DESCRIEREA MICROSCOPULUI

Se numete microscop binocular pentru c permite examinarea cu ambii ochi i lumipan pentru c are ncorporat n el sursa de lumin. Un astfel de microscop este constituit din trei pri principale: partea mecanic, partea optic i sistemul de iluminare.

Partea mecanic este format la rndul ei din urmtoarele componente: piciorul sau talpa microscopului, coloana microscopului, msua sau platina microscopului i tubul microscopului. Piciorul sau talpa microscopului este o pies care prin forma i greutatea sa asigur stabilitate microscopului i servete ca suport pentru celelalte componente. n ca!ul microscopului "l#mpus $% &' talpa este de form aproximativ dreptunghiular i are ncorporate n ea sursa de lumin i o parte a dispo!itivului de transmis lumina. (e lng acestea mai conine transformatorul, iar pe partea lateral pre!int & butoane. Unul este pentru pornit)oprit, iar cellalt este folosit la reglarea intensitii luminii i pre!int o scal de reglare a intensitii de la ' la *. Coloana microscopului servete drept suport pentru: msu, tub i sistemul optic. +ste fixat pe talpa microscopului i are o form ncurbat. n extremitatea liber, coloana adpostete tubul microscopului care nu este vi!ibil. (e prile laterale pre!int cte & butoane ,vi!e- situate pe aceeai ax. Viza macrometric permite deplasarea preparatului microscopic n raport cu obiectivul printr)o micare rapid ,vi!ibil cu ochiul liber- i pe o distan mare ,cca. . cm-. $u a/utorul ei se obine imaginea preparatului microscopic. 0ceast imagine necesit o mbuntire, o finisare, pentru a avea claritatea necesar observrii detaliilor fine. Viza micrometric permite deplasarea preparatului n raport cu obiectivul pe o distan mic printr)o micare foarte lent ,ce nu poate fi observat cu ochiul liber-. 0ceast deplasare fin va permite o reglare de mare preci!ie a imaginii. 1e altfel, prin micarea acestei vi!e se face finisarea , clarificarea- imaginii preliminare obinute cu a/utorul vi!ei macrometrice. Msua sau platina este ataat de coloana microscopului n po!iie ori!ontal. +a este format din dou plci metalice dispuse una peste cealalt. $omponenta inferioar are o form aproximativ ptrat, este fix i pre!int n !ona central un orificiu de form rotund care permite trecerea luminii ce vine de la condensor nspre preparatul microscopic n timp ce componenta superioar, de form dreptunghiular este mobil ,poate fi deplasat nainte i napoi-.. 2sua pre!int un dispo!itiv pentru fixarea preparatului, i este prev!ut cu un bra articulat acionat de un resort. +l servete la fixarea i imobili!area preparatului de examinat pe msua microscopului. +i sunt fixai de o in metalic. 0ceasta este situat la partea mobil a msuei i se poate deplasa lateral ,stnga)dreapta-. Sub msu, n partea dreapt, se gsesc dou uruburi montate pe acelai ax, care alctuiesc carul mobil ,cruciorul- al msuei. 3urubul superior este mai gros i prin rotirea lui este acionat placa superioar a msuei care se va deplasa nainte i napoi n funcie de dorina examinatorului. $um preparatul microscopic este fixat la partea anterioar a acestei componente i imobili!at cu sistemul de cleme, nseamn c micnd componenta superioar a msuei deplasm preparatul nainte sau napoi, n raport cu obiectivul ,care rmne fix-. 3urubul inferior este mai subire i prin rotirea lui este acionat sistemul de cleme. (reparatul imobili!at cu sistemul de cleme poate fi deplasat la dreapta sau la stnga ,n raport cu obiectivul-, dup cum dorete examinatorul. n felul acesta cu a/utorul celor dou uruburi ale carului mobil se va putea deplasa preparatul microscopic n timpul examinrii nainte i napoi ,cu a/utorul urubului superior-, la dreapta i la stnga ,cu a/utorul urubului inferior-. 0ceste micri sunt necesare pentru ca examinatorul s poat explora ntreaga suprafa a seciunii histologice existente pe preparatul de examinat. Viza condensorului se afl sub msu, n partea stng i permite deplasarea acestuia n sus sau n /os, modificnd n acest fel cantitatea de lumin ce va fi trimis n planul preparatului microscopic Tubul microscopului este dispus n extremitatea liber a coloanei i asigur legtura optic ntre sistemul obiectiv i sistemul de prisme. n partea lui inferioar tubul microscopului este prev!ut cu un dispo!itiv numit revolver. 4evolverul este format din dou discuri metalice: unul superior fix i unul inferior rotativ. 1iscul inferior este prev!ut cu patru orificii n care se montea! prin nfiletare obiectivele microscopului. 4evolverul este prev!ut la interior cu o 5piedic6 ,un arc de oel- care servete la fixarea obiectivelor n axul optic. (rin rotirea revolverului se poate aduce n axul optic obiectivul dorit, po!iionarea lui corect fiind confirmat de un mic !gomot metalic pe care l emite arcul revolverului n momentul cnd obiectivul a a/uns n po!iie corect. n partea superioar a tubului se gsete sistemul de prisme. Partea optic este alctuit din urmtoarele componente ma/ore: sistemul obiectiv, sistemul de prisme i sistemul ocular. Sistemul obiectiv este repre!entat de . obiective care, aa cum am mai menionat, sunt montate pe discul inferior ,rotativ- al revolverului. Un obiectiv este un tub metalic n care se afl montat un sistem de lentile. (rima lentil ,cea care privete spre obiectul de examinat- este plan convex, fiind dispus cu faa plan spre exterior

