Sunteți pe pagina 1din 240

DELIAN ELENA

FIZIOLOGIA PLANTELOR

BUCURETI 2010

3 CUPRINS

PARTEA I CAPITOLUL 1. INTRODUCERE N FIZIOLOGIA PLANTELOR 1.1.Definiie, scop, importan 1.2.Istoricul cercetrilor de fiziologia plantelor 1.2.1. Fiziologia plantelor pe plan mondial 1.2.2. Fiziologia plantelor n Romnia 1.3.Raporturile fiziologiei plantelor cu alte tiine 1.4.Metode de cercetare utilizate n fiziologia plantelor CAPITOLUL 2. FIZIOLOGIA CELULEI VEGETALE 2.1. Proprietle fiziologice ale materiei vii 2.2. Principalele particulariti structurale ale celulei la plantele superioare i rolul fiziologic al componentelor celulare 2.2.1. Peretele celular 2.2.1.1. Formarea peretelui celular i componentele acestuia 2.2.1.2. Modificri secundare ale peretelui celular 2.2.1.3. Rolul fiziologic al peretelui celular 2.2.2. Membrana citoplasmatic Plasmalema 2.2.2.1. Componentele membranei citoplasmatice 2.2.2.2. Proprietile plasmalemei 2.2.2.3. Rolul fiziologic al plasmalemei 2.2.3. Citosolul 2.2.4. Citoscheletul 2.2.5. Sistemul de endomembrane 2.2.5.1. Reticulul endoplasmatic 2.2.5.2. Complexul Golgi 2.2.5.3. Microvezicule 2.2.6. Ribozomii 2.2.7. Plastidele 2.2.8. Mitocondriile 2.2.9. Nucleul 2.2.10. Vacuomul celular CAPITOLUL 3. RELAIA CELUL VEGETAL - MEDIU 3.1. Relaia celulei vegetale cu apa 3.1.1. Principalele procese care guverneaz transportul apei i cile specifice de transport 3.1.2. Ptrunderea apei n celula vegetal i generarea strii de turgescen 3.1.2.1. Aquaporinele descoperire, dovezi ale existenei lor i importan 3.1.3. Plasmoliza generare, importan 3.1.4 Relaiile dintre diferite fore, relativ la starea de hidratare a celulei vegetale la un moment dat 3.2. Ptrunderea i transportul substanelor dizolvate n celula vegetal 3.2.1 Transportul pasiv i activ al substanelor 3.2.1.1. Transportul pasiv prin membranele biologice 3.2.1.2 Transportul activ prin membranele biologice 3.3. Schimburile de gaze dintre celula vegetal i mediu CAPITOLUL 4. REGIMUL DE AP AL PLANTELOR 4.1. Clasificarea plantelor n funcie de relaia lor cu umiditatea solului 4.2. Coninutul de ap al plantelor, strile i formele apei din plante 4.3. Rolul apei n viaa plantei

7 7 7 7 7 10 11 11 13 13 14 15 15 19 20 20 21 22 23 23 24 24 25 26 27 28 29 30 31 32 35 35 36 39 40 42 43 44 45 45 46 49 51 52 52 52

4 4.4. Absorbia apei de ctre plante 4.4.1. Cile i mecanismul de absorbie a apei de ctre plante 4.4.1.1. Absorbia apei prin rdcin i transportul extra-fascicular ctre xilem 4.4.1.2. Absorbia apei prin organele aeriene 4.4.2. Factorii care influeneaz absorbia apei de ctre plante 4.5. Transportul apei (i substanelor) n plante 4.5.1. Cile de transport a apei i substanelor 4.5.2. Forele care contribuie la circulaia apei (i substanelor) prin xilem 4.6. Eliminarea apei din plante 4.6.1. Transpiraia 4.6.1.1. Tipurile de transpiraie 4.6.1.2. Particularitile structurale i funcionale ale complexului stomatic 4.6.1.3. Influena factorilor asupra transpiraiei 4.6.1.4. Indicatori fiziologici privind transpiraia 4.6.2. Gutaia CAPITOLUL 5. FIZIOLOGIA NUTRIIEI MINERALE 5.1. Rolul fiziologic general i criterii de clasificare a elementelor minerale 5.2. Metode de studiu a nutriiei minerale a plantelor 5.2.1. Creterea plantelor pe soluii nutritive minerale artificiale - importan teoretic i practic 5.2.2. Analiza strii de nutriie a plantei 5.3. Absorbia, transportul i utilizarea substanelor minerale de ctre plante 5.3.1. Semnalizrile moleculare la nivelul rizosferei: interaciunile sol rdcini microorganisme 5.3.2. Absorbia substanelor minerale prin rdcin, transportul i acumularea ionilor minerali n plant 5.3.2.1. Absorbia substanelor minerale prin rdcin 5.3.2.2. Absorbia substanelor minerale prin organele aeriene 5.3.2.3. Transportul, acumularea ionilor minerali n plante i desorbia substanelor din plante 5.4. Rolul fiziologic al principalelor elemente minerale i dereglri fiziologice determinate de stresul nutriional 5.5. Adaptri ale sistemului radicular pentru favorizarea aprovizionrii plantei cu ap i substane minerale 5.5.1. Simbioza dintre ciupercile micoritice i rdcinile plantelor Micorizele 5.5.1.1. Principalele avantaje ale plantelor cu micorize i importana practic a micorizelor 5.5.1.2 Tipuri de micorize 5.5.1.3. Particulariti ale micorizelor vezicular- arbusculare 5.5.2. Fixarea biologic a azotului Simbiozele de tip rhizobial i actinorhizal 5.5.2.1. Particulariti fiziologice ale stabilirii simbiozei bacterie- rdcin 5.5.2.2. Procese fiziologice i biochimice privind fixarea azotului molecular 5.5.3. Asemnri i deosebiri structurale i funcionale dintre simbiozele arbuscularmicorhizale i noduli PARTEA II CAPITOLUL 6. NUTRIIA CU CARBON LA PLANTE 6.1. Tipuri de nutriie cu carbon la plante 6.2. Fotosinteza 6.2.1. Definiie, ecuaie general, importan 6.2.2. Sediul fotosintezei la nivelul plantei i la nivel celular 6.2.3. Condiii prioritare pentru desfurarea fotosintezei 6.2.3.1. Pigmenii asimilatori 54 54 54 56 57 60 60 61 64 64 65 65 70 73 75 77 77 79 80 82 83 83 86 86 87 87 88 96 96 97 99 101 104 104 107 110 113 113 114 114 114 115 116 116

5 6.2.3.2. Lumina 6.2.4. Mecanismul procesului de fotosintez 6.2.4.1. Faza dependent de lumin la plantele superioare 6.2.4.2. Faza independent de lumin (enzimatic) a fotosintezei reducerea dioxidului de carbon i sinteza hidrailor de carbon 6.2.5. Factorii care influeneaz fotosinteza 6.2.5.1. Factorii interni care influeneaz fotosinteza 6.2.5.2. Factorii externi care influeneaz fotosinteza 6.2.6. Legtura dintre fotosintez i recolt. Msuri de sporire a recoltei 6.3. Nutriia autotrof chimiosintetizant 6.4. Nutriia heterotrof 6.5. Nutriia mixotrof CAPITOLUL 7. TRANSPORTUL SUBSTANELOR ORGANICE N PLANTE 7.1. Particulariti structurale i funcionale ale floemului 7.2. Substane translocate i mecanismul de translocare prin floem 7.2.1. Tipuri i forme de substane translocate prin floem 7.2.2. Cile de parcurs, de la surs ctre utilizator i mecanismul de transport 7.3. Factorii care influeneaz translocarea prin floem 7.4. Depozitarea substanelor organice de rezerv CAPITOLUL 8. BIODEGRADAREA SUBSTANELOR ORGANICE DE REZERV 8.1. Respiraia Definiie, Ecuaie general, Importan 8.2. Etapele procesului de biodegradare a substanelor organice de rezerv 8.2.1. Etapa I-a - Biodegradarea enzimatic a substanelor organice de rezerv 8.2.2. Etapa a II-a de biodegradare a substanelor organice de rezerv 8.2.2.1. Biodegradarea glucozei pe calea glicolizei prima faz a respiraiei 8.2.3. Etapa a III-a de biodegradare a substanelor organice de rezerv 8.2.3.1. Mecanismul biodegradrii aerobe a acidului piruvic (respiraiei mitocondriale) - faza a doua a respiraiei 8.2.3.1.1. Bilanul energetic al biodegradrii glucozei 8.2.3.1.2. Ci alternative, prin care se evit conservarea energiei, n cursul fosforilrii oxidative 8.2.3.2. Biodegradarea anaerob a acidului piruvic 8.2.3.2.1. Mecanismul cilor fermentative la plantele superioare i importana practic 8.3. Factorii care influeneaz procesul de respiraie i importana practic a cunotinelor privind respiraia plantelor CAPITOLUL 9. FIZIOLOGIA CRETERII I DEZVOLTRII PLANTELOR 9.1. Aspecte generale privind creterea i dezvoltarea plantelor 9.2. Particulariti ale creterii plantelor 9.2.1. Etapele creterii celulare 9.2.1.1. Creterea embrionar 9.2.1.2. Creterea prin elongaie 9.2.1.3. Diferenierea celular 9.2.2. Particulariti ale creterii organelor plantelor 9.2.3. Evaluarea creterii plantelor 9.3. Micrile de cretere la plante 9.3.1. Factori implicai i mecanismul general de realizare a micrilor 9.3.2. Clasificarea micrilor la plante 9.3.2.1. Tropisme 9.3.2.2. Nastii 9.3.2.3. Nutaii 118 120 121 125 133 133 135 138 139 139 140 143 144 148 148 149 153 154 157 157 159 159 160 161 163 163 167 168 170 170 171 177 178 179 181 181 183 184 185 192 193 194 194 195 197 198

6 9.4. Controlul formrii florilor 9.4.1. Principii de baz ale formrii florilor 9.4.1.1. Fotoperiodismul i ceasul circadian 9.4.1.2. Giberelinele 9.4.1.3. Redirecionarea autonom 9.4.1.4. Vernalizarea 9.5. Fiziologia legrii, maturrii i senescenei fructelor 9.6. Senescena, abscisia i moartea 9.7. Factorii care influeneaz creterea i dezvoltarea plantelor 9.7.1. Factorii externi care influeneaz creterea i dezvoltarea plantelor 9.7.2. Hormonii vegetali i rolul lor n creterea i dezvoltarea plantelor 9.7.2.1. Mecanismul general de aciune a hormonilor vegetali 9.7.2.2. Principalele clase de hormoni vegetali i funciile acestora CAPITOLUL 10. DORMANA SAU STAREA DE REPAUS LA PLANTE 10.1 Tipuri de dorman, factori implicai i mecanism fiziologic general 10.2. Dormana plantei ntregi 10.3. Dormana mugurilor la plantele lemnoase Perenitatea 10.3.1. Fazele i controlul dormanei mugurilor 10.4. Dormana altor muguri 10. 5. Dormana la semine 10.5.1. Tipuri de dorman la semine 10.5.2. Mecanismul dormanei seminelor 10.5 3. Germinarea 10.5.3.1. Fiziologia i biochimia germinrii seminelor 199 200 203 208 209 209 212 213 215 215 217 217 218 223 224 226 226 226 229 230 231 232 232 234

7 PARTEA I CAPITOLUL 1 INTRODUCERE N FIZIOLOGIA PLANTELOR 1.1. Definiie, scop, importan

Fiziologia plantelor sau fiziologia vegetal este o tiin biologic, care se ocup cu studiul proceselor fundamentale ale vieii plantelor, precum: nutriia, creterea, dezvoltarea etc. i a capacitii de adaptare la condiii noi de via, att favoabile ct i nefavorabile. Termenul de fiziologie deriv de la cuvintele greceti physis = natur i logos = tiin, vorbire. Scopul fiziologiei plantelor l reprezint cunoaterea proceselor vitale, n aa fel nct s ne dea posibilitatea dirijrii vieii plantelor, n vederea obinerii unor producii maxime, de calitate superioar i n condiiile unei profitabilitii maxime. C.A. Timiriazev, cel mai mare dintre fiziologii botaniti rui spunea: " scopul spre care tinde fiziologia plantelor const n a studia i explica fenomenele vitale din organismul vegetal i nu numai a le studia i explica, dar n urma acestui studiu i a acestei explicaii s le supunem pe deplin voinei raionale a omului, astfel ca el s poat, dup dorin, s schimbe, s opreasc sau s provoace aceste feomene. Fiziologul nu poate s se mulumeasc cu rolul pasiv al observatorului; ca experimentator, el este un element activ, care dirijeaz natura " (Opere, Vol. V, pag. 143). Importana fiziologiei plantelor pentru agricultur a fost redat foarte sugestiv nc din secolul al XIX-lea, cnd Timireazev n cartea sa, Viaa plantelor (1878) preciza: "importana crescnd pe care o are agricultura tiinic va ndrepti desigur, cu timpul, convingerea c fiziologia plantelor va ocupa n viitor aceeai situaie, pe care o are fiziologia omului n raport cu medicina". n prezent, fiziologia plantelor a devenit tiina dirijrii proceselor vitale ale plantelor n scopul dorit, constituind baza tiinific pentru aprofundarea cercetrilor cu privire la plante n general i a plantelor de cultur n special. Totodat, fiziologia plantelor pune la dispoziia agronomului i horticultorului date cu privire la pstrarea produselor agricole i horticole; ofer indicaii importante n legtur cu creterea plantelor n condiii de ser, n soluii nutritive etc.; folosirea stimulatorilor de cretere sintetici (pentru stimularea germinrii seminelor, nrdcinarea butailor, combaterea chimic a buruienilor etc.). n acelai timp, pe baza cunotinelor de fiziologie vegetal, agronomul poate cerceta comportarea plantelor de cultur n condiii nefavorabile de mediu, precum seceta, excesul de umiditate, temperatura ridicat, temperatura joas negativ, concentraiile mari de sruri, atacul unor ageni patogeni, precum i msurile care pot fi luate, cu scopul sporirii rezistenei plantelor la aciunea duntoare a factorilor de stres abiotici i biotici. 1.2. Istoricul cercetrilor de fiziologia plantelor

1.2.1. Fiziologia plantelor pe plan mondial Fiziologia plantelor este tiin relativ tnr, conturndu-se ca tiin de sine stttoare n cadrul botanicii, ncepnd cu secolul al XVI-lea. Istoria fiziologiei, asemenea sistematicii este ns de o mai mare extindere n trecut, dar, procesele de recunoatere a acesteia au fost mult ncetinite. Cunotinele secolelor al XVI-lea i al XVII-lea nu au fost diferite de cele ale antichitii. Era cunoscut faptul c rdcina nu servete doar pentru fixarea plantei n sol, ci i pentru absorbia nutrienilor i c anumite ngrminte, precum cenua promoveaz creterea. Prin urmare, primele cunotine de fiziologia plantelor dateaz din antichitate fiind cuprinse n operele unor reprezentani de seam ai acelei perioade: Aristotel, Theophrast, Plinius.

