Sunteți pe pagina 1din 30

Lucrare de laborator nr.

9
Tema:Procesul infectios factorii nespecifici de rezistenta
a organismului..
1.Notiune de infectie
INFECIA totalitatea proceselor biologice care se produc n ma/o n urma penetrrii mi/o
patogene sau potenial patogene (PP).
PROCESUL INFECIOS interaciunea dintre mi/o i ma/o n diverse condiii ale mediului
ambiant. Manifestarea lui poate fi inaparent / asimptomatic (stare de portaj sntos,
eliminarea rapid a mi/o) sau simptomatic.
MALADIA INFECIOAS manifestarea suprem a procesului infecios, se caracterizeaz prin diferite
simptome, determinate de efectele metaboliilor microbieni (toxine, enzime, etc) sau de reacia
imun a gazdei la prezena bacteriei
Particularitile bolii infecioase
1. Sunt provocate de ageni patogeni
2. Contagiozitate (capacitatea de a se transmite de la o surs la o persoan receptiv)
3. Specificitate (un agent provoac o infecie, ex.: Clostridium tetani este agentul tetanosului,
etc.)
4. Evoluie clinic stadial
5. Imunitate la reinfecie (durat variabil)
Apariia maladiei depinde de multipli factori, n special de capacitatea agentului cauzal de a provoca
maladia i de gradul de rezisten al gazdei la aceast invazie

2.Rolul microorganismelor in procesul infectios.


ROLUL MICROORGANISMULUI N PROCESUL INFECIOS. PATOGENITATEA I VIRULENA
Relaiile dintre mi/o i ma/o gazd:
1. Comensalism (flora bucal, intestinal, etc)
2. Parazitism (prezena mi/o este nociv pentru ma/o)
Orice mi/o parazit capabil s provoace o infecie (n condiii adecvate) este considerat p a t o g e
n.
Exist 2 tipuri de mi/o patogene:
1. Obligat (cert) patogene, care infecteaz persoane imunocompetente cu doze mici

2. Potenial patogene (oportuniste), care pot cauza infecie numai cu doze mari sau la
persoane imunocompromise (deseori fac parte din flora normal a organismului)
Mi/o patogene pot fi gzduite uneori fr a provoca maladia, astfel de persoane sunt numite
purttori sntoi de germeni
Microorganismele patogene se caracterizeaz prin:
Patogenitate capacitatea unei bacterii de a declana infecia. Este un caracter de specie
determinat genetic (cromozom, plasmide, bacteriofagi).
n cadrul unei specii patogene pot exista tulpini cu manifestare variat a patogenitii de la
absena total pn la foarte nalt.
Virulen gradul de patogenitate al unei tulpini (msur cantitativ a patogenitii). Se
apreciaz prin infectarea animalelor de laborator cu cantiti diferite de mi/o.
Unitile de virulen:
-

DLM numrul de bacterii necesar pentru a ucide 80% din animalele infectate

DL50 50% letalitate

DCL 100% letalitate

DI50/DI provoac boala la 50% / 80% animale

Modificarea virulenei:
-

Amplificarea prin transfer i recombinare genetic, condiii optime pentru cretere

Reducerea (atenuarea) prin meninerea bacteriilor n condiii nefavorabile (t, factori chimici,
etc), mutaii

Bacteria patogen trebuie:


1. S fie capabil de a se transmite ntre gazde
2. S penetreze n organismul-gazd
3. S se rspndeasc prin organism
4. S se multiplice i s persiste (evitnd sau distrugnd sistemul imun al gazdei)
5. S produc leziuni
Aceste capaciti sunt asigurate de factorii de patogenitate.
3.factorii patogenitatii
Factorii de patogenitate ai bacteriilor

I.

Factori structurali (somatici)

1. Adezine - fimbriile, glicocalixul, proteine de adeziune ale peretelui celular. Asigur aderarea
bacteriilor la receptorii de pe suprafaa celulelor-int sau la proteine matriciale
extracelulare (colagen, fibronectin, laminin, elastin, etc)
2. Proteine ale sistemelor de secreie (tipuri I-IV)
3. Capsula antifagocitar, anti-complement
4. Antigenul O - antifagocitar
5. Peptidoglicanul (adeziune, agresie tisular)
6. Acizii teichoici/lipoteichoici (adeziune, toxicitate)
7. Proteina A la stafilococi (aciune antifagocitar prin fixarea Fc a IgG)
8. Proteina M la streptococi (adeziune, a/fagocitar)
II. Enzime de patogenitate (responsabile de persisten, diseminare i producerea leziunilor)
-

Plasmocoagulaza (formarea trombilor septici-efect antifagocitar, propagare n organism)

Fibrinolizina (eliberarea bacteriilor din trombi)

Hialuronidaza (diseminare, leziuni tisulare)

Colagenaza (identic)

Neuraminidaza (lichefierea mucusului)

Proteaze (ex.: distrugerea Ig A secretorii)

Dezaminaze

Decarboxilaze

Fosfataze, etc
III. Toxine bacteriene (responsabile de leziuni)
- Exotoxine (proteice, secretate n mediul extracelular)
- Endotoxine (LPZ, legate de celula bacterian)
4.Toxinele bacteriene.Carcateristica.Obtinerea.
Caracteristica exotoxinelor:
-

Proteine produse de bacterii G+/G-

Pot fi secretate n mediul extern, eliberate n spaiul periplasmic sau fixate pe suprafaa
celulei

Termolabile (excepie enterotoxina stafilococic i TS (toxina termostabil) a E. coli)

Hidrosolubile i acioneaz la distan

Efectul se instaleaz dup o perioad de incubaie

Manifest tropism (specificitate de aciune)

Toxicitate nalt (DLM de ordinul ng/kg)

Exotoxinele sunt imunogene (induc sinteza anticorpilor - antitoxine)

Antitoxinele neutralizeaz activitatea exotoxinei (faza de fixare pe receptorii celulari)

Exotoxinele tratate cu formol 0,4% i meninute la 39-40C timp de 3-4 sptmni se


transform n anatoxine. Ele sunt lipsite de toxicitate dar pstreaz imunogenitatea (utilizate
n calitate de vaccin).

Suportul genetic al exotoxinelor: cromozom (dizenteric, ), plasmide (toxina antraxului, toxina


tetanic), profagi (toxina difteric, botulinic).
Tipurile de exotoxine:
I.

Toxine citolitice

Deregleaz membranele celulare prin aciune enzimatic (fosfolipaza /lecitinaza, sfingomielinaza)


sau prin formarea porilor (streptolizina O, -toxina/hemolizina S.aureus, leucocidina
II. Toxine citotoxice, de tip A-B (acioneaz n interiorul celulei). Ex.: toxina difteric, botulinic,
tetanic, holeric, etc
Au structur bipartit: fracia polipeptidic B (cell binding) este responsabil de legarea de receptorii
specifici din membrana celulei-int, fracia polipeptidic A (active) ptrunde n celul (prin
endocitoz sau translocare) i determin activitatea toxic.
Fiecare citotoxin acioneaz strict specific:
toxina difteric inhib sinteza proteinelor,
-

toxina botulinic i tetanic sunt neurotoxine, inhib eliberarea neurotransmitorilor,

toxina holeric i pertusic activeaz adenilat-ciclaza membranar, etc

Obinerea exotoxinelor bacteriene


-

Cultivarea tulpinii toxigene n mediu lichid

Filtrarea culturii pentru separarea toxinei

Purificarea toxinei

Concentrarea toxinei

Determinarea activitii toxinei (se msoar in uniti de floculare Lf )

5.Patrunderea si raspindirea microorganismilor in macroorgansim


P A T O G E N E Z A BOLII INFECIOASE
Ptrunderea i rspndirea mi/o n ma/o
Sursa de infecie: omul bolnav, reconvalescent, purttor sntos (infecii antroponoze) sau
animalele (infecii zooantroponoze)
Mecanismele de transmitere
1. Prin contact (direct, indirect)
2. Fecal-oral (alimentar, hidric, etc)
3. Aerogen (aer-praf, aer-picturi)
4. Transmisiv (prin intermediul vectorilor)
5. Vertical (transplacentar)
Microbii penetreaz prin tegument, mucoase sau direct n snge (pori de intrare). Un
microb poate avea una sau mai multe pori de intrare.
Doza critic ex.: dizenterie 102 mi/o, febr tifoid 105 , holer 109 .
La poarta de intrare bacteria ader la celule (adeziunea) i se multiplic local (colonizarea),
formnd focarul primar de infecie. Infecia poate rmne localizat sau poate s se
rspndeasc (invazia) pe cale limfatic, sanguin, pe calea nervilor sau prin continuitate
(din aproape n aproape). n esutul afectat mi/o se multiplic i provoac leziuni direct prin
intermediul enzimelor sau toxinelor sau indirect, via mecanisme imune.
Mi/o se elimin cu diferite secrete sau excrete ale ma/o, prin care are loc contaminarea
altor gazde sau obiecte
6.Dinamica evoluarii bolii infectioase
Dinamica evoluiei bolii infecioase
I. Perioada de incubaie (de la penetrarea mi/o pn la apariia primelor simptome). Durata
variabil (ore ani). Microbul se adapteaz, se multiplic, produce toxine, enzime, etc.
II. Perioada de invazie (prodromal, de debut). Apar primele semne clinice, nespecifice (febr, frison,
inapeten, astenie, etc). Durata 2-3 zile.
III. Perioada de stare (a manifestrilor clinice specifice). Durata variabil.

IV. Perioada terminal (convalescen i vindecare, sau cronicizare, sau stare de portaj, sau deces)
7.Criteriile de apreciere a rolului etiologic al agentului causal
Criteriile de apreciere a rolului etiologic al agentului cauzal n survenirea infeciilor specifice
(postulatele lui Koch)
1. Bacteria trebuie s fie prezent la toate persoanele bolnave
2. Bacteria trebuie s fie izolat de la bolnav i meninut n cultur pur
3. Cultura pur inoculat la un voluntar sau la un animal experimental trebuie s reproduc
simptomele bolii
4. Aceeai bacterie trebuie s fie reizolat de la voluntarul sau animalul infectat
Actualmente se insist pe genomul bacterian (prezena genelor de patogenitate)
8.formele infectiei..

