Metode și tehnici de analiză a plantelor

supuse stresului de mediu

ARAD
2023
 CUPRINS
INTRODUCERE........................................................................................................................2
CAPITOLUL I............................................................................................................................3
1. Stres de mediu..................................................................................................................3
1.1. Stres biotic................................................................................................................3
1.2. Stres abiotic..............................................................................................................4
CAPITOLUL II...........................................................................................................................5
2. Gaze cu efect de seră........................................................................................................5
2.1. Dioxidul de carbon...................................................................................................5
2.2. Ozon..........................................................................................................................7
CAPITOLUL III.........................................................................................................................8
3. Descrierea metodelor și tehnicilor de analiză..................................................................8
3.1. Caracterizarea compușilor organici volatili utilizând cromatografia de gaze cuplată
cu spectrometria de masă.....................................................................................................8
3.2. Analiza unor pigmenţi asimilatori (clorofile şi carotenoizi) prin cromatografia de
lichide de înaltă performanță.............................................................................................14
3.3. Măsurarea parametrilor fotosintetici a plantelor folosind sistemul de schimb de
gaze....................................................................................................................................16
3.4. Determinarea compuşilor fenolici totali prin metoda Folin Ciocâlteu...................17
CONCLUZII.............................................................................................................................18
BIBLIOGRAFIE.......................................................................................................................17

2
 INTRODUCERE

Pe fondul dezvoltării rapide a economiei globale, o serie de probleme legate de resurse

și de mediu, cum ar fi poluarea mediului, deficitul de energie și daunele ecologice, devin din
ce în ce mai proeminente, în special schimbările climatice cauzate de dioxidul de carbon și
alte gaze cu efect de seră, care au a devenit una dintre provocările severe cu care se confruntă
dezvoltarea societății umane și un subiect fierbinte în domeniul cercetării academice [1].
Aceste schimbări climatice reprezintă una dintre principalele provocări pentru
generațiile actuale și viitoare . Încălzirea globală afectează plantele și animalele și este
responsabilă pentru pierderi considerabile de recolte [2]. Se prevede că schimbările climatice
vor afecta cel mai mult producția agricolă, în primul rând la latitudini joase populate de țările
în curs de dezvoltare, cu efecte adverse ale creșterii dioxidului de carbon și ale temperaturii
ridicate, provocând cercetătorii să elaboreze strategii de adaptare [3].
De asemenea, poluarea cu ozon a fost considerată a fi cauza principală a declinului
pădurilor și a decăderii copacilor în Europa de Est și de Vest și în toată Statele Unite. Stresul
cauzat de ozon ar putea avea un impact puternic asupra utilizării luminii și producerii de
produse de fotosinteză în plante [4].
Scopurile acestei lucrări reprezintă descrierea metodelor și a tehnicilor de analiză a
plantelor supuse stresului de mediu (biotic sau abiotic).

3
 CAPITOLUL I

1. Stres de mediu
Stresul de mediu poate fi de origine naturală sau antropică (adică, rezultat din acțiunile
umane). Multe stresuri de mediu, cum ar fi majoritatea uraganelor, secetele, inundațiile și
incendiile sunt o caracteristică periodică a vieții pe Pământ. În schimb, stresurile de mediu,
cum ar fi producția și eliberarea de noi compuși chimici și schimbările la scară largă în
utilizarea terenurilor, rezultă direct din acțiunile umane. În mod ironic, suprimarea stresului
natural al mediului, cum ar fi incendiile și inundațiile, poate fi, de asemenea, o sursă de stres
pentru sistemele biologice care rezultă din acțiunile umane [5].
Plantele sunt supuse unei varietăți de stres de mediu, ceea ce limitează productivitatea
culturilor agricole. Stresul mediului care afectează plantele este de două tipuri: stres biotic și
abiotic. Stresul abiotic include temperatura ridicată și scăzută (răcire, îngheț), radiațiile
ultraviolete (UV-B și UV-A), salinitatea datorată Na + excesiv, inundațiile, seceta, metalele
grele, expunerea la ozon, nivel ridicat de dioxid de carbon, ceea ce duce la pierderea unor
plante de cultură importante la nivel global, în timp ce stresul biotic se referă la daune cauzate
de insecte, ierbivore, nematode, ciuperci, bacterii sau buruieni. Pentru a face față acestor
stresuri, plantele au dezvoltat o serie de strategii [6].