8 n Evul Mediu, toate cunotinele au fost dominate de concepiile religioase. A cerceta natura era un sacrilegiu, iar relevarea realitii biologice, fr a include divinitatea la originea a tot ce exista, era pltit cu viaa. Cu scarificii ns, oamenii au cercetat n continuare i au fcut descoperiri valoroase. n perioada renaterii s-au scris primele cri de botanic i a aprut necesitatea ca cercetarea naturii s se fac pe baz de experimente. Prima experien de fiziologie vegetal fost efectuat de Johannes Baptista van Helmont (1577-1644) (fizician i chimist flamand), care n anii 1600, n urma unui faimos experiment a demonstrat c plantele utilizeaz substane n forma n care se gsesc n sol, n opoziie cu ideea susinut de Aristotel (dup care plantele s-ar hrni ca i animalele, cu substane organice gata pregtite din sol) i totodat a precizat rolul deosebit al apei n viaa plantelor. El a utilizat metoda gravimetric, respectiv a introdus ntr-un vas pmnt exact cntrit i a plantat un buta de salcie. A adugat ap ntr-o cantitate determinat, n fiecare zi i a urmrit experiena timp de 5 ani. Constatarea a fost c practic nu au existat diferene ntre masa iniial i masa final a solului. Deoarece nu se cunotea nimic despre fotosintez, Helmont, dominat de concepia primordialitii apei, ca factor de genez a vieii (concepia lui Thales din Milet) a concluzionat c salcia a crescut numai datorit apei. E. Mariotte (1620-1684) a realizat n anul 1679 c cele mai diferite plante pot primi aceiai nutrieni, din aceleai componente ale solului i c acestea sunt capabile s formeze mai muli compui, dect cei care se gsesc n sol. Pe lng aceasta, el a observat c una i aceeai sev brut poate produce un gust astringent la un fruct de pr slbatic i un gust bun n cazul unui altoi, altoit pe pomul slbatic. El a dovedit prin distilare faptul c, aceleai specii conin ntotdeauna aceiai compui i a demonstrat astfel c transformarea materiei are loc n plante. Pentru a confirma acest punct de vedere a fcut i un calcul. " Poi cultiva 3000-4000 de specii de plante diferite pe 7-8 livre de sol (livra- 452 g)Acum: dac seva, uleiurile i mineralele sunt diferite n fiecare dintre speciile de plante, atunci toate acestea ar trebui s fie coninute n aceast mic cantitate de sol i n apa de ploaie. Este clar c aa ceva este imposibil. Dac fiecare dintre aceste specii de plante, la momentul maturrii conin cel puin o sare fixat i dou din sol i dac toate acestea se adaug celor dizolvate n ap, aceasta ar crete cu circa 2-3 ori masa fiecrei specii de plante, nsemnnd c cele 4000 de specii de plante ar nsuma o mas de 500 livre". J. Woodward (1665-1728) a pus o plant ntr-un vas cu ap i a acoperit suprafaa apei, aa nct apa se putea elibera doar prin intermediul plantei. Astfel, el a descoperit c pe parcursul a trei luni, planta a emis de 46 de ori cantiatea de ap pe care ea o stocheaz n corpul su. Asemenea tip de experiment a fost perfectat de S. Hales (1677-1761), fizician i filozof englez, care a indicat de asemenea importana hidrostaticii, n privina explicaiilor ascensiunii sevei brute. El a determinat conexiunea dintre puterea presiunii sevei i transpiraie i a introdus cntarul, ca un nou dispozitiv pentru experimente, stabilind astfel o legtur cu fizica. A ncercat ca prin compararea maselor, s determine perioada de timp dintre absorbia apei i eliminarea sa prin transpiraie i a folosit aceste rezultate pentru a calcula viteza de transport a apei prin plant. Apariia lucrrii "Vegetable Statics" (1727) (n care sunt prezentate 124 de experiene proprii cu privire la circulaia sevei, transpiraia i nutriia plantelor) marcheaz momentul cnd fiziologia plantelor se impune ca tiin. Examinarea substanelor din plante, n special a acizilor a fcut progrese graie cercetrilor lui C.W. Scheele (1742-1786), cercetri ncepute n anii 1770 i ale lui F. Vanquelin, care i-a nceput astfel de studii la sfritul secolului al XVIII-lea. Prin intermediul lor au devenit bine cunoscui acidul tartric, acidul citric, acidul malic, acidul oxalic i acidul galic. De asemenea, A.S. Markgraf (1709-1782) i D. de Monceau (1700-1781) au analizat cenua plantelor i au identificat un numr de sruri. Totodat, Markgraf a fost primul care a folosit microscopul, ca un mijloc pentru chimia analitic (cristale de zahr n seciunile de rdcini uscate). S.F. Hermstaedt (1760-1833) a introdus analiza chimic, ca mijloc de caracterizare a plantelor folositoare. A evideniat semnificaia fermentaiei i deteriorrii. De asemenea, J.J.Berzelius (1779-1848) a listat pe parcursul primei jumti a secolului al XIX-lea, mai mult de 40 de compui diferii izolai din plante.

9 J. Priestley (1733-1804) (chimist englez) a precizat c aerul este pentru viaa plantelor la fel de necesar, ca i pentru viaa animalelor, dar plantele, spre deosebire de animale au proprietatea de a purifica aerul viciat de respiraia vieuitoarelor sau prin diferite arderi. Cel mai faimos experiment (efectuat n jurul anilor 1772) a demosntrat c o lumnare se va stinge imediat, dac se plaseaz ntr-un clopot de sticl, dar va arde din nou n acelai mediu, dac n vas se va lsa o plant pentru cteva zile. Concluzia sa a fost c planta a mprosptat aerul, care a fost viciat prin arderea lumnrii. De asemenea, Priestley a concluzionat c un oarece plasat sub clopotul de sticl va vicia aerul, n aceeai manier precum a fcut-o lumnarea i c aerul poate fi respirat dup ce a fost mprosptat. Aceasta a condus la conceptul c respiraia i fotosinteza sunt procese opuse. A inut un oarece ntr-un clopot de sticl cu aer, pn el a murit. Dac ns oarecele a fost inut sub clopot mpreun cu o plant, el a supravieuit. Priestley este cel care a descoperit substana, care mai trziu a fost denumit oxigen, de ctre chimistul francez Antoine Laurent Lavoisier. J.I. Ingenhousz (1730-1799) (fiziolog olandez) a determinat n anul 1778 c plantele absorb CO2 i elibereaz O2, cnd sunt expuse la lumin i este primul care a definit procesul de fotosintez. El a fcut distincia ntre fotosintez i respiraie, preciznd c numai plantele verzi au proprietatea de a purifica aerul viciat i c aceasta se ntmpl numai n prezena luminii (la ntuneric, plantele verzi asemenea altor vieuitoare, elimin CO2 i absorb O2). Iat deci, este momentul conturrii fotosintezei i respiraiei ca dou procese fundamentale ale vieii plantelor i totodat al afirmrii importanei pigmenilor asimilatori. Greeala lui Ingenhousz a fost c a crezut c oxigenul eliberat de ctre plante deriv din dioxidul de carbon. Apoi, fizicianul german J.R. Mayer a formulat conceptul c energia a fost transformat din energie luminoas, pentru a produce noi substane chimice. n anul 1791, J. Senebier (1742-1809) a publicat lucrarea Physiologie vgtale, lucrare n care trateaz nutriia mineral a plantelor. De asemenea, mpreun cu Th.de Saussure (1767-1845) a studiat influena luminii i schimburile de gaze. R.H.J. Dutrochet (1776-1847) a descoperit osmoza, a explicat modul de determinare a presiunii osmotice la soluii, a definit turgescena, imbibiia i transportul sevei brute. Bazele nutriiei minerale a plantelor au fost puse tot n cadrul secolului al XIX-lea. n anul 1838, Academia de tiine din Gttingen a oganizat o competiie, ntrebarea fiind: "dac ceea ce numim element anorganic, care poate fi gsit n cenua plantelor poate fi gsit i n plante, chiar dac el nu a fost oferit ca nutrient i dac aceste elemente sunt pri aa de importante ale organismului plantei, aa nct acestea chiar nu pot crete fr ele". Ctigtorul competiiei a fost chimistul Justus v. Liebig (1803-1873), cu lucrarea sa "Die organische Chemie in ihrer Anwendung auf Agricultur und Physiologie" (Chimia Organic i Utilizarea ei n Agricultur i Fiziologie). El a fost apreciat pentru determinrile sale n ceea ce privete folosirea metodelor chimice, pentru a rspunde la ntrebri legate de nutriia plantelor. A examinat conexiunile dintre recolt i cantitatea de ngrminte aplicat plantelor i de asemenea a recunoscut importana compuilor minerali fcui disponibili plantelor prin descompunerea materialelor de origine animal i vegetal. Pe baza unor experimente, Liebig a precizat c principalele elemente necesare plantelor sunt C, H, O i N, elemente disponibile n abunden, aa nct suplimentarea lor nu a fost necesar. Totodat, a precizat c humusul nu scade dintr-un sol acoperit cu vegetaie, ci, dimpotriv sporete, ceea ce infirm definitiv concepia lui A. Ther. Dup sursa de carbon folosit, Liebig a mprit plantele n autotrofe i heterotrofe i a indicat unele metode adecvate pentru cercetarea nutriiei minerale a plantelor. Fiziologia plantelor a fost introdus pentru prima oar ca disciplin separat de botanic, n anul 1849 la Universitatea din Viena, apoi n toate marile centre universitare din Europa. A doua jumtate a secolului al XIX-lea a reprezentat perioada afirmrii cercetrilor fitofiziologice. n acest sens, se pot aminti: cercetrile efectuate de J.B.D. Boussingault (18021887), chimist i agronom francez, care a introdus metoda culturilor experimentale n studiul nutriiei minerale; J. Sachs (1832-1897), fiziolog german, care a publicat un tratat de fiziologie vegetal n anul 1865, tratat care cuprindea rezultate ale experienelor proprii, cu privire la diferite procese fiziologice la plante; W. Pfeffer (1865-1920) a efectuat cercetri privind osmoza,

10 fotosinteza, absorbia apei, precum i transportul sevei elaborate; K.A. Timireazev (1843-1920) a efectuat cercetri privind fotosinteza i a evideniat rolul fundamental al clorofilei n procesul de fixare a energiei solare, respectiv rolul ei cosmic, de a realiza legtura dintre astrul ceresc i pmnt. Secolul al XX-lea a reprezentat epoca fiziologiei aplicative. S-au efectuaat cercetri cu privire la nutriia plantelor i s-au stabilit reete pentru soluii nutritive (V.D. Crone - 1902; H. Cranner - 1922; D. Hoagland - 1948). S-au studiat microorganismele fixatoare de azot molecular (M. Beijerinck - 1901; S. Vinogradski - 1889). S-au indicat condiiie cele mai favorabile pentru asimilarea azotului. Au fost descoperii stimulatorii de cretere (auxinele), graie cercetrilor lui A. Paul (1914), F.Went; N.G. Holodni i F. Kgl. Ulterior, cercetrile efectuate i rezultatele obinute n ce privete utilizarea substanelor bioactive au condus la noi descoperiri, respectiv descoperirea giberelinelor, citochininelor, retardanilor etc. De asemenea, au luat amploare cercetrile privind influena factorilor de stres i rezistena plantelor la aciunea acestora (N.A. Maksimov, S.N. Ivanov, J. Levitt, K. Hffler etc.); cercetrile legate de nflorirea i fructificarea plantelor (V.S. Klebs - 1912; G. Gassner; W.W. Garner; H.A. Allard - 1920); studiile n privina hormonilor implicai n procesul nfloririi (H. Chailakhyan 1937; S.H. Wittwer, A. Lang - 1959; J Bonner - 1963; C. Nitsch - 1968. Totodat, s-a acordat atenie deosebit cercetrilor fundamentale, precum cele legate de elucidarea mecanismului fotosintezei (M. Calvin, D. Arnon, A. Benson), mecanismului respiraei (A.N. Bach, O. Warburg), modului de aciune al stimulatorilor (K.V. Thimann, A. Vegis, A.C. Leopold, P.E. Pilet) ct i celor referitoare la absorbia substanelor minerale (H. Lundegrdh, D. Hoagland, P. Kramer, J. Suteliffe, H. Jenny). n secolul XXI, proteomica celulelor plantelor a devenit o tehnologie care asigur informaii asupra genomicii funcionale, determinnd localizarea subcelular a proteinelor, identificarea componentelor unui complex proteic multifuncional i identificarea a noi componente implicate n metabolismul celulei vegetale. Prima diferen major dintre genom i proteom este aceea c genomul este static, n timp ce proteomul celulelor vii este dinamic, aa nct intervin modificri ca rspuns la starea metabolic individual a celulei i la recepia moleculelor semnal, de natur intracelular i extracelular. Prin urmare, analiza proteinelor reprezint cea mai direct procedur pentru abordarea dinamicii metabolismului celulei vegetale. 1.2.2. Fiziologia plantelor n Romnia n Romnia, fiziologia plantelor a fost fondat n anul 1907 de ctre E.C. Teodorescu (1866- 1949), titular al primei catedre de Anatomie i Fiziologie vegetal, n cadrul Universitii din Bucureti, pn n anul 1935. E.C. Teodorescu i-a fcut studiile la Paris i a obinut doctoratul la fiziologul francez G. Bonnier, la Sorbona. A fost un savant de renume mondial, fiind nscris n anul 1966 printre personalitile de seam srbtorite la UNESCO. Printre deosebitele sale contribuii tiinifice se pot aminti: influena radiaiilor luminoase asupra creterii, asupra formei i structurii plantelor; circulaia substanelor organice prin liber; micrile plantelor volubile la lumin i la ntuneric etc. Sub directa coordonare a lui E.C. Teodorescu s-au format noi personaliti ale fiziologiei vegetale romneti i ulterior creatori de coal, att n nvmnt ct i n cercetare. Merit a fi menionai: P. Stnescu, care a studiat acumularea produilor fotosintezei n timpul zilei, n condiii diferite; C.T Popescu, care mpreun cu E.C. Teodorescu a studiat esutul liberian i rolul su n transportul substanelor organice (1915); . Popescu a studiat zona de absorbie la nivelul rdcinilor. n anul 1912, la Universitatea din Iai a nceput predarea fiziologiei ca disciplin separat, de ctre I.C. Constantineanu (1869-1931), iar din anul 1919 fiziologia s-a predat i la Cluj, de ctre I. Grinescu. Grinescu a cercetat morfologia i fiziologia algelor verzi, precum i micrile la leguminoase. De asemenea, tot la Cluj o activitate deosebit a fost depus de acad. Prof. E.Pop, cu

