21.09.

2010
1
FAMILIA
ENTEROBACTERIACEAE.
MICROBIOLOGIA SI
DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL
ESCHERICHIOZELOR I AL
DIZENTERIEI BACTERIENE
FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE
Peste 30 genuri cu peste 150 specii
Habitat: intestinul gros al omului,
animalelor. Pot fi intalnite pe sol, plante, in
apa, etc
Martori de contaminare fecal a mediului
Majoritatea fac parte din microflora
normal (comensal) intestinal

CLASIFICAREA
N FUNCIE DE PATOGENITATE:
- Enterobacterii patogene: genurile Shigella,
Salmonella, Yersinia, unele variante ale
genului Escherichia;
- Enterobacterii condiionat patogene: genurile
Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Hafnia,
Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia,
Serratia, Edwardsiella, etc.

n 11 luni ale anului 2009 s-au nregistrat 16627
cazuri de boli diareice acute (BDA), inclusiv
12580 cazuri la copii n vrst pn la 17 ani,
comparativ cu 15207 cazuri, inclusiv 11315
cazuri la copii n vrst pn la 17 ani n aceeai
perioada ale anului 2008. Ponderea copiilor din
numrul total al bolnavilor depistai cu BDA n
11 luni ale anului 2009 constituie 76,0 %.

n primele 2 luni ale anului 2010 s-au
nregistrat 2265 cazuri de BDA, inclusiv 1831
cazuri la copii n vrst pn la 17 ani,
comparativ cu 2226 cazuri, inclusiv 1811 cazuri
la copii n vrst pn la 17 ani n primele 2 luni
ale anului 2009.
21.09.2010
2
TESTE-CHEIE ALE FAMILIEI ENTEROBACTERIACEAE
- Bacterii (bastonae) gramnegative
- Nesporogene
- Mobile-peritriche sau imobile
- Facultativ-anaerobe
- Fermenteaz glucoza pn la acid (A) sau acid
i gaz (AG)
- Catalazo-pozitive
- Oxidazo-negative
- Reduc nitraii n nitrii
TESTE PRIMARE (identificarea genurilor)
Utilizarea citratului de Na (mediul Simmons)
Utilizarea malonatului de Na
Hidroliza ureei (testul Preus)
Decarboxilarea lizinei (LDC)
Dezaminarea fenilalaninei (FAD)
Producere de H2S n mediul multitest (ex.: Kligler)
Fermentarea glucozei pn la acizi (testul MR)
Fermentarea glucozei pn la acetoin (testul VP)
Mobilitatea (n geloz semilichid)
TESTE SECUNDARE (identificarea
speciilor/variantelor)
Teste biochimice (fermentarea glucidelor,
decarboxilarea aminoacizilor (arginin,
ornitin), producerea indolului, etc)
Fagoidentificarea i lizotipia
Colicinogenotipia
Seroidentificarea
Antibiograma

CARACTERE MORFOBIOLOGICE
Caractere morfologice: bastonae G-,
1 - 6 m x 0,3 - 1 m, mobile peritriche
(Shigella, Klebsiella, Yersinia pestis
imobile), nesporogene, formeaz
microcapsule (Klebsiella capsulat),
posed fimbrii.

21.09.2010
3
Caractere de cultur:
- Anaerobe facultativ
- Temperatura optim 37 grade C (limite
18 45 grade)
- Nepretenioase nutritiv
- Colonii S, apar dup 18-24 h de incubare,
2 - 3 mm (dup repicri pot apare colonii
R), Klebsiella colonii M (mucoide),
Proteus invadeaz suprafaa mediului

MEDII DE CULTUR
De transport: glicerin 30%, soluie salin 3%, soluie
tampon-fosfat
De mbogire a bacteriilor patogene: Kauffmann,
Muller, bulion selenit, etc
Diferenial-diagnostice:
I. De izolare a culturii pure
- ENDO, LEVIN, PLOSKIREV
Componena: baz nutritiv, lactoz, indicator
Coloniile L+ : colorate; Coloniile L- : incolore (frecvent flora
patogen)
- Mediul Wilson-Blair cu sulfit de Bi (Salmonella reduce sulfitul
n sulfur de Bi colonii negre pe mediul verde)
21.09.2010
4
II. De acumulare i identificare preliminar
(medii multitest)
- Russel, Kligler (glucoz, lactoz, sruri de Fe,
indicator)
- Olkeniki (glucoz, lactoz, zaharoz, uree,
sruri de Fe, indicator)
III. De identificare final (medii cu citrat,
malonat, irul Hiss, medii cu aminoacizi,
gelatina, etc)