1.1. Stres biotic

Stresul biotic la plante este cauzat de organismele vii, în special de viruși, bacterii,
ciuperci, nematode, insecte, arahnide și buruieni. Agenții care provoacă stres biotic își
privează direct gazda de nutrienții săi și duc la moartea plantelor. În ciuda lipsei sistemului
imunitar adaptativ, plantele pot contracara stresul biotic evoluând către anumite strategii
sofisticate. Mecanismele de apărare care acționează împotriva acestor stres sunt controlate
genetic de codul genetic al plantelor stocat în ele. Stresul biotic poate deveni major din cauza
pierderilor pre- și post-recoltare. În ciuda lipsei sistemului imunitar adaptativ, plantele pot
contracara stresul biotic evoluând către anumite strategii sofisticate. Mecanismele de apărare
care acționează împotriva acestor stres sunt controlate genetic de codul genetic al plantelor
stocat în ele.
Acești agenți de stres biotic provoacă diferite tipuri de boli, infecții și daune plantelor de
cultură și în cele din urmă afectează productivitatea culturii. Cu toate acestea, prin abordări de
cercetare au fost dezvoltate diferite mecanisme pentru a depăși stresul biotic. Stresurile biotice

2
ale plantelor pot fi depășite prin studierea mecanismului genetic al agenților care provoacă
aceste stresuri [7].

2
 1.2. Stres abiotic
Stresurile abiotice, cum ar fi seceta (stresul hidric), udarea excesivă (aglomerarea apei),
temperaturile extreme (frig, îngheț și căldură), salinitatea și toxicitatea minerală au un impact
negativ asupra creșterii, dezvoltării, randamentului și calității semințelor culturilor și altor
plante. În viitor, se prevede că deficitul de apă dulce va crește și, în cele din urmă, intensitatea
stresului abiotic va crește. Prin urmare, există o urgență de a dezvolta soiuri de culturi care să
fie rezistente la stresul abiotic pentru a asigura securitatea și siguranța alimentară în următorii
ani. Prima linie de apărare a plantelor împotriva stresului abiotic se află în rădăcinile sale.
Șansele de a supraviețui în condiții stresante vor fi mari dacă solul care ține planta este
sănătos și diversificat din punct de vedere biologic [7].

3
 CAPITOLUL II

2. Gaze cu efect de seră

Industria poate aduce o altă schimbare la scară globală în atmosferă: creșterea a ceea ce
se numesc gaze cu efect de seră. Asemenea sticlei dintr-o seră, aceste gaze admit lumina
soarelui, dar tind să reflecte înapoi în jos căldura care este radiată de la sol, captând căldura în
atmosfera pământului. Acest proces este cunoscut sub numele de efect de seră [8].
Cele mai importante GES sunt dioxidul de carbon (CO 2), metanul (CH4), protoxidul de
azot (N2O), hidrofluorocarburile (HFC), perfluorocarburile (PFC) și hexafluorurile de sulf
(SF6) [9]. Aceste gaze se împart în două mari categorii în funcție de prezența lor în atmosferă.
Unele dintre ele sunt prezente în mod natural în atmosferă, iar concentrația lor este în
continuă creștere din cauza activităților umane. Astfel de gaze sunt CO2, CH4 și N2O.
Clorofluorocarburile, HFC și PFC nu sunt prezente în mod natural în atmosferă, ci sunt
produse exclusiv de om [10]. Cea mai mare parte a încălzirii provine de la CO 2 (66%), urmat
de CH4 (16%) și N2O (7%). Aproximativ jumătate din tot CO 2 emis de activitățile umane
rămâne în atmosferă. Cealaltă jumătate este absorbită de pământ și oceane. În oceane, CO 2
crește temperatura de la suprafața mării și nivelul de aciditate [11].

2.1. Dioxidul de carbon

Existenţa dioxidului de carbon (CO2) a fost cunoscut încă din timpurile primitive [12].
Astfel că, dioxidul de carbon este principalul gaz cu efect de seră, responsabil pentru
aproximativ trei sferturi din emisii. Poate rămâne în atmosferă timp de mii de ani. Emisiile de
dioxid de carbon provin în principal din arderea materialelor organice: cărbune, petrol, gaz,
lemn și deșeuri solide. Nivelurile atmosferice de dioxid de carbon – cel mai periculos și
răspândit gaz cu efect de seră – sunt la cele mai înalte niveluri înregistrate vreodată [13].
În 2021, nivelurile de dioxid de carbon ajung la 416,96 părți per milion (ppm), iar în
anul 2022 se înregistrează un nivel de 417,31 părți per milion (ppm) [14].
Creșterea emisiilor de dioxid de carbon ar putea duce la mai multe schimbări climatice,
inclusiv diferite episoade de căldură extremă, secete sau inundații care stresează vegetația
terestră. Plantele pot răspunde la creșterea concentrațiilor de CO 2 din atmosferă prin creșterea
eficienței utilizării apei și a ratelor fotosintetice. Experimentele de îmbogățire cu CO2 în aer

4
liber (FACE), care folosesc plante crescute în medii în aer liber îmbogățite cu dioxid de
carbon, s-au dovedit a crește randamentul culturilor alimentare, chiar și în comparație cu
experimentele în cameră [15].

