Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

SimNERV
STUDIUL PROPRIETĂŢILOR NERVULUI MOTOR PERIFERIC

SimNerv este un program de simulare pe calculator a experimentelor efectuate pe nervul

motor periferic, privind excitabilitatea şi conductibilitatea nervului. Acest program reprezintă
o cale alternativă, modernă şi accesibilă, în abordarea experimentele efectuate pe animalul
de laborator.
Nervul ischiatic izolat de broască, obţinut printr-o tehnică prezentată în imagini video, este
excitat cu stimuli electrici izolaţi, iar potenţialele de acţiune generate sunt înregistrate cu
ajutorul a doi electrozi de suprafaţă cuplaţi la un osciloscop catodic. Programul reproduce o
condiţie experimentală esenţială, şi anume heterogenitatea răspunsului preparatelor
biologice în condiţii experimentale. Pentru interpretarea corectă a rezultatelor obţinute
trebuie să se ţină seama şi de faptul că experimentul se efectuează pe nerv, iar acesta
reprezintă un ansamblu de fibre nervoase cu excitabilitate diferită.

1. ORGANIZAREA LABORATORULUI SimNERV

Laboratorul „SimNERV” cuprinde componentele prezentate în Fig.nr.1:

 Cutia cu electrozi - permite fixarea pe un suport a nervului ischiatic izolat. Este dotată cu
2 electrozi de excitare - de culoare albastră şi galbenă şi 2 electrozi de culegere - de
culoare verde şi roşie. Cutia oferă posibilitatea de deplasare a electrozilor pe o scală
gradată cu lungimea de 10 cm. Suprafaţa de culoare albă, cuprinsă între 5 şi 6 cm, este
suprafaţa destinată pământării şi are întotdeauna potenţialul 0 - orice electrod plasat pe
această suprafaţă devine electrod indiferent.

 Stimulatorul - generează stimuli electrici la parametri de durată (Duration), amplitudine

(Amplitudine) şi interval de stimulare (Delay) ce pot fi stabilite prin deplasarea pe
verticală a unui cursor. Fiecare din aceşti parametri pot fi amplificaţi prin deplasarea pe
A
orizontală a câte unui cursor Multiplier. Stimulatorul mai permite stabilirea modalităţii de
aplicare a stimulului (MODE) - Single/Twin, stabileşte polaritatea electrozilor de
stimulare (POLARITY) - Normal/Invert şi poate asigura o anumită perioadă de latenţă
între momentul aplicării excitaţiei şi înregistrarea imaginii pe osciloscop (TRIG) -
Normal/Delay. Tasta STIMULUS/On permite „lansarea” excitaţiei cu parametrii stabiliţi în
prealabil.

 Osciloscopul - permite înregistrarea grafică a parametrilor durată/timp ce ţin de

aplicarea excitantului (CHANNEL 1) şi de potenţialul de acţiune al nervului (CHANNEL 2).
Pentru etalonarea înregistrării, osciloscopul prezintă 3 „butoane” – două pentru
amplitudine [mV/Div] şi unul pentru durată – TIMEBASE [ms/Div]. Diviziunea este
reprezentată de pătratul cu latura de 5 cm, corespunzător caroiajului de pe ecran.
Osciloscopul suprapune imaginile obţinute prin experimente repetate atâta timp cât
este activată tasta Store şi permite „golirea” ecranului când este activată tasta Clear
Screen.

 Cutia Petri – cuprinde două fragmente de nerv ischiatic plasate în soluţie Ringer.

1
 Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

 Mosorul de aţă – este utilizat pentru aplicarea ligaturilor pe nerv.