9.Rolul mediului ambient si social in infectie


Rolul mediului ambiant i social n infecie (condiiile economice, condiiile de via,
catastrofe ecologice sau naturale, progresul n igiena public, etc).
Maladii sociale: tuberculoza, pediculoza (tifosul exantematic), sifilisul, etc.
10.Rezistenta nespecifica a microorganismelor.
Pentru meninerea coerenei celulelor i esuturilor i pstrarea integritii sale ma/o pune
n joc 2 categorii de procese aprute succesiv n cursul evoluiei:
Rezistena nespecific, nnscut dezvoltat filogenetic, asigurat de factori
constituionali. Rspuns maxim imediat, nespecific, antigen-independent
Imunitatea (rezistena specific) s-a dezvoltat ontogenetic, antigen-dependent i
antigen-specific, rspuns maxim peste cteva zile de la agresie, se caracterizeaz prin
memorie imunologic

Rezistena nespecific
Rezistena nespecific este asigurat de factori tisulari (de barier), factori celulari i umorali.
Factori tisulari (de barier)
-

Tegumentul (barier mecanic - integritatea, descuamarea stratului cornos; barier


biologic -flora normal, chimic - pH acid al tegumentului)

Mucoasele (barier mecanic - integritatea, micarea cililor, scurgerea secretelor; chimic secreiile digestive, pH acid al urinei; biologic -flora normal; barier enzimatic enzimele
din secreiile mucoaselor, ex.: lizozimul, lactoferina
Dac barierele au fost depite, atunci organismul dispune de ali factori de rezisten
nespecific: factori celulari i umorali.
Factori celulari de rezisten nespecific
- Reacia inflamatoare. mpiedic multiplicarea i rspndirea microbilor i asigur distrugerea lor.
-

Fagocitoza (component al reaciei inflamatoare). Asigur captarea i distrugerea


substanelor strine, inclusiv a mi/o, celulelor infectate, celulelor tumorale.

Celulele fagocitare (fagocitele)


1 - Leucocitele PMN
2 Macrofagele (monocite n snge, macrofage fixe cel. Kupffer, macrofage alveolare,
osteoclaste, microglia, macrofage din splin i ganglioni limfatici).
Pentru a interveni, fagocitele trebuie s recunoasc bacteriile ca particule strine.
Exist molecule solubile i membranare care pot recunoate componente bacteriene:
1. Solubile - lectinele care se pot lega de manoza din peretele celular bacterian; proteine
plasmatice ce leag LPS bacterian
2. Membranare pe macrofage exist receptori de manoz, receptorul CD 14 pentru LPZ,
receptori Toll-like (TLR). TLR pot recunoate diferite molecule bacteriene: LPZ,
peptidoglicanul, lipoproteine, acizi lipoteichoici, flagelina.
Ali receptori: receptori pentru Fc al IgG, pentru complement (CR1, CR3, CR4), pentru interferon,
limfokine, lectine, fibronectin, .a.
11.Fagocitoza
FAZELE FAGOCITOZEI
I. Chemotaxisul (atractani proteine bacteriene, fragmente de perete celular, capsule,
endotoxina, chemokine, etc)
III. Adeziunea mi/o la fagocit (fagocitul recunoate molecule strine de pe suprafaa bacteriilor
monomeri de PG, acizi teichoici, LPZ, acid micolic, ADN bacterian, ARNd.c. viral, manoza, glicani din
fungi, etc )
Inhibitori capsula, antigenul O, proteina M, proteina A, plasmo-coagulaza, etc. Bacteriile patogene
care nu pot fi fagocitate se numesc extracelulare.
Stimulatori cationi de Ca2+, proteina C - reactiv, opsonine (fracii de complement (C3b),
fibronectina, unii anticorpi). Datorit receptorilor opsoninele acoper suprafaa bacteriilor

(opsonizare). Fagocitele de asemenea posed receptori pentru opsonine i astfel faciliteaz


adeziunea i ingestia mi/o.
IV. Ingestia (nglobarea) i formarea fagosomei.
III. Distrugerea (digestia) intracitoplasmatic
Fagosoma fuzioneaz cu lizosoma, n interiorul fagolizosomei formate mi/o va fi omort sub
aciunea enzimelor, anionilor superoxizi, H2O2, pH acid, apoi digerat de enzimele hidrolitice.
Produsele degradate pot fi eliminate din celul (PMN, macrofagele) sau dup o selecie i pregtire
prealabil (processing) unele peptide vor fi expuse pe membrana macrofagelor n asociaie cu
molecule ale CMH. Ele vor contribui la stimularea imunitii prin interaciunea cu receptorul pentru
Ag de pe limfocitele T. Aceasta este fagocitoza complet.
Fagocitoza incomplet agentul persist i se multiplic n fagocit (micobacterii, gonococi).
Cauze: inhibiia formrii fagolizosomei, eliminarea bacteriei din fagosom nainte de fuziunea cu
lizosoma, etc). Acetia sunt patogeni facultativ intracelulari.
Aprecierea strii funcionale a fagocitelor
1. Procentul fagocitelor active (N - 30-60%) ponderea fagocitelor care au nglobat cel puin
un mi/o
2. Numrul fagocitar (N - 4 - 24) nr de mi/o nglobate n mediu de un fagocit
Alte celule cu activitate nespecific: celulele K i NK
Factori umorali de rezisten nespecific
Reactivi de faz acut organismul supus unei agresiuni reacioneaz prin sinteza i secreia
crescut a unor proteine plasmatice: inhibitori de proteaze, proteine ale sistemului complement i
ale coagulrii, proteina C reactiv, protrombina, fibrinogenul, etc. Acestea mresc rezistena gazdei,
limiteaz leziunile tisulare i favorizeaz vindecarea
Complementul reprezint un sistem complex de proteine termolabile solubile i
membranare. Se ntlnesc n plasma sangvin, limf i exsudate. Nu se detecteaz n saliv,
lacrimi, urin, transsudate.
Exist peste 30 de fracii ale C. C1-C9 sunt solubile, celelalte au rol de receptori membranari.
Fraciile C1-C9 circul n ser sub form inactiv, care n procesul activrii capt proprieti
enzimatice.
Activitatea biologic a complementului:
-

Opsonizarea bacteriilor

Aciune citolitic

Activitate anafilactic stimuleaz chimiotaxisul i activeaz neutrofilele, degranularea


mastocitelor i bazofilelor

Activarea limfocitelor B

2. Properdina proteine serice care particip la activarea complementului pe cale


alternativ.

3. -lizinele proteine serice termostabile (63 grade) cu activitate antimicrobian asupra


bacteriilor G+ n special

4. X lizina, protein seric termostabil (70-100 grade), produce liza bacteriilor G -

5. Lizozimul prezent n lacrimi, saliv, ser sanguin, favorizeaz liza bacteriilor

6. Anticorpii normali

7. Interferonii (glicoproteine cu aciune antiviral, antiproliferativ i imunomodulatoare

Lucrare de laborator nr 10
Tema:Imunitatea .Raspunsul imun.Ag.Ac

1.Notiune de imunitate.Organele centrale si periferice ale sistemului imun.Celulele


imunocompetente.Complexul MHC
IMUNITATE nereceptivitatea organismului la orice ageni strini din punct de
vedere genetic, inclusiv la mi/o i toxinele lor.
IMUNITATE capacitatea de aprare specific a organismului fa de agresori
externi (virusuri, bacterii, fungi, protozoare, toxine) ct i fa de propriile molecule i
unele celule degradate sau modificate.
Sarcina fundamental a imunitii distincia dintre moleculele i celulele proprii
(self) i cele strine (non-self)

Organele centrale (primare) ale SI mduva osoas i timusul la vertebrate


(ficatul n perioada embrionar), bursa Fabricius la psri. Apar primele n timpul
vieii embrionare.
Rolul sursa celulelor-stem, instruirea, maturizarea i selectia celulelor
imunocompetente (limfocitele T i B).
n mduva osoas se afl celulele-stem, precursori ai T i B-limfocitelor. Pre-T
limfocitele migreaz ulterior n timus, unde va avea loc instruirea i maturizarea lor,
devenind celule imunocompetente, capabile s recunoasc specific un singur Ag (prin
achiziionarea unor receptori specifici).
Instruirea si maturizarea B-limfocitelor are loc n mduva osoas.
Aceste procese sunt independente de orice stimulare antigenic a organismului.
Dup prsirea organelor centrale limfocitele nu mai revin aici, ele se stabilesc n
organele limfoide secundare, recirculnd prin snge, limf
Organele periferice (secundare) ale SI
n ele se realizeaz contactul dintre antigen, celulele prezentatoare de antigen ( CPA)
i celulele imuno-competente, cu inducerea unui raspuns imun.

