperite cu gp120 pot provoca fixarea, fuziunea i moartea limfocitelor neinfectate.
5. Hiperstimulare celular cu dezvoltarea anergiei celulare.

PATOGENEZA I CLINICA INFECIEI CU HIV

Transmiterea:
Cale sexual (hetero-/homo-).
Cale sangvin (toxicomani, hemofili, transfuzii de snge sau transplante de organe, manopere medicale penetrante-injecii,
acupunctur, tatuaj, pearcing).
Cale vertical (in utero n ultimele sptmni de sarcin, n timpul naterii sau n timpul alptrii).
Evoluia maladiei
Primo-infecia (peste 20 zile dup contaminare). Durata 2-4 sptmni. Are loc:
1. multiplicarea intens i diseminarea virusului,
2. scderea numrului de limfocite T CD4,
3. creterea numrului limfocitelor CD8.
Diminuarea arjei virale este determinat de rspunsul imun specific celular i umoral (Ac anti-gp120, gp41, p24). Evoluia poate fi
asimptomatic sau simptomatic (50%): adenopatie cervical, febr, faringit, oboseal, mialgii, erupii cutanate.

70
Faza asimptomatic, de laten clinic (durata aproximativ 10 ani).
Virusul se replic n organele limfoide, numrul LT CD4 diminueaz lent sau rmne stabil. Apar variante noi de virus care se multiplic, SI le
recunoate i reacioneaz specific, ciclul se repet de multiple ori. Aceasta duce la diminuarea progresiv a LT CD4 i epuizarea SI, urmat de
multiplicarea necontrolat a HIV i dispariia complet a limf. T CD4.
Faza clinic (SIDA) incubaia 8-10 ani Numrul LT CD4 500-200 celule/ml.
Se manifest clinic prin febr cronic, pierdere n greutate, diaree, afeciuni ale tuturor organelor i sistemelor, infecii oportuniste, tumori
(sarcomul Kaposi, limfome).
Parazii: Toxoplasma, Histoplasma, Leishmania
Bacterii: Mycobacterium, Salmonella, etc
Fungi: Pneumocystis carinii, Cryptococcus neoformans, Cryptosporidium, Candida, etc
Virusuri: HSV, HZV, CMV.
5-10% de infectai sunt asimptomatici de lung durat.
arj viral redus.
Numrul LT CD4 stabil (peste 500/ml).
Rspuns imun celular i umoral constant.
Absena semnelor clinice.
Rspunsul imun:
Umoral Ac anti-gp120 mpiedic fixarea HIV.
Celular LT CD8 recunosc i distrug celulele infectate (n special LT CD4, Th).

Teste indirecte de depistare

Teste ELISA de depistare a Ac (dup 22 zile de la contagiu)
Teste combinate Ag - Ac (detectarea Ag p24 i Ac anti-p24 prin tehnici ELISA)
Teste rapide (RA cu particule de gelatin sensibilizate)
Teste de confirmare (n caz de reacie pozitiv). Tehnica de referin Western-blot (separarea el-for. a proteinelor virale, transferarea lor pe o
band de nitroceluloz, tratarea cu serul cercetat, apoi efectuarea RIE). Pot fi detectai Ac contra tuturor Ag.
Criterii de apreciere: un ser este considerat pozitiv dac sunt prezeni Ac contra cel puin 2 Ag de suprafa (gp160, gp120, gp41), asociai cu
Ac contra cel puin o protein intern (p24, p17 sau a enzimelor)
Teste directe
Detectarea Ag p24 (marker direct al infeciei HIV) prin tehnici ELISA. Poate fi detectat n primo-infecie pn la seroconversie, apoi dispare i
reapare n momentul evoluiei spre SIDA.
Detectarea ARN-lui plasmatic sau ADNv prin teste de amplificare genic.
Prezena ARNv n ser denot replicarea constant a virusului. Determinarea arjei virale este utilizat pentru monitorizarea unui pacient infectat.
Izolarea HIV n cultur
Se realizeaz prin inocularea cu plasm sau celule mononucleate de la bolnav a unei culturi de celule mononucleate de la donatori sntoi.
Replicarea este detectat prin evidenierea Ag p24, RT sau a ARNv.
Diagnosticul primo-infeciei (markerii virali)
1. ARNv plasmatic (apare dup 8-17 zile de la contagiu)
2. Ag p24 n ser (pn la apariia Ac anti-p24)
3. Ac anti-HIV (dup 3 sptmni de la contagiu)
4. Monitorizarea virologic a seropozitivilor
5. Parametrii imuno-hematologici (formula sangvin, determinarea subpopulaiilor de LT (valori absolute, raport T CD4/T CD8),
dozarea Ig, microglobulinei beta2)
6. Markerii virali (arja viral plasmatic (ARNv), Ag p24, Ac anti-p24)

