UNIVERSITATEA OVIDIUS CONSTANA FACULTATEA DE MEDICIN GENERAL

STUDIU HISTOLOGIC COMPARATIV AL ACIUNII NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL ASUPRA TEGUMENTULUI

Conductor tiinific Profesor Universitar Doctor Teofil Mehedini

Doctorand Olga Surdu

Constana 2007

INTRODUCERE Balneologia a fost o important parte a medicinei timp de secole, dar n ultimile decenii a pierdut mult din reputaia academic. Dovezi empirice, majoritatea din surse vechi, sugereaz c balneoterapia are un mare potenial terapeutic pentru multe din problemele de sntate care afecteaz populaia, mai ales pentru bolile cronice. Astzi balneoterapia are un aer uor desuet, datorit avntului tiinific i tehnologic care a adus cu sine substane de sintez cu aciune intit asupra factorilor cauzali ai bolilor sau asupra mecanismelor patogenice oferind o modalitate mai rapid i mai uoar de tratare dect balneoterapia. O metod terapeutic balneo-fizical, nu poate aciona asupra "fenomenului boala" n sens simplu cauzal, intru ct n fiecare caz n parte intre mijlocul terapeutic i procesul patologic se interpune organismul bolnav n ansamblul lui, cu sistemele sale de reglare proprii i multiple i cu reactivitatea sa individual. Activarea acestor sisteme complexe sub aciunea factorilor de cur influeneaza legtura cauz-efect care s-ar stabili intre agentul terapeutic i organul/funcia afectat. Un spor de dificultate n evaluarea efectelor terapeutice ale peloidoterapiei este adus i de faptul c o cur balnear este un complex de factori care n afar de factorul terapeutic natural i el foarte complex - include: schimbarea climei, a habitatului, a alimentaiei, lipsa ori cel puin diminuarea stresului din activitatea cotidian, etc. n mod tradiional sunt folosite trei modaliti de aplicare terapeutic a nmolului care sunt diferite intre ele i cresc complexitatea demersului tiinific. Logic i raional nu poate fi negat aciunea terapeutic a nmolurilor, dar riguros tiinific este dificil de stabilit care din proprieti sau componente determin un anume efect. CAPITOLUL I NIVELUL CUNOATERII N DOMENIU I MOTIVAIA ALEGERII TEMEI I.1. STADIUL CUNOATERII I CERCETRII N PELOIDOTERAPIE Folosite nc din antichitate, nmolurile, par a nu-i fi dezvluit inc toate valenele i virtuile terapeutice. Complexitatea compoziiei biochimice, bogata flor microbian, inter-relaiile dintre componentele lui, ingreuneaz decelarea efectelor fiziologice i terapeutice i a mecanismelor prin care sunt produse. Orientarea general a cercetrii n acest domeniu se indreapt spre fundamentarea tiinific a balneoterapiei, avnd n vedere respectarea criteriilor medicinei bazate pe dovezi, pentru a se depsi etapa empiric de folosire a nmolurilor. Direcia cercetrii. n momentul actual se fac studii referitoare la explicarea/demonstrarea efectelor balneoterapiei la nivel celular: variaia citokinelor plasmatice, a markerilor condrocitari, limfocitari, etc. Sunt studii fcute n strintate (Italia, Israel) i recent i n Romnia referitoare la

dinamica citokinelor plasmatice sub aciunea peloidoterapiei att la persoana sntoas ct i la bolnavii cu afeciuni reumatismale degenerative i inflamatorii. Stadiul actual al cercetrii n peloidoterapie. n momentul actual, n Romnia, se ntreprind studii referitoare la efectele peloidoterapiei i la obinerea unor produse biologic-active extrase din nmol n Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol. Pe plan internaional, n momentul actual se fac incercri de reevaluare a studiilor balneologice, metaanalize, pentru a demonstra pe baze tiinifice c exist o balneologie bazat pe dovezi (evidence based balneology). n acest scop autorii investigheaz bazele standard de date medicale: Medline, Embasse, Database, Pedro, PubMed i Registrul studiilor controlate Cochrane, analiznd lucrrile i studiile inregistrate prin prisma cerinelor medicinei bazate pe dovezi. Cutnd n bazele de date lucrri referitoare la efectele fiziologice ale balneoterapiei, Pal Geher a identificat puin peste o mie de articole n intervalul 1966-2006, dar din acestea doar o sut treizeci i opt conineau rezultate originale referitoare la diverse modaliti terapeutice. Studii clinice referitoare la eficacitatea balneoterapiei n suferinele de tip artrozic sunt i ele foarte puine: dou metaanalize, trei studii dublu-orb controlate, cincisprezece studii asupra eficacitii balneoterapiei n artrozele de genunchi i old i un singur studiu cost/eficien. Se mai gsesc n aceste baze de date cinci studii fundamentale referitoare la efectele balneoterapiei asupra citokinelor proinflamatorii, nivelului plasmatic al cisteinei, condrocitelor, nivelului plasmatic al endorfinelor i al radicalilor liberi. Nici un studiu histologic nu este identificat n aceste baze de date. I.2. MOTIVAIA ALEGERII TEMEI. Tema pe care am ales s o realizez se afl la intersecia obiectului de studiu al mai multor discipline - fiziologie, biochimie, imunologie - cu histologia. n plus progresul tiinific n medicin a depsit etapa de lucru cu microscopul optic sau electronic. Studiul structurilor celulare este, n acest moment, apanajul biologiei celulare, al biochimiei i al geneticii, domenii care studiaz biogeneza organitelor celulare, compoziia lor biochimic, controlul genetic al sintezelor necesare diverselor structuri. Cu toate aceste progrese nu a fost efectuat nici un studiu histologic asupra tegumentului, care este elementul structural i funcional cel mai solicitat n cursul balneoterapiei. 1. Am ales aceast tem pentru teza de doctorat datorit faptului c nu am gsit rspunsuri la unele intrebri ivite n cursul activitii practice de ingrijire a pacienilor. Precizez c n literatura de specialitate studiat (din ar i din strintate) nu am gsit nici un studiu care s evidenieze modificrile histologice produse la nivelul tegumentului uman de aplicaia nmolului. 2. Prin elaborarea aceastei teme mi-am propus s demonstrez c peloidoterapia este o opiune terapeutic valoroas atunci cnd este judicios administrat i nu un tratament empiric, c efectele terapeutice produse de nmol sunt autentice nu placebo, iar amorsarea lor are loc la nivel tegumentar.

3.

Am dorit s contribui la fundamentarea pe baze tiinifice a peloidoterapiei,

respectnd rigorile impuse de conceptul medicinei bazate pe dovezi (evidence based medicine), contribuind astfel la dezvoltarea balneologiei bazate pe dovezi. Am considerat c trebuie s studiez modificrile histologice tegumentare, posibile, ca prim pas n fundamentarea pe baze tiinifice, de actualitate a peloidoterapiei. SCOPUL LUCRRII este obiectivizarea posibilelor modificri histologice cutanate produse de peloidoterapie pentru a completa tabloul modificrilor funcionale sistemice i locale, relativ bine cunoscute, cu modificrile histologice, imunohistochimice i bio-histometrice tegumentare aprute n urma aplicaiei terapeutice. Prin aceast tez am dorit s rspund la urmtoarele intrebri:

1. 2. 3.

Peloidoterapia influeneaz/modific structura histologic a epidermului? Stimularea sistematic, repetat, susinut a circulaiei periferice de termoreglare prin

peloidoterapie modific numrul i structura vaselor de snge din derm?. Modularea rspunsului imun produs de aplicaia peloid poate fi evideniat n

aspectul histologic tegumentar? Pentru atingerea scopului i a obiectivului propus al tezei am evaluat urmtoarele aspecte ale peloidoterapiei:

1.

structura histologic a epidermului i a dermului.

Pentru evaluarea impactului aplicaiei peloide asupra epidermului am urmrit pe preparatele histologice aspectul general al epidermului, grosimea i numrul de rnduri celulare ce compun fiecare strat epidermic. Prin biohistometrie am determinat raportul arie nuclear/arie epidermic i numrul de nuclei pe cmpul microscopic epidermic. Prin tehnici de imunohistochimie am determinat aspectul citokeratinelor n epiderm i n structurile tegumentare anexe. Am determinat n serul pacienilor IL6 i TNF inainte de inceperea tratamentului i la sfrsitul curei. Pentru evidenierea efectelor neuro-endocrine ale aplicaiei de nmol asupra structurii tegumentului am urmrit pe preparatele histologice prezena melaninei n keratinocite i incrctura cu melanin a keratinocitelor i n serul pacienilor nivelul cortizolului i al TSH-ului inainte de tratament, la 24 de ore dup prima aplicaie i la sfrsitul curei. Pentru evaluarea efectelor peloidoterapiei asupra dermului am urmrit aspectul histologic pe preparatele clasice histologice. Prin biohistometrie am determinat raportul arie nuclear/arie dermic total i numrul de nuclei pe cmpul dermic, iar prin studiul unor parametrii sanguini am determinat impactul variaiei acestor rapoarte asupra echilibrului acido-bazic.

2.

structura i numrul vaselor de snge din derm i hipoderm.

Pentru evaluarea efectelor circulatorii locale ale peloidoterapiei, prin studiul histologic am analizat aspectul microscopic al vaselor de snge din derm iar prin studiul biohistometric am

evaluat numrul vaselor de snge din tegument n cele trei modaliti de utilizare a nmolului, comparativ cu lotul martor. Pentru evaluarea impactului produs de modificrile circulatorii locale asupra homeostaziei am determinat unii parametrii biochimici ai echilibrului gazelor sanguine.

