Spectromicroscopie UV-VIS

II.5.
SPECTROMICROSCOPIA
MOLECULAR N DOMENIUL
VIZIBIL

II.5.1. Definiie i clasificarea

Spectromicroscopia este o tehnic combinat care valorific concomitent
informaiile spectrale i microscopice
din radiaia electromagnetic ce
trece printr-o proba de analizat transparent sau care se reflect de pe
materie opac. Avantajele spectromicroscopiei faa de analiza
spectrometric i microscopic, practicate fiecare separat, snt legate de
faptul ca odat cu examinarea imaginii microscopice a unei zone se
poate efectua concomitent i analiza spectrometric a acelei zone
determinndu-se compoziia chimic calitativ i cantitativ a acesteia. De
asemenea, spectromicroscopia
face posibil urmrirea unor cinetici
chimice i biochimice din punct de vedere al compoziiei chimice a
reactanilor i produilor de reacie n strns corelare cu evoluia imaginii
microscopice
a speciilor participante. Tot ca vantaj trebuie privit i

300

Spectromicroscopie UV-VIS
productivitatea dubla fa de cea realizat la analiza spectrometric i
examinarea microscopic practicate fiecare separat.
Este evident c
analiza combinat spectromicroscopic n cazul lichidelor se poate face
numai in situaiile n care specia urmrit se gsete sub form de
particule microscopice distribuite
n lichid. La corpuri solide sau
pulverulente examinarea concomitent se efectueaz fr probleme
deosebite pe principiul analizei radiaiei reflectate
La ora actual,
exist pe pia
urmtoarele
tipuri de
spectromicroscoape:
- Spectromicroscoape n domeniul spectral vizibil
- Spectromicroscoape n domeniul spectral infrarou
- Spectromicroscoape Raman
- Spectromicroscoape Rntgen
- Spectromicroscoape de rezonan magnetic

II.5.2. Spectromicroscoape de laborator pentru

domeniul vizibil
Aceste echipamente au la baz constatarea c o radiaie
electromagnetic
n domeniul vizibil
care a traversat un mediu
transparent sau s-a reflectat de pe un material opac conine informaii
spectrale i imagistice care pot fi analizate fiecare separat dup ce
radiaia luminoas este scindat cu un sistem optic n dou canale optice
independente. Radiaia luminoas din fiecare din cele dou canale optice
formate are acelai coninut spectral i imagistic ca i acela din canalul
optic nedivizat, n schimb intensitatea radiaiei luminoas n canalele nou
formate reprezint jumtate din intensitatea radiaiei luminoase din
canalul optic nedivizat ceea ce se rsfrnge asupra sensibilitii
msurtorilor, cu efect negativ asupra limitei de detecie la analiza
spectral. Prin plasarea unui spectrometru pe unul din canalele rezultate
i a unui sistem video de analiz optoelectronic de imagine pe cellalt

301

Spectromicroscopie UV-VIS
canal optic este posibil obinerea concomitent att a spectrului ct i a
structurii microscopice a materiei analizate situat n punctul focal al
microscopului. n figura II.5.1 este prezentat schema de principiu privind
scindarea unei radiaii luminose n dou radiaii independente ce pot fi
valorificate separat prin analiza spectral,
respectiv prin examinare
microscopic, cea din urm putnd fi efectuat vizual sau cu ajutorul unui
sistem optoelectronic de analiza de imagine echipat cu o camera video
sau aparat foto digital performant.

Fig.II.5.1. Scindarea unei radiaii luminoase cu un sistem optic n dou radiaii

independente ce pot fi valorificate concomitent prin analiza spectral i examinare
microscopic optoelectronic de imagine. 1-sistem optic de divizare, 2-spectrometru, 3spectrogram, 4-camera video, 5-imagine microscopic, r1-radiaia luminoas iniial, r2,r2
radiaiile luminoase scindate.

Cele mai multe spectromicroscoape de tip modular snt formate dintr-un

microscop pe care, prin adaptari minimale, se monteaz un spectrometru
miniatural cu detector Diode-Array, informaiile optice de natur imagistic
i spectral fiind prelucrate prin intermediul unui calculator i a unui soft
specializat. n afar de camera video i spectrometru, un spectromicroscop
trebuie s dispun de un sistem optic de divizare a radiaiei luminoase ce
conine informaia spectral i cea microscopic. n figura II.5.2 snt redate
diferitele modalitile de divizare folosite
la ora actual n construcia
spectromicroscoapelor. Din variantele prezentate, cele mai utilizate soluii

302

Spectromicroscopie UV-VIS
snt cele cu prisma optic, figura II.5.2.a
II.5.2b.

sau cu fibr optic, figura

Fig.II.5.2.
Modaliti tehnice de scindare a radiaiei luminoase pentru analiza
spectromicroscopic n domeniul vizibil folosind diferite sisteme optice: a-cu prisma optic,
b-cu fibr optic, c-cu oglind semitransparent, d-cu un orificiu circular plasat pe o oglind
cu reflexie total. 1-spectrometru miniatural cu detecor Diode-Array, 2-camera video, 3prisma optic; 4-divizor pentru fibre optice, 5-oglind semitransparent; 6- oglind cu refexie
total, cu orificiu circular central, 7-colimator optic, r1-fibr optic nedivizat, r2,r3-fibre
optice divizate

Un spectromicroscop se poate prezenta sub forma unui aparat unitar care

realizeaz ambele funcii concomitent sau poate fi realizat de utilizator n
cteva minute folosind o structur modular format
dintr-un microscop
ce dispune de analiz optoelectronic de imagine, un spectrometru portabil
cu reea de difracie fix i detector Diode-Array i unul din sistemele de
scindare
a radiaiei luminose reprezentate n figura II.5.2. Astzi
majoritatea microscoapelor biologice i metalografice dispun de analiz
optoelectronic de imagine care presupune un sistem trinocular cu prism
de divizare, fig.II.5.2.a. Un canal optic este destinat vizualizrii imaginii
prin dou oculare optice, iar unul din canale destinat montrii unei camere
video sau a unui aparat foto digital. Una din cele mai comode i totodata

303

Spectromicroscopie UV-VIS
avantajoase soluii pentru obinerea i a unui canal spectrometric, pe
lng canalul videomicroscopic specific studiului microscopic, const n
nlocuirea unui ocular din sistemul binocular cu un dispozitiv cu fibr
optic la fel cu cel din Fig.II.5.12 i Fig. II.5.13. Pentru scindarea radiaiei
luminose sn folosite n practic i soluiile prezentate n Fig.II.5.2.b,c,d,

II.5.2.1 Spectromicroscoape destinate analizei soluiilor

Acest tip de spectromicroscoape se bazeaz pe analiza radiaiei transmise.
n figura II.5.3. este prezentat schema de principiu a unui asemenea
spectromicroscop

304

Spectromicroscopie UV-VIS
Fig. II.5.3. Schema de principiu a unui spectromicroscop modular cu transmisie destinat
analizei soluiilor transparente. 1-sursa de radiaie, 2,3-oglinzi cu reflectie total, 4,8colimatori optici, 5-masa microscopului, 6-prisma optic, 7-camera video, 9-reea de
difracie, 10-detector Diode-Array, 11-amplificator electronic, 14-calculator electronic, 15imprimant, MC-modul cuve, C1,C2-cuve cu soluie de analizat M-microscop, Sspectrometru, T-tehnica de calcul

modular destinat analizei soluiilor transparente, a unor structuri biologice

transparente sau a unor materiale polimerice transparente. n acest scop
este folosit un microscop optic biologic (M), ce dispune de cap trinocular
cu prisma 6 i analiz optoelectronic de imagine printr-o camera video 7,
pe care se monteaz prin operaii simple un spectrometru (S) miniatural,
echipat cu un detector DiodeArray 10. Prin scindarea informaiei optice n
prisma 6 se obin
dou canale optice independente, pe unul realiznduse analiza spectrometric cu spectrometrul (S) i calculatorul 14 electronic,
iar pe celalalt structura microscopic a probei cu ajutorul structurii
microscopice, a camerei video 7 i a calculatorul 14 electronic

II.5.2.2. Microscoape fotometrice destinate analizei soluiilor

Microscoapele fotometrice snt structuri mixte specializate pe analiza
unui numr limitat de specii spectrometrice dintr-o soluie, din materiale
solide sau pulverulente. Preul de cost al acestor structuri de analiz este
mai mic dect cel al spectromicroscoapelor. Un microscop fotometric
folosete in locul unui spectrometru cu reea de difracie fix i detector
Diode- Aray folosete un simplu detector tip fotodiod.

