Efectul acidului ascorbic asupra activitii antioxidante din ceaiul negru i ceaiul verde Rezumat Efectele benefice ale

ceaiului negru i celui verde au fost de regul puse pe seama activitii antioxidante a compuilor lor fenolici. Ceaiul se servete de obicei cu lapte sau lmie. Proteinele din lapte pot intra n componena polifenolilor i s le reduc acestora activitatea antioxidant. Lmia conine vitamina C (acid ascorbic) care are proprieti antioxidante i poate influena pozitiv potenialul antioxidant al ceaiului. Studiul de fa are ca scop s compare n vitro activitatea antioxidant a unor tipuri diferite de ceai care se gsesc n comer, preparate dup metode casnice obinuite i s evalueze posibilele efecte a unor doze diferite( 5-40 mg/100 ml) de vitamina C (acid ascorbic ) asupra capacitii antioxidante totale a ceaiului (TAC). S-a determinat activitatea antioxidant din extractele de ceai cu metoda fotometric, potrivit lui Rice-Evans i Miller (Metode Enzymol 234, 1999, 279), msurnd formarea de cationi liberi ABTS. Valorile activitii antioxidante ale ceaiurilor preparate n acelai mod pt consum au fost asemntoare, de la 13.3 pn la 21.6 mmoli TE (TE= trolox echivaleni) n ceaiul verde i 10.4-17.6 mmoli n ceaiul negru. Experimentul n care s-a adugat n ceaiuri acid ascorbic a artat c TAC capacitatea antioxidant total a crescut liniar ntre 5 i 20 mg acid ascorbic/100 ml soluie de ceai (r=0.984; p<0.01), iar n ceaiul verde extracte de pn la 30 mg acid ascorbic/100 ml de soluie de ceai (r=0.959; p<0.01). Cuvinte cheie: ceai negru, ceai verde; capacitate antioxidant total; acid ascorbic 1. Introducere Ceaiul este butura cea mai consumat n lumea ntreag i este bogat n compui polifenolici cunoscui sub numele de flavonoide din ceai. Ceaiul verde, care este tipul preferat pt consum n Japonia i China , a nceput s fie folosit din ce n ce mai mult i n rile vestice n ultimii ani. Ceaiul verde se prepar din frunze de ceai proaspete i conine n principal catechine. Ceaiul negru este cunoscut n Vest i India i este bogat n thearubigin i theaflavin care sunt dimeri ai catechinelor, formate de oxidarea enzimatic care are loc n timpul fabricrii ceaiului negru. Flavonoidele din ceai (cum sunt catechinele, theaflavinele i thearubiginele) au proprieti antioxidante puternice, de ex. ele pot proteja organismul de deteriorrile produse de stresul oxidativ indus de radicalii liberi. Astfel, consumul de ceai a fost asociat cu reducerea riscului de maladii majore, cum ar fi bolile de inim coronare, atacurile cerebrale i cancerul (Benzie Szeto,1999; ..1997). Potenialul antioxidant considerabil al ceaiului a fost recunoscut de mult vreme i depinde de mai muli factori implicai n prepararea ceaiului. Sa artat c extractele de ceai verde au capacitate antioxidant mai mare dect soluiile de ceai negru iar potenialul antioxidant total se coreleaz puternic cu coninutul total de fenoli din ceaiul de toate tipurile (Benzie.2000). Constatrile experimentelor n vitro susin c i capacitatea antioxidant maxim este asociat cu consumul de ceai verde preparat la temperaturi ridicate (90C) i perioade lungi de infuzare. Ceaiul negru se prepar n mod ideal la temperaturi ntre 70 i 90C, mai de preferat din frunze i nu din plicuri, iar timpii de infuzare nu trebuie s depeasc 1-2 minute pt a se obine potenialul antioxidant maxim (Langley-Evans 2000). Mai mult, datorit capacitii de legare a flavonoidelor a proteinelor din lapte , adaosul de lapte poate scdea potenialul antioxidant ceaiului negru (LangleyEvans 2000; Robinson et al., 1997). S-a observat o cretere a capacitii antioxidante a plasmei la oameni dup consumul de ceai fr lapte (Serafini, Ghiselli, Ferro-Luzzi, 1996). Sa sugerat c, compuii polifenolici din lapte rezist la descompunerea gastric, fcnd polifenolii incapabili s fie absorbii (Serafini et al., 1996). Cu toate acestea, acest lucru nu 1

