Sunteți pe pagina 1din 50

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

CUPRINS
CUPRINS
REZUMAT
INTRODUCERE
CAPITOLUL I. STADIUL ACTUAL AL CUNOTERII
1.1.
Originea, teoriile referitoare la formarea propolisului i recoltarea
propolisului de ctre albine i om
1. 2.
Proprieti fizico-chimice ale propolisului i factorii care influeneaz
colectarea propolisuluide ctre albine
1.3.
Falsificarea propolisului
1.4.
Activitatea biologic a propolisului
CAPITOLUL II. MICROORGANISMELE STUDIATE I PROPRIETILE
TERAPEUTICE ALE PROPOLISULUI
2.1.
Microorganismele Gram pozitive i Gram negative studiate
2.1.1. Escherichia coli
2.1.2. Salmonella
2.1.3. Stapylococcus aureus
CAPITOLUL III. MATERIAL I METODE
CAPITOLUL IV. REZULTATE I DISCUII
CONCLUZII I PROPUNERI
BIBLIOGRAFIE
ANEXE

1
2
4
7
7
9
11
12
16
16
16
19
23
28
30
38
39
42

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

EFECTELE EXTRACTELOR DE PROPOLIS ASUPRA UNOR


MICROORGANISME PATOGENE
Maria NOVAC, Aurica Breica BOROZAN
Universitatea De tiine Agricole i Medicin Veterinar A Banatului Timioara
Calea Aradului, nr.119, 300645 Timioara, jud. Timi, borozan_a@yahoo.com
maria_29n@yahoo.com

REZUMAT
Propolisul are proprieti bactericide i anestezice care eclipsez de 5,2 ori aciunea
novocainei i 3,5 ori cocainei.
n studiul nostru am urmrit comportarea urmtoarelor culturi microbiene: Escherichia
coli (A), Staphylococcus aureus (B) i Salmonella (C) sub aciunea extractului de propolis brut
i a principalelor componente ale acestuia.Pentru fiecare compus s-a preparat cte cinci diluii.
Concentraiile celor cinci diluii au variat de la 0.1 mM/mL (A1,B1,C1), 0.01 mM/mL
(A2,B2,C2), 0.001 mM/mL (A3,B3,C3), 0.0001 mM/mL (A4,B4,C4), i 0.00001 mM/mL
(A5,B5,C5). Ca i variant control a fost utilizat o soluie de DMSO (DimethylSulfoxid ).Obiectivele urmarite n aceasta prima etap sunt: studiul unui amestec de propolis,
care provine din diferite zone ale rii; stabilirea concentraiei minime inhibante de propolis,
guercitin, catechin i acid galic pentru cele trei specii bacteriene: Staphylococcus aureus,
Escherichia coli i Salmonella; stabilirea principalului compus (guercitin, catechin i acid
galic) din amestecul de propolis cu efect antimicrobian ridicat.
Efectul antimicrobian al amestecului de propolis brut, depinde de concentraia testat. n
majoritatea cazurilor cele trei specii studiate au prezentat rezisten la concentraiile celor patru
extracte, ns Escherichia coli, a prezentat sensibilitate la amestecul de propolis brut (conc. 0.1
mM/mL) i quercitin (conc. 0.001 mM/ml). Speciile Salmonella i Staphylococcus aureus
prezint rezisten la toate concentraiile celor patru extracte testate.Dintre cele cinci
concentraii testate eficien prezint A1 (0.1 mM/mL), pentru amestecul de propolis brut i A 3
(0.001 mM/ml), pentru compusul quecitin. Activitatea biologic a propolisului depinde n
special de quercitin.
CUVINTE CHEIE
Escherichia

coli,

Salmonella,

Stapylococcus

antimicrobian.
2

aureus,

propolis,

activitatea

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

EFECTELE EXTRACTELOR DE PROPOLIS ASUPRA UNOR


MICROORGANISME PATOGENE
Maria NOVAC, Aurica Breica BOROZAN
Universitatea De tiine Agricole i Medicin Veterinar A Banatului Timioara
Calea Aradului, nr.119, 300645 Timioara, jud. Timi, borozan_a@yahoo.com,
maria_29n@yahoo.com
ABSTRACT
Propolis has antibacterial and anesthetic properties that eclipse the action of 5.2 times
novocaine and 3.5 times cocaine.
In our study we have studyed the behaviour of the following microbial cultures:
Escherichia coli (A), Staphylococcus aureus (B) i Salmonella (C) under the action of raw
extract of propolis and its main components. For each compound was prepared five dilutions.
The five concentrations of dilutions

ranged from 0.1 mM/mL (A1,B1,C1), 0.01 mM/mL

(A2,B2,C2), 0.001 mM/mL (A3,B3,C3), 0.0001 mM/mL (A4,B4,C4), i 0.00001 mM/mL


(A5,B5,C5). Version control was used as a solution of DMSO (Dimethyl-Sulfoxid ).
The objectives in this first stage are: a study of propolis, coming from different areas of
the country; establishment of minimum inhibitory concentration of propolis, quercetin,
catechins and gallic acid for the three bacterial species: Staphylococcus aureus, Escherichia coli
i Salmonella; determination of the principal compound (quercetin, catechins and gallic acid)
from mixture of propolis with high antimicrobial effect.
Antimicrobial effect of the mixture of raw propolis depends on the concentration tested.
In most cases the three species studied were resistant to concentrations of the four extracts,
however Escherichia coli, showed sensitivity to the mixture of raw propolis(conc. 0.1 mM/mL)
and quercetin (conc. 0.001 mM/ml).
Species of Salmonella and Staphylococcus aureus resistance to all concentrations of the
four extracts tested.Of the five concentrations tested efficiency has A1 (0.1 mM / mL), the
mixture of raw propolis and A 3 (0.001 mM / ml) for compound quecetin.The biological activity
of propolis depend mainly on quercetin.
KEYWORDS
Escherichia coli, Salmonella flexneri, Stapylococcus aureus, propolis antimicrobial activity.
3

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

INTRODUCERE
Denumirea de propolis provine din limba latin (pro-nainte; polis-cetate) .
Propolisul este un amestec complex de rinoase colectat de albine din exsudatele plantelor i
amestecat cu secreii ale hipofaringelui, cear de albine i polen.
Acesta este utilizat pentru fagurii de miere construcii i lustruire, pentru ntreinerea n
condiii aseptice a mediului din stup, pentru protecia i adaptarea de cuiburilor (12,13,20).
Propolisul reprezint un produs apicol cunoscut din cele mai vechi timpuri pentru
proprietile sale terapeutice, poate fi de dou feluri: poligam (provine de la mai multe plante) i
monofil (provine de la o singur plant). Apicultorii au presupus timp de secole c albinele
utilizau propolisul pentru a proteja colonia mpotriva a vnturilor reci de iarn sau a ploilor. nsa
cercettorii n secolul XX au descoperit c propolisul este mai mult dect att. La ora actual se
crede c aceast substan are urmtoarele scopuri:
- ntrete stabilitatea structural a stupului;
- face stupul mult mai uor de protejat prin nchiderea intrrilor suplimentare;
- mpiedic ptrunderea paraziilor i a bolilor n stup, dar i dezvoltarea diverselor
bacterii;
- mpiedic putrefacia n interiorul stupului;
- reduce vibraiile.
Primele nsemnri asupra produselor stupului de albine provin din vechiul Babilon, unde
mierea era inut la mare pre, fiind folosit ca mijloc de plat i ca hran pentru animalele
sfinte.
Mierea de albine i propolisul sunt produse care au fost folosite de secole n medicina
popular.(30)
Propolisul fost cunoscut i folosit nc dinaintea apariiei primelor texte scrise, medicina
strveche l prescrie pentru tratarea multor afeciuni, datorit calitilor sale bacteriologice.
Astfel, egiptenii, chinezii, grecii i romanii l-au folosit mai ales pentru calitile lui
vindectoare generale i pentru tratarea unor leziuni ale pielii.
Grecii i egiptenii au folosit propolisul la nceput ca un antiseptic. Egiptenii l foloseau
pentru mblsmarea mumiilor ferindu-le n acest fel de microbi i ali duntori.
n America Central propolisul era folosit pentru a trata febra, nc din secolul al XI-lea.
De asemenea era folosit i pentru tratarea rnilor deoarece era un bun antiseptic.
nc nainte de secolul al XV-lea, legionarii din imperiul roman aplicau propolis pe rni pentru a
se vindeca mai repede.
n Frana n secolele XVIII XIX, propolisul era folosit de asemenea la pansarea rnilor.

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Italianul Stradivarius din Cremona folosea propolisul pentru viorile sale extrem de
scumpe ce de sute de ani sunt i astzi cele mai cutate, el prepara lacul folosind propolisul pe
care-l obinea

dup o metod proprie, rmas

ns secret. Adevrata descoperire a

propolisului s-a produs abia n ultimele decenii, cnd s-a reuit punerea n valoare a imenselor
resurse terapeutice ale acestui produs apicol de excepie, realiznd adevrata binefacere a
acestuia.
Propolisul este utilizat n multe lucrri din stupin (ex.: bobiele de propolis sunt
introduse n afumtor, iar valul de fum rezultat este linititor pentru albine, extractul alcoolic de
propolis mpiedic albinele s l nepe pe stupar). Pentru a evita roirea de privar, stuparii,
amplaseaz n pomii din vecintatea stupilor, cteva buduroaie unse n interior cu o soluie de
propolis.
Pentru dezinfectarea stupilor, se recurge la operaii de flambare i vruire cu un lac
amestecat

cu propolis i alcool (dup metoda Latev).

Propolisul este folosit i pentru

lustruierea mobilei, fiind considerat lacul cel mai durabil i lucios. n propolis s-au gsit 21 de
flavonoide ( flavoane, flavonoli i flavonone), care i au rolul n protecia circulaiei sangvine
n

care

se

reduce

permeabiliatea

vascular

mrindu-i

rezistena

vaselor

capilare

(19,27,31,32,34,35).
Interesul pentru propolis a luat natere pornind de la cteva observaii: impasul n care
se gsete producia de medicamente, rezistena tot mai crescut a grupelor microbiene la
antibiotice i diferite substane chimioterapice, agresivitatea i virulena deosebit de mare a
unor tulpini, frecvena tot mai mare a mbolnvirilor, proprietile antimicrobiene i antivirale
ale propolisului.
S-a remarcat faptul c peste 10% din tulpinile stafilococice prezint rezisten la
penicilin. Multe dintre tulpini au manifestat rezisten i la o serie de alte chimioterapice
(aminoglucozide, macrolide, fluoroquinolone, etc.) devenind rspunztoare pentru o serie de
epidemii.
Aceste activiti biologice, cum ar fi antibacterian, antiviral, antifungic, printre altele,
continu s atrag interesul cercettorilor (1,5,10,12,13,18,29,44). Cele mai multe
antibacteriene, antifungice si anti-inflamatorii Activitatea de propolis se datoreaz prezenei de
compui polari, n special fenoli (flavonoide, acizi fenolici i esterii lor) i acizi aromatici (acid
cafeic i p-coumaric acid) (19, 30). Propolisul are, de asemenea, a fost raportat a fi de protectie
impotriva radiatiilor induse de daune (11) i s aib efect antimutagenic (46) i anti-inflamator
de activitate.
Compuii propolisului, ca urmare a bioactivitii lor nalte i a varietii produselor ce
pot fi obinute, prezint un potenial foarte mare pentru folosirea lor n domeniul medical.
5

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Obiectivele urmarite n aceasta prima etapa sunt:


-

studiul unui amestec de propolis, care provine din diferite zone ale rii;

stabilirea concentraiei minime inhibante de propolis, guercitina, catechina i


acid galic pentru cele trei specii bacteriene: Staphylococcus aureus,
Escherichia coli i Salmonella;

stabilirea

principalului compus (guercitina, catechina si acid galic) din

amestecul de propolis cu efect antimicrobian ridicat.


Extractele din amestecul de propolis i din cele trei componente principale: quercitin,
catechin i acid galic, au fost obinute n laboratorul de Chimie anorganic, Facultatea de
Tehnologia Produselor Agroalimentare, din cadrul Universitatii de Stiinte agricole si Medicin
Veterinara a Banatului Timisoara.
Testele microbiologice, pentru evidenierea activitii biologice a acestor compui, care
reprezint de fapt coninutul acestei lucrri au fost efectuate n laboratorul de cercetare cu
specific microbiologic i chimic, din cadrul Facultii de Tehnologia Produselor Agroalimentare.
Ambele laboratoare au dotarea corespunztoare studiilor ntreprinse n acest domeniu.
Cu toate c studiile noastre sunt abia la nceput, fiind testate pn n prezent apte tulpini
microbiene, din care n aceast lucrare sunt prezentate doar trei, ncercm s parcurgem i
celelalte etape propuse n scopul gsirii unei soluii pentru unele probleme care afecteaz
sntatea uman.