305

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.4. Schema de principiu a unui microscop fotometric modular cu transmisie

destinat analizei fotometrice cantitative a unei singure specii chimice sau biologice
concomitent cu urmrirea microscopic. 1-sursa de radiaie, 3-oglinda cu reflexie total,
4,8-colimatori optici, 5-masa microscopului, 6-prisma optic , 7-camera video, 11amplificator electronic, 12-filtru optic, 13-fotocelul, 14-calculator electronic, 15-imprimant,
MC-modul cuve, C1,C2- cuve cu soluie de analizat, M-microscop, F-fotometru, T-tehnica de
calcul.

n figura II.5.4. este redat schema optic a unei aplicaii fotometrice

destinat analizei cantitative a unei singure specii chimice sau biologice
concomitent cu urmrirea microscopic. Se observ c n aceast
structur de analiz spectrofotometrul miniatural S din Fig.II.5.3. este
nlocuit cu o fotocelul 13.

306

Spectromicroscopie UV-VIS

II.5.2.3.

Spectromicroscoape
netransparente

destinate

analizei

materiei

Spectromicroscopia poate fi
practicat i pentru materie
netransparent de natur solid sau pulverulent. Din punct de vedere a
diversitii problematicii de rezolvat aceasta situaie este chiar dominant
fa de analiza lichidelor. n figura II.5.5
este prezentat schema de
principiu a unui spectromicroscop de reflexie la care radiaia luminoas
incident cade pe prob, preia de pe suprafaa acesteia informaii de
imagistic i informaii spectrale i este

Fig.II.5.5 Schema de principiu a unui spectromicroscop modular cu reflexie destinat

analizei materiei netransparente. 1-surs de radiaie, 2,9-colimatori optici, 3-oglind
semitransparent, proba opac de analizat, 5-masa microscopului, 6-prism optic, 7camer video, 8-oglind cu reflexie total, 10-retea de difracie, 11-detector Diode-Array, 12-

307

Spectromicroscopie UV-VIS
amplificator electronic, 13-calculator
spectrometru, T-tehnica de calcul.

electronic,

14-imprimant,

M-microscop,

S-

reflectat ctre un sistem de microscopie optic unde radiaia este

scindat n dou canale optice pe unul realizndu-se urmrirea i
nregistrarea imaginii microscopice, iar pe cellalt canal fiind efectuat
analiza spectrometric a materiei solide analizate. Schema de principiu
este foarte asemntoare cu schema de
principiu pentru
spectromicroscoapele optice cu transmisie,
diferenele constnd n
sistemul de iluminare i n lipsa cuvelor cu soluie la spectromicroscopul cu
reflexie, n locul acestora fiind folosite chiar materialele solide de cercetat
sau n cazul cercetrii materialelor pulverulente, cuve netransparente i
nereflectorizante n care este depus materialul urmrit.

II.5.2.4. Spectromicroscoape de fluorescen

Att spectromicroscoapele cu transmisie ct i cele cu reflexie pot fi
folosite
i pentru studiul fotometric de fluorescen concomitent cu
examinarea microscopic a probei. Trebuie specificat c materialele ce
prezint fluorescen se pot gsi n stare lichid, solid, pulverulent sau
gazoas, ca atare, n funcie de starea de agregare trebuie aleas o
structur specific de analiz spectromicroscopic. La studiul n

308

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig. II.5.6. Schema de principiu a unui spectromicroscop modular cu reflexie destinat

analizei materiei fluorescente pulverulente sau solide: 1-surs de radiaie monocromatic,
2,9-colimatori optici, 3-filtru dicroic, 4-proba fluorescent de analizat, 5- filtru optic cu
lungimea de und specific speciei de analizat, 6-prism optic, 7-camer video, 8-oglind
cu reflexie total, 10-reea de difracie, 11-detector Diode-Array,12-amplificator electronic,13calculator electronic, 14-imprimant, M-microscop, S-spectrometru, T-tehnic de calcul.

fluorescen sursa de radiaie policromatic este nlocuit de o surs de

excitaie monocromatic de tip led sau diod laser, iar pentru analiza de
concentraie se seteaz prin programul de calcul lungimea de und
corespunztoare radiaiei
de fluorescen. n traseul luminos spre
dispozitivul optic de scindare se intercaleaz un filtru optic specific speciei
chimice sau biologice analizate, scopul acestui filtru este cel de separare a
radiaiei specifice utile pe care o las s treac, de alte lungimi de und
nespecifice. n figura II.5.6. este prezentat schema de principiu a unui
spectromicroscop
modular
cu reflexie destinat analizei materiei
fluorescente pulverulente sau solide. Afar de prezena filtrului dicroic 3, a
filtrului
specific 5 i a soft-ului
specific, structura de analiz

309

Spectromicroscopie UV-VIS
spectromicroscopic a speciilor fluorescente solide sau pulverulente este
identic cu structura de analiz a materialelor netransparente prezentat n
capitolul precedent, vezi i fig.II.5.5. Pentru
analiza
materialelor
fluorescente lichide sau solide transparente structura de analiza din
fig.II.5.6 difer doar prin modul de iradiere de jos n sus astfel nct,
radiaia monocromatic s treac prin proba analizat.

II.5.2.5. Cuve i celule de curgere pentru spectromicroscoape

Att spectromicroscoapele cu transmisie ct i cele cu reflexie pot fi
folosite i pentru studiul spectrofotometric de fuorescen concomitent cu
examinarea microscopic a probei. n acest scop, sursa de radiaie
policromatic clasic este nlocuit de o surs de excitaie monocromatic
de tip LED sau diod laser, iar pentru analiza de concentraie se seteaz
prin programul de calcul lungimea de und a radiaiei de fluorescen
specific pentru specia de analizat.
La analiza probelor lichide pe structuri spectromicroscopice trebuie avut n
vedere faptul c iradierea cuvelor cu soluie se face prin peretele de jos al
cuvei i nu prin peretele lateral aa cum este cazul la spectrofotometrele
sau fotometrele clasice. Aa cum este cunoscut, legea Lambert Beer:

A = a b c

(II.5.1)

unde : A - absorbana optic

A - coeficient molar de absorbie
B - grosimea de strat a lichidului analizat
C - concentraia speciei chimice analizate
reclam o grosime de strat absolut constant de la o prob la alta, lucru
care este uor de realizat la cuvele clasice cu perei plani paraleli i
iluminare orizontal i greu de realizat pentru cuvele cu iluminare vertical

