Sunteți pe pagina 1din 12

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE DIN CRAIOVA

COALA DOCTORAL

CERCETRI FIZICO CHIMICE ASUPRA SPECIEI


Sambucus ebulus L.
Rezumatul tezei de doctorat

Conductor de doctorat,
Prof. Univ. Dr. STELIAN RADU
Student doctorand,
LIVIU CHIRIGIU

Craiova
2014

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

CUPRINS
CUPRINS
ABREVIERI
INTRODUCERE
STADIUL ACTUAL AL CUNOATERII
CAPITOLUL 1. CONSIDERAII GENERALE PRIVIND SPECIA Sambucus ebulus L.
1.1. ncadrare sistematic
1.2. Distribuia speciei Sambucus ebulus L.
1.3. Chemosistematic
1.4. Potenialul fitoterapeutic
1.4.1. Activitatea antiinflamatoare
1.4.2. Activitatea antioxidativ
1.4.3. Activitatea anti-Helicobacter pylori
1.4.4. Activitatea citotoxic i antiangiogenic
CAPITOLUL 2. METODE DE EXTRACIE I DE ANALIZ A COMPUILOR CHIMICI CONINUI DE
SPECIA Sambucus ebulus L.
2.1. Metode de extracie
2.1.1. Metoda Soxhlet
2.1.2. Extracia cu microunde
2.1.3. Extracia asistat cu ultrasunete
2.2. Metode de identificare i separare a metaboliilor secundari
2.2.1.Gaz-cromatografia cuplat cu spectrometria de mas
2.2.2. Cromatografia de lichide de nalt performan cuplat
2.2.3. Spectrometria de absorbie atomic
CONTRIBUII ORIGINALE
CAPITOLUL 3. IDENTIFICAREA I CARACTERIZAREA PRELIMINAR A SPECIEI
3.1. Caracteristici macroscopice
3.2. Caracteristici microscopice
3.3. Caracteristici microscopice ale pulberilor provenind de la produsele vegetale
3.4. Determinarea umiditii, substanei uscate i reziduului la calcinare pentru specia Sambucus ebulus
3.5. Extracia Soxhlet
3.6. Analiza prin spectroscopia IR cu transformat Fourier (FT-IR)
3.6.1. Materiale i metode folosite
3.6.2. Rezultate i discuii
3.7. Analiza cationilor metalici coninui de specia Sambucus ebulus L. prin SAA
3.7.1. Mineralizarea probelor
3.7.2. Materiale i metode
3.7.3. Rezultate i discuii
CAPITOLUL 4. INVESTIGAII FITOCHIMICE ASUPRA SPECIEI Sambucus ebulus L. PRIN GC-MS I
HPLC / HPLC -MS
4.1. Analiza prin gaz-cromatografie cuplat cu spectrometria de mas a compuilor coninui n
extractele de Sambucus ebulus L.
4.1.1. Pregtirea probelor
4.1.2. Aparatur i condiii de lucru
4.1.3. Rezultate i discuii
4.2. Analiza unor clase de metabolii secundari din Sambucus ebulus prin HPLC i HPLC-MS
4.2.1. Analiza brassicasterolului, campesterolului i stigmasterolului
4.2.1.1. Pregtirea probelor
4.2.2. Separarea antocianilor
4.2.3. Separarea i -amirinului
CAPITOLUL 5. EVALUAREA ACTIVITII BIOLOGICE A UNOR EXTRACTE DIN Sambucus ebulus L.
5.1. Evaluarea activitii antioxidante
5.1.1. Pregtirea probelor
5.1.2. Materiale i metode
5.1.2.1.Coninutul total de compui fenolici
5.1.2.2. Coninutul total de flavonoide
5.1.2.3. Determinarea permanganometric a coninutului n substane organice oxidabile din specia
Sambucus ebulus L.
5.1.2.4. Studii de voltametrie ciclic
5.1.2.5. Determinarea capacitii chelatante a extractelor
5.1.3. Rezultate i discuii