11 contribuii deosebite n ceea ce privete curenii citoplasmatici la plantele submerse, absorbia zincului n semine i cariopse, pe baza folosirii izotopilor radioactivi etc. n cadrul aceleiai universiti, . Peterfi i-a adus contribuii la dezvoltarea fiziologiei stimulatorilor de cretere, la studiul dinamicii vitaminei C la specii de plante aparinnd la familii diferite, la studiul dinamicii glucidelor la via de vie etc. ncepnd din anul 1938, fiziologia vegetal a devenit disciplin de sine stttoare i obligatorie pentru tot nvmntul biologic universitar. Cercetrile efectuate n cadrul catedrelor de fiziologie vegetal, a institutelor de cercetri de biologie i agricole, a staiunilor experimentale au condus la dezvoltarea continu a fiziologiei vegetale din ara noastr, precum i la realizarea conexiunilor dintre cunotinele teoretice i activitatea practic. 1.3. Raporturile fiziologiei plantelor cu alte tiine

Fiziologia plantelor este o tiin cu un caracter teoretic, dar i aplicativ. Avnd n vedere complexitatea proceselor vitale specifice plantelor, sunt necesare o serie de cunotine din alte domenii ale biologiei. Fiziologia plantelor are legturi cu fiziologia animal, deoarece multe procese fiziologice sunt caracterizate prin mecanisme fizice i biochimice comune. Avnd n vedere legtura strns ntre structur i funcie, fiziologia plantelor are relaii cu morfologia i anatomia plantelor. Biochimia i biofizica pun la dispoziia fiziologiei plantelor metode de cercetare a unor procese fiziologice la nivel molecular. Pentru nelegerea interrelaiei dintre organism i mediu, ecologia asigur cunotinele necesare. La rndul lor, genetica i ameliorarea plantelor se bazeaz pe cunoaterea proceselor fiziologice i a particularitilor metabolice ale soiurilor. Agrochimia permite nelegerea relaiei plant-sol, n ceea ce privete procesele de nutriie mineral i de utilizare corespunztoare a ngrmintelor, n vederea obinerii unor producii mari, de calitate superioar i profitabile din punct de vedere economic. Pentru disciplinele de specialitate (legumicultur, pomicultur, viticultur, floricultur, fitotehnie etc.), fiziologia plantelor reprezint baza teoretic. Ea poate fi considerat asemenea mecanicii fine pentru industrie. De asemenea, microbiologia i fitopatologia utilizeaz cunotine de fiziologie a plantelor. Spre exemplu, reacia de rspuns a plantelor la aciunea agenilor biotici de stres este explicat i interpretat pe baza mecanismelor fiziologice specifice. Totodat, pentru calculul i interpretarea rezultatelor obinute n urma cercetrilor de fiziologie a plantelor, un rol deosebit revine matematicii i statisticii. De asemenea, sunt deosebit de utile cunotinelor privind utilizarea calculatorului. Fiziologia plantelor ofer rezultate pentru fundamentarea tehnologiilor de producie, dar totodat beneficiaz de aportul de cunotine pe probleme practice. n urma experimentelor specifice, se pot oferi rspunsuri la aceste probleme. Prin urmare, prioritile cercetrii n domeniul tiinelor agricole reprezint n acelai timp obiective prioritare ale cercetrilor n domeniul fiziologiei plantelor. 1.4. Metode de cercetare utilizate n fiziologia plantelor

Metodele de baz utilizate n cadrul cercetrilor de fiziologia plantelor sunt observaia i experimentul. De altfel, fiziologia plantelor este o tiin cu un profund caracter experimental. Experiena este realizat n condiii dirijate de ctre om, dup reguli stabilite anterior (n condiii de laborator, n casa de vegetaie, ori n cmp), iar lucrrile trebuie astfel organizate, nct studiile privind procesele fiziologice s fie efectutate raportat la factorul modificat. Printr-o asemenea metod se pot stabili condiiile favorabile pentru creterea i dezvoltarea plantelor, respectiv condiiile nefavorabile.

12 Desigur, rezultatele experienelor de laborator trebuie s fie verificate n condiii de cmp, deci n condiii naturale, unde intervin numeroi factori, care nu pot fi controlai n totalitate. Observaia presupune cercetarea plantelor n condiiile naturale de via i efectuarea unui numr suficient de determinri. Existena unei legturi cauz-efect este demonstrat de repetarea unui anume fenomen, n aceleai condiii date. Ca procedee tehnice de laborator se folosesc n mare msur metode fizico-chimice. Rezultatele obinute sunt prelucrate statistic, cu scopul interpretrii corecte a acestora i formulrii concluziilor cu caracter general.

13 CAPITOLUL 2 FIZIOLOGIA CELULEI VEGETALE Cuvinte cheie: celula vegetal, proprieti fiziologice, perete celular, plasmalem, tonoplast, citosol, citoschelet, sistem de endomembrane, ribozomi, plastide, mitocondrii, nucleu, vacuomul celular Obiective descrierea sumar a principalelor proprieti fiziologice ale celulei vegetale; descrierea rolului fiziologic al componentelor celulei vegetale, n relaie cu structura i compoziia chimic a acestora; REZUMAT Celula vegetal reprezint unitatea morfologic, structural i funcional de baz a plantelor. Principalele proprieti fiziologice ale celulei vegetale sunt: metabolismul (cu cele dou laturi ale sale: anabolism i catabolism), creterea, dezvoltarea, sensibilitatea i excitabilitatea, micarea, adaptabilitatea, ereditatea i moartea. Componentele de baz ale celulei vegetale eucariote sunt: peretele celular (peretele celular primar, peretele celular secundar, lamela median, plasmodesmele) i protoplastul (citoplasma, nucleul, vacuomul celular i substanele ergastice). Funciile fiziologice ale componentelor celulare sunt n strns interrelaie cu particularitile structurale i compoziia chimic a acestora.

Celula vegetal reprezint unitatea morfologic, structural i funcional de baz a plantelor (fig.2.1.). Cunoaterea particularitilor structurale i a rolului fiziologic al componentelor celulare reprezint o etap primordial n vederea nelegerii i interpretrii proceselor fiziologice, care se desfoar la nivelul plantei ntregi.
Fig. 2.1. Principalele componente structurale ale celulei vegetale

2.1. Proprietle fiziologice ale materiei vii Celulele, precum i plantele ntregi sunt organisme vii, care se caracterizeaz prin urmtoarele proprieti fiziologice: Metabolismul reprezint totalitatea reaciilor de schimb de substane, energie i informaii dintre celula vegetal i mediul nconjurtor, precum i totalitatea transformrilor care se petrec n celula vie. Prin urmare, celulele constituie un sistem deschis, dinamic, aflat ntr-un permanent schimb de substan, energie i informaie cu mediul i care tind ctre un echilibru termodinamic, fr ns a se ajunge la el. n cadrul metabolismului se disting dou laturi contradictorii:

14 anabolismul i catabolismul. Anabolismul reprezint totalitatea reaciilor de biosintez a substanelor proprii organismului, reacii care se realizeaz cu consum de energie metabolic. Catabolismul const n totalitatea reaciilor de biodegradare a substanelor de rezerv, conducnd la producerea de energie. Cele dou laturi ale metabolismului alctuiesc o unitate dialectic. n cursul ontogenezei, raportul dintre cele dou laturi ale metabolismului se modific. n faza de tineree a plantelor predomin anabolismul (ceea ce explic i procesul de cretere al organelor tinere), la maturitate se nregistreaz un echilibru dinamic ntre cele dou laturi (durata strii de echilibru variaz cu specia de plant), iar n faza de senescen predomin catabolismul. Creterea este un proces cantitativ, complex, ireversibil, care const n sporirea numrului de celule, a masei i a volumului acestora. Dezvoltarea este un proces calitativ, care const n parcurgerea fazelor de tineree, maturitate i senescen i realizarea capacitii de reproducere, asigurndu-se perpetuarea speciei. Sensibilitatea i excitabilitatea reprezint proprieti ale materiei celulare vii, de a percepe aciunea factorilor din mediul ambiant i de a rspunde n mod specific. Micarea este o proprietate de baz a materiei vii, dar i a plantei ca organism. Prin desfurarea proceselor de cretere n mod flexibil, plantele rspund condiiilor mediului ambiant. Adaptabilitatea reprezint nsuirea celulelor vii de a-i modifica structura i metabolismul, n raport cu factorii de mediu, ceea ce le permite supravieuirea n condiii de stres. Ereditatea reprezint proprietatea materiei vii de a transmite n mod fidel la descendeni, caracterele specifice speciei. Moartea este o nsuire general a organismelor vii, de altfel o consecin fireasc a vieii, care survine odat ce metabolismul nceteaz. 2.2. Principalele particulariti structurale ale celulei la plantele superioare i rolul fiziologic al componentelor celulare Prezentarea principalelor particulariti structurale ale celulei vegetale eucariote i a rolului fiziologic al acestora va avea n vedere structurarea redat n tabelul 2.1. Tabelul 2.1. Principalele pri componente ale celulei vegetale eucariote
PERETELE CELULAR - peretele celular primar - peretele celular secundar - lamela median - plasmodesmele = coninutul celular (exclusiv peretele celular) 1) Membrana citoplasmatic = Plasmalema 2) Citosolul 3) Citoscheletul 4) Sistemul de endomembrane (reticulul endoplasmatic, complexele Golgi, membrana nuclear, membrana vacuolar, microveziculele) 5) Ribozomi 6) Plastide 7) Mitocondrii a) Nucleoplasma b) Cromatina c) Nucleoli

PROTOPLASTUL A) Citoplasma

B) Nucleul

C) Vacuomul D) Substane ergastice - cristale de oxalat de calciu, taninuri etc. - grunciori de amidon n amiloplaste i cloroplaste

15 2.2.1. Peretele celular Peretele celular reprezint nveliul exterior al celulei, o reea fibrilar puternic, care d fiecrei celule forma sa stabil. Principalele ntrebri care se pun sunt urmtoarele: care sunt structurile care alctuiesc polimerii care intr n structura peretelui celular ? cum sunt fabricai aceti polimeri i cum sunt depozitai n matrixul extracelular ? cum funcioneaz peretele celular n cazul proceselor de cretere i difereniere celular ? care este interrelaia dintre evenimentele extracelulare i cele intracelulare; cum sunt reglate aceste relaii ? n urma studiilor efectuate prin microscopie electronic de mare rezoluie, peretele celular a fost descris ca un complex de hidrai de carbon i proteine, secretate de celul. El apare a fi un matrix continuu, care se constituie ca o schel i un substrat pentru celule ntr-un esut. O interpretare mai simpl este aceea c peretele celular const dintr-o dispunere ordonat a microfibrilelor de celuloz, mbrcate n hemiceluloz. Acest matrix este fixat ntr-un gel de pectine i undeva n acest aranjament se gsesc proteine. De asemenea, ligninele i ali polimeri organici asigur rezistena i rigiditatea peretelui celular. Cercetrile bazate pe tehnica spectroscopiei n infrarou au permis realizarea amprentei compoziiei peretelui celular (Bonetta i al., 2002). 2.2.1.1. Formarea peretelui celular i componentele acestuia Peretele celular const din trei straturi: 1) - lamela median: primul strat format n timpul diviziunii celulare i alctuit n principal din compui pectici; 2) - peretele celular primar: format dup lamela median i const dintr-un schelet rigid al microfibrilelor de celuloz, mbrcate ntr-un material asemenea unui gel, compui pectici i glicoproteine; 3) - peretele celular secundar: format dup ce creterea celulei s-a ncheiat; extrem de rigid; alctuit din celuloz, hemiceluloz i lignin. Peretele celular se formeaz n timpul diviziunii celulare, din fragmoplast (fig. 2.2.). Fragmoplastul (sub forma unui disc) se formeaz la mijlocul celulei care se divide, n cursul telofazei i const din o mas citoplasmatic (proplastide, promitocondrii, canalicule ale reticulului endoplasmatic, vezicule golgiene, ribozomi liberi). De asemenea, n fragmoplast se remarc i microtubuli, care contribuie la orientarea deplasrii veziculelor provenite din complexul Golgi. Veziculele golgiene pun n libertate acizii galacturonici, care ulterior prin legturi 1,4- -glicozidice vor forma acizii poligalacturonici. Acetia intr n alctuirea substanelor pectice, sub form Fig. 2.2. Formarea fusului de diviziune de geluri, din care se formeaz apoi lamela median. Lamela median reprezint liantul dintre celulele esuturilor, practic interfaa dintre pereii celulari primari ai celulelor vecine.

16 Membranele veziculelor golgiene, precum i cele formate prin biosinteza de novo se unesc i formeaz plasmalema. Ulterior formrii plasmalemei, printr-un proces de exopinocitoz, substanele sunt eliberate n spaiul extraplasmatic (ntre plasmalem i lamela median), realizndu-se biosinteza peretelui celular primar i a peretelui celular secundar (n anumite cazuri). Pentru dicotiledonate sunt descrise cinci componente de baz ale peretelui celular, n urmtoarele procente aproximative : 1. celuloz (circa 30% din masa uscat a peretelui celular); 2. hemiceluloz (circa 30%); 3. pectine (circa 35%); 4. proteine (circa 1-5%) i 5. ap (circa 75%). De asemenea, calciul este considerat cel de-al aselea component, dar el se afl n cantiti cu adevrat neglijabile, comparativ cu primele 5. Peretele celular primar const din 9%-25% celuloz (moleculele fiind asamblate n fibre cilindrice lungi, numite microfibrile); 25%-50% hemiceluloze; 10%-35% substane pectice; 10% proteine (fig. 2.3.) (Cosgrove, 2005). El este caracteristic celulei vegetale. Celulele tinere n cretere, unele celule de depozitare, celulele fotosintetizante din frunze, toate celulele parenchimatice i alte tipuri de celule nu au dect perete celular primar. Peretele celular secundar const din circa 41%-45% celuloz, 30% hemiceluloz i n unele cazuri 22%-28% lignin. El are de obicei o grosime mai mare dect peretele celular primar i const n materialul depozitat ntre peretele celular primar i plasmalem, odat ce creterea celulei a ncetat. Peretele celular secundar este caracteristic spre exemplu celulelor care alctuiesc xilemul i contribuie la prevenirea colapsului, care s-ar putea produce datorit presiunii exercitate de celulele vecine, pline cu lichid aflat sub presiune. Uneori se formeaz peretele celular teriar. Peretele celular primar i secundar difer n ceea ce privete lignificarea. Peretele celular primar nu este lignificat, este subire i elastic. Pereii celulari secundari i teriari sunt lignificai. Peretele celular primar nu are perforaii, n timp ce peretele celular secundar are numeroase perforaii, respectiv suprafee subiri n peretele celular formate n perechi, pe fiecare parte a lamelei mediane, care separ celulele vecine. Fig. 2.3. Structura peretelui celular primar Peretele celular este (dup Cosgrove, 2005) strbtut transversal de extensii tubulare ale plasmalemei, cu diametrul de circa 50 nm, denumite plasmodesme de ctre Strasburger n 1901. Acestea reprezint de fapt puni citoplasmatice ntre celule (fig. 2.4.). Conexiunile astfel formate constituie simplastul, iar transportul prin plasmodesme este denumit transport prin simplast.