CHIMIOTERAPIA ANTIRETROVIRAL
Dup mecanismul de aciune:
Inhibitori nucleozidici i nucleotidici ai RT (Abacavir, Didanosin, Lamivudin, Stavudin, Zalcitabin, Zidovudin, Tenofovir)
Inhibitori nenucleozidici ai RT (Delavirdin, Efavirenz, Nevirapin)
Inhibitori ai proteazelor (Amprenavir, Indinavir, Lopinavir, Nelfinavir, Ritonavir, Sanquinavir
Inhibitorii adeziunii i penetrrii n curs de evaluare (CD4, T20)
Inhibitor al asamblrii i eliberrii - Interferonul alfa
Tratamentul este indicat tuturor bolnavilor de SIDA i persoanelor cu numrul LT CD4+ mai mic de 350/ml.
Este indicat asocierea a 3 chimioterapice: 2 INRT + 1 IP; 2 INRT + 1 INNRT, 3 INRT, 1 INRT+1 INNRT+IP
Dificulti: Durata i costul tratamentului; Toxicitatea preparatelor; Dezvoltarea rezistenei
Monitorizarea terapiei antiretrovirale: Msurarea arjei virale (copii ARNv n plasm); Determinarea numeric a LT CD4+

PROFILAXIA: Msuri nespecifice: prevenirea transmiterii HIV. Profilaxia specific dificil:

Existena a 2 virusuri HIV-1 i HIV-2 cu numeroase subtipuri genetice i antigenice.
Infecia natural nu este stopat de rspunsul imun, iar memoria imunologic este mediocr.
Nu este definitiv clar rolul LT CD8+ (Tc).
Lipsa unui model animal satisfctor.

118. Familia Herpesviridae. Clasificarea (subfamilii, genuri, spp.). Caracterele morfobiologice ale virusurilor herpetice. Virusurile
HSV 1 si HSV 2. Patogeneza infectiilor cauzate (infectia primara, latenta, reactivarile). Particularitatile de evolutie la persoane
imunocompromise. Diagnosticul de laborator al infectiilor cauzate de HSV. Prelevatele. Metodele de diagnostic. Profilaxia si terapia
specifica.
FAMILIA HERPESVIRIDAE
Virusurile herpetice - ageni patogeni ai omului, primatelor i altor mamifere (porci, cai, vite), ai psrilor (gini, curcani, etc), petilor i
broatelor, reunind peste 100 de virusuri.
Clasificarea virusurilor herpetice de interes medical:

71
Subfamilia Alphaherpesvirinae: genul Simplexvirus (HSV-1, HSV-2); genul Varicellovirus (VZV)
Subfamilia Betaherpesvirinae: genul Cytomegalovirus (CMV ); genul Roseolovirus (HHV-6/7)
Subfamilia Gammaherpesvirinae: genul Lymphocryptovirus (EBV); genul Rhadinovirus (HHV-8)