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

5.1.3.1.Coninutul total de compui fenolici i flavonoide


5.1.2.2. Determinarea permanganometric a coninutului n substane organice oxidabile din specia
Sambucus ebulus L.
5.1.2.3. Studii de voltametrie ciclic
5.1.2.4. Determinarea capacitii chelatante a extractelor
5.2. Evaluarea fitotoxicitii
5.2.1. Pregtirea probelor
5.2.2. Materiale i metode
5.2.3. Rezultate i discuii
6. DETERMINAREA PIGMENILOR CLOROFILIENI, A CAROTENULUI, A AZOTULUI, A PROTEINEI,
A FORSFORULUI, A POTASIULUI I A SUBSTANEI USCATE DIN SPECIA Sambucus ebulus L.
6.1. Aparatura folosit i metode de determinare
6.2. Ponderea diferiilor factori n variaia compoziiei chimice a plantei
6.3. Mineralizarea materialului vegetal
6.3.1. Mineralizare cu acid sulfuric (Metoda Kjendal)
6.4.Determinarea carotenului i a pigmenilor clorofilieni
6.5. Determinarea proteinei brute. Azotul total.
6.6. Determinarea fosforului
6.7. Determinarea K
7. CONCLUZII GENERALE I PERSPECTIVE DE CERCETARE
BIBLIOGRAFIE
LISTA LUCRRILOR PUBLICATE

Cuvinte cheie: Sambucus ebulus L., GC, HPLC, MS.

CAPITOLUL 1. CONSIDERAII GENERALE PRIVIND SPECIA


Sambucus ebulus L.
1.1. ncadrare sistematic

Iniial genul Sambucus ebulus a aparinut familiei botanice Caprifoliaceae1, ns,


dup ndelungi dezbateri taxonomice, att genul Sambucus ct i alte cteva genuri
(Viburnum) au fost mutate n familia Adoxaceae de ctre Vernon, n 19872. Aceast
familie botanic aparine ordinului Dipsacales, clasa Magnoliopsida subclasa
Asteridae. Din genul Sambucus fac parte aproximativ 30 de specii, dintre care cele mai
cunoscute sunt: Sambucus nigra, Sambucus racemosa, Sambucus palmensis,
Sambucus canadensis i Sambucus ebulus.

1.2. Distribuia speciei Sambucus ebulus L.


Sambucus ebulus, similar speciei Sambucus nigra, este o specie larg
rspndit, att n Europa Central i de Sud ct i n Asia, Nordul Africii i Statele
Unite ale Americii.

1.4. Potenialul fitoterapeutic


Apar menionri n literatura de specialitate cu privire la utilizarea frunzelor,
florilor i fructelor ca expectorant, diuretic sau purgativ, n diverse afeciuni inflamatorii
precum: artrita reumatoid, febr, edem pulmonar, arsuri, sau diverse rni deschise,
au aciune bacteriostatic i diuretic.

1
2

Iaroenko P D (1962). Geobotanica, Ed. Academiei R.P.R., Bucureti.


Vernon H (1987). Flowering plants of the World. Andromeda Oxford LTD, Heywood.

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

CAPITOLUL 2. METODE DE EXTRACIE I DE ANALIZ A


COMPUILOR CHIMICI CONINUI DE SPECIA Sambucus
ebulus L.
Printre cele mai cunoscute metode de extracie se numr: metoda Soxhlet,
extracia cu microunde, extracia cu ultrasunete, macerarea, hidrodistilarea3,
turboextracia, vibroextracia etc.
Dintre tehnicile de identificare i dozare a compuilor coninui n extractele
obinute amintim: gaz cromatografia cuplat cu spectrometria de mas, (GC-MS),
cromatografia n strat subire (TLC), cromatogra de lichide de nalt performan
cuplat cu spectrometrie de mas (HPLC-MS), spectrometria de absorbie atomic
(AAS), spectrometria n infrarou cu transformat Fourier (FT-IR).

CONTRIBUII ORIGINALE
CAPITOLUL 3. IDENTIFICAREA I CARACTERIZAREA
PRELIMINAR A SPECIEI
3.1. Caracteristici macroscopice
n aceast prim etap a cercetrii au fost descrise caracteristicile morfologice
i organoleptice ale organelor vegetale, s-a apreciat aspectul (interior, exterior) i
particularitile caracteristice, dimensiunile, culoarea, mirosul.

3.2. Caracteristici microscopice


Prin caracterizarea microscopic s-a urmrit evidenierea elementelor
structurale difereniale ale organelor vegetative provenind de la specia Sambucus
ebulus. S-a lucrat pe un microscop Bel Photonics model BIO3 cu camera video Bel
Photonics Model BVM-100 i soft Bel MicroImage Analzyer.

3.4. Determinarea umiditii, substanei uscate i reziduului la


calcinare pentru specia Sambucus ebulus L.
Tabel 1. Umiditatea i cenua brut pentru specia Sambucus ebulus L.
Nr.
crt.
1.
2.
3.
4.
5.