CAPITOLUL I. STADIUL ACTUAL AL CUNOTERII

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

1.1. ORIGINEA, TEORIILE REFERITOARE LA FORMAREA PROPOLISULUI I


RECOLTAREA PROPOLISULUI DE CTRE ALBINE I OM
Primele teorii asupra formrii i originii propolisului au fost foarte simple n general era
identificat cu ceara, dar pe msura obinerii de noi cunotine asupra vieii albinelor, acestea au
fost respinse astzi ele fiind doar etape parcurse pn la stabilirea teoriilor actuale.
n prezent, exist dou teorii privitoare la originea propolisului. Una din teorii
(principalii adepi ai acestei teorii sunt ROSCH, EVENIUS, BERLEPSCH, CIESELSKI i alii.
ROSCH a fost cel ce a pus bazele acestei teorii, teoria este cunoscut sub denumirea de teoria
lui Rosch) afirm c albinele recolteaz propolisul din rinile i secreiile de pe mugurii i
scoara anumitor arbori din familia foioaselor i rinoaselor din zona unde sunt amplasai
stupii.
n 1907, a fost avansat o nou teorie de Dr. KUSTENMACHER care explic formarea
i originea propolisului ntr-o alt manier. Conform acestei teorii, propolisul provine din polen;
albinele lucrtoare nghit polen i l acumuleaz ntr-o poriune din intestin denumit chylus
magen, adic stomac de polen. Conform prerii Dr. Kustenmacher acest balsam care rezult
constituie materia prim i esena propolisului.Trebuie totui remarcat faptul c nu toate
gruncioarele de polen sunt de aceeai calitate i o parte dintre acestea nu se dezintegreaz ca
urmare a umflrii i din acest motiv ele reprezint un balast n hrana albinelor, de care acestea
ncearc s se debaraseze. Din cauza densitii specifice mai reduse, acest balast de polen
ajunge n partea posterioar a intestinului unde se combin cu balsamul.
Prin micri de unduire ale stomacului de polen, albinele lucrtoare elimin aceast
mas de balsam i gruncioare de polen nedigerate pe care o depun pe pereii sau n crpturile
stupului. Acolo, materialul capt consisten formnd o mas de culoare galben sau galbenroiatic. Acestui material albinele i adaug nainte de a se modifica praf i impuriti
mecanice dnd propolisului o consisten care permite transportul lui dintr-un loc n altul.
Deci, conform dr. KUSTENMACHER propolisul este format din balsamul provenit din
prile exterioare ale gruncioarelor de polen pe care albinele l amestec cu cear i alte
materiale, impuriti n cantiti variabile. Cunotinele obinute n domeniul apiculturii de la
apariia acestor teorii i pn n prezent susin dar i neag anumite pri sau detalii ale acestora;
de aceea este necesar s se fac o analiz critic asupra lor.
Dac polenul este conform teoriei dr. Kustenmacher la baza formrii propolisului ar
trebui ca n acesta s se regseasc mai multe substane sub form de compui azotai, zaharuri
i lipide pe care polenul le conine n cantiti relativ mari. Rezultatele analizelor chimice nu
confirm ctui de puin aceasta tez. n plus, nici una din aceste substane coninute n polen nu
a fost identificat n propolis. Multe aspecte fiziologice, morfologice, biologice i anatomice
7

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

legate de propolis expuse de HAYDAK, EVENIUS i ROSCH contrazic teoria lui


KUSTENMACHER.
n ultima vreme, cercetrile efectuate asupra propolisului au furnizat numeroase date
obiective n favoarea teoriei dr. ROSCH. Studiul compoziiei chimice a propolisului au
demonstrat clar c baza acestei teorii este mai realist i mai bine fondat. Conform acestei
teorii se susine c mai ales substanele identificate de o manier indiscutabil n propolis se
regsesc ntr-una sau mai multe specii de plante vizitate de albine i c secreiile acestor plante
pot fi sursa de producere a propolisului.
Un lucru deosebit de important pus n eviden este participarea activ a albinei la
formarea propolisului. Prin secreiile sale glandulare pe care le adaug materiilor vegetale se
obine propolisul recoltat de apicultor din stup. Se demonstreaz c majoritatea substanelor de
natur flavonoid identificate i separate din propolis (GHISALBERTI, 1979) se gsesc n stare
liber ca agliconi i nu ca glicoside, form sub care acestea se gsesc n sursele vegetale. Se
pare deci c albina dispune n secreiile sale salivare de o substan ce are capacitatea de a
descompune glicosidele sau componentele lor principale pe care le transform apoi n propolis
i n hran (42).
Recoltarea propolisului de ctre albine
Propolisul sau cleiul albinelor este recoltat de ctre albine din rinile i secreiile
mugurilor unor plante la care ele adaug i secreii proprii.
Albinele identific particula de rin, o recolteaz cu ajutorul anterelor, iar

cu

mandibulele prinde bucata respectiv, o trage i o ntinde sub forma unui fir subire pn se
rupe. Manevreaz cu picioarele particula rupt i o depoziteaz n corbicule. Operaiunea este
repetat pn ce grunciorii de propolis ajung la mrimea potrivit. Descrcarea propolisului se
poate face chiar pe scndura de zbor i dureaz cteva ore, albina este ajutat de ctre alte albine
care rup si trag propolisul cu mandibulele i l depoziteaz la locul unde este necesar.
Propolisul poate fi recoltat numai la temperaturi ridicate (peste 20C) fiindc materialul
vscos este moale i mai uor de adunat i maleabil.
Albinele folosesc propolisul la sporirea pereilor interiori ai stupului; cu el completeaz
crpturile pe unde ar ptrunde apa din ploi i zpezi, curenii, dar i unii duntori.
Albinele, mpotriva acestora din urm, bareaz cu propolis urdinul prea larg, mai ales n
perioada de iarn cnd colonia, afectat de frig, se strnge sub form de ghem astfel stupul
rmnnd fr paz. n momentul n care temperatura mediului ambiant crete, albinele au
nevoie de mai mult aer, motiv pentru care rod aceast barier format din propolis i deschid
urdinul cnd au nevoie. Cu ajutorul propolisului, ele ntresc marginile laterale fragile ale
fagurilor nou-cldii i ramele stupului, fcnd o centur de ntrire (fig. 1.1) (35).
8

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 1.1. Propolis adunat pe speteza ramelor


(39)
Recoltarea i pstrarea propolisului de ctre om
Propolisul omogen se recolteaz n sezonul activ,adic la sfritul perioadei de
nmugurire a fiecrei specii de plante cu o anumit specificitate vegetativ.Pentru trebuinele
omului recoltarea propolisului se face prin rzuirea lui de pe podioare,rame, spetezele ramelor
sau cu ajutorul unor colectoare speciale pentru propolis.Rzuirea se execut cu dalta,cu ajutorul
unui cuit sau cu rclei ascuii.Cel care se ocup de recoltarea propolisului trebuie s aib grij
ca produsul s fie ct mai curat i fr impuriti (fig. 1.2).
n urma recoltrii,cantitatea ce se poate obine de la un stup variaz de la o regiune la
alta, putnd fi de 100 pn la 400 de grame, ea se face deobicei cnd stuparul controleaz stupul
iar temperatura mediului ambiant este de cel puin 20C.

Fig. 1.2. Rzuirea propolisului cu dalta


(31)
Pentru obinerea unor cantiti mai mari de propolis se pot utiliza fii din material
plastic care se fixeaz pe spetezele superioare ale ramelor iar la extremiti se pune o buc ic
de cear sau propolis.Aceste fii se instaleaz n luna aprilie i se ridic la nceputul lunii
octombrie.
Dup recoltare se condiioneaz prin eliminarea corpurilor strine cum ar fi rumegu de
lemn, achii, albine moarte sau resturi ale acestora.

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Propolisul se pune la pstrat n locuri rcoroase ,bine aerisite,lipsite de mirosuri strine


i umezeal,sub form de bulgri sferici (fig. 1.3) care se nvelesc n hrtie de staniol, n pungi
de plastic sau n borcane de sticl nchise cu dop de sticl, rodate i apoi parafinate.Se
recomand a nu se nclzi sau topi pentru ca el sa se comprime, pentru c prin acest procedeu se
pierd o parte din substanele volatile, degradndu-se valoarea lui biologic (28).

Fig. 1.3. Propolis sub form de bulgr sferic


1.2. PROPRIETI FIZICO-CHIMICE ALE PROPOLISULUI I FACTORII CARE
INFLUENEAZ COLECTAREA PROPOLISULUI DE CTRE ALBINE
Caracteristici fizice ale propolisului
Din punct de vedere al aspectului, propolisul se prezint ca o mas rinoas heterogen
de consisten solid, uneori compact ceroas provenind din particule maleabile i aderente,
alteori granuloas ori friabil, lund aspectul unor sfrmturi pulverulente. Aa cum s-a mai
menionat, propolisul este cunoscut i sub denumirea de clei de albine. La temperaturi
ridicate (20C), se nmoaie iar la temperaturi mai mari de 60C devine lichid. La temperatur
ambianta se prezint ca o mas dur i devine friabil la temperaturi sczute, sub 15C, chiar i
pentru sorturile ceroase.
Culoarea propolisului este ns deosebit de variabil n funcie de surs
vegetal vizitat de albine.
S-au efectuat studii pe eantioane de propolis provenind din diferite zone ale lumii i s-a
demonstrat faptul c:
- propolisul din zonele cu clim temperat prezint o gam de culoare ce variaz de la
brun deschis la brun nchis, uneori cu reflexe galben verzui;
- propolisul cubanez prezint mai multe varieti: rou, brun, verde i violet nchis;
- n Australia i n zonele cu climat tropical, culoarea propolisului poate fi pn la negru;
10

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

- propolisul brazilian are o culoare predominant verzuie cu nuane galben brune;


- propolisul din zonele apropiate de cercul polar (Finlanda) are o culoare portocalie;
Greutatea specific a propolisului variaz ntre 1,112 i 1,136.
Mirosul propolisului este variabil ca intensitate fiind variabil n funcie de zona de unde
a fost cules, nsa fumul pe care l scoate la ardere poart o arom de balsamuri i rini.
Gustul este plcut, uneori amrui, iute, astringent, fiind influenat de origine.
Consistena propolisului este vscoas, lipicioas pn la tare, casant, iar cnd este
luat ntre degete se frmnt.
Solubilitate. Propolisul este insolubil n ap, dar parial solubil n alcool, eter, aceton,
benzen cloroform, propilenglicol, dimetilsulfoxid, etilendiamin.
n funcie de temperatur, depinde nu numai viteza de dizolvare ci i trecerea n soluie
sau nu a unor fraciuni cum ar fi de exemplu ceara, care se dizolv n alcool fierbinte, dar este
greu solubil n alcool la rece.
Reziduurile de la dizolvare cuprind n majoritate impuriti i corpuri strine, alturi de
una sau sau mai multe dintre fraciunile care rmn parial solubile sau insolubile, n funcie de
selectivitatea dizolvantului. Trecerea parial ntr-un anumit solvent este luat n considerare
pentru realizarea extractelor de propolis, dar i pentru stabilirea calitii propolisului prin
aprecierea substanelor solubile, proporia acestora putnd fi dat ca indice de control calitativ
n industria farmaceutic. (selene.ro)
Compoziia chimic a propolisului
Nu este suficient de cercetat compoziia chimic a propolisului, ns pn acum s-au
identificat peste 149 de substane componente.
Propolisul are o compozitie chimica complexa, n funcie de diversitatea plantelor i
locaiile geografice din care albinele colecteaza polenul (1).
Rinile i balsamurile sunt componenii si de baz n proporie de 50-55%, cear 30%,
uleiuri eterice 15% i polen 5%. Rinile sunt alctuite n mare parte din acizi monocarboxilici
n stare liber, iar in rina de propolis s-au identificat acizii precum: acidul benzoic, cinamic i
cafeic, dar i substane cumarinice i terpenoidice, valin, alcool cinamic i benzilic, esteri ai
acizilor cinamic, benzoic i cumaric.(selene.ro)
Indicele de aciditate este mult mai mare dect al cerii de albine datorit coninutului mare de
acizi liberi ai rinii.
Ceara este al doilea component al propolisului avnd o dubl origine: ceara vegetal
recoltat de albine de pe mugurii copacilor i ceara de albine pe care acestea o pune n
compoziia produsului primar n timpul prelucrrii lui.
Se estimeaz c raportul ntre cele dou categorii de cear este de 1:3.
11