Fig.nr.1. Organizarea Laboratorului SimNerv

2. PREGĂTIREA EXPERIMENTULUI SimNERV

Pentru efectuarea experimentelor privind excitabilitatea şi conductibilitatea nervului motor

periferic este necesară în prealabil pregătirea “laboratorului”, respectând următoarele
etape:
 se deschide camera de experiment;
 se plasează nervul pe suportul camerei;
 se activează POWER/On pentru stimulator şi osciloscop;
 se stabileşte modalitatea Single (MODE) de stimulare;
 se stabileşte polaritatea Normal (POLARITY):

Electrod Funcţie
roşu explorator (Ve)
verde indiferent (V0) – culegere monopolară
de referinţă (Vr) – culegere bipolară
albastru excitator activ
galben excitator inactiv

 se stabileşte varianta NORMAL (TRIG) pentru timpul de latenţă a excitaţiei;

 se repoziţionează canalul CH1 în partea inferioară şi CH2 în porţiunea mijlocie a
ecranului osciloscopului.
 se etalonează înregistrarea: CHANNEL 1 (CH1) - 500 mV/Div;
CHANNEL 2 (CH2) - 2 mV/Div;
TIMEBASE - 1 ms/Div

Observaţie - etalonarea condiţionează aspectul grafic al potenţialelor.

2
 Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

3. ETAPELE EXPERIMENTULUI SimNERV

3.1. STIMULUL PRAG

Obiectiv - se urmăreşte stabilirea amplitudinii prag pentru o durată de acţiune dată şi

demonstrarea fenomenului de „recrutare a fibrelor nervoase”. Secvenţa de lucru permite
înregistrarea grafică a potenţialului minim corespunzător activării celor mai excitabile fibre
ale nervului şi a potenţialului maxim corespunzător activării tuturor fibrelor nervului (Fig.2).
“Recrutarea” reprezintă activarea progresivă a fibrelor nervoase, odată cu creşterea
amplitudinii de stimulare.

Fig.nr. 2. Potenţialul minim şi maxim al

nervului – culegere monopolară. Temă de lucru
 reproduceţi graficele obţinute pe canalul
CH2 şi notaţi amplitudinea
corespunzătoare a excitantului pentru fiecare
înregistrare;
 observaţi şi explicaţi creşterea progresivă în amplitudine a potenţialului de acţiune.

Tehnică
 se plasează electrozii - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben la 5,5 cm şi roşu la 9 cm;
 pentru durata stimulării se fixează cursorul vertical DURATION la 2 ms şi cursorul
orizontal Multiplier/DURATION la 1x;
 pentru amplitudinea stimulării se fixează cursorul orizontal Multiplier/AMPLITUDINE la
10x;
 se stimulează repetat nervul (activând tasta STIMULUS/On) crescând progresiv
amplitudinea (deplasarea cursorului AMPLITUDE) cu 10 mV/determinare, până la
înregistrarea unui potenţialul de acţiune minim al nervului;
 se activează tasta Store a osciloscopului;
 se continuă stimularea progresivă până în momentul în care amplitudinea potenţialului
nu se mai modifică, reprezentând potenţialul de acţiune maxim al nervului;

3.2. CONDUCEREA POTENŢIALULUI DE ACŢIUNE NEURONAL

Obiectiv - se urmăresc aspectele grafice ale conducerii potenţialului de acţiune prin nervul
motor, în funcţie de modalitatea de culegere şi poziţia electrozilor pe suprafaţa nervului.

Temă de lucru
 reproduceţi schematic poziţiile electrozilor pe suprafaţa nervului pentru fiecare din cele
4 situaţii experimentale;
 copiaţi graficele obţinute şi explicaţi aspectul grafic al potenţialelor de acţiune.

3
 Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

Tehnică
 se activează tasta Clear Screen şi se inactivează tasta Store a ecranului osciloscopului;
 se aplică stimuli cu durata de 2 ms şi amplitudine de 200 mV obţinuţi prin fixarea
cursorilor verticali şi orizontali în următoarele poziţii:
- DELAY - 2 ms, Multiplier - 1x;
- DURATION - 2 ms, Multiplier - 1x;
- AMPLITUDINE - 2 mV, Multiplier - 100x;

Observaţie - diferenţa de potenţial (V) reprezentată pe ecranul osciloscopului este diferenţa