Proba de
Sambucus
ebulus L.
Rdcini
Tulpini
Flori
Fructe
Frunze

Masa
iniial
(g)
1,4216
2,1261
1,4758
2,9378
3.3317

Masa dup
uscare (g)

Umiditate
(%)

Reziduu
calcinare

1,2987
1,9463
1,3555
2,5349
3,0672

8,645
8,456
8.8749
13,7143
8.6235

0,0989
0,0860
0,1240
0,0931
0,2536

Cenu
brut
(%)
6,956
4,044
8,402
3,169
7,612

Reacii fitochimice preliminare

Pentru identificarea principalelor clase de principii active coninute de aceast


specie, s-au folosit extractele obinute prin metoda Soxhlet. Pentru identificri au fost
folosite metodele prescrise de Farmacopeea romn ed. X.
3

Peres VF, Saffi J, Melecchi MI, Abad FC, Assis Jacques R, Martinez M, Conceic E Caramao EB(2006).
Comparison of soxhlet, ultrasound-assisted and pressurized liquid extraction of terpenes, fatty acids and Vitamin
E from Piper gaudichaudianum Kunth, Journal of Chromatography A, 1105:115118.

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

Tabel 2. Analiza fitochimic a extractelor eterice ale speciei Sambucus ebulus L.


Reacie identificare
Reacia Carr-Price
Metoda NeoClevenger
Reacia Liebermann-Burchard
Hidroliz
Reacia cianidolului
Reactivi Mayer, Bertrand, Ehrlich
Reacia Borntranger
+ principii active prezente;

Principii active
Rdcin
carotenoide
+
uleiuri volatile
+
steroli
+
acizi grai
+
agliconi flavonici
+
alcaloizi baze
+
emodoli
+
- principii active absente.

Frunz
+
+
+
+
+
+
+

Fruct
+
+
+
+
+
+
+

Tulpin
+
+
-

Tabel 3. Analiza fitochimic a extractelor alcoolice ale speciei Sambucus ebulus L.


Reacie identificare
Principii active Rdcin
Reacia cu FeCl3
taninuri catehice
+
Reacia Fehling
polifenoli
+
Spumifiere, Reacia Liebermann-Burchard
saponozide
+
Ninhidrin
aminoacizi
+
Coloraie n mediu acid
antocianozide
+
Reacia Shibata
flavonozide
+
+ principii active prezente;
- principii active absente.

Frunz
+
+
+
-

Fruct
+
+
+
+
-

Tulpin
-

3.6. Analiza prin spectroscopia IR cu transformat Fourier


Pentru nregistrarea spectrelor reziduurilor etanolice i eterice a fost utilizat un
aparat FT-IR NICOLET, n domeniul 4.000 400 cm-1, cu pastilare cu bromur de
potasiu. Controlul aparatului i achiziia datelor s-a realizat cu ajutorul softului Omnic
Spectra. Spectrele au fost trasate dup prealabila pastilare cu bromur de potasiu
astfel: reziduu uscat a fost mojarat cu bromur de potasiu de puritate spectral.
Tabel 4. Principalele frecvene IR (cm-1) obinute pentru pulberile fitofarmaceutice
Proba / Frecvene caracteristice n IR (cm-1)
Rdcin
Frunz
Fruct
Tulpin
Pri aeriene
3.386

3.435

3.385

3.008

3.008

2.924

2.925

2.926

2.929

2.926

2.853
1.733
1.462
1.378
1.260
1.172

2.854
1.735
1.462
1.377
1.247
1.171

2.854
1.745
1.460
1.377
1.241
1.166

2.854
1.735
1.247
1.171

2.857
1.733
1.457
1.376
1.249
1.170

1.093

1.094

1.098

1.094

1.072

1.023
801
-

802

1.032
723

1.045
801
552

Atribuire
Vibraii ntindere O-H i N-H
(aminoacizi, amine, amide)
C-H(asim) (lipide, acizi grai)4
Vibraii asimetrice de alungire CH3, -CH2(acizi carboxilici)
(sim) grupe CH3
Vibraii ntindere -C=O (esteri)
C-H(ndoire) (a gruprii -CH2 proteine)
Vibraii de deformare (C-H)
C-O, O-H def (polifenoli)
C-O- C, inel
C-H(deformare), C-O,
C-C(ntindere) carbohidrai
C-O (ntindere) polizaharide
C-H (ndoire n afara planului)
Vibraii gruparea fosfat

Schulz H., Baranska M. Identification and quantification of valuable plant substances by IR and Raman spectroscopy,
Vibrational Spectroscopy, 43: 13-25, 2007.