Virion sferic, 150-200 nm diametru, constituit din:

centru dens, de forma unui mosor (bobin), de natur proteic, pe care este nfurat acidul nucleic;
genomul viral ADNd.c., constituit din 80-100 gene
capsida de simetrie icosaedric, format din 162 capsomere;
tegument structur proteic fibrilar, situat ntre capsid i supercapsid;
peplos (supercapsida), dublu strat lipidic, pe suprafaa creia proiemin spiculi scuri, constitui din 5-8 glicoproteine, responsabile de
adeziune i fuziune.
Enzime (ADN-polimeraza ADN-dependent, timidin-kinaza, ribonucleotid-reductaza, serin-proteaza).
Caractere biologice
virusuri dermo, limfo i neurotrope
determin infecii latente, recurente
majoritatea prezint potenial oncogen
posed numeroase enzime ce intervin n multiplicarea viral
prezint un spectru foarte larg de gazde i o gam divers de forme clinice
sunt virusuri fragile i se transmit numai prin contact direct
Rezistena la ageni fizici i chimici
n stare liofilizat, la 4 grade, virusurile herpetice se menin ani de zile.
Relativ instabile la temperaturi ambientale (+ 22 grade C), inactivate de solveni lipidici, detergeni, dezinfectani uzuali, pH extreme. Prezint
sensibilitate la aciunea inhibitorilor sintezei ADN (acyclovir, etc).

Multiplicarea viral
Adsorbia virionului la suprafaa celulei-int.
Penetrarea NC prin fuziunea supercapsidei virale cu membrana celular.
Degradarea partiala a capsidei de enzime celulare i ptrunderea ADN viral n nucleul celulei. Sinteza proteinelor celulare se oprete.
Biosinteza: n 3 runde consecutive are loc transcrierea ARNm viral cu sinteza ulterioar a 3 tipuri de proteine: foarte precoce (alpha,
immediate early), precoce (beta, early), care sunt n majoritate enzime i proteine tardive (gamma, late), care sunt proteine de structur.
Replicarea ADN
Asamblarea NC are loc n nucleu. Prsindu-l prin inmugurire, NC se nvelesc cu membrana nuclear intern, n care sunt nserate GP
virale imature, pe care o dezbrac n procesul de nmugurire prin membrana nuclear extern. n citoplasm NC capt proteinele
tegumentului i sunt ulterior re-nvelite n supercapsid ntr-o vezicul de exocitoz, n membrana creia se conin GP virale mature.
Virionii sunt eliberai prin exocitoz .

Celula infectat este alterat ireversibil prin:

Inhibarea rapid a metabolismului celular.
Fragmentarea cromozomului i apariia incluziilor intranucleare corpusculii Cowdry.
Apariia de sinciii i celule gigante.

SUBFAMILIA ALPHAHERPESVIRINAE
GENUL Simplexvirus
Specii: Herpes simplex virus tip 1 (HSV-1); Herpes simplex virus tip 2 (HSV-2)
Cultivare:
Culturi celulare primare umane sau din rinichi de iepure, fibroblaste de embrion de gin, linii celulare HeLa
Ou embrionate de gin (pe membrana chorioalantoic produc pustule pocks-uri)
Animale de laborator
oarece nou-nscut (letal)
Iepure (keratoconjunctivit dup scarificarea corneei)
Cobai infectat intraplantar (erupie vezicular local)
Patogeneza infeciilor cu HSV
Sursa de virus omul (90% au Ac anti-HSV1 i 20% anti-HSV2)
Transmiterea virusului:
1. Contact direct: prin saliv sau lichidul vezicular, mai rar prin obiecte contaminate recent cu saliv (preponderent HSV-1)
2. Contact sexual (preponderent HSV 2)
3. n timpul naterii (herpes neonatal, HSV 2)
4. Transplacentar (herpes congenital, HSV 2))
5. Prin intermediul transplantelor de organe infectate
6. Autoinocularea

Primo-infecia este precoce, la 1-3 ani, n 90% cazuri asimptomatic.

Manifestri clinice:
herpesul labial
gingivostomatit (erupie vezicular i ulceroas, adenopatie cervical, febr)
kerato-conjunctivit (prezint riscul ulceraiei corneei i orbirii)
eczema herpeticum (survine la pacieni cu eczeme cronice, se manifest ca o dermatit vezicular generalizat)
panariiu herpetic (la personalul medical, la copii autoinoculare)
meningite, menindo-encefalite, consecutiv infeciei pe calea nervilor trigemen sau olfactiv (letalitate 70%).