Ganglionii limfatici (raspuns imun contra Ag transportate cu limfa)


Splina (raspuns imun contra Ag transportate cu sangele)
Formaiunile limfoide ale mucoaselor digestive i respiratorii (amigdale, plci Peyer,
apendice), esutul limfoid asociat tegumentului (raspuns imun contra Ag ce
penetreaza prin epitelii)
CELULELE SISTEMULUI IMUN
Limfocitele (celule imunocompetente, recunoasterea Ag)
Celulele efectoare (eliminarea microbilor)
Celulele prezentatoare de Ag (CPA) (captarea si prezentarea Ag microbiene )
LIMFOCITELE
Toate limfocitele provin din celule-stem ale maduvei osoase, cu o etapa ulterioara de
maturizare si selectie.
Limfocitele T si B sunt unicele celule ce poarta receptori specifici de Ag (celule
imuno-competente), fiind mediatorii principali ai imunitatii adaptative
Maturizarea limfocitelor B are loc n mduva osoas prin intermediul interaciunii
directe cu celulele stromei, iar n stadiile tardive sub aciunea citokinelor secretate de
celulele stromale (n special IL-7). LB sunt supuse unei selectii pozitive in favoarea
expresiei de receptori intacti si unei selectii negative contra recunoasterii puternice a
antigenelor proprii.
In organelor limfoide secundare limfocitele B se localizeaza in foliculii cortexului
extern din ganglionii limfatici, foliculii din plcile Peyer i foliculii zonei periferice
din pulpa alb a splinei (arii timo-independente).
COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE (MHC)
Moleculele CMH reprezint un ansamblu unic de glicoproteine exprimate pe
suprafaa celulelor organismului, care sunt veritabili markeri / antigene de identitate
ai fiecrui individ.
Rolul moleculelor CMH:
Particip la prezentarea antigenelor peptidice limfocitelor T
Responsabilitate n respingerea grefelor
CMH este transmis genetic. Genele CMH sunt situate pe cromozomul 6 la om, locus
numit HLA (Human Leukocyte Antigen).
Moleculele CMH sunt formate din 2 catene polipeptidice, constituite din domenii
extracelulare, un fragment transmembranar i o regiune intracitoplasmatic. Structura
tridimensional a moleculei duce la formarea unei caviti, la fundul creia se afl
receptorii care vor interaciona cu peptide antigenice proprii sau strine. Ali receptori
ai CMH interacioneaz cu moleculele CD4 sau CD8 de pe TL.

2.Tipurile de imunitate.Imunitatea dobindita ,umorala si celulara.


-

TIPURILE DE IMUNITATE
Ereditar (natural, de specie). Poate fi absolut (lipsa intei) sau relativ.
Dobndit (achizitionata, adaptativa)
Activ
- Natural (postinfecioas)
- Artificial (n urma vaccinrii)
Pasiv
- Natural (transplacentar, prin laptele matern)
- Artificial (administrarea Ac / seruri imune sau a
limfocitelor)

Imunitatea dobndit se caracterizeaz prin:


Dezvoltare lenta si manifestare tardiva (cteva zile, sptmni dupa contactul cu un
antigen)
Specificitate fa de antigen (capacitatea de a recunoaste si raspunde specific la
numeroase substante straine, inclusiv agenti infectiosi)
Memorie imunologic (capacitatea de a elabora raspuns mai rapid, mai intens si
eficace la intalniri repetate cu un antigen)
Imunitatea dobndit poate fi:
I. Imunitate antibacterian, antiviral, antimicotic, antitoxic, antitumoral, etc
II. n funcie de mecanismele reaciilor imune
Imunitate umoral, exercitat prin intermediul unor proteine numite anticorpi (Ac,
Ig), produse de limfocitele B. Fiind secretate in sange si lichide biologice
neutralizeaza si elimina microbii extracelulari si toxinele lor.
Imunitate celular, eficienta in eliminarea parazitilor intracelulari sau a celulelor
tumorale. Este exercitat prin intermediul limfocitelor T (citotoxicitate directa,
activarea macrofagelor, celulelor NK, secreia citokinelor)
III. n dependen de persistena mi/o
- Imunitate steril se manifest dup eliminarea agenilor patogeni din organism
(ex.:rujeol)
- Imunitate nesteril nereceptivitatea se pstreaz doar n perioada aflrii mi/o n
organism (tuberculoz, sifilis).

3.Antigenele si characteristic lor.Antigene complete si


incomplete.Izoantigene si autoantigene
ANTIGENELE substane strine (non-self) de natur endo- sau exogen capabile
s declaneze un rspuns imun (umoral, celular, toleran imunologic, memorie
imunologic, paralizie imunologic).
Proprietile de baz ale Ag:
Imunogenitatea capacitatea Ag de a fi recunoscut ca strin i de a induce rspuns
imun specific
Antigenitatea (specificitatea) capacitatea Ag de a interaciona specific cu Ac sau cu
receptorul pentru Ag complementar al limfocitelor sensibilizate
Antigenele care posed ambele caractere sunt Ag complete.
Cerinele fa de Ag complete:
- S fie substane strine
- S fie formate din gruparea carrier (purttor) i epitopi (determinante antigenice)
S aib o greutate molecular de peste 10 kDa
S aib structur chimic complex (proteine, polizaharide, LPZ, etc)
S aib o conformaie spaial stabil
Antigenele incomplete (haptenele) posed antigenitate dar sunt lipsite de
imunogenitate
Antigenele incomplete (haptenele):
Au mas molecular mic
Pot deveni imunogene combinndu-se cu macromolecule purttoare (proteine sau
polizaharide)
Exemple de haptene: sruri ale metalelor grele (Cr, Ni), substane de origine vegetal,
medicamente, colorani, oligonucleotide.

Superantigene molecule proteice particulare (enterotoxinele stafilococice, toxina


ocului toxic stafilococic, toxina exfoliativ a stafilococilor, nucleocapsida virusului
rabic), capabile s stimuleze un numr mare de limfocite T (10-40%). N 0.01%.
SuperAg provoac reacii imunopatologice.
Se disting arbitrar:
Ag solubile: proteine plasmatice, toxine, enzime, hormoni, etc
Ag figurate (celulare, corpusculare): celule, bacterii, parazii, etc.
n funcie de provenien se deosebesc:
- Ag heterofile Ag comune mai multor specii animale. Ex.: Ag polizaharidice
Forssman, prezente n hematiile de cal, cine, oaie, cobai; sistemul Rh al
eritrocitelor se ntlnete la om i maimuele Macaccus rhesus, etc

4.Structura antigenic a celulei bacteriene si a virusurilor.


-

Structura antigenic a celulei bacteriene


Ag structurale (Ag O/R somatice, LPZ, termostabile; Ag H flagelar, proteic,
termolabil; Ag K capsular, termovariabil; Ag F fimbrial)
II. Ag solubile (enzime de
patogenitate, exotoxine)
Antigene virale: proteine/GP de invelis, nucleoproteine, enzime
Determinantele antigenice (epitopii)
Imunogenitatea este o caracteristic a ntregii macromolecule Ag.
Antigenitatea (specificitatea) este determinat de anumite secvene ale Ag.
Suprafee limitate din macromolecula Ag apte s se combine cu Ac specifici sau cu
receptorii de pe limfocitele sensibilizate se numesc determinante antigenice sau
epitopi.

5.Anticorpii(imunoglobulinele)structural or .Clasele de
imunoglobuline.Functiile lor biologice.Anticorpii complete si
incomplete
-

Ig prezint glicoproteine din fracia -globulinelor. Se disting Ig membranare (BCR)


i Ig solubile (secretate) Ac ca atare.
Ac sunt molecule glicoproteice produse de plasmocitele derivate din limfocitele B
activate de Ag. Ac circul n snge i ptrund n esuturi. Sunt eficieni contra
bacteriilor, toxinelor microbiene i virusurilor n poziie extracelular.
Ac au proprietatea de a recunoate i a se combina cu Ag complementar, att in vivo,
ct i in vitro
UNITATEA DE STRUCTUR a Ig (monomerul) este constituit din 2 lanuri
glicoproteice (catene) identice uoare L (Light) i 2 catene grele H (Heavy), legate
ntre ele prin puni disulfidice.
Exist 2 tipuri de catene L i , identice ntr-o molecul de Ig.
Se disting 5 clase de lanuri H: , , , , , ce corespund celor 5 clase (izotipuri) de
Ig: Ig G, Ig A, Ig M, Ig D, Ig E.
n componena lanurilor se disting regiuni variabile (aminoterminale) i regiuni
constante (carboxilterminale).
Regiunile variabile ale catenelor L i H formeaz o cavitate tridimensional - centrul
activ (paratopul) al moleculei de Ig, care va reaciona specific cu determinanta
antigenic (epitopul) Ag corespunztor, constituit din 5-7 AA sau 3-4 reziduuri

glucidice. Regiunea variabil constituie fragmentul Fab (antigen binding) al


moleculei de Ig.
Regiunea constant corespunde fragmentului Fc (constant, cristalizabil). Este
purttor de receptori i responsabil de activitatea biologic a Ig:
Transportul transplacentar al unor Ig (Ig G)
Fixarea pe diferite celule (mastocite, bazofile, fagocite, limfocite, etc.)
Capacitatea de a fixa complementul
Capacitatea de fixare a proteinei A a stafilococilor
Definete clasele i subclasele de Ig (specificitatea antigenic a catenei H)

6.Raspunsul imun.Elementele implicate.Interactiunea dintre t si b


limfo si macrofagi in rs imun

RI este un proces complex, indus de ptrunderea unui Ag. Are loc n organele
limfoide secundare i prevede implicarea mai multor celule (CPA, limfocite T, B,
.a.) i substane solubile (citokine).
Consecinele unui rspuns imun:
Imunitate (umoral, celular)
Hipersensibilitate (imediat, tardiv)
Memorie imunologic
Toleran imunologic
Paralizie imunologic
Anticorpii sunt efectorii principali ai imunitii umorale, iar limfocitele Tc i
macrofagele activate ale imunitii celulare.
Imunitatea umoral este eficace contra bacteriilor non-invazive (extracelulare),
virusurilor libere i contra toxinelor.
Imunitatea celular intervine n special contra paraziilor intracelulari (bacterii,
virusuri) i celulelor proprii modificate (tumorale)
Etapele unui rspuns imun
1. ntlnirea Ag cu CPA, T-, B-limfocite. Are loc n organele limfoide secundare.
2. Recunoaterea specific a Ag, asigurat de limfocitele B i T nave prin receptorii
pentru Ag (BCR, TCR). BL pot recunoate epitopi superficiali conformationali ale
moleculelor de Ag native. TL recunosc doar epitopi lineari din Ag proteice prezentate
de CPA
in asociatie cu moleculele CMH
3. Activarea, proliferarea i diferenierea T sau B limfocitelor n celule efectoare i
celule B sau T-memorie. Coordonarea acestor procese este asigurat de contacte
celulare directe i de citokine, eliberate de diverse celule
4. Realizarea efectului (neutralizare, opsonizare, liz, etc)