3.

modularea rspunsului imun tegumentar i sistemic

Pentru evidenierea impactului peloidoterapiei asupra funciei imune i a efectelor ei tegumentare am efectuat studiul imunohistochimic pentru diferenierea limfocitelor T i B din derm i am determinat dinamica IgE plasmatic inainte de inceperea tratamentului, la 24 de ore dup prima aplicaie i la sfrsitul curei de 12 zile. Pentru toate rezultatele acestor studii am efectuat interpretarea statistic n conformitate cu rigorile medicinei bazate pe dovezi i am raportat rezultatele obtinute la lotul martor. Am solicitat avizarea efectuarii studiului de la Comisia de Etic a Universitaii Ovidius din Constana. CAPITOLUL II PREMIZE TEORETICE II. 1. PREMIZE TEORETICE Tegumentul este structura plasat intre nmol i mediul intern al organismului. Aplicarea sistematic a nmolului pe tegument pe durata unei cure determin necesitatea obiectiv de a rspunde continuu unei solicitri neobinuite. Tegumentul este un organ complex cu posibiliti reactive numeroase, semnificative i conexiuni nervoase i/sau umorale cu toate organele. Aplicarea nmolului pe toat suprafaa tegumentar produce efecte fiziologice locale i sistemice cu consecine pn la nivel celular (1) Concret, n cursul aplicaiei peloide, tegumentul realizeaz:

recepia senzitiv a calitilor/proprietilor nmolului i transmiterea lor spre etejele

superioare de integrare i control: schimbul de energie i substan cu mediul peloid; indeplinirea comenzilor adaptative: circulatorii (circulaia periferic de termoreglare),

secretorii (sudoraia), de protecie (keratinogeneza, melanogeneza, formarea filmului hidrolipidic); integrarea efectelor cutanate ale aplicaiei de nmol n fiziologia general a

organismului: termoreglarea, sinteza vitaminei D, optimizarea balanelor homeostatice: imune, endocrine i neurovegetative ale organismului . II.2. DEFINIIA I CLASIFICAREA NMOLURILOR Nmolurile sunt pmnturi, roci de consisten pstoas, folosite ca remedii terapeutice din vechime. Unele efecte binefctoare ale nmolurilor sunt cunoscute n mod empiric din antichitate, altele au fost descrise i studiate relativ recent, unele au ramas i azi n stadiul explicaiei sumare. n deceniul III al secolului XX SOCIETATEA INTERNAIONAL DE HIDROLOGIE MEDICAL (ISMH) a introdus termenul de peloid, a elaborat definiia i a stabilit criteriile de

clasificare ale nmolurilor. n definiia dat de Societatea Internaional de Hidrologie Medical, nmolurile (peloidele) sunt "substane formate n condiii naturale sub influena proceselor geologice i care n stare fin divizat i n amestec cu apa se folosesc n practica medical sub form de bi sau proceduri locale." II.3. PROPRIETILE FIZICE I COMPOZIIA BIOCHIMIC A NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL Nmolul este un sistem fizico-chimic eterogen alctuit dintr-o faz lichid ce conine ap i sruri minerale solubile n ap, o faz solid ce conine substane minerale i organice i o faz gazoas care conine hidrogenul sulfurat. A. Caracterizarea fizico-chimic a nmolului integral, proaspt recoltat Pentru aprecierea potenialului terapeutic al nmolului este necesar efectuarea unei analize fizico-chimice detaliate. Fiind un material biologic folosit n terapia uman analiza este efectuat dup metodele indicate n Farmacopeea Romn cu unele completri luate din metodele de lucru folosite pentru analiza solurilor. Rezultatul obinut se prezint sub forma buletinului de analiz fizico chimic. A1. caracteristicile fizico-chimice ale nmolului sapropelic de Techirghiol. Nmolul sapropelic de Techirghiol este un nmol alcalin cu pH-ul 8,2. Greutatea specific (densitatea) este legat de natura componentelor nmolului, de coninutul n substane organice, n sruri solubile sau n elemente anorganice insolubile, exprimnd consistena peloidului. Ea are o valoare de 1,283 g/cm3. De densitate depind consistena i vscozitatea nmolului care sunt factorii fizici ce permit aplicarea terapeutic sub form de baie sau mpachetare. Coninutul de substan uscat definit prin diferena dintre 100 i umiditatea nmolului este de 28,73 g%. Bazele schimbabile definite ca sum a cationilor bazici Ca+2 + Mg+2 +K+ + Na+ reprezint capacitatea de schimb cationic a peloidului. Valoarea determinat a acestei sume, pentru nmolul de Techirghiol este de 47,6 me/100g nmol. Granulometria (indicele de dispersie) indic o compoziie pulverulent, cu valori ale particulelor componente sub 0,3 mm. Procentual cele mai numeroase sunt particulele cu diametrul cuprins intre 0,09 i 0,04 mm care reprezint 87,98% din totalul particulelor. A2. compoziia chimic global. Nmolul sapropelic din zcmntul de pe fundul lacului este puternic hidratat (71,24 g%), bogat n substane minerale (20,36 g%) i cu un coninut n substane volatile prin calcinare de 8,4 g%. Substanele minerale dozabile n cantitate de 20,36 g% se gsesc att n faza lichid ct i n faza solid. Componenta solid mineral conine o fraciune calcico-magnezian solubil n acid clorhidric i o fraciune argiloas insolubil (reziduu insolubil). Privit ca un tot unitar, fraciunea solid

mineral se prezint ca un schelet de bioxid de siliciu pe care se grefeaz srurile acvasolubile i cele acidosolubile. A3. compoziia chimic sistemic (grupe de substane). Nmolul de pe fundul lacului Techirghiol este un nmol organic cu un coninut total de 9,6 g% substane organice din care sunt de reinut: componenta humic n cantitate de 0,9551 g% (raportat la nmolul integral) i componenta separat prin extract eteric ce conine ceruri, rsini i grsimi n cantitate de 1,612 g% Substanele humice , cu o pondere de 9,95 g% din total substane organice, fara a atinge valori foarte mari imprim nmolului caracteristici: frenatoare enzimatice, schimbtoare de ioni, inalt grad de gonflare. Procesul de humificare al nmolului este invers proporional cu coninutul n celuloz. (7) Componenta mineral este reprezentat de metale i microminerale variate i n cantiti ce caracterizeaz un nmol bine mineralizat. (8) B. Variaia compoziiei biochimice a nmolului n diverse circumstane Dup extracie nmolul ia contact cu aerul iar pentru aplicaia terapeutic este inclzit la o temperatur de 550 C. Determinarea compoziiei biochimice n aceste ipostaze a relevat faptul c nmolul nu sufer modificri semnificative, ceea ce inseamn c n cele trei modaliti de peloidoterapie este folosit acelasi factor terapeutic. Fiind folosit acelasi factor terapeutic rezultatele obinute n urma studiului pot fi comparate intre ele. B1. Variaia compoziiei biochimice a nmolului n condiiile expunerii la aer timp de 48 de ore. Analiza compoziiei biochimice a nmolului dup expunerea la aer, este necesar pentru a reproduce condiiile onciunii cu nmol rece. Meninerea nmolului n aer liber, nu produce modificri ale compoziiei chimice i/sau ale proprietilor fizico-chimice de natur s influeneze efectele peloidoterapiei. B2. Variaia compoziiei biochimice a nmolului n condiiile inclzirii la o temperatur de 55 C timp de 72 de ore. Experimentul l-am efectuat pentru reproducerea condiiilor de conservare a nmolului (inclziri i reinclziri succesive) pentru aplicaiile calde. Inclzirea i reinclzirea experimental timp de 3 zile nu produce modificri n compoziia lui chimic de natur s influeneze efectele aplicaiilor. B3. Variaia compoziiei biochimice dup aplicaia terapeutic. Variaia compoziiei biochimice a peloidului la finalul aplicaiei terapeutice pledeaz pentru participarea componentelor biochimice la producerea efectelor fiziologice i terapeutice. Cresc cantitativ i n baia de nmol i n mpachetarea de nmol urmtoarele componente: substanele volatile, magneziul, sodiul (variaie concordant). Scad cantitativ: fierul, silicaii, pH-ul i substana uscat. Inregistreaz o variaie discordant: substanele minerale totale, calciul, potasiul.
0

Variaii nesemnificative statistic au inregistrat: substanele volatile, pH-ul, i substana uscat la ambele tipuri de aplicaie, substanele minerale totale la mpachetarea cu nmol. Acest schimb material dintre nmol i organism este posibil datorit: unor caliti ale nmolului: termopexia, hidropexia, capacitatea de schimbtor de ioni, structurii anatomice, tipului de piele i strii funcionale a tegumentului n momentul curentul electric dezvoltat n nmol, i bine ineles compoziiei biochimice; aplicaiei terapeutice. II.4. UNELE PROPRIETI ALE NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL CARE GENEREAZ EFECTE TERAPEUTICE Efectele favorabile ale nmolului sapropelic din zcmntul subacvatic de la Techirghiol sunt generate de calitile fizice i de compoziia biochimic. a. Termopexia este numele generic al proprietilor/calitilor termice ale nmolurilor i se refer la primirea, inmagazinarea i cedarea cldurii. Pentru toate procesele biologice (intra- i extracelulare), temperatura reprezint una din condiiile eseniale ale desfurrii optime. Temperatura influeneaz sistemele vii incepnd de la nivelurile fundamentale ale proceselor biofizice i moleculare, pn la sistemele de cea mai mare complexitate funcional de integrare. b. Compoziia biochimic a nmolului favorizeaz schimbul de substan dintre nmol i tegument i poate modula activitatea unor enzime localizate tegumentar. b.1. Schimbul de substan dintre nmol i tegument este determinat de substanele coloidale: acizii humici, hidrosulfura de fier, silicea coloidal i determin variaii ale compoziiei biochimice a nmolului la sfrsitul aplicaiei terapeutice. Termalitatea mediului peloid crete permeabilitate tegumentar. Elementele solubile din faza lichid a nmolului particip la schimbul cu pielea i mucoasele cu att mai intens cu ct nmolul este mai diluat. n cazul balneoterapiei cu soluii cloruro sodice, cum sunt apa i nmolul lacului Techirghiol, cristalele de sruri rmase pe tegument constituie mantaua de sare, care prin aciunea higroscopic a NaCl stimuleaz timp indelungat terminaiile nervoase din piele i rein apa din atmosfer realiznd schimburi osmotice tegumentare diferite fa de condiiile cotidiene ale organismului. pH-ul tegumentar acid confer tegumentului permeabilitate numai pentru cationi. Modificarea pH-ului cutanat pe durata curei crete permeabilitatea tegumentar i pentru anioni. Bile calde de nmol alcaline incarc pielea electronegativ. b.2. Activitatea modulatorie enzimatic. Trecerea componentelor din faza lichid a nmolului n celulele epiteliale cutanate este posibil prin activarea barierei enzimatice tegumentare reprezentat de citocromoxidaz, fosfataz alcalin i ATP- az. Substanele humice din nmol acioneaz ca frenatori enzimatici, fiind dovedit activitatea antihialuronidazic.

