CUPRINS

MICROBIOLOGE GENERALA 1. Obiectul de studiul al microbiologiei 2. Caractere generale i poziia microorganismelor n lumea vie 2.1. Prionii 2.2. Virusurile 2.3. Bacteriile 2.4. Cyanobacteriile (algele albastre-verzi) 2.5. Protozoarele 2.6. Ciupercile MICROBIOLOGIA SOLULUI 1. Solul ca mediu de via pentru microorganisme 2. Circuitul azotului 3. Circuitul carbonului 4. Influena factorilor ecologici asupra microorganismelor 5. Interrelaiile dintre microorganismele din sol 6. Interrelaiile dintre plantele superioare i microorganismele din sol MICROBIOLOGIA FERMENTAIILOR 1. Fermentaia alcoolic 2. Utilizarea microorganismelor n vinificaie Bibliografie 2 6 7 8 12 23 23 24 26 27 33 41 53 56 58 61 62 62 68

MICROBIOLOGIEGENERAL GENERAL MICROBIOLOGIE

1. OBIECTUL DE STUDIU AL MICROBIOLOGIEI Microbiologia este tiina care se ocup cu studiul microorganismelor. Microorganismele constituie un grup foarte mare de organisme, diferite ca natur, form i activitate biologic, cu o organizare unicelular i o structur intern relativ simpl, avnd ns caractere comune dimensiunile microscopice care le fac invizibile cu ochiul liber. Din grupul microorganismelor fac parte bacteriile, ciupercile microscopice (mucegaiurile i levurile), algele unicelulare i protozoarele. La lumea microorganismelor au fost alturate i virusurile care sunt entiti infecioase alctuite din componentele chimice eseniale ale organismelor vii, proteine i acizi nucleici cu o organizare acelular, care le face inapte de a se multiplica n afara unei celule vii, fapt ce le oblig la un parazitism intracelular absolut. Dei Microbiologia este o tiin relativ tnr, datorit domeniului de studiu foarte vast, n cadrul ei s-au difereniat o serie de discipline microbiologice independente. Acestea pot fi grupate dup mai multe criterii: A. Dup grupul taxanomic studiat: 1. Virologia 2. Bacteriologia 3. Micologia 4. Algologia (ficologia) 5. Protozoologia B. Dup activitatea microorganismelor n raport cu mediul n care triesc: 1. Microbiologia acvatic 2. Microbiologia solului C. Dup natura problemelor studiate: 1. Fiziologia microorganismelor 2. Ecologia microorganismelor 3. Genetica microorganismelor D. Dup aplicaiile practice: 1. Microbiologia medical - uman i veterinar 2. Imunologia 3. Microbiologia industrial 4. Microbiologia agricol 5. Microbiologia insectelor 6. Microbiologia geologic
2

7. Microbiologia cosmic 8. Patologia vegetal (Fitopatologia) Istoricul Microbiologiei Microbiologia este o tiina relativ tnr, datorit faptului c din lipsa mijloacelor de investigaie, oamenii de tiin s-au ocupat n primul rnd de vieuitoarele vizibile. Existena microorganismelor ca ageni etiologici ai unor boli, era ns bnuit nc din antichitate. Hipocrat (400 .e.n.) ntemeietorul medicinei, considera doi factori responsabili de aceste boli: unul intrisec, reprezentat de contribuia bolnavului i altul extrinsec, constnd dintr-o alterare necunoscut a aerului care devine nociv. Aceast prim ipotez asupra etiologiei bolilor infecioase a persistat mult vreme sub forma teoriei miasmelor (gr.miasma = emanaie putred, murdrie). Varon (100 .e.n.), considera c alterarea aerului (gr. malaria = aer ru) este determinat de animale foarte mici, invizibile care ptrund n organism prin gur i prin nri. Fracastor (1488-1553) intuiete foarte corect una dintre caracteristicile eseniale ale bolilor produse de microorganisme i anume contagiozitatea lor. El arat c "infecia este aceeai pentru cel care a primit-o i pentru cel care a dat-o" i c ea este produs de "particule mici i imperceptibile" care trec de la un organism bolnav la altul sntos. Antony Leeuwenhoek (1632-1723) reuete descoperirea microorganismelor folosind ca microscop un sistem de lentile biconvexe de construcie proprie, cu o putere de mrire de 40-275 x. El observ protozoare, alge, nematozi, levuri i bacterii pe care le descrie i deseneaz n lucrarea sa "Arcana naturae ope microscopiorum detecta" (Tainele naturii descoperite cu ajutorul microscoapelor (1675). Dei, descoperirile lui Leeuwenhoek au strnit admiraia i interesul oamenilor de tiin, studiul microorganismelor a rmas n continuare empiric, constituind doar o preocupare a amatorilor de curioziti ale naturii. n felul acesta se acumuleaz numai date disparate cu privire la forma, structura, mrimea i distribuia n natur a acestor microorganisme. K. Linnaeus, celebru botanist, n opera sa "Systema naturae" (1735) ncearc o sistematizare a vieuitoarelor cunoscute, reunind toate microorganismele ntr-un grup denumit semnificativ "Chaos". Terehovski, folosind pentru prima dat metode experimentale, public n anul 1775 lucrarea " De Chao infusorii Linnaei" n care demonstreaz c fiinele foarte mici, observate n diferite infuzii bogate n substane organice, cresc, se divid i se mic datorit unor fore interne proprii, ajungnd la concluzia c aceste organisme sunt adevrate animale n miniatur. Louis Pasteur (1822-1895) savant francez, prin lucrrile sale stabilete principiile care stau i azi la baza acestei tiine. Primele cercetri ale lui Pasteur au fost legate de fenomenul asimetriei moleculare. La acidul tartric racemic, compus inactiv pentru lumina polarizat, demonstreaz c este un amestec echimolecular de acid dextrogir i acid levogir, ale cror cristale sunt de forme asimetrice i enantiomorfe. De asemeni, a observat c dac n amestecul racemic, inactiv din punct de vedere optic se dezvolt un mucegai (Penicillium glaucum) soluia devine optic activ, deviind de ast dat spre stnga planul luminii polarizate. Mucegaiul degradeaz izomerul dextrogir lsndu-l intact pe cel levogir, care astfel poate fi izolat n stare pur. Aceast descoperire pe lng faptul c furniza un procedeu simplu de separare a izomerilor optici a demonstrat i intervenia unei caracteristici fizice, ca disimetria molecular n fenomenele chimice ale vieii dar, mai ales a atras atenia lui Pasteur asupra unui fenomen spre care se va ndrepta n continuare curiozitatea lui de cercettor: microorganismele produc transformri ale substanelor organice printr-o activitate selectiv foarte specific. Cercetrile lui Pasteur asupra fermentaiei vinului i berii l-au condus la urmtoarele concluzii fundamentale:
3

1. fermentaiile sunt procese biologice determinate de aciunea unor microorganisme anaerobe, deci fermentaia este via fr aer; 2. fiecare fermentaie este produs de un anumit tip de microorganism care este specific n sensul c determin o anumit transformare a mediului pe care crete; 3. dezvoltarea unui microorganism strin n mediul unde acioneaz un microorganism cu aciune fermentativ specific, deviaz cursul normal al fermentaiei n dauna calitii (prin apariia compuilor nedorii), i a randamentului ei n produs util determinnd o aa numit "boal" a fermentaiei; 4. microorganismele strine care produc bolile vinului i ale berii sunt consecina contaminrilor din aer, de pe vasele sau din ingredientele folosite n producie, iar multiplicarea lor poate fi prevenit prin nclzire, procedeu utilizat sub denumirea de pasteurizare. Pn la Pasteur ideea participrii microorganismelor la determinarea unor boli era respins, ca nefiind probat pe cale experimental. Pasteur extinde noiunea de specificitate din domeniul fermentaiilor n acela al patologiei omului i animalelor, n sensul c, orice boal infecioas este rezultatul activitii vitale a unui anumit microorganism specific, care se dezvolt ca parazit n organismul animal respectiv. Ulterior, cercetrile acestuia au demonstrat principiul vaccinrii i stabilirea bazelor tiinifice ale preparrii vaccinului, contribuind n acelai timp la descoperirea fenomenului de imunitate. Studiind boala "holera ginilor" Pasteur observ c agentul ei patogen i pierde complet, prin nvechirea culturii, capacitatea sa specific de a produce aceast boal, adic devine avirulent. Inoculat la psri sntoase, cultura avirulent, le confer ns rezistena fa de holer, n sensul c ele nu se mai mbolnvesc nici dac sunt infectate cu o cultur proaspt, virulent, psrile "vaccinate" devenind "imune". Pe acelai principiu Pasteur a mai preparat i utilizat cu succes "vaccinul anticrbunos" (1881), apoi vaccinul antirabic (1885). L. Pasteur rezolv i problema generaiei spontane. Ignorarea unor principii eseniale, care mai trziu au stat la baza microbiologiei experimentale, n ceea ce privete sterilizarea i asepsia, au fcut posibil concluzia fals c microorganismele pot lua natere prin organizarea spontan a substanelor organice din produsele supuse fermentaiei sau putrefaciei. Folosind baloane speciale cu "gt de lebd", Pasteur demonstreaz c un mediu de cultur sterilizat, n spe bulionul de carne, poate rmne steril timp ndelungat, dac se evit contaminarea lui cu germeni din aer. Dac prin nclinarea unui asemenea balon, mediul "spal" poriunile incurbate ale gtului rmas descoperit, poriunile n care s-au depus bacteriile din aer, bulionul se infecteaz. Faptul c n baloanele cu mediu steril nchise ermetic nu apar niciodat microorganisme, n timp ce acelai mediu se infecteaz dac este lsat n contact cu aerul, dovedete c microorganismele nu iau natere spontan din materia organic inanimat ci numai se nmulesc n ea, pornind de la organisme similare provenite din mediul nconjurtor. L. Pasteur a adoptat pentru denumirea organismelor microscopice termenul de "microb" creat de medicul francez Sedillot, iar noua tiin care studiaz microbii a rmas cu numele de Microbiologie. Robert Koch (1843-1910) a adus n dezvoltarea microbiologiei ca tiin, contribuii de ordin tehnic i teoretic deosebit de valoroase, ntre care conceptul de " cultur pur", respectiv de organism cultivat ntr-un mediu lipsit de alte organisme. Realizarea culturilor pure este facilitat prin introducerea n tehnica microbiologiei de ctre Koch, a mediilor de cultur solidificate (cu gelatin sau agar). Pe lng faptul c a descoperit mai multe specii de bacterii patogene, ntre care bacilul tuberculozei (Mycobacterium tuberculosis) i vibrionul holerei, Koch demonstreaz fr echivoc c bacteria carbonoas (Bacilus anthracis) este agentul patogen al bolii denumit antrax sau crbune, pe care l cultiv "in vitro" n ser sanguin, studiind formarea de spori termorezisteni, alternana de sporulare i germinare, precum i faptul c infecia natural a animalelor provine din sol prin iarba contaminat.
4

Pe baza acestor cercetri, R. Koch stabilete criteriile indispensabile pentru ca un microorganism izolat dintr-un organism afectat de o anumit boal s poat fi considerat n mod justificat ca agentul cauzal al bolii respective. Aceste criterii cunoscute sub numele de postulatele lui Koch, sunt urmtoarele: 1. microorganismul incriminat s poat fi pus ntotdeauna n eviden n toate cazurile bolii respective, iar distribuia lui s corespund leziunilor caracteristice bolii; 2. s poat fi utilizat n cultur pur, pe medii artificiale; 3. dup ce este cultivat "in vitro" mai multe generaii s reproduc boala i leziunile specifice la animalele sensibile de la care s poat fi reizolat. Postulatele lui Koch, au reprezentat i reprezint nc un principiu eficace de lucru, a crui respectare previne interpretrile eronate, n materie de diagnostic bacteriologic sau de identificare a unor ageni infecioi. Ilia Metchnikoff (1845-1916), biolog rus, studiind digestia intracelular la echinoderme, demonstreaz capacitatea anumitor celule de a capta i ngloba diferite particule cu care vin n contact i emite ipoteza c celulele cu funcii asemntoare, denumite de el "fagocite" ar putea exista i n organismul altor animale. Ulterior (1884), studiind infecia crustaceului Daphnia magna cu ciuperca Monospora (Metschnikowia) bicuspidata, observ c sporii aciculari ai levurii ptrund odat cu hrana n tubul digestiv al dafniei de unde, strpungnd peretele acestuia, trec n cavitatea general unde sunt atacai de celule mobile. Cnd infecia este moderat, amoebocitele nglobeaz i diger toi sporii ciupercii i astfel crustaceul supravieuiete. Cnd ns infecia este masiv, sporii rmai nefagocitai germineaz i dau natere formei vegetative a ciupercii, care prin multiplicare, invadeaz tot organismul dafniei, determinndu-i moartea. Metchnikoff extinde rezultatele acestor observaii la animalele superioare i la om, demonstrnd prezena i importana celulelor cu proprieti fagocitare, n reaciile de aprare ale organismului fa de bacteriile patogene, stabilind astfel bazele imunitii celulare. Ivanovski (1864-1920) demonstreaz c mozaicul tutunului este produs de un agent patogen invizibil la microscop, care traverseaz filtrele bacteriene i poate fi transmis de la o plant bolnav la una sntoas prin intermediul filtratului acelular al trituratului de frunze, cu leziuni. Beijerinck (1851-1953) confirm n 1898 filtrabilitatea agentului patogen i intuiete natura deosebit a agentului patogen pe care l considera ca agent contagios viu (contagium vivum fluidum). Aceast intuiie a fcut din Beijerinck adevratul intemeietor al virologiei ca tiin. Winogradski (1856-1953), lucrnd la Institutul Pasteur din Paris, a descris procesul de asimilare la organismele chimiosintetizante i fenomenul de fixare a azotului atmosferic de ctre microorganisme. n acelai timp el a elaborat metode speciale pentru cercetarea activitii microorganismelor din sol, fiind considerat intemeietorul microbiologiei solului. Alexander Fleming (1881-1955), observ n anul 1929 c unele culturi de Penicillium, elaboreaz o substan cu proprieti microbiene specifice penicilina. Acest prim antibiotic a fost mai trziu purificat de Florey i Chain (1940). Prin lucrrile sale Fleming deschide era antibioticelor, de o importan excepional n medicin i biologie. coala romneasc de Microbiologie Victor Babe (1854-1926), fondatorul colii romneti de microbiologie a desfurat o prodigioas activitate de cercettor studiind numeroase boli ale omului printre care lepra, tuberculoza, holera, febra tifoid i mai ales turbarea.

n colaborare cu Cornil, el este autorul primei lucrri de sintez n bacteriologie i anatomie patologic din lume, aprut n 1885. Bacteriile i rolul lor n etiologia, anatomia i histologia patologic a bolilor infecioase. A studiat, de asemenea asociaiile microbiene, fiind primul cercettor care dup Pasteur, i-a dat seama de importana terapeutic a antagonismului microbian. Ioan Cantacuzino (1863-1934) este creatorul Institutului de Microbiologie, care I poart numele i al colii contemporane de microbiologie din ara noastr. Cele mai importante lucrri sunt referitoare la aparatele i funciile fagocitare n regnul animal i problema imunitii la nevertebrate. Cantacuzino a studiat de asemenea, diferite boli ca holera, febra tifoid, scarlatina, tuberculoza, creind i organiznd condiiile produciei de seruri i vaccinuri n ara noastr. Constantin Ionescu-Mihieti (1883-1962), a adus contribuii tiinifice valoroase n domeniul virologiei, imunologiei i microbiologiei generale. Dumitru Combiescu (1887-1961) a desfurat o ampl activitate n domeniul rickettsiozelor i zoonazelor. Mihai Ciuc (1883-1969), este autorul unor lucrri deosebit de importante n domeniul bacteriofagilor, paludismului, salmonelozelor, difteriei. tefan Nicolau (1896-1967) este creatorul colii romneti de virologie I fondatorul institutului respectiv. A publicat numeroase lucrri originale n domeniul herpesului, turbrii, febrei aftoase, febrei galbene, hepatitelor virale. Traian Svulescu (1889-1963) este creatorul i ndrumtorul colii romneti de fitopatologie. Este autorul unor lucrri de sintez ca: Monografia uredinalelor, Monografia ustilaginalelor, i a unor lucrri originale n fitopatologie i n domeniul imunitii plantelor fa de bolile bacteriene

2. CARACTERELE GENERALE I POZIIA MICROORGANISMELOR N LUMEA VIE Microorganismele, cu excepia celor cu structur acelular (virusurile) au ca unitate elementar de baz celula. Celula la microorganisme, asemntoare n general cu celula vegetal i animal, prezint unele particulariti n funcie de grupul de microorganisme considerat. Aceste particulariti structurale i funcionale au determinat mprirea microorganismelor n dou grupe (Eduard Chatton, 1932 i Stanier, 1970). ntre microorganismele procariote i eucariote exist diferene eseniale structurale, funcionale i de compoziie. Diferenele dintre celula procariot i celula ecucariot Procariote Bacterii Cyanobacterii Nucleul fr membran Compoziia chimic a membranei fr steroli (cu excepia citoplasmatice micoplasmelor) Sistemul respirator n membrana citoplasmatic Ribozomii 70 S Curenii citoplasmatici abseni
6

Caracterul

Eucariote Alge, Fungi, Protozoare, Plante, Animale cu membran conine steroli mitocondrii 80 S prezeni

Reticulul endoplasmatic Tipul de diviziune

absent direct (sciziparitatea)

prezent Mitoz

Poziia microorganismelor n lumea vie Dup acumularea a numeroase cunotine asupra microorganismelor a fost necesar introducerea acestora ntr-un grup taxonomic. Iniial microorganismele au fost incluse n regnul Plantae, dar pe parcursul timpului datorit unor descoperiri noi au aprut alte sisteme de clasificare. A. Sistemul tradiional: 1. Regnul Plantae; 2. Regnul Animalia. B. Sistemul lui Hogg i Haeckel: 1. Regnul Monera; 2. Regnul Plantae; 3. Regnul Animalia. C. Sistemul lui Copeland: 1. Regnul Procaryotae (Monera); 2. Regnul Protista; 3. Regnul Plantae; 4. Regnul Animalia. D. Sistemul lui Whittaker: 1. Regnul Procaryotae (bacterii, cianobacterii = alge albastre-verzi); 2. Regnul Protista (protozoare, diatomee); 3. Regnul Fungi (ciuperci); 4. Regnul Plantae (alge verzi, brune, roii, brofite, traheofite); 5. Regnul Animalia (animale multicelulare). Astzi, majoritatea specialitilor din domeniul microbiologiei au acceptat sistemul de clasificare elaborat de Whittaeker n anul 1969 i care corespunde necesitilor actuale. Din punct de vedere taxonomic subdiviziunile regnului sunt: ncrengtura, subncrengtura, clasa, ordinul, familia, genul, specia. Unitatea de lucru efectiv este specia la care denumirea este n sistemul binominal, numele organismului fiind derivat din latin sau greac. n sistemele de clasificare prezentate anterior sunt cuprinse numai organismele care au ca unitate de baz, celula, eucariot sau procariot, nefiind introduse entitile infecioase cum sunt virusurile sau prionii i care au fost "alturate" acestor sisteme de clasificare. 2.1. PRIONII Bolile produse de prioni sunt cunoscute la om i animale. Prima semnalare a unei boli de natur prionic a fost fcut n Anglia n anul 1732 la ovine. Astzi sunt cunoscute ca boli certe, produse de prioni, urmtoarele: - la animale: 1. encefalopatia spongiform la ovine, denumit popular scrapie (engl.); tramblanta (fr.). n Romnia mai este utilizat impropriu termenul de "cpiala" oilor, dar aceasta este o boal bine cunoscut i este produs de un parazit animal. Medicii veterinari avizai folosesc termenul francez de tramblanta oilor. 2. encefalopatia spongiform bovin; 3. encefalopatia spongiform a felinelor;
7

4. encefalopatia spongiform a nurcilor; 5. encefalopatia spongiform a hamsterilor. - la om: 1. Boala "Kurru". Aceasta este prima semnalat i cel mai bine studiat. A fost depistat la un trib local n Papua - Noua Guinee. Dup interzicerea consumului de carne, n stare proaspt, aceast boal a fost eradicat. 2. Boala Creutsfeldt-Jacob. Agentul infecios Astzi se consider c agentul infecios este o molecul proteic cu greutatea molecular de 27 kilodaltoni, alctuit dintr-un lan de 240 de aminoacizi i care prezint o configuraie spaial asemntoare unui metru de tmplrie parial destins. Aceast protein a fost izolat din creierul tuturor cazurilor bolnave studiate. Surpriza a sosit n momentul studierii n paralel (la oi) a creierului la animale sntoase i care prezint o protein celular similar. Lanul de aminoacizi este identic cu excepia unui singur aminoacid (schimbat). Proteina celular normal prezint o configuraie spaial asemntoare unui resort. Specialitii din biochimie consider c prin schimbarea unui singur aminoacid din lan nu se poate modifica configuraia spaial. n acelai timp proteina infecioas rezist la atacul proteazelor celulare. Se consider c procesul infecios se desfoar astfel: celula prepar proteina celular normal care se acumuleaz n lizozomi, acetia o transport la exteriorul celulei i n momentul n care aceast protein ptrunde din nou n celul este degradat de proteaze. n cazul proteinei infecioase aceasta se acumuleaz n lizozomi n mod continuu pn cnd acetia "crap". Enzimele din interiorul lor degradeaz componentele celulare i n final ntreaga celul nervoas. n locul acesteia rmne un orificiu. Din acest motiv, dup un timp creierul atacat arat ca un burete (cu numeroase orificii). n stadiul final al bolii, creierul degenereaz complet, avnd dimensiunea unei nuci. Studiile cele mai ample sunt efectuate la animale, la om ele fiind extrem de puine, deoarece boala poate fi studiat numai dup moartea individului. 2.2. VIRUSURILE Virusurile reprezint o categorie specific de ageni infecioi, structural i fiziologic fundamental diferii de oricare dintre microorganismele cunoscute (Zarnea G., 1983). Morfologia virusurilor Din punct de vedere morfologic virusurile pot aparine urmtoarelor tipuri principale: form cilindric-alungit sau de bastona (virusul mozaicului tutunului); form sferic (izometric), sferoidal (virusul gripal), form paralelipipedic (virusul variolei), form de cartu sau obuz (virusul piticirii galbene la cartof), form de mormoloc, spermatozoid sau cirea cu coad (unii bacteriofagi). Dimensiunile virusurilor 17 nm - 2500 nm. Structura virusurilor Dei diferitele virusuri se deosebesc mult ca form i dimensiuni ele sunt constituite dup principii comune. Particula viral matur (virionul) este alctuit din dou componente eseniale: genomul viral i capsida, precum i un constituient accesoriu, nveliul extern. Genomul viral este reprezentat n mod obinuit printr-o molecul de acid nucleic (ADN sau ARN, niciodat ambele). Genomul viral poart informaia genetic necesar replicrii n sensul sintezei constituienilor virali i a precursorilor lor.
8

Capsida viral (gr. "Kapsa" = cutie), acoper genomul fiind alctuit din subuniti proteice denumite capsomere. Capsomerele sunt constituite din molecule proteice aezate n mod regulat, formnd n ansamblu structura specific a virusului. Capsida protejeaz materialul genetic. Capsida i genomul viral formeaz nucleocapsida. La unele virusuri nucleocapsida este acoperit de o alt structur numit nveliul extern sau peplosul (gr. peplos = manta). Virusurile plantelor Virusurile plantelor au o mare importan ca ageni patogeni datorit marii lor rspndiri i faptului c acelai virus poate infecta plante care aparin la diferite familii botanice. Bolile produse de virusuri la plante sunt denumite viroze. Pn n prezent sunt cunoscute cteva sute de boli virale, produse de virusuri care aparin la 25 genuri distincte. Din punct de vedere morfologic virusurile plantelor aparin la dou grupuri: grupul virusurilor izometrice (izodiametrice) sau sferice i grupul virusurilor alungite. n general virusurile plantelor au o structur chimic mai simpl dect virusurile animale i bacteriofagii. Mecanismul de transmitere: Virusurile se pot transmite de la planta bolnav la planta sntoas pe mai multe ci: A - transmitere mecanic: prin contact ntre frunze; anastomoze radiculare; unelte de lucru; altoire. B - transmiterea prin vectori se realizeaz prin intermediul insectelor (cca.400 specii): afide i cicade. Relaia dintre virus - insect vectoare este variabil i corespunde la 3 situaii: Virusuri nepersistente, pot fi transmise pn la circa 4 ore de la achiziie. Virusuri semipersistente au capacitatea de infectare variabil de la 10-100 ore de la achiziie. Virusuri persistente cu o capacitate de infectare de peste 100 ore (uneori chiar toat durata de via a vectorului). n funcie de rspndirea i comportarea virusurilor n corpul vectorului, acestea se mpart n 3 categorii: Virusuri localizate pe stilet (virusuri nepersistente). Virusuri circulante (virusuri persistente) pot fi transmise timp ndelungat ajungnd n hemolimfa insectei. Virusuri propagative (virusuri persistente) se multiplic n corpul vectorului fiind transmise toat viaa insectei. C - transmiterea prin intermediul ciupercilor fitopatogene din sol, (ex. Polymyxa betae transmite virusul rizomaniei la sfecla pentru zahr). D - transmiterea prin intermediul nematozilor. E - transmiterea prin semine (cca. 1/3 din virusuri). Circulaia virusurilor n interiorul plantelor se realizeaz prin parenchim (plasmodesme), prin floem i prin xilem. Bacteriofagii Bacteriofagii sunt virusuri adaptate la viaa parazitar n celulele bacteriene i care prin multiplicare produc liza acestora. n anul 1915 Twort, descoper fenomenul de liz transmisibil, dar nu poate explica cu exactitate cauza acesteia. D'Herelle (1917) demonstreaz natura particular a fagului i l consider, ca virus, determinndu-l bacteriofag (mnctor de bacterii).
9

n anul 1940, ia fiin un grup de cercettori, denumit "grupul fag", condus de Delbrck, sistemul bacterie-bacteriofag fiind folosit ca model experimental pentru cele mai importante studii de genetic molecular. Structura fagilor difer de la un grup la altul, n majoritate, acetia ncadrndu-se n dou tipuri de baz i anume: - tipul icosaedric (poliedric); - tipul filamentos. Datele cele mai numeroase cunoscute n prezent sunt cele referitoare la fagii din seria T, ndeosebi la fagi T-par (T2, T4, T6). Anatomia fagilor T-par Particula viral matur a fagilor T-par cu g.m. 2,2 x 1010 este alctuit din ADN i protein i din punct de vedere anatomic prezint urmtoarele componente: cap, guler, coad, plac bazal i fibrele cozii. Capul fagului, la microscop prezint o form poliedric iar n seciune are o form hexagonal, cu o lungime de 100 nm i o lime de 65 nm. Acesta este constituit din capsomere cu de 4 nm, dar nu este cunoscut nc, numrul i modul de aezare al acestora. n interiorul capului, se gsete genomul, alctuit dintr-o molecul de ADN d.c., liniar, cu lungimea de 50 m, ce cuprinde 200 gene, fiind mpachetat foarte strns. n partea bazal a capului, la locul de prindere al cozii se afl un dop proteic, cu rol de articulare mecanic. ntre acest dop i placa bazal se gsete un tub lung de 120 nm, reprezentat de cilindrul axial al cozii. El are un de 7,5 nm i un canal central cu de 2 nm, prin care trece ADN-ul n momentul introducerii n celula bacterian. La exteriorul cilindrului axial se gsete teaca contractil a cozii, care n stare extins are o lungime de 80 nm, iar cnd se contract, teaca se scurteaz la 1/2 respectiv 35 nm. Teaca este constituit din 24 inele suprapuse i datorit aranjamentului capsomerelor formeaz o helice. Gulerul fagului este situat ntre dopul proteic i coada fagului i are forma unui disc hexagonal de 1,5 nm grosime cu de 3,6 nm. Placa bazal este un disc hexagonal cu de 40 nm i este prevzut la partea inferioar cu 6 crlige (croetele cozii) care sunt uniti integrale de fixare a fagului pe bacterie. n momentul contraciei, placa bazal ia forma de stea cu mrit la 60 nm i este lipsit de dopul central. Fibrele cozii sunt structuri filamentoase, proteice de 130 nm lungime, fixate cu unul din capete pe placa bazal, iar cu cellalt capt pe gulerul fagului, cea de-a doua legtur fiind mai slab. Aceste fibrile formeaz o reea care mbrac teaca contractil a cozii i care n perioada premergtoare fixrii fagului, se desprind de pe guler i rmn legate numai pe placa bazal, notnd libere n mediu i au aspectul unor picioare de pianjen. Structura genomului Bacteriofagii prezint n majoritate un genom format dintr-o singur molecul de A.N. (ADN m.c., ADN d.c. , ARN m.c.) cu o singur excepie fagul 6 de la Pseudomonas phaseolicola care are un genom ARN segmentat, format din 3 segmente. Genomul bacteriofagilor se deosebete de genomul virusurilor animale i vegetale prin prezena unor baze nucleice neobinuite, cum ar fi la bacteriofagii T-par, n loc de citozin prezint 5-hidroximetilcitozin, iar la fagii de la Bacillus subtilis, 5-hidroximetilluracil i 54,5 hidroximetiluracil. Legat de acest aspect s-a emis ipoteza c aceste baze nucleice ar avea rol de protecie a AN fagic mpotriva aciunii unor enzime virale (nucleaze) care atac numai AN strin i n felul acesta poate degrada selectiv cromozomul bacterian n cursul sintezei de virus.
10