7.Raspunsul imun de tip umoral si cellular.Rs imun primar si


secundar,Memoria imunologica.Toleranta imunologica.
-

RASPUNSUL IMUN UMORAL /IMUNITATEA UMORALA


Reprezint o form a imunitii achiziionate asigurat de Ac. Are funcia de a
neutraliza i elimina microbii extracelulari i toxinele microbiene. In acest proces
particip Ag, CPA, limfocitele T4, limf B.
Fazele rspunsului imun umoral:
Intalnirea Ag cu limfocitele B. Are loc in organele limfoide secundare.
Dac Ag patrunde direct n snge, intlnirea are loc n splin

Dac Ag penetreaz prin tractul respirator n amigdale i esutul limfoid asociat


bronhilor i mucoaselor
Dac Ag penetreaz n tractul intestinal plcile Peyer, foliculii solitari
Dac Ag patrunde prin tegument intlnirea are loc n esutul limfoid asociat
tegumentuluiII. Recunoaterea epitopilor unui Ag de ctre receptorul specific
(BCR) de pe suprafaa B limfocitelor naive (selecia clonala) i activarea lor.
Limf B nave recunosc epitopii prin intermediul moleculelor de Ig M i Ig D (BCR)
de pe suprafata lor, capabile s lege epitopi omologi cu forma complementara.
La interactiunea BCR/Ag T-dependent (proteine), limf B naiv se comporta ca o CPA
(inglobarea Ag, degradarea lui, selectarea peptidelor antigenice si prezentarea pe
suprafata celulara a complexului peptid/CMH II pentru a fi recunoscute de limf
TCD4)
Primul semnal activator reprezinta interactiunea BCR cu epitopul Ag corespunzator.
Semnale secundare intervin ulterior (ex.:fixarea pe limf B a fraciei C3d a
complementului). Astfel limf B naiv este activat, fiind capabil sa produc cantitati
mari de molecule CMH II, molecule co-stimulatoare i receptori pentru citokinele
produse de limf Th
III. Proliferarea limfocitelor B activate si diferentierea lor
Dup activarea limf B de un Ag T-independent urmeaza proliferarea lui intr-o clona
de celule identice (expansiunea clonala) i diferenierea n plasmocite, care vor
sintetiza si secreta Ac din clasa (izotipul) Ig M, memoria imunologica lipseste.
IV. Efectul interaciunii dintre Ag i Ac in vivo
depinde de natura Ag i de tipul de Ac i se poate manifesta prin:
- Opsonizarea bacteriilor i intensificarea fagocitozei
Activarea complementului pe cale clasic determinnd citoliz (inclusiv bacterioliz)
Neutralizarea toxinelor, enzimelor
Inhibiia adeziunii bacteriilor, virusurilor (IgA)
Neutralizarea virusurilor extracelulare
Imobilizarea bacteriilor si protozoarelor
Citotoxicitatea mediat celular anticorp-dependent (celulele acoperite de Ac sunt
distruse de celulele K)

Rspunsul umoral primar la primul contact cu Ag


I faz de laten dureaz 4-7 zile, pn la apariia primilor Ac. In acest timp are
loc recunoaterea, degradarea Ag, diferenierea T,B limfocitelor
II faz logaritmic Titrul Ac crete, atingnd max n a 10-15 zi. Iniial are loc
producerea Ig M, peste 4-5 zile - IgG sau alte izotipuri de Ig (prin comutatie de clasa
sub influenta citokinelor produse de Th).
III faz de producere maxim a Ac Durata variaz n funcie de Ag
IV faz de diminuare a titrului de Ac (declin) n cazul Ag proteice dureaza
sptmni, Ag polizaharidice luni, Ag virale ani)
Rspunsul umoral secundar (la un contact repetat cu acelai Ag).
Este asigurat de LB-memorie
Perioad de laten scurt (ore)
Ascensiune rapid a titrului Ac
Titru maxim de Ac meninut o durat mai mare
Afinitate crescut a Ac fa de Ag
Producerea anticorpilor Ig G.

RASPUNSUL IMUN CELULAR (Imunitatea celular) - IC


Rolul IC este de a elimina microbii care pot supravieui n vacuole fagocitare sau n
citoplasma celulelor infectate. Acest tip de imunitate este asigurat de limfocitele T.
Principalii efectori ai IC sunt limfocitele Tcitotoxice (Tc) derivate din limf TCD8
(T8), care au capacitatea de a distruge celulele infectate cu virus sau tumorale i de a
liza macrofagele infectate cu bacterii facultativ intracelulare. Ambele tipuri de
limfocite (TCD8 naive si Tc) poseda TCR si molecule CD8.
I etapa Prezentarea Ag LT nave. Procesul are loc n organele limfoide periferice
(OLP).
CPA profesioniste (macrofage, celule dendritice) capteaza Ag (ex.: celule infectate
cu virus sau celule tumorale).
In cursul fagocitozei unele proteine virale pot fi transferate din fagosome in
citoplasma, unde ele vor fi fragmentate de catre proteasome. Dupa asamblarea cu
moleculele CMH I, complexul peptid /CMH I este scos la suprafata CPA (peste
250.000 complexe per celula).
CPA cu limfa sunt transportate in ganglionii limfatici, unde ele vor fi capabile sa
prezinte Ag limfocitelor TCD8 nave.
II etapa Recunoasterea epitopilor Ag de catre TCR unui LT CD8 naiv si activarea
lui.
Limf T8 nave vor recunoaste peptide asociate cu CMH I de pe suprafata CPA care
au captat celule infectate cu virus. Epitopul trebuie sa corespunda cu TCR de pe
limfocitul T8, iar CMH I va recunoaste situsuri de pe CD8.
Aceaste interactiuni, precum si alte legaturi moleculare intre CPA si limf T8,
participa la activarea limf T8 nave (costimulare). Citokinele eliberate de CPA se
implica de asemenea.
III etapa Proliferarea limfocitelor T8 (expansiunea clonala) si diferentierea lor.
Dupa activare, sub influenta unor citokine eliberate de limf Th1 (in special IL-2), are
loc proliferarea limf T8 si diferentierea lor in celule efectoare Tc, capabile sa lupte
cu infectia intracelulara sau celulele tumorale.
Proliferarea ncepe la 2 zile de la activarea limfocitelor i se produce rapid (peste o
sptmn dup infectare pn la 10-20% din toate limf din OLP pot fi specifice
pentru un Ag. N 1:106 ). Diferentierea in celule Tc are loc in paralel cu proliferarea.
IV. Realizarea efectului IC
Citotoxicitatea este rezultatul contactului specific direct dintre clona de Tc i inta lor
(celule infectate cu virus sau bacterii intracelulare, celule tumorale). Celulele infectate
prezint pe suprafaa sa pep
Memorie imunologica Capacitatea sistemului imun de a elabora raspuns mai rapid,
mai intens si mai eficace la intalniri repetate cu acelasi Ag.
Toleranta absenta raspunsului imun la antigene proprii (self). Este determinata de
inactivarea si eliminarea limfocitelor autoreactive in procesul de maturizare a
limfocitelor T si B.

8.Particularitatile imunitatii in infectii


bacteriene,virale.Imunitatea antitoxica si de

transplant
-

Raspunsul imun antibacterian si antiviral are att o componenta


humorala ct si una celulara. Prevalenta unuia sau altuia dintre cele
doua compartimente este diferita n functie de natura agentului infectios.
De cele mai multe ori, predomina raspunsul imun mediat humoral, iar n
cazuri mai rare (de exemplu, infectia cu M. tuberculosis sau cu M.
leprae) este preponderent raspunsul imun mediat celular.
Raspunsul imun fata de diferite antigene ale agentilor patogeni are
grade variate de protectie antiinfectioasa, n functie de natura agentului,
de gradul sau de virulenta si de natura raspunsului imun pe care-l
initiaza. Uneori, raspunsul imun antiinfectios este putin benefic pentru
gazda sau este chiar detrimental, din diferite cauze:
- raspunsul imun este orientat fata de componente moleculare
neesentiale ale agentului infectios. Stimularea antigenica activeaza un
raspuns imun ineficient. Anticorpii nu au efect neutralizant al
infectiozitatii, pentru ca structurile de care se leaga specific nu constituie
situsuri critice ale agentului patogen (de exemplu, anticorpii antiflagelari,
care in vitro determina aglutinarea, in vivo au o eficienta mai scazuta,
limitata la imobilizarea celulelor bacteriene);
- raspunsul imun poate produce leziuni mai puternice si mai
extinse dect nsusi agentul infectios. Infectia propriu-zisa produce
leziuni minime, dar activarea imunitatii mediate celular amplifica leziunile
tisulare si grabeste evolutia procesului infectios (de exemplu, leziunile
consecutive infectiei cu virusul corio-meningitei limfocitare la soarece si
liza hepatocitelor infectate cu virusul hepatiei B umane).
Componentele structurale antigenice ale unui agent infectios, care
stimuleaza un raspuns imun protector se numesc situsuri critice sau
structuri imunodominante.
Un raspuns imun eficient (protector) trebuie sa aiba ca rezultat
final, lezarea structurii peretelui bacterian, fungic sau a nvelisului viral,
prin actiunea combinata a anticorpilor si a proteinelor complementului.