CARACTERE ANTIGENICE
Ag O, de perete, LPZ, termostabil i rezistent la
alcool, sensibil la formol, specificitate de gen,
specie, grup. Stimuleaza producerea Ig M.
Ag H, flagelar, proteic, termolabil i inactivat de
alcool, rezistent la formol, specificitate de tip
(variant). Stimuleaza producerea Ig G.
Ag K, superficial, capsular, termovariabil,
specificitate de specie, tip. Mascheaz Ag O,
inaglutinabilitate cu seruri anti-O. Variante L, A,
B la E.coli, Vi la Salmonella i Citrobacter
Ag F, fimbrial, termolabil, nespecific
ECA (Enterobacterial Common Antigen) antigen
comun fam. Enterobacteriaceae (interes
taxonomic) Ag Kunin

Genul Escherichia.
Diagnosticul de laborator al escherichiozelor
Genul Escherichia
Spp.: E.coli, E.blattae, E.fergusonii, E.vulneris,
E.hermanii
E.coli descoperita in 1885 de Theodor Escherich,
pediatru si bacteriolog
Habitat: intestinul gros al omului i animalelor (80% din
flora aerob intestinal), 10
7
-10
9
bacterii/gram
fecale.
Contamineaz solul i apele de suprafa. Prezena
E.coli - indicator de contaminare fecal
Rolul E.coli n fiziologia uman
1. Manifest activitate antagonist fa de
alte bacterii, inclusiv cele patogene
(probiotic tulpina Nissle 1917)
2. Stimuleaz dezvoltarea esutului limfoid
prin intermediul Ag sale
3. Particip la procesele de digestie, inclusiv
n metabolismul colesterolului i acizilor
biliari
4. Asigur organismul cu vitamine,
sintetiznd vitamine B, K, acid nicotinic,
acid folic, etc.
21.09.2010
5
CARACTERE MORFOBIOLOGICE
E.coli enterobacterie tipic, mobil, lactoza+
(colonii colorate pe medii DD de izolare),
fermenteaz glucoza cu formare de AG, teste
primare: MR +, mobilitate +, LDC+, celelalte
teste sunt negative
Structura antigenic
- Ag O 180 tipuri (O1, O2, O3,......O180)
- Ag H 60 tipuri (H1, H2, etc)
- Ag K 100 tipuri
Din combinaii rezult serovariante:
ex.: O55:H2:K1
FACTORI DE PATOGENITATE
- Capsula (antifagocitar, Ag K1 camuflaj
imunologic datorit epitopilor comuni cu
polisialozil-glicopeptide cerebrale la nou-nscui)
- Proteine din ME i LPZ (anti-complement,
protecie de factorii bactericizi ai sngelui,
adeziune, invazie)
- Fimbrii: pili manozo-sensibili/rezistenti, pili CFA,
pili P (adeziune la mucoasa intestinala si alte
substrate)
- Toxine (endotoxina, enterotoxine termostabile - ST
i termolabile LT (codificate plasmidic),
citotoxine Shiga-like toxine (SLT-1, SLT-2),
codificate bacteriofagic
- Hemolizina
- Siderofori (sisteme de captare a Fe)