Infecia celulei bacteriene. Replicarea Ciclul de replicare vegetativ a fagului are urmtoarele etape: I. Adsorbia reprezint procesul de fixare a particulelor virale pe suprafaa bacteriilor. Dup o serie de ciocniri ntmpltoare fagul se fixeaz pe peretele celular prin intermediul fibrelor cozii, realiznd faza de fixare iniial, care poate fi reversibil. Urmeaz faza de fixare ireversibil realizat prin intermediul croetelor i este condiionat de prezena receptorilor de fag. Acetia sunt reprezentai de orice structur existent la suprafaa celulei bacteriene sau pe pilii i flagelii acesteia, iar sinteza lor este controlat de gene bacteriene. II. Injectarea genomului viral n celula bacterian Dup fixarea ireversibil pe peretele celular are loc o contracie a cozii fagului, axul central al acesteia ptrunznd n adncimea peretelui celular 12 nm iar genomul este injectat prin intermediul cilindrului axial tubular. Nu se cunosc nc forele care proiecteaz genomul viral n interiorul celulei, injectarea fcndu-se rapid (15 secunde la T4). III. Replicarea bacteriofagilor Dup ptrunderea genomului fagic n interiorul celulei bacteriene au loc procese coordonate de cele 200 gene, care i ncep activitatea ealonat n mai multe faze: 1 - formarea proteinelor timpurii cu rol n: a - "astuparea" gurilor produse la intrare n peretele celular; b - blocheaz transcrierea informaiei de ctre ARN m al celulei gazd, rolul fiind preluat de ARN m viral; c - degradarea ADN gazd, de unele proteine, fiind frmiat pn la nucleotide n segmente de ADN d.h. mici de 1/100 din cromozomul originar, care sunt degradate n continuare la nucleotide formndu-se un stoc din care cel puin 1/3 sunt utilizate la formarea fagilor progeni. 2. replicarea genomului viral, care este semiconservativ i nu prin efectuarea de copii identice, repetate ale genomului originar; 3. formarea proteinelor tardive. Sinteza acestora devine predominant cnd ADN viral a ajuns la rata maxim de replicare. Proteinele tardive sunt grupate n 3 categorii: a - proteine structurale ale virusului; b - proteine active n procesul de morfogenez; c - enzime necesare lizei celulei bacteriene. 4. ansamblarea i morfogeneza virusului care, este dirijat de 50 de gene din cele 200. Fagul este constituit din 3 poriuni distincte care se formeaz separat pe trei linii principale care duc independent la formarea capului, a cozii i a fibrelor cozii. n treptele urmtoare compuii finii se combin pentru a forma particula viral. ncorporarea genomului are loc naintea unirii celor trei componente, formarea capului fagic nefiind definitiv, ncorporarea activat de unele proteine care asigur "aspirarea" ADN n precap. ADN se ruleaz ca o bobin a crei ax este perpendicular fa de cel al cozii. Bobinarea are loc de la exterior la interior, ultima spir fiind prima care iese n momentul infeciei virale. Concomitent cu mpachetarea ADN, capul fagului crete n volum i devine matur. Urmeaz unirea celor trei componente, cap, coad, fibrele cozii, desvrindu-se fagul matur. Liza bacterian i eliberarea fagului Liza bacterian se datorete aciunii unei enzime (endolizina) a crei sintez este indus de prezena fagului n celula bacterian. La un moment dat, cnd coninutul n endolizin este maxim, metabolismul celular nceteaz brusc i are loc o distrugere masiv a peretelui celular, cu un caracter exploziv, fagii fiind expulzai n exterior. Fagii filamentoi Fagii filamentoi care infecteaz E. coli, au forma unor bastonae flexibile cu de 6 nm i o lungime de 1000-2000 nm.
11

Structura este aceea a unui cilindru proteic gol deschis la capete (capsid) n interior aflndu-se genomul fagic format din ADN m.c., o molecul circular. Fagii filamentoi infecteaz numai bacteriile cu caracter mascul, ca i fagii cu ARN, adsorbia fcndu-se pe receptori speciali situai la extremitatea liber a pililor de sex. Fagii maturi sunt eliminai prin intermediul unor pori care se formeaz n membrana citoplasmatic, bacteria nefiind lizat, aceasta continu s se divid un timp, ulterior coninutul celular trece la exterior prin porii deschii de virioni. Cianofagii Au form asemntoare cu bacteriofagii T-impar. Genomul este reprezentat de ADN d.c. de 13,2 m. Micovirusurile Sunt virusuri care atac fungii, fiind cunoscute i sub denumirea de micofagi. Structura micovirusurilor. Cel mai bine studiat este virusul care infecteaz specia Penicillium chrysogenum, care se prezint sub forma unor mici particule poliedrice cu de 33-41 nm. Genomul este reprezentat de o molecul de ARN d.c. La fungi virusurile sunt n general latente, celulele se dezvolt mai lent, dar nu lizeaz constant. Micovirusurile au fost evideniate i n sporii fungilor. Transmiterea micovirusurilor n general se face n urma plasmogamiei (heterocarioza). Rolul bacteriofagilor n sol Coloniile de bacterii cultivate pe medii artificiale n zonele unde sunt atacate de bacteriofagi apar ca nite zone clare "plaje" de liz, iar n suspensii bacteriene atacul fagilor produce limpezirea mediului datorit lizei bacteriilor parazitate care dispar. Din astfel de suspensii de bacterii lizate se pot obine prin ultra filtrare suspensii de bacteriofagi. O proprietate deosebit a unor tulpini de fagi, este capacitatea de a tri n unele celule bacteriene fr a provoca moartea acestora, dar elibernd n afar noi particule virale. Astfel de fagi sunt denumii "bacteriofagi temperai", iar celulele bacteriene ce-l gzduiesc se numesc "celule lizogene". Importana bacteriofagilor din sol const n faptul c influeneaz ecologia bacteriilor gazd, distrugnd speciile de bacterii "lizosensibile", modificnd uneori echilibrul microbian. Rspndirea virusurilor din sol este influenat de capacitatea humusului i argilelor de a absorbi i imobiliza particulele de virus. Se tie n acest sens c solurile argiloase i bogate n humus adsorb mai mult particulele de virus de ct cele nisipoase. De aici rezult i posibilitatea rspndirii difereniate a unor boli virotice ale plantelor i ai bacteriofagilor n natur. Importana agricol a bacteriofagilor este puin cunoscut nc. Existena bacteriofagilor a fost demonstrat nc din anul 1927 de ctre A. Grigne, fiind dovedit n solele cultivate cu plante leguminoase. Densitatea lor maxim este n zona rizosferic i n nodozitile mature sau la nceputul mbtrnirii. Rspndirea bacteriofagilor nu este influenat prea mult de condiiile din sol. Astfel au fost identificai n soluri cu pH ntre 5,2-9,3, ct i n soluri care au suferit ngheul iernii.

2.3. BACTERIILE Sunt organisme unicelulare cu o structur complex care au un metobolism propriu datorit unui aparat enzimatic complex ce le asigur desfurarea proceselor vitale. n linii generale bacteriile au o serie de caractere generale ce pot fi sistematizate astfel:
12

 Nucleul celulei bacteriene este de tip procariot, adic lipsit de membran, iar afinitile tinctoriale nu sunt deosebite fa de citoplasm. Bacteriile au un polimorfism accentuat, putnd mbrca mai multe aspecte morfologice ca forme sferice, cilindrice, spiralate sau helicoidale, filamentoase i ptrate. Micarea la speciile mobile este asigurat de organite speciale, numite cili sau flageli. Bacteriile sunt lipsite de clorofil, dar unele grupe au pigmeni sintetizani i ca atare pot folosi energia luminoas. Altele i procur energia necesar sintezelor celulare i altor manifestri vitale, dezintegrnd diverse substane chimice prin intermediul proceselor fermentative, fiind din acest punct de vedere, organisme chimiosintetizante (Chemotrofe). Se nmulesc prin aciziparitate, dar se cunosc la unele grupe i forme de conjugare de tip parasexuat, cu formare de celule sexuate de sens diferit; forma de sciziparitate rmne ns forma esenial de reproducere. Bacteriile pot forma spori, ce constituie un mijloc de conservare a speciei, la unele grupe. Morfologia bacteriilor Din punct de vedere al formei exterioare se disting cinci tipuri de baz, dup cum urmeaz: - bacterii sferice denumite coci, cu genul principal Coccus; - bacterii cilindrice sub form de bastona drept sau uor curbat din care face parte genul Bacillus; - bacterii spiralate sau elicoidale, n care se cuprind trei categorii de germeni i anume: vibrionii, spirilii i spirocheta; - bacterii filamentoase, cu celule alungite n care se cuprind actinomicetele; - bacterii ptrate, sunt foarte rare, ntlnite n apele saline. Dup forma celulelor i modul de grupare n urma procesului de diviziune, bacteriile se mpart n urmtoarele tipuri i subtipuri morfologice: Bacteriile sferice sau cocii, au form sferic, ovoidal, sau elipsoidal, cu cele dou diametre aproximativ egale. n funcie de poziia celulelor fiice dup diviziune, cocii prezint urmtoarele moduri de grupare: Cocul simplu, izolat, la care celulele rmn independente dup diviziune (ex. Micrococcus ureae). Diplococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, celulele rezultate rmnnd grupate cte dou (ex. Diplococcus pneumoniae). Streptococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, iar celulele rezultate formeaz lanuri de lungimi variabile (ex. Streptococcus lactis). Tetracocul, la care planurile de diviziune sunt perpendiculare unele fa de altele, iar celulele rezultate sunt dispuse cte 4 la un loc (ex. genul Gafkia). Sarcina, la care planurile de diviziune sunt orientate dup cele trei direcii ale spaiului i reciproc perpendiculare unul pe altul, rezultnd o grupare de celule sub form de cub (ex. Sporosarcina ureae). Stafilococul, la care planurile succesive de diviziune sunt dispuse n mai multe direcii, iar celulele rezultate se grupeaz ca un ciorchine (ex. Staphyllococcus aureus. Bacteriile cilindrice, cunoscute sub denumirea de bacili au form de bastonae, cu raportul ntre cele dou axe foarte diferit, de la forme cu aspect filamentoase, pn la unele cu aspect aproape sferic. Unele dintre bacteriile cilindrice au proprietatea de a forma spori. Bacteriile spiralate, sunt elicoidale cuprind trei subtipuri morfologice: Vibrionul, n form curbat, cu un singur tur de spir. Spirilul, n form de spiral cu mai multe ture de spir, rigide ca un baston.
13

Spirocheta, sub form de spiral cu mai multe ture de spir dar flexibile, care se poate strnge i relaxa. Bacteriile filamentoase, au ca prototip actinomicetele, microorganisme cu asemnri morfologice cu fungii, cu particularitatea de a forma hife, cu tendin de ramificare, de unde i aspectul lor de miceliu. n unele cazuri, spre exemplu la Sphaerotilus nutans aspectul filamentos este determinat de aezarea celulelor individuale n lanuri de celule reunite printr-o teac delicat, cu perete neted. Bacteriile ptrate, evideniate n apa hipersalin din peninsula Sinai, au forma unor ptrate cu latura de 1,5-11 m i o grosime de 0,1 m. Formeaz placarde de 8-16 celule ptrate rezultate n urma diviziunii.

Structura celulei bacteriene Celula bacterian este o entitate morfologic i funcional echivalent cu celulele organismelor superioare, cu o structur complex format din urmtoarele componente, de la exterior ctre interior, lund ca reper peretele celular: Structur extraparietal format din: capsul; cilii sau flagelii; aparatul fimbrial i pilii de sex. Peretele celular. Structura intraparietal compus din: membrana citoplasmatic, mezozomii, citoplasm, aparatul nuclear, incluziunile, ribozomii, vacuolele, sporul bacterian. Capsula este o secreie care apare la unele bacterii, ce se fixeaz la exteriorul celulei i constituie un nveli n jurul acesteia. In funcie de raportul fa de celula bacterian capsula este de mai multe feluri: microcapsula, cu grosimea fin de 0,2 m, ce se pune n eviden prin metode imunologice; capsula propriu-zis, cu grosimea cuprins ntre 0,2-2 m; stratul mucos caracterizat prin prezena unei mase amorfe neorganizate n jurul celulei; zooglea ce se prezint ca un strat mucos neorganizat care nglobeaz mai multe celule microbiene. Compoziia chimic a capsulei difer n funcie de specia bacterian la care apare i de condiiile de mediu, fiind format din 98 % ap, ali constituieni ca polizaharidele i polipeptide. Funciile biologice ale capsulei sunt urmtoarele: - funcia de protecie mpotriva fagocitelor la bacteriile patogene; - funcia de virulen; - funcia de protecie mpotriva desicaiei. Cilii sau flagelii Cilii sau flagelii sunt formaiuni filamentoase, cilindrice, lungi, subiri, situate la suprafaa celulei bacteriene i reprezint organite de micare ale acesteia. Prezena cililor este caracteristic numai anumitor specii de bacterii, mobile. Numrul cililor este variabil, funcie de specie, de la unu pn la o sut. n funcie de inseria pe corpul bacteriei cilii pot avea urmtoarele poziii: - monotrih, un cil la un singur pol; - amfitrich, cu cte un cil la ambii poli ai celulei; - peritrich, cu cili dispui n jurul bacteriei; - lophotrich, cu cili dispui la un pol sub form de mnunchi.
14

Cilii sunt organite lungi de 16-18 m i subiri, cu diametrul de 0,01-0,02 m pe toat lungimea, de obicei ondulai. Implantarea lor se face n citoplasm printr-un corp bazal situat ntre peretele celular i membrana citoplasmatic. La bacteriile Gram-pozitive corpusculul bazal este format din dou discuri (inele), angrenate mpreun sub forma butonilor de manet. Lungimea cililor depete pe cea a celulei, n mod excepional pn la de 10 ori. Cu ajutorul cililor, bacteriile se pot deplasa linear sau se pot rostogoli. Viteza de naintare este mare, parcurgnd ntr-o secund o distan de la 10 pn la 40 ori mai mare decat diametrul longitudinal al bacteriei. Aparatul fimbrial. Fimbriile sunt formaiuni filamentoase prezente pe suprafaa bacteriilor imobile sau mobile, n numr mare, de ordinul sutelor (100-400). Ele au o poziie radial i sunt mai scurte ca cilii; nu servesc la micare ci au rol de fixare pe diferite substrate solide sau pe hematii, pe care le aglutineaz. Fimbriile sunt de natur intracelular deoarece dup ndeprtarea peretelui celular, rmn fixate pe protoplati. Pilii sunt, dup Ottow, apendice filamentoase care au un canal prin care se face transferul cromozomului bacterian de la celula mascul (F+) la celula femel (F-), fiind denumite i "pili de sex". Peretele celular Este invizibil sau foarte greu vizibil la microscopul fotonic i reprezint aproximativ 20 % din greutatea uscat a celulei i 25 % din volumul ei. Peretele celular are rol: - de susinere mecanic; - asigur individualitatea morfologic; - ofer protecie fa de ocul osmotic; - particip la procesul de diviziune celular; - conine receptori de virus; - mediaz schimbul de substane cu mediu. Peretele celular este absent la micoplasmatale. Coloraia Gram permite clasificarea bacteriilor dup peretele celular n dou mari categorii: Gram+ (violet) i Gram- (rou). ntre cele dou categorii exist diferene mari de compoziie chimic i anume: 1. Peptidoglicanul (mureina) este prezent la majoritatea bacteriilor, fiind de mai multe tipuri moleculare: 80-90 % laG+; 10-20 % la G-. 2. Acizii teichonici sunt foarte abundeni la bacteriile Gram+. 3. Acizii lipoteichonici sunt ntlnii la bacteriile Gram+ asociai la membrana citoplasmatic dar se gsesc i n peretele celular. 4. Acizii teichuronici sunt caracteristici bacteriilor Gram+. 5. Lipopoliozidele caracterizeaz bacteriile Gram- i sunt responsabile de primul control al permeabilitii celulare. Bacteriile Gram- sunt n general mai rezistente la inhibitori (peniciline, colorani) dect cele Gram+. 6. Acizii grai se gsesc sub forma unor lanuri lungi la nivelul peretelui celular la actinomicete i la bacteriile coryneforme. Membrana citoplasmatic, acoper citoplasma bacteriilor i o separ de faa intern a peretelui celular. Are o grosime de 7,5 nm i este constituit din dou straturi fosfolipidice. Analiza chimic a membranei evideniaz trei tipuri de molecule: lipide, proteine i glucide. Proteinele reprezint peste 50 % din total. Membrana citoplasmatic este o barier osmotic de permeabilitate care regleaz ptrunderea n celul i eliminarea selectiv a diferitelor substane. Ea menine n celul o concentraie ridicat de macromolecule, molecule mici i chiar ioni mpedicndu-le difuzarea n mediu dei concentraia extracelular este mai mic. Conine
15

permeazele care asigur transportul activ n interiorul celulei a unor substane organice polare din mediu. Membrana citoplasmatic are rol n creterea i diviziunea celular; la nivelul su ia natere semnalul care declaneaz iniierea replicrii cromozomului bacterian. n sfrit, membrana citoplasmatic este suportul enzimelor care particip la sinteza ATP (la eucariote aceste enzime se afl n mitocondrii). Mezozomii sunt formaiuni care deriv din membrana citoplasmatic sub forma unor invaginri, legate de ADN celular. Aceste organite celulare joac un rol important n diviziunea nucleului i n formarea septului care separ cele dou celule fiice. La bacteriile purpurii mezozomii conin pigmeni clorofilieni. La bacteriile fixatoare de N2, nitrogenaza care este inhibat de O2, este protejat de mezozomi. La bacteriile nitrificatoare numeroasele invaginri ale membranei citoplasmatice mresc suprafaa de schimb enzimatic. Citoplasma, este un sistem coloidal constituit din sruri minerale, compui solubili de natur lipoproteic, nucleoproteine, lipide i ap. Are un pH cuprins ntre 7-7,2. Citoplasma poate fi caracterizat ca un complex de stri fizice ntr-o continu transformare, n funcie de starea fiziologic i vrsta celulei. Ribozomii sunt formaiuni citoplasmatice, sferice. O celul bacterian conine n medie 18.000 ribozomi de tip 70 S, cu un diametru de 10-30 nm. Fiecare ribozom se disociaz n dou subuniti, 30 S i 50 S. Fiecare subunitate 50 S este legat de o subunitate 30 S prin intermediul legturilor ARN - protein i protein-protein. Ribozomii 70 S joac un rol precis n cursul traducerii lanurilor de ARN n proteine. Materialul nuclear ("nucleul") este constituit dintr-un cromozom format de o bucl de ADN aflat n suspensie, n citoplasm. Lungimea acestuia este mare, ajungnd la Escherichia coli la 1 mm, ceea ce implic o rsucire foarte accentuat. Plasmidele sunt considerate material genetic extracromozomial, fiind independente de nucleu. Plasmidele nu sunt indispensabile pentru viaa celular dar pot aduce un avantaj selectiv. Ele poart informaia pentru degradarea unor substraturi i pentru rezistena la antibiotice. Replicarea plasmidelor se produce n dou momente diferite: atunci cnd celula se divide i atunci cnd se produce procesul de conjugare. Bacteriile pot conine mai multe plasmide. Escherichia coli, de exemplu, posed pe cromozom 1 sau 2 plasmide conjugate i 10-15 plasmide neconjugate. Vacuolele sunt formaiuni sferice care apar n citoplasm n faza de cretere activ a celulelor bacteriene. n interiorul lor se gsete ap sau gaz. Cele cu ap au rol n meninerea presiunii osmotice n raport cu mediul extern, iar cele cu gaz au rol de flotaie. Incluziunile sunt formaiuni inerte care apar n citoplasm la sfritul periodei exponeniale de cretere a celulei. Ele pot fi formate din glicogen, amidon, carbonat de calciu i fosfat anorganic. Sporul bacterian este o formaiune care deriv din celula vegetativ a bacteriilor, n anumite condiii de via. Sporul este o form de conservare a speciei la condiiile nefavorabile de mediu i concentreaz ntr-un volum redus toate componentele eseniale ale celulei din care provine. Form sporului poate fi sferic sau oval. Dispunere sporului n celula vegetativ poate fi central, subterminal, terminal sau lateral. Dup modul de formare, structur i rezisten la factorii de mediu, sporul bacterian poate fi de mai multe tipuri:
16

1. Endosporul (sporul propriu-zis) apare n interiorul unei celule vegetative numit "sporangiu" i prezint o mare rezisten la condiiile nefavorabile de mediu, n special la variaiile temperaturii. O celul vegetativ poate forma un singur endospor. Bacteriile susceptibile de a produce endospori aparin genurilor: Bacillus, Clostridium, Desulfatomaculum, Sporosarcina, Sporolactobacillus, Thermoactinomyces. 2. Artrosporii se formeaz prin fragmentarea unor celule vegetative. Au o form neregulat i o rezisten intermediar ntre cea a endosporului i celula vegetativ. Artrosporii sunt caracteristici bacteriilor actinomicete. 3. Chitii sunt stadii de repaus sau supravieuire, formate ca rspuns la modificrile de mediu i provin din transformarea unei celule vegetative, prin ngroarea pereilor i acumularea de material de rezerv. Au o rezisten mai mic dect endosporul i nu sunt termorezisteni. 4. Gonidia apare endocelular prin condensarea i fragmentarea protoplasmei unei celule vegetative numit gonidangiu. n interiorul unei celule apar de regul mai multe gonidii care sunt eliberate n mediu prin ruperea peretelui gonidangiului. Principala lor funcie privete capacitatea de reproducere, neavnd rezistena caracteristic sporului. Compoziia chimic a bacteriilor Compoziia chimic a celulei bacteriene nu difer prea mult de cea a celorlalte organisme vii. Ea conine cca. 600 molecule diferite, organice i anorganice. Apa este mediul biogen esenial i reprezint 78 % din greutatea medie a celulei bacteriene. Se gsete sub form de ap liber sau legat de diferite componente celulare. Apa ndeplinete numeroase funcii: - este solvent al compuilor hidrosolubili; - este mediu de dispersie pentru constituienii chimici insolubili n ap; - condiioneaz activitatea enzimelor; - asigur transportul elementelor de metabolism. Srurile minerale reprezint 2-20 % din greutatea uscat a bacteriilor i sunt reprezentate de principalele elemente. Cel mai bine este reprezentat fosforul ( 45 %). Substanele minerale au rol n: - reglarea presiunii osmotice; - activeaz unele sisteme enzimatice; - regleaz pH-ul; - influeneaz permeabilitatea peretelui celular; - intr n compoziia unor constituieni celulari. Acizii nucleici. ADN se gsete sub forma unei singure molecule circulare, dublu helicale. Reprezint 1/5 din coninutul celular. ARN reprezint cca 17 % din greutatea uscat a celulei bacteriene i se gsete localizat n citoplasm sub trei forme: ARN m, ARN t, ARN r. Proteinele reprezint cca 60 % din greutatea uscat a bacteriilor i se gsesc sub form de holoproteine i heteroproteine. Proteinele au rol structural iar unele ndeplinesc funcia de enzime. Glucidele reprezint 4-25 % din greutatea uscat a celulei bacteriene i se gsesc sub form de glucide simple (mono i dizaharide) i polizaharide. Glucidele simple particip la metabolismul bacterian iar polizaharidele au rol structural, energetic sau de material de rezerv. Lipidele se gsesc n proporie de 1-20 %, din greutatea uscat a bacteriilor, iar aceast variaie este specific depinznd de vrsta celulei i compoziia mediului de cultur. Lipidele se gsesc n membrana citoplasmatic i sub form de granule intracitoplasmatice. Pigmenii sunt substane colorate care se gsesc n citoplasma bacteriilor cromogene. Dup localizarea pigmenilor fa de celul, bacteriile se mpart n dou categorii:
17

- bacterii cromopare, la care pigmentul este eliminat n mediul pe care l coloreaz (Ex. Pseudomonas fluorescens); - bacterii cromofore, la care pigmentul rmne localizat n celula bacterian (Ex. Staphylococcus aureus). Pigmenii pot fi de mai multe tipuri, dup compoziia chimic: bacterioclorofite, pigmeni carotenoizi (roii, galbeni, portocalii), antocianici, pigmeni melanici (brun sau negru). Pigmenii pot avea rol n fotosintez, rol antibiotic, de protecie mpotriva radiaiilor luminoase i ultraviolete, rol de vitamine. Enzimele bacteriene constituie o grup de proteine cu importan biologic deosebit, de catalizatori ai celulei vii, fiind solubile n ap, termolabile, criolabile i sensibile la aciunea radiaiei ultraviolete. Dup substratul asupra cruia acioneaz enzimele se clasific n: - exoenzime care sunt eliberate n mediul nconjurtor acionnd asupra unui substrat din afara celulei; ele sunt angrenate n procesele de catabolism; - endoenzime sunt secretate intracelular i particip la reaciile de sintez (anabolism). Dup viteza de aciune enzimele pot fi de dou categorii: - enzime constitutive, care sunt preexistente i care acioneaz rapid asupra unui substrat. Sunt sintetizate n tot cursul vieii bacteriei; - enzime adaptive, care acioneaz lent, deoarece celula trebuie s se adapteze la substrat, apariia enzimelor fiind legat de mediu.