Compusii cu sulf din compoziia nmolului produc o hiperemie tegumentar chiar la temperaturi mai sczute ale nmolului, intensific activitatea histaminazei tisulare i cresc activitatea histaminopexic a serului. II.5. UNELE MODALITI DE REACIE ALE ORGANISMULUI LA PELOIDOTERAPIE Aplicarea nmolului pe intreaga suprafa a tegumentului declanaz reacii funcionale locale tisulare i generale, inhibnd sau activnd unele sisteme enzimatice i metabolii intermediari. Modificarile bio- i histochimice, produse de nmol, observate la animalele de laborator sunt nespecifice, incadrndu-se n reaciile funcionale generale adaptative ale organismului i constau n modularea reactivitii generale spre parametrii optimali. Cura balear cu nmol produce efecte favorabile ce persist timp indelungat prin modificarea capacitii de rspuns adaptativ la diversi stimuli.

1.

Reactivitatea cutanat prezint creteri ale excitabilittii cutanate, ameliorarea

capacitii de difuziune a hialuronidazei i stimularea sistemului reticulo-endotelial. Tot la nivel cutanat au fost evideniate modificri metabolice i enzimatice tisulare sub influena aplicaiilor calde de nmol. Este vorba despre: creterea fosfatazelor alcaline i a oxidazelor, scderea reactiei PAS pentru evidenierea mucopolizaharidelor neutre din piele i o accentuare a reaciei Hale pentru mucopolizaharidele acide (acidul hialuronic). Baia general de nmol la 430 C modific starea coloidal a substanei fundamentale din piele i activeaz funciile enzimatice oxido-reductoare i eliberatoare de energie cu consum de glicogen.

2.

Reactivitatea neuro-endocrin. Modificrile enzimatice i metabolice aprute n terapeutice. Sub aciunea

glandele endocrine dup peloidoterapie difer dup specificul secretor al glandei, dup stadiul funcional n care se gsete glanda i sunt legate de tipul aplicaiei de sintez cu pstrarea specificitii fiecreia. Corelat cu activitatea de armonizare funcional endocrin este i stimularea activitii axului hipotalamo-hipofizo-suprarenalian tradus prin optimizarea nivelurilor plasmatice ale: -endorfinelor, A.C.T.H.-ului i cortizolului. Mecanismul endocrin este implicat i n inducerea efectelor antiinflamatorii ale peloterapiei prin modularea activitii axului hipotalamo-hipofizo-suprarenalian i prin echilibrarea general a balanei endocrine, efecte persistente i post-cura. Reactivitatea fa de mediatorii chimici acetilcholina i adrenalina ca i cea fata de ionii corelai cu activitatea vegetativ Ca, Mg, K este crescut dup cura extern cu nmol, iar tonusul vegetativ prezint o tendin spre reglare/normalizare, ceea ce duce la remedierea stigmatelor vegetative. nmolului se produce o stimulare armonic n toate glandele n sensul creterii activittii enzimatice i

Reactivitatea imunologic. Cura balnear cu nmol determin creterea capacitaii

de aprare antimicrobian prin creterea puterii fagocitare a leucocitelor-evideniat prin modificrile indicelui opsonocitofagic (I.O.C.). De asemenea, a fost evideniat efectul antiinflamator de aproximativ 50% din cel al diclofenacului produs de extractul din nmol. Un alt studiu a investigat dinamica citokinelor plasmatice i a moleculelor solubile de adeziune plasmatica asupra subiecilor sntoi. Aciunea aplicaiei peloide asupra reelei de citokine ar putea fi legat de efectele proteinelor de stres termic asupra funciilor plachetare i ale celulelor endoteliale. Alte studii demonstraser ca termoterapia cu nmol influenteaz nivelul seric al unor citokine implicate n metabolismul condrocitelor i prin ele n patogenia artrozelor prin modularea producerii lor: CAPITOLUL III FACTORI TERAPEUTICI, TRATAMENT APLICAT, MATERIALE, METODE I TEHNICI DE LUCRU III.1. FACTORII TERAPEUTICI NATURALI SPECIFICI AREALULUI TECHIRGHIOL I MODALITILE DE FOLOSIRE A LOR III.1.1. Factorii terapeutici naturali specifici arealului Techirghiol sunt: climatul, apa mineral a lacului i nmolul sapropelic din zcmntul de pe fundul lacului. Climatul de step marin cu veri calde, ierni reci, diferene mari de presiune, vnturi puternice i frecvente, se incadreaz n grupul bio climatelor stimulant - tonifiante. Vara i iarna acest climat are o puternic aciune excitant asupra organismului iar primvara i toamna aceast aciune este redus. Apa lacului clorurat, sulfatat, bromurat, sodic, magnezian, hiperton este folosit pentru aplicaii sub form de bi generale reci (imersia n lac) sau calde n czi sau bazin. [(1), (2)] III.1.2. Tratamentul aplicat zilnic pacienilor internai n Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol const n hidroterapie i un numr variabil de proceduri adjuvante (electroterapie, kinetoterapie, masoterapie). Nu am efectuat nici o modificare acestui tratament intru ct am urmrit evaluarea efectelor obinute, n condiiile reale de tratament. Durata tratamentului aplicat este de 12, 18, uneori 24 zile, n funcie de necesitile pacientului i tipul curei. Pentru realizarea tezei am selectat pacieni care au efectuat cura de 12 zile. III.1.3. Materialele folosite n realizarea studiului au fost:

nmol sapropelic din zcmntul de pe fundul lacului Techirghiol, ap mineral din

lacul Techirghiol, extract de plante; dotrile din baza de tratament a Sanatoriului Balnear i de Recuperare Techirghiol biopsie tegumentar i dotrile din sala de intervenii chirurgicale; dotrile din laboratorul de histologie al Facultii de Medicin General unde am

efectuat studiile.

10

III.1.4. Recoltarea nmolului se face din zona central a lacului unde exist trei insule cu nmol terapeutic, descrise de D. V. NARTI. III.2. METODELE I TEHNICILE DE LUCRU FOLOSITE PENTRU STUDIUL HISTOLOGIC, IMUNO-HISTOCHIMIC I BIOHISTOMETRIC III.2.1. Alctuirea loturilor pentru studiul histologic, imuno-histochimic i

biohistometric. La acest studiu au participat un numr de 35 de pacieni aflai la tratament n Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol n cursul anului 2005. Loturile au fost alctuite din cte zece pacieni pentru fiecare tip de aplicaie peloid, iar lotul martor a fost alctuit din cinci pacieni, care nu au primit peloidoterapie sau helioterapie. Tratamentul balnear de care au beneficiat pacienii lotului martor a constat n baie cu extract de plante i alte proceduri fizioterapice adjuvante. Criterii de includere n lot. Au fost inclusi n loturile de studiu pacieni internai n Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol care sufereau de afeciuni degenerative cronice ale sistemului mio-artro-kinetic i care nu prezentau semne clinice i/sau biologice de activare inflamatorie a suferinei. Pentru toi pacienii durata curei a fost de dousprezece zile. Pacienii au fost evaluai clinic (examen clinic general, pe aparate i sisteme) i investigai biologic (VSH, HLG, CRP, glicemie, transaminaze hepatice, uree, creatinin, acid uric) inainte de inceperea tratamentului. Criterii de excludere. Nu am introdus n loturile de studiu persoane cu afeciuni ale pielii (cronice sau acute) care ar fi influenat aspectele microscopice. De asemenea nu am selectat pentru acest studiu pacieni cu afeciuni inflamatorii cronice ale aparatului locomotor: artrit reumatoid, spondilit ankilopoetic sau alte artropatii inflamatorii. Pacienii au fost de acord cu recoltarea biopsiei cutanate n scop de cercetare i cu prezentarea datelor obinute n urma analizei n diverse materiale tiinifice. Le-am garantat confidenialitatea identitii lor. III.2.2. Recoltarea i numerotarea probelor Recoltarea a fost efectuat la Spitalul Clinic Judeean de Urgen Constana, n sala de operaii aseptice din secia de chirurgie, respectnd toate cerinele unei intervenii de mic chirurgie, n scopul prelevrii unei biopsii. Am recoltat tegument din regiunea deltoidian stng, printr-o incizie perpendicular pe tegument avnd dimensiunile de 1,5/0,5/0,5 cm. Am stabilit astfel, dimensiunea fragmentelor recoltate pentru a obine o fixare de calitate, o secionare bun i o etalare pe lama port-obiect adecvat cerinelor studiului. Imediat dup recoltare fragmentul a fost introdus intr-o eprubet cu dop care coninea fixatorul. Raportul volumetric intre piesa de fixat i soluia fixatoare a fost de 1/10 1/15,

11

respectiv, volumul soluiei fixatoare s fie de 10 - 15 ori mai mare dect volumul piesei de fixat. Probele au fost notate dup cum urmeaz:

M1 pn la M5 pentru lotul martor; IN1 pn la IN10 pentru lotul cu mpachetarea general cald; BN1 pn la BN10 pentru lotul cu baia general cald; ON1 pn la ON10 pentru pacienii care au efectuat onciunea cu nmol rece.

