21.09.

2010

FAMILIA VIBRIONACEAE. MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREI

Familia: Vibrionaceae Genuri: Vibrio Photobacterium Salinivibrio Aliivibrio (Allomonas) Enterovibrio Grimontia Caractere generale (cheie) ale familiei: bastonae G-, drepte sau ncurbate, mobile, reduc nitraii n nitrii, fermenteaz glucoza, oxidaza+, catalaza+

GENUL VIBRIO
Bastonae G-, ncurbate, polimorfe, 2-3 m / 0,50,8 m, nesporogene, necapsulate, mobile monotriche (flagel polar unic)

Clasificarea: - Vibrioni halotolerani - Vibrio cholerae (agenii holerei i diareilor holeriforme) - Vibrioni halofili V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.anguillarum, V.vulnificus, V.metschnikovii (oportuniti, pot cauza toxiinfecii alimentare, septicemii, meningite, supuraii) - Vibrioni free life (saprofii)

VIBRIO CHOLERAE
Clasificare : Serogrupuri: Vibrio cholerae O1, O2, ... O155 - V.cholerae O1, agent cauzal al holerei - V.cholerae O139 Bengal (descris in 1992, mutant al Ag O, biovarul El Tor) agent cauzal al holerei - V.cholerae non O1/non O139 (O2, O3,... etc, vibrioni NAG) responsabili de sindrom holeriform, diaree, toxiinfecii alimentare, gastro-enterite

21.09.2010

Serovariante ale V.cholerae O1 - Ogawa, Inaba, Hikojima Biovariante ale V.cholerae O1 : 1. V.cholerae cholerae (clasic) n 1883 izolat n cultur pur de ctre R. Koch, a cauzat 6 pandemii 2. V.cholerae El Tor izolat n 1905 ntr-o staie de carantin din El Tor (peninsula Sinai), n 1961 determin pandemia a VII

Caractere morfotinctoriale (vezi caracteristica genului) Caractere de cultur Anaerob facultativ, temperatura optim de cultivare -37 grade. Crete pe medii simple, dar prefer pH alcalin (7,6 - 9,6). Halotolerant (0,5 - 7% NaCl, optimal 3%). Sensibil la pH acid Mediu de mbogire Apa peptonat alcalin 1% (AP) Medii de izolare a culturii pure: Geloza alcalin (GA) - mediu electiv-selectiv - Mediul TCBS (tiosulfat-citrat-bil-zaharoz) DD i selectiv

Manifestarea creterii AP peste 3-6 ore de incubare vl fin la suprafaa mediului GA peste 12 ore colonii S (R atipice), plate, transparente, cu nuan albstruie TCBS peste 12 ore colonii S, opace, galbene (fermentarea zaharozei) Caractere biochimice: V.cholerae este catalaza+ i oxidaza+, reduce nitraii n nitrii, produce indol, posed gelatinaz, LCD i ODC, fermenteaz i oxideaz glucoza pn la acid (testul HughLeifson), lactoza -.

Conform activitii glicolitice V.cholerae aparine grupului I Heiberg (fermenteaz zaharoza i manoza, nu fermenteaz arabinoza)- testul ZAM Se disting 2 biotipuri (variante) de V.cholerae: clasic (V.cholerae cholerae) i El Tor (V.cholerae El Tor), identice morfologic i antigenic.

21.09.2010

Diferenierea biovariantelor
Caractere Aglutinarea eritrocitelor de gin Hemoliza eritrocitelor de berbec Producerea acetoinei (test VP) Liza cu bacteriofagi Creterea pe mediu cu polimixin V.cholerae cholerae C (IV) V.cholerae El Tor + + + ET (II) +

STRUCTURA ANTIGENIC A VIBRIO CHOLERAE

Antigenul O somatic, LPZ, termostabil (peste 155 serogrupe - O1, O2....O155) Ag O1 este constituit din 3 fracii - A,B,C Respectiv se disting 3 serovariante ale V.cholerae O1: Ogawa (A,B), Inaba (A, C) i Hikojima (A; B; C) Ag H, proteic, termolabil, comun pentru V.cholerae

FACTORI DE PATOGENITATE
Factori de adeziune (pili - Toxin Coregulated Pilus (TCP), LPZ, glicocalixul) Enzime de patogenitate (mucinaza, neuraminidaza, LDC, lecitinaza) Enterotoxina (toxina holeric, holeragen), constituit dintr-o subunitate A (A1, A2) i 5 subuniti B. Codat de genele ctxAB ale unui bacteriofag filamentos. Endotoxina

Mecanismul de aciune al enterotoxinei: Subunitile B servesc la fixarea pe receptorul gangliozidic GM1 de pe membrana enterocitului. Urmeaz modificarea conformaional a toxinei cu crearea unui canal hidrofil prin care subunitatea A ptrunde n celul. Catena A1, manifestnd activitate ADP -ribozilant, activeaz adenilatciclaza membranar, ce duce la creterea concentraiei de AMPc intracelular. Rezult inhibiia absorbiei bicarbonatului i secreia exagerat a cloridului. Apa i electroliii (Na + K+ ClHCO3-) se acumuleaz n lumenul intestinal. Rezult deshidratare extracelular intens cu hemoconcentraie, oc hipovolemic i acidoz metabolic.