4
 Emisia de compuși organici volatili (COV) de la plantele crescute cu dioxid de carbon
ridicat este îmbunătățită în comparație cu plantele crescute la concentrația reală de CO2 . De
exemplu, emisia de izopren crește în Phragmites australis, Platanus × acerfolia și Populas
nigra × maximowiczii NM6 atunci când este crescut în dioxid de carbon ridicat. Abundența și
diversitatea emisiei de compuși organici volatili din plante de răsaduri de la Hordeum vulgare
L., inclusiv aromaticele, terpenele și volatilele frunzelor verzi, au fost modificate și de
dioxidul de carbon crescut în comparație cu concentrația reală de CO 2. În schimb,
concentrațiile foliare de COV nu sunt afectate de condițiile de creștere (700 ppmv CO 2
comparativ cu 400 ppmv CO2) pentru plantele Artemisia annua [15].
S-a descoperit că CO2 crescut crește conținutul foliar de polifenoli din răsadurile de
ceai, dar scade în aminoacizi liberi și cofeină. Fertilizarea cu dioxid de carbon nu a afectat
totalul de fenoli determinați în frunzele de năut [15].
Concentrația de clorofile în frunzele plantelor crescute la dioxid de carbon ridicat scade
în ciuda concentrației totale de fenoli. Rata de scădere a conținutului de clorofilă al frunzelor
de Oryza sativa L. a fost mai rapidă la plantele crescute cu conținut ridicat de carbon dioxid,
în principal în perioada ulterioară de creștere. Expunerea frunzelor de roșii la diferite
tratamente cu CO2 a relevat o scădere a clorofilei a și b. Într-un studiu recent cu plante
terestre, s-a demonstrat că fluorescența clorofilei scade odată cu creșterea concentrația de
dioxid de carbon.
În schimb, clorofila totală a crescut la năut cultivat la 700 ppmv CO 2 comparativ cu
condițiile ambientale din stadiul de înflorire. Un astfel de comportament ar putea fi explicat
prin fixarea simbiotică a azotului, care își poate îndeplini necesarul de azot prin absorbția de
azot din plante, accelerată în condiții de CO2 atmosferic ridicat. O creștere a conținutului de
clorofilă cu 33% a fost găsită pentru plantele pak choi (Brassica rapa ssp. chinensis) cultivate
la 800 ppmv dioxid de carbon în comparație cu martor. De asemenea, s-a constatat că dioxidul
de carbon crescut ar putea crește concentrațiile de pigmenți fotosintetici (clorofile și
carotenoizi) în diferite genotipuri de sorg.
Sinteza flavonoidelor totale și a monomerilor din frunzele răsadurilor de Robinia
pseudoacacia L. este afectată pozitiv de dioxidul de carbon crescut, în special pentru plantele
mai vechi. Concentrația crescută de CO 2 poate determina o acumulare mai mare de acid
clorogenic la plantele Lactuca sativa L., în timp ce la orz și porumb, CO 2 ridicat scade totalul
de flavonoide și antociani [15].

5
 2.2. Ozon
Ozonul (O3) este un gaz asemănător cu oxigenul, fiind un criteriu de poluare a aerului și
un constituent major al smogului. Ozonul din atmosfera inferioară este o otravă; dăunează
vegetația, ucide copacii, irită țesuturile pulmonare și atacă cauciucul și diverse materiale
plastice. Oficialii de mediu măsoară ozonul pentru a determina severitatea smogului. Când
nivelul de ozon este ridicat, alți poluanți, inclusiv monoxidul de carbon, sunt de obicei
prezenți și la niveluri ridicate [8].
Ozonul troposferic este un poluant puternic oxidativ, cu potențialul de a modifica
metabolismul plantelor. Efectele directe ale ozonului asupra fenotipului plantelor pot modifica
interacțiunile cu alte organisme, cum ar fi polenizatorii și, în consecință, pot afecta succesul
reproductiv al plantelor. Într-un set de experimente cu efect de seră, am testat dacă expunerea
plantelor la un nivel ridicat de ozon le-a afectat dezvoltarea fenologică, atractivitatea lor față
de patru polenizatori diferiți (albine zidar, albine melifere, muște și bondari) și, în cele din
urmă, succesul lor reproductiv. Expunerea plantelor la ozon a accelerat înflorirea, în special la
plantele care creșteau toamna, când semnalele de lumină și temperatură, care favorizează de
obicei înflorirea, erau mai slabe. Expunerea plantelor la ozon nu a afectat în mod substanțial
preferința polenizatorilor, dar bondarii au avut tendința de a vizita mai multe flori pe plantele
expuse la ozon, un efect care a fost determinat de faptul că aceste plante au avut tendința de a
avea flori mai deschise, ceea ce înseamnă un semnal de atracție mai puternic. Albinele petrec
mai mult timp pe floare pe plantele expuse la ozon decât pe plantele de control. Accelerarea
producției de flori și răspunsurile comportamentale ale polenizatorilor la plantele expuse la
ozon au dus la păstrarea aptitudinii de reproducere a plantelor polenizate de bondari, albine
melifere și albine zidar, în ciuda efectelor negative ale ozonului asupra creșterii plantelor.
Plantele care au fost polenizate de sirisi au avut o reducere a aptitudinii de reproducere ca
răspuns la ozon. Într-un cadru natural, accelerarea înfloririi de către ozon ar putea favoriza
desincronizarea între activitățile plantelor și ale polenizatorilor. Acest lucru poate avea un
impact puternic asupra plantelor cu perioade scurte de înflorire și asupra plantelor care, spre
deosebire de muștarul sălbatic, nu au mecanisme compensatorii pentru a face față absenței
activității polenizatorului la începutul înfloririi [16].