Fig. 2.4. Aspectul plasmodesmelor din peretele celular n seciune longitudinal

17 Plasmodesmele primare se formeaz n timpul diviziunii celulare, n zona fragmoplastului i sunt firioare citoplasmatice intercelulare nconjurate de plasmalem (fig. 2.5.). Componenta central este reticulul endoplasmatic, iar zona dintre plasmalem i partea de reticul endoplasmatic este denumit annulus. Termenul de desmotubul este nlocuit cu denumirea appressed ER protein complex (AERPC sau AER). Plasmodesmele, reticulul endoplasmatic i membrana nucleului constituie un sistem membranal continuu. Deplasarea intercelular a moleculelor mici are loc prin micro-canale create ntre proteinele globulare ale AERPC i plasmalem. Micro-canalele au un diametru de circa 2,5 nm. Plasmodesmele secundare se formeaz post- citochinez, transversal pereilor celulari existeni deja. Plasmodesme secundare se pot forma pe parcursul ciclului de dezvoltare normal a plantei, precum i n cazul unor sisteme speciale (altoiri, interaciuni gazd-patogen etc.). Spre exemplu, n mugurii i florile tinere de Setcreasea purpurea, mrimea limit de funcionalitate (SEL) a perilor staminali este mai mic de 1000 Daltoni, n timp ce n florile senescente, SEL este mai mare dect 4,4 kDa. SEL crete de asemenea sub aciunea unor stimuli din mediu. n lipsa oxigenului sporesc SEL n rdcinile de gru, iar stresul osmotic crete SEL n rdcini de mazre. Studiile efectuate au permis introducerea Fig. 2.5. Reprezentarea unui model conceptului de conductan a plasmodesmelor. de structur a Plasmodesmele sunt structuri dinamice, care se plasmodesmei pot deschide sau nchide, pe msura maturrii esutului vegetal. Structura intern complex este critic pentru reglarea traficului moleculelor. Pe msur ce frunzele progreseaz de la importator net de fotoasimilate, ctre exportator net de foto-sintetizate, frecvena plasmodesmelor simple (care constau ntr-un singur canal) scade, n timp ce frecvena plasmodesmelor ramificate crete. De asemenea, cercetrile au demonstrat c plasmodesmele se pot afla sub trei conformaii de baz: nchise, deschise i dilatate (Crawford i Zambruyski, 2000). Producerea i depozitarea constituenilor peretelui celular Sinteza celulozei i a polizaharidelor matrixului se realizeaz pe ci distincte. La sfritul anilor 1990, prin studii moleculare i genetice s-au identificat genele celulozo-sintazei (CESA). Proteinele CESA sunt localizate la nivelul plasmalemei, n hexameri sub form de rozete (fig.2.6.). n cazul plantelor model Arabidopsis thaliana, familia CESA const din 10 gene, care se exprim n diferite tipuri de celule i esuturi. Spre exemplu, CESA 1, CESA 3 i CESA 6 sunt necesare pentru biosinteza peretelui celular primar, iar CESA 4, CESA 7 i CESA 8 sunt necesare pentru formarea peretelui celular secundar. Prin intermediul celulozosintazelor, care se deplaseaz n bistratul de fosfolipide se formeaz microfibrilele celulozice (lanuri de 1,4--D-glucan) cu o grosime de 35 nm i muli m lungime. Modificarea poziiei microtubulilor schimb i direcia de depunere a microfibrilelor. CESA sunt asociate i cu zaharozo-sintaza prin a crei citoplasmatic, activitate se asigur glucide pentru Fig. 2.6. Sinteza celulozei prin intermediul CESA sinteza polimerului.

18 Substanele pectice i hemiceluloza sunt sintetizate n sistemul de endo-membrane i secretate prin intermediul acestuia, urmnd a se realiza complexul cu celuloza, n matrixul extracelular (fig. 2.7.). Microfibrilele celulozice sunt legate mpreun prin interaciuni ne-covalente cu polizaharidele matrixului, ceea ce determin multe dintre proprietile fizice ale peretelui celular. Denumirea de hemiceluloz se folosete pentru a descrie o familie de polimeri bogai n Fig. 2.7. Producerea i depozitarea constituenilor peretelui celular glucoz, xiloz i arabinoz. Spre deosebire de celuloz, acetia au lanuri lungi, care includ adesea xiloz, galactoz sau fucoz. Substanele pectice sunt o familie de acizi poligalacturonici, alctuii n general din arabinoz, galactoz sau un complex de monozaharide i formeaz un gel. Sunt puternic metil esterificate cnd sunt depozitate, ceea ce le face rezistente la hidroliz i relativ nereactive cu calciul din peretele celular i cu ali ioni. Dup depunere, pectina este de-esterificat prin intermediul pectin metil esterazei (PME), redndu-i o sarcin negativ. Aceasta i permite s formeze configuraii rigide i s se lege eficient de calciu. Este totodat susceptibil la modificare, prin intermediul enzimelor hidrolitice de tip poligalacturonaze (PGs). Proteinele prezente n pereii celulari au fost clasificate astfel: proteine structurale, grupate n funcie de aminoacidul predominant: glicoproteinele bogate n hidroxi-prolin (HRGP), proteine bogate n prolin (PRP) i proteine bogate n glicin (GRP). Multe dintre acestea sunt puternic glicozilate. Extensina este una dintre HRGPs cel mai bine studiat. Ea conine serin, tirozin i lizin. proteine nestructurale: din clasa proteinelor arabinogalactanilor (AGPs), solubile n ap i foarte puternic glicozilate. AGPs funcioneaz n procesele de adeziune celular, semnalizare celular. Pe lng acestea, pot fi incluse numeroase enzime, care de altfel au un rol deosebit n procesul de extensie celular. Spre exemplu, acestea determin hidroliza enzimatic a polizaharidelor matrixului. Apa este adesea ignorat ca i component a peretelui celular, dei este un solvent, lubrifiant i determin concentraia componentelor n peretele celular. Totodat, hidratarea determin porozitatea peretelui celular. Creterea peretelui celular Formarea peretelui celular primar este n general nsoit de nceputul celei de-a doua etape de cretere celular, respectiv extensia sau elongaia celular (vezi Cap. 9.). n legtur cu extensia peretelui celular au fost descrise recent patru mecanisme moleculare, iar agenii implicai s-au prezentat a fi: expansina, xiloglucan endotransglicolaza/hidrolaza, endo- (1,4) -D-glucanaza i radicalii hidroxil. Se pun n discuie dou clase de ageni ai relaxrii peretelui celular: ageni primari, care catalizeaz direct relaxarea peretelui celular stress relaxation-;

19 ageni secundari, care cauzeaz extensia peretelui celular indirect, prin amplificarea efectelor fizice ale agenilor primari. Prin experimente s-a stabilit c celulele cresc mai rapid cnd pH-ul peretelui celular este situat sub 5,5 (conform ipotezei creterii acide) (Hager, 2003). Acidifierea activeaz activitatea expansinelor, care sunt ageni primari ai relaxrii peretelui celular (Cosgrove, 1997). Expansinele mediaz extensia indus acid, dar ele nu hidrolizeaz polizaharidele principale ale matrixului peretelui celular. Peretele celular se caracterizeaz prin nsuirea de a crete n suprafa (prin intussuscepiune) i n grosime (prin apoziie). Intussuscepiunea const n: transportul expansinelor dinspre citoplasm, prin plasmalem, ctre peretele celular; ruperea legturilor de hidrogen dintre componentele peretelui celular, ndeprtarea moleculelor i creterea suprafeei peretelui celular, ca urmare a presiunii de turgescen din celul; refacerea legturilor i sinteza a noi substane care intr n structura peretelui celular, cu participarea activ a sintetazelor i a auxinei. Expansinele au fost iniial identificate ca proteine pentru relaxarea peretelui celular. Studiile efectuate folosind plante transgenice au evideniat o serie de roluri biologice, n diferite aspecte ale creterii i dezvoltrii, precum extensia peretelui celular, scderea fermitii fructelor, abscisie, dezvoltarea componentelor florale, simbioz i rspunsul la aciunea factorilor de stres (Choi i al., 2006). Apoziia reprezint depunerea de noi microfibrile celulozice i lignine, pe faa interioar a peretelui celular primar, formndu-se peretele celular secundar. Depunerea moleculelor este centripet i uniform, n cazul celulelor sclerenchimatice. Se realizeaz astfel procesul de apoziie intern. La vasele lemnoase, apoziia se realizeaz tot centripet, dar neuniform. La grunciorii de polen ns, creterea n grosime a peretelui celular are loc centrifug, prin apoziie extern. 2.2.1.2. Modificri secundare ale peretelui celular Cerificarea const n depunerea de ceruri (amestec de ceride, adic esteri ai acizilor grai i a hidroxiacizilor cu 15-35 atomi de carbon, cu alcooli superiori care posed 28-34 atomi de carbon; de asemenea, aceste substane conin i molecule libere de acizi grai, alcooli, cetone, hidrocarburi, aldehide etc.). Biosinteza precursorilor cerurilor are loc la nivelul celulelor epidermice. Urmeaz transportul lor la exteriorul acestor celule, prin ectodesme i porii cuticulari. Transportul se face n stare dizolvat n substane volatile, iar la suprafaa cuticulei, solvenii se evapor. Cerurile cristalizeaz i n consecin se determin reducerea pierderilor de ap din esuturi, prin procesul de transpiraie. Cutinizarea const n depunerea cutinei. Cutina conine polimeri lipidici cu 16 i 18 atomi de carbon i cantiti mici de compui fenolici. Se consider c biosinteza cutinei se realizeaz pe suprafaa exterioar a pereilor celulari. Se folosesc monomeri formai n reticulul endoplasmatic neted i transportai la exteriorul celulelor, n cadrul unor vezicule sau sub form de picturi. Suberificarea const n depunerea suberinei, pe faa intern a pereilor celulari ai epidermei i ai endodermei. Aceasta este alctuit dintr-un amestec complex de acizi grai cu lanul lung C16C26 , acizi hidroxilai, acizi dicarboxilici i alcooli cu lanul lung. Ea difer de cutin, prin cantitatea mai mare de acizi fenolici i prin natura acizilor grai. Suberina determin ngrorile lui Caspary de la nivelul celulelor eododermului sau impregneaz celulele exterioare ale tuberculilor de cartof, n faza de maturitate. Suberificarea se realizeaz i n cazul celulelor lezate mecanic, ceea ce contribuie la izolarea esuturilor atacate de microorganisme parazite, de cele sntoase. Lignificarea const n impregnarea pereilor celulari cu lignin, un polimer aromatic, sintetizat din aminoacidul fenilalanin. Se formeaz uniti fenolice, ca parte integrant a pereilor celulari la plante, n special n traheide, fibre ale xilemului i sclereide. Precursorii ligninelor sunt biosintetizai n citoplasm. Sunt apoi transportai prin plasmalem (prin pinocitoz), sub form de glicozizi i sinteza ligninelor se realizeaz la nivelul pereilor celulari. Enzima cheie implicat n

20 sinteza precursorilor ligninelor este fenilalaninamoniuliaza (PAL). Polimerizarea acestora se realizeaz sub aciunea polifenoloxidazelor, izoenzimelor peroxidazei i prin intermediul lacazei. Gelificarea const n producerea n exces a substanelor pectice, care n contact cu apa formeaz gome sau mucilagii. Procesul de gelificare se constat n mod frecvent la fructele de piersic. Mineralizarea const n impregnarea peretelui celular cu dioxid de siliciu (la plantele graminee, ciperacee, equisetacee etc.), sruri de calciu, carbonat i mai rar sulfat (la unele plante lemnoase), ceea ce confer o rezisten mecanic sporit. 2.2.1.3. Rolul fiziologic al peretelui celular Peretele celular prezint un rol deosebit: pentru viaa celulei; pentru economie; pentru ecosistem. n privina rolului fiziologic al peretelui celular pentru viaa celulei, se pot meniona urmtoarele: 1) - asigur forma celulei vegetale (constrnge rata i direcia de cretere a celulei); 2) - permite dezvoltarea presiunii de turgescen; 3) - asigur specializarea celular (ex. colenchim, fibre, traheide, endoderm); 4 )- este o structur dinamic (sufer modificri pe parcursul vieii celulei, nu doar pe parcursul creterii i dezvoltrii plantelor, dar i n perioada post-maturare; prin descompunerea enzimatic a substanelor pectice din lamela median a fructelor, scade fermitatea esuturilor, proces ce caracterizeaz fazele de maturitate i senescen); 5) - asigur protecie i aprare (reprezint principala barier structural pentru agenii patogeni, iar substanele fenolice constituie mijloc de protecie chimic mpotriva atacului agenilor patogeni; substanele de natur proteic joac rol specific n fenomenul de recunoatere, aa cum este cazul lectinelor, care particip la recunoaterea bacteriilor simbionte, care la rndul lor particip la realizarea simbiozelor de tip rhizobial); 6) - cerurile din peretele celular previn deshidratarea; 7) - peretele celular poate fi biodegradat, asigurnd glucide pentru metabolism, n special la unele semine; 8) - asigur transportul apei i a substanelor dizolvate, prin spaiile dintre microfibrilele celulozice transportul prin apoplast. Din punct de vedere economic, peretele celular prezint importan pentru obinerea de hrtie, textile, cherestea, extragere de polimeri (ex. pectine) etc. Peretele celular reprezint de asemenea o surs de materie organic n ecosistem, ca humusul n sol. Cele mai abundente molecule organice de pe pmnt sunt polimerii peretelui celular: celuloza i lignina. 2.2.2. Membrana citoplasmatic Plasmalema Plasmalema sau membrana citoplasmatic care nconjoar celula, delimiteaz citoplasma de peretele celular. Ea reprezint adevrata barier selectiv dintre celul i mediul nconjurtor. De aceea, plasmalema ndeplinete numeroase funcii fiziologice, cum ar fi reglarea compoziiei interiorului celulei i a interrelaiilor cu exteriorul celulei (Larson i al., 1990). Plasmalema este probabil cea mai complex i difereniat membran biologic, fiind diferit de la o celul la alta, ntr-un organ sau esut (Sandelius i Morre, 1990). O alt membran biologic important este tonoplastul (parte a sistemului de endomembrane), care nvelete la exterior vacuola (vezi Vacuola). Plasmalema se formeaz n timpul diviziunii celulare, odat cu formarea peretelui celular.