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Substanele minerale din propolisulu brut, dein 0,5-2%; microelementele avnd un loc
predominant.
n

extractul alcoolic uscat s-au pus n eviden 17 microelemente cum ar fi:

aluminiul,magneziu, zinc, cupru, siliciu, mangan, fier, bariu, titan, stroniu, argint, staniu,
nichel, cobalt, crom, molibden i vanadiu.
n propolis s-au pus n eviden i zaharuri: glucoz, fructoz, melezitoz, precum i
vitaminele A, B, E, C i PP, dar i enzime din grupa transhidrogenazelor (19,42).
1.2. FACTORII CARE INFLUENEAZ COLECTAREA PROPOLISULUIDE CTRE
ALBINE
Principalii factori care influeneaz colectarea propolisului de ctre albine sunt:
Rasa i ecotipul
S-a remarcat o propolizare mai intens la albina caucazian (Apis mellifera caucasica),
albina neagr european (Apis mellifera mellifera), dar i la unele rase africane (Apis mellifera
unicolor i Apis mellifera intermissa).
Albina romneasc (Apis mellifera carpatica) colecteaz puin propolis, ns cel mai slab
instinct de propolizare se gsete la ecotipul din Cmpia de Vest.
Temperatura aerului
Cantitile mari de propolis au fost colectate i depozitate n sezonul cald. Datorit
temperaturilor ridicate substanele rinoase i ceroase se nmoaie fcndu-le mai plastice i
mai uor de adunat.
Individualitatea
Exista familii de albine n cadrul aceleiai stupine care au un instinct mai pronunat de
colectare a propolisului.
Sezonul
Primvara devreme crete cantitatea recoltei de propolis, la fel i toamna cnd albinele
i pregtesc cuibul pentru iernare. Unii apicultori afirm c atunci cnd albinele propolizeaz
urdiniul i cuibul puternic e un semn c iarna ce urmeaz va fi aspr.
Activitatea de cretere intens a puietului
n timpul depunerii oulor de ctre matc, albinele sunt obligate s foloseasc propolisul
la lcuirea celulelor unde vor fi depuse oule.
Zona geografic
Cantitatea de propolis este influenat de amplasarea, clima i vegetaia unde sunt
amplasate stupinele. n zonele mai reci i n zonele cu pduri propolizarea este mai mare dect
n zonele de es (35).

12

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

1.3. FALSIFICAREA PROPOLISULUI


Propolisul poate fi falsificat cu rin de conifere,colofoniu (sacz) i cu cear de albine,
aceasta din urm poate fi uor descoperita pentru c atunci cnd este adugat propolisului i
depete coninutul de 30%.
Saczul adugat propolisului l face tare i casant la temperatura camerei, dndu-i un
aspect sticlos strlucitor asemenea chihlimbarului.
Rinile de conifere adaugate sunt uor identificate n propolis din cauza mirosului de
terebentin.
Pentru stabilirea corect a calitii propolisului se folosesc analizele de laborator (28).
1.4. ACTIVITATEA BIOLOGIC A PROPOLISULUI
Faptul ca propolisul are proprietati antimicrobiene este un lucru deja cunoscut de toata
lumea i se presupune c aciunea antimicrobian a propolisului este constituit dintr-o fraciune
a estetrilor aromatici.
Pe propolis nu se dezvolt nici un mucegai datorit faptului c din el s-a extras un
antibiotic care are nsuirea de a distruge att microbii ct i ciupercile. Propolisul are
proprieti bactericide i anestezice care eclipsez de 5,2 ori aciunea novocainei i 3,5 ori
cocainei.
Propolisul a fost folosit de catre om din timpuri stravechi ca medicament impotriva unor
boli, deoarece s-a constatat efectul antimicrobian al acestuia.

In ultima perioada, datorita

rezistentei unor agenti patogeni fata de medicamentele existente pe piata, atentia cercetatorilor a
fost orientata spre sursele naturale, cum este si propolisul.
propolis prin procesul

de

extraciemetanol

i metoda

Coninutul de flavonoide de
de hidroliz de

acid.prezent

Studiul activitatii antibacteriene a extractelor metanolice de propolis relev faptul


c, dupa

perioada

de

incubare, concentraiile minime

inhibitorii (CMI) i

zonele maxime inhibitorii variaza in functie de specia bacteriana.


Activitiile antimicrobiene si antivirale ale extractelor de propolis atrag in continuare
interesul cercetatorilor din domeniu (1, 4,9,10,11,12,13,25,33). Proprietile biologice ale
propolisului sunt influenatede speciile de plante (6,13,27).
Activitiile biologice ale extractelor de propolis
(flavonoide,

acizi fenolici i

esterii

lor)

sunt date de prezenfenolilor

acizi aromatici (acid

cafeic i acid

p-

cumaric), (14,26).
A fost raportat faptul ca propolisul are, efect antimutagenic (36) i anti-inflamator
(24,33).

13

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Diferene semnificative privind activitatea antibacteriana a extractelor de propolis, au


fost observate ntre regiunile de provenienta ale acestuia, n funcie de microorganismele testate
i procedura folosit pentru prepararea extractelor. Speciile bacteriene Bacillus subtilis i
Staphylococcus aureus au prezentat sensibilitate la extractul alcoolic (70%) de propolis (30).
Cercetrile efectuate pe extracte de propolis , obtinute cu ajutorul unor solventi diferiti,
la trei valori ale pH-ului (usor acid, neutru si usor alcalin), pe 12 tulpini bacteriene, au
demonstrate faptul ca extractele au avut un efect antibacterian fata de bacteriile test, cu exceptia
bacteriilor cuprinse in genul Salmonella. De asemenea a fost sesizat faptul ca, un pH usor acid
conduce la un efect antibacterian mai pronunat (21). Propolisul este cunoscut astzi ca unul
dintre cele mai surprinztoare produse naturale datorit studiilor i cercetrilor efectuate care
atribuie acestuia i diferitelor sale fraciuni nenumrate aciuni biologice i efecte terapeutice.
ntre aciunile terapeutice se pot enumra: antimicrobian, antibiotic, antifungic,
antiinflamatorie, analgezic, antioxidant i anti-tumoral.La ora actual, pe plan mondial,
propolisul este utilizat pe scar larg n diferite formule de medicamente (ndeosebi n Europa
rsritean), suplimente sau aditivi alimentari i buturi pentru a mbunti starea de sntate i
pentru prevenirea unor afeciuni: inflamatorii, boli cardiace, hepatice, diabetul i chiar unele
forme de cancer.Cu toate aceste dovezi asupra virtuilor sale terapeutice, ansa de a se
transforma dintr-un remediu empiric ntr-un medicament, depinde foarte mult de purificare,
standardizare i supunerea sa la toate celelalte etape de cercetare i control: chimic, tehnologic,
toxicologic, preclinic i clinic.Progresul realizat n domeniul chimiei, farmacodinamiei i a
tehnologiilor farmaceutice au condus la stabilirea anumitor reguli pentru medicamente, ntre
care cea mai sever este cea privitoare la o anumit relaie ce trebuie s existe ntre produsul
respectiv i efectele sale asupra organismelor. Din aceast relaie se nate noiunea de doz
terapeutic, mai ales pentru substanele active pure, indiferent de forma farmaceutic n care
acestea sunt prezentate.Prin standardizarea extractelor, tincturilor, etc., noiunea de doz poate fi
extins i la medicamentele sau produsele care sunt amestecuri naturale de substane active.
Standardizarea nseamn deci uniformizarea concentraiei n principii active din produsele finite
dimensiune ce poate fi exprimat prin componentul cel mai caracteristic. Atunci cnd
metodele fizico-chimice nu pot fi aplicate, standardizarea se poate face utiliznd o metod de
control biologic. Oricum, standardizarea extractelor naturale este de mult vreme o condiie de
la sine neleas.Propolisul este cunoscut ca fiind activ la nivelul organismelor, dar n cursul
ultimelor decenii, s-a raportat o larg varietate a compuilor si. De aceea extractele de propolis
de uz medicinal trebuie s rspund cerinei privitoare la raportul dintre cantitatea administrati
efectul obinut; aceasta nseamn c att experimentele de laborator ct i cele clinice trebuiesc
efectuate numai cu extracte standardizate.Orice extract, presupune nainte de orice altceva, s se
14

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

obin un produs mai pur; un extract standardizat ofer posibilitatea de a fi administrat n


anumite cantiti ce conin concentraii controlate de substane active, astfel nct cu siguran el
s fie lipsit de toxicitate, s ofere o eficiena terapeutic maximi s permit individualizarea
tratamentelor.Extractul de propolis standardizat, departe de a fi un produs toxic, este totui
capabil s prezinte o serie de efecte secundare atunci cnd anumite doze sunt depite.
n acest sens, experiena Romniei, prin Centrul Medical de Apiterapie al Institutului de
Cercetare i Dezvoltare pentru Apicultur, a dovedit c rezultatele experimentelor biochimice i
farmacologice efectuate pe organisme sntoase precum i efectele sale pe organisme animale
cu stri patologice induse sunt elemente fundamentale n planificarea i efectuarea unui
experiment clinic. Extractul de propolis standardizat (extractul moale sau spiss) a fost supus
unor experimente biochimice pentru a i se demonstra eficacitatea asupra ficatului, sngelui,
sistemului muscular, organelor limfatice, glandelor suprarenale, metabolismul general al
glucidelor precum i n anumite aspecte imunobiologice. Datele privitoare la efectele
propolisului asupra organismului animal cu condiii patologice induse privesc aciunile
hepatoprotectoare i antiinflamatoare precum i investigaii asupra aciunii epitelizante, asupra
permeabilitii vasculare i aciunea antiviral (testat pe anumite virusuri multiplicate n culturi
de esuturi), (49).
Studiile efectuate pana in prezent pe extractele de propolis,

ncearc

s clarifice

efectele posibile protectoare ale propolisului n remedierea problemelor de toxicitate a clorurii


de trifenilstaniu (TPTCl) privind performana de reproducere, nivelul de testosteron, activitatea
de peroxidare a lipidelor i enzimelor n plasma seminal a iepurilor masculi albi din Noua
Zeeland .
Trifenilstaniu este cunoscut pentru provocarea peturbrilor endocrine i toxicitii n
reproducere, scderea producerii de testosteron. Propolisul este considerat ca a fi un important
antioxidant.
Rezultatele au artat c calitatea materialului seminal s-a deteriorat dup tratamentul cu
TPTCl. De asemenea, nivelurile testosteronului, masa corporal, greutatea relativ a testiculelor
i epididimului au sczut.
Trifenilstaniu s-a constatat c se acumuleaz n organele, muchii i capul
spermatozoiilor cauznd distorsiuni n reproducere de reglementare a hormonilor
modificarea reproducerii a unor

i de

clase de animale. Trifenilstaniu cauzeaz masculinizarea de

molutelor de sex feminin sau crete dezvoltarea organelor sexuale, care sunt n contrast cu
sexul lor real la anumite specii de melci de ap.
De asemenea cauzeaz o scdere a producei de testosteron.

15

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Compui organostanici sunt utilizai intens ntr-o varietate de produse industriale ca


echipamentele sportive i manui de plastic, ca stabilizatori de caldura n producia de clorur de
vinil , ca i stabilizatori pentru mbunatirea rezistenei la radiaile ultraviolete, i utilizate n
agricultur ca fungicide pentru a proteja culturile.
Propolisul conine unele minerale, cum ar fi Mg, Ca, I, K, Na, Cu, Zn, Mn i Fe, precum
i unele vitamine cum ar fi B1, B2, B6, C si E, precum i un numr de acizi grai.
Propolisul administrat singur a crescut semnificativ nivelurile testosteronului, masa
corporal, greutatea relativ testiculelor i epididimului, caracteristicile materialului seminal i
enzimelor din plasma seminal, a redus nivelurile radicalilor liberi i a lactat dehidrogenazei.
n plus, prezena propolisului mpreun cu TPTCl amelioreaz efectele sale toxice.
S-a concluzionat c propolis poate fi eficace n protecia toxiciti reproductive induse
de TPTCl.
A fost demonstrat c propolisul asigur o protecie asupra infertilitii prin mbuntirea
produciei, mobilitii i calitatea spermei i a crescut procesul de steroidogenezei i prin
urmare, producia de testosteron. n plus, de propolisul protejeaz ADN-ul spermei de la
deteriorarea oxidativ cauzat de acidul reactiv tiobarbituric.
Rezultatele actuale au artat c expunerea la trifenilstaniu

cauzeaz deteriorarea,

calitii materialului seminal, indus de radicalii liberi i a sczut activitatea enzimei n plasma
seminala. n plus,studiul de fa a elucidat efectele terapeutice ale propolisului administrat n
asociere cu trifenilstaniu a redus la minim toxicitatea sa pentru reproducere. n plus, propolisul
singur a avut efecte benefice n mbuntirea performanelor de reproducere a iepurilor de sex
masculin (23).
S-au fcut studii pe propolis, care a fost colectat din dou zone din Egipt (El-Saff i
Ismailia) pentru a investiga, activitatea antimicobian (Staphylococcus aureus, Escherichia coli
i Candida albicans) antioxidant i chimic a propolisului.
Rezultatele de evacuare a radicalilor liberi efectul de El-Saff si Ismailia propolisul a aratat o
activitate dependent de concentraie.
Activitatea antioxidant a variat n funcie de materialul examinat.
Propolisul El- Saff a avut un efect mai mare n activitatea antioxidant dect propolisul
Ismailia , el a avut o mai mare activitate antibacterian potriva Staphylococcus aureus i o
activitate anti-fungic mai mare mpotriva Candida albicans. n timp ce propolisul Ismailia
avea o mai mare activitate antibacterian mpotriva Escherichia coli , dect propolisul El-Saff.
Compoziia chimic a probelor de propolis au fost cercetate de GC/MS, unde 75
compui au fost identificai, 22 fiind noi pentru propolis.