310

Spectromicroscopie UV-VIS
aezate pe masa microscopului. La aceste cuve grosimea de strat este
influenat de precizia de dozare volumetric a soluiei
din cauza
impreciziei dozrii volumetrice a lichidului. Din acest motiv s-au dezvoltat
module de cuve speciale de tipul celor din figura II.5.7 i figura II.5.8
destinate aplicaiilor spectromicroscopice de transmisie. Aceste module
conin cel putin doua cuve C1,C2, (fig.II.5.7 ), corpul lor

Fig.II.5.7. Modul cu dou cuve folosit la spectromicroscoapele modulare cu transmisie,

destinat analizei soluiilor transparente: 16-corpul modulului, 17-lamela subire din sticl
pentru ndeprtarea excesului de solutie, C1-cuva pentru solvent, C2-cuva pentru soluia de
analizat, c1-canal pentru preluarea excesului de solvent i de soluie de analizat, b-grosimea
de strat lichid

16 fiind confecionat din metacrilat de metil transparent prin injecie n

matri. Dup umplerea n exces a celor dou cuve cu solvent, respectiv
cu soluie de analizat, astfel

311

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.8 Modul cu opt cuve, folosit la spectromicroscoapele modulare cu transmisie,

destinat determinrii grosimii optime de strat i a concentraiei limit de liniaritate la analiza
soluiilor transparente, 19-lamel subire din sticl pentru ndeprtarea excesului de soluie,
C1.....C8-cuve pentru soluie de analizat, c3-canal pentru preluarea excesului de solvent i
de soluie de analizat, b-grosimea de strat lichid, 20-corpul modulului

nct lichidul s formeze un menisc convex la limita superioar a cuvelor,

se mpinge lamela 17, din sticla optic, tangent cu suprafaa peretelui
superior astfel ca excesul de solvent i de lichid de analizat s fie refulat n
canalul colector c1, n felul acesta obinndu-se o grosime strat b bine
definit. Iradierea volumului de lichid din cele dou cuve n vederea
fotometrrii se face pe rnd fr ca lamela 17 din sticl optic s fie
ndeprtat, radiaia trecnd i prin aceasta. Pentru mrirea productivitii
la analize s-au construit module cu pn la opt cuve nseriate toate avnd
aceeai grosime de strat b. De asemenea, s-a dezvoltat un modul special
cu opt grosimi diferite de strat, modul prezentat n figura 6. Acest modul
folosete determinrii rapide a limitei de liniaritate a legii Lambert Beer din
punct de vedere a concentraiei i a grosimii de strat. n acest scop cuvele
C1.....C8 se umplu n exces uor cu soluie preparat cu substan pur,
de o anumit concentraie a speciei chimice urmrite, se ndeprteaz
excesul cu lamela 19 i se fotometreaz pe rnd cuvele cu soluie

312

Spectromicroscopie UV-VIS
msurnd absorbana optic A a fiecrei cuve, dup care se vars soluia
din cuvele modulului, se spal cu ap bidistilat i se umplu cuvele din

Fig.II.5.9. Familia de curbe obinut cu ajutorul spectromicroscopului de transmisie i a

unui modulul de cuve n trepte n scopul determinrii limitei de liniaritate a legii Lambert
Beer din punct de vedere a concentraiei i a grosimii de strat.

nou cu soluie de alta concentraie cunoscut a aceleiai specii. n final se

reprezint, manual sau electronic, valorile de absorbanta (A) n funcie de
concentraia (c) i de grosimea de strat (b) rezultnd o familie de curbe de
natura celei din figura II.5.9. Prin stabilirea punctului limitei de liniaritate
pentru fiecare curb i unirea acestor puncte se obine o linie care
stabilete limita de liniaritate pentru concentraie i grosimea de strat
pentru specia chimic analizat. Odat stabilite aceste limite, operatorul
poate lua decizia optim n alegerea dimensiunii cuvei sau a concentraiei
care s permit determinrile n limitele liniaritii legii Lambert-Beer.

313

Spectromicroscopie UV-VIS
Pentru studiul spectromicroscopic al soluiilor tulburi n condiii de
laborator poate fi folosit soluia prezentat n figura 10, la care transmisia
informaiilor se realizeaz cu un sistem de fibr optic 12, 26, pentru probele
25 fiind folosite nite cuve 24 cu grosimea stratului de soluie studiat de 1
mm.

Fig.II.5.10. Schema de principiu a spectromicroscopului folosit la studiul spectrofotometric

al soluiilor tulburi n cuve lamelare subiri deschise. 1-sursa de radiaie, 7-spectrometru cu
reea de difracie fix i detector Diode - Array, 8-spectrogram, 9-camer video, 10-imagine
microscopic, 12-fibr optic 13-lentil colimatoare, 24-cuv lamelar din sticl, 25-soluie de
analizat, 26-fibr optic, 27-lentil de focalizare.

Pentru studiul spectromicroscopic continuu al soluiilor tulburi, in situ, este

recomandat spectromicroscopul prezentat n figura II.5.11.

314

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.11. Schema de principiu a spectromicroscopului folosit n studiul spectrofotometric

al soluiilor tulburi n cuve lamelare subiri nchise, cuplate n by-pass ntr-un proces
tehnologic, pentru analiz continu in-situ, n regim on-line, 1-surs de radiaie, 7spectrometru cu reea de difracie fix i detector Diode-Array, 8-spectrogram, 9-camer
video, 10-imagine microscopic, 12-fibr optic, 13-lentil colimatoare, 26-fibr optic, 27lentil de focalizare, 28-soluie de analizat n curgere provenit din procesul tehnologic, 29celul de curgere capilar din sticl, 30-pomp peristaltic, 31-reactor chimic, biochimic sau
rezervor ce conine materia lichid de analizat

Soluia de analizat provenit dintr-un reactor chimic, reactor biochimic sau

rezervor 31 este trimis de ctre o pomp peristaltic 30 n regim de bypass printr-o celul de curgere capilar 29 din sticl, unde este traversat
de un fascicul luminos policromatic provenind de la o surs 1 de radiaie
policromatic ce preia n mod continuu din proba 28 de analizat structura
microscopic a particulelor n suspensie precum i compoziia spectral a
mediului lichid prin intermediul unei lentile de focalizare 27, cuplat la o fibr
optic 26 care se scindeaz ulterior n dou fibre optice. De la una din
fibrele optice scindate este decodat informaia spectrometric cu ajutorul
unui spectrometru cu reea de difracie fix i detector DiodeArray, iar de pe
cealalt este decodat informaia de imagistic spectral cu ajutorului unui
detector CCD, al unei camere video sau a unui aparat foto digital, rezultatul

315

Spectromicroscopie UV-VIS
fiind n primul caz o spectrogram 8 a mediului lichid purttor, iar n cel de-al
doilea caz o imagine microscopic 10 a particulelor n suspensie. Acest tip de
studiu spectromicroscopic permite studii cinetice continue n funcie de
diveri parametri de proces.

