Proprietatile fizico-chimice ale ADN-ului

Denaturarea şi renaturarea ADN

Denaturarea - presupune ruperea legăturilor de hidrogen dintre catenele complementare ale
ADN.
Se realizează prin ridicarea temperaturii la 70 - 940C.

Temperatura medie de topire (Tm ) a ADN -este temperatura la care 50% din ADN este
denaturant. O Tm este mai mare la un ADN bogat în perechi de baze guanină-citozină (datorită
legăturilor triple) şi Tm mai mică la un ADN bogat în perechi de baze adenină-timină (datorită
legaturilor duble).

După ce s-a realizat denaturarea termică dacă are loc o răcire bruscă a soluţiei în care se găseşte
ADN-ul denaturat, atunci nu se vor putea reface punţile de hidrogen dintre cele două catene şi
ADN-ul rămâne monocatenar (ADN denaturat).

O răcire lentă a soluţiei în care se găseşte ADN va duce la renaturarea ADN.

Aplicaţii:

Prin tehnica denaturării şi renaturării se pot realiza hibrizi moleculari între catene de ADN
provenite de la specii diferite (hibrid ADN –ADN) şi hibrizi ADN – ARN

Renaturarea este cu atât mai eficientă şi mai rapidă cu cât ADN-ul speciilor analizate prezintă
secvenţe de nucleotide omoloage mai lungi, deci cu cât este mai strânsă apropierea
filogenetică.

Important de reţinut:
 Denaturarea ADN se face prin încălzirea soluţiei în care se găseşte ADN la o temperatură 70 -
940C când are loc ruperea punţilor de hidrogen dintre cele două catene ale ADN.
 Temperatura la care 50% din ADN este denaturant se numeşte temperatură de topire
 Răcirea bruscă a soluţiei va duce la obţinerea de ADN denaturant iar prin răcire lentă se obţine
ADN renaturat deoarece se refac legăturile de hydrogen dintre cele două catene.
 Prin tehnica denaturării renaturării se pot obţine hibrizi de tipul: ADN-ADN, ADN-ARN
 Denaturarea, renaturarea are aplicaţii în stabilirea gradului de înrudire dintre specii. Cu cât
renaturarea are loc pe distanţe mai lungi cu atât speciile sunt mai apropiate filogenetic . vezi figura 1
si 2.
Tema : Ce inseamna ADN denaturant?

Cum se realizeaza denaturarea si renaturarea ADN?