III.2.3. Fixarea materialului biologic recoltat Fragmentele recoltate au fost imediat fixate pentru a mpiedica alterarea structurilor celulare i tisulare i pentru a pregti colorarea. III.2.4. Prelucrarea probelor pentru studiul histologic Fragmentele de piele astfel fixate le-am prelucrat clasic prin includerea la parafin, tehnic ce permite efectuarea unor seciuni seriate fine de 3-5 grosime i a mai multor coloraii. Tehnica utilizat a comportat urmtorii timpi: deshidratarea, clarificarea, parafinarea, includerea propriu-zis, secionarea blocului, lipirea seciunilor pe lame i uscarea lor, colorarea seciunilor, uscarea i depozitarea materialului histologic. III.2.5. Tehnici de colorare pentru studiul histologic Evidenierea modificrilor structurilor histologice am realizat-o prin executarea unor seciuni seriate care au fost colorate prin:

metoda colorrii cu hematoxilin-eozin (H.E.). n tehnica de colorare cu

hematoxilin-eozin, nucleii celulelor se coloreaz n albastru-violet n funcie de heterocromatina coninut. Citoplasma celulelor apare colorat n roz, fibrele de colagen se coloreaz slab n roz palid, iar fibrele elastice i de reticulin nu se evidenieaz.

metoda colorrii cu verde de lumin tehnica Goldner-Szekeli (G.S.); n coloraia

tricromic cu verde de lumin Goldner-Szeckeli, nucleii apar colorai n rou nchis sau maron, nucleolii n negru, citoplasmele roz-violacei, eritrocitele n rou portocaliu, fibrele de colagen n verde iar fibrele musculare n rou-brun.

metoda PAS-hematoxilin. n aceast coloraie mucopolizaharidele se coloreaz n

rou-intens iar nucleii celulelor n albastru. metoda colorarii cu orcein permite evidenierea fibrelor elastice care se coloreaz n

maroniu rocat. Nucleii se coloreaz n maroniu deschis. III.3. metodele i tehnicile de lucru folosite pentru studiul imunohistochimic Metodele de imunohistochimie se bazeaz pe stabilirea unei legturi intre un antigen care este component celular sau tisular i un anticorp specific marcat. Pentru anticorp am folosit marcarea enzimatic cu peroxidaz extras din rdcin de hrean (HRP horseradish peroxidase) iar pentru evidenierea complexelor antigen anticorp formate am folosit metoda indirect biotin-streptavidin

12

conjugat enzimatic (labelled streptavidin-biotin LSAB). Prin aceast metod reacia pozitiv se traduce prin mase optic dense, localizate la nivelul structurilor celulare. III.4. Metoda de lucru pentru studiul biohistometric Preparatele au fost examinate la microscopul Nikon E600 i achiziionate cu ajutorul unei videocamere Sony. Imaginile au fost prelucrate folosind soft-ul de analiz de imagine LUCIA G. III.5. Metode i tehnici de lucru pentru studiul biochimic i imunologic sanguin. Pentru aceast etap a studiului am alctuit dou loturi n sezonul estival i un lot n extrasezon. Inregimentarea n loturi am efectuat-o dup criteriile folosite la studiul histologic. CAPITOLUL IV REZULTATE EXPERIMENTALE I DISCUIA REZULTATELOR IV.1. MODIFICRI HISTOLOGICE EPIDERMICE Tabelul 1 modificrile histologice epidermice mpachetarea cu nmol cald Bandelet fin alctuit din 3 4 rnduri de cornocite 1-2 rnduri de celule 3-4 rnduri de celule intre creste i 9-12 rnduri la nivelul crestei Nemodificat Crescut, dispus la polul apical Subire Evideniate printre keratinocite Baia general de nmol Bandelet alctuit din 5-6 rnduri de cornocite 2-3 rnduri de celule 3-5 rnduri intre creste i 10-15 la nivelul crestelor Nemodificat Uor crescut, dispus apical Subire Evideniate printre keratinocite Onciunea cu nmol rece Bandelet alctuit din 2 3 rnduri de cornocite 1 rnd de celule 2-3 rnduri intre creste i 8-10 la nivelul crestelor Nemodificat Foarte crescut, dispus n toat celula Subire Evideniate printre keratinocite

Stratul cornos Stratul granulos Stratul spinos Stratul germinativ Cantitatea de pigment melanic Membrana bazal Celule cu nuclei tahicromi

IV.1.1. Reducerea grosimii generale a epidermului am observat-o la toate cele trei forme de administrare a nmolului i provine din diminuarea grosimii straturilor componente ale tegumentului.

Figura 1stratul exfoliator, tegument expus la BN, col. HEx20

13

Figura 2 tegument expus la N, col. HEx40 Diminuarea grosimii stratului exfoliator prin descuamare, observat la toate preparatele, este produs sub aciunea unor substane keratolitice sau emoliente care se gsesc n nmol cum sunt: cerurile, grsimile, rinile, bituminele, clorura de sodiu, sulful. Onciunea cu nmol rece se asociaz cu helioterapia i imersia n lac, fiind un complex terapeutic cunoscut sub numele de bi reci. Helioterapia folosit ca unic procedur terapeutic produce ingroarea stratului cornos. La pacienii care au efectuat bi reci nu am constatat ingroarea stratului cornos, ba dimpotriv am remarcat reducerea grosimii acestui strat. Oxizii de zinc i de fier care se gsesc n compoziia biochimic a nmolului i a apei lacului sunt substane cu aciune fotoprotectoare. Aspectul histologic al tegumentului expus complexului terapeutic rece este determinat de calitile fotoprotectoare i emoliente/keratolitice ale nmolului sapropelic. Folosirea nmolului drept agent keratolitic este valoroas n afeciunile dermatologice care evolueaz cu hiperkeratinizare. Reducerea numrului de rnduri de celule ce alctuiesc stratul granulos, observat la toate preparatele sugereaz un proces de accelerare a keratinizrii i o posibil modificare a structurii desmozomilor. Keratinocitele sunt surse i inte pentru numeroase citokine. Pentru evaluarea impactului peloidoterapiei asupra keratinizrii am determinat n sngele pacienilor dou citokine: IL6 care este stimulatorie pentru keratinogenez i TNF care are efect citostatic reversibil asupra keratinocitului inhibnd keratinizarea. Trebuie subliniat faptul c cele dou citokine nu acioneaz numai la nivelul tegumentului i numai asupra keratinizrii. Ele au funcii multiple n organism i mai muli factori intervin n reglarea nivelului lor plasmatic. Variaia IL6 inainte de inceperea tratamentului i la sfrsitul curei este prezentat n figura 3. Din analiza datelor se observ scderea semnificativ statistic a nivelului plasmatic al IL6 dup peloidoterapie. mpachetarea general cu nmol produce cea mai mare scdere a nivelului plasmatic al IL6. Baia general de nmol i onciunea cu nmol rece produc scderi mai mici, comparabile intre ele, i aflate la limita semnificanei statistice: P(t = 0.05).

14

7 6 5 4 3 2 1 0 Medie baie de namol Medie impachetare cu namol Medie onctiune cu namol

inainte de tratament

la sfarsitul curei

Figura 3 variaia nivelului plasmatic al IL6 n funcie de tipul aplicaiei peloide Factorul de necroz tumoral are efecte opuse IL6, respectiv inhib keratinizarea. Valorile obinute n sngele pacienilor n urma determinrii acestei citokine sunt prezentate n figura 4.
7 6 5 4 3 2 1 0 Medie baie de namol Medie impachetare cu namol Medie onctiune cu namol

inainte de tratament

la sfarsitul curei

Figura 4 variaia nivelului plasmatic al TNF alpha n funcie de tipul aplicaiei peloide Din analiza datelor rezult o scdere a valorilor plasmatice a TNF n toate formele de aplicaie peloid, dar numai onciunea cu nmol determin o scdere semnificativ statistic. Scderea nivelului plasmatic al acestei citokine reprezint diminuarea inhibrii keratinizrii, astfel c aspectul observat pe preparatele histologice este confirmat. n cazul onciunii cu nmol rece intervine i helioterapia care este factor recunoscut de ingroare a tegumentului. Scderea factorului de necroz tumoral alpha, la limita semnificanei, P(t=0.05), subliniaz scderea activitii antikeratinizante n situaia expunerii la soare. Neingroarea tegumentului sub aciunea razelor solare este determinat de faptul c nmolul este un ecran protector fa de radiaia solar Keratinizarea normal necesit i desmozomi cu structur funcional optim. Accelerarea keratinizrii sub aciunea aplicaiilor peloide sugereaz faptul c structura desmozomilor care sunt foarte importani n acest proces este influenat de aplicaia peloid.

15

Pentru structura normal a desmozomilor este important prezena calciului. Este cunoscut faptul c domeniul extracelular al dispozitivului transmembranar de legtur din structura desmozomilor este reprezentat de proteine din clasa cadherinelor (desmogleina i desmocolina), i necesit calciul pentru fixarea de structura omoloag. a celulei vecine. n acest scop am determinat dinamica plasmatic a calciului, magneziului, a raportului Ca/Mg, a sodiului i a potasiului plasmatic. Calcemia i magneziemia au fost determinate att pentru nivelul total ct i pentru compartimentul ionic. Datele sunt sistematizate n tabelul 2. Tabelul 2 variaia comparativ a unor ioni plasmatici dup tipul primei aplicaii: salin sau peloid Fa de valoarea iniial Scade f.v* Crete Crete Scade f.v*. Scade

parametrul Ca+2 nCa Mg+2 nMg Ca/Mg Na+ K+

Imediat dup prima aplicaie PT BS Scade Scade Scade Scade Scade Scade Scade Scade f.v*. Crete Crete f.v*. Scade Scade

La 24 de ore PT Scade Crete Scade Scade Crete Scade f.v*. BS Scade Crete Scade Scade Crete f.v*. Crete

La sfrsitul curei PT BS Crete Crete f.v*. f.v*. Crete Crete Crete Crete Scade Scade f.v*. f.v* Scade Crete

Pentru structura desmozomilor este important calcemia din compartimentul extracelular sub form ionic. Scderea nivelului plasmatic al ionului de calciu la sfrsitul curei balneare se coreleaz cu aspectul histologic de diminuare a grosimii straturilor granulos i exfoliator i susin intervenia aplicaiei peloide ca factor determinat al acestui aspect. Prin biohistometrie, folosind softul Lucia G am determinat raportul arie nuclear/arie epidermic total. Datele obinute sunt reprezentate grafic n figura 5. Analiza statistic a variaiei raportului dintre aria nucler i aria epidermic, fa de lotul martor, nu prezint variaii semnificative statistic, ceea ce evideniaz normalitatea structurii tegumentare, la sfrsitul curei balneare. Valoarea cea mai crescut a acestui raport a fost inregistrat la preparatele obinute dup mpachetarea de nmol (0.33%). Valorile obinute prin analiza preparatelor provenind de la pacieni care au efectuat baie de nmol (0.28%) i onciune cu nmol rece (0.29%) sunt apropiate intre ele dar mai mici dect la lotul martor (0.30%). Scderea ariei nucleare, astfel cum am observat la pacienii care au efectuat baie de nmol i onciune rece cu nmol, este un aspect caracteristic al apoptozei. Apoptoza este un mecanism fiziologic de eliminare a celulelor care ajung n situaii anormale n timpul keratinizrii. Astfel, ea este o important component a morfogenezei keratinocitare i a meninerii balanei homeostatice dintre hipertrofie, atrofie i involuie la nivelul tegumentului.