21 Din punct de vedere structural, plasmalema prezint n general asemnri cu structura membranelor care nvelesc organitele celulare. De altfel, n celula vegetal sunt peste 20 de tipuri de membrane (de exemplu plasmalema, tonoplastul, reticulul endoplasmatic, complexul Golgi, reeaua trans-Golgi, membrana nuclear etc.). 2.2.2.1. Componentele membranei citoplasmatice Principalele componente ale membranei citoplasmatice, ca de altfel a biomembranelor n general sunt lipidele, proteinele i hidraii de carbon. n privina compoziiei lipidice, conform ipotezei mozaicului fluid (Singer i Nicholson, 1972) (fig. 2.8.), toate membranele biologice constau dintr-un strat dublu de fosfolipide, care constituie reeaua structural, n care sunt ancorate proteinele membranale (fig. 2.9. ). Fosfolipidele sunt di-esteri ai acidului fosforic cu diacilglicerolul i diferii alcooli. Ele conin un pol hidrofob (poriunea insolubil n ap, acizii Fig. 2.8. Model al mozaicului fluid grai) i un pol hidrofil (poriune solubil n ap inozitol, colin, etanol-amin, serin). Ca toate substanele grase, lipidele membranale pot exista n dou stri fizice diferite: gel semi-cristalin fluid Orice lipid dat sau amestec de lipide poate s se transforme din gel n fluid, prin intermediul temperaturilor crescute, iar aceast modificare de stare este cunoscut sub denumirea - tranziie de faz. Cu ct gradul de saturare a acizilor grai este mai mare, cu att se produce mai uor tranziia de faz, de la fluid la gel, sub influena temperaturilor coborte pozitive. Acest proces determin scderea permeabilitii membranelor plasmatice i ale organitelor celulare cu circa 60%. Cele mai importante clase de lipide caracteristice membranei plasmatice sunt fosfolipidele, glicolipidele i sterolii. n mod frecvent, cercetrile s-au axat pe determinarea compoziiei n acizi grai i n mod special, pe stabilirea gradului de nesaturare, interpretat ca fluiditate sau microvscozitate a membranei. n membranele cloroplastelor predomin galactolipidele i sulfolipidele. n celelalte membrane ale organitelor celulare predomin fosfolipidele. Pentru biosinteza lipidelor membranale, trebuie menionat faptul c particip mai multe organite celulare. Astfel, n cloroplast se realizeaz biosinteza acizilor grai cu C16 i C18. Acetia sunt transportai n citosol, apoi n reticulul endoplasmatic neted (sub form acilat, legai de o protein transportoare). La nivelul reticulului endoplasmatic neted are loc interconversia acizilor grai, esterificarea glicerolului i biosinteza unor lipide Fig. 2.9. Structura plasmalemei precum linalenoil fosfatidilcolina i linalenoil galactolipide. Ulterior, aceste substane se acumuleaz n canaliculele reticulului endoplasmatic neted. Acestea formeaz o vezicul transportoare care le transport prin citosol, pn la membranele plasmatice. Acolo, ele sunt eliberate i respectiv ncorporate n structura membranelor.

22 n privina proteinelor, modelul original al mozaicului fluid a inclus dou tipuri de baz de proteine: proteine integrale; proteine periferice . Prin definiie, proteinele periferice sunt solubile n ap i pot fi eliberate prin splarea membranelor n ap, n sruri sau soluii acide, care nu distrug bistratul lipidic. Spre deosebire de acestea, proteinele integrale sunt insolubile n ap i pot fi eliberate numai cu detergeni sau solveni organici, care degradeaz bistratul. Cercetrile recente au permis descoperirea a patru clase adiionale de proteine membranale: legate de acizi grai; legate de o grupare prenil; ancorate de fosfatidilinozitol; legate de colesterol, fiecare dintre ele fiind ataate bistratului prin cozile lipidului. Unele proteine membranale interacioneaz cu peretele celular, inclusiv prin formarea unor legturi fizice cu moleculele peretelui celular, sinteza i asamblarea polimerilor pereilor celulari i crearea unui domeniu inter-facial specific, puternic hidratat. Prezena unor legturi fizice ntre plasmalem i peretele celular a fost dedus prima oar din existena unor firioare care conecteaz protoplatii celulelor plasmolizate, cu pereii celulari (fig. 2.10.). Denumirea de firioare Hecht - s-a dat n onoarea lui Kurt Hecht, creditat cu aceast descoperire n 1912. n timpul aclimatizrii la frig, numrul firioarelor Hecht crete. De asemenea, printre moleculele de fosfolipide se gsesc molecule de glucide (galactoz, glucoz, fructoz etc.), citocromi, flavone, flavoproteine i chinone, cu rol oxido-reductor. Calciul reprezint un component important al membranelor i asigur acestora stabilitate. Totodat, calciul modific potenialul de membran i reprezint un mesager biochimic secundar. Formarea complexului calmodulin - calciu la nivel de citosol stimuleaz activitatea unor enzime. 2.2.2.2. Proprietile plasmalemei Principalele proprieti ale membranelor sunt permeabilitatea i potenialul de membran. Permeabilitatea reprezint nsuirea unei membrane de a permite trecerea gazelor, lichidelor i a substanelor dizolvate ntr-un lichid. Din acest punct de vedere, o membran poate s permit trecerea substanelor sau se poate opune trecerii acestora. Vorbim despre o membran permeabil, respectiv una impermeabil. Plasmalema, precum i alte membrane biologice se caracterizeaz printr-o semipermeabilitate selectiv diferenial. Ea permite trecerea moleculelor de ap i se manifest selectiv n ceea ce privete trecerea substanelor dizolvate. Determinarea gradului de permeabilitate se poate realiza printr-o metod indirect, respectiv metoda conductometric, dar i prin alte metode. Unitatea standard pentru conductivitate a fost mhos cm-1 i s-a schimbat ulterior cu Siemens cm-1. De obicei, conductivitatea se exprim n microsiemens cm-1 . Permeabilitatea plasmalemei, respectiv selectivitatea acesteia se modific pe parcursul ciclului normal de cretere i dezvoltare a plantelor. Valori mai mari sunt caracteristice celulelor tinere i celor din seminele uscate aflate n perioada de dorman. La celulele mature se determin cele mai mici valori (corespunztor unei selectiviti pronunate n privina transportului

Fig. 2.10. Evidenierea conexiunilor dintre plasmalem i peretele celular

23 electroliilor). n perioada de trecere de la maturitate, la senescen, valoarea permeabilitii membranelor crete marcant. Totodat, gradul de selectivitate al plasmalemei, ca de altfel a membranelor biologice n ansamblul lor este influenat de aciunea factorilor de stres biotici sau abiotici (Delian i al., 1999; Delian i al., 2000; Delian, 2006). Aceasta se explic prin deteriorarea ultrastructurii membranelor, din cauza aciunii mai multor factori: activitii fosfolipazelor, care determin descompunerea fosfolipidelor membranale i n consecin crete permeabilitatea membranelor; aciunii etilenei (hormon de maturare, dar i de stres); peroxidrii lipidelor membranale, sub aciunea peroxizilor etc . (Burzo i al., 2004). Potenialul de membran este determinat de distribuia neuniform a ionilor de o parte i de alta a membranelor plasmatice (fig. 2.11.). Prin urmare, celulele se comport ca un acumulator, generndu-se un potenial bioelectric de -70 mV, pn la -170 mV. Spre exemplu, la un pH de 7,5 n citoplasm i 5,5 n apoplast, potenialul bioelectric este de -150 mV. Valoarea potenialului de membran variaz cu vrsta celulelor: valori mai mici la celulele tinere (cu coninut mare de ap i sczut n ioni); valori maxime la celulele mature (cnd membranele sunt Fig. 2.11. Generarea mai selective); potenialului membranal i a valorile scad n faza de senescen (cnd crete gradientului protonilor permeabilitatea membranelor). n funcie de valorile potenialului de membran se determin i direcia de transport a cationilor. Astfel, un potenial de membran ridicat determin un transport al cationilor n celule, iar un potenial de membran sczut determin ieirea ionilor din celule. 2.2.2.3. Rolul fiziologic al plasmalemei Plasmalema ndeplinete numeroase funcii fiziologice: asigur compartimentarea celular, separnd soluiile din apoplast i citosol; prin transportul activ al ionilor, determin i menine o concentraie mai mare de substane minerale n simplast, comparativ cu apoplastul; se genereaz astfel potenialul bioelectric i potenialul osmotic; are rol de transport a apei, ionilor i compuilor organici cu greutatea molecular mic, ntre apoplast i simplast; are rol n meninerea homeostaziei celulare, adic a parametrilor fiziologici celulari (fiind implicat n meninerea concentraiei ionilor de hidrogen, precum i a calciului la valori normale la nivelul citosolului), prin intermediul diferitelor tipuri de transportori (Dajinaviien, 2008); contribuie la biosinteza celulozei, prin intermediul celulozo sintazelor; constituie situs pentru perceperea i transducia semnalelor; proteinele membranale au diferite funcii, n raport cu localizarea lor n celul etc. 2.2.3. Citosolul Citosolul reprezint o soluie citoplasmatic delimitat de plasmalem i tonoplast, dar exterior tuturor organitelor celulare. Termenul de citoplasm reprezint un termen colectiv pentru citosol, plus organitele suspendate n citosol. Citosolul este o component important a citoplasmei, dei cantitatea de citosol este redus la celula vegetal, ca urmare a volumului mare al vacuolei.

24 Citosolul reprezint fluidul intern al celulei, unde se desfoar o parte a metabolismului celular. Prin urmare, componenta major o constituie apa, dar exist i o structur cu un nalt nivel molecular de organizare (ap, ioni minerali, molecule mici i molecule mari solubile n ap, precum proteinele, acestea din urm reprezentnd circa 20%-30%). Proteinele din citosol joac un rol important n cile de transducie a semnalelor, n glicoliz, acioneaz ca receptori intracelulari etc. 2.2.4. Citoscheletul Citoscheletul este o reea filamentoas proteic complex i dinamic, care strbate citosolul i care asigur organizarea n spaiu a organitelor celulare. Fiecare structur este filamentoas, are un diametru fix, dar lungimea este foarte variabil, chiar uneori cu o extindere de pn la civa micrometrii. Citoscheletul este un sistem dinamic, supus proceselor de asamblare/dezasamblare, cci legturile dintre uniti sunt slabe, ne-covalente, dar destul de puternice pentru a reda stabilitate relativ n condiii celulare. n alctuirea citoscheletului intr: microtubuli halouri cilindrice cu un diametru exterior de 25 nm, alctuii din proteinele i tubulin, fiecare cu o mas molecular de 55 daltoni; subunitile i tubulin sunt aranjate n helix i heterodimerizeaz la modul cap-coad dnd natere polaritii, care joac un rol crucial n funcionalitatea lor (Eckardt, 2006). microfilamente spre deosebire de microtubuli au un diametru de circa 7 nm; un microfilament const din subuniti de actin polimerizate (o form special de protein gsit n muchi, denumit actin globuloas sau G- actin); filamente intermediare (cu mrime intermediar ntre cele dou) (fig. 2.12.). n privina rolului fiziologic: Microtubulii contribuie la meninerea formei celulei, asigurnd stabilitate; microtubulii speciali, chiar n interiorul plasmalemei, denumii microtubuli corticali sunt implicai n creterea ordonat a peretelui celular; direcia de extensie i forma peretelui celular este Fig. 2.12. Componentele guvernat de orientarea microtubulilor; citoscheletului orienteaz traficul veziculelor derivate din C. Golgi, ctre plasmalem sau vacuol; rol n crearea fusului de diviziune, care ghideaz micarea cromozomilor n timpul diviziunii celulare; Microfilamentele asigur elasticitate citoplasmei; contribuie la realizarea micrilor n citosol; Organizarea microfilamentelor sufer modificri dinamice pe parcursul diviziunii celulei, elongaiei i diferenierii (Higakia i al., 2007). 2.2.5. Sistemul de endomembrane Sistemul de endomembrane este un concept introdus de More i Mollenhauer (1974) i include: reticulul endoplasmatic; complexul Golgi;

25 membrana nuclear, precum i alte organite i membrane (de exemplu: microvezicule, membrana vacuolar) care i au originea n reticulul endoplasmatic sau complexul Golgi. El separ reaciile biochimice n cadrul unor compartimente limitate de membrane i reprezint o cale de transport a substanelor, att intracelular ct i transversal prin plasmalem, pe calea secreiei sau endocitozei. Principalul rol fiziologic l constituie: biosinteza i transportul lipidelor, proteinelor i polizaharidelor destinate alctuirii peretelui celular sau destinate altor localizri n celul; contribuie la meninerea integritii celulei i detoxifierea de molecule strine, care au ptruns n celul. Sistemul de endomembrane sau calea secretoare este critic pentru biosinteza i traficul ctre plasmalem i vacuol (fig.2.13.). Departe de a fi static, morfologia, localizarea i funcia acestor compartimente endomembranale sunt foarte dinamice n cursul creterii i dezvoltrii plantelor. Pe lng rolul tradiional de transport, recent s-a artat implicarea sa ntr-o varietate de rspunsuri specifice, incluznd semnalizarea dat de acidul abscisic i auxin; dezvoltarea plantelor; rspunsuri tropice i aprarea fa de patogeni (Carter i al, 2004). 1) Traficul nainte ncepe cu sinteza proteinelor destinate pentru secreie i continu cu eliberarea n reticulul endoplasmatic, precum i transportul ctre complexul Golgi, unde are loc sortarea, fie pentru translocare ctre exteriorul celulei, fie ctre diferite compartimente celulare (de exemplu vacuole de depozitare a proteinelor, vacuole litice, plasmalem, perete celular ). 2) Traficul napoi este cel realizat n direcie opus i se permite astfel endocitoza unor molecule extracelulare, precum i reciclarea membranelor i proteinelor, n vederea meninerii integritii celulare. 2.2.5.1. Reticulul endoplasmatic Reticulul endoplasmatic este un sistem membranal 3-D i reprezent cel mai extins sistem membranal la eucariote. El are o pondere de circa 50% din membranele celulei vegetale. Este prevzut cu membran simpl lipo-proteic. n seciune transversal apare ca dou membrane paralele, constituite din proteine integrale i periferice interpuse, iar la mijloc se afl un spaiu numit lumen. Termenul de reticul endoplasmatic a fost introdus de Porter i Thompson (1947). Este alctuit din cisterne ultramicroscopice, pe care sunt ataai ribozomi, cisterne aflate n apropierea nucleului i care poart denumirea de reticul endoplasmatic rugos (REr) (fig. 2.14.). Membrana reticulului endoplasmatic rugos se afl n legtur cu membrana nuclear i se asigur continuitatea funcional a spaiilor interne a celor dou formaiuni celulare. Aceste vezicule se continu cu o reea de tubuli, lipsit de ribozomi, Fig. 2.14. Reticulul dispus spre complexul Golgi i plasmalem i care poart endoplasmatic rugos denumirea de reticul endoplasmatic neted (REn). Reeaua de tubuli se extinde prin intermediul plasmodesmelor, ctre celulele vecine.
Fig. 2.13. Diagrama compartimentelor principale ale sistemului de endomembrane i a direciilor de trafic ntre compartimente