21.09.2010

PATOGENEZA HOLEREI I MANIFESTRILE CLINICE

HOLERA gastroenterit acut, strict uman. Agentul cauzal V.cholerae O1/O139 Sursa de infecie bolnav, convalescent, purttor sntos Mecanismul de transmitere fecal-oral - Alimentar (ap, alimente, fructe de mare) - Contact direct (manual) Doza infectant 109 - 1011 UFC (104 pentru persoane cu hipoaciditate gastric)

21.09.2010

Vibrionii care au supravieuit ajung n intestinul subire. Local mucinaza descompune mucusul, asigurnd adeziunea vibrionilor la enterocite, colonizarea i producerea toxinei. Neuraminidaza transform di i trisialogangliozidele membranare n GM1, ce permite fixarea toxinei i penetrarea ei.

Evoluia clinic a holerei: I - Perioada de incubaie (2-5 zile) II Enterita holeric (scaune frecvente, afecale, apoase, constituite din lichid clar cu flocoane albe - aspect zeam de orez) III Gastro-enterita (scaune frecvente 10 50 ori pe zi i vome abundente). Consecine deshidratare (3-20 litri eliminai n 24 ore), carene de sruri, acidoz, hipoxie tisular, hipotensiune, contracii (crampe) musculare.

IV - Algida holeric (stare extrem de grav, hipotermie, asfixie, anurie, colaps, com, deces) Imunitatea umoral (sIgA, IgG), antibacterian i antitoxic, de scurt durat (2 ani), reinfecii sunt posibile

21.09.2010

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREI

Prelevate: mase vomitive, materii fecale, bil (purttori), de la cadavru 3 fragmente din intestinul subire i vezica biliar, prelevate din mediul extern (apa, alimente) Metode de diagnostic 1. Diagnosticul rapid Frotiu Gram (bacterii G-, ncurbate) Studierea mobilitii (preparate native bacterii mobile, grupate n bancuri de peti Imobilizarea i aglutinarea vibrionilor cu serul anti-O1 Imobilizarea vibrionilor cu bacteriofagi C i ET RIF

2. Examenul bacteriologic (de baz) - Prelevatele se nsmneaz n AP I (mbogire) i GA I / TCBS (izolarea culturii pure) termostat, 37 grade C - Peste 6 ore se examineaz cultura din AP (vl la suprafa?), utilizat pentru diagnosticul rapid, apoi se rensmneaz pe AP II i GA II.

21.09.2010

- Peste 12 ore se examineaz coloniile de pe GA I sau TCBS. Coloniile suspecte (plate i transparente cu nuan albstruie pe GA, galbene pe TCBS) sunt expuse diagnosticului rapid (5 teste), apoi repicate pe mediul cu lactoz i zaharoz pentru acumularea culturii pure i difereniere primar. AP II poate fi utilizat pentru efectuarea testelor rapide i nsmnare pe GA III - Culturile lactoza-/zaharoza+ sunt identificate morfologic, cultural, biochimic, serologic (cu ser O1 sau RO (colonii atipice), apoi cu seruri monospecifice Ogawa i Inaba). Se efectueaz fagoidentificarea i diferenierea biovariantelor

3. Depistarea toxinei - In vivo (ansa ligaturat la iepure, culturi de celule) - In vitro (ELISA, cu utilizarea gangliozidului GM1; latexaglutinarea) - Tehnici de biologie moleculara (PCR, etc) 4. Serodiagnostic (retrospectiv) Anticorpii (aglutinine, vibriocine, antitoxine) apar dup 10-15 zile de boal - RA (serul bolnavului + diagnostic din V.cholerae O1 (titrul diagnostic 1/80) - RHAI (serul bolnavului + diagnostic eritrocitar) - Reacia de vibrioliz (serul bolnavului + cultur de vibrioni + complement). Titrul diagnostic 10-4 - Dozarea antitoxinelor (ELISA, RHAI)

TRATAMENTUL I PROFILAXIA HOLEREI

Tratament - Rehidratare - Antibiotice (tetraciclin, sulfanilamide, doxiciclin) - Tratament simptomatic Profilaxie - Igiena individual i colectiv - Vaccinarea (vaccin inactivat, vaccin subunitar, holeragen-anatoxin) Imunitatea pn la 6 luni Vaccinul viu este n proces de studiu

VIBRIONII HALOFILI
V. parahaemolyticus toxiinfecii alimentare, consecutive utilizrii fructelor de mare, gastroenterite V. vulnificus, V. alginolyticus procese supurative (otite, conjunctivite, infecii de plag, etc), toxi-infecii alimentare, septicemii

CAMPYLOBACTER

Caractere morfobiologice Reprezentanii genului Campylobacter sunt bastonae Gram -, ncurbate n virgula, n S sau pescru in zbor, mobili monotrichi. Trei specii de Campylobacter sunt patogene pentru om : C. fetus, C. jejuni, C.coli .

21.09.2010

Campylobacter au metabolism respirator microaerofil. Pot fi izolate pe medii selective imbogite cu snge coninnd numeroase antibiotice (bacitracin, novobiocin, vancomicin, polimixin, etc) Temperatura optima 37 grade C. Colonii S, plate, cenuii, translucide, 12 mm diametru, apar peste 2-4 zile de cultivare.

HABITAT Campylobacter se intlnesc n tubul digestiv al animalelor, n special ovine, porcine i la psri Contaminarea omului are loc pe cale alimentar (ap, lapte, carne).

PATOGENEZA SI FORME CLINICE C. jejuni/coli au o putere enteropatogen important, fiind responsabile de enterite. Afecteaza toate vrstele, dar mai frecvent copiii, n condiii de igien precar. Maladia evolueaz benign cu vindecare spontan n cteva zile. C. fetus determin septicemii la persoane fragilizate: cirotici, diabetici, cardiaci, gravide...

SENSIBILITATE LA AB Eritromicina este antibioticul de elecie n tratamentul campilobacteriozelor digestive. Alte antibiotice: tetraciclina, aminoside, cloramfenicol, ampicilina