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

3.7. Analiza cationilor metalici coninui de specia Sambucus


ebulus L. prin spectrometrie de absorbie atomic
Analizele au fost efectuate prin SAA cu flacr i cuptor de grafit pe un aparat
AA240FS DUO Varian i prin SAA cu cu cuptor grafit, pe un spectrometru de absorbie
atomic novAA 400G Analytik Jena cu autosampler MPE60 i soft WinAAS 3.17.0.
Tabel 5. Determinarea prin spectrometrie de absorbie atomic a cationilor
metalici din specia Sambucus ebulus L prin metoda 1
Denumire prob
Fructe
Tulpini
Frunze
Rdcini

Ca
(g/g)
3196,9
2921,8
9539,6
2805,1

Fe
(g/g)
97,1
9,9
148
200,25

Mn
(g/g)
16,4
5,5
49,93
37,1

Mg
(g/g)
1698,6
2127,14
5469
1841,22

Zn
(g/g)
20,7
6,2
23,12
19,46

Pb
(g/g)
1,4
0,78
0,76
0,7

Cr
(g/g)
0,35
0,15
1,37
4,15

Ni
(g/g)
2,5
1,32
0,99
7,146

Tabel 6. Determinarea prin spectrometrie de absorbie atomic a cationilor


metalici din specia Sambucus ebulus L prin metoda 2
Fructe verzi
Fructe negre
Frunze
Rdcini
Tulpini

Cu (g/g)
6,895
4,962
1,923
6,310
7,374

Pb (g/g)
1,021
0,728
0,876
1,952
2,980

Zn (g/g)
33,1
27,9
47,5
26,5
35,6

Tabel 7. Determinarea prin spectrometrie de absorbie atomic a cationilor


metalici din specia Sambucus ebulus L prin metoda 3
Nr.
crt.
1.
2.
3.

Produs
Fructe
Frunze
Tulpini

Cd
*
0.32
*

Concentraia (g/g)
Cu
Cr
Zn
2.34
9.85 45.92
5.16
10.27 36.58
2.16
*
16.58

Pb
9.21
12.63
*

Fe
113.40
99.29
*

CAPITOLUL 4. INVESTIGAII FITOCHIMICE ASUPRA


SPECIEI Sambucus ebulus PRIN GC-MS I HPLC/HPLC-MS
4.1. Analiza prin GC-MS a compuilor din Sambucus ebulus L.
S-a lucrat pe un gaz cromatograf Hewlett Packard 6890 cu detector
spectrometru de masa 5973, coloana: DB1 30 m x 0,25 mm x 1 m, Tinjector.: 290oC,
debit gaz purtator (He) = 0,8 mL/min, raie splitare = 188 : 1, Temp. surs MS =
230oC, Quadrupol MS = 150oC, Interfaa MS = 300oC. Atribuirea spectrelor de mas
s-a realizat folosind baza de date Nist05 Library. Din totalul compuilor gsii n
frunze, au fost identificai cu o probabilitate ridicat un numr de 19 compui n
extractul eteric (9 cu probabilitate foarte mare) i 51 de compui n extractul alcoolic
(29 cu probabilitate foarte mare) reprezentnd 87 % din totalul componenilor5. Cei
mai muli compui au fost identificai n fructele speciei, 51 de compui n extractul
eteric i 32 de compui n cel alcoolic.
5

Chirigiu L., Chirigiu R. G., Tircomnicu V., Bubulica M. V (2011). GC-MS analysis of chemical composition of
Sambucus Ebulus leaves, Chemistry of natural compounds, 47 (1): 126 127, UDC 547.913

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

4.2. Analiza unor clase de metabolii secundari din Sambucus


ebulus prin HPLC i HPLC-MS
4.2.1. Analiza brassicasterolului, campesterolului i stigmasterolului
Determinarea coninutului fitosterolic din Sambucus ebulus s-a realizat prin:
- cromatografie HPLC (Ultimate 3000 Dionex, detector UVD-3000, C18
Acclaim 120 DIONEX cu lungimea de 250 mm, diametrul 4 mm, pomp LPG-3400A).
Faza mobil folosit metanol : acetonitril : i-propanol : ap acidulat (0,05 % acid
trifloracetic) = 75 : 5 : 10 : 10. Temperatura coloanei 21C, debitul 0,5 mL/min,
lungimea de unda 230 nm.
- cromatografie LC-MS Agilent (1200 Series cu detector MS 6120 Qudrupole i
autosampler). Condiii cromatografice: detectia temperatura coloanei 40C, debit 0,6
mL/min, volumul injectat 5 L, timp 35 minute, faza mobil folosit acetonitril :
isopropanol = 80 : 20 (%). Detecia s-a efectuat n MSD scan. S-a preferat
determinarea simultan a celor trei fitosteroli, avnd n vedere faptul c acetia au un
efect cumulativ deosebit, ns separat nu prezint aceleai proprieti.
Tabel 16. Caracteristici cromatogr. pentru brassicasterol, campesterol i stigmasterol
Standard
Brassicasterol
Campesterol
Stigmasterol