între potenţialul de la nivelul electrodului roşu (VR) şi verde (VV);
CULEGEREA MONOPOLARĂ:
Se obţine utilizând electrodul explorator (roşu) şi electrodul indiferent (verde) plasaţi astfel:
(a) pentru obţinerea unui potenţial monofazic pozitiv (Fig.3.A)- verde la 1 cm, albastru la 3
cm, galben şi roşu la 5,5 cm; Vm = VR(0) - VV(-)  Vm(+)  fază pozitivă
(b) pentru obţinerea unui potenţial monofazic negativ (Fig.3.B) - roşu la 1 cm, albastru la
3 cm, galben şi verde la 5,5 cm; Vm = VR(-) - VV(0)  Vm(-)  fază negativă

(A) potenţial monofazic pozitiv (B) potenţial

monofazic negativ
Fig.nr.3. Potenţialul neuronal obţinut prin culegere monopolară
CULEGEREA BIPOLARĂ:
Se obţine utilizând electrodul explorator (roşu) şi electrodul de referinţă (verde) plasaţi:
(a) pentru obţinerea unui potenţial bifazic cu prima fază pozitivă (Fig.4.A) şi a doua negativă
- verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben la 5,5 cm şi roşu la 9 cm;
I fază: Vb = VR(+) - VV(-)  Vb(+)  fază pozitivă
II fază: Vb = VR(-) - VV(+)  Vb(-)  fază negativă
(b) pentru obţinerea unui potenţial bifazic cu prima fază negativă (Fig.4.B) şi a doua pozitivă
- verde la 1 cm, galben la 5,5 cm, albastru la 7 cm şi roşu la 9 cm.
I fază: Vb = VR(-) - VV(+)  Vb(-)  fază negativă
II fază: Vb = VR(+) - VV(-)  Vb(+)  fază pozitivă

(A) potenţial bifazic – prima fază pozitivă (B) potenţial bifazic – prima fază negativă
Fig.nr.4. Potenţialul neuronal obţinut prin culegere bipolară
4
 Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

3.3. LEGILE CONDUCERII PRIN FIBRA NERVOASĂ

Obiectiv - se evidenţiază două din legile conducerii prin fibra nervoasă, şi anume conducerea
bidirecţională şi integritatea fibrei nervoase.

Temă de lucru
 reproduceţi schematic poziţiile electrozilor pe suprafaţa nervului şi a celor două ligaturi şi
copiaţi în caiete graficele obţinute înainte şi după aplicarea fiecărei ligaturi;
 explicaţi modificările de aspect grafic al potenţialelor în urma aplicării ligaturilor.

Tehnică
 se activează tasta Clear Screen;
 se utilizează stimuli cu durata de 2 ms şi intensitatea de 200 mV (secvenţa 2);
 se plasează electrozii - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben la 5,5 cm şi roşu la 9 cm şi
se obţine un potenţial bifazic cu prima fază pozitivă şi a doua negativă;
 pentru aplicarea ligaturilor se execută „click” pe mosorul de aţă şi ţinând apăsat butonul
din stânga al mouse-ului se „fixează” firul de aţă pe nerv, în locul de aplicare a ligaturii;
 se efectuează prima ligatură în poziţia 7 cm (între electrodul albastru şi cel roşu) -
potenţialul devine monofazic pozitiv;
 se deplasează ligatura în poziţia 2 cm (între electrodul albastru şi cel verde) - potenţialul
devine monofazic negativ;
 se aplică două ligaturi simultan în cele două poziţii menţionate.

3.4. PERIOADA REFRACTARĂ ŞI PERIOADA EXCITABILĂ NEURONALĂ

Obiectiv - evidenţierea excitabilităţii periodice a nervului care determină ca răspunsul la

excitaţie să depindă de faza potenţialului de acţiune în momentul aplicării stimulului
(Fig.nr.4):
 un stimul care cade în perioada refractară absolută (PRA) nu determină nici un răspuns;
 un stimul care cade în perioada refractară relativă (PRR) determină un răspuns cu
amplitudine redusă;
 un stimul care cade în perioada cu excitabilitate normală (PE) determină un răspuns cu
amplitudine maximă.