Creterea i multiplicarea bacteriilor Ciclul de dezvoltare al bacteriilor se compune din dou faze: creterea i multiplicare. Prin cretere se nelege procesul de neoformare, n condiii favorabile, n protoplasma bacteriei, a substanei de constituie. Aceast cretere se continu pn la atingerea unei limite, cnd survine diviziunea celular. Prin multiplicare se nelege sporirea numrului de indivizi, care se face prin diviziune celular. Diviziunea celular poate fi: - izomorf, cnd celulele fiice rezultate sunt egale; - heteromorfe, cnd celulele fiice rezultate nu sunt egale; n afara diviziunii celulare, multiplicare se mai poate realiza prin: - fragmentarea coninutului celular n mai multe elemente; - prin nmugurire. Evoluia unei culturi bacteriene n urma studierii multiplicrii bacteriilor pe medii artificiale, s-a constatat c acest proces se realizeaz n mai multe faze succesive: 1. Faza de lag sau (cretere zero), este cuprins ntre momentul nsmnrii bacteriilor i momentul nceperii multiplicrii, cnd numrul bacteriilor din inocul nu crete, iar cultura nu este vizibil macroscopic. Aceast faz dureaz aproximativ 2 ore i este o etap de adaptare la noile condiii de cultur. 2. Faza de accelerare a ritmului de cretere, care corespunde nceperii multiplicrii, a crei vitez crete progresiv i n care celulele sunt tinere.
18

3. Faza exponenial sau de multiplicare logaritmic, n care procesul se accentueaz n progresie geometric, iar durata unei generaii este minim. Creterea exponenial a unui organism unicelular ce realizeaz o generaie la 20 minute (dup Stanier, 1966) Timpul (minute) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 Numr de diviziuni 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Numr de organisme exprimat n: nr.aritmetic log2 log10 1 0 0,000 2 1 0,301 4 2 0,602 8 3 0,903 16 4 1,204 32 5 1,505 64 6 1,806 128 7 2,107 256 8 2,408 512 9 2,708 1024 10 3,010

4. Faza ncetinirii ritmului de creterem cnd rata multiplicrii ncepe s scad progresiv. 5. Faza staionar, cu ritm de cretere zero, care se caracterizeaz prin faptul c numrul celulelor rmne constant din cauza echilibrului ce se stabilete ntre numrul celulelor ce mor i a celor ce apar n urma unei diviziuni foarte lente. Aceast faz corespunde celulelor mature. 6. Faza iniial de declin, n care numrul celulelor viabile scade progresiv, prin moartea unora dintre ele. Aceast faz corespunde celulelor btrne, cu forme de involuie, cnd apar numeroi spori. 7. Faza intermediar de declin n care numrul celulelor continu s scad, cu un ritm de dispariie constant. 8. Faza final de declin ncheie evoluia unei culturi prin moartea n ritm lent a celulelor pn la sterilizarea complet a culturii. Oprirea multiplicrii bacteriilor i n cele din urm moartea lor se datorete unei serii de factori ca: - lipsa substanelor nutritive eseniale din mediul nutritiv; - competiia pentru O2 sau activitatea slab a substanelor folosite pentru procesele respiratorii; - modificrile fizico-chimice ale mediului de cultur (acumulare de acizi, alcooli etc.); - acumularea produilor de catabolism i a toxinelor n concentraii incompatibile cu viaa celulelor. Nutriia bacteriilor Bacteriile pot folosi pentru manifestrile lor vitale, fie energia radiant luminoas n cazul celor capabile de fotosintez, fie energia eliberat prin reacii chimice oxidative, la ntuneric, n cazul celor chimiotrofe. Dup sursa de energie bacteriile pot fi clasificate astfel: - fototrofe (fotosintetizante) a cror surs primar de energie este lumina; - chemotrofe (chimiosintetizante) a cror surs de energie este obinut la ntuneric n urma reaciei de oxido-reducere a unor substane organice sau anorganice. - paratrofe la care creterea este dependent de energia furnizat de celula parazitat.

19

n funcie de capacitatea de sintez a metaboliilor eseniali, bacteriile prezint urmtoarele tipuri de nutriie: - Autotrofia, corespunde capacitii de sintez a tuturor constituienilor celulari prin mijloace proprii, pornind de la surse simple anorganice de C i N ca: CO2, NH3, NO2-, NO3-. - Heterotrofia, implic incapacitatea de sintez a unor metabolii eseniali i de aceea este nevoie de prezena substanelor organice ca surs de C sau N. Bacteriile care folosesc o surs organic de carbon sunt denumite bacterii de fermentaie iar cele care utilizeaz o surs organic de azot mai sunt denumite bacterii de putrefacie. n concluzie, autotrofele prin sintezele lor genereaz substana organic plecnd de la compui minerali simpli, pe cnd heterotrofele nu-i pot realiza sintezele proprii dect dac dispun de substane organice pe care le descompun pn la produi mai simpli i pe care i utilizeaz n metabolismul lor. Respiraia microorganismelor Dup exigenele fa de oxigenul molecular, microorganismele se grupeaz n patru tipuri respiratorii: 1. Microorganisme strict (obligatoriu) aerobe care folosesc O2 ca acceptor final de H, avnd nevoie de prezena continu a oxigenului atmosferic. 2. Microorganisme strict (obligatoriu) anaerobe, care nu se pot dezvolta n prezena oxigenului molecular, putnd fi cultivate numai pe medii srcite n O 2. Ele nu dispun de enzimele respiratorii din categoria citocromilor. Anaerobioza lor strict const n faptul c, n prezena O 2, care se comport ca acceptor final de H, se formeaz peroxidul de hidrogen, care este toxic i nu ap. 3. Microorganisme facultativ anaerobe, care sunt capabile s-i orienteze metabolismul spre respiraie sau spre fermentaie, n funcie de disponibilitile de O 2 i care au n mod obinuit un metabolism anaerob fr a fi ns sensibile la prezena O2. Unele microorganisme de acest tip respirator (levurile) pot trece de la un metabolism aerob la unul anaerob, n funcie de condiiile de mediu. 4. Microorganismele microaerofile, au nevoie de o concentraie de O2 mai mic dect aceea din aerul atmosferic. Aceast particularitate se datoreaz sensibilitii unora dintre enzimele lor la condiiile de oxidare puternic. Grupe particulare de bacterii Bacteriile glasogene Apa chimic i biologic, pur, poate rmne n stare lichid pn la -40 oC. Supus la temperaturi inferiore lui zero grade, ea nu nghea dect n prezena nucleelor glasogene. Aceste nuclee pot fi reprezentate de particulele minerale care provoac congelarea ncepnd de la -10oC. La temperaturi situate ntre -10oC i zero, gheaa nu se formeaz la plante dect n prezena bacteriilor specifice care, posed n membran, nucleele glasogene. Suele bacteriene n cauz, aparin speciilor Pseudomonas syringae i Erwinia herbicola; ele pot fi saprofite (epifite) sau parazite pe organele plantelor n cauz (frunze, flori, fructe). Procentul de nuclee glasogene este ridicat la Ps. syringae (60 %) i mai mic la E. herbicola (1-5 %). Puterea glasogen a bacteriilor se exprim "in vitro" sau n "in vivo" pe organele plantelor. Pe de alt parte suele inductoare de ghea se multiplic abundent pe organele necrozate prin nghe, ceea ce le ofer un avantaj selectiv considerabil. Cnd o suspensie de bacterii glasogene este pulverizat pe frunze, apar simptomele ngheului cu ofilirea ireversibil, dac ele sunt plasate (inute) 1 or la -5 oC, pe cnd plantele martor netratate cu bacterii rmn imune la toate alterrile vizibile. La via de vie s-a observat o corelaie ridicat ntre numrul de bacterii glasogene prezente pe muguri i pierderile cauzate de frig la temperaturi apropiate de 0 oC. Bacteriile
20

glasogene care provoac nghearea au fost observate la plante foarte diverse (pin, cire, piersic, prun, cais, forsiia, fasole, porumb, tomate, cpun). Suele bacteriene active, datorit capacitii de a induce formarea gheii, prezint o gen specific care codeaz o protein foarte particular n membrana lor. Proteina este format din 1200 de aminocizi cu o structur repetitiv foarte accentuat. Compus din 1200 de aminoacizi, acest polipeptid comport repetiii n mai mult de 100 exemplare. Reducerea numrului de repetiii n lanul polipeptidic reduce activitatea glasogen. Alte proteine care au o structur repetitiv sunt prezente de asemenea, n sngele a numeroase specii de animale din regiunile polare, unde ele au un efect antigel. Bacteriile glasogene joac un rol important n practic deoarece provoac nghearea n primvar a numeroase plante, n special pomii fructiferi i via de vie. Bineneles c se ncearc stoparea aciunii acestor bacterii pe diferite ci (tratamente chimice cu antibiotice, pulverizri cu ap, fumigaii, folosirea bacteriofagilor, a microorganismelor antagoniste, aplicarea de polimeri care limiteaz schimburile termice cu exteriorul etc.). n ultimii ani s-a obinut prin inginerie genetic sue neglasogene de Ps. syringae, care aplicate pe plante inhib dezvoltarea speciilor glasogene n sens pozitiv specia Ps. syringae glasogen este utilizat pentru obinerea zpezii artificiale (Snow max). Micoplasmele Micoplasmele reprezint un grup particular de bacterii lipsite de perete celular, la care celula este delimitat de o membran lipoproteic, cu o compoziie chimic asemntoare celulei animale. Sunt considerate cele mai mici organisme capabile de cretere autonom pe medii acelulare. Micoplasmele sunt grupate n clasa Mollicutes (moli = moale, pliabil i cute = piele), cu dou genuri: - Mycoplasma, a crei cretere este dependent de prezena sterolilor n mediu. - Acholeplasma, care se dezvolt independent de steroli. Morfologie. Datorit lipsei peretelui celular, micoplasmele au o plasticitate natural foarte mare, fiind descrise mai multe tipuri morfologice ca: sferice-cocoidale, diplococi, filamentoase. Cu toate acestea, cultivate n condiii de mediu bine definite, fiecare specie are o morfologie caracteristic, nct polimorfismul acestora nu trebuie confundat cu pleomorfismul care implic obligatoriu existena a mai mult de o form celular distinct, n cursul vieii unui organism. Micoplasmele sunt Gram-negative. Dimensiunile lor variaz de la 125-250 nm la formele sferice, pn la 150 m la cele filamentoase. Lipsa peretelui celular este rspunztoare de instabilitatea morfologic i de alte proprieti cum ar fi: - sensibilitatea osmotic; - rezistena la antibioticele care acioneaz asupra sintezei peretelui celular (penicilina); - tendina de ptrundere i cretere n profunzimea mediilor; - capacitatea de a traversa filtrele bacteriene. Multiplicarea micoplasmelor se poate realiza la aceeai specie prin diviziune, nmugurire i fragmentarea filamentelor. n condiii naturale micoplasmele sunt parazite, instalarea lor n diferite organisme fiind uurat de natura chimic a membranei similar membranelor gazdei. Micoplasmele produc peste 40 de boli la plante dar i la animale i om.
21

Actinomicetele Actinomicetele constituie un grup mare de bacterii filamentoase, Gram pozitive, caracterizate printr-o mare varietate morfologic. Mult vreme actinomicetele au fost considerate ca fcnd parte din categoria ciupercilor, deoarece au particularitatea de a forma hife (filmente) ramificate i spori de diseminare. Morfologie. Majoritatea actinomicetelor au o form alungit filamentoas, cu tendin de ramificare, de unde i aspectul lor de miceliu. Filamentele miceliene au un cuprins ntre 0,5-2 m i prezint o structur de tip procariot, corespunznd unor celule foarte lungi, multinucleate, fr perei transversali. Pe medii de cultur solide formeaz colonii dense cu aspect cartilaginos sau cretos, aderente la substrat. Pe aceste colonii se formeaz sporofori cu spori. Sporoforii sunt diferii ca form: spiralai, drepi sau curbai. Sporii sunt de asemenea variai ca form, fiind sferici ovali, alungii sau cilindrici. Suprafaa sporilor este neted sau prezint diverse ornamentaii. Actinomicetele produc pigmeni care dau miceliului aerian culori diferite (galben, portocaliu, rou, violet pn la albastru sau cenuiu). La unele specii pigmenii difuzeaz n mediu. Metabolism. O particularitate a fiziologiei actinomicetelor este modul lor de nutriie omnivor, care le permite s se dezvolte pe substraturi organice dintre cele mai diferite. n condiii naturale, pe resturi vegetale actinomicetele ncep s se dezvolte numai dup ce bacteriile i ciupercile au ncetat s se mai multiplice, atunci cnd toate substanele uor asimilabile din resturile vegetale au fost descompuse de predecesorii lor. Capacitatea lor de a degrada substanele organice dintre cele mai complexe le confer un rol important n natur, n special, n descompunerea substanelor organice din nmoluri i sol. n sol, acestea particip la degradarea biologic i mineralizarea substanelor organice. Importana lor practic este legat n mod deosebit prin intermediul speciilor genului Streptomyces, de producere de substane antibiotice (pn n prezent peste 500 de antibiotice distincte). Aproximativ 50 % din tulpinile izolate n natur produc antibiotice. Unele actinomicete produc boli la plante, animale i om. Rolul bacteriilor n natur Bacteriile care triesc n natur joac un rol important n mineralizarea compuilor organici, contribuind astfel la realizarea circuitului elementelor n natur (azotul, fosforul, potasiul, calciul, magneziul i microelementele). Bacteriile contribuie i la formarea substanelor humice, mbogind solul n materie organic. Prin unele substane bacteriene de natur mucilaginoas cum sunt polizaharidele capsulare, acestea contribuie la agregarea particulelor de sol, deci la mbuntirea structurii solului. Unele specii bacteriene au capacitatea de a produce antibiotice, care pot limita dezvoltarea unor grupe de microorganisme din sol, deci menin sau schimb echilibru biologic din sol. Unele grupe de bacterii triesc n simbioz cu plantele superioare producnd nodoziti i realizeaz fixarea azotului atmosferic; altele activeaz n zona rdcinii plantelor contribuind la dezvoltarea acestora i la sporirea activitii rizosferice. n medii specifice unele grupe de bacterii produc procese fermentative utile ca, fermentaia amidonului, a pectinelor, fermentaia lactic, butiric, propionic etc. Alte grupe de bacterii au capacitatea de a secreta enzime extracelulare cu care lizeaz unele bacterii sau ciuperci.
22

2.4. CYANOBACTERIILE (ALGELE ALBASTRE-VERZI) Sunt organisme procariote care folosesc apa ca donator de electroni i n prezena luminii produc oxigen. Mecanismul lor fotosintetic este identic cu cel al algelor eucariote. Celulele prezint un perete rigid, multistratificat, asemntor cu cel de la bacteriile Gram-negative. Peretele celular poate fi acoperit la exterior cu o teac gelatinoas sau fibroas. Cele mai multe Cyanobacterii sunt mobile ntr-un anumit stadiu de dezvoltare, avnd o mobilitate de tip glisant, asemnndu-se cu bacteriile filamentoase glisante de tip Beggiatoa. Pigmenii fotosintetizani sunt reprezentai numai de clorofila "a" i deficobiliproteine (alloficocyanina, ficocyanina i uneori ficoeritrina). n citoplasm se observ vacuole cu gaze ce au rol de flotaie. Unele cyanobacterii sunt unicelulare, iar altele filamentoase, formnd lanuri mai lungi. Cyanobacteriile sunt strict fotoautotrofe i nu se pot dezvolta numai n prezena substanelor organice, nu au nevoie de vitamine ca factori de cretere, iar ca surs de azot folosesc azotaii, srurile de amoniu, iar unele specii folosesc azotul molecular, fiind fixatoare de azot (Nostoc i Anabaena). Sunt mult rspndite n sol, n apele dulci i ape srate din mri i oceane. Sunt mai tolerante fa de condiiile extreme nefavorabile dect algele eucariote. Ele constituie primele organisme ce populeaz rocile dezagregate, participnd la procesul de solificare i favorizeaz dezvoltarea n masa lor mucilaginoas a unor bacterii fixatoare de azot ntre care Azotobacter i Clostridium. Dintre cyanobacterii mai rspndite n natur sunt genurile Gloeocapsa i Chroococcus care sunt organisme unicelulare. Alte grupe sunt filamentoase ca, Oscillatoria i Lyngbia. Genurile Nostoc i Anabaena ce au capacitate de a fixa azotul molecular triesc n solurile umede din orezrii, unde asigur N2 necesar plantelor. 2.5. PROTOZOARELE Sunt organisme unicelulare la care se cunoate un anumit ciclu evolutiv i care reprezint vieuitoare complete i independente, fiind cuprinse n ncrengtura Protozoa, regn. Protista.. Celula unui protozor se compune din protoplasm, n care se gsesc incluziunile granulare, condriozomii, precum i diferite substane de rezerv. De asemenea, se gsesc unul sau mai muli nuclei cu forme i structuri diferite. Ca substane de rezerv n celulele de protozoare s-au descoperit; amidonul, glicogenul, leucozina, grsimi i substane proteice de rezerv cum este volutina. nmulirea protozoarelor se face pe cale asexuat prin mprirea celulei n dou pri aproape egale, n urma crui proces apar dou celule fiice. nmulirea sexuat are loc dup mai multe diviziuni simple, prin conjugare ntre gamei. n urma contopirii gameilor iau natere zigoii care n condiii neprielnice se transform n zigochiti sau chiti de repaus care au o mare rezisten la temperaturi nefavorabile, concentraii mari de sruri solubile, uscciune sau acumulare n mediul ambiant a unor factori nocivi. La revenirea condiiilor favorabile, din zigochiti apar indivizi obinuii. n sol sunt rspndite protozoare din urmtoarele clase: Rhizopoda, Sarcodina, Mastigophora (Flagelata) i Infusoria (Cilliata).
23

Din clasa Sarcodina cele mai rspndite genuri sunt: Negleria, Amoeba. Clasa Mastigophora (Flagelata) are n sol forme autotrofe ct i heterotrofe. Cele autotrofe posed n celule cromatofori. Ca reprezentani avem genurile Bodo, Euglena. Clasa Infusoria (Ciliata) cuprinde protozoare care se mic cu ajutorul a numeroi cili care sunt excrescene protoplasmatice. Din acest grup ca reprezentani citm: Paramoecium, Balantiophorus i Colpoda. Rolul protozoarelor n sol este secundar fa de cel al bacteriilor i ciupercilor. Ele sunt n majoritate prdtori ce se hrnesc cu bacterii i se gsesc n sol ntre 10.000 pn la cteva sute de exemplare la grmul de sol. Ca microprdtori protozoarele contribuie la diminuarea numrului de bacterii n sol. n acelai timp s-a constatat c prin moartea lor protozoarele pun la dispoziia microorganismelor surse nutritive care stimuleaz creterea numrului acestora n sol. n unele experiene cu Azotobacter n culturile la care s-au adugat protozoare (Colpidium colpoda), s-a fixat mai mult azot dect la culturile martor. Se trage de aici concluzia c protozoarele fagocitnd bacteriile, formeaz colonia s produc mai multe celule tinere care sunt mai active n fixarea azotului molecular. Pe de alt parte se presupune c protozoarele ar elimina n mediu de cultur unele substane stimulatoare pentru dezvoltarea bacteriilor. Dup ali autori n afar de aciunea indirect asupra biologiei solului, protozoarele ar contribui i la formarea humusului.

2.6. CIUPERCILE Ciupercile reprezint un grup numeros la care se cunosc cca. 100.000 de specii, fiind cuprinse n regnul Fungi. De asemeni, ele constituie o component important a microflorei solului la care s-au identificat peste 170 de genuri i peste 800 de specii. Frecvena lor n sol variaz ntre 8.000 i 1.000.000 de indivizi pe gramul de sol. Ciupercile au un rol important n natur participnd n descompunerea substanelor organice; formeaz asociaii sub form de micoriz cu rdcinile plantelor; produc substane antibiotice participnd n acest fel la antagonismul microbian i la reglarea echilibrului biologic n sol. Morfologia ciupercilor Aparatul vegetativ este un tal cu o constituie variat iar, complexitatea acestuia crete pe msura evoluiei filogenetice. Astfel, la ciupercile din subncrengtura Mastigomycotina aparatul vegetativ este o celul nud - gimnoplast sau o asociere de gimnoplati ce formeaz un plasmodiu. La ciupercile din Zigomycotina aparatul vegetativ cu aspect filiform este un sifonoplast, neseptat, format din hife simple sau ramificate. La ciupercile din subncrengtura Ascomycotina, Basidiomycotina i Deuteromycotina, aparatul vegetativ poate fi unicelular, sub form de dermatoplast ca la Saccharomycetaceae, iar la majoritatea este un tal filamentos pluricelular, format din hife septate. Talul ciupercilor poate fi filamentos la ciupercile microscopice, sau masiv la unele ciuperci din subncrengtura Basidiomycotina, formnd corpuri de fructificare de dimensiuni vizibile cu ochiul liber (carpofori).

24

Reproducerea ciupercilor Ciupercile se pot reproduce pe mai multe ci i anume: - vegetativ, prin fragmente de tal sau prin nmugurire; - asexuat, prin spori haploidali ce apar pe corpi de fructificare special formai pe miceliu; - sexuat, prin unirea gameilor care dau produi de fecundaie ce poart denumiri diferite ca: zigoi, asce i bazidii. n urma procesului de reducere cromatic se revine la faza asexuat reprezentat prin spori haploidali ce poart denumirea de spori imobili, zoospori, ascospori sau bazidiospori, dup gruparea sistematic din care ciupercile fac parte. Creterea Creterea filamentelor miceliene este strict apical comparativ cu creterea intercalar cunoscut la alte organisme filamentoase. Apexul hifelor este bogat n vezicule ce conin hidrolaze i sintezaze, necesare creterii n lungime. Acumularea apical a veziculelor implic o circulaie acropetal a coninutului citoplasmatic, afluxul de elemente nutritive realizndu-se din regiunile mature n zonele de cretere. Dac veziculele purttoare de enzime de cretere sunt prea numeroase, apar ramificaii laterale la civa m distan de apex. La un moment dat apare o concuren trofic ntre axul principal i ramificaiile principale, secundare sau teriare, dat n principal de coninutul mai sczut al mediului n elemente nutritive. Nutriia. Ciupercile sunt organisme total lipsite de pigmeni asimilatori, prezentnd o nutriie heterotrof. Dup felul substratului folosit ciupercile se mpart n: - saprofite, care se dezvolt numai pe substraturi organice n descompunere; - facultativ parazite, sunt cele care n majoritatea timpului se dezvolt pe substraturi n descompunere, dar n anumite condiii se dezvolt i parazit; - facultativ saprofite, sunt ciupercile care n mod normal se dezvolt ca parazite, dar ntr-o anumit perioad a ciclului ontogenetic au o nutriie saprofit; - parazite, care se dezvolt numai n esuturi vii, neputnd fi cultivate pe medii artificiale. Cerine fa de mediu Temperatura. Majoritatea ciupercilor sunt mezofile cu un optim de cretere situat ntre 25-35oC. Unele specii sunt termotolerante (20-50oC). Temperatura maxim limit de dezvoltare este de 60-62oC. Ciupercile termofile joac un rol important n procesele de degradare a compostului. PH-ul. Majoritatea ciupercilor pot s se dezvolte ntr-o zon de pH cuprins ntre 4,5-8. Optimul fiind situat ntre 5,5-7,5. Exist specii de ciuperci acidofile cu cretere la un pH inferior lui 4,5 sau acidotolerante. Aeraia.Unele specii de ciuperci sunt microaerofile, altele sunt strict anaerobe, dar majoritatea sunt aerobe.

25

microbiologiasolului solului microbiologia

Importana microbiologiei pentru producia agricol Microbiologia solului se ocup cu studiul microorganismelor ce populeaz solul, a activitii lor biochimice i fiziologice. Trebuie de precizat c numai microorganismele care i petrec n sol faza vegetativ de dezvoltare i n condiii favorabile exercit procese care influeneaz particularitile fiziochimice, biologice i agricole ale solului, fac parte din sistemul biologic al solului i snt studiate de microbiologia solului. Alte microorganisme ce produc boli la om, animale sau plante, se consider c sunt accidental ntlnite n sol i ca atare, fac obiectul unui studiu al altor ramuri ale microbiologiei. Microorganismele specifice solului aparin la diferite grupe sistematice ca: bacterii, actinomicete, ciuperci, alge, protozoare i virusuri; el influeneaz starea solului care la un moment dat depinde de interrelaiile biologice care se stabilesc ntre organismele aparinnd acestor grupe, precum i ntre microorganisme pe de o parte i componentele organice i minerale ale solului, pe de alt parte. Microbiologia solului studiaz procesele microbiologice ce se desfoar n sol n scopul dirijrii lor n sensul dorit de om pentru mbuntirea calitii solului i a strii sale de fertilitate. n ansamblu, microorganismele din sol le snt specifice dou categorii de procese biochimice cu consecine multilaterale de ordin fizico-chimic, biologic i agricol: - n primul rnd sunt procesele de degradare (fermentaiile, amonificarea, etc.) prin care se elibereaz din materia organic substane minerale accesibile plantelor. - n al doilea rnd sunt procesele de sintez, (fixarea azotului molecular i humificarea), care creeaz n sol o rezerv de substane nutritive, mai cu seam sub form organic, ce influeneaz simitor starea fizico-chimic i fertilitatea solului. Cunoaterea profund a acestor procese i dirijarea lor raional poate contribui la mbuntirea condiiilor din sol i deci la ridicarea produciei agricole. Studiul participrii microorganismelor la procesele complexe din sol se axeaz n principal pe trei direcii: - cunoaterea ct mai complet a strii biologice a solului pe toat adncimea lui, prin studiul comparativ al frecvenei i activitii microflorei generale i grupelor fiziologice de microorganisme cu funcii bine determinate (fixarea de azot molecular, nitrificarea, fermentarea celulozei, etc.) - studiul echilibrului dinamic care se stabilete ntre grupele fiziologice de microorganisme, precum i oscilaiile pe care le sufer acest echilibru n procesul natural de formare a solului i n cursul transformrii acestuia sub influena diferiilor factori legai de cultivare (prelucrarea solului, ncorporarea de ngrminte chimice sau organice). - cunoaterea biologiei solului sub dublu aspect, momentan i evolutiv, care face posibil compararea diferitelor orizonturi ale unui sol, compararea diferitelor tipuri de sol, constatarea unui eventual dezechilibru n sol, precum i stabilirea raporturilor ntre microflor i starea de fertilitate. Studiul microflorei solurilor se bazeaz pe cercetarea activitii acesteia n ansamblu i nu pe studiul microorganismelor izolate, n culturi pure. n acest sens S. N. Winogradschy arat c: Metoda de analiz a activitii reale a microorganismelor n natur trebuie s se
26

bazeze nu pe cunoaterea speciilor izolate n afara mediului natural, ci pe reaciile ntregii comuniti microbiene n snul acestui mediu. - Sarcina principal a microbiologiei solului const n elucidarea laturii biologice a unor procese din sol, care ar putea fi studiate i pe cale chimic, de exemplu dinamica compuilor accesibili cu azot. Ptrunderea ns a mecanismelor biologice care determin aceast dinamic, permite att cunoaterea ct i dirijarea proceselor, deoarece geneza i proprietile solului, dinamica elementelor minerale accesibile plantelor snt determinate de fenomene biologice. Din aceast cauz microbiologia solului ocup un rol important ntre tiinele care studiaz solul, avnd sarcina de a stabili rolul componenilor sistemului biologic al solului n evoluia acestuia. Microbiologia solului ca tiin de sine stttoare abordeaz dintr-un punct de vedere propriu i prin metode specifice, fenomenele telurice, de unde rezult o concepie de ansamblu proprie, care influeneaz celelalte tiine ce se ocup cu studiu solului ca: pedologia, agrochimia, agrotehnica i altele. 1. SOLUL CA MEDIU DE EXISTEN PENTRU MICROORGANISME Solul reprezint stratul superficial afnat al litosferei care, ndelung i continuu transformat prin aciunea formaiilor vegetale succesive, a agenilor atmosferici i a altor factori naturali, n condiii caracteristice mediului geografic din care face parte, a acumulat treptat elementele nsuirii specifice numite fertilitate, devenind astfel capabil s ntrein viaa plantelor superioare (Chiri). Alctuirea general a solului. n alctuirea solului intr trei pri i anume: partea solid (mineral i organic), partea lichid sau soluia solului i partea gazoas sau aerul din sol. Partea mineral a solului deine ponderea cea mai mare (90-95%), ea provenind din rocile pe care s-a format, prin transformarea acestora sub influena proceselor de dezagregare i alterare. Dezagregarea este fenomenul fizic de simpl mrunire a rocilor sub influena variaiilor termice, a apei, vntului i organismelor. n urma procesului de dezagregare rezult roci afnate, alctuite din fragmente i particule de diferite dimensiuni. Acest complex de dezagregare nu reprezint nc solul, ci numai o faz premergtoare n formarea acestuia. Totui, rocile mrunite posed o nsuire nou fa de roca iniial, dur masiv i anume sunt afnate, ceea ce le face permeabile pentru aer i ap. Alterarea este procesul complex de modificare a mineralelor i rocilor, care se manifest printr-o serie de procese simple de hidratare, dizolvare, hidroliz, carbonare i oxido-reducere. Rezultatul alterrii const n faptul c o parte din elementele minerale de nutriie a plantelor trec n forme asimilabile simple, ndeosebi n sruri minerale. n acelai timp ns iau natere i compui minerali compleci de natura celor care intr n alctuirea argilelor (minerale argiloase). Partea mineral a solului rezult n urma proceselor de dezagregare i n timpul solidificrii propriu zise, fiind reprezentat n principal prin sruri (cloruri, sulfai, carbonai, azotai, fosfai, etc.), oxizi i hidroxizi (fier, mangan, aluminiu, siliciu, etc.), minerale argiloase care formeaz argila din sol principalul coloid mineral al solului, praf sub form de particule cu diametru ntre 0,2 i 0,002mm i nisip cu particule cu diametru ntre 2 i 0,2mm. La unele soluri se pot aduga i fragmente cu diametru peste 2mm sub form de pietri, pietre, bolovani. Partea organic a solului deine un procent mai mic dect cea mineral, numai circa 5-10% n greutate, dar are o importan esenial n formare, evoluia i proprietile solului. Aceasta este reprezentat prin resturile vegetale i animale, netransformate, sau transformate sub aciunea microorganismelor. Principalul constituent al prii organice din sol l formeaz humusul, materie organic coloid-dispers, de culoare brun sau brun negricioas.
27