ROLUL E. COLI N PATOLOGIA UMAN
FENOTIPURI DIAREIGENE
- Tulpini enteropatogene: EPEC (O26, O55, O111,
O125, O142, etc). Responsabile de gastro-
enterite infantile (infecii salmoneliforme). Ader
la mucoasa intestinului subire printr-o protein
din membrana extern fr a penetra
intracelular, distrug microvilozitatile, perturba
procesele de secretie si absorbtie intestinala.
- Tulpini enteroinvazive: EIEC (O28, O124, O143,
etc). Responsabile de sindrom dizenteric (infectie
dizenteriforma) cu invazia mucoasei colonului,
penetrare intracelular, ulceraii. Factori de
patogenitate: adezine, citotoxine (SLT).
- Tulpini enterotoxigene: ETEC (O6, O8, O20, O25,
O115, etc). Responsabile de diareea cltorului,
sindrom holeriform. Adeziunea la enterocitele
intestinului subire este asigurat de pili (CFA
colonization factor antigen sau CSF coli surface
factors). Elaboreaz toxine enterotoxine LT
i/sau ST. Activeaz adenilat- respectiv guanilat
ciclaza enterocitelor cu acumulare de AMPc sau
GMPc intracelular, provocnd o secreie sporit a
ionilor de Cl
-
i inhibiia absorbiei ionilor de Na
+
,
antrennd o pierdere hidric important.
- Tulpini enterohemoragice: EHEC (O157:H7; O26,
O111). Responsabile de colite hemoragice cu
sindrom uremic-hemolitic (anemie hemolitic +
trombocitopenie+insuficien renal). Posed
factori de adeziune i produc citotoxine capabile
de difuzie n organism (Shiga-like toxine SLT 1
i SLT 2). Receptori specifici sunt pe enterocite,
celule endoteliale si celulele epiteliului renal.
Produc frecvent hemolizin.
- Tulpini enteroagregative: EAggEC (O111:H12).
Posed adezine, hemolizine i ST. Provoac
diaree persistent (peste 14 zile) la copii si adulti
cu imunosupresie (HIV/SIDA). Ader agregativ la
suprafaa culturilor de celule.
- Tulpini enteroadezive: EAEC. Ader difuz la
celulele intestinale i culturile de celule. Provoac
sindroame diareice.
21.09.2010
6
FENOTIPURI UROPATOGENE (O1, O2, O4, O6)
Posed afinitate pentru mucoasa uro-genital
(fimbrii tipul 1 sau P, Ag O i K specifice,
hemolizine, etc ).

FENOTIPURI BACTERIEMICE

Alte forme clinice provocate de E.coli:
- Sepsis, oc endotoxinic
- Meningite la nou-nscui (preponderent tulpini
cu Ag K1)
- Infecii ale plgilor (frecvent de origine
nosocomial)
- Colecistite, peritonite, salpingite, etc.
- Toxiinfecii alimentare
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Prelevate n funcie de forma clinic: materii fecale,
urin, snge, LCR, puroi, etc
Metode de diagnostic
1. Examenul microscopic de orientare (frotiu Gram n
infecii extra-intestinale, RIF)
2. Examenul bacteriologic (de baz, cantitativ) detalii
in Ghid !!!!!
3. Examenul serologic (retrospectiv, de confirmare)
- RA cu autotulpini (titru diagnostic 1:200)
Tratamentul escherichiozelor
- Antibiotice peniciline semisintetice, cefalosporine,
aminoglicozide, carbepeneme, ciprofloxacina,
trimetoprim, nitrofurane, aztreonam. Antibiograma
obligatorie, rezistenta multipla
- Eubiotice (colibacterin, lactobacterin,
bifidumbacterin, bificol, etc)
- Bacteriofagi

Profilaxia escherichiozelor - nespecific

GENUL SHIGELLA. DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL DIZENTERIEI
Shigelele strict umane. Cauzeaz infecii
intestinale - igeloze, cea mai grav form
dizenteria bacterian.
Clasificarea genului Shigella (biochimic i antigenic):
A Shigella dysenteriae (12 s/v, 12 b/v) Manitol -
B Shigella flexneri (6 s/v, 14 ss/v, 23 b/v)
C Shigella boydii (23 s/v)
D Shigella sonnei (1 s/v, 7 b/v)
Subgrupele B, C, D manitol +
Descoperite in 1898 de Kiyoshi Shiga
CARACTERE MORFOBIOLOGICE
Enterobacteriaceea tipice, imobile, lactozo-negative (colonii
incolore pe medii DD), scindeaz glucoza pana la acizi (testul
MR+), celelalte teste primare sunt negative.