Formul moecular
C28H46O
C28H48O
C29H48O

Timp de retenie (min)


3.73
4.28
4.49

Ion [M-H2O+H] +
470
383
395

Tabelul 17. Caracteristici cromatografice rezultate la determinarea sterolilor


Proba
S. ebulus flori
S. ebulus frunze
S. ebulus tulpini
S. ebulus rdcini
S. ebulus fructe

Fitosterol

tR (min)

Arie pic (mAu.min)

Inaltime (mAu)

Brassicasterol
Campesterol
Brassicasterol
Stigmasterol
Campesterol
Campesterol
Brassicasterol
Campesterol

3,59
4,18
3,63
4,46
4,21
4,20
3,31
4,19

174,09
965,29
73,98
163,05
755,37
674,08
221,80
568,67

886,88
2691,67
394,13
952,64
2787,99
2771,32
478,27
2699,82

Concentraia
(mg/100 g)
29,222
136,310
12,418
132,748
109,411
95,118
37,230
80,244

Prezena n cantiti destul de ridicate a brassicasterolului i campesterolului n


toate organele vegetative ale speciei explic activitile antiinflamatorii i antireumatice
ale acesteia6. Campesterolul se gsete ntr-o cantitate mai mare dect
brassicasterolul un fapt mai rar ntlnit n lumea vegetal. Cele mai bogate n
campesterol sunt florile (136 mg %) urmate de tulpini (109,411 1mg/100 g)7.

4.2.2. Separarea antocianilor


Pentru cei trei compui de referin utilizai s-au obinut urmtorii timpi de
retenie: delfinidin 6.28 minute, pentunidin 6.89 minute i pentru cianidin 3,5diglicozid 7.35 minute.
6

Gabay O, Sanchez C, Salvat C, Chevy F, Breton M, Nourissat G, Wolf C, Jacques C, Berenbaum F (2010).
Osteoarthritis Cartilage, 18:106.
7
Bubulic M.V., Chirigiu L., Popescu M., Simionescu A., Anoaica G., Popescu A (2012). Analysis of sterol
compounds from Sambucus ebulus, Chemistry of natural compounds. 48(3):520-521.

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

Tabelul 18. Caracteristici cromatografice rezultate la determinarea antocianilor


Proba
S. ebulus flori

S. ebulus frunze
S. ebulus tulpini
S. ebulus rdcini
S. ebulus fructe

Antociani
Delfinidin + pentoze
Petunidin + pentoze
Cianidin 3,5-diglucozide
Delfinidin + pentoze
Petunidin + pentoze
Cianidin 3,5-diglucozide
Petunidin + pentoze
Petunidin + pentoze
Delfinidin + pentoze
Petunidin + pentoze

tR (min)
5,89
6,67
7,22
5,89
6,76
7,29
6,69
6,61
5,72
6,67

Arie pic (mAu.min)


196,43
749,98
213,17
133,14
727,31
814,56
928,48
1003,86
111,12
678,53

Inaltime (mAu)
609,99
2596,46
1025,88
434,31
2387,9
2354,67
2578,0
2832,31
230,88
2688,87

Antocianii prezeni n aceast specie sunt uor hidrosolubili, sunt poteni


inhibitori ai radicalilor liberi avnd astfel o activitate antioxidant extrem de crescut i
explicnd astfel proprietile antiinflamatorii i imunostimulente ale bozului.
n mod surprinztor, cea mai mare cantitate de antociani a fost gsit n
rdcini, ns din punct de vedere numeric, cei mai muli compui se gsesc n frunze
i fructe, i avnd n vedere c n cromatografia de lichide de nalt performan aria
picului caracteristic separat este direct proporional cu concentraia acestui compus
din extract, se poate afirma c i n aceste dou organe vegetative (fructe i frunze),
se gsesc cantiti nsemnate de cianidin i petunidin. Tulpinile speciei conin numai
petunidin + pentoze, ntr-un procent destul de ridicat.