16

0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 MARTOR LOT 1 (N) LOT 2 (BN) LOT 3 (ON )

Figure 5 variaia raportului arie nuclear/arie dermic total Rezultatele obinute din aprecierea acestui parametru constituie semne morfologice ale apoptozei amplificat de factorii naturali de cur: stressul climatic, mediul acvatic (nefiziologic pentru om) i proprietile lui fizice i biochimice. Aceast afirmaie este susinut de valoarea raportului arie nucler/arie epidermic la lotul martor (0.30%) care a beneficiat de climatoterapie i alt procedur hidroterapic dect nmolul, respectiv baie general cu extract de plante. Hipertermia este un factor pro-apoptotic cu aciune demonstrat. mpachetarea de nmol este o procedur hiperterm (42 450 C temperatura de aplicare a nmolului), dar valoarea crescut a raportului arie nuclear/arie epidermic arat c la acest tip de aplicaie apoptoza a avut rata cea mai mic. Acest fapt conduce la ideea c declanarea i meninerea apoptozei la anumii parametrii este reglat de un complex de factori, iar rolul hipertermiei n acest context este mai puin semnificativ pentru organism dect rolul celorlali factori. Aspectul normal al keratinocitelor din stratul germinativ, observat la toate preparatele presupun diminuarea grosimii epidermului prin alte mecanisme i factori dect inhibarea mitozelor. Variaia numrului nucleilor pe cmpul microscopic epidermic (nc/cmp), a relevat o distribuie la limita semnificanei pentru mpachetarea de nmol, P (t)=0.054, iar pentru baia de nmol i onciunea rece a prezentat o variaie nesemnificativ statistic fa de martor. Datele sunt prezentate n figura 6. Variaia numrului de nuclei pe cmpul microscopic se coreleaz cu aspectul histologic relevat, respectiv reducerea numrului de rnduri celulare ce compun fiecare strat epidermic. Desi valorile medii obinute pentru mpachetarea cu nmol (191.3) i onciunea cu nmol rece (193.4) sunt apropiate, doar diminuarea grosimii tegumentare produs de mpachetarea cu nmol are semnificaie statistic.

17

250 200 150 100 50 0 MARTOR IN BN ON

Figure 6 graficul variaiei numrului nucleilor/cmp epidermic IV.1.2. Creterea cantitii de pigment melanic din keratinocite i din melanocite am constatat-o la cele trei loturi tratate cu nmol. Cea mai intens prezen melanic am remarcat-o la lotul care a efectuat onciunea cu nmol rece unde melanina se dispune n toat citoplasma keratinocitelor. Prin biohistometrie am evaluat incrctura cu melanin a celulelor epidermice determinnd raportul dintre aria ocupat de melanin i aria epidermic total.
0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 MARTOR LOT 1 (N) LOT 2 (BN) LOT 3 (ON )

Figure 7 graficul variaiei ncrcturii cu melanin Melanosinteza este reglat de ctre factori hormonali, auto-, para,- intracrini, interacionnd prin ci activate de mecanisme receptor dependente sau independente. Cel mai important regulator pozitiv al melanogenezei este receptorul MC1 i liganzii lui: MSH-ul i ACTH-ul. Ambii hormoni se leag de receptorul MC1 cu afinitate egal i sunt echipoteni n efectele mitogenetice i melanogenetice. Hormonii melano-stimulani (MSH) sunt peptide , i derivate din proopiomelanocortin care este precursorul ACTH--endorfinei. Alpha-MSH-ul folosete cAMP-ul ca

18

trigger melanogenetic prin activarea exprimrii unui factor transcripional care este restricionat n melanocite n mod normal. Acest factor activat este capabil s transactiveze promotorii mai multor gene ale cror produsi finali moduleaz pigmentarea. Scaderea cantitii de cortizol produs de cortexul suprarenalian sub aciunea peloidoterapiei duce la creterea cantitii de A.C.T.H. dar i de M.S.H., ambii hormoni stimulnd pigmentarea (ca n boala Addison, de exemplu).

16.5 15.5 14.5 13.5 12.5 11.5 10.5 9.5 moment initial la 24 h dupa prima aplicatie bn hoi la sfarsitul curei

in

Figure 8 graficul variaiei cortizolemiei n funcie de tipul aplicaiei peloide Din figura 8 se observ c la 24 de ore dup prima aplicaie peloid sub form de onciune cu nmol rece cortizolemia crete dramatic fa de aplicaiile calde care produc o diminuare a nivelului plasmatic al cortizolului. La sfrsitul curei n cele trei forme de tratament peloid cortizolemia scade fa de nivelul iniial. Scderea cea mai mare se produce la pacienii care au efectuat tratamentul rece, iar cea mai mic la cei care au efectuat baia de nmol. Stimularea cea mai intens a funciei secretorii hipofizare se produce n cursul aplicaiei reci. Pentru aplicaia sub form de baie i mpachetare de nmol valorile sunt comparabile cu cele obinute de cercettori din alte ri. Scderea cantitii de cortizol plasmatic evideniat dup prima mpachetare cu nmol i confirmat la terminarea curei de 12 zile concord cu rezultatele studiilor din strintate. Studiul histologic a adus o dovad morfologic a stimulrii secreiei de hormoni tropi hipofizari prin evidenierea creterii cantitii de melanin din epiderm. IV.1.3.. Celulele T . Pe toate preparatele examinate, intre celulele epidermice se evideniaz celule cu form alungit, spinoas care intr n contact cu multe keratinocite. n general celule T nu circul prin snge, ele fiind rezidente n tegument. Rolul acestei celule este crucial n vindecarea rnilor, cnd produce un factor de cretere asemntor insulinei (insulin like growth

19

factor) care protejeaz keratinocitele fa de apoptoz i le stimuleaz s produc hyaluronan care este depus n matricea extracelular, meninnd-homeostazia i funcia de barier cutanat. [(7), (25)].

Figura 9 tegumentcu celule cu nuclei tahicromi recoltat dup onciunea cu nmol rece, col HEx20 IV.2. MODIFICRI HISTOLOGICE DERMICE Table 3 modificrile dermice produse de peloidoterapie DERMUL SUPERFICIAL Dispoziie lax, celularitate crescut: fibroblaste situate preponderent Aspect general sub membrana bazal. Macrofage dispuse perivascular preponderent Mastocite dispuse perivascular i perifolicular Creterea numrului i calibrului Vasele sanguine vaselor de snge. Vase de neoformaie; Infiltrat inflamator preponderent n jurul vaselor de neoangiogenez Glandele Componentele glandulare din derm nemodificate, infiltrat inflamator periglanduar Foliculii pilosebacei Infiltrat inflamator limfoplasmocitar perifolicular Aspect nemodificat Creterea numrului i calibrului vaselor de snge, cu congestia pereilor Infiltrat limfocitar perivascular Pstrarea aspectului de esut conjunctiv dens semiordonat DERMUL PROFUND

20

IV.2.1. esutul conjunctiv dermic Dermul superficial prezint o dispunere mai lax a esutului conjunctiv colagenic i o celularitate crescut. Dermul profund si pstreaz aspectul de esut conjunctiv dens semiordonat n toate tipurile de aplicaie peloid .

Figura 10 dermul superficial col HE x 20 Prin biohistometrie am determinat numrul de nuclei pe cmpul dermic. Analiza statistic i aspectul graficului susin observaiile de pe preparatele histologice. Toate aplicaiile peloide determin o cretere a celularitii dermului. Creterile cele mai evidente sunt produse de mpachetarea cald i onciunea rece, aplicaii care produc att infiltrate inflamatorii bogate ct i vase de neoangiogenez

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 MARTOR LOT 1 (N) LOT 2 (BN) LOT 3 (ON )

Figure 11numrul de nuclei/cmp dermic Tot prin studiu biohistometric am determinat raportul dintre aria nuclear/aria dermic total. figura 12. Variaia raportului dintre aria nuclear i aria dermic total pledeaz pentru o activitate citoplasmatic intens. Pentru aprecierea impactului funcional sistemic al modificrilor raportului arie nuclear/arie dermic total, raport care poate fi considerat expresie morfologic a activitii metabolice, am determinat n sngele pacienilor variaia pH-ului, a ionului bicarbonat i a excesului bazic total i extracelular comparativ pentru toate formele de peloidoterapie i baia salin. n

21

toate cazurile i pentru toi parametrii variaia a aprut imediat dup prima aplicaie, ceea ce semnific accentuarea activitii metabolice n cursul aplicaiei terapeutice.

0.2 0.18 0.16 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 MARTOR LOT 1 (N) LOT 2 (BN) LOT 3 (ON )

Figure 12 variaia raportului arie nuclear/arie dermic total IV.2.2. Vasele sanguine din derm Analiza microscopic a preparatelor provenite de la pacienii care au beneficiat de peloidoterapie a reliefat o cretere moderat a calibrului i numrului vaselor sanguine i apariia vaselor de neogenez, cu endoteliul turgescent. n jurul vaselor de snge i n special al celor de neoformaie am observat existena unui infiltrat difuz, alctuit preponderent din limfocite dar i cu prezena plasmocitelor.