16

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Propolisul Ismailia este caracterizat de prezena unei foarte important cantitate de


esteri aromatici (47,3 %) i triterpenice (17,3 % ), n timp ce El-Saff propolis cuprinde doar 3%
i 1,9%.
Propolisul El-Saff a avut o cantitate semnificativ foarte mare (27%) din etanol 2,6-bis(benziloxi)-4-pentylphenyl, care este, de asemenea, un compus nou din propolis.
Studiile din prezent au raportat c antioxidanii gsiii n propolis protejeaz pacienii de
cancer de efectele secundare a agenilor chimioterapeutici (2).
Propolisul este un produs care a fost folosit de secole n medicina popular.
Mai multe studii au fost efectuate pentru a autentifica acest medicament popular i
proprietile sale fiind utilizat de multe ori n medicin .
Utilizarea terapiilor alternative se datoreaz, n mare parte dezvoltrii rezistenei la
antibiotice a bacteriilor i/sau o mai mare contientizare a efectelor adverse a mai multor
produse farmaceutice(37).
Aciunea antiviral a propolisului. Se tie c virusurile constau dintr-un nucleu infecios
ce conine un acid nucleic (ADN sau ARN) i o manta proteic. Adeseori, acestea pot penetra
uor n celulele umane. Pentru a deveni active, mantaua lor proteic trebuie s fie digerat de
enzimele prezente n lizosomi. Lizosomii sunt vezicule acoperite de o membran lipidic care n
prezena flavonoizilor nu poate fi penetrat de virusuri. Fondul acestui fenomen nu este nc
deplin neles, dar se poate emite o ipotez. Un exemplu ar putea fi neutralizarea gruprilor
amino din mantaua proteic prin fosforilare o prezumie pentru penetrarea membranelor
lipidice lizosomale.Cercettorii au testat efectele antivirale a 5 specii de flavonoizi specifici
prezeni n propolis: crizina, kaempferol, acacetina, galangina i quercetina. Utiliznd culturi de
celule in vitro, s-a determinat replicarea i infectivitatea unor tulpini de virus herpetic,
adenovirus, coronavirus i rotavirus. Crizina i kaempferolul au prezentat o aciune inhibitorie
dependent de doz asupra replicrii virale intracelulare a tuturor tulpinilor virale testate dar nu
afecteaz infectivitatea acestora. Ambii flavonoizi se dovedesc foarte activi n inhibarea
replicrii diferitelor tipuri de virusuri herpetice (HSV herpes simplex): HSV-2 (0,2 g/ml si
0,1 g/ml), HSV-1 (0,5 g/ml i 2 g/ml). La 10 g/ml crizina i kaempferolul reduce
replicarea virusurilor n proporii de 45% i respectiv 65% la coronavirusul bovin, 30% i 50%
la coronavirusul uman, rotavirusul SA-II 25% i respectiv 35%. Quercetina la doza de 60g /ml
i crizina la 10 g/ml au redus infectivitatea virusurilor herpetice (HSV-2, HSV-1i TKHSV-1)
cu aproximativ 65% i respectiv 50%. S-a observat c propolisul este foarte activ in vitro
mpotriva virusului polio i herpetic. La o concentraie de 30 g/ml propolisul reduce titrul
virusurilor herpetice de 1000 de ori, inhib replicarea HSV cu 99,5% i inhib total formarea
plgii de poliovirus. S-a observat de asemenea i o aciune virulicid asupra virusurilor
17

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

ncapsulate, herpes simplex i virusul stomatitei veziculare (VSV). In acest caz se sugereaz c
flavonoizii galangini crizin majoritari n eantioanele de propolis recoltat din Frana (i n
general din zona european) acioneaz sinergic n aciunea antiviral a propolisului. ntr-un
studiu mai aprofundat asupra aciunii inhibitoare a flavonoizilor asupra virusurilor, s-au
observat efecte sinergice individuale i binare ale flavonolilor (galangin, kaempferol i
quercetin), flavonelor (crizin, apigenin, luteolini tectocrizin) i a flavanonelor
(pinocembrini izosakuranetin) asupra infeciei cu virus herpetic de tip I i replicarea acestuia
n celule renale de maimu in vitro. Activitatea flavonolilor descrete n ordine invers cu
numrul de grupri hidroxil substituite: galangin > kampferol > quercetina. Afinitatea
compusului la lipide (lipofilie) pare s aib o importan deosebit pentru activitatea biologic.
Numai galangina, kaempferolul i balsamul de propolis pare s fie activi cu adevrat mpotriva
HSV-I. Ali constitueni de tipul metoxiflavonelor minore sau conjugai de tip cafeoil pot
contribui la rndul lor la aciunea antiviral. Cele mai importante combinaii binare au fost:
kaempferol + luteolin; quercetin + crizin; galangin + apigenin; kaempferol + apigenin;
quercetin + apigenin. Adeseori sinergismele indic diferite moduri de aciune dar ntruct
mecanismul (ele) inhibiiei virale mai trebuie nc elucidate, se fac nc speculaii (49).

CAPITOLUL 2. MICROORGANISMELE STUDIATE I PROPRIETILE


TERAPEUTICE ALE PROPOLISULUI
2.1. MICROORGANISMELE GRAM POZITIVE I GRAM NEGATIVE STUDIATE
2.1.1. Escherichia coli
ncadrare taxonomic
Escherichia coli face parte din ncrengtura Eubacteria,clasa Protobacteria, ordinul
Enterobacteriales, familia Enterobacteriaceae, genul Escherichia.
Familia Enterobacteriaceae, include 28 de genuri cu 135 specii ubicuitare, prezente mai
ales n sol, ap, intestinul omului i al animalelor.Majoritatea speciilor sunt patogene pentru om,
producnd infecii grave.
18

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Sunt bacili Gram-negativi, mobili sau imobili, aerobi i facultativ anaerobi, nesporulai
i necapsulai.
Cele mai importante genuri ale familiei Enterobacteriaceae, sunt:
- genul Salmonella, dintre specii Salmonella typhi prezint un nalt grad de patogenitate pentru
om,este agentul febrei tifoide
- genul Proteus, cu specia Proteus miriabilis, specie condiionat patogen care n anumite
situaii poate produce infecii ale tractului urinar
- genul Yerisnia,cu specia Yerisnia pestis, agentul etiologic al pestei
- genul Escherichia, din care face parte Escherichia coli.
Genul Escherichia cuprinde o singur specie: Escherichia coli
Escherichia coli a fost pus n eviden de ctre Jh. Escherich n anul 1895.Aceasta a
fost izolat dintr-o serie ntreag de nfecii.
Habitat
Colibacilii sunt rspndii peste tot n mediul nconjurtor: sol, ap, aer, alimente, etc.n
coninutul intestinal al omului i al animalelor formeaz aproximativ 80% din flora rezident
unde exercit un important rol n sinteza unor vitamine din grupul B i K i menine un echilibru
normal al biocenozei.
Este prezent de asemenea n regiunea perineal, vagin, uretr, dar i pe epiderm.
n mediul extern se localizeaz ntr-un numr foarte mare mai ales n spitale.Prin identificarea
colibacililor n ap, alimente etc., se determin indicele coli care este un indicator cu care se
apreciaz gradul de poluare al mediului sau al alimentelor.
Morfologie
Bacteriile de Escherichia coli se prezint sub forma unor bastonae cu capetele
rotunjite,de dimensiuni variabile, cuprinse ntre 2-6 micrometri lungime i 1-1,5 micrometri
lime.Avnd un polimorfism accentuat, poate lua uneori form filamentoas de 6-10
micrometri n culturile vechi sau chiar forme scurte cocoide (fig. 2.1).
Bacili pot fii singulari sau se pot agrega n perechi (formele filamentoase).
Sunt specii mobile, mobilitatea fiind dat de 2-6 bacili peritrichi, dar exist i variante
puin mobile sau chiar imobile.Sunt Gram-negative, capsulate, unele specii fiind
pseudocapsulate sau necapsulate.
Capsula se prezint ca o mas gelatinoas hialin, care nvelete bacteria la
exterior.Dimensiunile capsulei variaz, putnd ajunge de la 20 micrometri pn la civa
microni.Datorit faptului c nu se coloreaz capsula cu colorani obinuii n frotiuri se observ
ca un halou care nconjoar bacteria.Capsula are un rol important n virulen.
19

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 2.1. Escherichia coli - aspecte macroscopice i microscopice


(56)

Caractere de cultur
Bacteriile cresc pe medii de cultur obinuite, fiind puin pretenioase.Sunt specii
aeorbe,facultativ anaerobe care se comport diferit fa de aceste medii.n bulion tulbur
uniform mediul cu formarea unui depozit care se disperseaz uor.
n culturile vechi pot forma un inel aderent i foarte rar o pelicul.Pe geloz se dezvolt
colonii rotunde, opace, convexe, cu margini regulate, de tip S.Formele R, sunt
reprezentate de colonii uscate, turtite, cu margini dinate, aderente la mediu.Coloniile au un
diametru de 2-3 mm i degaj un miros specific de amoniac.
Pe mediul de cartof se dezvolt culturi uor pigmentate.
Proprieti biochimice
Escherichia coli fermenteaz gluoza, lactoza, maltoza, trehaloza, manitolul i alte
zaharuri cu producere de gaz.Acidific i coaglueaz laptele, produce -galactozidaz i lizin
decarbozilaz,nu degaj H2S i nu lichefiaz gelatina.
Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici

20

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Escherichia coli poate supravieui luni de zile n mediul extern (sol, materii fecale de la
om i roztoare etc.)
Suport variaii lungi de temperatur i reacie chimic, dar temperatura optim este de
37C i pH-ul optim cuprins ntre 7,2 i 7,6. Sub aciunea cldurii germenii pot rezista 15-20
minute la 60C i 5-7 minute la 100C.Nu rezist la frig, acetia dac sunt congelai mor n
cteva zile.
Sunt sensibili la aciunea bacteriostatic a unor concentraii de bil i sruri biliare, la
aciunea dezinfectantelor uzuale: fenol, sublimat, cloramin, Cl n concentraii de 0,5
1

1000000 avnd un efect letal asupra bacteriilor;

1i asupra coloraniilor din

grupa trifenil-metanului ca verdele briliant i verdele malahit prezint solubilitate, de asemenea


clorura de litiu, srurile de Se, teluritul de potasiu, tetrationatul n funcie de concentraie, pot
avea aciune bacteriostatic asupra lor.
Rezistena la substanele antibiotice
Escherichia coli este rezistent la penicilin i carboxipeniciline (aproximativ 10% din
tulpini), cefalo-sporine precum i la asociaia amoxacilin clavulanat.
Sunt sensibili la aciunea beta-lactaminelor (aproximativ 2/3 din tulpini), fluoroquinolonelor,
etc.
Caractere de patogenitate
Escherichia coli este condionat de germenii patogeni, care numai n anumite condiii
pot provoca diferite infecii.Afeciunile care apar se datoreaz toxinelor pe care bacteriile le
elibereaz n organism : enterotoxine i endotoxine.
Enterotoxinele sunt de dou tipuri: termostabile, care produc enterit dizenteriform i
termolabile, care reprezint o cauz a apariiei diareii holeriforme.
Endotoxinele pot fi de natur proteic sau de natur glucido-lipidic.Prin
supranmulirea bacteriilor i eliminarea acestor endotoxine n snge, mucoase sau alte esuturi
se produc diferite afeciuni locale sau sistemice, ca de exemplu leziunile viscerale, mai ales la
nivelul capsulei suprarenale.Virulena la Escherichia coli este mai redus.
Infeciile produse de Escherichia coli.
Escherichia coli este o bacterie condiionat patogen care n anumite situaii poate
produce infecii variate ca numr i form de manifestare, dar i localizare.Dintre acestea cele
mai grave sunt infeciile tractusului urinar.
n urma numeroaselor studii s-a stabilit c n peste 90% din cazuri, aceste infecii se
prezint sub mai multe forme : cistice, uretrocistite, nefrite i enterita grav a sugarului.
enterita grav a sugarului, o afeciune a tubului digestiv caracterizat prin diaree, stare avansat
de deshidratare i o masiv pierdere n greutate,este o cauz major a mortalitii
21