4.2.3. Separarea i -amirinului


Caracteristicile cromatografice pentru cele 5 probe sunt redate n tabelul 19.
Tabel 19. Caracteristici cromatografice obinute pentru i amirin
Proba
Sambucus ebulus flori
Sambucus ebulus frunze
Sambucus ebulus tulpini
Sambucus ebulus rdcini
Sambucus ebulus fructe

Compus
- amirin
- amirin
- amirin
- amirin
- amirin
- amirin
- amirin
- amirin

tR (min)
3,25
4,23
3,33
4,4
4,00
4,07
3,42
4,07

Arie pic (mAu.min)


228,21
51,03
77,15
181,23
630,59
624,99
52,69
531,22

Inaltime (mAu)
1409,07
229,99
330,73
956,08
2827,83
2840,44
248,86
2786,11

Este de remarcat faptul c amestecul racemic al celor doi izomeri d


proprietile respective. Aa cum se observ din tabelul 19, n flori, frunze i fructe se
gsesc cei doi izomeri, n timp ce n rdcini i tulpini este ntlnit numai izomerul .

CAPITOLUL 5. EVALUAREA ACTIVITII BIOLOGICE A


UNOR EXTRACTE DIN Sambucus ebulus L.
Din extractele obtinute s-au luat 200 L peste care s-au adaugat 2,5 mL reactiv
Folin Cioclteu diluat 1 : 10. Dupa 4 minute s-au adaugat cte 2 mL carbonat de
sodiu (75 g/L) n fiecare prob, apoi au fost lsate timp de 2 ore la temperatura 23oC8.
Absorbana a fost msurat la 765 nm.
8

Borneo R, Leon AE, Aguire A, Ribotta P, Cantero JJ (2009). Antioxidant capacity of medicinal plants from the
Province of Cordoba (Argentina) and their in vitro testing in a model food system. Food Chemisty, 112: 664-670.

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

5.1.2.2. Coninutul total de flavonoide


S-a realizat cu soluie clorur de aluminiu 10 % (metoda Roy et all., 20109),
ulterior se evalueaz maximul de absorbie al coloraiei obinute, raportat la curba de
etalonare. Coninutul total n flavonoide se exprim n mg/g (echivaleni quercetin).
Cel mai mare coninut polifenolic l au fructele de Sambucus ebulus, urmate de
flori i frunze. Pentru fructe, s-a realizat i evaluarea extractului obinut din drupele
crude, mai ales innd cont de utilizarea acestora n etnomedicin sub aceast form.
Tabel 20. Coninutul total de compui fenolici i flavonoide i activitatea
antioxidant a extractelor testate
Total compui fenolici
Coninut total de flavonoide
(mg GAE/g)
(mg QE/g)
m.p.*
m.u.**
m.p.*
m.u.**
1.
Sambucus ebulus L. flori
41,8 + 0,98
3,75 +2,31
19,06 +1,06
2.
Sambucus ebulus L. rdcini
32,06+ 0,56
20,07 +1,23
3.
Sambucus ebulus L. fructe
9,25 + 1,08 43,28+ 0,71 3,96 +1,84
22,71 +0,61
4.
Sambucus ebulus L. frunze
35,73+ 1,26
13,55 +1,36
5.
Sambucus ebulus L. tulpini
30,21 + 0,74 2,52 + 1,20 13,54 + 0,78
* material vegetal proaspt. ** material vegetal uscat. media DS (n = 3).
Nr. crt

Proba

5.1.2.3. Determinarea permanganometric a coninutului n


substane organice oxidabile din specia Sambucus ebulus L.
S-a efectuat prin titrare permanganometric n mediu de acid sulfuric 4 N. S-au
determinat volumele de soluie de permanganat utilizate.
Rezultatele sunt prezentate n tabelul 21.
Tabelul 21. Determinarea permanganometric a coninutului n substane
oxidabile din specia Sambucus ebulus L.
Tulpini
Fructe negre
Frunze

mprob (g)

VH2SO4 (mL)

VH2O (mL)

VKMnO4 0,1 N (mL)

10,00
10,00

20,00
20,00

60,00
60,00

118,5
89,5

5.1.2.4. Studii de voltametrie ciclic


Voltamogramele ciclice pentru determinarea activitii antioxidante a extractelor
s-au realizat cu ajutorul unui poteniostat model PGZ-402 Universal Pulse Dinamic EIS
Voltammetry, produs de Radiometer Copenhagen, n 2007 echipat cu soft Volta
Master 4. Studiile de voltametrie ciclic s-au fcut n intervalul 200 1.000 mV, la
temperatura ambiant cu o viteza de polarizare de 100 mV/s.
Extractele testate la pH = 7,1 au avut cea mai buna activitate antioxidant, fapt
deosebit de important dac se are n vedere obinerea unor forme farmaceutice care
s aib o activitate antioxidant crescut.