concord cu constatri mai recente (Leenen et al., 2000,.) care au artat c adaosul de lapte n ceaiul negru nu influeneaz absorbia de catechine din ceai i capacitatea antioxidant din plasma uman. Adaosul de lapte este un obicei n Regatul Unit. n alte ri, ceaiul se servete cu lmie. Lmia conine vitamina C (aproximativ 50 mg acid ascorbic/ 100g) care de asemenea are proprieti antioxidante. Acidul ascorbic n vitro protejeaz unele flavonoide cum sunt antocianinii mpotriva degradrii oxidante care are loc n timpul fabricrii i depozitrii sucurilor 8Kaack, Austed,1998). Aproape 150 mg de acid ascorbic pur poate asigura acelai potenial antioxidant ca o can de ceai verde de trie obinuit (1.5%) (Benzie, Szeto, 1999). Studii efectuate pe voluntari au artat c aportul de acid ascorbic i consumul de ceai verde au efecte inhibitoare asupra formrii endogene de nitrozoderivai- N (Vermeer.1999). Acest lucru subliniaz importana investigrii potenialului antioxidant din ceaiuri cu adaos de vitamina C. Studiul de fa a fost realizat pt a compara activitatea antioxidant a unor diferite tipuri de ceai n vitro care se gsesc n comer, preparate urmnd instruciunile de pe cutii i pt a evalua posibilele efecte ale unor doze diferite (5-40 mg/100 ml soluie de ceai) de vitamina C (acid ascorbic) asupra capacitii antioxidante totale (CAT) din ceaiuri. 2. Materiale i metode 2.1 Substane chimice S-a achiziionat de la Fluka (Buchs, Elveia) i Sigma-Aldrich (Viena, Austria) trolox (6hidroxi-2,5,7,8-tetra metil croman -2- acid carboxil) i respectiv ABTS ( 2,2-azino-bis-3etilbenz-tiazolin-6-acid sulfonic) pt msurarea CAT. Toate celelate substane chimice au fost furnizate de Riedel- de Haen, Seelze, Germania. Testul acid ascorbic-enzime a fost procurat de la Boehringer Mannheim, Darmstadt, Germania. 2.2 Probele de ceai S-au cumprat apte tipuri de ceai verde i ase de ceai negru disponibile n comer (frunze i plicuri). Toate extractele de ceai au fost preparate prin turnarea a 200 ml de ap deionizat la 90C ntr-un recipient de sticl cu plicuri de ceai (1.75-2g de frunze) sau 2 g de frunze uscate de ceai urmnd instruciunile de pe ambalaj, lsnd timp de 2-3 minute. Volumul de 200 ml a fost ales s reprezinte cantitatea obinuit consumat de butorii de ceai. S-a luat o alicot din fiecare extract de ceai pt msurarea imediat a activitii antioxidante. 2.2 Determinarea capacitii antioxidante totale S-a determinat capacitatea antioxidant a extractelor de ceai proaspt dup ce s-au rcit la 20 C, msurnd formarea de cationi radicali ABTS, dup metoda fotometric a lui Rice-Evans i Miller (1994). n prezena H2O2 i metmioglobinei, ABTS-ul este oxidat la cationi ABTS. n aceast reacie, metmioglobina acioneaz ca peroxidaz. Cationii radicali formai dureaz destul de mult i arat o absorbie maxim la 734nm. S-au diluat toate probele de ceai verde i negru individual nainte de analiz. S-a determinat capacitatea antioxidant total a probelor folosind o curb etalon cu trolox. Rezultatele au fost exprimate n echivaleni trolox (mmoli TE) ca medie SD a trei msurtori consecutive ale aceleai probe. Variaia intra-probe a fost de 5.3%. 2.4 Experimentul cu vitamina C 2.4.1 Efectul unor doze diferite de acid ascorbic asupra activitii antioxidante Pt a investiga efectul unor doze diferite de vitamina C (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mg acid ascorbic/ 100 ml extract de ceai ) asupra potenialului antioxidant, s-au analizat dou tipuri de ceai cu potenial antioxidant asemntor, plicuri de ceai verde Inter Spar i ceai negru Ceylon. 2