*Raspunsul imun n infectiile virale


-

Infectiile virale constituie, nca, o cauza majora a morbiditatii si


mortalitatii, desi vaccinarea a redus incidenta infectiilor severe (polio,
oreion, rujeola, rubeola) si a eradicat variola. Cunoasterea
mecanismelor raspunsului imun antiviral este importanta pentru
evaluarea problemelor clinice de fond (de exemplu, dinamica
raspunsului imun) si pentru cautarea unor noi metode de obtinere a
vaccinurilor.
Interactiunea virusurilor cu organismele, este modulata de
sistemele de aparare nascute si dobndite. Pentru a se perpetua ntr-o
populatie, virusul trebuie sa fie virulent, dar suficient de flexibil n
modularea virulentei, pentru a se pastra n populatia sensibila. In
perspectiva evolutiva, interactiunea virusului cu organismul sensibil
trebuie sa confere superioritate virusului. Daca este prea virulent si nu
poate fi controlat de imunitatea gazdei, rezultatul poate fi moartea si n
final disparitia gazdei. Daca este lipsit de virulenta, virusul va fi eliminat
prea rapid de sistemul imunitar al gazdei si poate sa dispara prin

incapacitatea de a se perpetua.
Adeseori, virulenta virala este diminuata prin mutatie si n acelasi
timp se selecteaza gazde mai bine adaptate imunitar, rezultnd un
echilibru fluctuant, n care coexista att gazda ct si virusul.
Proteinele virale, componente ale capsidei si peplosului, sunt
imunogene si induc un raspuns imun intens n organismul infectat.
Raspunsul imun antiviral este orientat att fata de antigenele exprimate
pe suprafata virionilor, ct si fata de antigenele prezentate pe suprafata
celulei infectate.
Antigenele expuse pe suprafata celulei infectate, difera n functie
de natura virusului (nud sau acoperit) si de mecanismul maturarii
virionilor. Celulele infectate cu virusuri nude (adeno-, reo-,
enterovirusuri) expun pe suprafata lor proteine virale asociate cu moleculele CMH I,
iar cele infectate cu virusuri nvelite, n special cu
virusuri care se matureaza prin nmugurire la nivelul membranei, expun
glicoproteinele peplosului, inserate n arii limitate ale membranei. In
ambele cazuri, celula infectata devine tinta mecanismelor de
recunoastere imunitara.
Antigenele expuse pe suprafata virionului sau a celulei infectate,
stimulatoare ale raspunsului imun, se numesc antigene protectoare.
Antigenele intrinseci ale virionului, au rol protector nesemnificativ,
deoarece nu vin n contact cu sistemul imunitar, dect n cazul n care
se sintetizeaza n exces si se elimina din celula infectata.
Antigenele virale libere sau asociate virionului, stimuleaza
raspunsul imun humoral, iar cele prezentate pe suprafata celulelor
infectate, stimuleaza raspunsul imun celular.
Activarea unuia sau altuia dintre compartimentele imunitatii,
depinde de mai multi factori: de tipul de infectie (primara sau
secundara), de rezultatul interactiunii virus-celula (liza sau infectie
persistenta) etc.
Virusurile care produc infectii acute, determina o competitie ntre
replicarea virala si efectorii raspunsului imun. Rezultatul este
nsanatosirea sau moartea gazdei.
Pentru virusurile care produc infectii cronice, scara de timp este
mai lunga. Virionii sau antigenele virale din snge sau din alte fluide,
determina formarea complexelor Ag-Ac, cu manifestari patologice
secundare. Alteori, anticorpii antivirali si celulele T activate, pot produce
leziuni ale celulelor infectate. Majoritatea manifestarilor clinice care
nsotesc infectiile virale cronice, sunt consecinta raspunsului imun al
gazdei, stimulat de antigenele virale.

Lucrare de laborator nr.11


Tema:Metoda serologica de diagnostic.Reactii
antigen Anticorp
L.L. Nr.11 Tema: metoda serologica de diagostic. Reactii le antigen-anticorp.

1.

Metoda selorogica de diagnostic. Esenta. Seroindentificarea si serodiagnosticul. Mecanismele reactiilor


antigen-anticorp in vitro.

REACIILE ANTIGEN-ANTICORP in vitro (REACIILE SEROLOGICE)


Reacia Ag-Ac este determinat de interaciunea specific dintre epitopii Antigenului i paratopii Anticorpilor.
n acest proces intervin patru tipuri de legturi: legturi de hidrogen, legturi electrostatice, forele Van
der Waals i legturi hidrofobe.
Legtura Ag-Ac are trei caracteristici: este exotermic, specific i reversibil.
Afinitatea unui Ac pentru un Ag specific caracterizeaz intensitatea forelor de legtur a complexului Ag-Ac.
Ea depinde de complementaritatea steric dintre paratop i epitop.
Aviditatea unui Ac pentru un Ag specific reprezint rapiditatea apariiei manifestrii reaciei Ag-Ac
(precipitare, aglutinare, etc.). Ea depinde de constanta de asociere, de valena Ac, de numrul de
epitopi, de temperatur, de pH, de fora ionic a mediului.
Un paratop se poate combina cu un singur epitop, numit specific. Astfel, dac este cunoscut unul din
elementele reaciei - Ag sau Ac, poate fi identificat cellalt

Reaciile Ac-Ac (reaciile serologice) au dou direcii de aplicare practic:


I.
Seroidentificare: Detectarea i dozarea Ag (element necunoscut - tulpini microbiene izolate din diferite
prelevate) cu ajutorul Ac specifici cunoscui.
Pot fi utilizate dou surse de Ac: Ac monoclonali, absolut omogeni, dar care recunosc doar un singur epitop i
Ac policlonali, ce se conin n seruri imune (antiseruri), care permit legturi de aviditate nalt cu Ag.
Serurile imune se obin prin injectarea la un animal de laborator a antigenelor cunoscute. Dup o perioad de
timp, serul animalului va conine anticorpi contra acestor antigene. Dar natura exact a Ac din acest ser
nu poate fi cunoscut cu exactitate (Ac policlonali). Specificitatea serului trebuie s fie permanent
controlat i Ac nedorii trebuie s fie eliminai prin adsorbie.
II. Serodiagnostic: Detectarea i titrarea Ac din serul bolnavilor (component necunoscut) fa de un Ag
specific cunoscut (coninut n diagnosticuri).
Unele reacii Ag-Ac se manifest direct i pot fi observate de experimentator: de exemplu precipitarea sau
aglutinarea complexelor Ag-Ac, liza unor celule purttoare de Ag pe membrana lor (hemoliz,
bacterioliz, etc).
Alte reacii Ag-Ac nu se vizualizeaz spontan in vitro. n acest caz se va recurge la nite artificii
experimentale, cum ar fi utilizarea Ac marcai:
Ac marcai cu un fluorocrom: imunofluorescena.
Ac marcai cu un izotop radioactiv: analiza radio-imun.
Ac marcai cu o enzim: analiza imunoenzimatic.
INTERACIUNEA ANTIGEN-ANTICORP
Faza specific: are loc interaciunea dintre Ag i Ac specific corespunztor. Este un fenomen rapid, invizibil,
comun pentru toate reaciile Ag-Ac. Decurge la temperatura de 37 C, n prezena unui electrolit
(sol. fiziologic).
Faza nespecific, vizibil a uniunii Ag-Ac, se manifest prin precipitare, aglutinare, liz, etc - fenomene
determinate de anumite condiii (valena Ac, dimensiunile Ag, etc).

2. Reactia de aglutinare (RA). Principiul, mecanismul i componentele reactiei. Modificrile reactiei de


aglutinare. Tehnica de efectuare. Analiza rezultatelor.
REACIA DE AGLUTINARE
Din latin agglutinatio - ncleiere
Reacia Ag-Ac se poate manifesta prin aglutinare atunci cnd determinantele antigenice sunt purtate de
particule figurate (Ag insolubile, corpusculare), iar Ac specifici sunt complei (cel puin bivaleni).

Aglutinarea este determinat de formarea unei reele ntre Ag i Ac, ce permite apropierea unui numr
suficient de particule figurate pentru a constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac IgM cu 10 epitopi
poteniali aglutineaz mai activ dect Ac IgG.

Clasificarea reaciilor de aglutinare


Aglutinare activ sau direct, n care particula figurat (Ag corpuscular) este el nsui purttor de
determinante antigenice specifice (hematii, leucocite, trombocite, spermatozoizi, bacterii)
Aglutinare pasiv sau indirect, n care particula servete doar de suport pentru un determinant antigenic
solubil fixat artificial pe suprafaa sa. Frecvent sunt utilizate ca suport hematii formolate, particule
de latex sau microcristale de colesterol.

Reactii de aglutinare activa (directa)


Aspect calitativ
Reactia poate fi efectuata pe lama de sticla sau in tuburi.
Reactia pe lama
Se amesteca o picatura de ser si o picatura de suspensie bacteriana (Ag). Lectura se face la microscop sau cu
ochiul liber. In caz de reactie pozitiva apar conglomerate, iar lichidul se clarifica;
in caz de reactie negativa,
lichidul ramane tulbure.

Reactia in tuburi
In eprubeta se amesteca serul si Ag figurate (hematii, bacterii).
Reactia pozitiva se manifesta prin formarea unui sediment cu aspect de umbrela inversata la fundul tuburilor
(peste 20-24 ore) i clarificarea lichidului. Aprecierea intensitaii reaciei se efectueaza dupa sistema de
4 plusuri (++++).
Celulele neaglutinate se sedimenteaza la fundul tuburilor sub forma de buton sau inel (reactie negativa).
Lectura se face cu ochiul liber sau folosind oglinda concava a microscopului.
Aspect cantitativ
Metoda dilutiilor succesive
Initial se efectueaza dilutii succesive ale serului (1/50, 1/100, 1/200, etc) in care se introduc ulterior cantitati
egale de Ag. Termostat 2 ore, apoi la t camerei 18-20 ore.
Aprecierea: cea mai mare dilutie a serului in care se manifesta aglutinare de cel putin 3 + (+++) se numeste
titrul anticorpilor aglutinanti (titrul serului aglutinant).
Aglutinarea directa este utilizata pentru determinarea grupelor sangvine sau in diagnosticul unor maladii
infectioase (seroidentificarea Ag sau depistarea i titrarea Ac din serul bolnavilor) .
Reactile de aglutinare pasiva (indirecta)
Aglutinarea pasiva consta in fixarea unui Ag solubil (sau al unui Ac) pe un suport corpuscular inert, care nu
intervine in reactia Ag-Ac. In calitate de suport inert pot servi hematiile, particule de latex, cristale de
colesterol. Suspensia de particule sensibilizate cu Ag sau Ac este pusa in contact cu serul imun
(respectiv cu Ag), ca si in cazul aglutinarii directe.
Avantajele reactiilor indirecte: facilitatea lecturii si sensibilitatea inalta.
Reactia de hemaglutinare indirecta (pasiva) RHAI / RHAP
Unele antigene de origine polizaharidica se fixeaza practic spontan, dupa o scurta incubatie, pe suprafata
hematiilor. Antigenele proteice se fixeaza doar dupa o pregatire prealabila a hematiilor (de ex.: tratarea
cu tanina, formol).
RHAI se efectueaz in godeurile unei placi din polistiren. Reactia pozitiva se manifesta prin aglutinarea
eritrocitelor sensibilizate (umbrela inversata de culoare bruna la fundul godeurilor).

n reacia de latex-aglutinare Ac sau Ag sunt fixai pe particule de latex. Reacia se efectueaz pe lama de
sticl.