5.1.2.5. Determinarea capacitii chelatante a extractelor


Determinarea capacitii chelatante a extractelor s-a realizat dup metoda Dinis
i colaboratorii cu cteva ajustri. Absorbana s-a msurat la 562 nm folosind
Na2EDTA ca martor pozitiv. Extractele vegetale au rolul de ageni de complexare care
perturb formarea complexului Fe-Ferozin, cnd intensitatea coloraiei scade.
9

Nayan R, Rajibul AL, Ismail S, Deepa K, Tirthankar G, Naznin AB (2011). A detailed study on the antioxidant
activity of the stem bark of Dalbergia
sissoo Roxb., an Indian medicinal plant. Food Chem. 126: 1115-1121.

10

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

5.2. Evaluarea fitotoxicitii


Fitotoxicitatea extractelor din diverse plante a fost corelat ulterior cu proprieti
citotoxice ale acestora, i chiar cu activitatea anticanceroas. Cea mai utilizat plant
n scopul testrii fitotoxicitii o constituie grul (Triticum vulgare, soiul Dropia,
Gramineae). n tabelul 22 sunt prezentate rezultatele obinute n urma testului Triticum.
Tabel 22. Elongaia radicular a cariopselor germinate pe durata celor cinci zile
Nr.
crt.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.

Tip de extract
Sambucus ebulus
frunze (Se1)
(extract apos)
Sambucus ebulus
fructe (Se2)
(extract apos)
Sambucus ebulus
rdcini (Se3)
(extract apos)
Sambucus ebulus
tulpini (Se4)
(extract apos)
Martor (M1)

Concentraia
2.0 %
1.0 %
0.5 %
0.25 %
2.0 %
1.0 %
0.5 %
0.25 %
2.0 %
1.0 %
0.5 %
0.25 %
2.0 %
1.0 %
0.5 %
0.25 %
-

Ziua 1
0.75
0.80
0.74
1.01
1.00
0.98
1.05
0.82
0.74
0.73
1.21
1.24
0.77
1.00
1.10
0.97
1.23

Elongaia radicelei principale (cm)


Ziua 2 Ziua 3 Ziua 4 Ziua 5 % inhibiie
0.80
0.80
0.80
0.93
92.38
0.95
0.95
0.95
1.12
90.82
1.13
1.52
1.74
2.13
82.54
1.62
2.38
2.38
3.22
73.61
2.26
4.54
4.71
6.59
45.98
2.20
3.90
4.32
5.00
59.02
2.52
5.27
6.37
6.82
44.098
2.66
5.92
6.11
8.80
27.87
1.12
1.46
1.43
3.48
71.47
1.47
3.81
3.78
3.77
69.09
1.47
3.78
4.10
8.30
31.96
1.88
4.02
4.72
11.23
7.95
1.16
1.22
1.40
5.62
52.29
1.40
3.30
3.46
7.70
36.88
1.74
3.62
4.81
7.26
40.49
2.19
5.23
6.42
9.84
19.34
2.03
3.47
5.72
12.2
-

Exist un effect mitoinhibitor specific la concentraiile mai ridicate. Un efect


citotoxic a fost observat la extractul de 2 % din frunzele i rdcinile speciei (nuclei cu
1 2 nucleoli hipertrofiai). La concentraii mici, 0,5 1 %, pentru aceleai extracte a
fost constatat un efect moderat mito-depresiv, n timp ce la cea mai mic concentraie
investigat s-a constatat un efect de stimulare a diviziunii celulare.

6. DETERMINAREA PIGMENILOR CLOROFILIENI, A


CAROTENULUI, A AZOTULUI, A PROTEINEI, A
FOSFORULUI, A POTASIULUI I A SUBSTANEI USCATE
DIN SPECIA Sambucus ebulus L.
Substana proaspt din planta se mojareaz foarte bine, peste care se pune
alcool etilic. A doua zi se filtreaz i se aduce la semn tot cu alcool. Se fac citirile la
spectrometru, iar rezultatele se introduc n formula de calcul.
Tabelul 23. Coninutul n caroten i pigmeni clorofilieni al speciei S. ebulus L.
Pigmeni clorofilieni
Ca
Cb
K
Dbuleni 10,614 4,721 3,961
Amrti 10,214 4,659 3,890
Mrani 10,427 4,718 3,943
Teasc 10,601 4,719 3,954
Varianta

11

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

6.5. Determinarea proteinei brute. Azotul total.


Coninutul de azot total din material vegetal se determin prin mineralizare
umed, acidul sulfuric fiind larg folosit, n diferite variante ale metodei clasice Kjeldahl.
Eliberarea azotului din materialul vegetal se poate realiza i prin combustie uscat
metoda Dumas, procedeu mai puin folosit deoarece necesit o aparatur special.