II.5.2.6. Dispozitive optice folosite la spectromicroscoapele de

laborator
Dispozitivul optic din figura II.5.12 se refer la o structur optomecanic destinat adaptrii unui sistem spectrometric modular portabil,
echipat cu fibr optic, unui microscop clasic cu sistem optoelectronic de
achiziie de imagine pentru a putea realiza examinri microscopice
concomitent cu analize spectrometrice, figura II.5.13. n acest scop
este folosit un echipament ce poate fi montat pe tubul (2) optic al oricrui
microscop sau stereomicroscop n locul unui ocular al acestuia.
Fig.II.5.12. Vedere cu seciune a dispozitivului de
adaptare spectrometric. 1-tub de adaptare la canalul
optic, 2-tub optic aparinnd unui microscop sau
stereomicroscop binocular sau trinocular, 3- corpul
dispozitivului optic de adaptare, 4-tij, 5-fibr optic,
6-nveli polimeric, 7-lentil optic, 8- piuli de
blocare;

Dispozitivul optic este format dintrun tub de adaptare 1 n care se gsete

nfiletat un alt corp 3, iar n acesta se
gsete nfiletat la rndul ei o tija 4 n
centrul creia se gsete o fibr 5 optic
protejat de un nveli 6 polimeric,
dispozitivul mai conine o lentil 7 optic
i o piuli 8 de blocare, iar sistemul
spectrometric de tip miniatural compact

316

Spectromicroscopie UV-VIS
este

format dintr-o lentil 9 optic condensoare, o reea 10 de

Fig. II.5.13. Schema de principiu a canalului spectrometric realizat cu dispozitivul optic de

adaptare: 1-tub de adaptare la canalul optic, 2-tub optic aparinnd unui microscop sau
stereomicroscop binocular sau trinocular, 3-corpul dispozitivului optic de adaptare, 6-nveli
polimeric, 7-lentil optic, 9-lentil optic condensoare, 10-reea de difracie fix,11-oglind
optic plan de reflexie, 12-detector de tip Diode-Array, 13-interfa de tip USB, 14-cablu
electric, 15-calculator electronic

difracie fix, o oglind 11 optic plan de reflexie, un detector 12 de tip

Diode-Array i o interfa 13 de tip USB conectat printr-un cablu 14
electric la un calculator 15 electronic.

II.5.3. Spectromicroscoape portabile

Spectromicroscoapele portabile au aplicaii deosebite pentru
analiaza in situ a materiei solide, dar pot fi folosite n unele situaii i
pentru analiza soluiilor colorate, mai ales a celor concentrate. Aplicaiile
se ntind de la controlul calitii alimentelor solide la
forensic, la

317

Spectromicroscopie UV-VIS
atestarea autenticitii operelor de art, la controlul drogurilor, la analiza
mineralogic etc. n figura II.5.14 este prezentat schema de principiu, n
figura II.5.15 o vedere a sondei aparatului portabil, n figura II.5.16a, o
vedere a aplicaiei privind folosirea
spectromicroscopului portabil la
spectrofotometrarea
pe vertical a soluiilor, iar n figura II.5.16b, o
vedere a aplicaiei privind folosirea
spectromicroscopului portabil la
spectrofotometrarea i examinarea microscopic a stratului limit
pe
vertical la recipiente, reactoare chimice sau biochimice.
Spectromicroscopul portabil n structura sa de baz se compune
dintr-o sonda S, o parte E electronic i un calculator C portabil ce
dispune de soft specific. Sonda E este format dintr-un corp 2 cilindric n
interiorul cruia o fibr 3 optic se divide n dousprezece fibre 41-12 optice
dispuse radial n jurul unei alte fibre 5 optice centrale, un grup 6 de
lentile optice de focalizare, prevzute cu o armtur 7 filetat, o piuli 8 de
blocare i un divizor 9 optic ce mparte radiaia n dou fibre optice 10 i
11. Partea E electronic este format la rndul ei dintr-o surs 12 de
radiaie policromatic, un spectrometru 13 miniatural cu reea de difracie
fix i detector Diode-Array i o camera 14 video miniatural. Acest
aparat dispune i de posibilitatea de lucru pe vertical
folosit la
inspectarea microscopic a depunerilor sau a coroziunii pereilor
recipientelor adnci umplute cu lichid precum i analizei spectrometrice a
compoziiei chimice a lichidului din imediata vecinatate a peretelui. n
aceast execuie corpul 2 al aparatului este fixat perpendicular pe o tij
telescopic ce poate asigura lungimi de pn la ordinul metrilor.

318

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.14. Schema de principiu a unui spectromicroscop portabil. 1-materialul cercetat, 2corpul cilindric al sondei, 3-fibr optic de iluminare, 41-12-fibre optice de iluminare obinute
prin divizarea fibrei optice (3), 5-fibr optic central, 6-lentile de focalizare, 7-armatur
filetat, 8-piuli de blocare, 9-divizor optic, 10,11-fibre optice, 12-surs de radiaie
luminoas, 13-spectrometru miniatural
cu detector Diode-Array, 14-camer video
miniatural, f-punct focal, S-sond, E-parte electronic, C-calculator portabil cu soft
specific.

319

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.15. Vederea sondei unui spectromicroscop portabil i seciune prin sond 1materialul cercetat, 2-corpul cilindric al sondei, 3-fibr optic de iluminare, 41-12-fibre optice
de iluminare obinute prin divizarea fibrei optice (3), 5-fibr optic central, 7-armatur
filetat, 8-piuli de blocare, f-punct focal

Aplicaia pentru spectrofotometrarea soluiilor la diverse adncimi, fig.

19a, se compune dintr-un optocuplor 15, un corp 16 prelungitor pentru
fibrele 41-12 i 5 optice, corp care este prevzut la partea inferioar cu un
dispozitiv 17 optic ce prezint o fereastr f de inundare i o oglind 18
miniatural pentru reflectarea fasciculului luminos dup ce a trecut printr-o
grosime de strat de soluie de analizat egal ca valoare cu deschiderea
ferestrei f.

320

Spectromicroscopie UV-VIS
Aplicaia pentru spectrofotometrarea i examinarea microscopic a
depunerilor pe pereii reactoarelor chimice, a schimbtoarelor de cldur
precum i pentru spectrofotometrarea stratului lichid limit cu aceti perei,
fig.19b, se compune dintr-un optocuplor 15, un corp 16 prelungitor pentru
fibrele 41-12 i 5 optice, corp care este prevzut la partea inferioar cu un
dispozitiv 19 optic ce conine o oglind 20 cu reflexie total
pentru
devierea radiaiei luminoase spre lentila 6 a armturii 7 filetate, radiaia
focalizat n punctul focal f reflectndu-se din zona stratului 21 limit dintre
lichidul cercetat i peretele 22 al reactorului sau recipientului de stocare.
Modul de lucru cu spectromicroscopul n structura de baz este
urmtorul: se pornete partea electronic E i calculatorul C dup care se
ia sonda S n mn i se apropie ncet partea frontal a acesteia de
materialul 1 de analizat. Pentru achiziia automat a datelor este necesar
ca zona examinat s se gseasc tot timpul n punctul focal f al
obiectivului optic al spectromicroscopului portabil. n acest scop, pe tot
timpul deplasrii manuale a sondei S spre materialul 1 analizat are loc n
mod automat, prin intermediul soft-ului specific,
derivarea
valorii
intensitii fotocurentului n funcie de timp. n punctul focal intensitatea
radiaiei luminoase reflectate este maxim, ca atare i fotocurentul mediu
Imed dat de sensorul CCD al camerei video are valoare maxim, iar
valoarea derivatei a 1-a intr-un maxim are ntotdeauna valoarea zero,
ceea ce n cazul concret duce la expresia:

dI med
=0
dt

(II.5.2)

Ca atare, atingerea valorii zero a derivatei fotocurentului n funcie de timp

poate fi folosit pentru achiziia automat a spectrului i a imaginii ntrun timp de cca 1/50 secunde,
momentul achiziiei i confirmarea
acesteia fiind semnalizate sonor de ctre difuzorul
calculatorului C
portabil. Atunci cnd se
dorete modificarea ordinului de mrire

321

Spectromicroscopie UV-VIS
microscopic se desfileteaz armtura 7 mpreun cu grupul de lentile 6
optice de focalizare de pe corpul 2 al sondei S i se schimb cu o nou
armtur, ce conine un alt grup de lentile, cu alt ordin de mrire. Pentru
obinerea n noua situaie
a unui drum optic optim se apropie i se
deprteaz ncet sonda de materialul ncercat urmrind pe monitor
claritatea imaginii video, iar concomitent cu deplasarea sondei se
nfileteaz i se desfileteaz ncet noua armatur de pe corpul sondei. La
obinerea unei imagini clare, armatura 7 se blocheaz prin strngerea ei
manual prin intermediul piuliei 8.