6
 CAPITOLUL III

3. Descrierea metodelor și tehnicilor de analiză

3.1. Caracterizarea compușilor organici volatili utilizând

cromatografia de gaze cuplată cu spectrometria de masă

În chimia analitică, putem găsi o gamă largă de tehnici și metodologii dedicate analizei
probelor. Tehnicile de separare analitică cromatografică au capacitatea de a detecta
moleculele și atomii în probe cu concentrație scăzută și prezintă parametri care pot fi
controlați, permițând eliminarea ușoară a interferențelor [17].
Cromatografia este o metodă analitică cu spectru larg, utilă în separarea, identificarea,
cuantificarea și determinarea compușilor chimici prezenți în analit. Acest lucru face posibilă
analiza amestecurilor foarte complexe, în diferite ramuri industriale. De exemplu, industria
chimică, petrochimică și farmaceutică utilizează cromatografia ca tehnică pentru determinarea
și controlul compușilor organici care provin din procesele lor. Pe de altă parte, această tehnică
este utilizată și ca măsură de control al mediului: poluanții aromatici din aer, din apă, din
mediul înconjurător și din mediu. poluanți aromatici în aer, în apă, detectarea și măsurarea
pesticidelor.
Dintre toate tehnicile cromatografice utilizate în scopuri analitice, cromatografia în fază
gazoasă este probabil cea mai utilizată, nicio altă tehnică analitică nu poate oferi capacitatea
de separare sau sensibilitatea sa la analiza compușilor volatili[17] .
Se bazează pe împărțirea analitului între o fază mobilă gazoasă și o fază lichidă
imobilizată pe o suprafață solidă inertă sau pe pereții unui tub capilar. Componentele unui
eșantion introdus în orificiul de injecție cu o seringă sunt vaporizate și separate ca urmare a
separării între faza mobilă gazoasă și o fază staționară lichidă sau solidă ținută într-o coloană.
Eluția se realizează prin intermediul unui flux de fază mobilă de gaz inert (heliu), care nu
interacționează cu analitul, singura sa funcție fiind aceea de a transporta analiții de-a lungul
coloanei până la detector, pentru a fi ulterior pentru a obține cromatograma.
Pentru a efectua o separarea cromatografică în fază gazoasă, o cantitate mica din proba
care trebuie separate este injectată într-un curent de gaz inert, la temperatură ridicată. Acest

7
curent de gaz trece printr-o coloană cromatografică care va separa componentele amestecului
prin intermediul unui mecanism de partiție (cromatografie gazoasă lichidă), de adsorbție
(cromatografie gazoasă solidă) sau, în multe cazuri, printr-o combinație a celor două.

7
Componentele separate vor ieși din coloană la intervale discrete și vor trece printr-un sistem
de detecție adecvat sau vor fi direcționați către un dispozitiv de colectare a probei [17].
Faza mobilă: Faza mobilă gazoasă asigură o echilibrare rapidă între faze cu o eficiență
mai mare în obținerea analizelor. Cele mai frecvent utilizate gaze sunt: azot, heliu, hidrogen și
argon. Faza mobilă nu trebuie să interacționeze cu faza staționară sau cu proba, trebuie să fie
ieftină, compatibilă cu detectorul și de o puritate ridicată. Pentru a asigura o reproductibilitate
mai mare a analizei, saturația gazului trebuie să fie constantă și trebuie să fie controlată prin
supape cu ac.
Un cromatograf cu gaz este format din mai multe module de bază asamblate pentru:
 asigurarea un debit sau un flux constant al gazului purtător (faza mobilă)
 permiterea introducerii vaporilor de eșantionare în fluxul de gaz curgător
 să conțină o lungime corespunzătoare de fază staționară
 să mențină coloana la temperatura corespunzătoare (sau secvența programului de
temperatură)
 detectează componentele probei pe măsură ce acestea se eluează din coloană
 furnizează un semnal lizibil proporțional în mărime cu cantitatea fiecărui component
al probei în funcție de cantitatea fiecărei componente.
Schema generală a unui cromatograf de gaze este prezentată în figura 1.
a. Sursa de gaz
b. Sistem de injecție
c. Cuptor și coloană cromatografică
d. Sistem de detectare
e. Sistemul de înregistrare