26 n relaie cu particularitile structurale, funciile fiziologice sunt difereniate: cisternele sunt implicate n sinteza proteinelor membranale i a celor destinate secreiei, n afara celulei sau n vacuol; tubulii sunt implicai n sinteza lipidelor i prevaleaz n celulele care transport sau secret lipide i glucide. Reticulul endoplasmatic este un sistem dinamic al citoplasmei i ndeplinete numeroase funcii fiziologice: sinteza proteinelor (plastice, de rezerv, enzime) - REr; sinteza lipidelor - REn (foarte extins n celulele care sintetizeaz activ uleiuri); sinteza de componente membranale proprii (steroli, fosfolipide); transportul anumitor enzime i alte substane, n interiorul celulei (ctre diferite pri ale celulei) i transversal prin plasmalem n afara citoplasmei, n urma procesului de secreie; rol funcional, n sensul c divide celula n compartimente specializate i asigur o suprafa la nivelul creia pot avea loc reacii chimice; determin o specializare metabolic intern; asigur conexiunea cu alte celule, prin intermediul plasmodesmelor, formnd cile de transport prin simplast i reelele de comunicare celul celul. Prin urmare, reticulul endoplasmatic este un organit de sintez, asamblare i sortare a proteinelor secretate, iar subunitile specializate denumite ERES (situsuri de export ale RE) sunt dedicate exportului proteinelor ctre Golgi (Tang i al., 2005). 2.2.5.2. Complexul Golgi Complexul Golgi const din pachete de cisterne individuale aplatizate, cu capetele rotunjite, combinate cu o reea neregulat de tubuli i vezicule, numit reea trans Golgi (TNG). Denumirea acestor cisterne este de dictiozomi sau corpi Golgi. Unul pn la mai muli dictiozomi sunt denumii colectiv complexul Golgi, dup numele italianului Camillo Golgi, care i-a descoperit prin microscopie optic n anul 1898. Complexele Golgi au regiuni funcionale distincte. Ele sunt practic formaiuni polarizate, prevzute cu membran simpl lipo-proteic: cisternele din apropierea plasmalemei, alctuiesc faa denumit trans (faa matur sau de eliberare); cisternele dinspre centrul celulei sunt denumite faa cis (faa formatoare): reeaua trans Golgi (faa trans) (fig. 2.15.). Fig. 2.15. Complexul Golgi Componentele eliberate din reticulul endoplasmatic intr n complexul Golgi pe la faa formatoare, urmnd a se deplasa ctre zona median i zona de eliberare. Transportul din reticulul endoplasmatic ctre Golgi, ntre cisternele Golgi i din reeaua trans Golgi, ctre destinaia final (din interiorul sau din exteriorul celulei) are loc pe calea unor vezicule mbrcate n proteine (COP I i COP II protein coated vizicles). Veziculele derivate din RE sunt n general netede, n timp ce cele derivate din complexul Golgi sunt mbrcate n protein (vezicule mbrcate n clathrin), formndu-se ca o colivie. De altfel, moleculele transportate trebuie nti s fie legate de un receptor proteic specific, din zone speciale ale membranei (coated pits). Dup recunoatere urmeaz ncapsularea i se formeaz vezicula.

27 O diferen major dintre cile secretoare la celula vegetal i animal este deplasarea i localizarea complexelor Golgi. La celula vegetal, complexele Golgi sunt dispersate n zeci i sute de pachete individuale, deosebit de mobile. Acestea funcioneaz ca un aspirator mobil pentru produii din reticulul endoplasmatic, pe principiul oprete i pleac sau staie de umplere. Aceasta reliefeaz existena unui semnal regulator produs de reticulul endoplasmatic. Nebenfhr i al. (1999) au propus un model conform cruia micarea reelei oprete i pleac a unitilor reelei Golgi-trans-Golgi este reglat prin semnale stop, produse de reticulul endoplasmatic la nivelul situsurilor de export (fig. 2.16.). La celula animal, Complexele Golgi sunt dispuse pe microtubuli. n privina cunoaterii traficului ctre Fig. 2.16. Model al reglrii oprete i pleac membrane i de la membrane aflate n legtur pentru C. Golgi i al relaiilor cu transportul func ional cu complexele Golgi, n ultimii ani produilor, prin intermediul cii secretoare s-au fcut progrese remarcabile. S-au identificat noi rute de la Golgi, ctre organite din afara sistemului secretor. Se scoate n eviden importana complexelor Golgi, ca staie major de sortare n celula vegetal (Matheson i al., 2006) (fig. 2. 17.). Principalele funcii fiziologice ale complexelor Golgi sunt: biosinteza acizilor poligalacturonici, care formeaz lamela median i a celor care intr n structura peretelui celular primar i secundar; biosinteza glucidelor complexe, care intr n peretelui celular: xiloglucani, alctuirea galactomanani, - glucani etc.; glicozilarea proteinelor provenite din REr i formarea glicoproteinelor complexe; prin ncorporarea substanelor formate n vezicule Golgiene se asigur transportul prin intermediul acestor vezicule ctre spaiul extracelular (pentru formarea peretelui celular) sau ctre zonele de depozitare; Fig. 2. 17. Noi rute de la Golgi, prin intermediul veziculelor Golgiene, n timpul ctre organite din afara sistemului secretor telofazei se transport spre fragmoplast substanele ce vor da natere lamelei mediane. 2.2.5.3. Microvezicule Peroxizomii Peroxizomii sunt formaiuni de dimensiuni mici (diametrul de 0,2 1,7 m) specifice celulelor eucariote (70 100 ntr-o celul). Sunt prevzui cu membran simpl lipo-proteic, care nconjoar un matrix fin granular. Ei conin circa 50 enzime. Catalaza este ntotdeauna prezent i este folosit ca enzim marker pentru acest organit. Rolul fiziologic difer n funcie de esutul sau organul n care peroxizomii se afl: n seminele n curs de germinare, care au depozitate ca substane organice de rezerv lipide, ei particip la biodegradarea acestora;

28 n frunzele plantelor cu metabolism C3 (peroxizomii de frunz) au rol n procesul de fotorespiraie (alturi de cloroplaste i mitocondrii); n nodulii unor rdcini la leguminoase sunt implicai n procesul de conversie a azotului molecular recent fixat (pe cale biologic), n compui organici bogai n azot; aa numiii peroxizomi nespecializai din celulele rdcinii i alte esuturi conin catalaz (cu rol n descompunerea apei oxigenate - H2O2), glicolat-oxidaz, urat oxidaz i enzimele -oxidrii (dar funcia propriu zis nu este bine cunoscut). Glioxizomii Glioxizomii sunt aa numiii peroxizomi specializai. au rol n biodegradarea acizilor grai, prin procesul de -oxidare i apoi conversia la acid succinic, printr-o serie de reacii (ciclul acidului glioxilic). Acidul succinic este folosit n mitocondrii, pentru biosinteza acidului oxal - acetic, din care apoi n citosol se formeaz acidul piruvic, care este utilizat n procesul de gluconeogenez. Oleozomii Oleozomii, denumii i sferozomi sunt vezicule nconjurate de o jumtate de membran, respectiv dintr-un singur strat fosfolipidic, format prin depunerea lipidelor de rezerv ntre cele dou bistraturi ale membranei REn (fig. 2.18.). Prin urmare, fiind un singur strat, gruprile polare sunt orientate ctre faza apoas, n timp ce cozile hidrofobe sunt orientate spre interior i astfel se stabilizeaz n uleiurile depozitate. n membrana acestora se gsesc i oleozine, pentru a se preveni fuzionarea oleozomilor cu alte organite. Oleozomii se gsesc n numr mare n celulele plantelor oleaginoase. n oleozomi se gsesc de asemenea lipaze. Aceste enzime catalizeaz biodegradarea lipidelor n glicerol i acizi grai, pe parcursul procesului de germinare a seminelor.

Fig. 2.18. Formarea oleozomilor

Proteinozomii Proteinozomii sunt vezicule protejate la exterior de o membran simpl lipo-proteic, iar la interior se gsesc proteine de rezerv. Depozitarea proteinelor n seminele multor plante este vacuolar i veziculele se formeaz prin scindarea vacuolei (cum este cazul la ovz). La cereale ns, exist un program dezvoltat pentru depozitarea proteinelor n vezicule rezultate din reticulul endoplasmatic. n proteinozomi sunt enzime de tip proteaze, care catalizeaz biodegradarea proteinelor n aminoacizii corespunztori, n timpul germinrii seminelor. 2.2.6. Ribozomii Ribozomii sunt particule dense sau granule citoplasmatice (15-25 nm ), observate pentru prima oar de Robinson i Brown (1953) n celula vegetal i de ctre George Emil Palade, n celula animal n acelai an, folosind microscopul electronic. Sunt denumii i granulele lui Palade. George E. Palade s-a nscut la Iai i a fost laureat al premiului Nobel n anul 1974 pentru Fiziologie i Medicin (pentru descoperirile sale cu privire la organizarea structural i funcional a celulei) (Co-premiu - Albert Claud i Chriastian De Duve , ambii din Belgia). Ribozomii sunt cele mai mici organite celulare fr membran (150 pn la 230 ). Sunt dou tipuri de ribozomi: 70 S i 80 S (tipul 70 S caracteristic celulei procariote i tipul 80 S la celulele eucariote). Fiecare ribozom const din dou subuniti: o subunitate mai mic i o subunitate mai mare. Din punct de vedere al compoziiei chimice, un ribozom este alctuit din

29 protein (riboprotein) (ca i component nconjurtoare) i acid nucleic (ARN). Raportul dintre ARN-ul ribozomal i protein este de 2:1 la ribozomii 70 S i de circa 1:1 pentru ribozomii 80 S. Ribozomii nu conin molecule lipidice. Ei se pot dezasambla, cnd nu sintetizeaz activ protein. Ribozomii sunt localizai: n citoplasm: fie liberi, fie grupai n poliribozomi; asociai cu RE i constituie REr; n cloroplaste i mitocondrii, ca formaiuni mai mici (similari ribozomilor 70 S). Ribozomii au rol n sinteza proteinelor 2.2.7. Plastidele Plastidele sunt organite citoplasmatice specifice celulei vegetale, nconjurate de o membran dubl lipoproteic. Ele au capacitatea de autoreproducere i posed material genetic propriu ca i mitocondriile. Toate plastidele deriv din proplastide, prezente n esuturile tinere meristematice, avnd un diametru de circa 0,2 1,0 m i o form sferic sau ovoid. n stroma proplastidelor se depoziteaz uneori fitoferritin, o form de depozitare a fierului, similar ferritinei din celula animal. Odat formate, anumite tipuri de plastide se pot transforma n alte tipuri (fig. 2.19.).

Fig.2.19. Diferite tipuri de plastide i transformarea acestora

Se disting dou categorii principale de plastide: plastide necolorate Dintre acestea, foarte cunoscute sunt amiloplastele, unde se biosintetizeaz amidon i se stocheaz granule de amidon (spre exemplu n celulele tuberculilor de cartof). Denumirea lor vine de la amiloz (polizaharid linear solubil n ap, alctuit din (1-4)- glucopiranol, de fapt componentul principal al amidonului). n celulele din vrfurile rdcinilor sensibile la gravitaie, amiloplastele servesc ca statolite, sedimentndu-se ca rspuns la fora de gravitaie i declannd rspunsul gravitropic. Leucoplastele sunt implicate n sinteza monoterpenelor. Aceste substane volatile sunt prezente n uleiurile volatile. Numeroi astfel de compui sunt exploatai de om pentru miros sau ca ageni farmacologici. Structura intern este similar cu cea a unui cloroplast, cu excepia granei i a pigmenilor. Ele au membran dubl, o strom dens, cteva membrane interne, ribozomi, precum i plastoglobuli. n mod tipic sunt nconjurate de membrane tubulare ale REn care particip la sinteza lipidelor. Leucoplastele se gsesc n organe subterane ale plantelor: rizomi, bulbi, tuberculi, rdcini. Etioplastele sunt plastide la care dezvoltarea din proplastide, ctre cloroplaste a fost stopat de absena luminii sau condiii de insuficien a luminii la nivelul frunzelor. Ele nu au clorofil, dar au cantiti mari de protoclorofilid. Etioplastele depoziteaz lipide membranale n ceea ce se cheam corpul prolamelar, cu o proporie de 75% lipide. Cnd sunt iluminate, ncep s se transforme n cloroplaste. Lumina controleaz sinteza clorofilei din protoclorofilid, precum i asamblarea complexelor proteice. Moleculele lipidice din corpul prolamelar sunt dispersate n membranele fotosintetice active, cunoscute sub numele de tilacoide. plastide colorate Acestea depoziteaz molecule de pigmeni i sunt de dou tipuri: 1) cromoplaste, respectiv centre de culoare galben, oranj, rou, dup cum se combin ca prezen carotenii, cu xantofilele. Ele conin enzime care catalizeaz sinteza lipidelor i carotenilor; globule osmeofile (care se coloreaz n negru cu acid osmic), precum i plastoglobuli care conin