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

infecii intestinale ca :
-enterite, colite, entero-colite
-toxiinfecii alimentare
-infecii biliare
-infecii cu diverse localizri : apendicite,peritonite, meningite, bronhopneumoni
-infecii ale plgilor i ale arsurilor
-infecii ORL
-infecii genitale
-infecii noscomiale
Tratament.Profilaxie
n cazul infeciilor tubului digestiv manifestate prin diaree, nu esre recomandat un
tratament antibiotic datorit riscului dezvoltrii sindromului hemolitic, uremic, dupa
administrarea de antibiotice : aminoglycoside, ciprofloxacin.
Pe lng antibiotice se administreaz acciunurile anticolibacilare, foarte eficiente n
tratarea bolnavilor, mai ales cnd antibioticele nu dau rezultate.Acesre vaccinuri sunt preparate
fie numai din culturi de Escherichia coli

inactive (vaccinurile monomicrobiene), fie din

asociaii de germeni Escherichia coli cu alte specii : Clostriduim perfrigens, Pseudomonas


aeruginosa, Salmonella etc. (vaccinurile polimicrobiene).
Alte specii de Escherichia
n prezent se mai cunosc 3 specii de Escherichia .
Escherichia hermani, care produce un pigment galben i care a fost izolat din plgi,
snge, lichidul cefalorahidian, dar i din mediul extern, nu se cunoate un rol patogen, al acestei
specii.
Escherichia blattae, bacterie care a fost izolat de la Blatta Orientalis (gndacul de
buctrie)
Escherichia vulmeris, produce de asemenea un pigment de culoare galben, a fost
localizat din plgi umane infectate.Aceasta este cea mai nou specie a genului Escherichia.
Importan
Escherichia coli este o bacterie utilizat n aprecierea igienico-sanitar a apei i a
alimentelor.Aceast apreciere se face prin stabilirea indicelui coli (titrul coli).
Indicele coli reprezint numrul de germeni coliformi (numrul colibacililor, ct i al altor
enterobacteriacee) din ap i alimente, stabilii n urma tehnicii de numrtoare care poart
numele de colimetrie.Acest indice permite aprecierea gradului de poluare al apei i al
22

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

alimentelor cu materii fecale i n funcie de valorile pe care le reperezint i dac corespund


sau nu cu standardele de stat, se poate stabili dac o surs de ap potabil sau dac un aliment
este bun de consum.
Escherichia coli

este cel mai utilizat organism viu n cercetri, mai ales n ingineria

genetic.Cele mai multe studii s-au realizat n scopul cunoaterii tehnicii ADN recombinat prin
care s-au vehiculat genele purttoare ale informaiei genetice n scopul obinerii de caractere
noi(5).
2.1.2. Salmonella
Taxonomie
Regnul: Bacteria
ncrengtura: Proteobacteria
Clasa: Gamma Proteobacteria
Ordinul: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Genul: Salmonella
Specii: S.arizonae, S.bongori, S.choleraesuis,
S.subterranea, S.typhi, S.typhimurium.

S.enterica,

S.enteritidis,S.

paratyphi,

Istoric
Eberth n anul 1880, a izolat primul reprezentant al genului la om, dintr-un caz de febr
tifoid.Cu cini ani mai trziu,Salmon a izolat germenul de la porci cu leziuni de pest creznd n
mod eronat, c acesta este agentul etiologic al acestei boli.
Morfologie
Celulele dau form de bacili sau cocobacili, de 2-5/ 0,7-1,5 microni, nesporulai,
necapsulai, sunt Gram-negative, sunt mobile datorit numrului variabili de cili peritrichi.
Condiii de cultivare i caractere culturale
Salmonella se dezvolt bine la 370C n 24 ore n bulion i agar.
Nu sunt germeni pretenioi.
Se dezvolt pe medii obinuite lichide sau solide, formnd colonii de tip S
sau R.Cultivarea pe mediile cu snge nu determin hemoliza.
Avand n vedere c salmonelele se izoleaz frecvent din
materiile fecale
i
c aspectele coloniilor de enterobacterii sunt deseori identice pe medii obinuite,
pentru izolarea salmonelelor i identificarea lor sunt necesare medii de mbogire (cu selenit
sau mediul Muller Kaufmann) i medii de cultura selective: Leifson, Istrate- Meitert, Wilson
Blair. Celulele au forme bacilare (Fig. 2.2.).
Pe mediile de imbogire coloniile bacteriene se dezvolt prompt (24 de ore), fr a
modifica culoarea mediului pe care cresc. Salmonelele vireaz n caramiziu n 24-48 de
ore mediul cu selenit i decoloreaza mediul Muller Kauffmann
Pe mediile moderat
selective IstratiMeiter si Leifson apar
sub
form
de colonii bombate, rotunde, transparente, lactozo-negative.
Pe mediul nalt selectiv Wilson Blair salmonelele dezvolt colonii mici de culoare
neagr, lucioase cu o zon metalic n jur.
Pe AABTL este lactozo-negativ.

23

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 2.2. Salmonella - aspecte macroscopice i microscopice


(54, 55)

Habitat
Salmonella, este foarte raspandit n natur.Toate serotipurile de Salmonella
enterica subsp. enterica sunt parazite pentru om i mamifere, n timp ce celelalte subspecii,
precum i Salmonella bongori se ntalnesc n special la animalele cu snge rece (peti, erpi),
la psri i la insecte. Se gsesc frecvent n intestinul psrilor, mamiferelor, omului bolnav,
purttorilor sntoi.Se pot izola din mediu de pe alimente infectate, din ape de suprafa, ape
reziduale, unde pot supravieui luni i chiar ani (sol).Multiplicarea n mediul exterior este
posibil dar nesemnificativ i fr importan practic.
Proprieti antigenice
Salmonella posed 3 categorii de antigene- antigene somatice O, antigene flagelare H i
antigene de suprafa Vi care sunt amplasate n celula bacterian astfel: la suprafaa celulei se
gsete antigenul Vi, iar limitrof acestuia nspre interior,antigenele O, iar antigenele H se afl n
structura cililor.
Antigenele somatice O sunt alcoolo-rezistente reprezentante de complexul lipopoliglucidic din membrana extern a peretelui celular i termostabile.
Aglutinarea O are aspect granular i este inhibat de formol n concentraie de 0,5 %.
Antigenele flagelare H sunt termolabile,de natur proteic,sensibile la
alcool.Aglutinarea H are un aspect floconos nefiind inhibat de formol.
Antigenele de suprafa Vi, termolabile insensibile la alcool i formol. Antigenul Vi fiind
situat n celul la exterior antigenului O mascnd i mpiedicnd aglutinarea cu seruri anti O.
(18)
Caractere biochimice
Speciile din genul Salmonella sunt aerobe, facultative anaerobe.
Temperatura optim de cretere este de 37 0C, dar se pot dezvolta i ntre 10-450 C,
la un pH optim intre 7,2-7,6.
Salmonella nu fermenteaz lactoza dar descompune glucoza.
Salmonella typhi fermenteaz glucoza numai cu producere de acid iar celelalte specii de
Salmonella fermenteaz glucoza cu producere de gaz.
Rezistena n mediu, la ageni fizici, chimici i biologici
Sunt germeni deosebit de rezisteni.
24

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

n afara organismului, n apa i sol pot supravieui timp


ndelungat. Laptele constiuie
un
mediu
de cultur favorabil,
salmonelelle putnd supravieui 30-35 de zile (toxiinfecii
alimentare),
rezist 4
ani n pulberea de ou a crei utilizare n alimentaie este interzis.
Culturile de salmonelle sunt distruse prin caldur la 600 C (caldur umed) n 15-20 minute.
Substanele clorigene le distrug n cteva ore (var cloros 20%, cloramina 5%)
iar acidul fenic 5% n cteva minute.
i pot catiga rezisten la antibiotice.
n general sunt sensibile la cloramfenicol, streptomicin, tetracicilin, ampicilin i
bacteriofagi specifici.
Caractere de patogenitate
Salmonella spp. devine patogen prin multiplicare i invazivitate.
Este obligatorie colonizarea realizat cu ajutorul unor structuri de aderare (adezinele)
care induc modificari la nivelul membranei celulare. Studii de fiziopatologie fundamental
au identificat un receptor hormonal afectat prin ataare i invazie bacterian.
De menionat ca la genul Salmonella a fost pus n eviden i un grup de gene (gene de
invazivitate) unele din ele fiind asemanatoare cu cele identificate la Genul Yersinia.
Salmonella
spp.
supravieuiete
intrafagocitar
datorit
prezenei
unor
structuri de suprafat precum i prin prezena unor proteine (peste 40 ) care apar ca rspuns la
fagocitare.
Endotoxina (antigenul O LPZ) eliberat dupa distrugerea germenilor are un rol
important n patogenitate.
Raspunsul imun
Rspunsul imun umoral este detectabil n special dup infecii extraintestinale.
Este cert apariia rspunsului imun dup infeciile produse de Salmonella typhi i S.
paratyphi cu punerea n eviden a anticorpilor circulani anti -O, anti-H, anti
-Vi. Anticorpii anti-O i anti-Vi au rol protector.
Apariia anticorpilor din clasa Ig A secretorii pot mpiedica ataarea la nivelul
epiteliului intestinal.
Boala la om
Infeciile salmonelozice sunt larg rspndite pe glob, evolueaz endemo-epidemic i
constituie o parte important a sindromului diareic n special la copilul sub 3 ani.
Clinic, Salmonella poate determina:
- salmoneloze sistemice sau febre enterice (febra tifoid i febrele paratifoide) entiti clinice
clar definite cu evoluie clinic caracteristic i imunitate durabil;
- salmoneloze enterice - forma comun - parte important a sindromului diareic de etiologie
bacterian, cu rspndire universal i manifestare endemo-epidemica, care n condiii
deficitare de aprare local i general, n contextul unei bacteriemii pasagere pot determina
infecii extradigestive: urinare, articulare, meningeale, respiratorii.
- septicemiile salmonelozice sunt de fapt complicaii ale unor forme enterice care se
generalizeaz pe fondul unei agresiuni puternice la organismele imunodeficitare (copii, vrstnici
debiliti prin boli cronice, maligne,etc). Condiia de baz a pacientului imprim gravitatea bolii
care de obicei inregistreaz procente ridicate de mortalitate (10%-20%)
Salmonella typhi determin febra
tifoid, iar Salmonella
paratyphi, febrele
paratifoide, considerate boli sistemice denumite i febre enterice . Se preteaz la diagnostic
imunologic, dau o imunitate durabil.
Alte specii de Salmonella pot determina:
25

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

- toxiinfecii alimentare de tip infecios n urma ingerarii de alimente intens contaminate;


- colite, enterocolite n cazul consumului unei cantiti mai mici de germeni.
Toxiinfecia alimentar de tip infecios
Agent etiologic: cel mai adesea Salmonella typhimurium sau Salmonella enteritidis n
urma consumului oualor de rata.
Boala apare n urma consumului de alimente masiv contaminate cu Salmonella,
procesul infecios manifestndu-se dup 48-72 de ore. Toxina eliberat de bacterii
este endotoxina.
Simptomatologia se
manifest
prin:
greuri,
vrsturi, colici
abdominale,
peristaltism exagerat, scaune diareice apoase, pierderi electrolitice.
Diagnosticul bacteriologic i antibiograma sunt obligatorii n
stabilirea
conduitei
terapeutice. Se efectueaz obligatoriu i reechilibrarea hidroelectrolitic a bolnavului.
Febra tifoid
Determinat de Salmonella. typhi n urma ingerarii de alimente
contaminate.Salmonella patrunde pe cale digestiv ajunge n plcile Payer i se multiplic n
profunzime.
Dup primele 7 zile de la contaminare apare bacteriemia primar determinat
de multiplicarea germenilor din organele limfoide (ganglioni solitari intestinali, ganglionmi
mezenterici, canal toracic apoi invadeaz i alte organe limfoide).
Boala debuteaz cu un acces febril datorat ptrunderii germenilor n circulaie.
Bacteriemia secundar apare la o sptaman de la apariia
simptomatologiei,
iar febra crete.
Perioada de stare dureaz 2-3 saptamani, timp n care simtomatologia obiectiv are
intensitate maxim. Febra atinge n platou 39-40 0 C. Starea general a bolnavului
este alterat.
Endotoxina cu tropism vascular, permeabilizeaz vasele,
producnd
edem
materializat clinic prin starea tific.
Prin hiperpermeabilizarea vascular apar pete hemoragice, se produce leucopenie.
Simptomatologia digestiv se manifesta prin:
- ulceraii spre lumenul
intestinal,
dar i spre profunzimea
peretelui
(determinate de cantitatea mare de germeni din intestin);
- colici puternice;
- peristaltism accentuat.
Dup vindecarea clinic, unii bolnavi pot rmne purttori snatoi de germeni, care
localizai n colecist se vor multiplica lent i se vor elimina n cantiti mici (18,41,48).