322

Spectromicroscopie UV-VIS

a)

b)

Fig.II.5.16. Aplicaii ale spectromicroscopului portabil la spectrofotometrarea pe vertical a

soluiilor (a) la spectrofotometrarea i examinarea microscopic a stratului limit pe
vertical la recipiente, reactoare chimice sau biochimice (b). 2-corpul cilindric al sondei, 4 1-12fibre optice divizate de iluminare, 5-fibra optic central, 7-armatur filetat, 8-piuli de
blocare, 15-optocuplor, 16-corp
prelungitor pentru fibrele 4 1-12, 17-dispozitiv optic de
reflexie, 18-oglind miniatural, 19-dispozitiv optic, 20-oglind cu reflexie total, f-punct
focal, 21-strat limit, 22-perete recipient sau reactor;

323

Spectromicroscopie UV-VIS
Modul de lucru cu spectromicroscopul la
aplicaia privind
spectrofotometrarea la diferite adncimi a soluiilor, (fig.II.5.16a, este
urmtorul: se desfileteaz armtura 7 de pe corpul 2 i se nfileteaz n
locul acesteia optocuplorul 15 al unei tije 16 de adncime, dup care se
nfileteaz n partea inferioar a tijei dispozitivul optic 18, operaie urmat
de scufundarea tijei 16 n soluia de analizat pn la adncimea dorit,
dup care se realizeaz spectrofotometrarea soluiei cercetate.
Modul de lucru cu spectromicroscopul portabil folosit la aplicaia
privind spectrofotometrarea i examinarea microscopic a straturilor limit
situate ntre volumul de baz al soluiei i pereii vaselor de depozitare sau
pereii reactoarelor chimice sau biochimice, fig.II.5.16.b, este urmtorul: se
desfileteaz armtura 7 filetat de pe corpul 2 i se nfileteaz n locul
acesteia optocuplorul 15 al unei anumite lungimi de tij 16, dup care se
nfileteaz n partea inferioar a tijei dipozitivul optic 20 pe care se
nfileteaz la rndul lui armtura 7 filetat,
preluat de la structura de
baz a aparatului reprezentat n figura 11 i figura 12, operaiile fiind
urmate de scufundarea tijei 16 n soluia de analizat pn la adncimea
dorit i apropierea lent pe orizontal a armturii 7 filetate de stratul 21
limit
dintre lichidul cercetat i peretele
22 al recipientului. La
traversarea punctului focal al lentilei 6 are loc achiziia automat a
spectrului stratului limit dintre soluie i peretele vasului de depozitare sau
reactorului chimic sau biochimic precum i achiziia automat a structurii
microscopice a depunerii de pe perete sau dup caz i structura
microscopic a stratului limit atunci cnd acesta conine suspensii.

II.5.4.

Aplicaii ale spectromicroscopiei optice

II.5.4.1. Spectromicroscop biologic de transmisie

324

Spectromicroscopie UV-VIS

n figura II.5.17 este reprezentat o aplicaie specific analiticii

alimentare la care este studiat cinetica formrii micotoxinelor n diverse
medii chimice i biologice de lucru. n acest scop este folosit ca structur
de baz lanul optic al unui microscop biologic cu sistemul de iradiere a
probei p de analizat format dintr-o surs de radiaie 1 policromatic i o
fibr optic 2, informaia microscopic i spectrometric fiind preluat de la
obiectivul optic al microscopului printr-o fibr optic 6 care se divide ulterior
n dou fibre identice. Pe una din fibre informaia optic este transmis
ctre un spectrometru miniatural cu detector Diode-Array 7, iar pe cealalt
fibr informaia optic este transmis ctre o camera video 9. Pe masa
22 de baz a microscopului este montat o alt mas 21 rotativ cu
ajutorul creia probele p de analizat snt

325

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig. II.5.17 Aplicaie privind folosirea unui spectromicroscop cu transmisie, echipat cu

fibr optic, la studiul cinetic al evoluiei micotoxinelor ntr-un mediu lichid n funcie de
diveri parametrii: 1-surs de radiaie luminoas, 2-fibr optic de iluminare, 3-microscop
optic cu transmisie, 6-divizor pentru fibre optice, 7-spectrometru miniatural cu detector
Diode-Array, 8-spectrogram, 9-camer video, 10-imagine microscopic, 19-sistem de
dozare cu specii chimice sau biologice pentru studiul influenei acestora asupra evoluiei

326

Spectromicroscopie UV-VIS
micotoxinelor, 20-cuve din sticl coninnd speciile de analizat, 21-mas rotativ, 22-masa
microscopului, 23-servomotor pentru acionarea mesei rotative.

aduse pe rnd, la timpi bine stabilii, n dreptul canalului optic de iradiere,

cu ajutorul unui servomotor 23 pas cu pas. Un sistem de dozare
volumetric 19 face posibil dozarea precis i introducerea unor specii
chimice sau biologice n probele analizate ceea ce permite studiul influenei
cineticii concentraiei micotoxinelor
alturi de studiul evoluiei
microscopice a speciilor biologice care le genereaz n funcie de
diferii factori externi.

II.5.4.2. Spectromicroscop biologic de reflexie

n figura II.5.18 este prezentat schema de principiu
a unui
aranjament privind folosirea unui spectromicroscop cu reflexie, echipat
cu fibra optic, pentru studiul cinetic al degradrii unui produs alimentar
solid in funcie de temperatur.

327

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.18. Aplicaie privind folosirea unui spectromicroscop cu reflexie, echipat cu fibra

optic, folosit la studiul cinetic al degradrii unui produs alimentar solid n funcie de
temperatur: 1-surs de radiaie luminoas, 4(5)-optica microscopului, 7-spectrometru
miniatural cu detector Diode-Array, 8-spectrogram, 9-camer video, 10-imagine
microscopic, 14-cuva cu proba de analizat, 15,16- fibre optice speciale cu ase fibre (a)
de iluminare i cu o fibr (b) pentru transmiterea informaiei optice, 17-sistem de
termostatare a probei, 18-termostat electronic

II.5.4.3. Spectromicroscop metalografic

328

Spectromicroscopie UV-VIS
In figura II.5.19 este prezentat o aplicaie spectromicroscopic pentru
depuneri galvanice, scopul investigrii fiind n acest caz studiul influenei
compoziiei chimice a stratului limit din imediata vecintate a catodului
asupra dimensiunii i formei grunilor cristalini electrodepui pe catod.
Echipamentul modular este format dintr-o surs de radiaie policromatic 1,
dou fibre optice cu bifurcare; prima fibr cu bifurcare 2 realizeaz pe o
ramur iradierea catodului 3 printr-o lentil colimatoare 4, iar pe cealalt
ramur realizeaz preluarea informaiei sub form de radiaie reflectat de pe
acesta, cea de-a doua fibr optic cu bifurcare 5 realizeaz pe o ramur
transmiterea informaiei optice preluate spre un canal microscopic 6 prevzut
cu camer video CCD i soft specific de analiz optoelectronic a imaginii
microscopice, iar pe cea de-a doua ramur realizeaz transmiterea
informaiei spectroscopice spre un spectroscop

329

Spectromicroscopie UV-VIS
Fig. II.5.19. Schema de principiu a spectromicroscopului electrochimic. 1-sursa de radiaie
policromatic, 2,5-fibre optice cu bifurcare, 4-lentil colimatoare, 6-canal microscopic, 7canal spectrometric, 8-spectrogram, 9-imagine video a structurii microscopice

UV-VIS 7, prevzut cu reea de difracie, detector Diode-Array i soft de

analiz automat a spectrelor. Rezultatul se valorific sub forma unor
spectrograme 8 ce reflect n timp real evoluia compoziiei i concentraiei
electrolitului din imediata vecintate a catodului corelat cu o succesiune
corespunztoare de imagini video 9 a structurii microscopice a germenilor
cristalini ce se formeaz pe catod ca urmare a depunerii electrochimice a
metalului sau aliajului metalic.