'

,spre preparatul microscopic-. +a poart numele de lentil frontal i este lentila de ba! a obiectivului adic cea care preia imaginea obiectului de examinat. n funcie de mediul care se interpune ntre obiectul de examinat i lentila frontal a obiectivului se deosebesc dou feluri de obiective: obiective uscate la care ntre obiectul de examinat i lentila frontal se interpune aerul i obiective cu imersie la care ntre preparatul microscopic i lentila frontal se interpune un lichid, numit lichid de imersie. "biectivele uscate ale microscopului sunt n numr de 7 i au urmtoarea putere de mrire: .x, '8x, i .8x. (uterea de mrire este notat pe fiecare obiectiv naintea cifrei care exprim apertura lui numeric. $el de al .)lea obiectiv al microscopului este obiectivul cu imersie care are o putere de mrire de '88x. Sistemul de prisme este format dintr)o prism de ba! care preia imaginea de la obiectiv i prin intermediul altor prisme ,prisme deviatoare- o distribuie spre cele dou oculare, reali!nd vederea binocular a imaginii microscopice. (rismele sunt astfel concepute nct schimb direcia ra!elor de lumin primite de la obiectiv de aa manier nct examinarea la microscop s se poat face n po!iia cea mai comod posibil. Sistemul ocular este repre!entat de cele dou oculare situate la partea superioar a sistemului de prisme. "cularul este un tub metalic n care s)a montat un sistem de lentile. 2icroscopul este dotat cu oculare plane cu cmp larg, cu o putere de mrire de '8x. (uterea de mrire a ocularului este nscris n partea lui superioar. 1istana dintre oculare poate fi reglat n funcie de distana interpupilar a fiecrui examinator. 9ubul n care este montat ocularul din stnga este prev!ut cu un dispo!itiv rotativ care permite corectarea diferenei de dioptrii dintre cei doi ochi ai examinatorului.

Sistemul de iluminare este alctuit din sursa de lumin i dispo!itivul de transmis lumina.
Sursa de lumin este repre!entat de un bec halogen de * : i &8 ;. 0limentarea becului se face de la reeaua de &&8 : prin intermediul unui transformator inclus n tapa microscopului care are la ieire un curent de * :. Dispozitivul de transmis lumina este format din totalitatea componentelor pe care ra!ele luminoase dispersate venite de la sursa de lumin le vor ntlni n calea lor spre obiectul de examinat. (rima pies a acestui dispo!itiv este o pies de form cilindric prev!ut cu dou lentile ce poart numele de colector. 4olul colectorului este de a direciona ra!ele luminoase, adic el primete ra!ele de lumin dispersate ce vin de la sursa de lumin, pe care le va orienta n aa fel nct la ieirea din colector fasciculul luminos va fi format din ra!e paralele ntre ele. +le vor fi trimise n sus, sub form de fascicul de ra!e paralele, printr)un geam dispus pe partea superioar a tlpii microscopului. <asciculul de ra!e va ntlni apoi o diafragm numit diafragma de apertur dup care va ptrunde n condensor. 2odificarea orificiului diafragmei de apertur se face cu a/utorul unei rotie pre!ente n partea inferioar a condensorului. $ondensorul este un dispo!itiv prev!ut cu dou lentile i are rolul de a concentra fasciculul de ra!e paralele pe care le captea! cu prima lentil, astfel nct ele vor fi adunate ,concentrate- sub forma unui punct ,spot- luminos ce va fi trimis n planul preparatului microscopic. =umina primit de la condensor va strbate preparatul microscopic i va intra n lentila frontal a obiectivului concurnd la formarea imaginii n microscop.