2.1.3. Stapylococcus aureus


ncadrare taxonomic
Staphylococcus aureus a fost ncadrat sistematic de ctre numeroi cercettori tinifici
n ncrengtura Eubacteria, ordinul Eubacteriales, familia Micrococcaceae, genul
Staphyloccocus.

26

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

ncrengtura Eubacteria, cuprinde bacteriile propriu-zise i este structurat n numeroase clase


i ordine.
Unul din cele mai importante ordine este Ordinul Eubacteriales care cuprinde bacteriile
tipice cunoscute sub diferite forme:coci, bacili, vibrioni, specii imobile, dar i mobile, Grampozitive i Gram-negative, specii aerobe, facultativ anaerobe i specii anaeorbe.
Bacteriile acestui ordin sunt att specii saprofite ct i parazite i patogene pentru om,
animale, plante,producnd diferite boli i cuprinde mai multe familii dintre care cele mai
importante sunt:
Familia Bacteriaceae, cuprinde bacilli parazii dintre care Escherichia coli, prezent mai
ales n intestinul omului producnd colibaciloza, dar i alte boli ca de exemplu infecia
urinar,Bacterium disenteriae, care produce dizenteria, etc.
Familia Bacillaceae, din care face parte Bacillus subtilis, specie oportunist
patogen,Bacillus anthracis- agentul etiologic al antraxului,Bacillus tetani, care produce
tetanosul, etc.
Familia Micrococcaceae din care fac parte bacteriile de form sferic (cocii), Grampozitive,aezate n grmezi caracteristice regulate i neregulate.
Familia Micrococcaceae este mprit n 3 genuri:
-genul Micrococcus
-genul Planococcus
-genul Staphylococcus, gen din care face parte specia Staphylococcus aureus.
Genul Staphylococcus are bacterii patogene care produc infecii deosebit de periculoase
pentru om.
Denumirea genului vine din limba greac (staphylo=strugure) i semnific dispunerea
cocilor n grmezi a cror form este asemntoare unui ciorchine de strugure.
Din cele 27 de specii i 7 subspecii care fac parte din acest gen: Staphylococcus
epidermus,
Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus schleiferi, Staphylococcus
haemolyticus . Staphylococcus aureus este agentul patogen cel mai virulent al genului.
Istoric
Staphylococcus aureus a fost izolat n anul 1880 de Pasteur, din puroiul unui furuncul.
Morfologie
Stafilococci au o form sferic coc, cu diametrul de 0,5-1,5 m i sunt dispui n
grmezi neregulate(10-40 coci),sub form de ciorchine.(fig 2.3.)

Fig. 2.3.Aspecte macroscopice i microscopice - Staphylococcus aureus (50, 51).

27

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 2.4. Infecii cutanate determinate de S. Aureus (52, 53).

Datorit gruprii lor n grmezi,coci se pot prezenta i ca celule ovale i chiar turtite pe o
parte.n cultruri n bulion s-au ntlnit frecvent i lanuri scrute sau chiar grupri n diplo.
Sunt de regula necapsulai, dar s-au ntlnit i tulpini capsulate sau pseudeocapsulate n
culturi tinere n bulion cu vrsta de 3-6 ore i care au disprut n culturi mai vechi.
Sunt imobili, lipsii de flagel, Gram-pozitivi,nesporulai.Se coloreaz foarte bine cu toi
coloraii de anilin pentru care prezint o afinitate deosebit.
Structur
Staphylococcus aureus are o structur foarte complex i la fel ca i la celelalte
specii(Bacillus subtilis, Bacilus cereus, Escherishia coli) este alctuit din aceleai componente
care sunt caracteristice celulei bacteriene.
Capsula apare foarte rar la Staphylococcus aureus i reprezint nveliul compact care
nconjoar la exterior celula cu o grosime de minim0,2 m.Prin colorarea bacteriilor capsula
apare ca un halou care nconjoar celula.Capsula este de natur polizaharidic i repezint un
factor de virulen, avnd proprieti antigenice specifice.
Compoziia chimic
Compoziia chimic a bacterilor cuprinde 80% ap i 20% elemente chimice.Elementele
de baz sunt: H, C, N, O, P, S; n procente mult mai mici, sub 1% se ntlnesc K, Na, Mg, Cl,
Ca, etc.
Oligoelementele cum sunt : Mn, Fe , Ca, Cu, etc. sunt n cantiti foarte reduse.
Caractere de cultur
Aerobe i facultativ anaerobe, stafilococii se dezvolt n limite foarte largi la temperaturi
cuprinse ntre 12-45 C, optimul de dezvoltare fiind la 37 C. i n ceea ce privete reacia
chimic a mediului de cultur stafilococii manifest o larg toleran putnd crete foarte bine i
la un pH acid de 4-5, optimul fiind 7,2-7,6.
Crete pe medii obinuite de cultur, bulion, geloz, gelatin i mult mai bine pe medii
compuse cu glucoz.
n bulion, dup incubare 24 de ore la 37 C stafilococul tulbur uniform mediul,
formnd un depozit moderat pe fundul tubului.
Pe mediile solide se dezvolt colonii mari de 0,5-3mm diametru, de form rotund,
bombate, opace, strlucitoare, de culoare aurie, culoare care se datoreaz pigmentului
caretenoid.Pigmentarea se observ mai bine dupa incubarea la termostat i meninerea lor la
temperatura camerei timp de 24h.De remarcat este faptul c pigmentul nu este produs n
anaerobioz, deci n mediile lichide, coloraia aurie specific acestor specii nu se observ.
i n medii cu cartof stafilococii se dezvolt foarte bine dezvoltnd colonii cu o
pigmenie bogat.

28

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Pentru o dezvoltare ct mai bun stafilococii necesit mai muli factori de cretere pe
care i gsete n mediul obinuit de cultur dintre care: acidul nicotinic (vitamina PP),
aneurina(vitamina B) i biotina (vitamina H).
Stafilococii fermenteaz glucoza, lactoza, maltoza, zaharoza i coaguleaz laptele i
peptonific cheagul prin proteoliz.
Vitalitate
Stafilococii sunt specii nesporogene, cele mai rezistente la mediul exterior, putnd
supravieui luni de zile n produse patologice uscate la temperatura camerei.
Rezist 30 de minute la temperaturi ridicate de 50 C iar unele tulpini pot rezista i 30 de
minute la temperaturi de 60-62 C. Fierberea i omoar instantaneu.
n culturi de bulion sau pe geloz, n tuburi parafinate supravieuiesc luni de zile la
temperatura camerei.
Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici
Sunt rezisteni la fenoli, colamine, iod i idofori, detergeni.Sub aciunea alcoolului 70%
mor n 60 de minute.
Sunt sensibili colorailor, mai ales la anilin.Violetul de gienian, cirstalvioletul,verdele malahit,fucsina acid i alte substane colorate n anumite concentraii pot
inhiba dezvoltarea stafilococilor.
Rezistena la substane antibiotice
Sunt
sensibili
la
majoritatea
famililor
de
antibiotice:
betalactamine,clindamicin,fosfomicin,
rifampicine,carbopeneme,macrolide
glicopeptide
(vacomicin i teicoplanin) i acid fusidic.Sunt rezisteni ns la alte antibiotice cum ar fi
colistinul,acidul nalidixic, cloramfenicol,eritromicina,tetraciclina, clindamicina, gentamicina.
S-a remarcat faptul c aproximativ 10% din tulpini prezint rezisten la penicilin.
Multe dintre tulpini au manifestat rezisten i la o serie de alte chimioterapice (aminoglucozide,
macrolide, fluoroquinolone, etc.) devenind rspunztoare pentru o serie de epidemii.
Patogenie
Staphylococcus aureus prezint, pe lng formele comensale i forme parazite,
patogene, capabile s produc cele mai variate afeciuni ale organismului uman, avnd puterea
de a strbate barierele aprrii naturale i de a evita mecanismele aprrii antiinfecioase.Acest
fapt se datoreaz multiplelor enzime i toxine pe care le elibereaz n organism. Staphylococcus
aureus poate infecta omul pe cele mai variate ci: calea cutat, calea mucoas, cile aeriene,
calea intestinal, traseul genito-urinar etc.
Infeciile stafilococice
Staphylococcus aureus determin:
-infecii localizate care evolueaz invaziv
-infecii generalizate septicemice
-sindroame toxice
Cele mai multe infecii sunt stafilococice, cutanate-foliculitele,care sunt infecii
determinate de localizare Staphylococcului aureus la rdcina foliculilor piloi.Staphylococcus
aureus de la nivelul pleoapelor duce la formarea ulciorului.Foliculitele profunde apar datorit
extinderii infeciei la nivelul glandelor sebacee i se caracterizeaz prin formarea unei colecii
apreciabile de puroi i care duce la unirea furunculelor (Fig. 2.4).Carbunculul este format din
unirea mai multor furuncule.
O alt infecie produs este Hidrosadenita, care este produs la nivelul glandelor
sudoripare, iar infecia glandelor sebacee duce la apariia acneei pustuloase.
Mastita este o infecie depistat la nivelul glandelor mamare i care apare frecvent la
femeile care alpteaz.

29

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Dermatita exfoliativ(sindromul pielii oprite,maladia Ritter) afecteaz mai ales copiii


mici sub 1 an i este o infecie care debuteaz cu apariia unor vezicule urmate de descuamarea
epiteliluli.
Staphylococcus aureus este cauza frecvent bacteriemiilor aprute dup proceduri
chirurgicale,50% dintre acestea se dobndesc n spitale.Se asociaz de obicei la nivelul
endocardului, ducnd la apariia endocarditelor acute,infecii grave care duc la o mortaliate de
50% n rndul pacienilor.
Staphylococcus aureus este cauza frecvent a infeciilor urinare ocupnd locul 2 dupa
Escherichia coli.n asociaie cu ali germeni patogeni, a fost frecvent semnalat n infeciile
veziculei biliare.S-au semnalat i infecii ale cilor aereiene ca de exemplu: infecii bronice,
gripa, infecii pulmonare, bronhopneumonii foarte grave.
Osteomielita semnalat la nivelul oaselor lungi la copii i mai frecvent la nivelul
vertebral la aduli, este principala cauz a infeciilor produse de acest stafilococ.Boala cauzeaz
dureri de oase i febr, Staphylococcus aureus poate fi de asemenea principala cauz a unor
arterite septice att la copii ct i la aduli.
Sindroamele toxice
Toxiinfecile aliemntare sunt rezultatul ingerrii unor alimente contaminate cu
stafilococi enterotoxici, cele mai frecvent implicate sunt produsele din carne de porc, lactalele i
alte alimente.Acestea se manifest prin diaree, deshidratare, greuri, vrsturi, dureri
abdominale, cefalee.
Staphylococcus aureus este i cauza apariiei enterocolitelor de natur endogen, aprute
la bolnavi tratai cu antibiotice cu spectru larg de aciune i care au avut ca efect distrugerea
florei normale a colonului(5).
Proprietile terapeutice ale propolisului
Datorit nsuirilor sale bactericide, antitoxice, antivirale, bacteriostatice, regenatoare i
analgezice, propolisul este utilizat nc din cele mai vechi timpuri pentru tratarea numeroaselor
boli.
Tratamentul cu propolis se poate aplica pentru urmtoarele afeciuni:
- boli respiratorii: bronite, traheite, tuberculoz;
- boli infecto-contagioase: febr tifoid, meningit i grip;
- boli ale aparatului circulator: hipertensiune i asteroscleroz;
- boli dermatologice : n intertrigo, pentru btturi i negi, eczeme, neurodermite, ulcer
varicos i fisuri anale, hemoroizi, keratodermii, arsuri i degeraturi;
- boli ale aparatului digestiv: ulcer gastroduodenal, enterite, colite, dureri de stomac, boli
virotice ale stomacului, inflamaii ale ficatului i parazitoze;
- n oftamologie: pentru conjunctivite;(47)
- O.R.L : amigdalite, otite, rinite, sinuzite etc.;
- infecii urologice i boli de prostat: ci urinare, rinichi, vezic urinar i prostat;
- boli ginecologice: vaginite i metrite ulceroase;
- boli stomatologice: dureri dentare, gingivite,stomatite, parodontoz incipient,abcese
paradontale;
- cancer: mamar, al organelor interne sau al pielii;
- boli reumatice: artrite, spondilit (35).
Preparatele din propolis i modalitile de obinere sunt prezentate n anexa 4.