Figura 1:Schema generală a unui cromatograf de gaze[17]

8
Componente ale echipamentului de cromatografie în fază gazoasă
A) Butelie de gaz purtător
Acestea nu trebuie să interacționeze cu faza staționară sau cu proba. Acesta ar trebui să fie
de o puritate ridicată, cu costuri reduse și compatibile cu detectorul. A se vedea pentru a
controla viteza gazului purtător, sunt necesare regulatoare și contoare de presiune, calibrare și
debit. Gazele utilizate sunt: azot, heliu, hidrogen și argon.
B) Coloana
Coloana constituie un tub lung care conține faza staționară, cu o rezistență termică
ridicată, care optimizează gradul de separare a probelor. În general, acestea sunt fabricate din
cupru, oțel, aluminiu, sticlă și teflon. Din acestea se produc două tipuri de coloane: coloane
capilare sau deschise; tuburi subțiri, lungi, cu o peliculă interioară care conține o fază
polimerică de siliciu cu o grosime cuprinsă între 0,1 și 5 µm și coloane compacte, tuburi cu o
fază staționară sub formă de sfere sferice. fază staționară în formă de sferă cu caracter inert,
de obicei din silice.

Figura 2:Coloana cu umplutură (stânga) și coloana capilară deschisă (dreapta) [17]

C) Injector
Sistemul de injecție se realizează prin utilizarea de micro-seringi care conțin proba, al
căror volum de injecție nu trebuie să depășească capacitatea oferită de coloană, unde, prin
efectuarea unei injecții la un volum mai mic, se îmbunătățește eficiența și reproductibilitatea
analizei. Injectorul are capacitatea de a se încălzi, permițând aplicarea unei temperaturi
adecvate pentru a asigura volatilizarea și atomizarea probei.
D) Detector
După ce proba trece prin coloană, unde este separată, ajunge la sistemul de detecție.
Acesta are rolul de a transforma fracția de analit într-un semnal electric. Cei mai relevanți
parametri ai acestuia sunt sensibilitatea, liniaritatea și cantitatea minimă detectabilă.

Printre cei mai relevanți detectori se numără:

 Detector de ionizare prin flacără (FID)

9
 Prin arderea efluentului coloanei cu o flacără alimentată de amestecul hidrogen/aer, se
produc ioni și electroni care produc o diferență de potențial captată de un electrod aflat la baza

9
arzătorului. Această diferență provoacă un curent electric de mică intensitate care este
amplificat.

 Detectorul de conductivitate termică (TCD)

Se bazează pe diferența de conductivitate termică a gazului purtător atunci când acesta
circulă cu analitul. Aceste modificări sunt produse de o rezistență încălzită electric (sârmă fină
de platină, aur sau tungsten) al cărei potențial electric este constant și a cărei temperatură
depinde de gazul înconjurător.

 Detector cu captură de electroni (ECD)

Datorită unui emițător radioactiv, cum ar fi nichel-63 sau tritiu, absorbit pe o placă de
platină sau titan, cum ar fi nichel-63 sau tritiu absorbit pe o placă de platină sau titan, emite
particule β (electroni). Acestea provoacă ionizarea gazului purtător, generând o explozie de
electroni care, sub un câmp electric constant furnizat de o pereche de electrozi, va fi întreruptă
de fluxul de compuși din gazul efluent. Acest lucru permite selectivitatea pentru compuși și
molecule cu caracter electronegativ.

 Detectorul spectrometrului de masă (MS)

Această tehnică este guvernată de obținerea de ioni din molecule atomizate în prealabil,
care sunt supuse unui câmp electric indus care determină variația traiectoriei spre detector,
evidențiind separarea atomilor și moleculelor în funcție de sarcina și masa acestora.
E) Cromatograma
O cromatogramă este semnalul colectat de detectorul cromatografului definit ca o
înregistrare grafică bidimensională. Aceasta cuprinde răspunsul la relația proporțională dintre
funcția de concentrație a concentrației de solut analit sau volumul de eluție și timpul de
retenție, formând modele de vârfuri și văi care permit vizualizarea separării fizice, asigurând
identificarea, clasificarea și cuantificarea componentelor amestecului. Cromatogramele pot fi
segmentate în diferite valori pentru analiza grafică.