EXAMI AREA LA MICROSCOPUL OP!IC

(entru a examina n condiii optime la microscopul optic, sunt necesare cteva operaiuni care preced examinarea propriu)!is. 0ltfel spus, microscopul trebuie 5 pre"tit6 n vederea examinrii. 0ceast pregtire const n urmtoarele operaii: '- se po!iionea! butonul de reglare a intensitii luminoase n dreptul cifrei 7> &- se apas pe butonul de pornire)oprire> 7- se coboar msua cu vi!a macrometric pentru a avea acces uor pe msu. n felul acesta preparatul poate fi ae!at uor n cea mai corect po!iie i nu exist riscul !grierii lentilei frontale a obiectivului sau a lamelei preparatului> .- se aea! preparatul microscopic pe msu cu lamela n sus i se imobili!ea! cu a/utorul celor doi valei> ?- cu a/utorul carului mobil deplasm preparatul pn cnd seciunea colorat se suprapune peste spotul luminos trimis de condensor> *- se aduce n axul optic obiectivul .%, prin rotirea revolverului n sensul acelor de ceasornic. 1up efectuarea acestor operaiuni, microscopul este pregtit pentru examinare. (rin dotarea lui tehnic, microscopul permite o palet larg de operaiuni, motiv pentru care o s pre!entm operaiunile cele mai des utili!ate. (entru examenele curente se folosesc obiectivele .%, '8%, .8%. "biectivul '88% se folosete numai n anumite situaii.

&

"@ABC+4+0 B20DBCBB 2B$4"S$"(B$+ $U "@B+$9B:+=+ .%, '8%, .8%

n ca!ul examenelor curente, obinerea imaginii preparatului de examinat se face ntotdeauna cu obiectivul cu puterea de mrire cea mai mic ,.%- i numai ulterior se trece la obiectivul urmtor ,dac este ca!ul-. 9rebuie preci!at c microscopul este pregtit pentru examinare aa cum am pre!entat anterior.

"@ABC+4+0 B20DBCBB $U "@B+$9B:U= .%.

1ac structurile din preparatul microscopic ce urmea! a fi examinate sunt de dimensiuni mari, ele nu necesit pentru examinare ,cel puin pentru imagini de ansamblu- dect trepte mici de mrire. n aceast situaie se examinea! ,cel puin iniial- cu obiectivul .%. (rivind lateral ,la preparat i nu #n oculare-, ridicm msua cu $i%a macrometric pn n po!iia cea mai de sus. 0poi pri$ind #n oculare, coborm ncet, tot cu $i%a macrometric , pn cnd obinem imaginea preparatului. n acel moment lum mna de pe vi!a macrometric i n continuare vom lucra numai cu viza micrometric. Bmaginea obinut cu a/utorul vi!ei macrometrice este o imagine preliminar care necesit anumite mbuntiri calitative pentru ca noi s putem observa detaliile fine ale preparatului. (entru aceasta, imaginea obinut cu a/utorul vi!ei macrometrice o vom finisa ,clarifica- cu a/utorul vi!ei micrometrice. n acest moment imaginea este corespun!toare i examinatorul poate deplasa preparatul cu a/utorul carului mobil n direcia dorit astfel nct s poat examina tot ceea ce dorete de pe suprafaa de seciune. 9rebuie menionat faptul c este necesar ca imaginea s fie clarificat n permanen cu vi!a micrometric pentru ca ea s fie de cea mai bun calitate. 0cest lucru este necesar deoarece imaginea bine reglat ntr)un punct al preparatului nu se va pstra la aceeai calitate dup deplasarea n alt punct. &n timpul e'aminrii o m(n $a ac)iona carul mo*il i cealalt $i%a micrometric.