Fig.nr.4. Răspunsul nervului la dubla

stimulare, în funcţie de intervalul între
stimuli şi fazele potenţialului neuronal.

Temă de lucru
 reproduceţi în caiete graficele obţinute prin stimulare dublă şi notaţi durata intervalului
de stimulare corespunzătoare.
 stabiliţi corelaţia între intervalul de stimulare şi perioadele de excitabilitate ale nervului.

5
 Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

Tehnică
 se îndepărtează ligaturile, se activează Clear Screen şi tasta Store;
 se plasează electrozii - verde la 1 cm, albastru la 3 cm, galben şi roşu la 5,5 cm;
 se activează tasta Twin/Mode şi se creşte progresiv intervalul de stimulare, deplasând
cursorul Delay cu 1 msec/determinare;
 se urmăreşte momentul apariţiei şi amplitudinea răspunsului la cel de-al doilea stimul;
 stimularea se opreşte când cei doi excitanţi determină răspunsuri cu aceeaşi
amplitudine.

6
 Lucrări practice Fiziologie I – 2015-2016

TESTE (CU UN SINGUR RĂSPUNS CORECT)

1. SimNerv este un program de simulare a experimentelor privind:
A. Nervul senzitiv periferic
B. Nervul motor periferic
C. Muşchiul striat scheletal
D. Nici un răspuns nu este correct
2. Aspectul grafic al potenţialelor neuronale depinde de:
A. Etalonarea înregistrării
B. Poziţia electrozilor
C. Tipul de culegere utilizată
D. Toate răspunsurile sunt corecte
3. Pentru o durată de stimulare dată, creşterea progresivă a amplitudinii stimulului permite:
A. Studiul potenţialului de repaus al nervului
B. Studiul legilor conducerii prin fibrele nervoase
C. Studiul fenomenului de recrutare a fibrelor nervoase
D. Nici un răspuns nu este corect
4. Pentru obţinerea unui potenţial monofazic sunt necesare:
A. O culegere monopolară
B. O culegere bipolară
C. Un electrod explorator şi unul de referinţă
D. Un electrod indiferent
5. Pentru obţinerea unui potenţial monofazic negativ se plasează:
A. Electrodul explorator la un capăt al nervului
B. Electrodul indiferent pe suprafaţa de pământare
C. Electrodul indiferent la un capăt al nervului
D. Răspunsurile A şi B sunt corecte
6. Pentru obţinerea unui potenţial bifazic sunt necesare:
A. Un electrod explorator
B. Un electrod de referinţă
C. Un electrod explorator şi unul de referinţă
D. Un electrod indiferent şi unul de referinţă
7. Un potenţial neuronal este bifazic dacă:
A. Culegerea este bipolară
B. Culegerea este monopolară
C. Ambele răspunsuri sunt corecte
D. Nici un răspuns nu este corect
8. Un potenţial neuronal este bifazic, cu prima fază negativă dacă:
A. Culegerea este unipolară
B. Electrodul explorator şi cel indiferent sunt plasaţi la capetele nervului
C. Electrodul explorator şi cel de referinţă sunt plasaţi la capetele nervului
D. Toate răspunsurile sunt corecte
9. Perioada refractară absolută reprezintă perioada în care un stimul:
A. Nu determină nici un răspuns
B. Determină un răspuns cu amplitudine maximă
C. Determină un răspuns cu amplitudine redusă
D. Nici un răspuns nu este corect
10. Legile conducerii prin fibra nervoasă demonstrate prin experimental SimNerv sunt:
A. Conducerea bidirecţională
B. Integritatea fibrei nervoase
C. Ambele răspunsuri sunt corecte
D. Nici un răspuns nu este correct

Răspunsuri: 1-B, 2-D, 3-C, 4-A, 5-D, 6-C, 7-A, 8-C, 9-A, 10-C.
7