30 pigmeni carotenoizi, ce confer culoarea caracteristic pentru unele flori i fructe. Cromoplastele se dezvolt direct din proplastide sau prin rediferenierea cloroplastelor, aa cum este cazul la maturarea fructelor de tomate. n cazul cromoplastelor din celulele petalelor florilor, principala funcie o reprezint atragerea insectelor n vederea polenizrii. 2) cloroplaste, respectiv plastide de form oval, sferic sau lenticelar (5-8 m lungime i 3-4 m grosime) situate n special n celulele mezofilului frunzelor i care constituie sediul fotosintezei. Numrul cloroplastelor ntr-o celul este variabil (un cloroplast la alge i 20-40 la plante superioare). O celul matur a mezofilului frunzei la Arabidopsis thaliana conine circa 120 cloroplaste. Din punct de vedere al compoziiei chimice: cloroplastele conin ap (50%), proteine (25%), lipide (15%) i pigmeni (10%). Sunt delimitate la exterior de o membran dubl lipo-proteic. Membrana extern este neted i prevzut cu un numr mare de pori. Ea permite trecerea moleculelor de pn la 10 kDa. Membrana intern prezint pliuri denumite tilacoide, nu prezint pori i n consecin este mai puin permeabil. Totui, ea poate fi strbtur de molecule de trioze i aminoacizi. ntre cele dou membrane se afl un spaiu denumit lumen. Tilacoidele pot fi dispuse ca formaiuni grupate, respectiv saculi (2 pn la 8, ca monedele ntr-un fiic) i astfel de uniti formeaz grana cloroplastului (10 100 n fiecare cloroplast). Totodat, exist tilacoide care realizeaz legtura ntre grana, denumite tilacoidele stromei. Fluidul intern vscos, de natur coloidal, din jurul tilacoidelor se numete strom (fig. 2.20.). Din punct de vedere structural, tilacoidele se aseamn cu membranele plasmatice. Ele constau dintr-un bistrat fosfolipidic, n care se gsesc substane transportoare de electroni, pompe de protoni, antene fotoreceptoare i centre de reacie, care alctuiesc dou fotosisteme, la nivelul crora se desfoar faza de lumin a fotosintezei. La nivelul Fig. 2. 20. stromei se gsesc diferite substane organice, dar i minerale. Printre Cloroplastul acestea se gsesc o serie de enzime, care particip la realizarea fazei enzimatice a fotosintezei. De asemenea, sunt prezeni ribozomi specifici cloroplastului i material nuclear specific. Rolul fiziologic al cloroplastelor reprezint sediul fotosintezei, proces n care din CO2 i H2O, n prezena luminii i a clorofilei se sintetizeaz primii compui oganici triozele; n cloroplaste are loc prima etap a procesului de fotorespiraie, proces prin care o parte din produii fotosintezei sunt biodegradai cu producere de CO2: n cloroplaste se biosintetizeaz proteine specifice precum RUBISCO; are loc biosinteza acizilor grai cu 16 i 18 atomi de C din acetil CoA; are loc reducerea nitrailor la NH3, la unele specii n prezena nitrat i nitrit reductazei etc. 2.2.8. Mitocondriile Mitocondriile sunt organite sferice, ctre elipsoidale, n general cu grosimea de 1m i 1-3 m lungime. La microscop, n celulele vii, aceste organite au o aparen pleiomorf (frecvent au loc modificri rapide de form). Numrul mitocondriilor ntr-o celul variaz considerabil, n raport cu tipul de organism i natura celulei. Celulele cu activitate metabolic intens conin un numr mai mare de mitocondrii. Mitocondriile sunt prevzute cu o membran dubl lipo-proteic. Membrana extern este neted, prezint pori (prin care pot traversa moleculele mici) i proteine transportoare, n vederea transportului de substane. Membrana intern este mai selectiv, ca urmare a unui coninut de

31 cardiolipine i alte fosfolipide. De asemenea, ea este impermeabil pentru protoni. Ea formeaz pliuri numite criste i la nivelul su se afl lanul transportor de electroni i ATP- sintetaza. Membrana intern conine circa 80% - 90% din totalul proteinelor asociate membranelor i mai mult de 90% din totalul lipidelor mitocondriei. Spre deosebire de membrana extern, transportul substanelor prin membrana intern este controlat de transportori proteici. Central se afl matricea, care are o structur asemntoare citosolului. Aici sunt ribozomi specifici, acizi nucleici i numeroase enzime (fig. 2.21.). Mitocondriile au genom propriu (similar celui bacterial ca form, dar de dimensiuni mai mici) care codific circa 10% din proteinele mitocondriale. Mitocondria conine de asemenea cteva proteine ABC (ATP binding cassete) cu rol n meninerea homeostaziei celulare Fig. 2.21. Mitocondria (Burkea i Ardehali, 2007). Dintre principalele funcii fiziologice ale mitocondriilor amintim: sunt centrele respiratorii ale celulei; la nivelul lor se desfoar etapa final de biodegradare a substanelor de rezerv (ciclul Krebs) din care rezult energie, CO2 i H2O; are loc etapa a treia a procesului de fotorespiraie (n care din dou molecule de glicin rezult serina, CO2 i NH4); se desfoar ciclul respirator alternativ etc. 2.2.9. Nucleul Nucleul reprezint organitul celular cu cele mai mari dimensiuni (5-50 m), avnd o form sferic sau lobat. Din punct de vedere structural, este prevzut cu o membran dubl lipoproteic prevzut cu pori. Aceasta asigur realizarea comunicrii (schimburilor) dintre nucleu i citosol i permite trecerea moleculelor cu un diametru mai mic de 10 nm. ntre cele dou membrane se afl spaiul perinuclear, care este continuu cu lumenul RE. Pe faa extern a membranei nucleare externe (faa dinspre citosol) sunt ataai ribozomi. Proteinele din citoplasm pot trece prin por, ctre interiorul nucleului, numai dac au o secven de aminoacizi semnalul de localizare nuclear - , ceea ce face ca la recunoaterea semnalului porul s se deschid. Pentru ieire, este de asemenea nevoie de un semnal. n ambele cazuri, este necesar ATP de cele mai multe ori, pentru realizarea unor modificri conformaionale. n interiorul nucleului se afl carioplasma. Aceasta conine fibre lungi de ADN, n combinaie cu proteine i formeaz cromatina. n timpul diviziunii nucleului, cromatina se fragmenteaz formnd cromozomi. De asemenea, n nucleu este i o faz apoas (o soluie care conine enzime) denumit nucleoplasm. Aceasta conine probabil o structur asemenea unui citoschelet, care organizeaz cromatina i nucleolii (fig. 2.22.) Prin urmare, n carioplasm sunt unul sau mai muli nucleoli. Cele mai multe Fig.2.22. Alctuirea nucleului i a unui por nuclear celule au un singur nucleol, dar numrul lor variaz de la zero, la civa, ca urmare a structurii lor tranzitorii. Nucleolul apare negru, dens, neregulat ca form, constituit din fibre i granule. Este lipsit de membran, care s-l separe de restul nucleului. La microscopul electronic se pot distinge 3 zone:

32 unul sau mai multe centre fibrilare, unde se consider c are loc transcripia proteinelor ribozomale; o zon intermediar, dens fibrilar, care nconjoar centrele i unde este transcris i procesat ARN-ul ribozomal; o component granular extern (care nconjoar ntreaga regiune fibrilar), alctuit din uniti ribozomale, cu diametrul de 15-20 nm. Rolul fiziologic al nucleului: este coordonatorul tuturor activitilor vitale ale celulei, prin intermediul unor gene specifice; este centru cinetic celular, cel care declaneaz diviziunea celular, prin codificarea sintezei ciclinelor; are rol n transmiterea informaiei genetice la urmai, deci rol n ereditate; nucleolii contribuie la sinteza proteinelor nucleare, a subunitilor ribozomale i a ARN-ului ribozomal. 2.2.10. Vacuomul celular Vacuomul celular este alctut din totalitatea vacuolelor dintr-o celul, ocupnd mai mult de 50% din volumul acesteia (5-95%). Vacuola reprezint o parte component a sistemului de endomembrane, dar pentru c are o importan fiziologic deosebit este tratat n mod separat. Este delimitat la exterior de citosol, printr-o membran lipoproteic denumit tonoplast, care alturi de plasmalem reprezint una dintre principalele membrane biologice. n interiorul vacuolei se afl sucul vacuolar alctuit din ap, enzime (proteine care catalizeaz reaciile biochimice), ioni (precum K+, Cl- , Ca2+, NO3- etc. ), sruri (precum cele de calciu), glucide simple (glucoz, fructoz). De asemenea, n vacuol sunt i alte substane, incluznd metabolii secundari (cum ar fi alcaloizi), anumite substane toxice eliminate din citosol, pentru a se evita interferena cu metabolismul celular. Toxinele din vacuol pot de asemenea proteja unele plante de prdtori. La plante sunt cel puin dou tipuri de vacuole: vacuole litice, similare n privina funciilor cu lizozomii celulelor animale; vacuole pentru depozitarea proteinelor, specifice plantelor (Bassham i Raikhel, 2000). Mrimea i numrul vacuolelor difer cu esutul i stadiul de dezvoltare a plantei. Astfel, celulele meristematice conin multe vacuole mici. Acestea fuzioneaz dup extensia celular, pentru a forma o vacuol mare, central (fig.2.23.). n celulele esuturilor de depozitare din fructe i semine sunt vacuole specializate, pentru depozitarea proteinelor. Celulele cambiului vascular au multe vacuole mici iarna i o vacuol mare vara. Un alt exemplu de versatilitate a vacuolelor deriv din investigarea celulelor motoare de la Mimosa pudica (Fleurat-Lessard i al., 1997). Vacuolele din celule motoare imature (non-reactive) sunt localizate aproape de nucleu, conin cantiti mari de taninuri i se crede a aciona ca depozit pentru Ca2+. Vacuola "apoas" care este regsit adiional n celula motoare matur nu conine taninuri, este Fig.2.23. Vacuola mai mare, comparativ cu primul tip i ocup o poziie central. Modificrile n volum responsabile pentru micrile frunzelor rezult din fluxurile mari de ap transversal membranei vacuolei apoase, unde s-au detectat aproape exclusiv aquaporine -TIP i tipul de pomp H+-ATP-az (V-ATP-az).

33 Rolul fiziologic al vacuolei 1) - este sediul generrii potenialului osmotic; Graie prezenei ionilor, glucidelor simple, acizilor organici n ap (deci a substanelor osmotic active), potenialul apei din vacuol este de 0,5 -5 MPa. Se declaneaz astfel procesul de ptrundere a apei n celul, n vederea asigurrii turgescenei celulei (condiii optime pentru desfurarea proceselor vitale). 2) - are rol n depozitarea i acumularea unor substane, precum: sruri, substane organice cu molecul mic (glucide, aminoacizi, anumite proteine); pigmeni (ex. antociani care dau culoarea florilor, fructelor i chiar rdcinilor); sechestrare de substane care pot duna citosolului (metale grele, oxalai, alcaloizi); 3) rol n digestie; Vacuolele sunt considerate ca lizozomii caracteristici celulei animale, deoarece aici sunt numeroase enzime hidrolitice care practic diger poriuni de citoplasm, transportate aici printr-un proces de endopinocitoz. 4) - are rol n meninerea homeostaziei celulare (homeostazia de pH i ionic), respectiv n pstrarea la valori constante a parametrilor fiziologici la nivelul citosolului (Barkla i Pantoja, 1996). Spre exemplu, concentraia ionilor de hidrogen (pH-ul) se menine la valori constante, prin faptul c excesul de protoni este pompat n vacuol, care n consecin are un pH mai acid cu 1-2 uniti comparativ cu citosolul. Totodat, contribuie la meninerea calciului citosolic la valori optime, prin pomparea la nevoie a Ca2+ n vacuol i formarea oxalatului de calciu (fig. 2.24.). La celula vegetal, pH-ul la nivelul vacuolei este de 5,0-5,5, pn la 2,5 (lmie) sau 7 la vacuolele de depozitare a proteinelor n stare inactiv. 5) - are rol n sintez; De exemplu, ultimele etape ale sintezei etilenei au loc la nivelul tonoplastului. Totodat, anumite transformri ale glucidelor au loc n vacuol. De asemenea, anumite substane depozitate n vacuol sunt modificate la acest nivel. 6) - mai recent s-au descoperit transportorii ABC (ATP binding Fig.2.24. Cristale cassette) care folosesc energia eliberat direct din hidroliza ATP; Ei sunt asociai cu pompele conjugate glutationului, cci adesea transport molecule asociate covalent glutationului. La celula vegetal, astfel de pompe acioneaz pentru detoxifierea erbicidelor, pentru protecia mpotriva stresului oxidativ, acumularea pigmenilor i depozitarea compuilor antimicrobieni. ntrebri 1. Care sunt principalele proprieti fiziologice ale materiei vii ? 2. Care sunt principalele pri componente ale celulei vegetale ? 3. Precizai rolul fiziologic al componentelor celulei vegetale, n relaie cu structura i compoziia chimic a acestora.

34 Bibliografie selectiv Bassham, D.C. i Raikhel, N.V. 2000. Unique features of the plant vacuole storing machinery. Current Opinion Cell Biology, Vol. 12: 491- 495. Bonetta, D.T i al. 2002. Genetic dissection of plant cell wall biosynthesis. Biochemical Society Transactions, Vol. 30, part. 2. Buer, C.S., Weathers, P.J. i Swartzlander, Jr. 2000. Changes in Hechtian strands in cold-hardened cells measured by optical microsurgery. Plant Physiology, Vol. 122: 1365-1377. Burkea, M.A. i Ardehali, H. 2007. Mithochondrial ATP-binding cassette proteins. Translational Research, Vol. 150: 73-80. Burzo, I., Delian Elena, Dobrescu Aurelia, Voican Viorica, Bdulescu Liliana. 2004. Fiziologia plantelor de cultur, Vol.I. Procesele fiziologice din plantele de cultur. Ed. Ceres, Bucureti. Cilia, M., Cantrill, L. i van Bel, A. 2002. Plasmodesmata 2001. On sadfari through the symplast. The Plant Cell, Vol. 14: 7-10. Choi, D. i al. 2006. Expansins: expanding importance in plant growth and development. Physiologia Plantarum, Vol. 126: 511- 518. Cosgrove, D.J. 2005. Growth of the plant cell wall. Nature Review, Vol. 6: 850-861. Dajinaviien, J., Jukonien, S., Bareikien, N., veikauskas, V. 2008. H+-ATPase functional activity in plant cell plasma membrane. Sodininkyst ir Darininkyst, 27 (2). Delian Elena, Burzo Ioan, Voican Viorica, Aurelia Dobrescu. 1999. Studii privind permeabilitatea celular la merele Ionathan n perioada pstrrii. Lucrri tiinifice, U..A.M.V.B., seria F, Vol. IV, p.37-42. Delian Elena, Burzo Ioan, Bdulescu Liliana, Dobrescu Aurelia, Voican Ana. 2000. Permeabilitatea membranelor i coninutul n poliamine din merele afectate de unele dereglri fiziologice. Lucrri tiinifice, Anul XXXXIII Vol. 2 (43), Seria Horticultur, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai, p.249-255. Delian Elena. 2006. Fiziologia stresului biotic la plante. Ed. Cartea Universitar, Bucureti. Eckardt, N.A. 2006. Function of -tubulin in plants. The Plant Cell, Vol. 18: 1327-1329. Higakia, T., Sanoa, T. i Hasezawaa, S. 2007. Actin microfilament dynamics and actin side-binding proteins in plants. Current opinion in Plant Biology, Vol. 10: 549- 556. Matheson, L.A., Hanton, S.L. i Brandizzil, F. 2006. Traffic between the plant endoplasmatic reticulum and Golgi apparatus: to the Golgi and beyond. Current Opinion in Plant Biology, Vol.9: 601- 609. Nebenfhr, A. i al. 1999. Stop-and-go movements of plant Golgi stacks are mediated by actomyosin system. Plant Physiology, Vol. 121: 1127- 1141. Taiz, L. and Ziger, E. 2006. Plant Physiology. 4rd Ed. Sinauer Associates. Taler, D., Galperin, M., Benjamin I., Cohen, Y. i Kenigsbuch, D. 2004. Plant eR genes that encode photorespiratory enzymes confer resistance against disease. Plant Cell, Vol. 16: 172- 184. Tang, B.L. i al. 2005. COPII and exit from the endoplasmatic reticulum. Biochim. Biophys. Acta, Vol 1744: 293- 303.

