Lucrare practica 1

Determinarea spectrofotometrica a clorofilei a si b din frunze

Introducere
Clorofilele sunt molecule care absoarb lumina soarelui si utilizeaza energia ei pentru a sintetiza
carbohidrați din CO2 și apă. Acest proces este cunoscut sub numele de fotosinteza si este baza
pentru susținerea proceselor vitale ale tuturor plantelor. De fapt sunt 2 tipuri principale de clorofila,
numite a și b. Ele diferă doar puțin, în componența uneia din catenele laterale (in a este -CH3, în b
este CHO).

Metodologia de lucru

1. Se pregatesc 1000 mm2 de frunza de spanac (sau alta planta care se doreste sa fie analizata).
2. Se realizeaza 10 mL solutie de 80 % acetona (v/v) care se pastreaza in gheata.
3. Se mojareaza frunza (taiata in prealabil in bucatele mici) intr-un mortar pe gheata impreuna
cu 0.1 g nisip, 0.1 g CaCO3 si 2 mL de acetona pana tesutul vegetal este transformat intr-o
pudra fina.
4. Se centrifugheaza produsul obtinut la 10000 rpm.
5. Supernatantul se dilueaza si se introduce intr-o cuva de plastic.
6. Se determina spectrofotometric absorbanta la 645 nm si la 663 nm.
7. Se calculeaza concentratia de clorofila a cu relatia:

Conc de clorofila a (mg/mL) = 12.7 A663 - 2.69 A645

8. Se calculeaza concentratia de clorofila b cu relatia:

Conc de clorofila b (mg/mL) = 22.9 A645 - 4.68 A663
9. Concentratia de clorofila a in frunza (mg) = Conc de clorofila a (mg/mL) x volumul final
de acetona (mL)
10. Concentratia de clorofila b in frunza (mg) = Conc de clorofila b (mg/mL) x volumul
final de acetona (mL)

11. Concentratia de clorofila a pe unitatea de suprafata = Concentratia de clorofila a in

frunza (mg)/aria frunzei (cm2)

12. Concentratia de clorofila b pe unitatea de suprafata = Concentratia de clorofila b in

frunza (mg)/aria frunzei (cm2)