S-au preparat dou extracte de ceai din fiecare tip, adugnd 200 ml de ap la 90C i infuznd timp de 2-3 minute. La sfritul perioadei de infuzare, s-a luat o alicot de 100 ml i s-a amestecat cu una din dozele de acid ascorbic. S-au fcut msurtori ale coninutului de acid ascorbic i a activitii antioxidante n duplicate, dup ce s-a lsat la rcit la 20C. S-au folosit 8 nivele diferite de adaos de vitamina C plus proba standard (fr vitamina C), fiind 9 de toate, fiecare n duplicat, obinndu-se 18 probe. S-a analizat linearitatea cu testul lui Pearson i a fost acceptat ca fiind statistic semnificativ la p<0.05. Nu s-a depistat acid ascorbic (limita de detecie a fost de 0.3 mg acid ascorbic /l) n nici o prob analizat nainte de adaosul cu aceast vitamin. 3. Rezultate 3.1 Activitatea antioxidant a ceaiurilor verde i negru disponibile n comer Valorile activitii antioxidante att din ceaiul verde ct i din cel negru, preparate dup instruciunile de pe ambalaj, s-au nscris n intervale asemntoare, 13.3-21.6 mmoli TE n ceaiul verde i 10.4-17.6 mmoli TE n ceaiul negru i au prezentat doar SD mici (vezi Tabelul 1). Potenialul antioxidant maxim a fost msurat n ceaiul verde Java i cel mai sczut n frunzele de ceai negru Ceylon. Ceaiul negru Drajeeling (Queen s Blend), ceaiul verde Assam Bherjan i ceaiul verde Green Blend (Sencha +Green Darjeeling) au avut aproape aceeai capacitate antioxidant a doua cea mai mare dintre probele de ceai investigate. Acest lucru indic faptul c nu exist diferene majore ntre tipurile de ceai verde i ceai negru. Comparnd frunzele de ceai negru cu cele la plic, nu s-a observat vreo diferen semnificativ ntre acelai tip de ceai (Ceylon) (frunze de ceai, 10.4; ceai la plic 12.2 mmoli TE). 3.2 Experimentul cu vitamina C 3.2.1 Efectul unor doze diferite de acid ascorbic asupra activitii antioxidante din ceaiul negru n experimentul n care s-a adugata acid ascorbic n extractele de ceai negru (Ceai negru Ceylon la plic), activitatea antioxidant a crescut liniar n probele coninnd ntre 5 i 20 mg acid ascorbic/100 ml soluie de ceai (r=0.984; p=0.01). La o concentraie de 20 mg acid ascorbic/100 ml, extractul de ceai negru a avut o capacitate antioxidant total mai mare cu 20% (15.2mmoliTE) dect extractul fr vitamina C (12.6mmoli TE). O doz mai mare ntre 25 i 40 mg acid ascorbic/100 ml soluie nu a mbuntit capacitatea antioxidant a ceaiului. Valoarea CAT a sczut la 25 mg/100 ml soluie la 13.6 m MTE i a rmas aproape constant pn la sfritul experimentului. 3.2.2 Efectul unor doze diferite de acid ascorbic asupra activitii antioxidante din ceaiul verde La ceaiul verde (Inter Spa ceai verde la plic), adaosul de pn la 30 mg acid ascorbic / 100 ml extract a avut ca rezultat o cretere liniar a capacitii antioxidante de pn la 20.8mmoli TE (r=0.959; p<0.01) i a rmas neschimbat n ciuda adiionrii cu vitamina C. La o concentraie de 30 mg acid ascorbic/100 ml, extractul de ceai verde a avut o valoare a CAT cu aproximativ 50% mai mare dect extractul fr vitamina C (14.3 mmoli TE) (Figura 2). Tabelul 1 CAT (medieSD ) a ceaiului negru i ceaiului verde disponibile n comer (m moli TE) Tipuri de ceai negru la plic Darjeeling Assam special 3

Inter Spa blend Ceylon Ceai negru cu concentrat de lmie Ceai negru frunze Ceylon Ceai verde la plic Java Green blend Ceai verde cu lmie Ceai verde Inter spa Ceai verde cu gust de lmie Ceai verde frunze Assam Bherjan Yunnan Figura 1. Efectul unor doze diferite de acid ascorbic asupra activitii antioxidante din ceaiul negru Figura 2. Efectul unor doze diferite de acid ascorbic asupra activitii antioxidante din ceaiul verde 4. Discuii La extractele de ceai verde i ceai negru investigate, valorile activitii antioxidante au fost la nivele comparabile, fapt ce se coreleaz cu rezultatele obinute de Henn i Stehle (1998) i de Licht, Bohm i Bitsch (1997). Variaiile importante semnalate anterior de Benzie, Szeto, Robinson et al., 1997, privind activitatea antioxidant a unor ceaiuri diferite nu fost observate n studiul de fa. Probabil c varietile de ceai disponibile pe piaa australian sunt diferite de cele din alte ri, de ex n Anglia. Totui, unele