72
Dup infecie (clinic sau asimptomatic) virusul se localizeaz n ganglionul trigemen, determinnd o infecie latent. Genomul viral persist
sub form de episom. Replicarea ADN nu are loc, exprimndu-se doar cteva gene de laten.
Reactivarea infeciei (herpesul recurent) are loc consecutiv scderii rezistenei organismului: stress, radiaii, frig, infecii, perturbri hormonale,
etc. Virusul se propag centrifug pe cale nervoas, determinnd o infecie local (frecvent la jonciunea cutaneo-mucoas): herpes labial, nazal,
keratita herpetic (buchet de vezicule, se acoper cu cruste n cteva zile, vindecarea survine n 10 zile).

Infecia cu HSV -2 Determin preponderent infecii genitale.

Primo-infecia are loc la persoane de 15-25 ani (primele contacte sexuale) sau la nou-nscui (herpes congenital, neonatal). 75% cazuri primo-
infecia este inaparent.
Manifestri clinice:
herpesul genital (leziuni veziculo-ulcerative ale penisului, vulvei, vaginului, colului uterin, perineului, feselor, proctita herpetic.
Dup infecia primar virusul rmne latent n ganglionii lombari i sacrali, determinnd recurene, cu aceeai localizare, care sunt mai
puin severe.
herpesul neonatal. Contractat de nou-nscut la natere sau de la personalul medical cu herpes oral sau panariiu herpetic. Se manifest
prin septicemie sau conjunctivit. Netratat progreseaz cu diseminare visceral i deces (65%). Infecia poate fi asimptomatic.
infecie congenital. Transmiterea transplacentar determin malformaii congenitale, vicii.
cancer de col uterin i vulvar.
La gazde imunocompromise infecia cu HSV evolueaz grav, cu diseminare masiv i afectarea organelor interne. Recurenele sunt mai
frecvente, cu ulcerare, necroz, extindere.

Rspuns imun: umoral i celular, se instaleaz dup 1-3 sptmni de la infecie. Ig M apar i n reactivri i sunt martor de multiplicare viral.
Ig nu sunt protectoare, reactivrile au loc n prezena Ac. Imunitatea celular joac rolul principal n controlul infectiei cu HSV.

Diagnosticul de laborator al infeciei cu HSV

Prelevate: lichid din vezicule, ulceraii, cruste, fragmente bioptice sau necroptice.
Examenul microscopic: ME; Microscopia optic pe frotiuri colorate cu hem-eozin se observ celule mari, cu incluzii intranucleare eozinofile
(Cowdry); Detectarea Ag virale: RIF cu Ac monoclonali
Examenul virusologic: Izolarea virusului pe animale sensibile, ou embrionat de gin sau culturi celulare; Indicarea virusului: manifestri clinice
la animal, apariia veziculelor pe membrana chorio-alantoica a oului embrionat, ECP specific pe culturile de celule (celule gigante sincitiale cu
incluzii intranucleare); Identificarea virusului cu ajutorul serurilor imune specifice (RN, RIF, ELISA); Detectarea genomului viral prin tehnici de
biologie molecular (hibridare in situ, PCR)
Diagnosticul indirect. Serodiagnostic. Examinarea serurilor perechi (precoce i tardiv) cu evidenierea creterii titrului de Ac de cel puin 4 ori.
Reacii utilizate: RFC, RN, RIFI, ELISA.

Tratamentul specific al infeciei cu HSV: Vidarabin (adenin-arabinosid). Analog nucleozidic al guaninei. Inhibitor competitiv al ADN
polimerazei virale; Acyclovir, Valacyclovir, Zovirax (acycloguanosid), Penciclovir, famciclovir. Analogi nucleozidici ai guaninei. Inhibitori ai
ADN polimerazei virale, manifest activitate numai asupra virusului n curs de replicare. Foscarnet (phosphonoformat). Dezechilibreaz reacia
de polimerizare a ADN.