"@ABC+4+0 B20DBCBB $U "@B+$9B:U= '8%

<r a mai modifica imaginea obinut cu a/utorul obiectivului .%, prin rotirea revorverului aducem n axul optic al microscopului obiectivul de '8%. $u a/utorul vi!ei micrometrice clarificm imaginea. 1ac este ca!ul reglm intensitatea luminii cu a/utorul butonului de reglare de pe partea lateral a tlpii microscopului. 1up ce examinm i cu acest obiectiv seciunea colorat dac exist aspecte ce dorim s le examinm cu un obiectiv cu putere de mrire mai mare, aducem aceste aspecte n centrul cmpului microscopic i trecem la examinarea cu obiectivul .8%.

"@ABC+4+0 B20DBCBB $U "@B+$9B:U= .8%

<r s modificm n nici un fel imaginea reglat pentru obiectivul '8%, aducem n axul optic obiectivul .8% prin rotirea revolverului n sensul acelor de ceasornic. 1ac imaginea a fost corect reglat pentru obiectivul '8%, ea se pstrea! i la schimbarea pe obiectivul .8% doar c pierde din claritate. Bmaginea va fi n continuare clarificat numai cu viza micrometric ,utili!area vi!ei macrometrice este total contraindicat-. 1ac este ca!ul reglm intensitatea luminii cu a/utorul butonului de reglare de pe partea lateral a tlpii microscopului. +xaminatorul poate acum studia toate detaliile care l interesea!. =a ncheierea examinrii, se rotete revorverul i aducem n axul optic al microscopului o po!iie n care nu avem fixat nici un obiectiv. $u a/utorul vi!ei macrometrice coborm msua pentru ca preparatul s poat fi luat uor. "binerea imaginii microscopice se face aa cum am mai spus, ncepnd de fiecare dat cu obiectivul .%. 0cest obiectiv cuprinde n cmpul microscopic o suprafa mare din preparat ceea ce permite locali!area uoar a unor structuri, chiar dac uneori nu permite observarea unor detalii foarte fine ale acestora. ntotdeauna, locali!area structurilor pe suprafaa de seciune se face cu obiectivul .%. 1ac dorim s observm anumite detalii identificate cu obiectivul .%, vom examina cu obiectivul '8% i dac este ca!ul cu obiectivul .8%. "rdinea n care se lucrea! cu aceste obiective ,.%, '8%, .8%- este ntotdeauna aceasta. <iecare obiectiv are destinaia lui i trebuie folosit ca atare.

De re)inut+
(entru o examinare corect care s asigure o imagine de calitate i protecia aparatului i materialelor este obligatorie respectarea acestei modaliti de examinare. 4egulile care nu trebuie n nici un ca! uitate sau ignorate sunt: preparatul se aea! pe msu ntotdeauna cu lamela n sus; dup obinerea imaginii cu obiectivul .%, nu se mai utilizeaz viza macrometric; pentru celelalte obiective ,'8% i .8%- este suficient vi!a micrometric. dac, dintr)un motiv sau altul, n timpul examinrii, imaginea s)a dereglat, nu se forea! reglarea ei cu vi!a macrometric ci se reia examinarea de la capt ,cu obiectivul .%-> n nici un ca! nu se ncearc obinerea imaginii cu vi!a macrometric pentru fiecare obiectiv n parte.