30

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

CAPITOLUL IV
MATERIAL I METODE

Obinerea extractelor din propolis


Extractele din amestecul de propolis brut i din cele trei componente ale acestuia:
quercitina, acidul galic i catechina au fost obtinute n Dimethyl-Sulfoxid (DMSO), de ctre
cadrele didactice de la disciplina de Chimie anorganic, Facultatea de Tehnologia Produselor
Agroalimentare, din cadrul USAMVB Timioara. Pentru fiecare compus s-a preparat cte cinci
diluii. Concentratiile celor cinci dilutii au variat de la 0.1 mM/mL (A1,B1,C1), 0.01 mM/mL
(A2,B2,C2), 0.001 mM/mL (A3,B3,C3), 0.0001 mM/mL (A4,B4,C4), i 0.00001 mM/mL
(A5,B5,C5). Ca i variant control a fost utilizat o solui de DMSO.
31

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Culturile microbiene i mediul de cultur utilizat pentru testarea aciunii extractelor


S-a urmrit comportarea urmtoarelor culturi microbiene: Escherichia coli (A),
Staphylococcus aureus (B) i Salmonella flexneri (C) sub aciunea extractului de propolis brut i
a principalelor componente ale acestuia.
Densitatea celulelor bacteriene a fost masurata dupa soluia standard McFarland (24).
Mediul nutritiv folosit a fost agarul nutritiv, produs HiMedia Laboratories Pvt. Ltd
Compoziia chimic a mediului nutritiv:
- Extract de carne
1.50g
- Pepton
5g
- NaCl
5g
- Extract de drojdie
1.50g
- Agar
15g
- Apa distilat
1000 ml
pH = 7.40.2
Mediul nutritiv a fost sterilizat prin autoclavare la presiunea de 1 atm., timp de 20 de
minute, dup care a fost repartizat n plci Petri sterile. n fiecare plac s-au repartizat cte 10
ml de mediu. Dup rcirea i solidificarea mediului s-a efectuat operaia de inoculare cu cele
trei culturi microbiene.
Metoda de nsmnare a culturilor microbiene
Suspensile microbiene preparate prin omogenizarea a cte un mililitru din cultura
microbian tnr de 24 de ore i 9 ml de mediu nutritiv lichid, au fost nsmnate n cte dou
repetiii pe mediu agar nutritiv aplicndu-se tehnica diseminrii inoculului (5).
Etapele de lucru ale acestei tehnici sunt:
- suprafaa mediului nutritiv din plcile Petri se zvnt n termostat timp de 30 de minute
la temperatura de 37C;
- 1 ml suspensie microbian, aspirat cu o pipet steril se depune pe suprafaa mediului
solid;
- suspensia microbian se disperseaz pe toat suprafaa plcii Petri, iar surplusul se
ndeprteaz cu aceeai pipet.

Obinerea biodiscurilor si stabilirea concentraiei inhibante prin metoda difuziei n


mediu nutritiv
Biodiscurile au fost obinute din hrtie de filtru. Aceste rondele au fost sterilizate n
etuv la temperatura de 40C, timp de 20 minute.
Metoda difuzimetric este o metod rapid i eficient de stabilire a rezistenei simple
sau multiple a unui microorganism la aciunea unei substane. Avantajul acestei metode const
n faptul c se poate stabili gradul de sensibilitate sau rezisten la un set larg de substane.
Pe suprafaa mediului inoculat din plcile Petrii s-au depus cu ajutorul unei pense sterile
biodiscurile, care ulterior au fost umectate cu 10 l de (DMSO) (martor) si fiecare dilutie
obinut din cei patru compui.
Plcile Petrii au fost incubate n termostat timp de 48 ore, la temperatura de 37C.
Interpretarea statistic
Datele au fost analizate statistic folosind un pachet de statistic MVSP 3.1 (49,17)

32

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

CAPITOLUL V
REZULTATE SI DISCUII
Menionm de la nceput c fata de martor (DMSO), speciile microbiene au avut o
reactie pozitiva, s-au dezvoltat foarte bine si au ocupat n ntregime zona adiacent biodiscului
impregnat cu soluia control (Anexa 1).
Rezultatele determinrilor experimentale sunt reprezentate in graficele 5.1-5.8 .
Interpretarea rezultatelor experimentale s-a efectuat prin raportare la standardele
antimicrobiene privind testarea sensibilitii microbiene la antibioticele recomandate pentru
agenii patogeni luai n studiu (37).

33

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene


Diam.(mm)[acid_galic] Diam.(mm)[amestec_de_propolis]
Diam.(mm)[quercitina]
Diam.(mm)[catechina]
2
1.8
1.6
1.4

log Y

1.2
1
0.8
0.6
0.4

C5

C4

C3

C2

C1

B5

B4

B3

B2

B1

A5

A4

A3

A2

A1

0.2

Fig. 5.1. Distributia grafica a activitatii biologice a propolisului


Dintre cele trei culturi bacteriene testate, sensibilitate fa de amestecul de propolis brut
prezint Escherichia coli. n privina celor trei componente principale ale propolisului, se poate
remarca faptul c valorile halourilor de inhibiie sunt mici, ceea ce indic prezena caracterului
de rezisten a celor trei specii bacteriene, fa de majoritatea concentraiilor celor patru
extracte. n acest ultim caz, excepie face guercitina, care la concentraia A 3, are efect inhibitor
moderat (intermediar), fa se specia E.coli. Speciile Salmonella i Staphylococcus aureus
prezint rezisten la toate concentraiile amestecului de propolis brut, quercitin, catechin i
acid galic (fig. 5.1).

34

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

0.9992

0.96

0.8

0.64

Correlation

0.48

0.32
0.2683
0.16

0.1794

-0.16

amestec p

quercitin

catechina

-0.3375
acid gali

-0.32

Fig. 5.2. Corelaia Spearman


Corelaie pozitiv exist ntre compuii guercitin, catechin i amestecul de propolis.
Aceti compui prezint efecte similare la majoritatea concentraiilor testate. n schimb se
remarc, corelaie negativ cu acidul galic (fig. 5.2).
PCA
PC
1
2
3
4

Eigenvalue
24.685
4.83274
1.43264
0.799633

% variance
77.748
15.221
4.5122
2.5185

n continuare, va fi prelucrat doar axa 1, deoarece are coeficientul varian-covarian =


77.75 %.

35

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 5.3. Analiza principalelor componente


Efectul antimicrobian al amestecului de propolis brut, depinde de concentraia testat.
Activitatea biologic a acestui compus se reduce odat cu scaderea concentraiei. Astfel, efectul
inhibitor accentuat este remarcat la concentraia cea mai ridicat (A1).
Quercitina are activitate biologic maxim la concentraia A3, catechina la concentraia
A4, iar acidul galic la concentraia B1. Chiar dac haloul de inhibiie este prezent n majoritatea
cazurilor, diametrul acestuia nu se ncadreaz n standardele privind sensibilitatea microbian.
Dintre toi compuii propolisul brut are efectul antimicrobian cel mai accentuat, fiind
urmat de quercitin i catechin. Acidul galic are activitatea antimicrobian nesemnificativ
(fig. 5.3, Anexa 3).

36

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 5.4. PCA- 95 % elipsoidal


Pe msura testrii concentraiilor (fig. 5.4), s-a remarcat n majoritatea cazurilor un
comportament similar, excepie (comparativ cu toate extractele) face amestecul de propolis brut
la concentraia A1 (Anexa 1).

37

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 5.5. PCA pe specii microbiene


Efect inhibitor fa de Escherichia coli, prezint guercitina i propolisul brut. Rezisten
fa de catechin (Anexa 2 ) i acid galic, se observ la speciile bacteriene Stapaylococcus
aureus i Salmonella (fig. 5.5).
Contrar rezultatelor obtinute in aceasta lucrare, Muli si colab (2007), a remarcat o
sensibilitate accentuata a speciei Staphylococcus aureus, fata de extractele alcoolice din trei
regiuni diferite ale Kenyei. Dupa Grange si Davey (15),Grecianu si Enciu (16), Ivan si colab.
(20), si Keskin si colab. (22). Au observat ca bacteriile Gram-pozitive printre care si S.
aureus, sunt mai sensibile decat bacteriile Gram-negative (E. coli, P. aeruginosa etc), la
propolisul provenit din Kenya. Explicatia este data de compozitia chimica complexa a
propolisului care depinde de diversitatea plantelor i locaiile geografice din care albinele
colecteaz propolisul (1, 3). n mod similar, proprietile biologice ale propolisului pot varia n
funcie de speciile de plante (22).

38

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 5.6. PCA activitate biologic maxim


Dintre toi compuii testai, activitatea antimicrobian maxim este dat de amestecul de
propolis brut (fig. 5.6).

39

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 5.7. Modelarea liniar generalizat


Conform fig. 5.7, odat cu creterea concentraiei de quercitin din propolisul brut,
crete i activitatea biologic a acestuia. Dintre cei trei compui ai propolisului, s-a observat c,
efectul antimicrobian al acestuia depinde n special de quercitin (Anexa 2).

40

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Fig. 5.8. Clauster-metoda Ward pe dou ci, utilizndu-se distanele euclidiene


Similaritate s-a remarcat ntre amestecul de propolis brut i quercitin, i ntre catechin
i acidul galic (fig. 5.8).

41

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

CONCLUZII I PROPUNERI
n majoritatea cazurilor cele trei specii studiate au prezentat rezisten la concentraiile
celor patru extracte.
Dintre cei trei ageni patogeni testai, Escherichia coli, a prezentat sensibilitate la
amestecul de propolis brut (conc. 0.1 mM/mL) i quercitin (conc. 0.001 mM/ml).
Speciile Salmonella i Staphylococcus aureus prezint rezisten la toate concentraiile
celor patru extracte testate.
Dintre cele patru extracte utilizate, la unele concentraii ale amestecului de propolis brut
i guercitin a fost sesizat caracterul de sensibilitate.
Dintre cele cinci concentraii testate eficien prezint A1 (0.1 mM/mL), pentru
amestecul de propolis brut i A 3 (0.001 mM/ml), pentru compusul quecitin.
Activitatea biologic a propolisului depinde n special de quercitin.
Se propune:
a. creterea concentraiei celor patru compui testai, cu scopul stabilirii unei concentraii
minime inhibante pentru agenii patogeni testai (conform standardelor antimicrobiene);
b. testarea sensibilitii/rezistenei celor trei specii fa de antibioticele recomandate n practica
medical, comparativ cu efectul compuilor luai n studiu;
c. dintre concentraiile testate n aceast lucrare se recomand utilizarea concentraia A1 (0.1
mM/mL), pentru amestecul de propolis brut i A 3 (0.001 mM/ml), pentru compusul quecitin,
specia Escherichia coli.