Reacia de latex-aglutinare este utilizata in identificarea factorului reumatoid la bolnavi suspecti de poliartrita
reumatoida, in bacteriologie pentru identificarea rapid a mi/o sau Ag lor n prelevate, sau identificarea
tulpinilor izolate, de asemenea pentru serodiagnosticul unor infecii.

Reacia de Co-aglutinare.
La baza acestei reacii se afl proprietatea unei bacterii Staphylococcus aureus (tulpina Cowan) - ce are n
componena peretelui celular proteina A - s fixeze Ig G prin intermediul fragmentului Fc. Astfel se
formeaz diagnosticuri cu Ac, cu ajutorul carora pot fi identificare Ag respective necunoscute. Reacia
se efectueaz pe lam.

REACIA COOMBS
Unii Ac (monovaleni) nu sunt aglutinani n condiii normale, fiind monovalenti (ex.: anticorpii anti-Rh,
responsabili de incompatibilitatea materno-fetal n sistemul Rh). Ei pot fi depistai graie testelor
Coombs.
Sunt posibile 2 tehnici, n funcie de prelevat: snge de la nou-nscut sau de la femeia gravid.

Tehnica Coombs direct. La un nou-nscut se caut prezena Ac materni anti-Rh fixai pe hematii, dac mama
este Rh-. La aceste hematii suspecte se adaug un ser anti-Ig uman. Acest ser nu aglutineaz hematiile
normale, din contra, el provoac aglutinarea hematiilor pe care sunt fixai Ac anti-Rh.
Tehnica Coombs indirect. La o femeie gravid Rh- Ac anti-Rh sunt prezeni n ser. Iniial la acest ser se agaug
hematii Rh+ (pentru formarea complexului Ag-Ac), apoi se aplic serul anti-Ig.

3. Reactia de precipitare (RP). Principiul, mecanismul si componentele reaciei . Tehnica de efectuare.


Analiza i interpretarea rezultatelor.
REACTIILE DE PRECIPITARE
Imunoprecipitarea se manifesta doar atunci cand Ag solubil este amestecat cu Ac corespunzator. Ea poate fi
observata sau in mediu lichid, sau solid, fiind sau calitativa, sau cantitativa. Acestea sunt reactii
specifice dar putin sensibile, ce necesita cantitati importante de anticorpi.
Precipitarea complexelor moleculare rezultate din uniunea Ag-Ac este determinata de formarea unei retele
tridimensionale de Ag reunite prin Ac.
Condiiile de formare a reelei de precipitare:
Ac sa fie cel putin bivalent (Ac completi)
Ag sa fie multivalent (haptenele nu pot fi precipitate)
Precipitarea maxima corespunde cu zona de echivalen, unde Ac si Ag sunt in raport optimal de concentraie,
ce permite precipitarea tuturor moleculelor de Ac cu Ag corespunzator. n exces de Ag sau de Ac
precipitatul nu se formeaz.
Utilizare: n medicina legala (determinarea apartenenei de specie a diferitor proteine: snge, sperm, etc), n
igiena alimentar (depistarea falsificrii alimentelor), n diagnosticul maladiilor infectioase, etc

PRECIPITAREA IN MEDIU LICHID


Reactia de precipitare inelara

Intr-un tub cu diametrul de cinci millimetri se introduce serul imun; pipeta se inclina si pe peretii ei se lasa sa
se prelinga incet solutia de Ag, ca sa nu se amestece cu serul. Daca Ac din ser corespund cu Ag, in zona
de separare a celor doua lichide
se formeaza un inel alb, ceea ce
semnifica precipitarea
complexului Ag-Ac.
Avantajul metodei rapiditatea
si simplicitatea.
Utilizarea practica: identificarea
petelor de sange, depistarea falsificarilor
produselor alimentare, depistarea
antigenului polizaharidic al agentului
antraxului in omogenat de organe (reactia Ascoli).
Reacia de floculare (tehnica Ramon)
Se efectueaz diluia succesiv a serului imun (Ac) la care se adauga cantiti egale de Ag. Se ntroduc probele
n termostat i periodic se examineaz pentru depistarea tubului n care apare precipitatul iniial (zona
de echivalen).
Utilizare: pentru determinarea cantitii de toxin, antitoxin sau anatoxin.

PRECIPITAREA N MEDIU SOLID (N GEL)


n aceste reacii Ag i Ac difuzeaz unul spre altul prin geloz i n zona de concentraie optim a acestor dou
reactive se produce precipitarea sub form de linii albe-cenuii. Dac exist mai multe sisteme Ag-Ac,
se vor forma linii de precipitare distincte. Poate fi utilizat n analiza calitativ a unui amestec de Ag
ntr-o soluie.
Imunodifuzia simpl radial (tehnica Mancini)
Se efectueaz pe o plac acoperit cu geloz, n care sunt ncorporai Ac specifici. Ag este depus n godeurile
din stratul de geloz. Ag difuzeaz radial n geloz pe parcursul a 48 ore. Dac Ag corespunde Ac, atunci
are loc formarea de discuri de precipitare, cu suprafaa proporional concentraiei Ag din godeu. Se
utilizez pentru depistarea i cuantificarea Ig, hormonilor, enzimelor, etc.

Imunodifuzie dubl
(tehnicile Ouchterlony i Elek)
Se acoper cu geloz o plac de sticl sau se toarn geloza n cutia Petri.
n tehnica Ouchterlony Ag i Ac difuzeaz din godeurile situate la o distan de 15 mm unul de altul.
n tehnica Elek cele 2 reactive difuzeaz din benzile de hrtie plasate pe suprafaa gelozei.
Moleculele difuzeaz n gel n funcie de greutatea lor i formeaz linii de precipitare pentru fiecare sistem AgAc ce corespund n zona lor de echivalen. Dac dou Ag sunt identice, liniile lor se unesc, dac sunt
diferite se intersecteaz. Utilizarea determinarea toxinelor (toxigeneza), antitoxinelor, Ag proteice

Contraimunoelectroforeza (CIEF)
Este util la examinarea amestecurilor antigenice complexe. Lectura este posibila peste 90 minute.
Geloza este turnat pe o plac de sticl, Ag i Ac sunt dispui n rezervoare circulare de 2 mm diametru, la o
distan de 10 mm. n timpul electroforezei Ag, ncrcat negativ, migreaz spre polul pozitiv, ntlnind
Ac care migreaz spre catod. La interaciunea Ag i Ac omologi are loc formarea liniei de precipitare.
CIEF servete la examinarea componentelor Ag din lichide biologice: LCR, urin, lichid pleural, ascit,
etc.

4. Reaciile de liz. Reactia de fixare a complementului (RFC). Principiul, mecanismul i componentle reaciei.
Tehnica de efectuare. Analiza i interpretarea rezultatelor.
REACII DE CITOLIZ IMUN (cu participarea complementului)
Activarea fraciilor complementului (C) duce la liza particulei purttoare de Ag (hematii, bacterii, diverse
celule...)
Activarea complementului
Calea clasic
Calea alternativ
Calea lectinic

Activarea C pe cale clasic


Activatorul l constituie complexe Ag-Ac (IgG, IgM)
Consecutivitatea activrii C: Ag-Ac fixeaz fracia C1qrs, care capt ulterior activitate esterazic (n prezena
++
obligatorie a Ca )
C1 activeaz C4, cu formarea complexului AgAcC1C4b. Este apoi activat C2 (AgAcC1C4bC2a), complexul
C4bC2a devenind convertaz ce acioneaz asupra C3
Urmeaz clivarea C3 n C3a (anafilotoxin) i C3b, care se unete de complex (AgAcC1C4bC2aC3b), formnd
C5-convertaza, care cliveaz C5 n C5a i C5b

C5b se leag de membrana celulei-int. Urmeaz fixarea simultan a C,6,7. La final se fixeaz C8, apoi C9,
formnd complexul de atac membranar. Fixarea lor produce leziuni ireversibile liza celulei.
Calea alternativ de activare a C
Activatori: endotoxine, celule infectate cu virus, levuri, parazii, venin de cobr, agregate de IgA sau IgE. C1,4 i
++
2 nu intervin i reacia ncepe cu C3. Properdina, factorul B i ionii de Mg sunt obligatorii n procesul de
activare pe cale alternativ.