Figura 13 vase de neoangiogenez cu infiltrat inflamator perivascular. Col HE x 10 Prin biohistometrie am determinat numrul de vase pe cmpul dermic. Datele sunt sintetizate n figura 14. Comparativ cu lotul martor la cele trei forme de aplicaie peloid se constat un numr mai mare de vase de snge pe cmpul microscopic, semnificativ statistic pentru toate formele de peloidoterapie. Diferene semnificative statistic se remarc i intre variantele de peloidoterapie

22

6 5 4 3 2 1 0 martor IN BN ON

Figure 14 numrul de vase/cmp dermic Aspectul histologic relevat pe preparate, respectiv creterea numrului de capilare deschise i neoangiogeneza, constituie o dovad morfologic a efectelor circulatorii funcionale produse calitile termopexice ale nmolului. Pentru a evalua impactul creterii numrului i calibrului vaselor de snge i a apariiei vaselor neoangiogenetice asupra fiziologiei generale a organismului am analizat datele obinute din studiul biochimic sanguin: presiunea total a gazelor din snge, presiunea parial a oxigenului i a bioxidului de carbon. Scderea valorilor inregistrate la sfrsitul curei balneare subliniaz aspectul histologic de cretere a numrului de capilare dermice. Creterea numrului i calibrului vaselor de snge din derm are repercursiuni asupra circulaiei sistemice prin suprafaa mare a patului vascular i prin capacitatea foarte mare de inmagazinare a sngelui. n raport de condiile n care se afl organismul uman, cantitatea de snge din tegument variaz de la aproape zero pn la 30% din volulmul circulant sistemic. Aplicaia cald determin vasodilataie periferic dar condiiile imersiei i temperatura mediului de baie cresc amplitudinea i frecvena respiraiei fapt ce se evideniaz prin variaia concentraiei gazelor sanguine. IV.2.3. Structurile tegumentare anexe: foliculul pilosebaceu, glandele sudoripare i sebacee nu au prezentat modificri histologice. n jurul lor ins, se pot evidenia infiltrate inflamatorii limfoplasmocitare. Prezena infiltratului inflamator n jurul folicului pilos, a glandelor i a canalelor excretoare glandulare poate fi generat de faptul c ele reprezint ci prin care unele substane din nmol pot ocoli bariera cutanat reprezentat de filmul hidrolipidic, mantaua acid i structura histologic a epidermului. Ptrunderea n piele a substanelor se face pe dou ci: transepidermic i transfolicular.

23

Figura 15 infiltrat inflamator n jurul vaselor de snge i al glandei sudoripare Pentru c nmolul conine proteine i microorganisme cu potenial alergogen am determinat n sngele periferic nivelul imunoglobinei E, inainte de inceperea tratamentului, la douzeci i patru de ore dup prima aplicaie i la sfrsitul curei balneare.
IgE
141.5 121.5 101.5 81.5 61.5 41.5 21.5 1.5 moment init ial la 24 h dupa pr ima aplicat ie la sf arsit ul curei

bn

hoi

in

Figure 16 variaia IgE plasmatic n funcie de tipul aplicaiei peloide Dispersia datelor acestor determinri evideniaz creterea cantitativ semnificativ statistic a IgE-ului dup aplicaia sub form de baie de nmol i onciune rece i traduce stimularea antigenic dar i efectul temperaturii de aplicare a nmolului. IV.3. STUDIUL IMUNOHISTOCHIMIC IV.3.1. Studiul imunohistochimic al populaiei limfocitare Analiza preparatelor histologice a relevat prezena n numr crescut a celulelor cu activitate imun n derm, grupate sub forma infiltratelor inflamatorii n jurul vaselor neoangiogenetice, a foliculului pilosebaceu i a glandelor sebacee. Pentru diferenierea limfocitelor din derm am folosit tehnici de imunohistochimie. Testul a fost pozitiv pentru limfocitele T.

24

Figura 17 aspect general al tegumentului cu imunomarcaj pozitiv pentru limfocitele T IV.3.2. Studiul citokeratinelor AE1/AE3 la cele patru loturi a evideniat o reacie imunohistochimic normal, pozitiv.

Figura 18 imunomarcaj pozitiv pentru citokeratine n epiderm supus mpachetrii cu nmol

25

CAPITOLUL V CONCLUZII 1. Diminuarea grosimii stratului exfoliator este produs de substanele cu rol emolient, keratolitic din compoziia nmolului. La acest efect se adaug modificarea posibil a structurii demozomilor. Reducerea grosimii acestui strat celular i la pacienii care au efectuat bi reci de nmol evideniaz rolul substanelor fotoprotectoare prezente n compoziia biochimic a peloidului. Practicarea onciunilor cu nmol rece este astfel o procedur sigur care nu necesit aplicarea unui ecran protector. Riscul oncogenetic i de mbtrnire a tegumentului ca urmare a expunerii la radiaia solar nu apare n condiiile efecturii bilor reci. Scderea dimensiunii stratului cornos este legat i de stimularea apoptozei ca urmare a peloidoterapiei. Peeling-ul produs de nmol are aplicaii n dermatologie i cosmetologie ntru ct se asociaz i cu alte efecte favorabile tegumentare i sistemice. 2. Un alt efect al peloidoterapiei este accelerarea keratinizrii evideniat prin reducerea numrului de celule ce compun stratul granulos i susinut prin variaia nivelului plasmatic al IL6 care este factor stimulant , TNF care este factor inhibitor i de variaia numrului de nuclei pe cmpul epidermic. Determinrile efectuate au evideniat diminuarea nivelului plasmatic al IL6 i TNF , diminuare care mai mult dect implicarea n keratinizare evideniaz efectul antiinflamator al aplicaiei peloide. Scderea IL6 care este stimulatorie pentru keratinizare poate fi explicat prin neimplicarea acestei citokine n accelerarea acestui proces de difereniere celular observat la pacienii din loturile studiate. Scderea TNF care este factor inhibitor al keratinizrii evideniaz implicarea acestui factor n accelerarea keratinizrii. Scderea numrului de nuclei pe cmpul epidermic se coreleaz cu accelerarea keratinizrii care se asociaz cu reducea numrului de celule din stratul granulos. Un rol deosebit de important n keratinizarea normal l dein desmozomii care sub aciunea nmolului sufer modificri structurale care grbesc keratinizarea. Variaia nivelului calciului n compoziia biochimic a nmolului la sfrsitul aplicaiei peloide coroborat cu variaia plasmatic a aceluiasi element susin intervenia peloidoterapiei asupra structurii desmozomilor. Deci, accelerarea diferenierii keratinocitelor are loc sub aciunea nmolului prin procesul de schimb ionic care modific structura desmozomilor, organite celulare specifice obligatorii pentru keratinizarea normal. 3. Apoptoza este un factor de reglare a structurii histologice normale a tegumentului. Sub aciunea peloidoterapiei apoptoza celulelor epidermice este stimulat contribuind astfel la indeprtarea celulelor cu modificri structurale. n acest proces celular de moarte programat sunt implicate multe citokine secretate de, sau care doar acioneaz asupra keratinocitelor.

26

Dar dovada cea mai elocvent a stimulrii procesului apoptotic este variaia raportului arie nuclear/arie epidermic total care evideniaz reducerea suprafeei nucleare n favoarea citoplasmei, respectiv picnozarea nucleilor. n afar de programul normal de dezvoltare, apoptoza poate fi iniiat de radiaiile ultraviolete (cum se intmpl n cursul aplicaiei bilor reci) i de ali factori stimulatori care pot fi intrinseci compoziiei biochimice a nmolului sau legai de temperatura de aplicare a nmolului. 4. Diminuarea grosimii membranei bazale a epidermului. Aplicarea sistematic, dozat, susinut a nmolului pe tegument n cursul curei balneare determin diminuarea grosimii membranei bazale a epidermului, fapt ce permite ameliorarea aportului nutritiv i al schimburilor cu dermul. Pe cale transepidermic sau transfolicular diverse substane cu potenial alergogen din compoziia biochimic a nmolului ptrund dincolo de epiderm. Aa se explic prezena infiltratului inflamator din jurul foliculului pilosebaceu i a glandelor sudoripare. n contextul peloidoterapiei diminuarea grosimii jonciunii dermo-epidermice presupune un schimb real bilateral. Este cazul ionilor din mediul extracelular care strbat n sens invers bariera cutanat i prsesc organismul. Dovada acestui fapt o constituie variaia compoziiei biochimice a nmolului dup aplicaia terapeutic. Deci, aplicaia peloid determin diminuarea grosimii jonciunii dermo-epidermice cu consecina creterii schimburilor materiale bilaterale intre nmol i organism. 5. Creterea cantitii de pigment melanic din keratinocite i melanocite este un efect deosebit de valoros al peloidoterapiei. Aceast cretere oglindete modularea activitii neuroendocrine a axului secretor hipotalamo-hipofizo-suprarenalian. Dovada acestei modulri a regimului secretor este adus de variaia nivelului plasmatic al cortizolului i a TSH-ului. 6. Pe toate preparatele histologice realizate a fost foarte evident prezena unor celule cu nuclei tahicromi dispuse printre keratinocite. Aceste celule pot fi celule T sau celule nedeterminate, cu activitate imun. Ele sunt celule prezentatoare de antigen i evidenierea lor n epiderm constituie o dovad a stimulrii pe care o produce peloidoterapia. innd cont de funciile acestor celule rezidente n epiderm putem afirma rolul benefic al lor n supravegherea imun asupra patogenelor intracelulare i rolul benefic al peloidoterapiei n meninerea homeostaziei imune. 7. Prezena infiltratului inflamator din derm este explicat prin ptrunderea unor substane din nmol fa de care organismul reacioneaz. La ptrunderea zilnic a unor substane din nmol tegumentul reacioneaz prin protejarea structurilor prin care are loc penetraia non-selfului i inconjurarea lor cu celule care au rolul de santinel la poarta de intrare. Celularitatea crescut a dermului este o alt dovad a modificrilor structurale produse de peloidoterapie. 8. Prezena vaselor neoangiogenetice ilustreaz faptul c aplicaia nmolului cald solicit funcia de termoreglare intr-un mod particular i anume creterea temperaturii centrale nu poate fi urmat de sudoraie pe durata aplicaiei, pentru c n mediu umed evaporarea sudorii este mpiedicat. Numrul crescut al capilarelor deschise i apariia vaselor de neoangiogenez cu