Humusul este alctuit din compui de resintetizare biochimic a produselor finale de descompunere a materiei organice, acizii humici, la care se pot aduga produse intermediare de descompunere a materiei organice. Humusul, component specific al solului, format sub aciunea microorganismelor asupra resturilor organice, constituie principala rezerv de substan nutritiv pentru plante; el determin cele mai importante proprieti ale solului. Ca o consecin a procesului de alterare a prii minerale a solului i de descompunere a materiei organice, se pun n libertate o serie de elemente ca: N,P, S, Mg, K, Ca, Fe, Al, Mn, Na, etc., din acestea o parte ajung n soluia solului, unde sunt asimilate de ctre plante, iar o alt parte s fixeaz n sol prin fenomene de reinere constituind un rezervor de elemente nutritive. Partea lichid sau soluia solului este reprezentat prin apa din sol, n care se gsesc dizolvate substane minerale i organice n stare de dispersie ionic, molecular sau coloidal. Importana fazei lichide a solului const n aceea c ea conine elemente nutritive n form accesibil plantelor i microorganismelor, adic sub form de sruri solubile care disociaz n anioni i cationi. n urma proceselor de reinere, pe suprafaa particulelor coloidale ale fazei solide se creeaz o rezerv de elemente nutritive absorbite, care se elibereaz n soluie pe msura consumrii lor de ctre organismele vii. Cantitatea global de sruri nutritive din soluia solului este n general, suficient pentru satisfacerea cerinelor trofice ale plantelor superioare i ale microorganismelor de 1,1-2,5 grame la litru. Din punct de vedere calitativ se poate constata n soluia solului, existena pe lng foarte numeroasele elemente minerale i a microelementelor necesare n cantiti extrem de mici ca: Br, Li, I, Co, Ni, Cr, Pb, V, Zn, Cu, Ag, Au. Compoziia soluiei solului este valabil depinznd de condiiile climatice, de activitatea microorganismelor, etc. n ceea ce privete soluia solului, pentru dezvoltarea microorganismelor, o importan deosebit o prezint activitatea osmotic a fazei lichide. n general, presiunea osmotic de 3-6 atmosfere, dup Miustin, pe care o posed celulele marii majoriti a microorganismelor, este suficient pentru dezvoltarea normal a acestora n soluri, funcie de gradul de aprovizionare a acestora. Astfel, n podzoluri presiunea osmotic este de 0,4-1,4 atmosfere, n cernoziomuri este de 2,5 atmosfere iar n solurile srturoase presiunea osmotic a fazei lichide ajunge la 12-15 atmosfere; aici se pot dezvolta numai microorganisme care au o presiune osmotic a celulelor ntre 12,5 i 16 atmosfere. Partea gazoas a solului este reprezentat de aerul care ocup spaiile libere lsate de ctre ap. Compoziia aerului din sol se deosebete de cea a aerului atmosferic prin raportul cantitativ ntre gazele obinute. Astfel, oxigenul se gsete n cantitate mai mic dect n atmosfer, datorit faptului c este consumat n activitatea microorganismelor i n respiraia rdcinilor plantelor superioare. De aceea procentul de oxigen n aerul solului scade fa de circa 21% n atmosfer, la numai18-20%. Procentul de CO2 n aerul din sol este de cel puin 10 ori mai mare dect n aerul atmosferic (0,15-0,65% n sol, fa de 0,03% n atmosfer), datorit eliberrii lui sub aciunea de descompunere exercitat de microorganisme asupra substanelor organice. Cantitatea de azot din aerul solului variaz puin de la 76-79%, fa de aerul atmosferic unde este de 79%. Consumul de azot molecular din aerul solului este foarte redus, el fiind folosit numai de ctre unele microorganisme azotofixatoare. n unele soluri, n special n cele mltinoase, n aerul solului se pot gsi i produsele gazoase ale metabolismului bacterian ca: NH3, CH4, H2S, i H. Compoziia aerului din sol nu difer totui prea mult fa de cea a aerului atmosferic, datorit schimbului permanent, care este n funcie de permeabilitatea solului, aceasta din urm fiind determinat de porozitatea necapilar a acestuia. Reacia solului
28

Dezvoltarea normal a microorganismului depinde nu numai de elementele chimice necesare desfurrii normale a metabolismul acestora ci i de unele condiii fizico-chimice, dintre care cea mai important este reacia solului. Majoritatea microorganismelor se dezvolt optim la un pH apropiat de neutru (pH = 7). Dar reacia solului variaz n funcie de tipul de sol, de la pH = 4 n podzoluri-soluri acide pn la pH = 9 n soloneuri, care sunt soluri srturoase. Fiecare tip de sol are o reacie caracteristic pe care i-o menine datorit capacitii de tamponare determinat n principal de complexul coloidal al solului. n funcie de reacia i tipul de sol, microorganismele se gsesc rspndite difereniat n funcie de capacitatea lor de a rezista la reacii extreme, foarte acide sau alcaline. Formarea solului Procesul de formare a solului ncepe imediat ce roca ia contact cu mediul extern, cu agenii fizici i chimici, precum i cu aciunea microorganismelor vii. Caracteristica principal a solidificrii const n acumularea materiei organice i a humusului, care determin capacitatea de reinere a substanelor nutritive. Elementele chimice eliberate n urma alterrii, cu tendina de a fi splate (levigate), spre structurile mai adnci ale rocii detagregate i alterate. Pe de alt parte organismele vii plantele superioare i microorganismele se opun acestui proces, ducnd la reinerea i chiar acumularea substanelor minerale n partea superioar a solului sub form de materie organic i de humus. n cursul solidificrii, n esen se ntlnesc o serie de procese n urma crora ia natere solul ca sistem complex i biologic n care se desfoar permanent fenomene contradictorii, de al cror echilibru depind proprietile solului. Astfel, n toate solurile se desfoar procesul de alterare a unor minerale primare i secundare concomitent cu formarea altor minerale secundare caracteristice; descompunerea resturilor vegetale i animale paralel cu sinteza acizilor humici; levigarea substanelor n paralel cu bioacumularea; procesul de acumulare a apei n sol i pierderea ei prin evaporare i prin transpiraia plantelor; absorbia energiei solare ce duce la nclzirea solului, paralel cu iradierea i deci pierderea acestei energii. n felul acesta intervenia organismelor vii asupra rocii dezagregate, marcheaz nceputul procesului de solidificare i aduce modificri importante n marele circuit geologic ce se desfoar n natur. Intervenia organismelor face ca peste marele circuit geologic s se suprapun micul circuit biologic care este de sens contrar cu primul. Ca rezultat al acestui proces, descompunerile substanelor organice i minerale sunt nsoite de intense procese de sintez organic, efectuate de organismele vii. Astfel se acumuleaz diferitele elemente necesare nutriiei plantelor i n special, azotul, element important care lipsete din rocile iniiale. Compoziia chimic a solului Raporturile ntre microorganisme i sol sunt determinate de compoziia chimic a acestuia n comparaie cu aceea a litosferei, a rocilor de origine (tabelul 7). Tabelul 7 Compoziia chimic a litosferei n % pn la adncimea de 10 m n unele soluri Denumirea elementelor Oxigen Siliciu Aluminiu Fier Calciu Mangan Litosfer 46,29 27,61 7,81 5,40 3,77 2,68 Podzol Cernoziom Cantitatea n % 69,7 76,1 13,4 15,2 4,3 5,6 0,7 2,6 1,1 2,2

29

Sodiu Potasiu Hidrogen Carbon Fosfor Magneziu Sulf Clor

2,36 2,40 0,21 0,22 0,10 0,08 0,03 0,01

1,2 3,0 2,2 0,39 1,1 -

1,3 3,3 4,6 1,10 2,2 -

Comparnd coloanele din tabel constatm acumularea n soluri a unor elemente biogene eseniale, cum sunt n primul rnd carbonul (n litosfer 0,22% iar n soluri pn la 45%), i azotul (n litosfer inexistent, n soluri pn la1,5%). De asemenea n solurile destinate agriculturii se acumuleaz cantiti importante de Mg, P i alte elemente chimice indispensabile vieii i care n litosfer exist n cantiti insuficiente. Elementele chimice existente n sol se distribuie ntre cele trei pri ale solului, solid, lichid i gazoas, care mpreun constituie un sistem microeterogen, organomineral, polidispers, structurat i poros. Rolul microorganismelor n formare i evoluia materiei organice Materia organic este reprezentat din resturile vegetale care se mineralizeaz de ctre microorganisme dar mai ales prin humus care este un complex de substane amorfe n stare coloidal, rezultat din transformri biochimice descompuneri i sinteze ale resturilor organice, vegetale i animale sub aciunea microflorei solului. Substanele organice vegetale i animale ajunse n sol dup moartea organismelor, nu sunt n ntregime supuse degradrii complete pn la compuii finali (CO 2, H2O, NH3). O parte din ele sunt transformate n produi noi, mai mult sau mai puin rezisteni la descompunerea de ctre microorganisme substanele humice. Acestea se acumuleaz n cantiti mari ca rezerve, condiionnd proprietatea cea mai important a solului fertilitatea. n felul acesta, pe lng aciunea lor de distrugere a substanelor organice vegetale i animale, microorganismele contribuie la formarea unor tipuri noi de substane organice. Datorit acestui fenomen, paralel cu dezagregarea enzimatic a substanelor organice, microorganismele din sol efectueaz sinteza unor compui noi care se acumuleaz temporar n sol, formnd adevrate rezerve de C,N, P, S, K, etc. absolut necesare vieii din sol. Dar microorganismele solului particip nu numai la formarea substanelor humice de rezerv, ci contribuie i la descompunerea lor lent, prin care se asigur plantelor elementele indispensabile pentru noile sinteze organice. Teoria microbiologic a formrii humusului Procesele de dezagregare i sintez care au drept rezultat formarea complexelor humice se datoreaz aciunii bacteriilor aerobe, anaerobe a actinomicetelor i ciupercilor microscopice. Bacteriile anaerobe acioneaz asupra substanelor organice aflate sub form de mase dense n profunzimea solului. Procesul este inhibat n momentul cnd cantitatea de acid ulmic acumulat este att de mare nct oprete dezvoltarea microorganismelor respective i este reluat dup degradarea acestuia. n condiii naturale, denaturarea acidului ulmic se produce dup aciunea frigului, iarna. Datorit acestui fapt, sinteza anaerob a compuilor humici are un caracter periodic, fiind mai activ primvara i vara i scznd n intensitate spre toamn i iarn. Acest proces reprezint forma cea mai important de acumulare a substanelor humice n natur. Sinteza aerob a substanelor humice se realizeaz n stratele mai superficiale ale solului i cu condiia ca acumularea substanelor organice vegetale s se fi fcut n masa afnat. Ea este efectuat de bacterii, n cazul resturilor de plante ierboase i de ciupercile microscopice, atunci cnd substana organic provine din plante lemnoase. Rezult n urma
30

acestui proces acizi humici care nu omoar microorganismele deoarece sunt neutralizai de NH3 format n paralel. Compoziia chimic a humusului este variabil i heterogen, neputnd fi definit prin nici o formul chimic; ea const din acizi ulmici i fulvici (70-80%) i din reziduu insolubil (20-30%). Coninutul bogat n N al humusului, n jur de 5% cu raportul C : N = 10:1, denot caracterul su de produs de sintez. El conine n special acid ulmic (acid hulmic brun) rezultat din aciunea bacteriilor anaerobe, acid humic (acid humic negru) produs de ciuperci. Una dintre particularitile cele mai importante ale substanelor humice este aceea de a fi mai stabile, n condiii termodinamice date, dect substanele naturale din care s-au format. n acelai timp ele sunt ntr-o permanent evoluie; pe de o parte, pornind de la diferite substane organice animale i vegetale se formeaz substane noi sub aciunea microorganismelor, iar pe de alt parte, complexele humice sintetizate sunt mineralizate de microflora solului. Datorit acestui proces continuu, formarea humusului se poate afla n diferite stadii de evoluie, sub form de: - substane prohumice, capabile s agrege particulele de sol; - humus activ, cel mai important pentru fertilitate, care prin descompunere formeaz uor substane nutritive pentru plante i reprezint aproximativ 1% din greutatea solului; - humus stabil, care cimenteaz agregatele de sol, dar se descompune greu i nu particip activ la nutriia plantelor; - humus inactiv, cu capacitate redus de mineralizare i fr rol n nutriia plantelor ca i n formarea structurii stabile a agregatelor de sol. Humusul ndeplinete numeroase funcii de importan excepional, din care se poate deduce rolul microorganismelor care particip la sinteza i descompunerea lui. Astfel, humusul formeaz n sol rezerve imense de N, C, P, S, K, Fe, care pot fi folosite dup mineralizarea prealabil. Dup S. Waksman cantitatea de substane organice sub form de humus depete cu mult pe cea prezent n toate formele vii. Humusul favorizeaz nutriia plantelor superioare, furnizndu-le substane nutritive, rezultate din descompunerea lui treptat i lent de ctre microorganisme. Humusul influeneaz caracteristicile fizice ale solului cruia i confer structura granular i culoarea ntunecat care favorizeaz absorbia razelor solare i determina creterea temperaturii. De asemenea el reduce vscozitatea argilelor i uureaz formarea de agregare care amelioreaz aerarea i drenajul solului, mrind n acelai timp capacitatea de reinere a apei din sol. Humusul, influeneaz proprietile chimice ale solului prin faptul c menine echilibrul general ntre ionii adsorbii i cei dizolvai i d solului putere tampon. Prin participarea sa la sinteza i transformrile substanelor humice, microflora solului ndeplinete un rol de o importan vital, deoarece, datorit proprietilor amintite, humusul confer solului proprietatea sa de baz fertilitatea care-l deosebete de roca steril. Dup definiia dat de A. Thaer Humusul este produsul materiei vii i izvorul acestuia, sau dup cum afirm S. Waksman, Humusul este o rezerv i un stabilizator al vieii organice pe pmnt. Populaia solului Populaia solului este constituit din totalitatea vieuitoarelor care exist n sol. Ele au o mare diversitate de forme, dimensiuni, apartenen sistematic i activitate biologic. Cele care au dimensiuni mai mari formeaz macropopulaia solului, ele fiind studiate din cele mai vechi timpuri. Restul de vieuitoare au fost puse n eviden numai dup perfecionarea mijloacelor de mrire a imaginii, ele formnd micropopulaia solului. Macropopulaia este reprezentat de macroflor i macrofaun.
31

Macroflora, este format din prile subterane (rdcini, tulpini i frunze ajunse n sol, organe sub diverse forme) ale plantelor superioare (agricole, horticole, buruieni etc.) care furnizeaz solului cea mai important surs de materie organic. Rdcinile au n plus un rol important i n modificarea concentraiei soluiei solului (ca urmare a procesului de adsorbie) i n eliminarea a numeroase substane (n special enzime) care intervin direct n activitatea microorganismelor. Datorit acestor condiii specifice, numrul de microorganisme aflate n jurul rdcinilor (rizosfer) depete cu mult pe cel aflat n restul solului. Macrofauna, cuprinde o diversitate mare de organisme, dintre care amintim: nematozii (circa 10 mii/mp), viermii inelai, rmele (90-500 kg/ha), furnicile, coleopterele i diverse vertebrate care, prin activitatea lor, mbogesc solul n materie organic, ce va fi utilizat de microorganisme. Micropopulaia din sol este reprezentat de microflor i microfaun. Microflora constituie populaia cea mai important pentru viaa solului. Ea este format din bacterii, cyanobacterii, ciuperci microscopice i alge. Cea mai important indicaie asupra activitii microorganismelor din sol este dat de numrul lor n unitatea de volum, de greutate sau de suprafa. Valoarea absolut a unor microorganisme raportat la un gram de sol, variaz ntre 1 milion-1 miliard de bacterii, ntre 5.000-50.000 la ciuperci, ntre 3.000-30.000 la actinomicete i 500-5.000 la alge (la adncimea de 2-5 cm). Microfauna solului este constituit din protozoare monocelulare (ntre 100-1.000 buc./g sol), dintre care cele mai numeroase aparin ncrengturii Flagellate. Dei aciunea lor este cunoscut, rolul protozoarelor n sol nu este pe deplin clarificat. Numrul microorganismelor din sol i componena lor constituie un important criteriu practic n aprecierea activitii biologice a acestora. Pentru edificarea complet a acestei activiti, este necesar i cunoaterea activitii biochimice a microorganismelor.

32

2. CIRCUITUL AZOTULUI Azotul este un element esenial pentru existena vieii n biosfer, deoarece este inclus n structura tuturor proteinelor i a acizilor nucleici. Dei este prezent n natur n cantiti foarte mari, se gsete aproape invariabil n forme inaccesibile direct, plantelor i animalelor. Circuitul azotului n natur se desfoar pe parcursul a mai multor etape care implic desfurarea unor multiple activiti biochimice, unele au loc n anaerobioz iar altele n prezena oxigenului. Aceste etape sunt: fixarea N2; amonificarea; nitrificarea; denitrificarea. I. Fixarea azotului molecular se poate realiza pe cale abiotic i biotic. Pe cale abiotic fixarea se realizeaz prin iradieri, descrcri electrice i prin intermediul precipitaiilor. Pe cale biotic fixarea azotului molecular este un proces lent i continuu prin care, sub aciunea a peste 100 genuri de bacterii diferite, azotul gazos atmosferic este convertit la forme fixe (NH4-, NO3-, NO2-), care sunt folosite de plante i introduse n forme organice utiliznd energia obinut prin fotosintez. Bacteriile care particip la aceast fixare au fost grupate astfel: - bacterii fixatoare de N2 libere aerobe; - bacterii fixatoare de N2 libere anaerobe; - bacterii fixatoare de N2 care triesc n asociaie cu plantele. n cazul celui de-al treilea grup n funcie de relaia care se stabilete ntre cei doi parteneri, ntlnim trei tipuri de simbioz: simbioza Rhizobium - leguminoase; simbioza Actinomicete - neleguminoase; simbioza asociativ. II. Amonificarea, const n mineralizarea azotului proteic pn la NH3. III. Nitrificarea cu cele dou trepte intermediare: nitritarea i nitratarea n care are loc oxidarea NH3 pn la nitrii respectiv nitrai. IV. Denitrificarea este procesul prin care are loc reducerea azotului nitric pn la azot molecular, ncheindu-se n acest mod circuitul azotului. Toate procesele desfurate pe parcursul celor patru etape sunt mediate numai de bacterii, cu excepia unei etape premergtoare amonificrii, proteoliza n care pot aciona i microfungii. n timp ce n ecosistemele naturale, circuitul azotului este un proces echilibrat, n sensul c pierderile de azot din sol sunt compensate de procesele de fixare, n sistemele supuse procesului de agricultur, pierderile depesc ritmul de nlocuire. Dac rezervele de azot din sol sunt limitate, fapt ce duce la apariia unor frecvente dezechilibre ntre nevoia de azot i posibilitatea de a o satisface, din contr, rezerva de azot atmosferic, este practic inepuizabil, calculele artnd c aceasta ar putea asigura necesarul
33

pentru cel puin 800.000 ani. Din pcate aceast imens cantitate este inaccesibil, direct, organismelor vii i mai cu seam plantelor superioare. n cursul ultimilor decenii datorit nevoilor crescnde de hran pentru o populaie n permanent dezvoltare, cantitile de ngrminte chimice cu N2 aplicate au crescut continuu. Dei o perioad de timp, ngrmintele chimice cu N au ndreptit speranele rezolvrii i pe viitor a satisfacerii nevoilor nutritive pentru populaie, criza energetic a ultimilor ani i apariia unor efecte secundare nedorite, a impus reconsiderarea acestei posibiliti. Azotul atmosferic este convertit, industrial n NH3 prin procedeul Haber. Reacia are loc la temperaturi ridicate de cca. 500oC i la o presiune de 300-600 atmosfere, ceea ce presupune un consum ridicat de energie de cca 22.000 kcal/kg. n acelai timp excesul de ngrminte chimice cu azot are efecte negative asupra mediului i uneori asupra omului prin produsele vegetale pe care acesta le consum. Creterea coninutului n protein la plante sub influena ngrmintelor cu azot are loc n limita potenialului genetic al speciei sau soiului. De aceea excesul de azot duce la o serie de deranjamente i la acumularea de azot nitric n plante. Aceste acumulri n plantele furajere sau alimentare provoac intoxicaii grave ce pot duce chiar la moartea individului. La copii, nitraii, sunt redui la nitrii care fiind absorbii de snge reduc capacitatea acestuia de a transporta oxigenul prin formarea metahemoglobinei. La aduli, nitraii sunt convertii la nitrosamin care, de asemenea este otrvitoare. Folosirea n doze excesive a azotului duce la splarea acestuia i la mbogirea n nitrai a pnzei de ap freatic care poate fi utilizat ca ap potabil sau n adpatul animalelor. De asemenea, utilizarea intensiv a ngrmintelor chimice duce la creterea coninutului solului n unele elemente (Zn, Pb, Ni, Cr etc.) care anterior se gseau n forme solubile doar ca urme. Creterea concentraiei acestora peste o anumit limit, avnd efecte toxice asupra plantelor i microorganismelor (Davidescu, 1974). Datorit crizei energetice i efectelor secundare ale ngrmintelor chimice cu N, o atenie tot mai mare se acord n ultimul timp mecanismelor naturale de fixare a azotului n sol i n special fixarea biologic. Prin procesele de fixare biologic sunt introduse n sol cantiti foarte mari de azot. Microorganismele fixatoare de azot posed un complex enzimatic denumit nitrogenaz capabil s activeze tripla legtur a moleculei de azot, care poate fi astfel redus la amoniac. Procesul se desfoar la o temperatur relativ sczut de 15-40 oC frecvent ntlnit n sol i la presiune atmosferic normal. n funcie de numeroi factori, dar mai ales de planta de cultur, cantitatea de azot atmosferic fixat biologic variaz ntre limite foarte largi. Legat de acest aspect, n anul 1971 Hank a sintetizat rezultatele din literatura de specialitate pentru diferite ecosisteme, astfel: - culturi de cmp 7-28 kg N/ha; - angiosperme i alte plante neleguminoase 7-114 kg N/ha; - leguminoase 73-865 kg N/ha; - pdure 58-594 kg N/ha; - puni 13-99 kg N/ha; - ape 70-250 kg N/ha. Fenomenul de fixare a azotului de ctre microorgansime a fost pus n eviden n anul 1888 de ctre Berthelot. Acesta a urmrit n paralel variaia azotului n vase cu sol nesteril i n vase cu sol steril, constatnd c n solul nesteril coninutul n azot crete, pe ct vreme n vasele cu sol sterilizat nu. Fixarea N2 de microorganisme libere aerobe
34

n anul 1901 Beijerinck reuete izolarea din sol a dou specii de bacterii, care au capacitatea de fixare aerob a azotului molecular. Ulterior, cercetrile au evideniat existena i a altor specii capabile s realizeze acest proces. Dintre cele mai cunoscute specii putem enumera: - Azotobacter chroococcum; - Azotobacter vinelandii; - Azotobacter agile; - Azotobacter insigne; - Azotobacter macrocytogenes; - Azotobacter mobile; - Azotobacter fluminensis; - Beijerinckia indica; - Derxia gummosa; - Rhodospirillum sp.; - Rhodopseudomonas sp. Dintre acestea cele mai rspndite i mai cunoscute sunt cele din genul Azotobacter. Bacteriile din genul Azotobacter sunt rspndite n natur mai ales n solurile cultivate, bogate n humus cu reacie neutr i se gsesc rar n solurile acide, podzolice, turboase i mltinoase. Morfologia lor este foarte variabil n funcie de condiiile de mediu, fapt ce explic descrierea la un moment dat a numerose specii separate care ulterior au fost considerate ca sinonime. Dintre speciile genului Azotobacter cea mai rspndit i mai eficace este Azotobacter chroococcum. Azotobacter chroococcum prezint o serie de aspecte morfologice considerate ca fcnd parte dintr-un ciclu de evoluie corelat cu vrsta. n funcie de vrsta coloniei celulele apar difereniat: 1. Celule tinere, au aspect de bastonae groase de 2 x 4 m, cu capetele rotunjite, izolate sau n perechi. 2. Celulele adulte, sunt sferice sau ovale ca nite coci mari de 2 x 1,2 m, coninnd numeroase granulaii constituite din lipide, volutin, glicogen etc. 3. Celulele btrne care apar n a 5-a zi de dezvoltare a culturii, sunt aproape sferice i au dimensiuni mai mici de 1,5 x 1,3 m. n condiii nefavorabile de mediu apar chitii. Chitii sunt prevzui cu un perete gros, format din dou straturi i apar prin modificarea celulelor adulte sau a celulelor btrne. Acetia mai poart numele de macrochiti. Citoplasma lor este constituit din protein concentrat. Chistul este o form latent, de rezisten a germenului, care sub aceast form se menine viabil mai multe luni sau chiar ani. Prin germinare, din chiti iau natere celule tinere care reiau ciclul descris. n condiii de cultur pe medii lichide Azotobacter formeaz un vl gros la suprafa, albicios, care cade treptat la fund, formeaz un depozit dens albicios i care mai trziu devine brun-negru. Pe mediile solide formeaz colonii lucitoare, la nceput incolore, vscoase, cu tendina de scurgere prin glisare pe suprafaa mediului. Cu timpul ele se coloreaz n brun-negru, datorit pigmentului melanic. Bacteria se dezvolt la temperatura cuprins ntre 9-35oC i la un pH ntre 5,8-8,5, fiind foarte sensibil la aciditate sub pH=5,8. Este strict aerob, Gram negative i oxideaz complet hidraii de carbon pn la CO 2, fr a produce n mediu metabolii intermediari. n condiii optime fixeaz aproximativ 20 mg N2 pentru fiecare gram de glucide oxidate.
35

Randamentul fixrii este variabil de la o tulpin la alta, dup natura sursei de carbon. Deosebirile dintre diferitele tulpini constau n viteza aciunii lor, unele fiind n stare s fixeze n 3 zile 100 % din concentraia final, n timp ce altele realizeaz fixarea ntregii cantiti numai dup 12 zile.