10
 1.0
2.0
3.0
4.0
5.0

N-Acetyl-2,2,3,3,3-pentafluoro-N-(4-(2,2,3,3,3-pentafluoro-N-(2,2,3,3,3-pentafluoropropanoyl)propanamido)butyl)propanamide

7.5
Octadecane, 2,2,4,15,17,17-hexamethyl-7,12-bis(3,5,5-trimethylhexyl)-
6.0 TIC (1.00)

Glutaric acid, di(5-bromo-2-methoxybenzyl) ester

(x1,000,000)

Maltosuronic acid, 1',6'-anhydro-penta-O-benzyl-

Pregnan-20-one, 3,11,17,21-tetrahydroxy-, O-methyloxime, (3.alpha.,5.beta.,11.beta.)- (9CI), 4TMS derivative

10.0
Ethyl Acetate

12.5

Heptane
15.0
17.5

Toluene
20.0

Cyclotrisiloxane, hexamethyl-
22.5
25.0

10
o-Xylene
27.5

Bicyclo[3.1.0]hex-2-ene, 2-methyl-5-(1-methylethyl)-
30.0

5-Hepten-2-one, 6-methyl-
1,1,1,2,2,3,3,4,4,5,5,6,6-Tridecafluorotridecane
32.5

6,7-Dimethyl-3,5,8,8a-tetrahydro-1H-2-benzopyran
Eucalyptol
35.0

Cyclopentasiloxane, decamethyl-
Cholestan-3-one, methoxime
37.5

Figura 3: Cromatograma unor compuși organici volatili

l-Menthone
Cyclohexanol, 5-methyl-2-(1-methylethyl)-, (1.alpha.,2.beta.,5.alpha.)-(.+/-.)-
40.0

Cyclohexanol, 5-methyl-2-(1-methylethyl)-, (1.alpha.,2.beta.,5.alpha.)-(.+/-.)-

Cyclohexanol, 3,3-dimethyl-
42.5

Cyclohexane, isothiocyanato-
4-Heptanol, 4-ethyl-2,6-dimethyl-
erythro-9,10-Dibromopentacosane
3-Cyclohexen-1-one, 2-isopropyl-5-methyl-
1,1,1,5,7,7,7-Heptamethyl-3,3-bis(trimethylsiloxy)tetrasiloxane
45.0
 Spectrometria este definită ca o tehnică spectroscopică care permite măsurarea numărul
de specii prezente sau concentrații date. Aceasta, în funcție de relația dintre interacțiunile
radiației electromagnetice și materie, înaintea proceselor de absorbție și emisie de energie.
Acesta este motivul pentru care tipul de spectrometrie este dat de natura procesului de
excitație și interacțiune a materiei și de mărimea fizică aferentă care trebuie măsurată.

Spectrometru de masă

Spectrometria de masă corespunde unei metodologii de analiză, a cărei funcție este

determinarea individuală a maselor de specii atomice sau moleculare. Prin separarea ionilor
de componentele analitului, care se deplasează rapid sub un câmp magnetic indus care le
permite separarea pe baza raportului lor masă-sarcină (m/z), este posibil să se colecteze
informații asupra naturii, compoziției și structurii speciei.
Capacitatea de a diferenția două mase este determinată cu puterea de rezoluție (R),
definită ca masa nominală (m) împărțită la diferența a două mase care pot fi separate.

m
R=
∆m

Componentele spectrometrului de masă:

a. Sistem de introducere a probei
b. Sursa de ionizare
c. Analizator de masă
d. Sisteme de vid
e. Detector de ioni

3.2. Analiza unor pigmenţi asimilatori (clorofile şi carotenoizi) prin

cromatografia de lichide de înaltă performanță

Cromatografia lichidă de înaltă performanță este o tehnică cromatografică care este

utilizată pentru a separa, identifica și cuantifica componentele unui amestec, de exemplu,
separarea compușilor chimici sau identificarea constituenților unei probe biologice.
Un sistem tipic de cromatografie lichidă de înaltă performanță cuprinde o fază
staționară, o fază mobilă cu polaritate variabilă și un detector de ultraviolete (Figura 4).

11
 Faza mobilă este de obicei compusă din doi solvenți cu polarități diferite, utilizați într-
un gradient, astfel încât polaritatea totală să poată fi mărită sau micșorată după cum se
dorește. Faza staționară este în mod obișnuit o carcasă de coloană solidă de câțiva centimetri
lungime care adăpostește particule de suport de silice și o substanță legată imobilizată pe
acestea care efectuează separarea componentelor analitului pe baza polarităților lor relative.
Diferiți compuși interacționează în grade diferite cu faza staționară, ceea ce înseamnă că
polaritatea solventului amestecul necesar (și, prin urmare, timpul necesar) pentru a le
îndepărta din coloană, sau „timpul de retenție”, poate fi folosit ca un identificator caracteristic
pentru acel compus (în aceleași condiții, adică compoziția, gradientul și debitul fazei mobile).
[18]

Figura 4: Cromatografia de lichide de înaltă permformanță [18]

Deoarece principalii pigmenţi responsabili pentru absorbţia luminii în procesul de

fotosinteză sunt clorofilele, sensibilitatea la stres a unei plante este evaluată prin conţinutul de
clorofilă. Astfel, determinarea pigmenţilor clorofilieni şi carotenoizi a fost efectuată utilizând
un cromatograf de lichide de înaltă performanţă [19].
Detecţia HPLC poate fi realizată simultan la mai multe lungimi de undă,
corespunzătoare maximului de adsorbţie pentru fiecare pigment investigat.
Pigmenții fotosintetici (clorofilele a și b, β-carotenul, zeaxantina, respectiv luteina) se
măsoare la diferite lungimi de undă. Pentru evaluarea cantitativă a acestor pigmenţi din

12
frunzele plantelor, se trasează curbele de calibrare pentru clorofila a, clorofila b şi β-caroten
utilizând diferite etaloane, respectiv pentru zeaxantin şi luteină.