119. Familia Herpesviridae. Genul Varicellovirus. Caracterele morfobiologice ale VZV. Patogeneza varicelei si zonei-zoster.
Particularitatile de evolutie la persoane imunocompromise. Diagnosticul de laborator al infectiilor cauzate de HZV. Prelevatele.
Metodele de diagnostic. Profilaxia specifica.
GENUL Varicellovirus
Specia virusul Varicella-Zoster (VZV), agentul etiologic al varicelei n primo-infecie i al zonei-zoster prin reactivare.
Cultivarea numai pe culturi celulare (celule primare de origine uman, simian, din rinichi de iepure, linii celulare)

Infecia primar varicela

Sursa de virus omul
Transmiterea aerogen, prin secreii rinofaringiene sau prin contact cu lichidul vezicular sau obiecte recent contaminate cu lichid vezicular.
Varicela se manifest n special la copii de 2-6 ani, evolund epidemic iarna i primvara. Contagiozitate maxim cu 1-2 zile naintea erupiei i
o sptmn dup ultimul puseu eruptiv. Perioada de incubaie 14 zile
Dup ptrundere virusul se multiplic local n cile respiratorii (mai rar conjunctiv) i ganglionii limfatici locali. Urmeaz faza de viremie
primar, cu durata de 10-11 zile i cu afectarea sistemului reticulo-endotelial.
Peste 5 zile urmeaz viremia secundar cu rspndirea i multiplicarea virusului n tegument, conjunctiv, tractul respirator (esuturilor de
origine ectodermic). Apare febra i succesiunea unor valuri de erupie pruriginoas care evolueaz independent (macul papul vezicule cu
lichid clar, apoi cruste) i ating tot corpul. Dispar fr cicatrice.
Odat cu apariia Ac (2-3 sptmni) simptomele dispar. Evoluia este benign.
La persoane cu deficiene imunitare leziuni hemoragice, suprainfecie bacterian, encefalite, pneumonii, varicela diseminat, letal.
La gravide n primele 20 sptmni de sarcin varicela poate determina o embriofetopatie.

Reactivarea (Zona-Zoster): n cursul primoinfeciei, prin nervii senzitivi sau hematogen, VZV disemineaz spre ganglionii spinali sau ai
nervilor cranieni, unde persist latent. n caz de reactivare virusul se multiplic i se deplaseaz pe cale nervoas centrifug spre sectorul cutanat
corespunztor, determinnd Zona-Zoster. Infecia debuteaz cu neuralgie sever, hiperestezie i erupie vezicular localizat unilateral n
dermatomul nervului afectat. Poate fi asociat cu meningit sau paralizii. Forme clinice: zoster oftalmic, zoster motor, encefalomielita.
Erupiile persist pn la apariia rspunsului imun (umoral, celular).

Tratament acyclovir, valacyclovir, famciclovir. Tratament simptomatic (analgezice, antipruriginoase).

Profilaxie vaccin viu atenuat, tulpina Oka (n special la imunodeprimai). Pentru prevenirea evoluiei grave la contaci (nou-nscui, copii pn
la 15 ani, gravide neimunizate, persoane cu imunodeficiene) se administreaz Ig uman hiperimun specific sau gammaglobuline de
convalesceni de zona.

73
120. Familia Herpesviridae. Genul Cytomegalovirus. Caracterele morfobiologice ale virusului citomegalic. Patogeneza infectiilor
cauzate de CMV , manifestarile clinice (infectie primare, reactivarile). Diagnosticul de laborator al infectiilor cauzate de CMV.
Prelevatele. Metodele de diagnostic. Profilaxia specifica.
SUBFAMILIA BETAHERPESVIRINAE
GENUL Cytomegalovirus
Specia Virusul cytomegalic (CMV)
Cultivarea numai pe culturi de celule primare din fibroblaste umane sau culturi de miometru.
Celulele int: macrofagele, celulele endoteliale, limfocitele T i B, celulele-su din mduva osoas, celulele epiteliale ale canalelor
glandulare.