Fixarea anaerob a azotului molecular Fixarea anaerob a N2 a fost evideniat nc din 1893 de Winogradski care a reuit izolarea i cultivarea pe un mediu nutritiv lipsit de N, a speciei Clostridium pasteurianum, specie mult rspndit n sol. Ulterior au fost descrise i alte specii anaerobe care aparin genurile: Desulfovibrio sp., Desulfatomaculum sp., Methanobacillus sp. Clostridium pasteurianum, face parte din grupul bacteriilor butirice. Se prezint n cazul formelor tinere vegetative sub form de bastona Gram pozitiv, cu capetele rotunjite, cu dimensiuni variabile, cuprinse ntre 1,5-8 x 0,8-1,3 m. Este mobil, cu cili dispui peritrichi, adesea fuziform. La celulele btrne apar forme de involuie, filamentoase sau cocoide, iar coninutul celulelor este granulos i se coloreaz n violet cu soluie iodurat Lugol, coninnd substane iodofile. Bacteria prezint un spor central cu diametrul de 1-1,3 m; este un microorganism anaerob obligat, care se dezvolt n condiii optime la 20-30oC i la un pH = 7,3-8,9. Cultivat pe un mediu ce conine substane hidrocarbonate dar, lipsit de N, obine energie din fermentarea acestora i fixeaz N 2 atmosferic. Cantitatea de N fixat este proporional cu cantitatea de glucoz fermentat i este de aproximativ 3 mg pe gramul de glucoz consumat. Randamentul fixrii N, de ctre Clostridium pasteurianum este maxim cnd este asociat cu bacteriile celulolitice anaerobe care pun la dispoziie hidrai de carbon solubili ca glicerina sau manita care se gsesc n sol n concentraii mici. Fixare anaerob a N2 are un rol esenial n solurile puin aerate sau invadate de ap (mlatini, orezrii) unde Clostridium pasteurinum este principalul fixator de azot. n ceea ce privete proporia dintre cele dou specii descrise, Fedorov arat c n soluri Azotobacter chroococcum a fost gsit numai n 30 % din cazuri, n timp ce Clostridium pasteurianum n 70 %, avnd deci o preponderen mai mare. Simbioza asociativ Prima semnalare a fixrii N2 de microorganisme asociative a fost fcut n anul 1974. Cercetrile efectuate au pus n eviden existena a mai multor specii de bacterii ale genului Azospirillum sp., Bacillus sp., Klebsiella sp., care triesc n asociaie cu rdcinile unor graminee. - Azospirillum lipoferum - porumb; - Azospirillum brasilense - gru, orez; - Bacillus macerans - porumb; - Klebsiella pneumoniae - Poa pratensis. n Romnia prima semnalare a fost realizat n anul 1980 de ctre Hera. Fixarea asociativ este mai rspndit de aproximativ 5 ori n zonele tropicale fa de zona temperat. Simbioza Rhizobium - leguminoase n solurile cultivate cu leguminoase, n afar de fixarea N 2 atmosferic de ctre bacteriile libere aerobe sau anaerobe se mai produce i fixarea de ctre microorganismele simbiotice care triesc n nodozitile de pe rdcinile acestor plante.
36

Dei formarea de nodoziti pe rdcinile plantelor leguminoase se cunoate din antichitate, fenomenul era considerat ca un proces patologic, tumoral sau datorat unor nepturi de insecte. Abia n 1865, Voronin a descris nodozitile i corpusculii ce-i conin, iar n 1887 Beijerinck a izolat i descris bacteriile care le produc.

Biologia bacteriilor de nodoziti Bacteriile care produc nodoziti la leguminoasele cu care triesc n simbioz, aparin genului Rhizobium care cuprinde mai multe specii distincte, cu capacitatea de a infecta numai anumite plante gazde, dup cum urmeaz: Rhizobium leguminosarum - mazre, bob, linte, R. trifolii - trifoiul, R. japonicum - soia, R. phaseoli - fasolea, R. lupini - lupinul, R. meliloti lucerna. Activitatea diferitelor specii de Rhizobium este variabil de la o specie la alta, n funcie de dou proprieti biologice importante: infeciozitatea, care reprezint capacitatea de a produce nodoziti i eficiena, care se refer la capacitatea de a fixa N2. Bacteriile ajung n zona rizosferic la nivelul periorilor absorbani fiind stimulate de secreiile radiculare care au rol chimiotactic pozitiv, dup care are loc un proces de recunoatere a celor doi parteneri. Recunoaterea se realizeaz prin intermediul unor substane specifice denumite generic lectine. Dup legarea ireversibil are loc deformarea periorului radicular, care ia form de crlig, sub aciunea unor substane eliminate de bacterii. Ulterior, peretele periorului absorbant este dizolvat sub aciunea unor enzime secretate de bacterii i acestea ptrund n interior formnd un cordon de infecie care ajunge n celulele parenchimului cortical. Cordonul este format la nceput dintr-o matrice mucoas n care se gsesc bacterii i care treptat se acoper cu o teac celulozic. Acest manon este constituit din secreii ale ambilor parteneri. Pe msur ce cordonul infecios nainteaz, bacteriile se multiplic continuu i sunt eliberate fie prin unele fisuri ale acestuia, fie prin extremitatea lui distal i se aeaz la periferia celulelor unde se multiplic activ. n acelai timp celulele cortexului radicular infectat se multiplic rapid, transmind infecia bacterian celulelor fiice. Rezultatul acestei proliferri este nodozitatea, care la nceput este inclus n cortexul radicular, apoi l deformeaz pe msur ce crete i n cele din urm l rupe. Ea apare ca rezultat al invadrii i multiplicrii bacteriilor n celulele gazde i al aciunii unor substane stimulente de tipul auxinei (acid indolilacetic), secretate de bacterii. La leguminoasele erbacee anuale nodulul este o structur efemer, n timp ce la cele perene dureaz 5-6 ani, dup care sufer modificri degenerative care duc la necrozarea i detaarea lui de rdcin. S-a constatat c n procesul fixrii N2 nu toate nodozitile sunt la fel de active, ele mprindu-se n dou categorii: Nodoziti "eficiente", sunt relativ puin numeroase i se formeaz mai ales pe rdcinile principale; sunt mai voluminoase i au o suprafa neted sau rugoas. Aceste nodoziti conin un pigment rou de natur proteic, leghemoglobina (hemoglobina leguminoaselor). Nodozitile eficiente au o structur caracteristic fiind constituite din mai multe regiuni: - regiunea periferic este reprezentat de cortexul nodozitilor, format din mai multe straturi de celule, compacte, cu rol de protecie; - regiunea meristematic, este situat n regiunea distal a nodoziti fiind format din celule neinfectate i asigur creterea nodozitilor prin diviziune; - regiunea central este alctuit din trei zone distincte:
37

a - zona de invazie, situat sub meristem, este format din celule neinfectate i celule mrite, infectate; b- zona simbiotic, ocup poriunea cea mai mare din nodoziti i prezint dou subzone: - subzona simbiotic timpurie, cu celule ce conin bacterii care nu prolifereaz; - subzona simbiotic tardiv, celule pline cu bacterii. Este zona de fixare activ a N2. c - zona de senescen, corespunde celulelor i bacteriilor n curs de degenerare sau moarte. Nodozitile "neeficiente", sunt mai numeroase, mai mici, cu suprafaa neted i sunt rspndite pe tot sistemul radicular. Infecia lor este foarte limitat, ele conin foarte puine bacterii. Activitatea lor dureaz numai cteva zile, iar fa de celelalte sunt nepigmentate. Mecanismul simbiozei plant-bacterie Bacteriile simbiotice iau energia necesar asimilrii azotului molecular, prin procedee de degradare a substanelor hidrocarbonate furnizate de planta gazd. La rndul lor bacteriile asimileaz N2 atmosferic pn la stadiul de acid aspartic care este preluat de plant. Aceasta, prin transaminare enzimatic n prezena acidului piruvic sintetizeaz alanina. n continuare planta gazd sintetizeaz ceilali aminoacizi, prin transaminare, pornind de la alanin i diferii acizi cetonici. Leghemoglobina este singurul reprezentant al hemoglobinelor din regnul vegetal, aceasta apare n stadiul activ al fixrii, numai n nodulii eficieni, aflai la maturitate, ca rezultat al simbiozei ntre bacterii i leguminoase. n acest sens bacteriile aduc nucleul "hem" iar planta "proteina". Pigmentul nu poate fi sintetizat separat nici de bacterii nici de planta gazd i fixarea N2 este proporional cu concentraia pigmentului din nodoziti. Simbioza Frankia - Plante neleguminoase (Actinorizele) Actinorizele reprezint asociaii simbiotice fixatoare de N2 la aproximaativ 200 specii de angiosperme, care sunt plante leguminoase caracteristice zonelor cu deficit de azot. Bacteriile care triesc n simbioz cu aceste plante aparin genului Frankia, fam. Frankiaceae, ord. Actynomycetales. Cele mai cunoscute genuri de plante n zona noastr: Hippophae, Elaeagnus. Formarea nodozitilor Modul de recunoatere ntre cei doi parteneri i infecia sunt asemntoare ca la simbioza dintre bacteriile genului Rhizobium i plantele leguminoase. Evoluia procesului infecios determin apariia unor nodoziti laterale pe suprafaa rdcinilor. Formaiunile simple originale au o asemnare extern evident cu nodozitile de leguminoase. Dup 10-15 zile pe suprafaa nodulului simplu originar apar lobi noi situai n partea apical. Repetarea acestui proces de ramificare i producerea anual de noi noduli pe rdcini duce la apariia unei grupri compacte cu aspect coraloid, fiecare lob reprezentnd o nodozitate individual. Importana deosebit a actinorizelor decurge din faptul c cele mai multe plante gazd sunt specii pionier. Ele populeaz terenurile cu deficit mare de azot, terenurile mltinoase, soluri srace, dune de nisip, pietri, regiuni subalpine, zone de deert. n al doilea rnd sunt importante prin larga rspndire a plantelor gazd, prezente n regiunile arctice, temperate, subtropicale, tropicale i de la regiunile de es pn la cele subalpine.
38

II. Amonificarea Substanele organice azotate, reprezentnd 99 % din rezervele totale de N2 din sol, constau din rezerve humice i din ali compui acumulai n mod natural n sol prin procesul de fixare biologic a N2 i prin cel de degradare a resturilor organice vegetale i animale, a ngrmintelor verzi i a blegarului. nsi celulele bacteriene reprezint o mas de substan organic, predominant proteic, de aproximativ 6 t/ha, la care se adaug circa 20 de tone reprezentate de restul microflorei i microfaunei. Dac acest N2 organic ar rmne ca atare, rezervele de N2 accesibile plantelor s-ar micora n fiecare an i nu ar mai permite creterea plantelor. n mod normal ns, aceste substane sufer un proces de mineralizare, la sfritul cruia sunt aduse n stare de NH3. Procesul de amonificare propriu-zis este precedat de descompunerea moleculelor proteice prin hidroliz, cu ajutorul proteazelor extracelulare eliberate de numeroasele specii de microorganisme aerobe i anaerobe dup formula general: H2O H2O H2O protein peptone peptide aminoacizi proteinaze peptonaze peptidaze Aminoacizii rezultai din aceast degradare ptrund n interiorul celulelor bacteriene, unde sufer un proces de dezaminare, din care rezult NH3 i acidul organic corespunztor. Se ntlnesc mai multe tipuri de dezaminare i anume: 1. Dezaminarea hidrolitic 2. Dezaminarea hidrolitic i decarboxilare 3. Dezaminarea reductoare 4. Dezaminarea reductoare cu decarboxilare (anaerob) 5. Dezaminarea oxidativ cu decarboxilare 6. Dezaminarea cu desaturare. Din asemenea reacii, n afar de NH3, pot rezulta acizii: acetic, formic, propionic, butiric, valerianic. n funcie de condiiile de mediu i natura microflorei, aceti acizi pot fi oxidai complet la CO2 i H2O (n mediul aerob), acumulai ca atare, transformai n alcooli. Amonificarea n sens strict poate fi definit deci ca un proces biologic n care se elibereaz n sol NH3, ca rezultat al aciunii microflorei solului asupra aminoacizilor rezultai din descompunerea substanelor proteice. n acest sens nu este inclus n amonificare, eliberarea de NH3 sub aciunea micoflorei temporare de putrefacie. n acest proces NH3 poate fi refolosit ca atare, de o serie ntreag de microorganisme. Cea mai mare parte din el sufer n continuare o transformare absolut necesar pentru viaa din sol, n forme accesibile plantelor, iar restul poate fi fixat n sol, mai ales n soluri acide sau se evapor n atmosfer. Microflora capabil s produc amonificarea substanelor proteice este numeroas i diferit i acioneaz n timp dup cum urmeaz: La nceputul procesului intervin bacterii obligat aerobe cum sunt: Bacillus cereus var. micoides, B. subtilis, B. thermoproteolyticus, specii nesporulate ca: Serratia marcescens, Arthrobacter etc. i specii facultativ anaerobe cum sunt: Proteus vulgaris, Pseudomonas fluorescens, Escherichia coli, Sarcina lutea etc. Dup 2-3 zile intr n aciune specii obligat anaerobe cum sunt: Clostridium putrefaciens, C. perfringens i unele actinomicete ca: Streptomyces violaceus i Micromonospora chaleea, care ncep s predomine i fac ca degajarea de NH3 s fie maxim. ncepnd cu ziua a 4-a mediul este invadat de mucegaiuri i degajarea de NH 3 descrete datorit faptului c acestea folosesc NH3 pentru sinteza proteinelor proprii i produc mult acid care neutralizeaz amoniacul.
39

Hidroliza ureei este realizat de un grup numeros de microorganisme capabile s produc enzima ureaza. n acest grup ntlnim specii din genurile: Achromobacter sp., Bacillus sp., Clostridium sp., Corynebacterium sp., Pseudomonas sp., actinomicete i microfungi filamentoi. La acestea se adaug grupul urobacteriilor caracterizate prin rezistena la concentraii mari de uree i la pH alcalin i prin capacitatea de a elibera cantiti mari de NH3. Din grupa urobacteriilor fac parte: Bacillus (Urobacillus) pasteuri, Micrococcus ureae, Planosarcina ureae etc. Activitatea amonificatoare a urobacteriilor este foarte important deoarece ureea conine 47 % N2 - care ar fi altfel neutilizat de plante. Cantitatea de uree eliminat n natur este mare atingnd cteva zeci de milioane de tone pe an. Se estimeaz c populaia uman ar elimina n 24 ore circa 15.000 t N ureic, iar animalele circa 1.500.000 tone. La aceste cantiti se mai adaug ngrmintele cu uree, aplicate prin tehnologiile actuale sub form de cianamid de Ca. Acest compus fabricat din N2 din aer i carbur de calciu nu este asimilabil de ctre plante. Ea sufer n sol unele transformri abiotice i biotice enzimatice pn la NH3. III. Nitrificarea Nitrificarea este un proces de oxidare a NH3 i a altor forme reduse ale N2 anorganic eliberate n sol n cursul procesului de amonificare, n nitrai care reprezint forma asimilabil pentru majoritatea plantelor verzi. n acelai timp ns, nitraii reprezint i forma sub care N 2 din sol este pierdut, deoarece fiind solubili, sunt splai de ploaie sau redui la NH 3, nitrai sau chiar N2 molecular prin denitrificare. Natura biologic a acestui proces a fost demonstrat prin suprimarea lui n urma sterilizrii solului prin nclzire la 110oC, sau prin tratarea cu vapori de cloroform. n laborator s-a demonstrat c procesul se desfoar n dou faze: 1. Nitritarea - const n dispariia NH3 i nlocuirea lui cu nitrii. 2. Nitratarea, nlocuirea nitriilor cu nitrai (HNO2 HNO3). Microorganismele nitrificatoare sunt autotrofe chimiosintetizante care i procur prin reacii chimice oxidative, energia necesar pentru producerea substanelor celulare proprii. Ele sunt aerobe stricte - rspndite practic n toate tipurile de sol, i folosesc ca surs de carbon, C mineral din CO2 i carbonai, iar ca surs de N amoniacul sau nitriii. ntre bacteriile nitroase - nitrit bacteriile - putem cita: Nitrozomonas europaea, Nitrosococcus oceanus, Nitrosospira briensis i Nitrosolobus multiformis , care transform srurile amoniacale n nitrii. Bacteriile nitrice (nitratbacteriile) frecvent ntlnite sunt: Nitrobacter Winogradskii, Nitrospira gracilis i Nitrococcus mobilis, ce realizeaz etapa a doua a nitrificrii, nitratarea care const n oxidarea nitriilor pn la nitrai Nitrificarea care reprezint a 3-a faz a circuitului azotului n natur, este un proces de importan excepional, deoarece aduce substanele azotate n forma cea mai uor accesibil plantelor. Dealtfel, s-a observat c n general numrul microorganismelor nitrificatoare este proporional cu fertilitatea solului, putnd ajunge, n solurile fertile, pn la un milion de bacterii pe gramul de sol. Numrul mare de nitrificatori din solurile fertile, comparativ cu solurile nelenite, se datoreaz i faptului c primele sunt lucrate i deci bine aerate. IV. Denitrificarea Nitraii acumulai n sol, ca rezultat al procesului de nitrificare, sunt n parte consumai de plantele superioare, iar o cantitate variabil este splat de apele de infiltrare i iroire. Nitraii pot fi folosii i de microorganisme, fie c sunt asimilai n cursul proceselor de
40

sintez a protoplasmei acestora (asimilarea nitriilor), fie c sunt redui, pentru oxidarea unei substane organice sau minerale. Denitrificarea reprezint un proces care nchide circuitul prin ntoarcerea N 2 molecular n natur. Reducerea nitrailor n procesul de denitrificare se face fie pn la N 2 sau NH3, fie pn la stadii intermediare ca nitrii, acidul hiponitros etc. Condiiile optime de producere sunt realizate n solurile saturate cu ap i n structurile profunde n care pot reaciona urmtoarele grupuri de microorganisme. Bacteriile denitrificatoare propriu zise ce reduc NO3- la N2 sunt: Pseudomonas stutzeri i Pseudomonas denitrificans. Dintre microorganismele din flora general a solului capabile s reduc NO3- la NO2sunt: Bacillus megaterium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa etc., precum i unele bacterii sulfuroase ca: Thiobacillus denitrificans. Semnificaia procesului de denitrificare este nc controversat, acesta fiind considerat de unii autori ca un fenomen patologic, inconstant i relativ rar n condiii naturale ale solurilor de cultur. Este sigur c reducerea nitrailor pn la N 2 gazos reprezint pentru solul respectiv o pierdere real care poate ajunge pn la 120 kg N2/ha/an, cu toate c o parte din N2 degajat poate fi preluat de fixatorii de N2 anaerobi cum sunt: Clostridium pasteurianum. n acelai timp, reducerea incomplet, pn la stadiile intermediare, de nitrii i NH 3, este mai puin duntoare pentru fertilitatea solului respectiv, deoarece NH 3 poate fi folosit de unele microorganisme heterotrofe, n timp ce nitriii sunt preluai de nitratbacterii i reoxidri n nitrai.

3. CIRCUITUL CARBONULUI Dac a fost relativ uor s se dea o descriere, destul de schematic e drept, a ciclului azotului n sol, nu este la fel de simplu pentru circuitul carbonului; acesta din urm nu are verigile bine individualizate care ale primului. Mai nti trebuie s artm c sursele de carbon introduse n sol sunt numeroase: carbonul mineral al CO2 atmosferic i carbonaii telurici, urmeaz apoi carbonul organic al vegetalelor i animalelor sub forme multiple, de la glucide simple pn la substane polimerizate ca celuloze sau cu structuri complexe ca lignina. Metabolismul acestor forme diverse este mult diferit n sol din mai multe cauze i anume: - datorit nsi structurii substanelor carbonate; - datorit florei multiple zimogene care acioneaz asupra acestor substane. Aceste diferene se traduc prin viteza de atac diferit i prin produii de metabolism intermediari obinui. Dac n adevr produii finali ai oxidrii i mineralizrii carbonului organic sunt n mod constant CO2 i H2O ( i CH4 n condiii de anaerobioz), produsele intermediare sunt foarte variate, sub form de acizi organici i zaharuri, mai mult sau mai puin complexe. De fapt, mineralizarea carbonului organic este n mod excepional realizat ntr-o singur etap i ca regul general, numeroase grupuri de bacterii i ciuperci intervin n mod succesiv pentru a ajunge la produse simple terminale. Acest ciclu al carbonului este complicat nc prin faptul c substanele hidrocarbonate sunt totdeauna asociate n proporie variabil cu substane azotate (proteice), lipide, precum i cu lignina, cerurile, rinile, taninurile, etc. Proporia relativ a acestor diverse substane modific n mod profund metabolismul produilor hidrocarbonai. Metabolismul mai variaz i n funcie de structura fizic i chimic a solului, de clim (temperatur, umiditate), de sistemul de cultur, etc.
41

Ultimul factor ce complic situaia este acela c n acelai timp cnd substanele hidrocarbonate sunt degradate, mineralizate, microorganismele realizeaz sinteza, pentru propriul lor corp, a unor produi ca hemiceluloza. Este ca atare dificil de tiut care sunt produii intermediari de degradare i care sunt cei de sintez. n orice caz, att unii ct i alii se pot combina pe cale chimic sau fizic ntre ei, precum i cu ali compui din sol pentru a forma substanele de rezerv humic. Pentru o mai clar prezentare a problemei, se va lua n considerare mai nti metabolismul carbonului mineral i apoi a celui organic. Metabolismul carbonului mineral Se tie c majoritatea bacteriilor au nevoie pentru metabolismul propriu de gazul carbonic (CO2) dar acesta intr n ciclul biologic n cantiti relativ mici Exist grupri fiziologice de bacterii care nu pot metaboliza dect carbonul mineral, cum sunt autotrofele sau litotrofele, care joac un anumit rol n sol. ntre acestea n primul rnd sunt bacteriile ce posed pigment asemntor cu clorofile (bacterioclorofil) i algele ce posed clorofil, care sunt organisme fototrofe. Metabolismul acestora este asemntor cu cel al plantelor superioare, energia fiind furnizat de ctre radiaiile luminoase. Snt apoi bacteriile lipsite de pigment de tip clorofilian, care i iau energia din oxidri ale substanelor minerale reduse (n mod esenial NH3 i SH2); aceast energie le permite s reduc CO2 i s metabolizeze carbonul, fiind organisme chimiolitotrofe. Printre ele se afl bacteriile nitrificatoare i unele care intervin n ciclul sulfului i fierului. Cu ajutorul carbonului mineral astfel metabolizat cu apa i cu substanele minerale luate din sol, aceste autotrofe din primul i al doilea grup realizeaz sinteza protoplasmatic, triesc, respir i ca urmare elimin CO2; n felul acesta ciclul mineral al carbonului se ncheie. Dac importana teoretic a metabolizrii carbonului mineral este foarte mare, din punct de vedere cantitativ nu are dect un rol restrns comparativ cu acela al ciclului organic ce provine de la vegetale i animale. Metabolismul carbonului organic Carbonul organic este n mod esenial de origine vegetal fiind introdus n sol prin procese multiple i sub forme variate. Prin procese naturale ca esuturi vegetale moarte, sub form de rdcini, frunze care ajung n sol odat cu moartea plantelor. Prin procese artificiale cum este ncorporarea unor vegetale parial metabolizate, sub form de gunoi natural i artificial. Carbonul organic de origine animal este din punct de vedere cantitativ mai puin important, fiind format din vieuitoarele faunei telurice dup moartea acestora sub form de cadavre. n acest caz descompunerea se realizeaz prin fenomene de putrefacie, unde rolul carbonului este foarte slab, datorit raportului C/N foarte sczut. Ca atare se va lua n considerare n mod esenial compoziia esuturilor vegetale, care reprezint o mas foarte nsemnat de materie organic n natur. Plecnd de la carbonul mineral atmosferic, de la ap i srurile din sol, vegetalele au fcut sinteza constituenilor celulari. n ceea ce privete substanele carbonate, esuturile vegetale sunt constituite din: - glucide ca monoze (hexoze-pentoze); dioze trioze, polioze, amidon, inulin, dextrin, hemiceluloz. - glucozizi ca acizi organici fici i volatili; grsimi, ceruri i rini; lignin. n tabelul 8 sunt redai principalii constitueni din diferite produse vegetale. Mai important din punct de vedere agrobiologic dect clasificarea chimic a produilor hidrocarbonai este aceea care ine seama de solubilitatea acestora, de care este
42

legat viteza de descompunere din sol. Avem din acest punct de vedere clasificarea urmtoare: - substane foarte solubile ntre care se cuprind glucidele simple i acizii organici;

Constituenii esuturilor vegetale Substana Fn Paie de ovz Paie de gru Porumb ciocli Porumb boabe Celuloza % 28,5 25,43 37,27 37,67 30,56 Pentozani (hemiceluloze) 13,52 21,33 21,67 31,50 23,54 Lignina % 28,25 20,40 21,21 14,70 15,13 Grsimi i cear 2 2,02 0,67 1,37 0,77 Proteine % 9,31 4,30 3 2,11 3,50

- substane puin solubile cum este hemiceluloza; - substane insolubile cum sunt: amidonul, celuloza, lipidele, cerurile i rinile; dintre acestea lignina formeaz o substan aparte datorit gradului su de rezisten la agenii biologici i care are tendine de a se acumula n sol. Constituenii hidrocarbonaii mai importani din punct de vedere cantitativ ai esuturilor vegetale redai n % de substan uscat sunt prezentai n tabelul 9 din care reiese c aceast compoziie este variabil n funcie de dezvoltarea plantei, adic de vrst. Compoziia esuturilor la secar n funcie de vrst (dup Pringsheim) Stadiu de cretere 30mm nspicare nflorire Maturitate Celuloz % 18,06 26,9 30,59 36,26 Pentoze % 16 21,18 22,71 22,90 Lignin % 9,9 11,8 18 17,1 Grsimi i ceruri 2,4 2,6 1,7 1,26 N total % 2,5 1,76 1,01 0,24

n decursul creterii cerealelor, se produce o sporire a proporiei de celuloz, hemiceluloz i lignin, corelat cu scderea proteinelor i mai ales a fraciunilor solubile.Ca atare esuturile plantelor n vrst vor fi mai dificil i mai lent descompuse n sol, dect ale plantelor tinere. Concentrarea n substane superioare polimerizate este nc i mai accentuat la plantele lemnoase unde proporia medie a acestei componente este urmtoarea: - Celuloz 45-55% - Grsimi, ceruri i 3-5% - Hemiceluloze 20-30% rini - Lignin 25-30% - Proteine 0,5-1% Lemnul este dificil fermentescibil n sol i rolul ligninei este din acest punct de vedere important prin mbogirea acestuia cu materie organic. Legturile acestor produse cu celuloza i gruprile uronice ale hemicelulozelor, face aceste glucide foarte rezistente la aciunea microbilor din sol. n continuare vor fi prezentate succesiv, procesele de degradare biologic n sol, a diverilor constitueni hidrocarbonai i esuturilor vegetale n funcie de
43

solubilitate de la glucidele simple, substanele solubile n ap, hemiceluloza, amidonul, peptina, celuloza, lignina, etc. Degradarea glucidelor simple i a substanelor solubile n ap Dup ce resturile de esuturi vegetale sunt ncorporate n sol, glucidele i substanele solubile sunt primele atacate de microorganisme i dispar n cteva zile, ajungndu-se la produii finali CO2 i ap. Etapele intermediare sunt ns diferite, n funcie de umiditatea, aeraia i temperatura solului, care condiioneaz intervenia fie a bacteriilor aerobe, fie a celor anaerobe sau a ciupercilor. n cazul atacului bacterian aerob se formeaz pe parcurs acizii piruvic, lactic, acetic, acetaldehida iar ca produi finali CO2 i H2O. n cazul interveniei ciupercilor aerobe se produce pe parcurs acizi gluconic, citric, oxalic, fumaric, succinic, etc. Atacul bacteriilor anaerobe are ca rezultat intermediar formarea de acizi volatili ca acidul lactic, hidrogenul, metanul i CO2. n urma aciunii fungilor anaerobi se produc acid fumaric i alcool. Aceste procese au fost urmrite n condiii de laborator dar n natur situaia este mult mai complex, deoarece produii intermediari formai sunt fie metabolizai imediat de ctre alte grupe de microorganisme, cum este cazul la Azotobacter care utilizeaz alcoolii, i acizii organici pentru sinteza proprie a compuilor si celulari, fie mineralizai complet pn la CO 2 i H2O. n ceea ce privete produii solubili n ap, a fost studiat problema zaharozei care este descompus de flora zimogen. Mai nti intervine B.megaterium care formeaz acid oxibutiric i apoi prolifereaz genul Pseudomonas care utilizeaz acest acid eliberat de primul, producndu-se i aici o reacie n lan. Reaciile de degradare sunt n mod cert cuplate cu cele de sintez, cci produsele mai simple rezultate sunt folosite de anumii germeni pentru constituirea capsulei gomoase, format din substane poliozide cu greutate molecular ridicat de tipul hemicelulozelor. Degradarea hemicelulozelor Cantitatea hemicelulozelor n resturile vegetale variaz ntre 6-30% din greutatea uscat, n funcie de specie i vrsta plantei. Hemicelulozele sunt polizaharide ce nsoesc celuloza n esuturile vegetale i care sunt grupate n pentozane i hexozane. Din pentozane fac parte:xilanul format din resturi de xiloz i arabanul din resturi de arabinoz. Din hexozane fac parte mananele constituite din resturi de manoz, glucomananele alctuite din resturi de glucoz i manoz i galactamanele, formate din resturi de galactoz i manoz. Degradarea hemicelulozelor Dintre hemiceluloze, galactanele sunt mai rezistente la atacul microbian, n timp ce xilanele i mananele sunt mai repede metabolizate, fiind descompuse de o flor nespecific. Viteza de descompunere a acestor substane depinde de cantitatea de azot accesibil i n timp se produce n mod ealonat i n ritm diferit. Astfel, n paiele de ovz care conin circa 23% hemiceluloz, se descompun n primele 4 zile 10% apoi 8,5% n urmtoarele 4 zile i numai 4,50% n cele 8 zile care urmeaz. Microorganismele care descompun hemiceluloza se succed ntr-o anumit ordine ncepnd cu bacilii nesporulai, bacilii sporulai i cocobacilii. Aproape constant apare i Azotobacter care nu este capabil s atace direct hemicelulozele, dar folosete produii intermediari de metabolism formai de celelalte grupe de bacterii. Dintre ciuperci s-au identificat n acest proces Zygorhynchus, Cuninghamella, Rhizopus, Trichoderma, Humicola, Aspergillus niger i A.fumigatus.
44