12
 3.3. Măsurarea parametrilor fotosintetici a plantelor folosind
sistemul de schimb de gaze

Schimbul de gaze la plante se realizează prin stomatele și lenticele. Epiderma are pori
minusculi numiți stomate (singular, stomata) care controlează transpirația și schimbul de gaze
cu aerul. În timpul zilei în care are loc fotosinteza, oxigenul eliberat din proces este utilizat
pentru respirație. Figura de mai jos descrie structura stomatelor din epiderma frunzelor [20].

Figura 5: Respirația plantelor

Stomatele controlează transpirația vaporilor de apă și schimbul de dioxid de carbon și
oxigen. Stomatele sunt flancate de celule gardă care se umflă sau se micșorează prin absorbția
sau pierderea apei prin osmoză. Când o fac, deschid sau închid stomatele. Tulpinile lemnoase
groase și chiar și pericarpul (copertele de fructe) la plante au, de asemenea, deschideri numite
lenticele pe suprafețele lor exterioare pentru schimbul gazos [20].
Măsurătorile schimbului de gaze se bazează pe principiul de bază conform căruia
modificările concentrațiilor de CO2 și H2O sunt determinate atunci când aerul trece printr-o
cameră climatizată care conține o probă de plantă [21].
Sistemul portabil de schimb de gaz și fluorescență permite controlul climatului cu o
gamă largă. Toți parametrii de mediu relevanți pentru fotosinteza plantelor (CO 2, H2O,
temperatură, lumină, ventilație și debit) pot fi controlați automat și pe întregul interval
fiziologic. Modulele opționale de fluorescență extind și mai mult capacitatea sistemului.
Protocoalele experimentale pentru curbele automate de lumină sau curbe automate de CO 2 pot
fi programate cu ușurință.

13
 Aplicațiile tipice ale sistemului sunt evaluarea asimilării CO2, a conductanței H2O sau a
respirației CO2 în funcție de concentrația de CO2, concentrația intercelulară de CO2, lumină,
temperatură, umiditate sau ora zilei [21].
Respirația plantelor este o componentă mare, sensibilă din punct de vedere al mediului,
a bilanțului de carbon al ecosistemului, iar fluxul net de carbon al ecosistemului se va
modifica pe măsură ce echilibrul dintre fotosinteză și respirație se schimbă. Împărțirea
respirației în componentele funcționale ale construcției, întreținerii și absorbției ionilor va
ajuta la estimarea respirației plantelor pentru ecosisteme [22].

3.4. Determinarea compuşilor fenolici totali prin metoda Folin

Ciocâlteu

Produsele pe bază de plante și plante sunt surse naturale de diferite fitochimice, cum ar
fi fenoli, flavonoide, alcaloizi, glicozide, lignine și taninuri [23].
Fenolii și flavonoizii sunt cei mai comuni fitoconstituenți ai diferitelor fructe, legume și
plante medicinale și aromatice, care sunt responsabile pentru activitățile antioxidante. Datorită
potențialelor efecte toxicologice ale antioxidanților sintetici, antioxidanții naturali precum
fenolii și compușii flavonoizi de origine vegetală câștigă popularitate în aceste zile.
Un antioxidant este o substanță care inhibă sau întârzie deteriorarea oxidativă a celulelor
organismelor prin eliminarea radicalilor liberi, cum ar fi peroxidul sau hidroperoxidul,
reducând astfel riscul a bolilor degenerative [23].
Testul spectrofotometric Folin-Ciocalteu este acum larg răspândit pentru cuantificarea
compușilor fenolici totali în diferite alimente de origine vegetală ca fructe, plante medicinale
și condimente, roșii sau în vin [24].
Metoda a fost folosită pentru prima dată pentru miere în 2005. De atunci, majoritatea
cercetătorilor, inclusiv cei români, au folosit aceleași condiții experimentale pentru amestecul
de reacție în ceea ce privește temperatura (20°C) și timpul de așteptare (2 h) până la absorbția
complexului fosfomolibdenic albastru înregistrat [24].
Metoda Folin-Ciocâlteu se bazează pe transferul de electroni în mediu alcalin de la
compuși fenolici la complexe de acid fosfomolibdic/fosfotungstic pentru a forma complexe
albastre care sunt determinate spectroscopic la aproximativ 760 nm [25].