II.5.4.4. Spectrotermomicroscop metalografic

In figura II.5.20 este prezentat o aplicaie specific studiului
spectromicroscopic al unor metale i aliaje la temperaturi ridicate n scopul
corelrii dimensiunii grunilor cristalini cu temperatura precum i cel al
determinrii compoziiei elementale a diferitelor aliaje studiate pe baza
spectrometriei de emisie atomic a aliajului studiat nclzit. n acest scop
este folosit un microscop metalografic 1 echipat cu un dispozitiv 2 de
nclzire progresiv electro-rezistiv prin contact a probei de analizat 3, un
sistem de rcire 4 al obiectivului optic 5 al microscopului, o fibr optic
special 6 cu trifurcaie, un spectroscop miniatural UV- VIS-IR 7 prevzut
cu reea de difracie, detector Diode-Array i soft specific de analiz
spectral calitativ i cantitativ
ce valorific semnalul optic de pe
ramura a a fibrei de sticl ntr-o spectrogram 8 precum i n alte
informaii calitative i cantitative referitoare la

330

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.20. Schema de principiu a spectrotermomicroscopului. 1-microscop metalografic, 2dispozitiv de nclzire, 3-prob de analizat, 4-sistem de rcire, 5-obiectivul optic al
microscopului, 6-fibr optic cu trifurcaie, 7-spectrometru miniatural, a-ramura de fibr
optic din care se valorific informaia spectral, b-ramura de fibr optic din care se
valorific informaia microsopic, c-ramura de fibr optic din care se valorific informaia
de temperatur, 8-spectrogram, 9-camer video sau aparat foto digital, 10-structur
metalografic, 11-sistem optoelectronic de conversie, 12-termogram

compoziia chimic a probei, un sistem optoelectronic 9 cu camer CCD de

nalt rezoluie care transform informaia de pe ramura b a fibrei optice
n semnal video, rezultatul procesrii electronice fiind
o structur
metalografic 10 afiat pe display i dup caz tiprit, un sistem

331

Spectromicroscopie UV-VIS
optoelectronic 11 de conversie a componentei infraroii a semnalului de
pe ramura c a fibrei optice n uniti de temperatur, redate printr-o
termogram 12 care reflect evoluia nclzirii probei 3 n timp.

II.5.4.5. Sistem spectromicroscopic

redus

pentru probe cu volum

Sistemul combinat spectroscopic i microscopic este destinat

analizei spectrometrice calitative i cantitative a unor volume mici de prob
lichid de ordinul microlitri precum i realizrii concomitente a imaginilor
video-microscopice a probei analizate. n acest scop este folosit o
structur optoelectronic modular, figura II.5.21, interconectat cu fibre
optice, care permite iradierea unui strat subire de soluie de analizat,
laminat ntre dou lentile colimatoare, urmat de analiza spectrometric
i microscopic a informaiei optice transmise prin prob. Sistemul
spectromicroscopic este compus dintr-o surs de radiaie policromatic, din
nite fibre optice de iradiere a probei i de preluare a radiaiei trecute prin
prob, un clete spectrometric, figura II.5.22, un spectrometru portabil cu
detector Diode-Array, o camera video cu detector CCD i o unitate de
calcul. Cletele spectrometric
folosete pentru iradierea unei pelicule
subiri din proba de analizat, pelicul a crei grosime este stabilit i
msurat cu un urub micrometric. Pe braul
superior al cletelui
spectrometric
se gsete montat o lentil colimatoare miniatural
cuplat la fibr optic, iar pe braul inferior
se gsete montat o alt
lentil colimatoare, prevzut cu o cup, n care se gsete proba de
analizat. Valoarea razei de curbur a cupei

345

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.21. Schema optoelectronic a spectromicroscopului pentru probe cu volum redus de

prob: UR-unitate de radiaie, CS-clete spectrofotometric,
US-unitate spectral, UMunitate microscopic, UC-unitate de calcul, 1-surs
de radiaie policromatic, 2-bra
articulat mobil, 3-bra articulat fix, 5-urub micrometric, 6-lentil colimatoare, 7-fibr optic, 8lentil colimatoare, 9-fibr optic cu scindare, 10,11-fibre
optice scindate, 12spectrofotometru miniatural cu detector Diode-Array, 13-camer video cu detector CCD, 14set de
obiective optice
interschimbabile, 15-calculator
electronic, 16-imprimant
electronic,17-buton de blocare, P-program de calcul specific aplicaiei fotometrice

este egal cu valoarea razei de curbur a lentilei colimatoare

din braul
superior, astfel nct la o apropiere avansat
a celor dou lentile
colimatoare s se inchid ntre ele o pelicul laminar subire de grosime
uniform din proba de analizat. Lentila colimatoare din braul inferior se
continu i ea cu o fibr optic care ulterior se scindeaz n dou fibre
optice independente. Din una din fibrele optice scindate este decodat
informaia spectrometric cu un spectrometru miniatural echipat cu
detector Diode-Array, iar din cealalt fibr optic este decodat informaia
de imagistic microscopic cu un detector CCD, ntregul sistem de
achiziie, prelucrare i afiare date este gestionat de un calculator cu
ajutorul unui program specializat.
Folosirea sistemului spectromicroscopic descris prezint avantajul
efecturii concomitente i n acelai loc att a analizei spectrometrice ct i

346

Spectromicroscopie UV-VIS
a studiului microscopic al probei urmrite folosind volume
extrem de mici de ordinul microlitrilor.

de soluii

Fig.II.5.22. Vederea cletelui spectromicroscopic: a-vedere din fa, b-vedere lateral, 2bra articulat mobil, 3-bra articulat fix, 4-arc de presare, 5-urub micrometric, 6-lentil
colimatoare, (10),(11)-fibre optice 17-buton de blocare, p-proba de analizat

Sistemul
spectromicroscopic
poate
lucra
opional
n
mod
spectromicroscopic, spectrometric sau microscopic, astfel:
1. Modul de lucru combinat spectromicroscopic-permite determinarea
n acelai timp a compoziiei chimice calitative, a concentraiei speciilor
chimice sau biologice prezente, folosind metoda semicantitativ precum
i studiul video-microscopic al materiei din zona n care s-a efectuat
analiza spectrometric. Pentru modul de lucru combinat se procedeaz n
felul urmtor:
a) n scopul analizei spectrometrice se picur cu o pipet o pictur
din proba p de analizat n cupa lentilei colimatoare 8 i se coboar braul 2
articulat mobil prin rotirea urubului 5 micrometric spre stnga, succesiv, n
funcie de distana d dintre cele dou lentile 6 i 9 optice, pictura va trece