Actinomicetele au fost identificate de asemenea ca fiind active n descompunerea hemicelulozelor. Unele bacterii polifage, sunt capabile s atace i hemicelulozele. Printre acestea se numr: Alcaligenes sp.,Pseudomonas sp.,B. Circulans i Sporocytofaga myxococcoides care este o bacterie celulolitic autentic. Activitatea microflorei hemicelulolitice este foarte variat n funcie de tipul de sol i coninutul n substan organic a esuturilor vegetale. Numrul bacteriilor hemicelulolitice este cel mai mare n solurile neutre i apoi n cele acide. Degradarea amidonului Amidonul nu reprezint dect o parte foarte slab n esuturile vegetale, cu excepia seminelor unde ajunge pn la 70% din greutatea uscat i n tuberculii de cartof. n funcie de natura solului, greu sau uor, de umiditate i de temperatur, procesul de amiloliz se desfoar n mod diferit. Astfel, n terenurile de cultur mijlocii bine aerate i semisaturate n umezeal, la temperatura de 18C intervin n degradarea amidonului unele bacterii i ciuperci ca: Aspergillus, Fusarium, Rhizopus. n solurile saturate n ap i cu celelalte condiii asemntoare, se gsesc bacterii aerobe i facultativ anaerobe din genul Bacillus, mai ales B.macerans, B.subtilis i B.cereus. n aceste condiii fenomenul este mai rapid.n aceleai condiii dar la o temperatur mai ridicat pn la 33C intervin bacteriile strict anaerobe de tip Clostridium i amiloliza este n aceste din urm condiii foarte rapid. Se ntlnesc bacteriile Clostridium butyricus, Cl. Perfringens i de asemenea Clostridium pasteurianum care fixeaz azotul i ia o parte la degradarea amidonului. n lumina acestor condiii se pare c amiloliza n sol, este rezultatul activitii unei flore zimogene destul de polifage cu o dubl constituie. O microflor abundent, puin specializat, bacterian i fungic, care degradeaz amidonul pn la stadiul de dextrin, apoi dextrina este metabolizat de alte microorganisme. O microflor mai restrns i mai specializat care hidrolizeaz amidonul pn la acizi, alcooli i gaze. n ansamblu aceast activitate merge n paralel cu fertilitatea aparent a solului i cu bogia microflorei totale. Degradarea pectinei Coninutul n pectin al esuturilor vegetale este variabil de la 10-30%, n funcie de specie, de organe i de vrsta plantelor. Pectinele sunt substane cu greutate molecular ridicat care aparin grupului poliuronidelor. Ele formeaz n condiii favorabile geluri n contact cu apa i se mpart n mai multe grupri: Protopectine derivaii ale acidului poligalacturonic legai prin anumii constitueni cu membrana celular; Acidul pectic sau pectina propriu zis, care este acid poligalacturonic esterificat de alcoolul metilic; Acidul pectic sub form de acid poligalacturonic neesterificat. Acestor trei compui le corespund enzime specifice ca: protopectinaza, pectinesteraza i respectiv poligalacturonidaza. La descompunerea substanelor pectice particip unele bacterii, actinomicete i ciuperci, bacteriile anaerobe fiind agenii principali de descompunere. Bacteriile pectinolitice anaerobe sunt reprezentate prin speciile de Clostridium cum sunt:
45

Clostridium aurantibutyricum ce atac att pectina purificat ct i pectina din resturile vegetale. Clostridium felsineum care atac numai pectina din resturile vegetale. ntre speciile aerobe de bacterii se ncadreaz Bacillus polymyxa, B. macerans i reprezentani ai genurilor Pseudomonas, Arthrobacter i Corynebacterium. ntre actinomicetele pectinolitice se situeaz genurile Streptomyces i Micromonospora. Dintre ciupercile pectinolitice fac parte mai multe genuri ca: Aspergillus, Fusarium, Alternaria, Botrytis, Monilia, etc. O alt specie, ciuperca Pullularia pululans descompune toamna pectina din frunzele czute, uurnd mineralizarea acestora. Descompunerea celulozei Celuloza reprezint 45-80% din greutatea uscat a resturilor vegetale i ca atale constituie cea mai important parte a substanelor organice care se ntorc n sol. Fedorov apreciaz cantitatea de C gsit n sol sub form de celuloz la 350 milioane tone n compoziia organelor vii i la 700 miliarde tone n sol i turb. Celuloza este un polizaharid (C6H10O5) format dintr-un lan de 1:4 D glucopiranoz (celobioz), care constituie scheletul peretelui celular la plante. Celuloza este foarte rezistent la degradare, exceptnd descompunerea produs sub aciunea microorganismelor, datorit creia plantele ar primi la hectar aproximativ 15 tone CO2 pentru nutriia lor carbonat. n acest fel degradarea i mineralizarea microbian a celulozei reprezint i din punct de vedere cantitativ unul din procesele cele mai importante ce se petrec pe suprafaa globului. Degradarea biologic a celulozei a fost evideniat prima dat de Omelianschi care a studiat fenomenele descompunerii aerobe, iar apoi Vinogradscki a stabilit i rolul deosebit a degradrii anaerobe. Din hidroliza celulozei rezult glucoz i celobioz care la rndul ei este descompus n glucoz. Aceti compui apar numai excepional n sol, deoarece procesele biologice merg pn la stadiile de combustie incomplet, cu eliberare de acizi i alcooli sau complet pn la CO 2 i H2O a glucozei. Microorganismele se dezvolt direct pe fibrele de celuloz de care se fixeaz i produc hidroliza enzimatic a celulozei, n cursul creia fibrele i pierd consistena, se gonfleaz i se transform ntr-o mas cu o consisten pstoas i gelatinoas. Degradarea aerob a celulozei poate fi realizat de bacterii i ciuperci. Bacteriile celulolitice pot fi puse n eviden nsmnnd gruni de pmnt pe suprafaa unei hrtii de filtru aezate pe gel de siliciu impregnat cu o substan azotoas. Dup cteva zile de incubare la 30C apar colonii colorate diferit, n galben, crmiziu, brun deschis, roz portocaliu, verde i foarte rar brun deschis i negru. Culoarea coloniilor variaz n funcie de vrsta culturii i de specie. Microorganismele celulolitice pot fi criofile, adic rezistente la temperaturi sczute, mezofile sau termofile. Cele mai multe dintre acestea sunt mezofile sau termofile i se mpart la rndul lor n microorganisme aerobe i anaerobe. ntre microorganismele celulolitice mezofile aerobe sunt cuprinse o serie de bacterii, actinomicete i ciuperci. Bacteriile celulolitice sunt reprezentate prin mai multe genuri ce aparin ord. Cytophagales, genul Cytophaga ce se prezint sub form de bastonae scurte sau elonagt flexibilie sau ca filamente cu dimensiuni de 0,3-0,7 x 5-50um cu capetele bastonaelor rotunjite sau ascuite. Celulele i coloniile sunt colorate n nuane de galben, oranj sau rou. Cea mai rspndit specie este Cytophaga hutchinsonii.
46

Genul Sporocytophaga se prezint sub form de celule asemntoare cu Cytophaga, dar formeaz microchisturi rezistente la uscciune, specia cea mai comun fiind Sporocytophaga myxococcoides. Din ord. Myxobacteriales produc descompunerea celulozei speciile Sorangium compositum i Polyanginum celullosarum. Din fam. Pseudomondaceae face parte i specia Cellvibrio ochracea bacterie celulolitic foarte activ. Se mai cunosc ca bacterii celulolitice i specii din genurile Cellulomonas precum i Bacillus ca B. vagans i B. soli. Dintre actinomicetele celulolitice citm speciile: Streptomyces cellulosae, Streptomyces violaceus, Micromonospora chalcea i Nocardia cellulans. Ciupercile celulolitice sunt ageni activi ai descompunerii celulozei i mai ales a celulozei din materialul lemnos. Dintre cele mai rspndite sunt genurile Chaetomium, Aspergillus, Penicillium, Myrothecium i Trichoderma. n cursul descompunerii aerobe a resturilor vegetale se disting dou etape succesive: n prima faz se produce descompunerea prilor vegetale mai uor atacabile, cu participarea predominant a speciilor de Cellvibrio i Myxococcus. n a doua faz urmeaz descompunerea prilor mai rezistente la degradare cu predominana speciilor Cytophaga i a ciupercilor microscopice. Din punct de vedere chimic, celuloliza are loc tot n dou etape. La nceput se produce hidroliza celulozei pn la celobioz (C12H22O11) i ali produi mai compleci, dup care prin oxidarea acestor produi se formeaz ulterior acizi uronici. Dac hidroliza celulozei este mai puternic, mergnd pn la formarea glucozei, aceasta este mai departe oxidat pn la CO2 i H2O trecnd prin stadiul de oxiacizi: (C6H10O5)n + nH2O + O2 R-CHOH-COOH CO2 + H2O + x cal. Formarea de hidrai de carbon solubili i de oxiacizi ca produi intermediari de degradare a celulozei are mare importan n sol deoarece stimuleaz dezvoltarea fixatorilor de N2 care i folosesc n hran. Degradarea aerob a celulozei se realizeaz n condiii optime n solurile bine lucrate, aerate, bogate n N i cu climat temperat. n aceste condiii bacteriile i ciupercile celulolitice sunt active pn la adncimea de 30 cm, ceea ce corespunde practic zonei pentru dezvoltarea culturilor agricole Degradarea anaerob a celulozei Acest proces se realizeaz n special n zonele umede, mai profunde ale solului, cnd resturile vegetale sunt n mase compacte, dense , neaerate. Din punct de vedere chimic, ea reprezint o hidroliz a celulozei sub aciunea celulazelor i a celobiazei microbiene, cu formare de glucoz, din descompunerea creia rezult acizi volatili ca formic, butirici, acetic, acizi nevolatili ca succinic i lactic, precum i alcool etilic i gaze (CO2, H2 i metan). Bacteriile celulolitice anaerobe din sol sunt reprezentate prin Bacillus cellulosae hydrogenicus i Methylomonas methanica care elibereaz metan. Fermentarea celulozei cu degajare de H2 este nsoit de formarea acidului butiric i a CO2 dup reacia: (C6H10O5)n + nH2O CH3CH2COOH + CH3COOH + H2 + CO2 + x cal. n fermentaia metanic a celulozei cantitatea de gaze eliberat prezint aproximativ 1/2 din greutatea celulozei descompuse. Schema general a reaciei ar fi urmtoarea: (C6H10O5)n + nH2O CH3CH2COOH + CH3COOH + CO2 + CH4
47

Unele specii de bacterii celulolitice anaerobe sunt adaptate s triasc n intestinul uman i al animalelor, unde determin descompunerea celulozei din alimente. Bacteriile celulolitice se dezvolt la temperatura optim de 55-70C i sunt prezente n medii bogate n celuloz i azot organic i mineral cum sunt blegarul i nmolurile oreneti. Unele bacterii termofile cum sunt: Clostridium termocellus i Clostridium termocellulolyticum, degradeaz celuloza cu formare de acizi volatili i fici, alcooli i gaze n special metan. Microorganismele celulolitice mai pot contribui la distrugerea hrtiei n bibliotecile i depozitele ru aerisite i umede, provocnd pagube nsemnate. Metabolismul chitinelor Chitina este un polimer al N acetil glucozaminei ce se gsete mai ales n corpul insectelor dar i a unor ciuperci; este descompus n sol de actinomicete i unele bacterii. Metabolismul ligninelor Descompunerea ligninelor are importan deosebit pentru circulaia carbonului, ntruct aceasta reprezint cea de a doua surs a acestui element n natur, 25-30% din corpul plantelor lemnoase i 15-20% din cel al plantelor ierboase. Ligninele reprezint totodat complexul vegetal mai rezistent i din aceast cauz se acumuleaz continuu n sol, lund parte la formarea humusului. Ligninele sunt substane macromoleculare provenite prin condensarea unor alcooli aromatici cu o structur complex reticular, care cere o mare cantitate de energie pentru a fi scindat. Agenii principali ai descompunerii ligninei sunt ciupercile din ord. Agaricales, mai ales acelea ce produc putregaiul alb al lemnului, care pot ataca i celuloza. Un alt grup de ciuperci cauzeaz putregaiul brun al lemnului, dar acesta nu atac lignina. Ciupercile ligninoclastice pot fi grupate n trei tipuri i anume: - tipul Polyporus versicolor care atac la nceput lignina i apoi celuloza; - tipul Armillaria vera atac la nceput celuloza apoi lignina; - tipul Ganoderma applantum, care poate ataca simultan att lignina ct i celuloza. Lignina se descompune mai repede n condiii aerobe, n care acioneaz ciupercile i mai lent n anaerobioz cnd acioneaz mai mult bacteriile. Metabolismul taninurilor, lipidelor i cutinei Taninurile sunt descompuse n special de ctre ciupercile din genurile Aspergillus i Penicillium. n cazul cnd ating o anumit concentraie n sol ele au o aciune antimicrobian. Lipidele sunt hidrolizate cu uurin de ctre microorganisme. Cutina este descompus de bacterii din genul Pseudomonas n ritm lent. Procesele complexe ale circuitului carbonului n natursunt schiate dup Florkin n fig.29, iar interrelaiile ntre circuitul carbonului i cel al azotului sunt redate dup G. Zarnea n fig.30.

48

Microorganismele din sol i circuitul sulfului Sulful este de asemenea, un element important din punct de vedere boilogic.El intr n componena aminoacizilor metionina i cisteina, a unor vitamine, glicozide, plizaharide, alcaloizi, etc. Tranaformarea microbiologic a sulfului n sol se face n trei faze principale: 1. Mineralizarea sulfului organic, ce se petrece paralel cu mineralizarea N i P organic sub aciunea unor microorganisme ca: Proteus vulgaris, Serratia maecesens, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Clostridium sporogenes, din bacterii n condiii anaerobe i de ctre unele ciuperci ca Scopulariopsis brevicaulis ;i Aspergillus niger. n cursul mineralizrii, S se elibereaz sub form de H 2S, CH3-SH (metilmercaptan) sau de sulfat (SO42-). 2. Sulfoficarea, este procesul de oxidare a H 2S, S, S2O32- (tiosulfailor), S4O62(tetrationailor), SO32- (sulfiilor) pn la acid sulfuric, respectiv sulfai. Aceast faz este produs de sulfobacterii chimiolitoautotrofe nefilamentoase ca Thiobacillus i Sulfolcbus i filamentoase ca Beggiatoa. Mai este produs de bacteriile purpurii Chromatium i bacteriile verzi Chlorobium. Spre exemplu Thiobacillus thioxidans oxideaz sulful elementar la acid sulfuric: S + 3/2O2 + H2O H2SO4 Bacteria Beggiatoa oxideaz H2S la S: H2S + 1/2O2 S + H2O Sulful se acumuleaz n celulele microbiene sub form de incluziuni. n lips de H 2S, bacteria oxideaz S din aceste incluziuni pn la H2SO4. Folosirea sulfului elementar poate avea aplicaii practice pentru mbuntirea solurilor alcaline. Astfel, S este oxidat de microorganismele sulfoficatoare pn la acid sulfuric care micoreaz pH-ul mediului. Dar sulfoficarea poate avea i efecte negative din punct de vedere agricol. n solurile inundate se formeaz cantiti mari de sulfuri datorit desulfoficrii. n urma drenrii i desecrii acestor soluri, sulfurile se oxideaz rapid la S pe cale chimic iar S la H2SO4, datorit microorganismelor sulfoficatoare. Ca rezultat pH-ul acestor soluri ajunge la valori de 3,2-2,2 care pericliteaz viaa plantelor. Pentru a preveni acest efect negativ este necesar aplicarea amendamentelor calcaroase. 3. Desulfoficarea este procesul de reducere dezasimilatorie a sulfailor pn la H 2S. Acest proces are loc n condiii anaerobe i se datoreaz n primul rnd speciilor de Desulfovibrio ca D. desulfuricans. Bacteria reduce sulfaii H2S cu ajutorul H din substanele organice ca lactatul i piruvatul care servesc att ca surse de energie dar i ca surs de C. Putem trage concluzia c sulfoficarea duce la acidifiere n timp ce desulfoficarea produce alcalinizarea solului. n acest proces H2S rezultatul din desulfoficare nu atinge concentraii toxice pentru plante, deoarece Fe2+ din sol, ndeprteaz H2S sub form de FeS care precipit. n solurile srace n Fe2+ i irigate cu ape bogate n sulfai, H2S produs n cantiti mari produce efecte toxice la orez i la alte plante. n fig. 31 este redat circuitul sulfului dup Florkin, 1943.
49

Microorganismele din sol i circuitul fierului Fierul intr n compoziia hemienzimelor, a hemoglobinei, leghemoglobinei, F-Sproteinelor, circuitul lui cuprinznd 4 etape microbiene ce se succed dup cum urmeaz: 1. Mineralizarea fierului organic, se petrece n paralel cu celelalte procese de mineralizare a substanelor organice. Microorganismele mineralizatoare atac partea organic a compuilor cu Fe, iar acsta se elibereaz sub form mineral bi sau trivalent. Microorganismele respective pot fi bacterii din genurile Pseudomonas, Bacillus, Crynebacterium, Mycobacterium, etc.; mai pot fi actinomicete din genurile Nocardia sau Streptomyces, precum i ciuperci, toate ca organisme chimioorganoheterotrofe. Compuii organici cu Fe din humus pot fi atacai de bacterii ce aparin la genurile Metallogenium, Pedomicrobium i Seliberia. Pe suprafaa celulelor respective se depune sub form de precipitat hidroxidul feric Fe(OH)3. 2. Formarea compuilor organici de Fe, este un proces opus mineralizrii fierului organic. Aici microorganismele sintetizeaz compui organici solubili, deintori de Feb bi sau trivalent. Fierul poate fi sintetizat de unii compui organici ca acidul acetic, sau compleci ca acizii citrici, acidul 2-ceto-D- gluconic, acizii humici, etc. Microorganismele capabile de formarea compuilor organici cu Fe sunt unele bacterii i mucegaiuri (ciuperci) precum i unii licheni. Mineralizarea i formarea microbian a compuilor organici cu Fe, joac un anumit rol n procesul de podzolire a solului. Sub aciunea microorganismelor n orizontul A se formeaz Fe organic solubil, care migreaz spre orizontul B, unde sub aciunea microorganismelor mineralizatoare, Fe se elibereaz sub form anorganic trivalent. 3. Oxidarea fierului bivalent. La aceste procese particip ferobacteriile (bacteriile feroginoase i siderobacteriile). Acestea sunt organisme acvatice, dar unele se pot dezvolta i n soluri i se prezint sub form filamentoas sau nefilamentoas. La ferobacteriile filamentoase ca Leptothrix ochracea, celulele individuale sunt incluse ntr-o teac organic comun, n care se acumuleaz Fe(OH)3. Ferobacteriile nefilamentoase cuprind unele bacterii pedunculate ca Gallionella ferruginea, capsulate ca Siderocapsa treubii, i nependulate i necapsulate ca Ferrobacillus thicoxidans, la care Fe(OH)3 se depoziteaz pe penduncul, n capsul i respectiv pe suprafaa celulelor Aceste bacterii sunt considerate n prezent chimiolitoorganoheterotrofe cu excepia lui Thiobacillus ferrooxidans. Acest tiobacil oxideaz nu numai sulful elementar, sulfurile i tiosulfaii, dar i Fe2+ i asimileaz CO2 dezvoltndu-se calcopirita (CuFeS2) T. Ferrooxidans produce sulfat feric. ntr-o prim etap, pirita este oxidat la sulfat feros: 2FeS2 + 7O2 + 2H2O 2FeSO4 + 2H2SO4 + energie n continuare sulfatul feros este oxidat la sulfat feric: 2FeSO4 + 1/2 O2 + H2SO4 Fe2(SO4)3 + H2O + energie La rndul lui sulfatul feric poate oxida pirita cu forme de sulfat feros i acid sulfuric: 7Fe2(SO4)3 + FeS2 + S H2O 15 FeSO4 + S H2SO4
50

Dezvoltarea lui Th. Ferrooxidans duce la acidifierea mediilor, datorit acidului sulfuric produs. La rndul lui acidul sulfuric poate solubiliza cuprul i alte metale grele din mineralele cele conin. De aceea dezvoltarea lui Th. Ferrooxidans duce la acumularea de concentraii fitotoxice pentru plantele de cultur, a acidului sulfuric i a metalelor grele n haldele de steril luate n cultur. 4. Reducerea fierului trivalent. Acest produs se datoreaz unor bacterii facultativ sau obligat anaerobe ca B. circulans, B. polymyxa, Enterobacter aerogenas, Clostridium butyricum, etc. Aceasta n prezena substanelor organice ca glucoza, reduc fierul trivalent la Fe 2+, Fe trivalent servind ca acceptor de electroni. Mai sunt capabile de reducerea Fe trivalent i unele ciuperci din sol. Toate aceste microorganisme fier-reductoare sunt chimioorganoheterotrofe. Trebuie s menionm c oxidarea Fe2+ i reducerea Fe trivalent n sol se poate produce i fr participarea direct a microorganismelor (fig.32). 13. Microorganismele din sol i circuitul fosforului Fosforul este un element absolut necesar vieuitoarelor i intr n compoziia acizilor nucleici, a unor proteine, a unor compui macroergici (ATP), a fosfolipidelor, a fosfozaharidelor, a fitinei, etc. Ciclul fosforului redat n fig.33 se desfoar n mai multe faze, dup cum urmeaz: 1. Mineralizarea fosforului organic se desfoar n paralel cu mineralizarea compuilor organici cu N (amonificarea) sub aciunea acelorai microorganisme. Unul dintre microorganismele foarte active n mineralizarea P organic este Bacillus megaterium var. phosphaticus. n urma mineralizrii P se elibereaz sub form de ortofosfat solubil, asimilabil de ctre plante i microorganisme; n acelai timp ns ortofosfatul solubil poate trece n ortofosfai de Ca, Fe, Al, Mg, Cu i Ni care sunt insolubili. Compuii organici cu P reprezint 15-85% din cantitatea total de P din diferite soluri. ntre compuii organici cu P ai solului predomin fitina i acizii nucleici. Fitina este de origine vegetal, iar acizii organici provin de la microorganisme, plante i animale. Fitina constituie ntre 10-80% din cantitatea total de P organic din soluri. Ea este sarea de Mg i Ca a acidului fitic, iar descompunerea ei hidrolitic este catalizat de fitoz. 2. Mobilizarea ortofosfailor insolubili este procesul de solubilizare a fosfatului tricalcic, a ortofosfailor de Fe, Al, Mg, Mn, Cu, Ni, ce are loc sub aciunea acizilor produi de microorganisme i de cei excretai de rdcinile plantelor. Aici intr acizii azotos i azotic produi de microorganismele nitrificatoare, acidul sulfuric produs de microorganismele sulfoficatoare, acidul carbonic i acizii organici produi de microorganisme, precum i de rdcinile plantelor. Dintre acizii organici acidul 2-ceto-D-gluconic joac un rol deosebit n solubilizarea ortofosfailor insolubili. Mai contribuie la solubilizare i acizii citric, succinic, malic, oxalic, tartric, lactic, precum i acizii humici. 3. Transformarea meta-, piro- i polifosfailor este realizat sub aciunea unor bacterii ca Pseudomonas fluorescens, Sporocytophaga cauliformis i a unor ciuperci ca Aspergillus i Penocillium. Aceste reacii sunt catalizate de enzime, dar ele pot avea loc i sub aciunea aciditii, iar transformarea meta- i pirofosfailor poate fi catalizat i de MnO2 4. Oxidarea fosfailor i hipofosfailor are loc sub aciunea unor microorganisme aerobe i este de asemenea catalizat de enzime. 5. Reducerea ortofosfailor este produs de microorganisme aerobe, reacia respectiv fiind de natur enzimatic,. n prezena nitrailor i sulfailor , reducerea ortofosfailor este inhibat, deoarece nitraii i sulfaii sunt utilizai mai uor ca acceptori de electroni.
51

Schema general a transformrilor fosforului n sol este redat n fig. 33 dup Cosgrove.