14
 CONCLUZII

Descrierea metodelor și tehnicilor de analiză reprezintă un aspect important într-o

lucrare deoarece au scopul de a face ca cititorul să înțeleagă ce se întâmplă cu diferiți
parametrii ale plantelor care au fost supuse stresului biotic sau abiotic.
Astfel, au fost detaliate metode spectrofotometrice, tehnici de analiză în vederea
caracterizării compușilor organici volatili, a pigmenților fotosintetici, dar și a compușilor
fenolici totali.

16
 BIBLIOGRAFIE

1. Zhang, J., X. Qian, and J. Feng, Review of carbon footprint assessment in textile
industry. Ecofeminism and Climate Change, 2020. 1(1): p. 51-56.
2. Copolovici, L., et al., Antagonist Temperature Variation Affects the Photosynthetic
Parameters and Secondary Metabolites of Ocimum basilicum L. and Salvia officinalis
L. Plants (Basel), 2022. 11(14).
3. Pereira, A., Plant Abiotic Stress Challenges from the Changing Environment. 2016. 7.
4. Ganwen, 列 ., 叶 . Longhua, and 薛 . Li, Effects of Ozone Stress on Major Plant
Physiological Functions. Acta Ecologica Sinica, 2014. 34.
5. Cairns, J., Stress, Environmental, in Encyclopedia of Biodiversity (Second Edition),
S.A. Levin, Editor. 2013, Academic Press: Waltham. p. 39-44.
6. Olayinka Bolaji, U., et al., Stresses in Plants: Biotic and Abiotic, in Current Trends in
Wheat Research, A. Mahmood-ur-Rahman, Editor. 2021, IntechOpen: Rijeka. p. Ch.
7.
7. Gull, A., A. Lone, and N. Wani, Biotic and Abiotic Stresses in Plants. 2019.
8. Cheremisinoff, N.P., Chapter 1 - Introduction to Air Quality, in Handbook of Air
Pollution Prevention and Control, N.P. Cheremisinoff, Editor. 2002, Butterworth-
Heinemann: Woburn. p. 1-52.
9. Moazzem, S., et al., Baseline Scenario of Carbon Footprint of Polyester T-Shirt.
Journal of Fiber Bioengineering and Informatics, 2018. 11(1): p. 1-14.
10. Rana, S., et al., Carbon Footprint of Textile and Clothing Products. 2015. p. 141-166.
11. Greenhouse gas levels hit new high in 2020: WMO. 21.12.2022]; Available from:
https://www.downtoearth.org.in/news/climate-change/greenhouse-gas-levels-hit-new-
high-in-2020-wmo-79896.
12. Topham, S., et al., Carbon Dioxide. 2014. p. 1-43.
13. NUNEZ, C. Carbon dioxide levels are at a record high. Here's what you need to
know. 2019; Available from:
https://www.nationalgeographic.com/environment/article/greenhouse-gases.
14. CO2.earth. 22.12.2022]; Available from: https://www.co2.earth/monthly-co2.

17
15. Lupitu, A., et al., The Influence of Elevated CO(2) on Volatile Emissions,
Photosynthetic Characteristics, and Pigment Content in Brassicaceae Plants Species
and Varieties. Plants (Basel), 2022. 11(7).

17
16. Duque, L., E.H. Poelman, and I. Steffan-Dewenter, Effects of ozone stress on
flowering phenology, plant-pollinator interactions and plant reproductive success.
Environ Pollut, 2021. 272: p. 115953.
17. Wlack, F.G., Determinación de componentes volátiles de aceite de Eucalipto
(Eucalyptus globulus). Universidad Técnica Federico Santa María, Chile, 2021.
18. Blum, F., High performance liquid chromatography. Br J Hosp Med (Lond), 2014.
75(2): p. C18-21.
19. Mlodzinska, E., Survey of plant pigments: Molecular and environmental determinants
of plant colors. Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica, 2009. 51: p. 7-16.
20. CK-12, Respiration in Plants. CBSE Biology Class 10, 2022.
21. GmbH, H.W. Gas Exchange. 2022 30.12.2022]; Available from:
https://www.walz.com/products/gas_exchange/gfs-3000/applications.html.
22. Ryan, M., Effects of Climate Change on Plant Respiration. Ecological Applications,
1991. 1: p. 157-167.
23. Phuyal, N., et al., Total Phenolic, Flavonoid Contents, and Antioxidant Activities of
Fruit, Seed, and Bark Extracts of Zanthoxylum armatum DC. ScientificWorldJournal,
2020. 2020: p. 8780704.
24. Chis, A. and C. Purcarea, Versatility of Folin-Ciocalteu Method Applied on Honey
Determination of Total Phenols. Revista de Chimie -Bucharest- Original Edition-,
2016. 10: p. 1932-1935.
25. Ainsworth, E.A. and K.M. Gillespie, Estimation of total phenolic content and other
oxidation substrates in plant tissues using Folin-Ciocalteu reagent. Nat Protoc, 2007.
2(4): p. 875-7.

17