347

Spectromicroscopie UV-VIS
prin fazele 1-5 reprezentate n figura 22, n faza 2, apare spectrul
ecranul calculatorului 15, n continuare urubul 5

pe

Fig.II.5.23. Modul de repartizare a probei de analizat la diferite distane intre cele

dou lentile 6 i 8 colimatoare, (Fig.II.5.21)

micrometric se rotete mai incet urmrind ca peak-urile spectrale s fie

maxime i ct mai nguste la baz, dup care se comand achiziia
spectrului care ndeplinete cel mai bine aceste condiii. Cu ajutorul
programului specializat calculatorul identific i afieaz automat, pe baza
lungimilor de und ale peak-urilor, denumirea speciilor chimice prezente n
proba analizat, de asemenea
determin prin calcul semicantitativ
concentraia fiecrei specii pe baza valorii nlimii fiecrui Peak raportat la
valoarea sumei tuturor peak-urilor.
b) n scopul studiului video-microscopic i al achiziiei imaginii care
reflect cel mai clar structura microscopic a materiei analizate, se rotete
urubul 5 micrometric, din ultima poziie corespunztoare achiziiei
spectrogramei, ncet spre dreapta i spre stnga pn cnd imaginea
video-microscopic apare clar pe ecran, n continuare ajustarea claritii
maxime a imaginii video se face rotind repetat i uor prima dat urubul 5
micrometric spre stng i pe urm din nou spre dreapta, dup care se
comand achiziia n baza de date a imaginii video-microscopice cu cea
mai bun claritate optic.

348

Spectromicroscopie UV-VIS
2. Modul de lucru numai spectrometricpermite determinarea automat
a compoziiei chimice calitative precum i a concentraiei speciilor chimice
sau biologice din proba analizat, folosind metoda semicantitativ. n
acest scop se aplic modul operator 1a
3. Modul de lucru numai microscopiceste folosit pentru studiului videomicroscopic i al achiziiei imaginii care reflect cel mai clar structura
microscopic a materiei
cercetate care se gsete ntre lentila 6
colimatoare i lentila 8 colimatoare. n acest scop se introduce prima dat
din setul 14 de obiective optice, obiectivul optic
corespunztor unui
anumit ordin de mrire optic dorit, n locaul specific situat ntre fibra
optic 11 i camer 13 video, dup care se picur o pictur n proba p
de analizat n cupa lentilei colimatoare 8, operaie urmat de coborrea
braului 2 mobil, prin rotirea spre stnga a urubului 5 micrometric, pn
cnd pe ecranul calculatorului 15 electronic apare o imagine video clar a
structurii microscopice. Atingerea claritii maxime a imaginii video se face
rotind repetat i uor urubul 5 micrometric, prima dat spre stng i pe
urm din nou pre dreapta, iar la obinerea imaginii microscopice cu cea
mai bun claritate optic se comand preluarea acesteia n baza de date.

II.5.4.6.

Fotometru automat
pentru determinarea
concentraiei i a studiului microscopic din volume
reduse de prob

Fotometrul descris reprezint un echipament combinat fotometric

i microscopic automat care permite concomitent i n acelai loc att
determinarea cu precizie ridicat a concentraiei unei anumite specii
chimice dintr-o soluie ct i studiul microscopic al unui volum de ordinul l
din acea soluie. n acest scop este folosit o structur optoelectronic
modular, figura II.5.24, figura II.5.25, cu fibre optice care permite iradierea
probei cu o radiaie monocromatic, cu lungimea de und specific speciei
chimice analizate, iradiere urmat de analiza fotometric i imagistic a

349

Spectromicroscopie UV-VIS
informaiei optice transmise prin proba de analizat care se gsete sub
forma unui strat subire ntre dou lentile colimatoare mobile care pot fi
apropiate, respectiv deprtate una fa de cealalt prin intermediul unui
motor pas cu pas comandat. Sistemul optoelectronic, folosit, figura II.5.24,
este compus la rndul lui dintr-o surs de radiaie monocromatic cu LEDuri, fiecare LED avnd lungimea de und a radiaiei de emisie acordat pe
lungimea de und specific de absorbie a unei anumite specii chimice, un
multiplexor

Fig.II.5.24 Schema bloc a fotometrului automat. UR-unitate de radiaie, CS- clete

fotometric, UF-unitate fotometric, UM-unitate microscopic, UC-unitate de calcul

optoelectronic care la comand aprinde numai LED-ul cu lungimea de

und specific speciei analizate, nite fibre optice de iradiere i de preluare
a radiaiei trecute prin prob i un clete spectrometric, figura II.5.25, cu
distana reglabil i msurabil ntre brae prin intermediul unui motor pas
cu pas, a unui senzor incremental de deplasare i a prii electronice a
fotometrului. Pe braul superior al cletelui spectrometric se gsete
montat o lentil colimatoare miniatural cuplat la fibr optic, iar pe
braul inferior se gsete montat o alt lentil colimatoare, prevzut cu
o cup, n care se picur proba de analizat, avnd valoarea razei de
curbur a cavitii egal cu valoarea razei de curbur a lentilei din braul

350

Spectromicroscopie UV-VIS
superior, astfel nct la presarea celor dou lentile ntre ele se nchide un
strat de lichid de grosime uniform, reglabil i

Fig.II.25. Schema optoelectronic a fotometrului automat. UR-unitate de radiaie, CF- clete

fotometric, UF-unitate fotometric, UM-unitate microscopic, UC-unitate de calcul. 1-surs
de radiaie cu mai multe LED-uri, 2-multiplexor optoelectronic comandat, 3-bra articulat
mobil, 4-bra articulat fix, 5-motor pas cu pas, 6- senzor incremental de deplasare, 7angrenaj urub-piuli, 8-lentil colimatoare, 9-fibr optic, 10-lentil colimatoare, 11-fibr
optic cu scindare, 12,13-fibre optice scindate, 14-fododiod, 15-camer video cu detector
CCD, 16-set de obiective optice interschimbabile, 17-calculator electronic, 18-imprimant
electronic, 19-buton de blocare, P-program de calcul specific aplicaiei fotometrice, pproba de analizat

msurabil. Lentila colimatoare inferioar este conectat i ea la o fibr

optic care ulterior se scindeaz n alte dou fibre optice. De pe una din
fibrele optice scindate este decodat informaia fotometric folosind o
fotodiod conectat la partea electronic, iar de pe cealalt fibr optic
este decodat informaia de imagistic microscopic folosind o camer
video echipat cu detector CCD, ntregul sistem de achiziie, prelucrare i
afiare date fiind gestionat de un calculator cu ajutorul unui program
specializat.

351

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.26. Vederea cletelui fotometric. a-vedere din fa, b-vedere lateral, 3-bra articulat
mobil, 4-bra articulat fix, 5-motor pas cu pas, 6-sensor incremental de deplasare, 7angrenaj urub-piuli, 8-lentil colimatoare, (12),(13)-fibre optice, 19-buton de blocare.

Folosirea sistemului combinat de tip fotometric-microscopic aduce

urmtoarele avantaje:
- prin modificarea automat, controlat din aproape n aproape, a
grosimii de strat analizat, fotometrul ofer posibilitatea determinrii precise
a concentraiei, att la probe de soluii de concentraie ridicat, fr
diluarea acestora ct i la probe de concentraii reduse din domeniul
urmelor, concomitent cu studiul microscopic al soluiei analizate.
- fotometrul combinat permite trasarea n citeva minute a familiei de
curbe de calibrare realizate n coordonate: absorban - A optic, grosime
- b de strat, concentraie c a speciei chimice analizate precum i
determinarea limitei de liniaritate a absorbanei A optice n funcie de
grosimea b de strat i n funcie de concentraia c a speciei chimice
analizate.

