Lucrare practic numrul 10

Nucleul

Nucleul este structura cea mai specializat a celulei, care asigur ereditatea i coordoneaz majoritatea reaciilor de sintez conform specificitii biologice a celulei. Este un corp veziculos n general, cu forma sferic sau ovoid, bine circumscris, cuprins n masa citoplasmatic a celulei. Dintre substanele care intr n constituia sa , cea mai caracteristic este cromatina, puternic bazofil. Forma nucleilor: n mod obinuit, forma nucleului este a celulei din care face parte: - turtit, n celulele endoteliale, (figura 1a); - sferic n celulele sferice (ovocite), cubice (n celulele ce formeaz endoteliul cilor biliare), (figura 1b); - ovalar n celulele piramidale sau prismatice, (figura 1c); - bastona sau fuziform n celulele musculare striate; - polilobat n leucocitele mature.

a.

b.

c.
Figura 1. a,b,c, Forme nucleare, col HE

Conturul nucleilor - neregulat n celulele secretorii : foliculi tiroidieni, fibra muscular; - regulat: epiteliul cubic, epiteliul prismatic Pozitia nucleului n celul n general poziia sa este central, dar poate fi modificat de anumii factori cum ar fi acumularea de substane de rezerv (adipocite), sau de granule de secreie(celule secretorii). Dimensiunile nucleului Variaz de la un tip de celul la alta n funcie de specie i vrst, iar la aceeai celul n funcie de fazele ciclului celular. In celulele umane, dimensiunile nucleilor sunt cuprinse ntre 3-25 microni. In general, nucleul reprezinta 1/3-1/4 din volumul celulei, cu exceptia limfocitului unde nucleul depaseste cu mult aceasta proportie. Numrul nucleilor n celul - celule anucleate secundar ex.: hematiile; - uninucleate - sunt marea majoritate a celulelor, (figura 2a); -binuc1eate - celule cu activitate metabolic intens ex.: hepatocitele, unii neuroni din ganglionii simpatici, (figura 2b) ;

-multinucleate - sinciiul - provine prin fuzionarea mai multor celule mononucleate ntr-o celul unic: osteoclastul (figura 2d); -plasmodiul - provine dintr-o celul iniial mononucleat ce a suferit multiple diviziuni ale nucleului, dar fr citodierez (diviziunea citoplasmei): fibra muscular striat (figura 2c).

a.

b.

c.

Figura 2. a.Celule uninucleate, b. binucleate, c. plasmodiu si d. sincitiu

La MO, nucleul interfazic apare ca un organit vesicular ce este delimitat de o membran vizibil, avnd n interior 1-2 nucleoli refringeni i carioplasma, (figurile 3,4).

Figura 3. Nucleu, ME

Figura 4. Nucleu (2) cu nucleol (1), ME

1.

Membrana nuclear

- n microscopia optic, are aspectul unei linii fine care separ coninuul nucleului de cel citoplasmatic. - n microscopia electronic, nveliul nuclear este constituit din dou membrane trilaminate separate printr-un spaiu clar - cisterna sau spaiul perinuclear, cu o grosime de 10-15 nm. Membrana extern se continu cu membranele reticulului endoplasmatic granular, iar pe faa citoplasmatic are ataai ribozomi. Din loc n loc, anvelopa nuclear este strbtut de canale porii nucleari - prin care se realizeaz pasajul macromolecular, (figurile 5,6,7).

Figura

5.

Membrana

nuclear

Figura 6. Por nuclear, ME

Figura 7.

Structura anvelopei nucleare, schem

2. Cromatina se prezint sub forma unor granule; este dispus sub dou aspecte:

a. condensat n formaiuni intens colorate, de form i dimensiuni variabile, numii cromocentri, a cror totalitate formeaz heterocromatina, (figura 8). Utiliznd colorani specifici din heterocromatin se delimiteaz: -cromatina sexual X care reprezint un cromozom X intens heterocromatinizat n celulele somatice care au doi cromozomi X; -cromatina sexual Y, care reprezint 2/3 distale din braul lung al cromozomului Y. b. eucromatina, format din granule de cromatin fin dispersat i ca urmare slab colorate cu colorani specifici (figura 9).

Figura 8.

Eucromatina, HE

Figura 9. Heterocromatina, HE

Cromatina este alctuit din punct de vedere chimic din ADN n cantitate mare, care se va evidenia prin colorare cu colorant Fulgen specific pentru ADN (coloreaz ADN-ul n rou violet). 3. Nucleolii sunt de form sferic; conin o cantitate mare de ARN. Evidenierea celor doi acizi nucleici sa face cu verde de metil pironin (verdele are afinitate pentru ADN colorndu-l n verde, pironina are afinitate pentru ARN colorndu-l n rou). 4. Sucul nuclear are aspect omogen, reprezentnd coninutul nucleului, n care se gsesc cromatina i nucleolii. Activitate practic Colorarea nucleilor celulelor

Scopul lucrrii: Evidenierea materialului genetic din nucleul celulelor eucariote prin coloraia verde metil acetic. Materiale necesare: -o ceap -bisturiu sau lame ascuite -pense fine, atraumatice -lame portobiect degresate, lamele Protocol 1. 2. 3. 4. Prelevarea unei piese fine de epiderm de ceapa (acea fin pelicul de la Se aeaza fragmentul pe o sticl de montare i adaug 1-2 picturi de Se spal n ap distilat Se aeaz epidermul de ceap ntre lam i lamel suprafaa unei foi) verde metil acetic i se las 1-2 minute

Rezultate Se observ la microscop nucleii celulelor colorai n verde i nucleolii n rou, (figura 10).

Figura 10. Rezultatele colorrii nucleului i nucleolului cu verde metil acetic