14. Transformrile microbiene ale potasiului Microorganismele elibereaz ionii de K+ prin descompunerea srurilor de K a acizilor organici ca acidul acetic sau butiric. Ionii de K+ reacioneaz cu anionii de HO3, PO4, SO4, CO3, i formeaz sruri accesibile plantelor i microorganismelor, sau sunt fixai de ctre coloizii solului. Microorganismele mai pot elibera potasiul i prin solubilizarea silicailor. Bacteriile care sunt capabile de aceast aciune au fost denumite silicatbacterii. Printre acestea este i Bacillus mucilaginosus var. siliceus, care dup unii autori ar fi o tulpin de Bacillus circulans. Unele ciuperci ca Aspergillus niger i Penicillium nigrescens pot de asemenea elibera K + din silicai. Eliberarea K+ din silicai sub aciunea silicatbacteriilor se datoreaz acizilor (H 2CO3 i acizii organici), pe care aceste microorganisme i produc. Sistemul radicular al plantelor produce de asemeni acizi care joac acelai rol. Transformrile microbiene ale calciului Descompunerea microbian a compuilor organici cu Ca, duce la eliberarea Ca 2+, care ca i K+, poate reaciona cu anionii minerali, formnd sruri solubile i insolubile sau se fixeaz de ctre coloizii solului. i aici acizii minerali i organici produi fie de microorganisme sau de rdcini, solubilizeaz srurile de Ca insolubile. Influena calciului din sol asupra microorganismelor este redat n fig. 34. Transformrile microbiene ale magneziului Acestea sunt asemntoare cu cele ale calciului, Mg activnd unele procese microbiene din sol, ndeosebi nitrificarea i fixarea azotului atmosferic. 15. Transformrile microbiene ale microelementelor 15.1.1. Manganul se gsete n sol n form bivalent ionic (Mn 2+) la pH mai mic de 5,5 i sub form de Mn trivalent i mai ales tetravalent la pH mai mare de 8, datorit autooxidrii Mn2+. Transformrile microbiene ale manganului se produc n zona valorilor de pH de 5,5-8. n condiii aerobe acioneaz unele bacterii heterotrofe din genurile Bacillus, Corynebacterium, Metallogenium, Streptomyces precum i ciupercile din genurile Curvularia, Cladosporium, etc. Aceste microorganisme oxideaz Mn2+, precipitndu-l sub form de MnO(OH)2 (hidroxid de Mn trivalent). Procesul de oxidare a Mn2+ poate duce la apariia n sol a carenei de Mn asimilabil i are ca efect apariia unor boli de nutriie la plante. n condiii anaerobe, n prezena substanelor organice uor asimilabile, unele bacterii reduc Mn tetravalent la Mn2+; MnO2 servete ca acceptor de electroni nlocuind O2. Totodat acizii produi de microorganisme, att n condiii aerobe ct i anaerobe deviaz echilibrul chimic dintre Mn bivalent i cel tetravalent n direcia formrii Mn2+. Circuitul manganului este redat schematic dup Starkey n fig. 35. 15.2. Seleniul. plante seleniul este prezent sub form de selenio - aminoacizi, n care Se nlocuiete S n structura metioninei i Se-metilcisteinei. Ambii Se-aminoacizi din resturile
52

vegetale se mineralizeaz sub aciunea microorganismelor din sol. Seleniul apare sub form de selenii (SeO32-) i selenai (SeO42-). Microorganismele din sol sunt capabile i de oxidarea seleniului metalic i al seleniurilor (Se2-) la selenai. O alt transformare microbian a seleniului n sol este reducerea seleniilor i selenailor la Se metalic. Aceast capacitate a fost demonstrat la unele bacterii cum sunt Clostridium, Corynebacterium i ciuperci ca Rhizobium, precum i la unele levuri i mucegaiuri. Compuii cu Se (selenii, selenai, Se-aminoacizi), pot fi metilai sub form de produs gazos numit dimetilselein (CH3-Se-CH3). Acest proces poate fi realizat de unele ciuperci ca Aspergillus, Cephalosporium, Fusarium, Penicillium, ca i de unele bacterii. 15.3. Zincul. Microorganismele n urma descompunerii resturilor vegetale elibereaz zincul sub form solubil (Zn2+). Microflora solului realizeaz aceast solubilizare prin acizii minerali i organici produi. n sens invers, prin diminuarea aciditii, microorgaismele micoreaz solubilitatea Zn. Tiobacilii oxideaz S din ZnS la acid sulfuric i elibereaz ZN SUB FORM DE Zn2+ care rmne n soluie datorit acidului sulfuric. H 2S produs de microorganisme ndeprteaz Zn prin formarea de ZnS care precipit. Insolubilizarea microbian a Zn provoac la pomii fructiferi o caren manifestat prin micorarea limbului frunzelor, boal ce poate fi prevenit prin tratarea solului cu sulfat de zinc (ZnSO4). 15.4. Cuprul. Descompunerea microbian a resturilor vegetale poate duce la micorarea concentraiei cuprului solubil, datorit unei reacii chimice n care sunt implicai produii microbieni formai n cursul descompunerii. Tiobacilii pot solubiliza Cu din minereuri sulfuroase cum este calcopirita (CuFeS 2), iar Thiobacillus ferrooxidans poate oxida att S ct i Cu monovalent din Cu 2S. Hidrogenul sulfurat (H2S) format pe cale microbian poate precipita Cu 2+ sub form de CuS. Microorganismele din sol au capacitatea de transformare i a altor microelemente ca Mo, V, Co, Ni, Pb, Cd, Si. 4. INFLUENTA FACTORILOR ECOLOGICI ASUPRA MICROORGANISMELOR Influena pH-ului Pentru marea majoritate a micropopulaiei solului, pH-ul optim este cel apropiat de neutralitate. Aa se explic de ce n solurile cu reacie neutr se gsete cea mai bogat i variat microflor. Dup preferinele fa de pH-ul solului, microorganismele pot fi grupate n: - Neutrofile, care prefer un pH n jur de 7. Din aceast categorie fac parte cele mai multe i mai importante microorganisme din sol (Azotobacter, bacteriile nitrificatoare autotrofe, microorganismele celulolitice cele mai active, actinomicetele). - Acidofile, a cror dezvoltare maxim este la un pH n jur de 3 (genul Thiobacillus). - Bazofile, cu o dezvoltare maxim la un pH mai mare de 8 (Bacillus ureolitici). - Indiferente sunt majoritatea ciupercilor. pH-ul solului poate fi considerat ca un factor de reglaj al competiiei pentru hran. De exemplu, ciupercile, care suport uor (chiar preferabil) reacia acid a solului, concureaz toate celelalte microorganisme din solurile acide. Calcarizarea solurilor acide stimuleaz evident activitatea lor biologic. Cu ct pH-ul solului neamendat este mai sczut, cu att este stimulat mai puternic activitatea microorganismelor. Exist o corelaie ntre coninutul de substane nutritive i reacia solului, dovedit prin schimbul de ioni. Schimbul este ntr-un raport echivalent ntre ionii de hidrogen produi de
53

rdcinile plantelor n timpul respiraiei i a asimilrii substanelor nutritive, cu bazele absorbite prin schimb cu mineralele argiloase i coloizii organici. Dezalcalinizarea permanent i formarea acizilor, n cadrul descompunerii substanelor organice, duce la acidifierea solului. n cazul cnd mineralizarea, degradarea i unele msuri de fertilizare nu pot acoperi dezalcalinizarea, aciditatea se menine. Aceasta duce la o restructurare a microorganismelor, predominnd ciupercile care prefer aciditatea i bacteriile anaerobe. Consecinele sunt urmtoarele: microorganismele respective descompun materialul din care se formeaz humusul i produc substane de inhibare a creterii; se formeaz humusul brun, care duce la podzolirea solului. Influena temperaturii Dependena fa de temperatur a microorganismelor este, n general, mai mare dect cea a plantelor verzi. Temperatura este un factor foarte important pentru cantitatea de humus format n solurile din regiunile umede cu clim temperat. Limitele optime ale temperaturii pentru microorganismele din sol sunt ntre 20-30 oC. Bacteriile au o adaptabilitate foarte mare la oscilaiile de temperatur. Referindu-ne la dinamica sintezei i descompunerii humusului, s-a constatat c odat cu scderea temperaturii scade, n general i activitatea microorganismelor. n funcie de adaptarea la factorul termic, microorganismele pot fi: - Psihrofile, cele care i desfoar activitatea la temperaturi sczute (cea mai mare parte a micropopulaiei solurilor polare). - Mezofile sunt microorganisme a cror optim de activitate metabolic este n jur de 30oC. n acest grup se ncadreaz cele mai multe i mai importante bacterii din solurile cu clim temperat. - Termofile sunt microorganisme al cror metabolism este intens la temperaturi relativ ridicate. De exemplu, specii de microorganisme din gunoiul de grajd. Influena apei n sol Activitatea biologic a unui sol tinde s se diminueze odat cu scderea coninutului n ap, dar contrar celor observate la plante, punctul de ofilire (pF = 4,2) nu constituie un prag indicator al ncetrii activitii microbiene. Se apreciaz c limita superioar oricrei activiti biologice corespunde la pF= 5,5-5,6. Uscarea solului peste aceste valori antreneaz moartea tuturor microorganismelor. Aceast particularitate a microorganismelor fa de plantele superioare se explic n primul rnd prin presiunea osmotic mai ridicat din celulele microbiene; n al doilea rnd bacteriile din sol nu pierd ap prin transpiraie ca plantele superioare i n al treilea rnd suprafaa de absorbie la microorganisme fa de masa protoplasmatic egal, este mai mare ca la plante. Moartea microorganismelor la umiditate sczut este determinat de mai muli factori ca, durata i nivelul uscrii, tipul microorganismului, tipul de sol i structura solului. n funcie de nevoile de ap, microorganismele se mpart n mai multe grupe: Microorganisme hiperxerofile sunt germeni al cror prag este superior valorii pF = 4,9. Aici majoritatea microorganismelor sunt cele amonificatoare, amilolitice i cele care degradeaz substanele vegetale complexe. Microorganismele xerofile sunt cele al cror prag este cuprins ntre pF = 4,9-4,2. Aici se includ germenii care degradeaz celuloza, cei care oxideaz sulful, o parte din microorganismele amilolitice, amonificatorii ureei i cei care produc nitrificarea sulfatului de amoniu. Microorganismele hidrofile includ germeni care au pragul pF = 2. Aici se gsesc ageni care descompun carboximetilceluloza, ce fixeaz azotul atmosferic, precum i o parte dintre nitrificatorii sulfatului de amoniu.
54

Existena pragurilor diferite ridic probleme de ordin practic deosebit de importante pentru agricultur. Astfel, una dintre consecine este predominarea selectiv a unor procese microbiene asupra altora. Aceasta se ntmpl n cazul umiditii situate n vecintatea punctului de ofilire, cnd predominarea proceselor de celuloliz asupra amonificrii, are drept urmare imobilizarea total sau parial a azotului mineral. De asemenea, n cazul umiditii sczute predomin procesele de amonificare, fapt ce antreneaz o acumulare de azot amoniacal remarcat n solurile n curs de uscare. Diferitele grupe de microorganisme au un grad variat de rezisten fa de uscciune. Astfel, ciupercile i bacteriile sunt mai sensibile, comparativ cu actinomicetele. Influena energiei radiante Lumina solar are, adesea, o influen duntoare asupra microflorei solului, chiar i asupra algelor care sunt fotosintetizante. Aciunea bactericid a lumii se datoreaz mai ales radiaiilor din domeniul albastru-violet al spectrului, care induc n celulele microbiene formarea de peroxizi sau determin hidroliza proteinelor. Radiaiile ultraviolete au o foarte puternic aciune bactericid la lungimile de und cuprinse ntre 2000 i 3000 . Efectul lor n sol este minim, din cauza puterii reduse de ptrundere n acest mediu. Lumina difuz a zilei este necesar activitii vitale a microbilor sintetizai din sol. Lumina mai slab i o umiditate mai ridicat favorizeaz descompunerea microbian a humusului. Prezena n sol a unor elemente radioactive, mai evident n solurile formate din roci vulcanice, stimuleaz formarea de nodoziti la leguminoase, activitatea bacteriilor din genul Azotobacter, a proteolizei i a denitrificrii. Activitatea microbian a diferitelor soluri Diferitele tipuri de sol, formate sub influena unui complex de factori, a dus la o mare variaie taxonomic a microorganismelor care l populeaz. S-a constatat c, paralel cu modificarea tipurilor de sol, se schimb i micropopulaia, exprimat prin dominarea unor specii, dispariia altora sau reducerea numrului lor. Variaia activitii microflorei din sol, n funcie de tipul de sol, nu trebuie legat numai de factorii climatici, ci i de modificrea condiiilor de nutriie pentru microorganisme. P. Papacostea (1972) a pus n eviden existena, n solurile din ara noastr, a unor microorganisme indicatoare, caracteristice unor tipuri de sol. Astfel, a stabilit o clasificare a solurilor, pe baza microorganismelor specifice i anume: Soluri cu Mucor rammanianus (foarte acide, specifice pajitilor alpine i acelora de sub pdure de molid), care nu sunt utilizate pentru exploatarea agricol. Soluri cu Pseudomonas acidophilus i P. pseudogley, din care fac parte solurile podzolice i pseudogleizate. Soluri cu Pseudomonas lemonnieri i P. aureofaciens, care sunt cele mai fertile. Activitatea microbian din sol este influenat i de textura i structura solului care, la rndul lor, depinde de compoziia chimic a diferitelor fracii minerale i organice din sol; compoziia chimic este, i ea, n mare msur, rezultat al activitii microbiene a solului. Pentru acelai tip de sol, exist o difereniere a distribuirii microorganismelor i a activitii lor n funcie de mrimea agregatelor. Microflora fiecrui tip de sol se modific, adesea, n cursul aceluiai an, n funcie de variaia factorilor climatici, adic apare o variaie sezonier a microflorei. n zonele temperate, intensitatea maxim a proceselor microbiene din sol s-a constatat primvara i uneori, toamna; mai sczut iarna i vara. Variaia sezonier afecteaz n primul rnd, straturile superficiale ale solului, diminundu-se n adncime. Pe lng variaiile sezoniere, microflora solului poate suferi variaii n decurs de cteva zile sau chiar n timp de 24 de ore.
55

5. INTERRELAIILE DINTRE MICROORGANISMELE DIN SOL S-a mai menionat anterior c, ntre microorganismele din sol pot fi pot fi raporturi de convieuire, ct i raporturi antagoniste. Un exemplu tipic de conlucrare i activitate reciproc este cel oferit de popularea iniial a rocilor, cnd bacterii, ciuperci i alge albastre triesc n vecintate, sprijinindu-se i completndu-i activitatea. n timpul circuitului biologic al substanelor, apar de asemenea raporturi care se evideniaz prin activitatea i colaborarea lor reciproc complementar. Un alt exemplu edificator este cel privind prelucrarea resturilor vegetale la care particip, adesea, n acelai timp, pe baza "diviziunii muncii", bacterii, ciuperci i actinomicete: bacilii fitofagi i mucoraceele prelucreaz compuii uor valorificabili ai carbonului (acizi, zahr i amidon) i compui ai azotului (proteine), pe cnd altele (Cellvibrio i Pseudomonas) prelucreaz celuloza, hemiceluloza i pectina, iar bazidiomicetele prelucreaz ligninele. Grupurile de microorganisme menionate, adesea, nu-i desfoar activitatea concomitent, ci n succesiunea menionat, adic n cadrul unei metabioze. Metabioza sau comensalismul bacterian Prin acest fenomen se nelege relaiile dintre reprezentanii a dou sau mai multe specii de microorganisme (care convieuiesc i se succed) n care unul dintre microorganisme profit iar cellalt n aparen, nici nu profit i nici nu este influenat negativ. Metabioza reprezint raporturi generale i trepte superioare de convieuire, care se realizeaz prin mai multe mecanisme: Un microorganism produce metabolii necesari altuia. Un exemplu de metabioz foarte strict este activitatea microorganismelor denitrificatoare: amoniacul este transformat, n sol, n nitrit de Nitrosomonas, iar nitritul n nitrat de Nitrobacter. Nitratul produs de Nitrobacter este neutilizabil de Nitrosomonas, care oxideaz amoniacul. Pentru a se putea prelucra autotrof o cantitate suficient de CO 2, transformarea nitriilor n nitrai se va efectua mult mai repede dect transformarea amoniacului n nitrii, deoarece ctigul de energie, n cazul formrii nitriilor din amoniac, este mult mai mare dect la formarea nitrailor din nitrii. n metabioaza transformrii sulfului n hidrogen sulfurat i sulfat, sulful produs n a doua etap poate fi utilizat de ctre bacteriile denitrificatoare. La descompunerea celulozei particip trei micropopulaii, n mod succesiv. Micropopulaia iniial se dezvolt pe seama celulozei din resturile vegetale. Produii rezultai (glucoz, acizi organici) sunt utilizai de micropopulaia secundar. Pe seama microorganismelor moarte din micropopulaiile primare i secundare se dezvolt micropopulaia teriar. Un microorganism degradeaz sau inactiveaz o substan care are un efect toxic asupra celuilalt microorganism. De exemplu, unele microorganisme degradeaz sau inactiveaz unele antibiotice, favoriznd astfel dezvoltarea microorganismelor care sunt sensibile la antibioticul respectiv. Un microorganism altereaz mediul, din punct de vedere fizico-chimic. n acest caz, este interesant metabioza ce se realizeaz ntre bacteriile aerobe i cele anaerobe din sol,
56

care explic faptul c bacteriile anaerobe se pot dezvolta i n straturile superioare, bine aerisite, ale solului. Un exemplu elocvent este cauza metabiozei dintre bacteriile aerobe i cele anaerobe n cadrul agregatelor particulelor din sol: cele aerobe se dezvolt pe suprafaa agregatelor i consum O2, mpiedicnd, astfel, difuzarea oxigenului n interiorul agregatelor, prin aceasta favorizeaz dezvoltarea bacteriilor anaerobe din interiorul agregatelor. Raporturi antagoniste Antagonismul const n relaii n care un microorganism sau un fag exercit o aciune defavorabil asupra unui alt microorganism. Fenomenul apare cnd un organism secret n mediu produse ale activitii vitale care inhib dezvoltarea altui organism sau l omoar. n sol apar urmtoarele aspecte de antagonisme ntre microorganismele care l populeaz: - Antagonismul microbian propriu-zis, care se realizeaz prin: Concuren pentru sursa de hran, ce apare cnd dou specii au necesiti nutritive asemntoare. Specia cu o cretere rapid mpiedic dezvoltarea speciei cu cretere lent. De exemplu, la nceputul descompunerii resturilor vegetale i animale, bacteriile se dezvolt abundent, n timp ce actinomicetele nu se dezvolt. Dup epuizarea substanelor uor asimilabile, bacteriile mor. n locul lor apar actinomicetele care se multiplic rapid, consumnd resturile organice care nu au fost descompuse de bacterii. Modificarea mediului prin produi metabolici. De exemplu, acidul lactic i acidul butiric, produi ai bacteriilor de fermentaie, acioneaz asupra tuturor microorganismelor asociate i, astfel mpiedic multiplicarea bacteriilor de putrefacie. Tot aici, trebuie menionat i fenomenul de antibioz, cnd antibioticul produs de un microorganism poate elimina dezvoltarea altor organisme din sol. De exemplu, Streptomyces grisseus produce streptomicin, care inhib activitatea bacteriei Bacillus subtilis. Parazitismul este fenomenul prin care un fag sau un microorganism se dezvolt pe seama i n dauna altui microorganism. Dup cum s-a mai menionat, fagii paraziteaz bacterii, actinomicete, cianobacterii i ciuperci, al crui mecanism a fost, de asemenea, descris anterior. Sunt i bacterii i actinomicete care lizeaz alte bacterii, respectiv ciuperci sau alge. Bacteriile micolitice sunt mixobacterii sau tulpini de Bacillus i Pseudomonas, iar actinomicetele micolitice sunt streptomicete i nocardii. Liza la cianobacterii i la algele verzi este efectuat de mixobacterii i alte bacterii, precum i de unele tulpini de streptomicete. Sunt i cazuri cnd att parazitul ct i gazda sunt ciuperci. De exemplu, Penicillium vermiculatum este parazit pe Rhizoctonia solani. Aceasta din urm poate fi parazit la rndul ei pe alte ciuperci, de exemplu pe Mucor recuvus. Prdtorismul (predaia) este un act de agresiune cnd un microorganism (agresor) atac pe un altul (prada) pe care l captureaz, ingereaz i diger. De exemplu, bacteriile sunt o hran a protozoarelor (protozoarul Rhizopoda consum n timpul existenei sale circa 40.000 de bacterii). Prin aceasta, ns, nu se reduce numrul bacteriilor, ci se poate, uneori, mri intensitatea proceselor fiziologice ale bacteriilor. Astfel de relaii pot fi considerate ca relaii de simbioz. Sunt i ciuperci prdtoare care consum animale mici, bacterii prdtoare, protozoare, metazoare i chiar bacteriofagi. Studiul raporturilor antagoniste dintre diferii reprezentani ai micropopulaiei solului prezint interes n sensul dirijrii lor pentru protecia plantelor cultivate, excluznd astfel mijloacele chimice de combatere, care prezint multe neajunsuri. Simbioza (mutualismul) Simbioza este o form de convieuire ntre dou sau mai multe specii i const ntr-o nutriie ncruciat: fiecare simbiont produce un metabolit pe care nu-l poate produce cellalt.
57

n formele ei superioare, simbioza const i ntr-o ptrundere morfologic reciproc a ambilor parteneri (ex. lichenii). Uneori, n relaiile simbiotice se pot observa i trsturi parazitare. Simbioza poate ave loc ntre parteneri aparinnd unor grupe diferite de microorganisme i anume: a) ntre diferite bacterii, de exemplu, simbioza dintre bacteriile denitrificatoare i cele fixatoare de azot, pe de o parte i bacteriile celulolitice, pe de alt parte. (Simbioza const n schimbul de surs de C i energie i de surs de N). b) ntre bacterii i ciuperci care se bazeaz, mi ales pe un schimb de factori de cretere. c) ntre bacterii i alge, de exemplu, ntre Azotobcter i unele alge. d) ntre bacterii i protozoare. S-a constatat c, n prezena protozoarelor, culturile bacteriene respir mai intens, iar cele de Azotobacter fixeaz mai mult N2. Multe protozoare conin bacterii endosimbiotice, de exemplu, ciliatul Spirostomul teres conine Chromatium vinosum. e) ntre ciuperci i alge, de exemplu, lichenii. Ei reprezint forma superioar de simbioz dintre microorganisme. Simbioza lichenilor acioneaz asupra formei, metabolismului i nmulirii organismelor participante. La formarea lichenilor particip adesea, din partea algelor, cianoficee filiforme i cloroficee unicelulare, iar din partea ciupercilor, de preferin, ascomicete i, numai rareori, bazidiomicete.

6. INTERRELAIILE DINTRE PLANTELE SUPERIOARE I MICROORGANISMELE DIN SOL Plantele superioare, dezvoltndu-se n acelai mediu natural (sol) cu microorganismele, intr adesea cu acestea n concuren pentru hran. Poate c termenul de "concuren" nu este cel mai potrivit, deoarece prezena bacteriilor n sol poate s aib un efect favorabil asupra plantelor de cultur, i invers, plantele de cultur pot avea o aciune favorabil asupra florei bacteriene din sol. Aspectul cel mai concludent este cel privind relaiile dintre rdcinile plantelor i microorganisme. Se apreciaz c ntre microorganismele din sol i plantele superioare se stabilesc relaii de simbioz. Apreciind beneficiile reciproce ntre microorganismele simbiotice ca parazii care, "mpreun cu specia gazd, au evolut pn la un stadiu de toleran mutual complet, astfel nct ele sunt n mod constant prezente n fiecare individ al speciei gazd (Drgan I Kiss, 1986). Din cele expuse, rezult c simbioza, n acest caz, este o infecie atenuat, potenial duntoare unuia dintre parteneri. De aceea, n anumite condiii, simbiontul poate deveni patogen. n cele ce urmeaz ne vom referi la cteva aspecte ale relaiilor dintre microorganisme i plantele superioare (simbioza dintre rizobii i plantele leguminoase, ca i alte simbioze dintre microorganisme i plantele superioare, au fost prezentate cnd s-a descris, n detaliu fixarea simbiotic a azotului atmosferic). Aspectul cel mai important l considerm cel privind relaiile dintre sistemul radicular al plantelor i microflora solului. Pentru aceasta este necesar s definim cteva noiuni (spermatosfera i rizosfera). Spermatosfera este zona de sol care nconjoar seminele n curs de germinare. n aceast zon, numrul microorganismelor, n special cel al bacteriilor, este mult mai mare dect n zona fr semine n curs de germinare. Aceasta, pentru c microorganismele utilizeaz substanele eliminate de semine n timpul germinrii lor i produc, la rndul lor, fitohormoni care stimuleaz germinarea i apoi creterea plantei. n mod treptat, spermatosfera se transform n rizosfer.
58

Rizosfera Rizosfera este zona de sol care nconjoar rdcinile i este influenat de acestea din punct de vedere fizic, chimic i biologic, datorit aciunilor specifice dintre microorganismele solului i plantele superioare. n cadrul rizosferei sunt trei subzone (dup Berezova, 1950) care se deosebesc ntre ele att n privina densitii microbiene, ct i prin structura speciilor de microorganisme. Prima zon, numit "rizosfera intern" (rizosfera propriu-zis), are o raz de 0-0,5 cm. Ea cuprinde microorganismele de la suprafaa rdcinilor. A doua zon, numit ''zona periradicular", cuprinde microorganismele care se gsesc la o distan de 0,5 cm de rdcin. A treia zon sau "rizosfera extern" ("edatosfera") cuprinde microorganismele care se gsesc la o distan mai mare de 0,5 cm de rdcin. Prezena mai multor microorganisme (n special bacterii) n rizosfer dect n solul nerizosferic (fr rdcini), se numete efect rizosferic. Intensitatea efectului rizosferic la bacterii se exprim prin raportul R/S (rizosfer/sol nerizosferic) care, n general este de 5:10 (la actinomicete, ciuperci, alge i protozoare R/S este ntre 2 i 3). Numrul bacteriilor n rizosfer este influenat de urmtorii factori: - Distana dintre suprafaa rdcinii i particulele de sol. Pe suprafaa rdcinii se gsesc cele mai multe bacterii. - Zonele rdcinii. Solul din jurul perilor radiculari conine mai multe bacterii dect cel din jurul celorlalte zone ale rdcinii. - Distana dintre zonele rdcinii i suprafaa solului. Zonele rdcinilor mai apropiate de suprafaa solului au o rizosfer mai bogat n bacterii dect zonele rdcinilor, de pe aceeai plant, care se gsete la adncime. - Specia plantei. n rizosfera gramineelor perene se gsesc mai multe bacterii dect la cele anuale, iar la lucern i trifoi mai multe dect la leguminoase. - Faza de vegetaie. Flora bacterian din rizosfer crete n cursul dezvoltrii plantei, ajungnd la o valoare maxim n perioada nfloritului, dup care scade evident. - Coninutul solului n substane nutritive. n solurile fertile, raportul R/S este mai mic dect la solurile srace. Efectul rizosferic se manifest nu numai sub aspect cantitativ (numr de microorganisme), ci i calitativ, fapt ce const n modificarea echilibrului dintre diferite grupe de microorganisme din sol. n rizosfera plantelor predomin bacteriile nesporogene, bastonaele Gram-negative din genurile Pseudomonas, Flavobacterium, Achromobacter i Agrobacterium (n rizosfera unor plante se dezvolt i Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum .a.). Relaiile dintre rdcinile plantelor i microorganismele din rizosfer Aportul plantelor. Rdcinile influeneaz, din punct de vedere mecanic, structura solului, elibereaz CO2, secret metabolii cu aciune energetic, enzimatic, care activeaz sau inhib creterea lor, lsnd resturi de esuturi care sunt utilizate ca hran de microorganismele din sol. Bacteriile din rizosfer sunt acelea care utilizeaz excreiile radiculare i substanele provenite din exfolierea esuturilor radiculare. Excreiile radiculare conin: aminoacizi, vitamine, acizi organici simpli, zaharuri, baze azotate, enzime, glucozide .a. Bacteriile cu un potenial ridicat de sintez a substanelor biologic active din rizosfer, cu o mare capacitate de nmulire i capabile s se hrneasc cu produsele de eliminare ale rdcinilor, ca i acelea care prin metabolismul lor produc substane ce inhib nmulirea altora, ajung dominante n structura microbiologic a rizosferei. Cantitatea i calitatea produilor eliminai de rdcinile plantelolr sunt determinate, pe lng baza ereditar, i de unii factori externi, dintre care menionm: condiiile de nutriie, umiditatea, lumina, pH-ul, temperatura, aeraia i altele care condiioneaz buna cretere i dezvoltare a plantelor i, n special, a sistemului radicular.
59

Aportul bacteriilor const n urmtoarele: - mbuntesc condiiile nutritive ale plantelor prin mineralizarea compuilor organici, producnd N, P, K, S, Ca etc. sub form accesibil plantelor. - Stimuleaz creterea plantelor prin fitohormonii pe care i produc i care sunt absorbii de rdcinile plantelor. Principalele specii microbiene care au aceast capacitate sunt: Pseudomonas sinuosa, P. fluorescens, P. desmoliticum, Bacillus mesentericus flavus .a. - Descompun unele substane fitotoxice, cum este cumarina. - Au efect fitosanitar prin antagonismul ce are loc ntre microorganismele saprofite i cele patogene. Rolul sanitar al microorganismelor n rizosfer mai const n faptul c ele consum unele substane eliminate de rdcinile plantelor care pot deveni duntoare, cnd s-ar acumula ntr-o cantitate mare. Micoriza sau simbioza ciupercilor cu rdcinile plantelor Micoriza este rezultatul simbiozei ciupercilor cu multe monocotiledonate (de exemplu, orhidee) i dicotiledonate superioare (de exemplu, plantele lemnoase i ierboase), precum i cu muchii (Bryophyte) i ferigile (Pteridophyta). Ciupercile de micoriz iau de la plante substane nutritive organice (glucide, vitamine i ali factori de cretere) i, n schimb, favorizeaz absorbia apei i a substanelor nutritive minerale (P, N, K .a.). Se citeaz cazuri cnd ciupercile de micoriz produc fitohormoni i apr plantele de unii parazii. Aspectul de simbioz dintre plante i ciuperci este nc mult discutat, n sensul c nu se tie precis dac este vorba de simbioz, parazitism sau comensalism. Ceea ce este cert este c micorizele arborilor sunt simbioze. n ceea ce privete "acuzaia" de parazitism, menionm c ciupercile asociate cu rdcinile arborilor cu funcie de micoriz se deosebesc de paraziii adevrai ai rdcinilor prin aceea c nu acioneaz toxic asupra gazdei, ci, din contr, stimuleaz creterea ei. Micorizele pot fi ectotrofe sau endotrofe. Micorizele ectotrofe sunt frecvente la arbori (Pinaceae, Betulaceae, Fagaceae), a cror rdcini nu au periori radiculari. Rdcinile acestora sunt acoperite cu un manon micelian, de la care se emit unele hife spre exterior (sol), iar altele spre interior. Acestea din urm ptrund ntre celulele parenchimului cortical al rdcinii i formeaz o reea intercelular numit "mpletitura lui Harting". Cele mai frecvente ciuperci simbiotice sunt bazidiomicetele superioare (mai rar forme inperfecte sau ascomicete). Micorizele endotrofe sunt mai frecvente dect cele ectotrofe, gsindu-se la arbori, arbuti, plante ierboase ale cror rdcini sunt normale (cu peri radiculari). n acest caz, ciupercile endotrofe emit hife n spaiul intercelular i n interiorul celulelor scoarei i epidermei. Totodat emit hife i spre exterior. Hifele intracelulare ale micorizelor endotrofe sunt digerate de planta gazd. n acest caz, planta gazd care utilizeaz produii de digestie poate fi considerat ca un parazit al ciupercii. Trebuie s reinem, totui, c digestia unei pri a hifelor ciupercilor de ctre plante are un rol important n stabilirea echilibrului fiziologic dintre ciuperci i planta gazd. Digerarea ciupercilor (funcologia) trebuie privit, n primul rnd, ca o reacie de aprare a plantei. Avantajele i dezavantajele convieuirii dintre cei doi parteneri depind, n primul rnd, de activitatea individual a partenerului respectiv. Cnd planta gazd este puternic, se menine echilibru necesar prin digerare de ciuperci. Cnd activitatea individual a plantei gazd este n dificultate, se poate ca ciuperca - partener al simbiozei - s devin parazit i deci s duneze plantei. E posibil s apar i fenomenul invers. Dezvoltarea micorizei este determinat, pe lng nsuirile fiziologice ale partenerilor simbiozei i de condiiile de mediu, n primul rnd, de nsuirile fizice i chimice ale solului.