42

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

BIBLIOGRAFIE
1. Alexandra Chis., Kirllian SS., Maria Cm., Ildenize Bsw., Mario Ts. Analysis of
thecomposition of Brazilian propolis extracts by chromatography and evaluation of their in
vitroactivity against gram-positive bacteria. Braz. J. Microbiol., 2004, 35, 1-2.
2. Ahmed G. Hegazi and Faten K. Abd El Hady Z. 2002 Egyptian Propolis: 3. Antioxidant,
Antimicrobial Activities and Chemical Composition of Propolis from Reclaimed Lands
Naturforsch. Vol.57, 395-402
3. BANSKOTA AH., TEZUKA Y., KADOTA S. Recent progress in pharmacological research of
propolis. Phytotherapy Res., 2001, 15, 561-71.
4. Bosio K., Avanzini C., Davolio A., Ozino O., Savoia D. In vitro activity of propolis against
Streptococcus pyogenes. Lett. Appl. Microbiol., 2000, 31, 174-177.
5. Borozan Aurica Breica, 2006, Microbiologie (indrumator de lucrari practice), Editura Mirton
Timisoara, 62-70
6. Burdock Ga. Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis), Food
Chem. Toxicol., 1998, 36, 346-63
7.Cheng Pc., Wong G. 1996, Honeybee propolis: Prospects in Medicine. Bee World, 77, 8-15
8.Detoma P., Ozino OI. 1991, Azione della propoli su microorganismi dell_ambiente
ospedaliero. Ann. Microbiol. Enzimol., 41, 231-2
9. El-Ghazaly Ma., Khayyal Mt. The use of aqueous propolis extract against radiationinduced
damage. Drugs Exp. Clin. Res., 1995, 21, 229-36.
10.Fernandes Jr A., Lopesc Cam., Sforcin Jm., Naqvi Sa., Dsiya Pc., Funari Src. Population
analysis of susceptibility of propolis in reference strains of Staphylococcus aureus and
Escherichia coli. J. Venom. Anim. Toxins, 1997, 3, 287-94.
11.Garcia-Viguera C., Greenway W., Whatley Fr. Composition of propolis from two different
Spanish regions. Z. Naturforsch., 1992, 47c, 634-7.
12.Ghisalberti El. 1960, Propolis: a review. Bee World, 60, 59-64
13.Ghisalberti El. Propolis: a review. Bee World, 1979, 60, 59-84.
14.Gonsales Gz., Orsi Ro., Fernandes Jr A., Rodrigues P., Funari Src. Antibacterial activity of
propolis collected in different regions of Brazil. J. Venom. Anim. Toxins incl. Trop.Dis., 2006,
12, 276-84.
15.Grange JM., Davey RW. Antibacterial properties of propolis (bee glue). J. R. Soc. Med.,
1990, 83, 159-60.
16.Grecianu A., EnciuV. Activity in vitro of propolis against bacterial strains of animal
origin. Institutal Agronomic _Ion Ionescu de la Brad_ (Zootehnie. Medicina Veterinara),
1976, p.90-2.
17 .HAMMER Q., HARPER D.A.T., AND P. D. RYAN ( 2001): Past: Paleontological Statistics
Software Package for Education and Data Analysis. Palaeontologia Electronica 4(1): 9pp.
18. Helgomar Rducnescu , Valeria Bica-Popii ,Bacteriologie veterinar, Editura
Ceres,Bucureti,1986)pag 201
19.Hristea L. Constantin, Pdurean L.S. 1967, A.B.CApicol,Volumul II de la litera M la Z.
Editura Agro-Silvic,165-168
20.Ivan KM., PepeljnjakE S., Bakmaz, M., Vladimir-Knezevic S. Flavonoid analysis and
antimicrobial activity of commercially available propolis products. Acta Pharm., 2005, 55,
423-30.
21. Ivancajic S. , Mileusnic I. and Cenic-Milosevic Desankaa, In Vitro Antibacterial Activity Of
Propolis Extracts On 12 Differenet Bacteria In Conditions Of 3 Vvarious Ph Values, 2010,
Arch. Biol. Sci., Belgrade, 62 (4), 915-934.
22. Keskin N., Hazir S., Baser KH., Kurkcuoglu M. Antibacterial activity and chemical
composition of Turkish propolis. Z. Naturforsch., 2001, 56, 1112-15.
23.Marcucci MC. 1995, Propolis: chemical composition, biological properties and therapeutic
activity. Apidologie, 26, 83-99
43

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

24.Khayyal Mt., El-Ghazally Ma., El-KhatibAS. Mechanisms involved in the anti-inflammatory


effect of propolis extract. Drugs Exp. Clin. Res., 1993, 19, 197203.
25.Koo H., Gomes Bpfa., Rosalen Pl., Ambrosano Gmb., Park Ik., Cury Ja. In vitro
antimicrobial acitivity of propolis and Arnica montana against oral pathogens. Arch. Oral.Biol.,
2000, 45, 141-8.
26.Krol W., Scheller S., Czuba Z., Matsuno T., Zydowicz G., Shani J., Mos M.Inhibition of
neutrophils chemiluminescence by ethanol extract of propolis (EEP) and its phenolic
components. J. Ethnopharmacol., 1996, 55, 19-25.
27.Markham Ke., Mitchel Ka., Wilkins AL., Daldy Ja., Luy . Hpcc and Gc-MS
identification of the major organic constituents in New Zealand propolis. Phytochemistry,1996,
42, 205-11
28.Mrghita Liviu Alexandru , 2008, Albinele i produsele lor, ediia aII-a revzut i
adugit;Editura Ceres Bucureti; pag 370-381
29.Mokhtar I. Yousef , Kamel I. Kamel , Mervat S. Hassan , Ahmed M.A. El-Morsy, 2010
Protective role of propolis against reproductive toxicity of triphenyltin
in male rabbits 2010, Food and Chemical Toxicology Vol. 48 Nr. 7 pages18461852
30. Muli E. M. , J. M. Maingi , J. Macharia 2008, Antimicrobial Properties of Propolis and
Honey from the Kenyan Stingless bee,Dactylurina Schimidti APIACTA Vol.43 PAGES 49 61
31. Muli E. M., Maingi J. M., Antibacterial activity of Apis mellifera L. propolis collected in
three regions of Kenya, J. Venom. Anim. Toxins incl. Trop. Dis vol.13 no.3 Botucatu 2007
32.Nallahalli Shivarajegowda Surendra, Musaiah Bhushanam, and Hemagirigowda Ravikumar,
Antimicrobial Activity of Propolis of Trigona sp. and Apis mellifera of Karnataka, India Prime
Journal of Microbiology Research(PJMR).
2012, Vol. 2(2), 80-85.
33.Orzturk F., Kurte., Cerci M., Emiroglu L., InanU., Turker M., Ilker S. The effect of propolis
extract in experimental chemical corneal injury. Opthalmic Res., 2000, 32,13-8.
34.Ptruic Silvia, 2006, Tehnologia creterii albinelor; Editura Eurobit Timioara, Pag 202-204
35.tefan Lazr, O.C Vornicu, 2007, Apicultura,Editura Alfa Iai, pag 569-578
36.Varanda Ea., Monti R., Tavaresc DC. Inhibitory effect of propolis and bee venom on the
mutagenicity of some direct- and indirect-acting mutagens. Teratog. Carcinogen Mutagen.,
2000, 19, 403-13.
37. ***Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests, CLSI Vol. 28 No.
Jan. 2008

Webografia
38.***http://ro.wikipedia.org/wiki/Propolis (accesat la data 07.05.2012)
39.***http://stupari.blogspot.com (accesat la data 14.05.2012)
40.***http://www.tincturadepropolis.ro/istoric-propolis(accesat la data
14.05.2012)
41.*** http://www.scritube.com/biologie/familia-enterobacteria cear-car 34326.php (accesat la
data 05.06.2012)
42.***http://www.selene.ro/articole/propolisul ( accesat la data 14.05.2012)
43.***http://apicultura.freesoul.ro/apiterapie/propolis.htm (accesat la data 14.05.2012)
44.*** http://trialx.com/curebyte/2012/05/13/pictures-for-methicillin-resistant-staphylococcusaureus/(accesat la data 04.06.2012)
45.*** http://drugster.info/medic/term/staphylococcal-scalded-skin-syndrome/(accesat la data
04.06.2012)

44

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

46. ***http://www.marlerblog.com/lawyer-oped/e-coli-o157h7-season-is-nearly-upon-us---willit-be-2005-and-2006-or-2007-and-2008/ (accesat la data 04.06.2012)


47.***http://despremiere.blogspot.ro (accesat la data 04.06.2012)
48.***http://atlas.microumftgm.ro/bacteriologie/bactsp/salmonella.ph
(acessat la data
05.06.2012)
49.*** http://palaeo-electronica.org/2001_1/past/issue1_01.htm (accesat la data 06.06.2012)
50.*** http://prep4md.blogspot.ro/2008/06/staphylococcus-aureus-and-food.html
51.*** http://medchrome.com/mbbs-exams/staphylococcus-aureus-lab-diagnosis-and-diseases/
52.*** http://trialx.com/curebyte/2012/05/13/pictures-for-methicillin-resistant-staphylococcusaureus/
53. ***http://drugster.info/medic/term/staphylococcal-scalded-skin-syndrome/
54. ***http://www.salmonellablog.com/salmonella-watch/inhibitory-effects-of-enterococcusstrains-obtained-from-a-probiotic-product-on-in-vitro-growth-of-salmonella-enterica-serovarenteritidis-strain-ifo3313/
55. ***http://pictures.life.ku.dk/atlas/microatlas/veterinary/bacteria/Salmonella_enterica/
56.
(accesate la data 07.06.2012)

ANEXA 1

45

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Varianta control (DSC 02731)

Activitatea antimicrobiana a amestecului de propolis (DSC 02734)

ANEXA 2
46

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Activitatea antimicrobiana a quercitinei (DSC 02736)

Activitatea antimicrobiana a catechinei (DSC 02748)

47

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

ANEXA 3

Activitatea antimicrobiana a acidului galic(DSC 02747)

ANEXA 4
48

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Modul de preparare al extractului alcoolic de propolis 15%


Se sfaram n particule mici 150 g propolis, se introduc ntr-o sticl de culoare nchis i
se adaug treptat 1 litru de alcool de 96,apoi se agit timp de 30 minute.Sticla etichetat cu
data preparrii se ine la ntuneric, agitndu-se zilnic,Dup 7 zile amestecul se filtreaz prin
tifon.Se poate pstra muli ani daca este inut la ntuneric.
n acelai mod se procedeaz i n cazul obinerii eaxtractului de propolis de alte
concentraii,variaz numai cantitatea de propolis utilizat (35).

Extract alcoolic de propolis i propolis mrunit (43).


Unguentul din exctractul alcoolic de propolis
Se iau 100 ml extract alcoolic de propolis(20%), se toarn ntr-o capsul de por elan cu
diametrul de 10cm sau intr-un mojar. Se aaz vasul pe baie de ap la 40-50 C pentru a se
evapora alcoolul, sau se procedeaz la evaporarea alcoolului proiectnd asupra lichidului, cu
ajutorul fnului, un curent de aer cald. Pentru uurarea operaiei de evaporare, vasul cu extract
se poate ine la temperatura camerei timp de 24 ore, apoi se evapor total alcoolul. Astfel se va
obine o mas vscoas, care este propolisul pur. Pentru a nu se pierde uleiurile eterice ce intr
n compoziia propolisului se cere s nu se depeasc tempetratura dat mai sus.
Peste propolis se adaug 5-10 g lanolin anhidr care se amestec cu un pistil, apoi
treptat se adaug 90 g vaselin alb.Se obine n final un unguent omogen, de culoare galbenbrun cu miros plcut aromat, de foarte bun calitate.
Unguent de propolis brut
ntr-un vas emailat aezat pe o baie de ap, la temperatura de fierbere, se pun 100 g
vaselin alb, peste care se adaug 20 g propolis bine mrunit.Se amestec timp de 10minute,
apoi lichidul fierbinte se strecoar printr-un strat de tifon.Lichidul este amestecat pn ce
vaselina i reia aproape consistena iniial,obinndu-se astfel unguentul propolizat.

Past de propolis brut


Concentraia pastei este de 25-50%.
Propolisul n prealabil mrunit se amestec n mojar cu ulei de vaselin nclzit la 4050C Uleiul se toarn n cantiti mici pn se obine o past omogen. Pe tot timpul preparrii
pastei, mojarul se menine nclzit la temperatura de 40-50 C.
49

Maria Novac , Efectele extractelor de propolis asupra unor microorganisme patogene

Eter propolizat
Se prezint sub form de lichid transparent de culoare brun. Este foarte volatil i
inflamabil. Eterul propolizat se prepar uor, adaugnd la 100 ml eter 15-20 g propolis bine
fragmentat.Se astup ermetic sticla, se agit i se ine la frigider, la loc foarte rcoros, agitnduse din cnd n cnd. Dup cteva ore, lichidul se filtreaz printr-un strat subire de vat. Se
pstreaz n sticl de culoare brun la rece. Trebuie ferit de foc. Dup evaporare, eterul
propolizat las o pelicul uniform de propolis.
n laborator se mai poate obine un extract eterat uscat de propolis, cu ajutorul aparatului
Soxhlet.
Unguent din extract eterat
Se iau 50 ml extract eterat (preparat din 20-30 g propolis la 100 ml eter) se evapor
eterul la jumtate i apoi cei 25 ml de extract concentrat se amestec cu 100 g vaselin,
adaugnd treptat i vaselina n mojar. Se amestec bine,ntr-un singur sens astfel se obine un
unguent omogen de culoare glbuie-nchis, cu miros de propolis i eter.
Extractul se manipuleaz cu atenie ferindu-se de foc, eterul fiind inflamabil.
Emulsie de propolis
Se prezint ca un lichid alb-glbui, cu o opalescen ce depinde de concentraie.
Se adaug dup scopul urmrit (terapie sau cercetare) 1-5-10-15-20 ml extract alcoolic
de propolis la 100 ml ap simpl. Se agit bine, obinndu-se o emulsie lptoas foarte stabil.
Este recomandat ca emulsia sa fie preparat nainte de utilizare. Emulsiile ce se separ se
pot agita, astfel se revine la aspectul iniial(28).

50