Patogeneza infeciei cu CMV

Sursa de infecie omul
Transmiterea:
1. Prin contact direct cu secrete i excrete ale bolnavilor (saliv, lacrimi, lapte, urin, secreii ale colului uterin, vaginale, sperm, mase
fecale, snge).
2. Congenital (vertical).
3. Neonatal (n timpul naterii, prin lapte).
4. Transfuzii de snge sau transplante de organe.
Primoinfecia este n general asimptomatic (80-90%). n caz de viremie este urmat de persistena latent a virusului n glandele salivare i
limfocite B.
Manifestri clinice:
Infecia congenital
moarte in utero cu avort;
natere prematur, cu dezvoltarea bolii cu incluzii citomegalice (microcefalie, hepatosplenomegalie, purpur trombocitopenic,
pneumonie interstiial, defecte neurologice). Patomorfologic - celulele infectate devin gigante (citomegalie), cu incluzii intranucleare
specifice n ochi de bufni.
Infecia postnatal (infectarea n timpul naterii sau cu laptele matern). Copiii elimin virusul prin urin i saliv. Decurge inaparent n
majoritatea cazurilor. La prematuri pneumonie interstiial, sechele neurologice i retardare psihomotorie.
Infecia primar a copilului sau a adolescentului. Dup o incubaie de 30 de zile diseminarea viral se manifest prin febr,
hepatosplenomegalie, adenopatii asociate cu sindrom mononucleozic (neutropenie, limfocitoz, bazofilie). Evoluie benign.
Infecia adultului (doar la imunodeprimai, persoane cu transfuzii sau transplante). Se aseamn cu mononucleoza infecioas (cu febr i
splenomegalie, dar fr angin, fr adenit i fr Ac heterofili )
Dup primoinfecie virusul persist latent n limfocite.

Reactivrile se traduc prin apariia unei viremii tranzitorii i excreia virusului. La imunodeprimai pneumonie, hepatit, infecie generalizat.
Imunitate umoral (Ac neutralizani, fixatori de complement) i celular prin intermediul limfocitelor Tc i celulelor NK. CMV are efect
imunosupresor, ducnd la creterea nr limfocitelor Ts i diminuarea limfocitelor Th.

Diagnosticul de laborator al infeciilor citomegalice

Prelevate: fracia leucocitar a sngelui, urin, spltur rinofaringean, secreii cervicale, probe bioptice sau necroptice.
Diagnosticul microscopic. Prezena celulelor mari, cu incluzii intranucleare n ochi de bufni pe frotiuri din leucocite, plasm, sediment urinar
sau seciuni tisulare
Detectarea Ag virale cu Ac monoclonali (RIF, ELISA)
Examenul virusologic dificil. Cultivarea pe culturi de celule este lent (2-8 sptmni). ECP- celule mari, incluziuni eozinofile intranucleare i
bazofile intracitoplasmatice
Detectarea genomului viral (PCR)
Serodiagnostic. Cercetarea serurilor perechi n RFC, RHAI, RIFI, ELISA
Infecie congenital izolarea virusului n primele 2 sptmni de via, depistarea Ig M.
Infecie recurent: reapariia excreiei virale la pacieni seropozitivi.

Tratament: gancyclovir, valgancyclovir, foscarnet, cidofovir

Profilaxie: vaccin viu atenuat sau/i plasm sau globulin hiperimun se administreaz gravidelor seronegative, recipienilor de transplant
HHV 6 ntlnit la aduli n 90%. Agent implicat n etiologia unei afeciuni cutanate - exanthum subitum. La persoane cu imunosupresie
pneumonii, encefalite, retinite, etc.
HHV 7 izolat de la aduli sntoi (aprox. 75%), care excret virusul prin saliv. Sediul latenei epiteliul glandelor salivare, limfocite T
CD4. Omologie de 50% cu CMV.
HHV 8 asociat cu sarcomul Kaposi.

74