60

n solurile de pdure, ciupercile care formeaz micorize au viaa nelimitat, iar n cele supuse unei inundaii de durat sunt distruse complet. Solurile pajitilor sunt, n general, lipsite de ciuperci care formeaz micoriza. Majoritatea ciupercilor de micoriz prefer solurile cu o reacie puin acid. Exist i forme care prefer solurile acide sau puternic alcaline. Se pare c humusul are o influen direct i pozitiv asupra micorizei. Coninutul solului n vitamine i aminoacizi influeneaz rspndirea i activitatea ciupercilor care formeaz micorize. Sunt i cazuri cnd solul conine substane care inhib creterea ciupercilor i, prin aceasta, dezvoltarea micorizei. Folosirea micorizei n agricultur este o problem n cercetare, cu perspective promitoare, privind inocularea solului i a puieilor cu ciuperci de micoriz.

Microbiologia fermentaiilor fermentaiilor Microbiologia

Microbiologia fermentaiilor studiaz caracteristicile biologice i biochimice, precum i condiiile optime de activitate ale microorganismelor care produc transformri chimice n diferite substraturi, cu formarea unor cantiti relativ mari de substane cu valoare util sau economic. De asemenea, ea studiaz rolul microorganismelor n apariia unor modificri utile a diferitelor produse alimentare, modalitile de a dirija aceast activitate microbian, ca i posibilitile de combatere a microorganismelor duntoare pentru evoluia normal a proceselor fermentative sau pentru buna conservare a produselor alimentare. Fermentaiile sunt procese biochimice determinate de enzimele unor microorganisme cum sunt bacteriile, levurile, mucegaiurile care au proprietatea de a degrada n condiii de anaerobioz diferii compui organici ai carbonului cu formarea de substane cu o condiie chimic mai simpl. Din descompunerea anaerob a hidrailor de carbon rezult o serie ntreag de produi finali cu 1, 2, 3 sau 4 atomi de carbon, care apar obinuit prin degradarea glucozei pn la acid piruvic. De cele mai multe ori unul dintre produii rezultai predomin cantitativ i ca atare caracterizeaz procesul de, fermentaie alcoolic, lactic, butiric, propionic etc. Termenul generic al fermentaiei (lat.fervere = a fierbe) a fost ales pentru a indica aspectul de lichid care fierbe, caracteristic pentru faza de intensitate maxim a procesului fermentativ, aceea n care, datorit eliberrii CO 2 sub form de bule de gaz, se produce o efervescen a mediului lichid n special n vasele foarte mari (de exemplu la mustul de struguri care fermenteaz). Iniial fermentaiile se produceau sub aciunea micoflorei "spontane", slbatice, care se gsete pe suprafaa sau n interiorul produsului supus fermentaiei. Aceste microorganisme sunt slab sau inegal active, sau n amestec cu specii duntoare, a cror activitate diminueaz calitatea produsului final. n prezent pentru a se preveni aceste inconveniene se recurge la microorganisme selecionate, cu ajutorul crora se obin produse de calitate superioar, se mbuntete randamentul i se scurteaz durata procesului tehnologic. Microorganismele utilizate n procesele fermentative de tip industrial au urmtoarele caliti ce pot fi astfel sintetizate: - cresc rapid i pot fi uor cultivate n cantiti mari pe medii ce conin substanele organice corespunztoare;
61

- au capacitatea de a-i menine constant proprietile fiziologice, n anumite condiii de cultur, producnd uor i n cantiti mari, enzimele necesare pentru transformarea substratului n sensul dorit; - realizeaz aceste modificri, cu formarea unor produi folositori, n condiii relativ simple i puin costisitoare. Microorganismele de utilitate industrial sunt astzi folosite pentru procese ca: - biosinteza a diferite substane chimice (alcooli, acid acetic, acid lactic, acid citric, aceton, antibiotice); - producerea pe cale fermentativ a unor alimente (produse lactate, brnzeturi) a unor buturi alcoolice (vin, bere) i a furajelor nsilozate; - obinerea de produse folosite n industria textilelor (fibre de in, cnep prin topire). Microbiologia industrial mai studiaz i aplic metodele de combatere a alterrilor microbiene a alimentelor cu ajutorul conservrii prin refrigerare, sterilizare, fermentaii i alte procese tehnice. 1. Fermentaia alcoolic Alcoolul etilic sau etanolul (CH3CH2OH) se obine prin fermentarea complet, n special de ctre unele drojdii, a diferite zaharuri, urmat de separarea prin distilare i purificare a alcoolului obinut. Fermentaia alcoolic este una din cele mai importante fermentaii industriale, deoarece alcoolul este ntrebuinat curent n industria alimentar, chimic, farmaceutic, a parfumurilor i cauciucului. Materiile prime folosite la fabricarea alcoolului sunt ieftine, abundente n natur i sunt grupate astfel: - materii prime amidonoase, rezultate din cartof, porumb, orz, secar, care se pot utiliza dup transformarea hidrolitic a amidonului din compoziia lor n zaharuri mai simple, fermentabile de ctre levuri; - materii prime zaharoase, provenite din sfecla pentru zahr sau trestia de zahr, sucurile de fructe, melasa rezultat ca deeu de la fabricarea zahrului i leiilor sulfitice ce rezult ca deeu de la fabricarea celulozei, cu coninut sczut de 1-5 % zahr; - materii prime celulolitice, rezultate din industria hrtiei ca lemnul i stuful, care prin fierbere cu acizi sub presiune se hidrolizeaz cu formarea de hidrai de carbon mai simpli, fermentabili. nainte de folosirea lor n fermentaiile industriale, amidonul, celuloza i hemiceluloza trebuiesc hidrolizate sau convertite n zaharuri cu molecule relativ simple i fermentabile. n acest scop se folosesc fie preparate enzimatice, ca malul de cereale, sau enzime de natur microbian, provenite de la bacterii i mucegaiuri, fie anumite substane chimice ca acizii diluai, sau aciunea asociat a unora din aceti ageni. Microorganismele care produc fermentaia alcoolic a zaharurilor sunt reprezentate de ciuperci n principal din genul Saccharomyces i unele bacterii ca, Thermobacterium mobile, B. macerans, Sarcina ventriculi, Bacillus acetosetilycus etc. Fermentaia alcoolic poate fi spontan, produs de drojdiile slbatice, prezente n natur, sau dirijat prin introducerea n materialul de fermentat a unor sue de drojdii selecionate, ce au capacitate superioar de fermentaie. Temperatura optim de activitate este de 28-32oC.Tulpinile selecionate au capacitatea de a suporta concentraii mari de alcool i de a consuma cantiti mari de hidrocarbonate pentru sintezele lor proprii. Aceste drojdii au un echipament enzimatic foarte bogat, graie cruia obin n mediu anaerob energia necesar manifestrilor vitale, prin procesul de fermentaie alcoolic a hidrailor de carbon, dup relaia global: C6H12O6 2CH3-CH2OH + CO2 2. Utilizarea microorganismelor n vinificaie
62

Vinul este o butur alcoolic nedistilat, cunoscut din cele mai vechi timpuri, care se obine prin fermentaia alcoolic a mustului de struguri. Fermentaia mustului, obinut prin zdrobirea strugurilor recoltai la maturitate, se face n vase speciale deschise, sub aciunea drojdiilor din flora natural sau a unor tulpini selecionate. Pe struguri, n must i respectiv n vin, exist un numr nsemnat de microorganisme, bacterii i ciuperci care iau parte la procesul de fermentaie, avnd fie un rol pozitiv n cazul fermentaiilor normale, fie un rol negativ, de "mbolnvire" a vinului, cnd declaneaz unele procese fermentative care duc la efecte nedorite. Levurile Levurile sunt ciuperci microscopice care au capacitatea de a produce fermentaia caracteristic a mediilor ce conin zaharuri (levere = a ridica). Ele sunt grupate din punct de vedere sistematic n subncr. Ascomycotina, fam. Saccharomycetaceae i n subncr. Deuteromycotina (Fungi imperfeci), fam. Cryptococcaceae. Rspndirea levurilor Levurile sunt larg rspndite n natur, ele se ntlnesc n sol, ape, pe plante, flori, fructe etc. Solul este considerat rezervorul principal al levurilor, unde numrul lor este n medie de 250.000 celule pe gramul de sol. n general, se ntlnesc n stratul superficial cuprins ntre 2-10 cm iar n solurile podgoriilor pn la 30-40 cm, att ca forme vegetative ct i forme de rezisten. Levurile apar pe boabe n timpul maturrii acestora i sunt rspndite de insecte (n special Drosophylla sp.) prin intermediul particulelor de praf i nu n ultimul rnd odat cu stropii provocai de ploi. Levurile ce se gsesc pe struguri aparin la mai multe specii, proporia dintre ele fiind diferit n funcie de mai muli factori: condiiile climatice, starea de sntate a recoltei, coninutul n zahr al mustului etc. Principalele levuri ntlnite n vin Levuri sporogene Saccharomyces ellipsoideus (Sacch. cerevisiae), prezint importana cea mai mare pentru fermentaia mustului. Levurile acestei specii au form elipsoidal sau globuloas. La fermentarea mustului prezint un randament ridicat realiznd n medie 1 ml alcool pur din 1,7 g zahr i rezist pn la concentraii de 16 % vol. alcool, uneori chiar mai mult. Temperatura optim este de 20-25oC i suport concentraii de pn la 250-300 mg/l SO2 total. Dup declanarea fermentaiei ele pun stpnire rapid pe mediu pentru ca la sfritul procesului numrul lor s scad foarte mult. Saccharomyces oviformis. Se prezint sub form oval, uneori rotund. Aceast levur este specific regiunilor calde unde strugurii realizeaz concentraii ridicate n zahr. Prezint acelai randament n alcool dar are o putere alcooligen mai mare dect Sacch. ellipsoideus depind uneori 18 % vol. alcool. Specia devine dominant spre sfritul fermentaiei i suport concentraii de pn la 300 mg/l SO2 total i 100 mg/l SO2 liber. Este considerat o bun levur de finisaj la prepararea vinurilor seci, obinute din musturi bogate n zahr. n schimb trebuie inactivat sau nlturat din vinurile demiseci, demidulci i dulci, ntruct majoritatea accidentelor de refermentare se datorete acestei specii. Saccharomyces acidifaciens (Sacch. bailii). Specie rezistent la concentraii mari de SO2, putndu-se dezvolta pn la concentraii de 12 % vol. alcool. Provoac mbolnvirea vinurilor demiseci i dulci sulfitate.
63

Contaminarea este facilitat de proprietatea ei de a fermenta cu uurin fructoza lsnd neatins glucoza. Cum majoritatea levurilor fermenteaz mai nti glucoza n vinurile dulci-licoroase zahrul restant este constituit n principal din fructoz. Saccharomyces chevalieri, se aseamn sub raporul activitii fermentative cu Saccharomyces ellipsoideus dar sunt puin ntlnite n vinuri. Saccharomyces bayanus, este prezent n toate regiunile viticole dar se ntlnete n proporii foarte mici la fermentarea mustului cnd formeaz proporii mrite de acizi volatili i glicoli. Saccharomyces italicus, Sacch. uvarum, Sacch, florentinus , sunt levuri specifice n general regiunilor viticole meridionale, au proprieti asemntoare speciei Sacch. ellipsoideus dar cu o fermentare mai lent dect aceasta. Saccharomyces rosei, levur prezent constant pe struguri i n musturi care fermenteaz. Are proprietatea de a fermenta lent, dar regulat, cantiti importante de zahr fr formarea de acizi volatili. Este folosit pentru obinerea vinurilor cu un coninut de pn la 12 % vol. alcool, pentru vinuri cu rest de zahr precum i pentru recolte atacate de man i putregai cenuiu, la care obinerea de vinuri cu aciditate volatil sczut este o problem dificil. Pichia membranefaciens, P. fermentans i Hansenula anomala, sunt levuri cu putere alcooligen slab, sunt ncadrate n categoria levurilor patogene, care n condiii oxidative provoac vinurilor boala denumit "floare". De asemeni, afecteaz calitatea vinurilor prin proporii ridicate de esteri, acetat de etil, acetat de amil pe care l formeaz i care imprim mirosuri neplcute. Saccharomycoides ludwigii, este o levur de dimensiuni mari, de form apiculat, rar ntlnit pe struguri i n musturi normale. Excepional de rezistent la SO 2 (700-1000 mg/l) i este specific musturilor pstrate cu doze mari din acest antiseptic. Este o levur patogen pentru vinurile demiseci sau dulci aflate n butoaie sau sticle crora le provoac refermentri. Hanseniospora valbyensis, H. uvarum, H. osmophila. Levur apiculat, specific zonelor calde, provoac declanarea fermentaiei aa cum n regiunile rcoroase acest proces este declanat de Kloeckera apiculata. Are capacitate mare de a asimila azotai. Levuri nesporogene Torulopsis stellata. Levur prezent pe struguri stafidii n urma apariiei mucegaiului nobil. Prezint o rezisten mai mare dect levurile apiculate, la concentraii de SO 2 i alcool dar mai sczut dect Sacch. ellipsoideus. Brettanomyces intermedius. Numele genului se datoreaz aciunii unor specii de a imprima berei britanice gust i arom caracteristice n urma unor procese secundare de fermentaie. Speciile acestui gen sunt ntlnite n proporii mici n musturi i vin. Mai frecvent se ntlnesc n vinurile bolnave de floare, oetite. Prezena lor favorizeaz formarea de acetat de etil i ali compui ce dau mirosuri intense cu iz de oarece. Candida vini (Candida micoderma, Mycoderna vini). Speciile acestui gen sunt cunoscute sub denumirea de "levuri de floare"producnd boala denumit floarea vinului, caracterizat prin formarea unei pelicule la suprafaa vinurilor slab alcoolice, pstrate n vase incomplet pline. Kloeckera apiculata, cunoscut i sub denumirea de levur slbatic, este extrem de rspndit pe toate fructele n regiunea cu climat temperat-rcoros. Prezint celule sub form de lmie, avnd unul sau ambele capete ascuite.

64

n practic sunt cunoscute sub denumirea de levuri apiculate. Acestea apar pe bace la faza de prg, iar la maturitatea deplin a strugurilor reprezint 99 % din totalul levurilor existente n acest moment. Ele declaneaz fermentaia mustului, avnd o capacitate foarte mare de nmulire,. randamentul n alcool este mai sczut dect al levurilor eliptice. Ele consum pentru l ml alcool pur 2,1 g zahr. Puterea alcooligen este redus realiznd 4-5 % vol. alcool, concentraie maxim pn la care aceast specie poate rezista. Prezint o sensibilitate mai mare dect levurile eliptice la SO2. Rhodotorula mucilaginosa, Rh. Glutinis, Rh. rubra sunt levuri denumite i mucilaginoase deoarece produc mucilagii n musturi i vinurile tinere srace n aciditate i formeaz pigmeni carotenoizi galbeni pn la roii. Se ntlnesc n pivniele de vinuri n care formeaz mpreun cu unele bacterii i alte ciuperci depuneri mucilaginoase pe pereii umezi. Dei, sensibile la alcool prezint o rezisten mare la temperaturi ridicate (50-60oC) i la aciunea substanelor alcaline (fosfat trisodic 1 %). Rezist la aciunea acidului boric pn la concentraia de 3 %. Mucegaiurile Ciupercile care formeaz colonii pufoase vizibile cu ochiul liber, n practic sunt denumite mucegaiuri. Mucegaiurile, obinuit aerobe, sunt foarte rspndite n natur, ntlnindu-se aproape n toate mediile, datorit capacitii mari de nmulire i de rspndire precum i a rezistenei mari la condiiile mai puin prielnice de mediu. Sunt frecvent ntlnite n plantaiile viticole, pe frunze, boabe, n sol, pe utilajele i pereii pivnielor, precum i la suprafaa mustului n primele etape de vinificaie. Mucor racemosus, produce n plantaii infecia strugurilor pe vreme ploioas. n cazul n care se afl complet scufundat n must ciuperca se prezint sub form de fragmente de sifonoplast; are capacitatea de a produce fermentarea mustului pn la 5-7 % vol. alcool Mucor circinelloides, este o alt specie care este folosit la fabricarea berei. Mucor piriformis, oxideaz parial glucidele cu formarea acizilor citric, oxalic, gluconic etc. Rhizopus nigricans este frecvent pe strugurii vtmai, n pivnie sau pe utilajele folosite n vinificaie, formnd pe suprafaa substratului degradat un mucegai de culoare negricioas. Prezint capacitate mic de fermentaie. Aspergillus niger, se dezvolt n crame i pivnie, pe vase vinicole, dopuri, formnd un mucegai negru. Aspergillus glaucus, se ntlnete mai frecvent pe suporturi lemnoase din pivnie. Penicillium glaucum, produce putrezirea boabelor incomplet coapte sau strugurii vtmai de insecte sau grindin. Dac contaminarea se extinde devreme se pot produce pierderi de recolt importante, boabele atacate fiind complet distruse. Cnd atac strugurii copi, mustul obinut are gust amar. n crame i pivnie se dezvolt pe dopuri, vase vinicole etc., ptrunznd n lemnul doagelor. n timpul fructificrii secret esteri cu gust i miros caracteristic de mucegai ce se transmit vinului. Genul Merulius cuprinde specii extrem de pgubitoare care se dezvolt n pivnie, pe butoaie, czi, pe rafturi, stelaje i orice obiect din lemn pe care se formeaz un miceliu alb, cu aspect buretos. Speciile genului Merulius formeaz substane cu miros specific neplcut, unele atac numai celuloza, altele numai lignina, transformnd lemnul ntr-o mas moale, de culoare brun sau alb.
65

Merulius lachrymans, denumit popular ciuperca igrasiei sau buretele de cas, formeaz un mucegai alb-cenuiu i filamente izolate sau cordoane compacte. Cladosporium cellare. Se dezvolt pe toate substraturile lemnoase dar i pe pereii pivnielor i chiar pe ramele de fier, grilaje, srme etc., datorit capacitii acesteia de a provoca microcondensarea pe suprafaa hifelor sale, a moleculelor compuilor organici i anorganici n stare de vapori, existeni n aerul din pivni. n unele pivnie acest mucegai se dezvolt pe perei ntr-un strat gros cu aspect de catifea i datorit capacitilor sale de a purifica aerul i de a regla umiditatea atmosferic, realizeaz condiii deosebite pentru maturarea i nvechirea vinurilor. Botryotinia fuckeliana prezint ca form conidian Botrytis fuckeliana i produce "putregaiul cenuiu al strugurilor". Aceast boal apare la intrarea n prg i este favorizat de crparea sau rrirea pieliei boabelor, producia n unii ani putnd fi diminuat cu 60-90 %. Vinurile obinute din strugurii atacai de aceast ciuperc sunt slab alcoolice, neplcute la gust, cu miros specific de mucegai i care se mbolnvesc uor. n unele toamne secetoase, cu diminei nelipsite de rou apare aa numitul "putregai nobil", care conduce la obinerea unui must de nalt calitate. n acest caz scade mult coninutul boabelor n ap i crete concentraia n zahr (de la 200-220 pn la 400-500 g/l). Producia scade mult, uneori cu peste 40 %, dar se obin vinuri cu o arom buchet deosebit i foarte plcut. Bacteriile vinului Bacteriile prezint o mare importan pentru calitatea vinurilor. Unele dintre ele n anumite condiii pot contribui prin activitatea lor la mbuntirea acesteia; cele mai multe pot provoca vinurilor transformri nedorite i chiar mbolnviri grave. n perioada recoltrii strugurilor pe pielia boabelor, pe lng levuri i mucegaiuri se gsesc i bacterii, dar pot fi ntlnite de asemenea n crame i pivnie, ndeosebi pe suprafaa intern a butoaielor i cisternelor n care se fermenteaz mustul sau se pstreaz vinul i care nu au fost corect curate i ntreinute. Dup procesele pe care le declaneaz, bacteriile au fost grupate n: - bacterii lactice; - bacterii acetice. Bacteriile acetice Sunt microorganisme aerobe, se ntlnesc att pe strugurii sntoi ct i pe cei vtmai, precum i n musturi sau vinuri, mai ales cnd sunt pstrate n vase incomplet pline. Bacteriile acetice care se dezvolt n vin formeaz la suprafaa acestuia un vl sau o pelicul care uneori poate fi alburie, subire, aproape transparent cu reflexe irizante i care poate urca rapid pe pereii vasului. Alteori acest vl este mai gros, uleios, hidrofob i se coloreaz pe msura mbtrnirii n brun. ntr-un al treilea caz vlul format atinge mai muli milimetri grosime, este vscos, greu de desfcut i care cu timpul cade la fundul vasului, cunoscut i sub numele de cuib de oet. Genul Acetobacter Acest gen grupeaz specii cu celule sub form de bastonae dispuse izolat, n perechi sau lanuri ce sunt imobile sau prevzute cu cili dispui peritriche. Speciile genului Acetobacter produc oxidarea etanolului pn la acid acetic, la un pH de aproximativ 4, precum i a acidului acetic a lactaiilor i aminoacizilor. Ciclul Krebs este prezent i activ. Se dezvolt la temperaturi cuprinse ntre 5-42oC, cu un optim de 30oC. Speciile cele mai importante sunt: - Acetobacter aceti;
66

- Acetobacter pasteurianus; - Acetobacter peroxydans. Genul Gluconobacter Cuprinde bacterii asemntoare din punct de vedere morfologic cu speciile genului Acetobacter. Singurul criteriu de difereniere l reprezint flagelaia cnd aceasta exist. Astfel, speciile genului Gluconobacter sunt lofotriche (3-8 cili la fiecare pol) fa de ciliaia peritriche la Acetobacter. Produc oxidarea moderat a etanolului pn la acidul acetic la un pH=4,5. Temperatura optim de dezvoltare este 25-30oC dar variaia acesteia poate fi cuprins ntre 7-41oC. Fiziologic se deosebete de genul Acetobacter prin urmtoarele proprieti: - ciclul Krebs nu este complet. - nu oxideaz acidul acetic i lactaii pn la CO2. Bacterii lactice Reprezentanii acestui grup sunt facultativi-anaerobi i particip la o serie de transformri n vin i anume: - transformarea glucidelor n acid lactic i ali produi secundari (glicerol, alcool etilic, acid acetic etc); - fermentaia malolactic; - degradarea acidului tartric, citric; - degradarea glicerolului i a altor componeni. Genul Pediococcus Cuprinde bacterii Gram (+) cu aspect sferic grupate sub form de diplococi sau tetracoci. Sunt nesporulate, imobile, homofermentative. Fermenteaz glucidele, iar acidul malic numai la pH ridicat. Nu degradeaz acidul citric i tartric, din acest motiv nu sunt considerate duntoare. Prezint dou specii importante: - Pediococcus cerevisiae; - Pediococcus pentosacens. Genul Leuconostoc Cuprinde bacterii Gram (+), cu celule de form sferic, ovoid sau alungit, dispuse sub forma unor iraguri de mrgele ca i streptococii. Produc fermentaia malolactic numai n vinuri foarte acide, nesulfitate sau cu un coninut redus de SO2. Principalele specii: - Leuconostoc gracile, este specia cea mai frecvent n vinuri. Descompune energic acidul malic i n msur mai mic acidul citric. - Leuconostoc oinos A, X, P. Genul Lactobacillus Grupeaz bacterii Gram (+) i cuprinde att specii homofermentative ct i specii heterofermentative. Specii homofermentative: Lactobacillus plantarum se prezint sub form de bastonae scurte, izolate sau grupate. Lactobacillus casei, se prezint sub forma unor bacili lungi i subiri izolai sau grupai. Specii heterofermentative: - Lactobacillus fructivorans; - Lactobacillus hilgardii;
67

- Lactobacillus brevis.

BIBLIOGRAFIE

1.Anghel I., Toma M., Voica C., Cojocaru I. - Biologia i tehnologia drojdiilor, Vol. I 1989, Vol. II - 1991, Vol. III - 1993. Ed. Tehnic, Bucureti. 2. Buchanan R.E., Gibbons N.E. - Bergeys manual of determinative Bacteriology , Ed. Wiliams. 3. Eliade Gh., Ghinea L., tefanic Gh. - Microbiologia solului, Ed. CERES, Bucureti, 1975. 4. Eliade Gh., Ghinea L., tefanic Gh . - Bazele biologice ale fertilitii solului. Ed. CERES, Bucureti, 1983. 5. Hatman M. - Microbiologie - Lucrri practice , Universitatea Agronomic Iai - Centrul de multiplicare, Iai, 1990. 6. Hatman M., Ulea E. - Microbiologie - Curs, Universitatea Agronomic Iai - Centrulde multiplicare, Iai, 1993. 7. Kiss t., tefanic GH., Pasca Daniela, Drgan-Bularde Zborovschi, Crian R. Enzimologia mediului nconjurtor, Ed. CERES, Vol. I - 1991, Vol. II, 1993. 8. Mihescu Gh., Gavril L. - Biologia microorganismelor fixatoare de azot, Ed. CERES, Bucureti, 1989. 9. Papacostea P. - Biologia solului. Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1976. 10. Zarnea Gh. - Tratat de microbiologie general, Ed. Academiei Romne, Bucureti, Vol. I - 1983, Vol. II - 1984, Vol. III - 1986, Vol. IV - 1990,Vol.V - 1994.

68