352

Spectromicroscopie UV-VIS
- fotometrul combinat prezint un pre redus deoarece detectorul lui
optic este o fotodiod i nu un spectrometru
n continuare snt redate posibilitile de lucru i modul operator cu
fotometrul combinat dup cum urmeaz:
1. Modul de lucru combinat fotometric - microscopic permite att
determinarea pe cale fotometric, cu precizie ridicat, a concentraiei unei
anumite specii chimice sau biolgice prezente n soluia de analizat, folosind
metoda curbei de calibrare, ct i studiul microscopic al probei analizate
folosind analiza optoelectronic de imagine, astfel:
a) Pentru determinarea concentraiei unei anumite specii chimice din
soluia analizat pe cale fotometric este necesar prima dat realizarea
familiei curbelor de calibrare, figura II.5.27. n acest sens are loc prima dat
setarea lungimii de und specific acelei specii ceea ce duce la comanda
automat a multiplexorului 2 n sensul aprinderii LED-ului corespunztor
din sursa 1 de radiaie, dup care se realizeaz, folosind substan pur
a celei specii chimice, un set de soluii de concentraii cresctoare,

353

Spectromicroscopie UV-VIS

Fig.II.5.27. Familia curbelor de calibrare realizate pentru o specie chimic la diferite

concentraii ale acesteia i la diferite grosimi de strat ale soluiei analizate

bine cunoscute, dup aceea se picur o pictur din soluia de calibrare,

avnd concentraia c de valoarea cea mai mic din rndul celor preparate,
pe lentila colimatoare 10 i se iniiaz dintr-o tast a calculatorului 17
electronic nceperea msurrii, ceea ce are ca efect msurarea automat
a absorbanelor A optice la diferite grosimi de strat b, valoarea acestora
fiind introdus alturi de valoarea grosimilor de strat corespunztoare, n
familia
curbelor de calibrare. Urmeaz aceeai procedur pentru
urmtoarea concentraie pn la epuizarea ntregului lot de concentraii din
soluia de calibrare urmat de comanda pentru realizarea automat a
familiei curbelor de calibrare folosind triplei de valori: absorban- A,

354

Spectromicroscopie UV-VIS
concentraie-c, grosime de strat, fig.II.5.27, familii n care este evideniat,
tot automat, domeniul de liniaritate pentru fiecare concentraie i grosime
de strat. Dup realizarea familiei curbelor de calibrare se aduce o pictur
din proba p de analizat pe lentila colimatoare 10 i se iniiaz dintr-o tast a
calculatorului 17 electronic nceperea msurrii ceea ce are ca efect o
prim determinare automat a absorbanei optice a crei valoare este
introdus, alturi de valoarea grosimii de strat corespunztoare, n familia
curbelor de calibrare. Dac msurtoarea se nscrie n zona dependenelor
liniare calculatorul 17 electronic valideaz determinarea i determin
automat prin calcul de extrapolare concentraia speciei analizate. Dac
valoarea absorbanei optice nu se nscrie n zona dependenelor liniare
programul calculatorului comand pornirea motorului 5 pas cu pas, acesta
micornd grosimea de strat, prin apropierea braelor 3 i 4, pn cnd
valoarea absorbanei A optice se nscrie n domeniul liniar, dup care are
loc determinarea automat a concentraiei prin calcul de extrapolare,
valoarea acesteia fiind afiat digital. Curbele de calibrare memorate
electronic pot fi folosite ori de cte ori este nevoie pentru determinarea
concentraiei speciei chimice
pentru care au fost realizate. Trebuie
menionat c la
determinarea concentraiei pe cale fotometric se
deosebesc dou situaii:
- n prima situaie, se urmresc cte specii chimice, din numrul celor
pentru care sursa 1 de radiaie cu LED-uri poate asigura lungimi de und
specifice,
snt prezente n soluia de analizat, dup care se decide
pentru care din aceste specii i n ce ordine se va determina concentraia
pe cale fotometric. n acest scop e iniiaz din tastatura calculatorului 17
pornirea multiplexorului 2 optic ceea ce are ca efect iradierea succesiv a
probei analizate de ctre sursa 1 de radiaie cu LED-uri ce emit fiecare o
anumit valoare a lungimii de und specific unei anumite specii chimice.
Pentru fiecare specie chimic prezent n soluie apare un Peak de
absorban optic la lungimea de und specific ei. n continuare, pentru a
se determina concentraia speciei alease se procedeaz ca la punctual 1a.

355

Spectromicroscopie UV-VIS
- n cea de-a doua situaie, se cunoate natura i numrul speciilor ce
se doresc a fi analizate. n acest caz se stabilete ordinea n care se va
determina concentraia acestor specii dup care se seteaz din tastatura
calculatorului 17 electronic prima lungime de und pe care trebuie s o
asigure multiplexorul 2 optic din ordinea stabilit, operaie urmat de
procedura stabilirii familiei curbelor de calibrare descrise la punctul 1a (face
excepie situaia n care aceste familii de curbe snt deja n baza de date de
la determinri anterioare). Dup realizarea i memorarea familiei curbelor
de calibrare are loc controlul automat al nscrierii valorii absorbanei n
domeniul liniar (vezi punctual 1a)
urmat de validarea rezultatului i
afiarea concentraiei pentru specia chimic analizat. Operaiile se repet
identic pentru determinarea concentraiei celorlalte specii chimice,
hotrte a fi analizate, din soluia cercetat.
b) Determinarea
structurii
microscopice se realizeaz
fr
ndeprtarea soluiei folosite pentru determinarea concentraiei comandnd
manual din tastatura calculatorului 17 electronic pai mici de deplasare a
lentilei 8 colimatoare nspre i dinspre lentila 10 colimatoare urmrindu-se
n mod continuu pe ecran imaginea microscopic a soluiei dintre cele dou
lentile colimatoare, iar pentru imaginea cu cea mai bun rezoluie se
comand preluarea acesteia n baza de date.
2. Modul de lucru numai fotometricpermite determinarea automat a
concentraiei speciilor chimice din proba analizat, folosind metoda
curbelor de calibrare. n acesp scop se aplic modul operator de la punctul
1a
3. Modul de lucru numai microscopiceste folosit pentru studiul
microscopic automat al probei p cu ajutorul analizei optoelectronice de
imagine. n acest scop se introduce prima dat, n locaul specific situat
ntre fibra optic 13 i camer 15 video, un obiectiv, din setul 16 de
obiective optice, corespunztor unui anumit ordin de mrire dorit, dup
care se picur o pictur n proba p de analizat n cupa lentilei 10
colimatoare, operaie urmat de comanda, din tastatura calculatorului 17
electronic, a servomototului 5 pas cu pas ceea ce are ca efect coborrea

356

Spectromicroscopie UV-VIS
braului 3 mobil. Comanda de coborre se execut atta timp pn cnd pe
ecranul calculatorului 17 electronic apare o imagie video clar a structurii
microscopice. Atingerea claritii maxime a imaginii microscopice video se
obine n continuare comandnd repetat i cu pai mici rotaia n ambele
sensuri a motorului 5 pas cu pas. La obinerea imaginii microscopice cu
cea mai bun claritate se comand preluarea acesteia n baza de date.

357