27

endoteliul turgescent sunt dovada modificrilor structurale produse de peloidoterapie la nivelul dermului, prin stimularea funciei de termoreglare. Intensa pozitivare a testului imunohistochimic pentru citokeratine la nivelul canalelor excretorii ale glandelor sudoripare este dovada adaptrii structurale fa de imposibilitatea eliminrii sudorii. 9. Stimularea funciei imune este ilustrat de prezena infiltratului inflamator cu limfocite T localizat perifolicular i perivascular i a celulelor cu nuclei tahicromi din epiderm. Negativitatea testului imunohistochimic pentru limfocitele B poate fi explicat prin epuizarea rolului lor inainte de terminarea curei balneare. n final pot afirma c rspunsurile la intrebrile formulate drept ipoteze de lucru au fost pozitive, n sensul confirmrii lor. 1. Aplicarea sistematic, susinut i repetat a nmolului produce modificri structurale tegumentare. 2. Stimularea funcional a circulaiei periferice de termoreglare genereaz creterea numrului i calibrului vaselor de snge din derm i neoangiogeneza. 3.Stimularea funciei imune a organismului produs de peloidoterapie este ilustrat la nivelul tegumentului. O parte din rezultatele obinute prin acest studiu constituie dovezi morfologice ale efectelor peloidoterapiei, iar o bun parte din rezultate desi au putut fi explicate au deschis perspective noi de studiere a implicaiilor peloidoterapiei asupra structurii tegumentare. CAPITOLUL VI BIBLIOGRAFIE SELECTIV

1. Andrie V. Note de curs. Medicin Fizic, Balneoclimatic i Kinetoterapie. Partea I, 1994,

Bucureti 2. Badiu Gh., Papari A., Adaptologie uman, Ed. Fundaiei Andrei aguna, Constana, 1999, ISBN 973-9262-61-9; pag. 312 370, 518 566; 3. Banciu Mioara, Balneofizioterapie general i concepte moderne de recuperare. Editura Mirton Timioara,1996. 4. Basili S et al, Effects of mud-pack treatment on plasma cytokine and soluble adhesion molecule levels n healthy volunteers, Clin Chim Acta 2001 dec; 314(1-2):209-14; 5. Bellometti S, et al, Both serum receptors of tumor necrosis factor are influenced by mud-pack treatment n osteoarthrotic patients Int J Tissue React 2002; 24(2): 57 64; 6. Bellometti S et al, Mud-bath therapy influences nitric oxide, myeloperoxidase and glutatione peroxidase serum levels n arthritic patients Int J Clin Pharmacol Res 1997;17(4):149-53 7. Bender T., Evidence Based Balneotherapy Osteoartritis. 35th Congress of the International Society of Medical Hydrology and Climatology, june 6 10, 2006, Istanbul 8. Berlescu Elena, Enciclopedia de balneo-climatologie a Romniei, ed. Al 1998, pag 210 i urmtoarele; ISBN 973-571-046-3 9. Bogdan Fl, Mehedini T, Epithelial mesenchymal interrelations at the skin level. A quantitative study, Rev Morphologie et Embriologie nr.1, Ed. Academiei RSR, pag 3 9; 10. Coloiu Al., et al, Dermatovenerologie, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, pag. 17-30

28

11. Coloiu AL., sub redacia, Tratat de dermato - venerologie, Ed. Medical, Bucureti, 1986, pag.

21 76; 12. Dnil L et al, Apoptoza, moartea celular programat, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 2002, pag. 136 135, 388 394, ISBN 973-27-0916-2; 13. Deepak R., et al, Keratinocyte apoptosis n epidermal developement and diseases, J of Invest Dermatol, 2006, nr 126, ISBN 10.1038/5700008, pag. 243 257 14. DeMayo Bina, et al. Apele minerale i nmolurile terapeutice din Republica Socialist Romnia. Ed. Medical Bucureti 1973, pag.506-516 15. Diculescu I., i colab., Histologie Medical, Ed. Medical, Bucureti, 1987, pag. 78 95 16. Diaconescu Leonte Eugenia, Apele minerale i nmolurile din Romnia, ed. Medical, Bucureti, 1973, pag 517 526 17. Galzigna L, et al, Thermal mud-pack as anti-inflammatory treatment, Biomed Pharmacother 1998; 52(9):408-9; 18. Jameson M. Julie et al, T cell-induced hyaluronan production by epithelial cells regulates inflamation, JEM, vol 201, nr. 8, 1269 1279, www.jem.org/cgi 19. Jones J. C. R., Goldman R., Intermediate fillaments and initiation of desmosomes assembly, J Cell Biol, 1985, 101, pag 506 517 20. Lupu N. Gh., sub redacia, Medicin intern, volumul I, semeiologie i terapeutic general. Editura Medical, Bucureti 1956, pag 378 390; 21. Marin Viorica et al, The Techirghiol sapropelic mud peloidogenesis, chemical composition, therapeutical effects, Book of abstracts 2006, RSBMB International Meeting, Constana, 01 03 June, ed. RSBMB Press, pag 55 22. Mehedini T., Histologie, Ed. Ovidius University Press, Constana, 1998, ISBN 973-9367-11-9, pag. 86 110 23. Michael S. Marks, Miguel Seabra, The melanosome: membrane dynamics n black amd white, Mollecular Cell Biology, vol 2, oct 2001, 738 748, www.Nature.com, nature reviews 24. Mogoan L., et al, Histologie Medical, Ed. Aius Craiova 2004, ISBN 973-700-038-2, pag. 256 266 25. Mogoan L., et al, Ghid de tehnici de histologie, citologie i imunohistichimie, Ed. Medical Universitar, Craiova 2003, ISBN 973-8354-71-4; 26. Murean P., Manual de metode matematice n analiza strii de sntate, ed. Medical, Bucureti, 1989, pag 151 167; 27. Onose G., et al, Aspecte conceptuale actuale ale prescripiilor balneare hidro-termo-terapeutice la vrstnici, Raport la Conferina Naional cu participare internaional <<actualiti i perspective n gerontologie i geriatrie la cumpna dintre milenii>> 31 mai 2 iunie Otopeni, Bucureti 2000 28. Pal G., Some Physiological Effects of Balneotherapy Review 35th Congress of the International Society of Medical Hydrology and Climatology, june 6 10, 2006, Istanbul; 29. Pavel Chiril, sub redacia, Medicin naturist, Editura Medical, Bucureti 1987, pag.151 165; 30. Pereianu D et al, Imunoendocrinologie n boli de colagen i osteoporoz Ed. Academiei Romne, Bucureti, 2002, ISBN 973-27-0882-4, pag. 40 54, 120 128, 203 223; 31. Pizzoferrato A et al, Beta-endorphin and stress hormones n patients affected by osteoarthritis undergoing thermal mud therapy, Minerva Med 2000, oct; 91 (10): 239-45 32. Popovici Adriana, Dermatofarmacie i cosmetologie, Ed. Medical, Bucureti, 1982, pag. 25 45. 33. Profir Daniela, Marin Viorica, Surdu Olga, Rooiu Natalia, Studiu clinic privind variaia hormonilor de stres i a unor markeri proinflamatori sub aciunea peloidoterapiei la pacienii cu osteoartrit. Al 29-lea Congres Naional de Medicin Fizic i de Recuperare, Poiana Braov, 01 04 noiembrie 2006. 34. Rasmussen Natalie et al, Neuroendocrinology letters 1999, vol 20, ISSN 0172-7box, pag. 265 282, www.nel.edu/2000 ;

29

35. Resch K-R, Franke A., The Effects of Spa Medicine Update of a Systematic Review. 35th

Congress of the International Society of Medical Hydrology and Climatology, june 6 10, 2006, Istanbul 36. Saragea M., sub redacia, Fiziopatologie, Ed. Academiei RSR, 1982, Vol II, pag 473 498 37. Slominski A. et al, Melanin pigmentation n mammalian skin and its hormonal regulation, Physiological Reviews, 2004, vol 84, pag. 1155 1228, www.physrev.physiology.org/ 38. Stanciu Gabriela, et al. Determination de la composition minerale du contenu en pesticides dans la boue sapropelique de Techirghiol, Scientific study and research, vol VI (2), 2005, ISSN 1582540X, pag 223 232 39. Surdu Olga, Evaluarea factorului chimic de aciune al nmolului sapropelic de Techirghiol, Ed Gramar 2006 ISBN 978-973-591-520-9. 40. erban M G Patologie molecular, aspecte biochimice i clinice, Ed. Printech 2004, Bucureti, ISBN 973-652-926-6, pag. 23 27, 56 59, 90 102 41. Teodorescu Exarcu I., sub redacia, Patologie biochimic Ed. Medical Bucureti, 1974 , pag 576 598, 723 805; 42. uculescu I, Biodinamica lacului Techirghiol. Biocenozele i geneza Nmolului. Ed. Academiei RSR, 1965, pag 85 92, 125 126, 43. Voiculescu C. et al, Noiuni de imunologie i imunopatologie, Ed. Academiei Romne, 1999, ISBN 973-27-0710-0, pag 110 189;

LISTA LUCRARILOR PUBLICATE/COMUNICATE 1. ASPECTE CONCEPTUALE ACTUALE ALE PRESCRIPTIILOR BALNEARE HIDROTERMOTERAPEUTICE LA VARSTNICI. Dr. Gelu Onose, Dr. Surdu Olga, Dr. Liliana Onose. Raport la Conferinta nationala cu participare internationala <<actualitati si perspective in gerontologie si geriatrie la cumpana dintre milenii>> 31 mai 2 iunie Otopeni, Bucuresti 2000. CERCETARI PRIVIND MODULAREA PARAMETRILOR PRESCRIPTIILOR DE FACTORI TERAPEUTICI NATURALI, SPECIFICI AREALULUI TECHIRGHIOL, LA VARSTNICI. Dr. Olga Surdu, Dr. Gelu Onose, Dr. Liliana Onose, Fiz. Ovidiu Teren. Comunicare la conferinta nationala cu participare internationala <<actualitati si perspective in gerontologie si geriatrie la cumpana dintre milenii>>, 31 mai 2 iunie, Otopeni, Bucuresti 2000. CERCETARI PRIVIND OPTIMIZARI METODOLOGICE REFERITOARE LA MODULAREA PARAMETRILOR HIDRO-TERMO-TERAPICI, CU FACTORI SPECIFICI AREALULUI TECHIRGHIOL, LA VARSTNICI. Olga Surdu, Gelu Onose, Liliana Onose, Ovidiu Teren. Comunicare la al IV-lea congres national de medicina fizica si recuperare, cu participare internationala 19 21 octombtie 2000, Bucuresti ISBN: 973-9394-53-1 CERCETARI PRIVIND PARTICULARITATI ALE MODULARII PARAMETRILOR PRESCRIPTIILOR DE FACTORI NATURALI SPECIFICI AREALULUI TECHIRGHIOL, LA VARSTNICI. Idem ANALIZA PROGRAMELOR KINETO- SI HIDROKINETOTERAPEUTICE ADMINISTRATE PACIENTILOR VARSTNICI, IN CADRUL CURELOR EFECTUATE IN S.B.R. TECHIRGHIOL. Idem SPONDILARTROPATIILE, Editura Academiei Romane 2000. Capitolul 15: TRATAMENTUL FIZICAL RECUPERATOR SI BALNEOCLIMATIC pag. 402-462, ISBN: 973-27-0761-5. Olga Surdu, Liliana Onose. PREZENTAREA UNUI CAZ DE SPONDILARTROPATIE ENTEROPATICA. Comunicare la al VIIlea Congres National de Reumatologie cu participare internationala 13-16 septembrie 2000 Mamaia. Revista de reumatologie nr.2, supliment, vol.VIII, anul 2000. Olga Surdu, Gelu Onose, Liliana Onose, Ileana Turcu.