6.6. Determinarea fosforului


Se face spectrometric la lungimea de und de 420 sau 470 nm. Citirea se face
fa de proba de referin etalonul 0 care are o uoar culoare glbuie.

6.7. Determinarea potasiului


Pentru determinarea potasiu total din plante, materialul vagetal este mineralizat
prin calcinare sau pe cale umed cu amestec de acizi minerali concentrai. n soluia
obinut dozarea potasiului se face prin fotometrie de emisie n flacr.
Tabelul 24. Rezultatele analizelor efectuate pe specia Sambucus ebulus L.
Varianta

Azot Proteina P2O5


(%)
(%)
(%)
Amrti 3,01
19,3
1,90
Mrani 3,06
19,4
1,92
Teasc
3,10
19,01
1,94

K2O
(%)
1,59
1,60
1,63

Substana uscat
(%)
28,50
28,53
28,51

12

Liviu Chirigiu

Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. Iaroenko P D (1962). Geobotanica, Ed. Academiei R.P.R., Bucureti
2. Vernon H (1987). Flowering plants of the World. Andromeda Oxford LTD, Heywood
3. Schulz H., Baranska M. Identification and quantification of valuable plant substances by IR
and Raman spectroscopy, Vibrational Spectroscopy, 43: 13-25, 2007
4. Gabay O, Sanchez C, Salvat C, Chevy F, Breton M, Nourissat G, Wolf C, Jacques C,
Berenbaum F (2010). Osteoarthritis Cartilage, 18:106.
5. Bubulic M.V., Chirigiu L., Popescu M., Simionescu A., Anoaica G., Popescu A (2012).
Analysis of sterol compounds from Sambucus ebulus, Chemistry of natural compounds.
48(3):520-521.
6. Popa T., Bubulic M.V., Chirigiu L., Mogosanu G. D., Popescu R., Popescu H., Researches
upon the heavy metals content of Sambucus nigra L. (Caprifoliaceae), Current Health Sciences
Journal, AprilJune, 2010, 36(2):111114, ISSN 20670656.
7. Chirigiu L, Popescu R., Bubulic M.V., Popescu A (2012). Determination of chromium,
cooper, iron, zinc, cadmium and lead by graphite furnace atomic absorption spectrometry in
seven phytopharmaceutical products, Revista de Chimie,: 63(9): 874-876.
8. Chirigiu L., Chirigiu R. G., Tircomnicu V., Bubulica M. V (2011). GC-MS analysis of
chemical composition of Sambucus Ebulus leaves, Chemistry of natural compounds, 47 (1): 126
127, UDC 547.913
9. Chirigiu L, Bubulica M. V., Chirigiu R. G (2010). GC-MS Analysis of Chemical Compounds
from Stems of Sambucus Ebulus L. Acta Medica Marisiensis, 56(6): 522-525.
70. Patel V.R., Patel P.R., Kajal S.S. Antioxidant Activity of Some Selected Medicinal Plants in
Western Region of India, Advances in Biological Research, 4: 23-26, 2010.
10. Bubulica MV, Chirigiu L., Grumezescu A.M., Popescu A., Simionescu A (2012).
Screening of antioxidant potential of Lonicera tatarica, Viburnum opulus and Sambucus ebulus
L. by multiple in vitro assays. Journal of Medicinal Plants Research Vol. 6(3): 544-552
11. Rop O., Reznicek V., Vasilkova M., Jurikova T., Milcek J., Kramarova D. Antioxidant
properties of European cranberrybush fruit (Viburnum opulus var. edule). Molecules, 15: 44674477, 2010
12. Chirigiu L, Bubulic MV, Averis LME (2012). Assessment of the toxicity of some
phytopharmaceutical products from Caprifoliaceae family by Triticum bioassay, Analele
Universitii din Craiova Seria- Biologie, Horticultur, Tehnologia Prelucrrii Produselor
Agricole, Ingineria Mediului, XVII (LIII): 583-587

13