FACTORI DE PATOGENITATE:
- Factori de adeziune la mucoasa colonului (fimbrii, LPZ)
- Microcapsula (antifagocitar)
- Factori de penetrare i multiplicare intracelular
- Toxine:
1. Toxina Shiga, de origine cromosomal. Inhiba sinteza
proteinelor in celula gazda. Manifesta activitate neurotoxic,
enterotoxic, citotoxic elaborat de S.dysenteriae 1.
2. Citotoxine (Shiga-like toxine (SLT), verotoxine), codificate de
bacteriofagi. Efect similar cu cel al toxinei Shiga.
3. Endotoxina

21.09.2010
7
Structura antigenic: Ag O i K cu
specificitate de gen, specie, subspecie,
variant

Rezistena n mediul extern:
S.dysenteriae - foarte sensibil (1-2 ore)
S.flexneri persist 1-3 sptmni n ap, 2
luni n lactate
S.sonnei persist i se multiplic n lactate
PATOGENEZA DIZENTERIEI BACTERIENE
Sursa de infecie: bolnav, reconvalescent, purttor
Transmiterea fecal-oral:
- Contact direct (mini murdare)
- Alimentar (alimente, ap)
Doza infectant: 10-10
2
bacterii
Bacteriile patrund n intestinul gros. Celulele epiteliale normale sunt
rezistente la infectia cu Shigella spp. In faza initiala Shigella este
captata de celulele M. Dupa transcitoza epiteliului intestinal
bacteria este eliberata intr-o vacuola care ulterior este captata de
macrofage. Shigella evita distrugerea prin initierea rapida a
apoptozei macrofagelor, determinand eliminarea citokinelor
proinflamatoare (IL1, IL18). Shigella eliberata din macrofage
invadeaza celulele epiteliale prin membrana bazo-laterala (prin
macropinocitoz dirijat), se elibereaza din fagosoma si se
multiplica in citoplasma. Bacteriile se propag intra- i
intercelular graie polimerizrii actinei la un pol al celulei
(caracter determinat plasmidic).
Citokinele eliberate de macrofage si celulele epiteliale
determina o recrutare masiva a PMN un locul
infectiei, ceea ce duce distrugerea integritatii
epiteliului si facilita invazia directa a submusoasei,
evitand celulele M. Astfel, moartea macrofagelor,
distrugerea stratului epitelial, influxul masiv al PMN
determina inflamaia fibrinoas intens a colonului,
micro-abcese i ulceraii, cu apariia mucusului,
puroiului i sngelui n materiile fecale.
Perioada de incubaie 2 - 4 zile
Semne clinice febr, dureri abdominale, tenesme
(spasme rectale), scaune lichide mucopurulente-
sanguinolente frecvente.
Vindecarea n 2-5 zile (clinic, apoi microbiologic)
Forme cronice sau portaj sunt posibile
21.09.2010
8
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DIZENTERIEI
Prelevate: probe de scaun (elementele muco-
sangvinolente), apa, alimente, lavaje de pe
suprafee
Metode de diagnostic
1. Examenul microscopic RIF
2. Examenul bacteriologic
I. Izolarea culturii pure pe medii DD (Endo, Levin,
Ploskirev) sau mbogirea ighelelor n
bulion selenit
II. Coloniile L- sunt repicate pe mediile Olkeniki,
Kligler pentru acumularea culturii pure i
identificare preliminar
(lactoza/zaharoza -, glucoza A, ureea -, H
2
S -)
III. Identificarea definitiv a culturii pure
- Caractere morfotinctoriale
- Caractere de cultur
- Caractere biochimice (teste primare, secundare)
- Caractere antigenice (seroidentificarea prin RA
pe lam cu seruri imune anti-Shigella poli- i
monovalente)
- Fagoidentificarea
- Virulena (testul Sereny la cobai)
- Antibiograma
IV. Analiza rezultatelor i formularea rspunsului

3. Diagnosticul serologic (din a 5-7 zi de boal)
- RA, RHAI (aduli 1:400 (S.flexneri), 1:200 (S.sonnei)
copii 1:100
coproanticorpi (Ig A 1:80)
- ELISA
- RIFI
Imunitate: specific de tip, 1-2 ani, umoral (IgA)
Profilaxie: vaccinuri ribosomale, inactivate, atenuate
(imunitate de scurt durat)
Tratament: antibiotice (trimetoprim, sulfamide,
tetraciclin, ampicilina, etc), eubiotice, bacteriofagi,
vaccin inactivat (dizenteria cronic)