2.

3.

4. 5. 6. 7.

30

8. 9.

10. 11.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20.

LOCUL BALNEOTERAPIEI IN CADRUL MEDICINEI NATURISTE SI AL CONCEPTULUI MODERN DE MEDICINA HOLISTICA. ANALELE UNIVERSITATII OVIDIUS CONSTANTA> Seria Stiinte medicale, numarul 7, vol. II 2001. ISSN: 1223 7213. ASPECTE ACTUALE ALE UTILIZARII TRATAMENTULUI CU NAMOL SAPROPELIC, IN SUFERINTE DE TIP FIBROMIALGIC, IN CONTEXT BALNEOTERAPIC COMPLEX, LA TEGHIRGHIOL. Olga Surdu, Gelu Onose. Comunicare la a XXII-a Conferinta Nationala de Medicina Fizica si Recuperare, Craiova 10-12 octombrie 2002. Revista de Recuperare, Medicina Fizica si Balneologie nr. 1-2/2002. ASPECTE CONCEPTUALE ACTUALE ALE PRESCRIPTIILOR BALNEARE HIDROTERMOTERAPICE CALDE, LA VARSTNICI. Gelu Onose, Olga Surdu, Liliana Onose. Revista de recuperare, medicina fizica si balneologie nr.1, 2003. ISBN 973/8489-08-3. PARTICULARITATI FIZIOLOGICE ALE PROCESULUI DE IMBATRANIRE SI MODULARI PARAMETRIALE ADECVATE ALE PRESCRIPTIILOR DE KINETOTERAPIE SI RESPECTIV HIDROKINETOTERAPIE CU APA MINERALA DIN LACUL TECHIRGHIOL. Gelu Onose, Olga Surdu, Ileana Turcu, Ovidiu Teren, Liliana Onose. Sesiunea anuala de comunicari stiintifice a Institutului National de Recuperare, Medicina Fizica si Balneologie, Bucuresti, 13 iunie 2003. / , , . Health, Scientific practical journal, nr. 8, , Health Ministry of Azerbaijan Republic, Baku, 2005, ISBN 5-8035-0168-9 EVALUAREA FACTORULUI CHIMIC DE ACIUNE AL NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL. Olga Surdu, Carmen ebrencu, Chiriac Maria, Mihaela Hncu, Laureniu Mogoan. Simpozionul naional Implicarea fondului acvatic dobrogean n meninerea echilibrului ecologic al populaiei umane Techirghiol 25 26 februarie 2005, organizat de: Academia Oamenilor de tiin din Romania, Universitatea Ovidius Constana, ECOM, asociaia pentru protecia omului i mediului. Ed. Virom Constana, 2005. ISBN 973-7895-00-2 PRIVIRE ASUPRA RESURSELOR TERAPEUTICE ACVATICE ALE DOBROGEI. Olga Surdu, Mihaela Hncu, Traian Surdu, Monica Nechifor. Simpozionul naional Implicarea fondului acvatic dobrogean n meninerea echilibrului ecologic al populaiei umane Techirghiol 25 26 februarie 2005, organizat de: Academia Oamenilor de tiin din Romania, Universitatea Ovidius Constana, ECOM, asociaia pentru protecia omului i mediului. Ed. Virom Constana, 2005. ISBN 973-7895-00-2 CONVERGENTA PELOIDOTERAPIEI CU MEDICINA CONVENTIONALA SI PRACTICILE MEDICALE ALTERNATIVE SI/SAU COMPLEMENTARE. Olga Surdu. Al 28-lea Congres National de Fizica si de Recuperare, Poiana Brasov 02 05 nov. 2005. Revista de Recuperare, Medicina Fizica si de Balneologie nr. 3 4, pag. 25. ISBN STUDIUL VARIAIEI N TIMP A COMPOZIIEI CHIMICE A NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL DE LA EXTRACIE PN LA FINALUL APLICAIEI TERAPEUTICE. Olga Surdu, Carmen ebrencu, Viorica Marin, Daniela Profir. Al 28-lea Congres National de Fizica si de Recuperare, Poiana Brasov 02 05 nov. 2005. Revista de Recuperare, Medicina Fizica si de Balneologie nr. 3 4, pag. 52 STUDIU HISTOLOGIC COMPARATIV AL ACIUNII NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL ASUPRA TEGUMENTULUI. . Olga Surdu. Al 28-lea Congres National de Fizica si de Recuperare, Poiana Brasov 02 05 nov. 2005. Revista de Recuperare, Medicina Fizica si de Balneologie nr. 3 4, pag 53 ANALIZA NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL N SCOPUL OBINERII UNUI BIOCOMPLEX INJECTABIL CU ACIUNE TERAPEUTIC. Olga Surdu, Gabriela Stanciu, Simona Guag. Al 28-lea Congres National de Fizica si de Recuperare, Poiana Brasov 02 05 nov. 2005. Revista de Recuperare, Medicina Fizica si de Balneologie nr. 3 4, pag 53. DTERMINATION DE LA COMPOSITION MINRALE ET DU CONTENU EN PESTICIDES DANS LA BOUE SAPROPLIQUE DE TECHIRGHIOL Gabriela Stanciu, Sava Constanta, Olga Surdu, Dan Secrieru, Mariana Arcusi, Simona Lupsor. Scientific study and research, vol VI (2), 2005, ISSN 1582-540X, pag 223 232. TECHIRGHIOL RESORT: TRADITIONS AND ACTUALITY. . Olga Surdu. 35th Congress of the International Society of Medical Hydrology and climatology, june 6-10, 2006, Istanbul, Congres Book pag 93.

31

21. HISTOLOGICAL STUDY ON THE SKIN TISSUES' MODIFICATIONS INDUCED BY MUD PACK THERAPY. Olga Surdu, Laureniu Mogoan, Traian-Virgiliu Surdu, Carmen Aurora Mogoan, Mihaela-Cezarina Hncu, Teofil Mehedini. 35th Congress of the International Society of Medical Hydrology and climatology, june 6-10, 2006, Istanbul, Congres Book pag 96. 22. STATISTIC STUDY ON THE EFFICACY OF THE PHYSIO-PELOID THERAPEUTIC COMPLEX FROM TECHIRGHIOL, IN FYBROMIALGIA. Olga Surdu, Monica Vasile. 35th Congress of the International Society of Medical Hydrology and climatology, june 6-10, 2006, Istanbul, Congres Book pag 127. 23. THE VARIATION OF BIOCHEMICAL COMPOUNDS OF SAPROPELIC MUD OF TECHIRGHIOL, FROM THE EXTRACTION MOMENT TO THE END OF THERAPEUTICALLY APPLICATION. Olga Surdu. Monica Vasile. 35th Congress of the International Society of Medical Hydrology and climatology, june 6-10, 2006, Istanbul, Congres Book pag 144. 24. THE TECHIRGHIOL SAPROPELIC MUD PELOIDOGENESIS, CHEMICAL COMPOSITION, THERAPEUTICAL EFFECTS. Viorica Marin, Daniela Profir, Iulia-Maria Belc, Olga Surdu, Natalia Rooiu. Book of abstracts 2006, RSBMB International Meeting, Constana, 01 03 June, ed. RSBMB Press, pag 55; 25. EVALUAREA FACTORULUI CHIMIC DE ACIUNE AL NMOLULUI SAPROPELIC DE TECHIRGHIOL. Olga Surdu, ed. Gramar, 2006, ISBN 978-973-591-520-9. 26. SISTEM ORTETIC ROBOTIZAT PENTRU ASISTAREA/ RECUPERAREA ORTOSTATISMULUI I MERSULUI LA PERSOANELE VRSTINICE, SEVER DISABILITATE PRIN INSUFICIENE CARDIO-RESPIRATORII SAU/I LA PACIENII CU DEFICIENE NEURO-LOCOMOTORII GRAVE. Crdei V., Onose G., Ciurea A.V., Ciurea J., Liliana Onose, Olga Surdu, Crciunoiu T. St., Avramescu V., Roxana Grajdanescu, Loredana Paun, Dogariu C., Racicovschi V., Ursu T., Modreanu M., Emilia Visilianu 27. STUDIU CLINIC PRIVIND VARIAIA HORMONILOR DE STRES I A UNOR MARKERI PROINFLAMATORI SUB ACIUNEA PELOIDOTERAPIEI LA PACIENII CU OSTEOARTRIT. Daniela Profir, Viorica Marin, Olga Surdu, Natalia Rooiu. Al 29-lea Congres Naional de Medicin Fizic i de Recuperare, Poiana Braov, 01 04 noiembrie 2006. 28. NIVELUL PLASMATIC AL CITOKINELOR PROINFLAMATORII LA PACIENII CU SA DUP ONCIUNEA CU NMOL RECE DE TECHIRGHIOL. Olga Surdu, Viorica Marin, Daniela Profir, Monica Vasile. Al 29-lea Congres Naional de Medicin Fizic i de Recuperare, Poiana Braov, 01 04 noiembrie 2006.

32