dintre ceaiurile investigate n studiul nostru , de ex ceaiul negru ASssam (14.m moli TE) i Ceylon (10.4-12.2 m moli TE) au avut capaciti antioxidante asemntoare celor demonstrate de Robinson et al., 1997, ceaiurile negre Assam i Ceylon 10.4 i 12.4 m moli TE, indiferent de deosebirile privind modul de preparare. Mai mult, nu am observat nici o diferen important dpdv statistic ntre ceaiurile negre frunze i la plic de acelai tip (Ceylon Negru la plic, 12.2 m moli TE; frunze, 10.4 mmoli TE). Langley- Evans (2000) au raportat c ceaiul preparat folosind plicuri are o capacitatea antioxidant semnificativ mai mic dect ceaiul negru frunze atunci cnd temperatura apei de infuzare a fost ntre 20 i 70 C, dar la o temperatur de infuzare de 90C , ambele au artat valori asemntoare ale CAT. Majoritatea consumatorilor de ceai prepar ceaiul n mod obinuit adugnd ap clocotit ntr-un vas rece, ceea ce produce o temperatur de aproximativ 90C. Noi am preparat ceaiul la 90C i a concordat cu constatrile fcute de Langley-Evans (2000). Robinson et al., (1997) au raportat c tria ceaiului, precizat de productor i relaionat cu gustul i aroma, este asociat cu activitatea sa antioxidant. Cea mai mare diferen (60%) privind activitatea antioxidant ntre ceaiurile negre investigate, ntre Darjeeling Queen s Blend la plic (17.6 m moli TE) i ceai frunze Ceylon (10.4 m moli TE ) ar putea indica o legtur ntre tria ceaiului i activitatea antioxidant a acestuia. Dintre ceaiurile verzi, valorile CAT a unor caeiuri la plic i extracte de ceai frunze au fost aproximativ identice. Constatrile de fa nu concord cu studiul efectuat de Robinson et al., i anume c nu exist vreo legtur ntre preul de pia al ceaiului i activitatea sa 4

antioxidant din soluie. n studiul nostru, cele mai ieftine tipuri de ceai ( de ex Ceai verde Inter Spa, Ceai verde cu gust de lmie, Ceai negru Ceylon) au avut capacitate antioxidant mai mic dect tipurile mai scumpe (ex. Ceai verde Java, Green Blend, Ceai negru Darjeeling). Multe studii in vitro iau n considerare efectele timpului de infuzare, temperatura de infuzare i adaosul de lapte asupra capacitii antioxidante a ceaiului. n experimentul in vitro prezentat n studiul de fa, am ncercat s evalum posibilele efecte a unor doze diferite de acid ascorbic asupra activitii antioxidante totale din ceai i am demonstrat c exist o cretere a potenialului antioxidant n ambele tipuri de ceai, negru i verde, prin adaosul de acid ascorbic. Acest lucru arat c prepararea ceaiului cu lmie sau suc de lmie care conine acid ascorbic poate mbunti potenialul antioxidant al ceaiului. Tipurile de ceai negru i ceai verde difer semnificativ n ceea ce privete compoziia lor. Ceaiul verde asigur aproximativ de dou ori mai multe catechine din cantitatea total gsit n ceaiul negru. Ceaiul negru conine proprii mai mari de ali polifenoli cum sunt thaeflavinele i thearubiginele produse de procesele oxidative folosite la fabricarae ceaiului (Van hetHof et al., 1997). Aceste diferene n compoziia ceaiurilor pot fi o explicaie pt rezultatele experimentului nostru cu acid ascorbic, n care activitatea antioxidant a extractelor de ceai negru a crescut cu pn la 20 mg acid ascorbic/100 ml soluie de ceai iar cea din ceaiul verde cu 30 mg acid ascorbic/100 ml de extract. 5. Concluzii Urmnd instruciunile de pe ambalaj privind la prepararea , modul casnic de preparare poate ajuta antioxidanii s protejeze organismul uman de boli degenerative. Serafini et al., (1996, 2000) a raportat c, consumul de ceai produce o cretere a capacitii antioxidante totale a plasmei . Adaosul de acid ascorbic n extractul de ceai poate mbunti potenialul antioxidant in vitro. Sunt necesare studii ulterioare pt a investiga dac consumul unor astfel de preparate , de ex ceai cu lmie sau ceai cu suc de lmie pot influena capacitatea antioxidant a plasmei.