Recoltarea pro*elor
4ecoltarea este operaiunea de prelevare a unor mici fragmente de esut sau organ, fie din organismul viu, fie de la cadavre. 1ei este considerat de multe ori o operaiune banal ,i tratat cu superficialitate- ea repre!int de fapt una din cele mai importante etape ale efecturii preparatului permanent. 0cionarea cu brutalitate sau instrumentar neadecvat asupra organului sau esutului din care se recoltea! piesa, poate cau!a modificri ,artefacte de recoltare- care pot pune n real dificultate pe cel care va examina n final preparatul histologic. (entru reali!area unei recoltri corecte este necesar respectarea cu strictee a unor reguli: recoltarea trebuie fcut cu instrumentar corespun!tor i foarte bine ascuit ,bisturiu cu lame de unic folosin, lame de brbierit etc.- i s nu se exercite presiuni, traciuni sau alte manopere asemntoare ce pot cau!a ruperea sau strivirea unor structuri> n ca!ul recoltrii probelor de la cadavre, operaiunea trebuie efectuat n cel mai scurt timp posibil pentru evitarea instalrii alterrilor post)mortem> se recoltea! fragmente de esut sau organ sub form de felii a cror grosime nu trebuie s depeasc ? mm, iar direcia n care se face secionarea va determina orientarea final a seciunilor, important mai ales n ca!ul unor organe cum ar fi muchii sau pereii organelor cavitare. 1ac piesele sunt mai groase exist riscul ca ele s nu poat fi ptrunse n timp util de agenii fixatori. 1ac grosimea este corespun!toare, celelalte dimensiuni ,lungimea, limea- nu sunt foarte importante din punctul de vedere al fixrii, putnd fi alese n funcie de necesiti> cnd pe suprafaa organului din care recoltm proba exist le!iuni vi!ibile macroscopic, seciunea trebuie astfel orientat nct fragmentul prelevat s cuprind att esut le!at ct i esut sntos> recoltarea pieselor din diferite esuturi i organe trebuie s se fac ntr)o anumit ordine stabilit n funcie de rapiditatea cu care ele ncep s se altere!e. 0stfel, structurile cele mai sensibile sunt glandele endocrine, apoi mucoasa gastric i intestinal, sistemul nervos, testiculele, rinichii etc> imediat dup recoltare piesele trebuie introduse n recipientul cu soluie fixatoare ,bucat cu bucat-.

,i'area pro*elor
(entru studiul histologic nu este suficient ca proba de examinat s fie transparent i s posede un contrast optic adecvat. $elulele i esuturile ,mai ales cele prelevate de la animale- sunt instabile din punct de vedere fi!ic i chimic. 9ratamentele la care ele sunt supuse pentru obinerea preparatului microscopic le)ar putea distruge n mod grav dac ele nu ar fi stabili!ate ntr)un anumit fel. <r modificarea amplasrii lor spaiale, proteinele structurale i ali constitueni trebuie fcui insolubili pentru toi reactivii la care urmea! s fie expuse. $elulele i materialele extracelulare trebuie 5conservate6 astfel nct modificrile structurale i de compo!iie chimic ale pieselor prelucrate histologic s fie minime. 0ceast 5conservare6 este subiectul fixrii. 2ai simplu spus, fixarea are ca scop ntreruperea fenomenelor vitale din celule i esuturi, cu pstrarea ct mai fidel a structurii acestora. 1up prerea ma/oritii specialitilor histologi, fixarea este operaiunea cea mai delicat dintre toate etapele reali!rii preparatului histologic permanent. Dreelile survenite n timpul fixrii compromit iremediabil re!ultatul final al prelucrrii histologice. 2aterialul biologic poate fi fixat prin metode fi!ice sau prin metode chimice. (entru ma/oritatea studiilor histologice sunt utili!ai fixatorii lichi!i. Substanele ce pot fi folosite pentru fixarea chimic a pieselor biologice sunt numeroase i diverse. +le pot fi folosite ca fixatori simpli sau ca amestecuri fixatoare. 0genii fixatori simpli utili!ai n tehnica histologic sunt foarte numeroi, iar dintre acetia amintim: alcoolul etilic, alcoolul metilic, acetona, cloroformul, acidul acetic, acidul tricloracetic, acidul picric, clorura mercuric ,sublimatul-, formolul etc. 1e cele mai multe ori aceti ageni fixatori intr n compo!iia unor amestecuri fixatoare, cu excepia ultimului care este folosit frecvent ca fixator simplu. Formolul comercial este o soluie apoas de formaldehid .8E. 1ac formolul este utili!at ca fixator n soluii apoase simple, el trebuie diluat cu cteva !ile nainte. Modul de preparare: considernd formolul comercial ca fiind o soluie cu concentraia de '88E, din care se prepar diferite soluii de lucru. 1e exemplu: pentru formol histologic '8E se diluea! '8 ml formol concentrat cu F8 ml ap distilat. <ixarea se face cel puin o sptmn la temperatura camerei. 2arele avanta/ al fixrii cu formol este faptul c dup ncheierea perioadei de fixare, piesele pot fi pstrate n continuare n fixator, fr ca ele s sufere modificri ma/ore care s compromit prelucrarea ulterioar. 1atorit acestui avanta/, formolul este cel mai utili!at fixator.