Calea lectinic de activare a C este determinat de legarea unor lectine pe unele grupri de manoz,
carbohidrat prezent n componena multor mi/o i absent la ma/o. Lectina este echivalent fraciei
C1q. Alte 2 molecule se asociaz, formnd o enzim similar C1, ceea ce duce la formarea complexului
C4bC2a (C3-convertaza)
Componentele reaciilor de liz:
Ag (celule bacteriene, hematii, etc)
Ac (lizine - IgG i IgM)
Complement ser proaspt de cobai sau ser de cobai liofilizat
Reacia de bacterioliz (RBL)
- Ag suspensie de bacterii vii (vibrioni, leptospire...)
- Ac serul imun sau serul bolnavului
- Complement
RBL in vitro
Se efectueaz diluia succesiv a serului
Se adaog suspensie microbian vie
Se adaog complement
(martor: Ag+ser fiziologic+C)

Incubare 2 h la 37C
Rensmnare pe cutii cu geloz cte 0,1 ml din fiecare diluie (24h 37 C)
Lectura se compar nr coloniilor crescute din martor i probele studiate
Titrul cea mai mare diluie a serului n care au fost lizate cel puin 50% din celule

RBL in vivo
Amestecul dintre Ag i Ac se inoculeaz intra-peritoneal la animale de laborator (ex.: oareci albi)
Peste fiecare 10 min, timp de o or, se extrage lichidul peritoneal, se pregtete un preparat nativ i se
examineaz pe fond negru sau cu contrast de faz.
Rezultat pozitiv numrul bacteriilor scade treptat pn la dispariie.
Utilizarea RBL diagnosticul holerei (RVL), leptospirozelor (RALL)
Reacia de hemoliz (RHL)
Ag hematii de berbec, suspensie de 3%
Ac ser imun de iepure anti-hematii de berbec (serul hemolitic)
Complement
Principiul reaciei: complexele Ag-Ac formate fixeaz C i-l activeaz pe cale clasic, provocnd hemoliza.
Intensitatea hemolizei se apreciaz vizual (++++) sau prin msurarea densitii optice a hemoglobinei
eliberate.
Utilizarea practic a RHL: pentru dozarea C, precum i n montarea reaciei de fixare a complementului.

5. Reactiile de neutralizare (RN) a toxinelor si virusurilor (in vivo, in vitro). Principiul, mecanismul i
componentele reactiei. Tehnica de efectuare. Analiza i interpretarea rezultatelor.
Antitoxinele sint niste anticorpi apti s interactioneze cu toxinele respective si sa le neutralizeze. 60 de specii
de m/o produc exotoxine.
Contiii pentru reactia de neutralizare: coraport cantitativ, timp necesar pentru interatiune si temperatura
optima. La baza neutralizarii - reactie f-ch, monosistemica, directa, bicomponenta.
Manifestarea externa (in vitro) - fenomenul de floculatie - opalescenta aparuta in epurubeta ce contine toxina
si antitoxina.
RIHA (reactia de inhibare a hemaglutinrii) - pentru indentificare virusurilor hemaglutinante. In conditii
necesare (temp. pH) in dilutii de ser se adaug o doz determinata de hematoglutinin i suspensia de
hematii.
Reactia pozitiv - daca sunt prezenti anticorpii inhibitri omologi hematoglutininei, hematiile
sedimenteaza in butoane.
Reactie negativa - in absenta acestor anticorpi hematiile aglutineaza in pelicula pe fundul godeuli sau al
tubului. se noteaza cu 4,3,2,1 despectiv inhibarii.
(in vivo) - se incouleaza ser imun + toxina la un animal receptiv si se urmareste manifestarea,
6. Reactii cu elemnte marcate: teste imunoenzimatice, radioimunodozarea, imunofluorescenta,
electrochemluminiscenta. Componentele. Tehnica de efectuare. Analiza i interpretarea rezultatelor.
Tehnici serologice cu utilizarea Ac marcai
n unele cazuri este imposibil de a detecta o reacie Ag-Ac: unii Ac nu precipiteaz, alii nici nu precipiteaz,
nici nu aglutineaz, exist complexe Ag-Ac care nu fixeaz C. n aceste cazuri pot fi utilizai Ac marcai
pentru a vizualiza Ag respectiv. Conjugarea Ac cu marcani nu afecteaz proprietile lor imunologice.
Aceste reacii se monteaz pe suport solid (lam, plci din plastic)
Marcanii utilizai uzual:
Fluorocromi (rodamina, fluoresceina), care emit respectiv o lumin rou-oranj sau verde-galben la tratarea
lor cu raze UV (Reacia de Imuno-Fluorescen)
Enzime (fosfataza alcalin, peroxidaza), capabile s modifice culoarea unui substrat (Reacia Imunoenzimatic)

125

Radio-izotopi ( J sau H), care emit respectiv raze gamma i beta (Analiza Radio-Imun)
Reacia de imunofluorescen (RIF, reacia COONS)
Metoda direct (numai n scop de seroidentificare). Din materialul ce conine Ag (material nativ, cultur pur,
biopsie tisular) se prepar un frotiu, peste care se aplic serul imun specific cu Ac marcai cu
fluorocrom. Peste 20 min de incubare ntr-o camer umed preparatul este studiat la microscopul
luminiscent. n caz de reacie pozitiv se observ luminiscen local. Inconvenient necesitatea de a
avea seruri imune marcate specifice pentru fiecare Ag.
Metoda indirect. Poate fi utilizat pentru sero-identificare i sero-diagnostic.
Pe frotiul ce conine Ag se aplic Ac corespunztori nemarcai. Peste 20 min se spal minuios preparatul, apoi
se adaog anti-Ig fluorescent, care se va combina cu Ac din complex. Acest reactiv poate fi utilizat n
numeroase reacii.
Anti-Ig se obine prin imunizarea iepurilor (sau altor animale) cu Ig.
Tehnica fondat pe fixarea C: Markerul fluorescent este un ser anti-complement care se va lega de
complementul fixat pe complexul Ag-Ac.
RIF se utilizeaz pentru identificarea rapid a Ag din biosubstrate sau pentru serodiagnostic.
Reacia Imuno-Enzimatic (RIE, ELISA -Enzyme Linked Immunosorbent Assays).
- RIE direct (metoda sandwich). Utilizat doar n sero-identificarea Ag. n godeurile din placa de polistiren n
care sunt fixai Ac cunoscui se toarn soluia de Ag necunoscut. Se incubeaz 1h. Dup o splare
minuioas a godeurilor se adaug Ac marcai cu enzime, care se fixeaz pe epitopii liberi ai Ag
polivalent. Dup incubare de 30 min-1h se spal iari godeurile. Prezena complexului Ac-Ag-Acmarcat se depisteaz cu ajutorul substratului cromogen (substan iniial incolor, dar care se coloreaz
sub aciunea enzimei, ex. apa oxigenata si orthofenilendiamina).

RIE indirect. Utilizat n serodiagnostic. Ag cunoscut este fixat la fundul godeurilor. Ac (serul testat) se
ntroduce n godeu, dup 1h se spal totul i se adaog ligandul marcat cu enzim (anti-Ig sau proteina
A cuplate cu enzim). Acest ligand se fixeaz pe Ac testai. Se adaog apoi substratul cromogen.
Cantitatea de Ac se msoar dup densitatea optic a lichidului din godeuri.

Tehnica imunoblot (western blot) permite identificarea Ag dintr-un amestec.


I etap electroforeza n gel a probei de Ag
II etap transferul electric al Ag pe membrana de nitroceluloz
III etap pe membran sunt aplicai succesiv Ac dirijai contra Ag, apoi conjugatul marcat cu enzim, care
permite depistarea Ac fixai. Dup o splare se adaog substratul cromogen. Fiecare complex Ag-Ac
formeaz zone colorate distincte. Utilizare: depistarea Ac anti-HIV, caracterizarea Ac monoclonali...
Proteinele sunt separate electroforetic n gel poliacrilamid. Sub aciunea cmpului electric are loc difuzia
proteinelor conform greutii moleculare, aranjndu-se n zone liniare subiri diferite: mai aproape de
start se aranjeaz proteinele cu mas molecular mare (120-150 kDa), la final se aranjeaz proteinele
cu mas molecular mic (5-10kDa).
Apoi lamela de gel este transferat pe o foaie de nitroceluloz amplasat ntre electrozii unei surse de curent
continuu. Sub aciunea cmpului electric are loc trecerea proteinelor din gel pe nitroceluloz, unde se
fixeaz foarte bine pe hrtie.
Proteinele fixate sunt marcate cu o enzim (e.g. alkaline phosphatase sau peroxidase) incolor.
Procedura ulterioar de montare a reaciei este similar tehnicii ELISA.
Analiza radioimun (ARI)
Principiul este identic cu cel al RIE

Ag se fixeaz la fundul godeurilor din placa de plastic. Se adaog Ac testai care se vor combina cu Ag omolog.
Dup splarea godeurilor, se adaug un ligand radiomarcat (anti-Ig). Dup eliminarea excesului de
izotopi prin splare, se msoar radio-activitatea: ea este proporional cu concentraia Ac dozai.

7. Metode de tipizare moleculara. Reactia de polimerizare in lant (PCR - polimerase chain reaction),
MUltiplex PCR, REal TIme PCR, masspectrometria. Principille, mecanismele. Analiza i interpretarea
rezultatelor.

Lucrare nr 12..
9.Hipersensibilitatea de tip imediat si
tardiv.Factoriii si mecanismele implicate

2/15/20101

REACIILE DE HIPERSENSIBILITATE.
Hipersensibilitate raspunsuri imune excesive sau anormale,
capabile sa provoace leziuni tisulare si maladii. Aceste reacii se
pot dezvolta n cadrul mecanismelor de aprare fa de un microb
patogen. n acelai timp, reacii similare pot fi dirijate contra
substanelor de origine ne-infectioasa.
Particularitile RHS:
1.RHS sunt specifice de Ag /alergen
2.RHS sunt induse de un contact primar cu Ag/alergenul care
provoac rspunsul imun specific (umoral, celular)
3.RHS sunt declanate la contacte ulterioare repetate cu acelai
Ag/alergen
Clasificarea RHS dup mecanismele imunologice efectuate (Gell,
Coombs)
I.Hipersensibilitatea de tipul I (reacii imediate, anafilactice)
II.Hipersensibilitatea de tipul II (citolitic-citotoxic)
III.Hipersensibilitatea de tipul III (prin complexe imune)
IV.Hipersensibilitatea de tipul IV (tardiv)
V.Hipersensibilitatea de tipul V (prin autoAc)
RHS de tipul I (anafilactice, imediate)
RHS imediate mai sunt numite alergie sau atopie. Persoanele predispuse la astfel
de reactii sunt numite atopice
Antigenele care declanseaza o hipersensibilitate imediata sunt calificate ca
alergeni.
Manifestrile patologice survin timp de 15-30 min dup rentroducerea alergenului n
organismul sensibilizat.
n reaciile anafilactice particip Ig E. la persoanele predispuse la alergii intalnirea cu
unele Ag determina activarea limf Th2 si producerea Ac Ig E. Fiind sintetizate n
timpul primului contact cu alergenul, IgE se fixeaz pe receptori ai mastocitelor (n
special din esutul conjunctiv sau din mucoase), persistnd mai multe luni.

La ptrunderea repetat (percutan, prin mucoase, intravenos) antigenul


omolog leag ncruciat fragmentele Fab ale Ig E vecinede pe mastocite.
Aceasta duce la eliberarea din celule a unor mediatori, substane biologic
active (histamin, serotonin, Factorul de Necroz al Tumorilor,
prostaglandine, leucotriene). Ele se fixeaz pe receptorii terminaiilor
nervoase inducnd contracia musculaturii netede (bronice, intestinale,
uterine), vasodilataie, creterea permeabilitii vasculare cu edem, reacie
urticarian n tegument i hipersecreie de mucus la nivelul bronic. Aceste
reactii survin la cateva minute de la reintroducerea Ag.

2/15/20102
Alti mediatori ai mastocitelor citokinele recruteaza, pe parcursul al catorva ore, neutrofile si eozinofile la nivelul localizarii
reactiei. Acest proces inflamator al RHS imediate reprezinta faza tardiva a reactiei. Este responsabila de leziunile tisulare
provocate de catre atacurile repetate de hipersensibilitate imediata.
Anafilaxia general (ocul anafilactic)
Este cea mai brutal i grav reacie declanat de un Ag/alergen. Se manifest n cteva secunde dup administrarea parenteral a dozelor
mari de Ag/alergen cu semne clinice sistemice: urticarie, asfixie, colaps circulator i oc. Poate duce la deces subit.
Ag responsabile de ocul anafilactic:medicamente (analgezice, anestetice, AB, seruri sangvine de animale, enzime), venin de viespi, de albine,
alimente.
Anafilaxia local(alergenul administrat n doz foarte mic sau depus pe o mucoas)
-La nivelul mucoaselor:conjunctivita alergic, rinita, astmul i traheita spasmodic (alergeni: polenuri, dejecte de acarieni din praful de cas)
-Forme cutanate: dermatita atopic i urticaria
-Alergia alimentar: manifestri extradigestive (urticarie, edem Quincke, astm, anafilaxie) i digestive (diaree, vome)
Depistarea RHS tipul I:
-Teste cutanateprin aplicarea cutanat sau administrarea intradermic a alergenilor. Reacie pozitiv peste 15 min local apare o reacie
eritemo-papuloas.
-Teste de provocarese efectueaz la astmatici, prin administrarea alergenului n aerozol (pe cale nazal, ocular, oral) i msurnd
modificrile imediate i tardive a volumului expirat maxim.
-Dozarea imunoenzimatic sau radioimun a Ig E

2/15/20103
Principii de tratament
-Evitarea alergenului
-Desensibilizarea prin administrarea repetata a dozelor mici de Ag, care induce sinteza Ac Ig G
-Tratament simptomatic (inhibitori ai degranulrii mastocitelor, anti-histaminice, etc)
RHS de tipul II (citolitic-citotoxice)
Implic Ac (Ig G sau Ig M) dirijai contra unui Ag natural sau exogen fixat pe suprafaa unei celule sau a unui esut. Se dezvolt n
cteva minute sau ore.
Afecteaz n special celulele sngelui, provocnd citoliza prin activarea complementului sau prin opsonizare i fagocitoz de
ctre macrofage. Celulele K de asemenea pot distruge celulele opsonizate.
Aceste mecanisme cauzeaz citopenie.
1.Reacii transfuzionale(prezena Ac anti-hematii n timpul unei transfuzii sanguine poate induce hemoliz intravascular prin activarea C pe
cale clasic).
2.Maladia hemolitic perinatal prin incompatibilitate Rhesus. Mama Rh-se imunizeaz n cursul primei graviditi contra ftului Rh+ la trecerea
hematiilor fetale n sngele matern (la natere, n timpul unui avort). La o graviditate ulterioar, mama pre-imunizat contra factorului Rh+
poate sintetiza Ig G anti-Rh+, dac ftul este iari Rh+.

Aceti Ac pot traversa bariera placentar i liza hematiile ftului la finele graviditii, provocnd o hemoliz grav.
Prevenirea: administrarea Ac anti-Rh+ tuturor femeilor Rh-n primele 48 ore de la naterea unui copil Rh+ sau a unui avort.
Aceti Ac opsonizeaz hematiile fetale din sngele matern i provoac eliminarea lor rapid.
3. Hemoliza imun de origine medicamentoas(medicamentul se depune pe membrana eritrocitar i Ac anti-medicament
distrug eritrocitele acoperite de acest medicament).
4. Trombocitopenii i granulocitopenii.
Diagnostic:
-Depistarea Ac contra celulelor (esuturilor) implicare
-Prezena Ac i C n leziuni, depistai prin RIF

2/15/20104
RHS de tipul III (mediate de complexe imune Ag-Ac solubile)
n mod normal CI sunt eliminate repede din organism. n unele circumstane CI persist perioade ndelungate. Cauze:
a)Infecii cronice: angine streptococice, endocardite bacteriene, hepatite virale, parazitoze, etc
b)esuturi proprii devenite auto-reactive n urma unor procese distructive (ex.: colagenoze)
c)Introducerea albuminei serice n cantiti mari (tratament cu seruri imune)
Mecanismul:Complexele Ag-Ac solubile activeaz C i determin leziuni n locul formrii sau depunerii lor n esuturi sau pe endoteliul vascular.
-Fenomene patologice locale: reacia Arthus, glomerulonefrita, artrit, poliatrerite. Se produc n exces de Ac dup 3-10 ore de la contactul cu
Ag.
-Fenomene patologicegenerale: boala serului (n exces de Ag).
Depistarea RHS de tipul III:
-Evidenierea CI n biopsii tisulare. Se efectueaz utiliznd RIF, RIE sau ARI
-Titrarea Complementului seric (diminuarea titrului)

RHS de tipul IV (mediate celular, tardive, ntrziate)


Sunt determinate de limfocite T CD8 (Tc) sau TCD4 (Th1) activate la contactul secundar cu Ag sensibilizant.
Sunt cunoscute 3 modele de hipersensibilitate tardiv:
1.Hipersensibilitatea tuberculinic
2.Reacia granulomatoas
3.Dermatitele de contact
Hipersensibilitatea tuberculiniceste indus de infecii bacteriene, virale, fungice sau parazitare, prin vaccinare cu vaccinuri vii atenuate sau cu
proteine fixate pe un adjuvant complet.
Ptrunderea repetat a Ag activeaz limdocitele Th1 specifice de acest Ag, ducnd la activarea Tc i eliberarea unor citokine, responsabile de
acumularea local a celulelor mononucleate cu apariia eritemului i formarea unui infiltrat, n unele cazuri chiar i necroz. Leziunea apare
peste 48 ore i dispare n 3-5 zile.

2/15/20105
Hipersensibilitatea granulomatoasapare n cursul sensibilizrii cu substane insolubile sau greu digerabile (constituienii unor parazii,
compui lipoidici ai micobacteriilor, brucelelor, etc). n aceste cazuri RHS se prelungete i se manifest prin formarea, n cteva sptmni sau
luni, a unui granulom.
n componena granulomului se disting 3 zone: central, din celule epitelioide, intermediar din limfocite i fibroblaste i periferic din
leucocite PMN, limfocite B i plasmocite. Granulomul poate fi supus fibrozei i calcifierii, persistnd mai muli ani.
Hipersensibilitatea de contacteste determinat de haptene (metale grele -Ni, Cr, substane chimice cauciuc, clei, pesticide, vopsele, produse
cosmetice, medicamente).
Aplicate percutanse combin cu proteinele membranare, n special ale celulelor Langerhans din epiderm. Aceasta duce la expansiunea clonal
a limfocitelor TCD8+. La contacte repetate cu aceeai hapten, citokinele eliberate de limfocitele activate determin infiltrarea celular a
glandelor sudoripare, sebacee, a foliculilor piloi, a epidermei. Peste 48-72 ore local se observ eritem, edem i formarea veziculelor.
Explorarea hipersensibilitii tardive
T e s t e c u t a n a t e (in vivo)
-Dermatitele de contactse depisteaz prin aplicarea cutanat a haptenelor i examinarea eritemului, infiltratului cutanat i a veziculelor aprute
peste 48 ore.
-Hipersensibilitatea tuberculinicse exploreaz prin introducerea intradermic a alergenilor microbieni: tuberculina (derivat proteic al unei
culturi de Mycobacterium tuberculosis), brucelina, tularina, antraxina, dizenterina, etc.

Peste 48 ore se msoar diametrul eritemului i induraiei.


Reacia pozitiv denot c organismul a fost n contact cu alergenul (infecie anterioar sau actual, vaccinare) i c acesta
persist n macrofagele organismului. Pentru confirmarea maladiei sunt necesare investigaii suplimentare.
Testeinvitro
-Testul de transformare limfoblastic(limfocitele unei persoane cu hipersensibilitate tardiv cultivate in vitro n prezena Ag
/alergenului suport o transformare blastic cu proliferare ulterioar).
-Testul de inhibiie a migrrii leucocitelor(activarea limfocitelor T de ctre Ag specifice duce la secreia citokinelor care inhib
migrarea leucocitelor)