35 CAPITOLUL 3 RELAIA CELUL VEGETAL - MEDIU Cuvinte cheie: difuziune, curent de mas, osmoz, potenialul apei, imbibiie, aquaporine, turgescen, plasmoliz, presiune osmotic, for de suciune, transport pasiv, transport activ, cotransport, antiport, simport, ionofor, pinocitoz, schimb de gaze Obiective: definirea i explicarea principalelor procese fizice care guverneaz relaia celulei vegetale cu apa; cunoaterea i nelegerea cilor de transport a apei i a modului de realizare a strilor de turgescen i plasmoliz la celula vegetal; importana fiziologic a acestor stri; cunoaterea i nelegerea cilor de transport a substanelor dizolvate; REZUMAT Celula vegetal se afl ntr-un permanent schimb de ap i substane cu mediul nconjurtor. Procesele fizice care stau la baza transportului apei sunt: difuziunea, curentul de mas, osmoza i imbibiia. Difuziunea reprezint procesul fizic de deplasare a moleculelor / ionilor conform gradientului de concentraie, n condiiile n care mediile respective se afl n contact direct. Curentul de mas const n deplasarea unui grup de molecule, ca rspuns la un gradient de presiune. Osmoza este un proces de difuziune particular a apei, transversal printr-o membran selectiv permeabil, care separ dou medii de concentraii diferite. Fora conductoare n acest caz o reprezint gradientul potenialului apei. Imbibiia reprezint procesul fizic de adsorbie a moleculelor apei sau a altor molecule de lichid, de ctre moleculele substanelor hidrofile din celul, conducnd la sporirea masei i volumului corpului care se mbib, n mod ireversibil. Exist de asemenea pori proteici pentru ap i aceast cale ofer o mare permeabilitate osmotic pentru ap sau conductivitate hidraulic a membranei. ntr-un mediu hipotonic (diluat) celulele vegetale devin turgescente. Turgescena reprezint o stare de saturare cu ap a celulei vegetale. Este o stare favorabil celulei vegetale. ntr-un mediu hipertonic (concentrat) celulele vegetale plasmolizeaz. Plasmoliza reprezint separarea protoplasmei celulei vegetale de peretele celular, ca rezultat al pierderii de ap din protoplast, prin procesul de exosmoz. Procesul are loc etapizat, parcurgnduse trei faze: plasmoliza incipient, plasmoliza concav i plasmoliza convex. La nivelul vacuolei ia natere presiunea osmotic, respectiv fora care declaneaz ptrunderea apei n celula vegetal. Adevrata for ns cu care apa este absorbit de ctre celula vegetal este fora de suciune. Valoarea acesteia se msoar n atmosfere i depinde de gradul de hidratare al celulei la un moment. Substanele dizolvate pot fi transportate fie n mod pasiv, fie n mod activ. Transportul pasiv se realizeaz fr consum de energie metabolic, conform gradientului de concentraie i are la baz difuziunea simpl sau facilitat. Transportul activ se realizeaz cu consum de energie metabolic i mpotriva gradientului de concentraie. Transportul activ primar asigur energie pentru transportul activ secundar. Cile de transport a apei i substanelor sunt apoplastul i simplastul. Unele substane precum lecitina, acizii grai i cardiolipina pot funciona ca ionofori. Un alt mod specific de transport este pinocitoza. Plantele realizeaz de asemenea schimburi de gaze cu mediul extern, n cursul proceselor de fotosintez i respiraie. 3.1. Relaia celulei vegetale cu apa n mod fundamental, celula rmne unitatea central care controleaz rspunsul plantei fa de ap. Proprietile celulei se pot modifica i rezult astfel aclimatizarea la apa din mediu. Drept consecin, unele caracteristici ale plantelor pluricelulare pot fi nelese numai prin cunoaterea proprietilor celulei.

36 Apa reprezint solventul pentru numeroase substane anorganice absorbite n principal din soluia solului (prin intermediul rdcinilor), dar i extra-radicular, urmnd apoi transportul n plante. Dac lum n considerare periorul absorbant (celul rizodermic specializat pentru absorbie) n relaie cu soluia solului, cnd apa se deplaseaz din sol ctre plant, prin plant i din plant ctre atmosfer, traverseaz diferite tipuri de medii i corespunztor acestora mecanismele de transport sunt variate. 3.1.1. Principalele procese care guverneaz transportul apei i cile specifice de transport Procesele fundamentale de transport a apei sunt: 1) difuziunea procesul fizic de deplasare a moleculelor / ionilor (att a solventului, ct i a substanelor dizolvate), fie c este vorba de un solid, lichid sau gaz, ca rezultat al agitaiei termice randomizate. Aceast micrae determin o deplasare progresiv a substanelor de la o regiune cu o concentraie mai mare, ctre o regiune cu o concentraie mai mic (n particula difuzibil luat n considerare), mediile respective aflndu-se n contact direct (fig.3.1.). Procesul este independent de aciunea Fig. 3.1. Realizarea forei de gravitaie i direcia de difuziune a unei substane este difuziunii independent de direcia de difuziune a altei substane (fig. 3.2). conform gradientului de Conform legii lui Fick, rata difuziunii este direct concentraie proporional cu gradientul de concentraie. De asemenea, procesul este rapid n cazul distanelor mici, n timp ce pe distane mari, difuziunea este extrem de nceat. Js = -Ds Cs/ Dx unde: Js = rata de transport (moli m-2 s-1) Ds = coeficientul de difuziune (moleculele mari au un D mai mic) Cs = gradientul de concentraie Dx = distana 2) curentul de mas mass Fig. 3.2. Micarea termal a moleculelor permite difuziunea flow sau bulk flow se refer la (dup Taiz i Zeiger, 2002) deplasarea unui grup de molecule, ca rspuns la un gradient de presiune. Ca exemple se pot da: deplasarea apei printr-o conduct; curgerea apei n cazul unui ru; cderea ploii sau deplasarea apei prin aquaporine. Dac facem referire la curentul de mas printr-un tub, rata acestuia depinde de diametrul tubului, de vscozitatea lichidului i de mrimea gradientului de presiune, care guverneaz aceast curgere. Presiunea care guverneaz curentul de mas al apei reprezint componenta principal a mecanismului responsabil de transportul apei pe distane mari n plante, pe calea xilemului. Spre deosebire de difuziune, presiunea care guverneaz curentul de mas este independent de gradientul de concentraie, atta timp ct modificrile vscozitii sunt neglijabile. Difuziunea i curentul de mas constituie totodat exemple ale transportului apei la nivel celular: difuziunea prin membran, curentul de mas prin aquaporine (fig. 3.3.) (Taiz i Zeiger, 2002).

37 3) osmoza reprezint un proces fizic de difuziune particular a apei, transversal printr-o membran selectiv permeabil, care separ dou medii de concentraii diferite. Sensul deplasrii moleculelor apei este de la mediul cu potenial al apei mare (diluat sau hipotonic), ctre mediul cu potenial al apei mic (concentrat sau hipertonic). Membrana selectiv permeabil (ex plasmalema i tonoplastul) este cea care permite trecerea apei i a altor substane cu molecul mic, nencrcate electric (precum dioxidul de carbon, oxigenul). Ea funcioneaz selectiv pentru deplasarea substanelor cu molecul mare i cu precdere a celor ncrcate electric. Asemenea proceselor de difuziune i curentului de mas, n cazul osmozei intervine o for conductoare. Aceasta reprezint o sum a celor dou fore menionate anterior (gradient de concentraie i gradient de presiune). S-a dezvoltat conceptul unei fore totale, reprezentat de gradientul potenialului apei. Potenialul apei (w) se refer direct la potenialul chimic al apei i asemenea potenialului chimic este o cantitate relativ, care depinde de trei factori: concentraie (s), presiune (p) i gravitaie (g). Potenialul apei (w) = s + p + g s = potenialul soluiei sau potenialul osmotic; Acest potenial este datorat concentraiei n substane dizolvate (electrolite i ne-electrolite) i cu ct este mai mare concentraia substanelor, cu att potenialul apei este mai mic. s = - RTCs unde R - constanta gazelor 8,32 J mol -1K-1 T - temperatura absolut Cs - concentraia soluiei mol L-1 p = presiune hidrostatic (potenial de presiune), care la celula vegetal se numete presiune de turgescen; Potenialul de presiune se datoreaz presiunii hidrostatice i are o valoare pozitiv. n cazul celulelor plasmolizate, valoarea sa este zero, n timp ce n cazul vaselor lemnoase n timpul unei transpiraii intense, valoarea este negativ. w : densitatea apei h: nlime g: gravitaie w g = 0,01 MPa m-1 ; 10 m: 0,1 MPa n mod arbitrar, potenialul apei pure este notat cu valoarea 0 MPa. Potenialul apei unei probe se definete relativ la potenialul apei pure. Cu ct este mai mare concentraia apei ntr-o soluie, cu att potenialul apei este mai mare. Deoarece moleculele apei sunt caracterizate prin coeziune, ele interacioneaz cu alte molecule i cu ionii din soluie. Interaciunea cu substanele ntrzie procesul de deplasare a apei, n mod proporional cu concentraia. Efectul substanelor dizolvate asupra potenialului apei unei soluii este acela de a-l reduce, prin reducerea concentraiei apei. Deci, pentru o soluie, potenialul apei (w) va prezenta semnul minus (-). n privina potenialului de presiune (p), dac apa nu difuzeaz, ea se poate deplasa numai sub o presiune. Apa poate fi mpins (presiune pozitiv) sau tras (presiune negativ) (fig.3.4.), iar potenialul de presiune poate fi o valoare pozitiv sau negativ. De obicei, potenialul gravitaional (g) este eliminat din relaia potenialului apei, deoarece cteva plante sunt destul de nalte pentru ca gravitaia s aib vreun efect. La modul simplificat, ecuaia potenialului apei poate fi redat astfel: (w) = s + p g = w gh unde

38 Diferitele valori ale potenialului apei pot fi observate n fig. 3.5 (Taiz i Zeiger, 2006). Pentru plant w guverneaz transportul apei ntre diferite celule i esuturi, constituind totodat un indicator fiziologic important. Celulele i esuturile plantelor trebuie s menin acest indicator la valori normale, pentru propriul echilibru hidric, iar factorii de stres perturb proporionalitatea acestor valori.

Fig.3.4. Realizarea procesului de osmoz

Unele lucrri menioneaz i potenialul de matrix (m) sau presiunea de imbibiie, care se refer la afinitatea pentru ap a substanelor de natur coloidal, a suprafeelor pereilor celulari, precum i a materialului protoplasmatic. Potenialul de matrix are valori mari n cazul celulelor lipsite de vacuol, iar la celulele care posed vacuol, valorile acestuia sunt neglijabile. n ceea ce privete posibilitile de determinare a potenialului apei pot fi folosite diferite metode, precum: folosolirea psichrometrului folosirea camerei de presiune metoda crioscopic etc. Pe baza valorilor potenialului apei, se poate caracteriza starea celulelor din punct de vedere a hidratrii, n diferite esuturi i organe. Spre exemplu, frunzele plantelor mezofile au un potenial al apei de -10 bari, n timp ce la xerofite acesta este de -15 bari.

Fig.3.5. Diferite valori ale potenialului apei i ale componentelor sale

Modificrile potenialului apei la nivel celular implic de asemenea modificri fiziologice (fig. 3.6.). 4) imbibiia reprezint procesul fizic de adsorbie a moleculelor apei sau a altor molecule de lichid de ctre moleculele substanelor hidrofile din celul (celuloz, amidon, proteine i alte substane de natur coloidal), conducnd la sporirea masei i volumului corpului care se mbib, n mod reversibil. Un exemplu comun al imbibiiei este imbibiia seminelor, ca prim etap a ptrunderii apei n semine puse la germinat.

Fig.3.6. Modificri fiziologice cauzate de schimbri ale potenialului apei

39 Trebuie menionat faptul c, spre deosebire de osmoz, n cazul imbibiiei: sunt adsorbite att apa, ct i substanele; nu este esenial prezena unei membrane cu permeabilitate diferenial; apa este adsorbit att sub form lichid, ct i sub form de vapori; n cursul procesului se genereaz cldur; n cazul seminelor mbibate se dezvolt o presiune de imbibiie care poate atinge 1000 atm. 3.1.2. Ptrunderea apei n celula vegetal i generarea strii de turgescen Dac lum n considerare periorul absorbant, peretele celular al acestuia reprezint prima structur care ia contact cu soluia solului. O prim etap a ptrunderii apei este realizat printr-un proces pur hidraulic, realizndu-se un curent transversal prin porii pereilor celulari. Peretele celular este total permeabil pentru ap i substane. El asigur contactul direct dintre soluia solului i soluia din spaiul extraplasmatic. Prin urmare, la baza acestui transport st procesul de difuziune, iar calea se denumete cale prin apoplast. Ea cuprinde transportul prin peretele celular, dar i prin spaiile intercelulare. O a doua etap este cea a traversrii plasmalemei. Traversarea plasmalemei n sensul perete celular, ctre citosol se realizeaz prin osmoz, dac apei din soluia solului este mai mare dect apei din citosol. Deci, apa se deplaseaz de la o zon cu mare presiune de difuziune a apei, ctre zona cu presiune de difuziune a apei mai mic. Spunem c deplasarea apei printre moleculele de De asemenea, traversarea fosfolipide se va realiza conform gradientului potenialului apei. plasmalemei se poate realiza i prin intermediul unor canale proteice pentru ap (aquaporine) printrun proces pasiv, fr consum de energie metabolic. La nivelul citosolului, apa se deplaseaz conform legilor difuziunii. Pentru a ajunge n vacuol, moleculele apei traverseaz tonoplastul, asemenea modului de traversare a plasmalemei. Deoarece la nivelul celulei, n sucul vacuolar se gsete o concentraie mai mare de substane osmotic active (care au capacitatea de a atrage apa), moleculele de ap se vor deplasa nspre aceast zon. Ca urmare, vacuola i mrete volumul, preseaz asupra citoplasmei i aceasta la rndul ei preseaz asupra peretelui celular. Plasmalema se lipete de peretele celular i celula vegetal devine turgescent. Din acest punct de vedere, un rol deosebit revine ionului de potasiu (K+). n celula vegetal acesta se gsete n dou locuri principale: n vacuol i n citosol. Cea mai mare cantitate este localizat n vacuol, loc unde are o funcie pur biofizic, pentru generarea ptrunderii apei n celul, respectiv generarea turgescenei i extensiei celulare. n citosol, potasiul are att rol osmotic, ct i roluri biochimice (Walker i al., 1996). Turgescena reprezint o stare de saturare cu ap a celulei vegetale. Generarea presiunii de turgescen este redat n figura 3.7.(Pritchard, 2001).

Fig. 3.7. Generarea presiunii de turgescen n celula vegetal

40 Importana fiziologic a strii de turgescen la celula vegetal: 1) asigur condiiile optime pentru desfurarea tuturor proceselor vitale; 2) asigur meninerea poziiei erecte a plantelor ierboase, precum i poziia specific a tulpinilor, lstarilor tineri i a limbului frunzelor; 3) are rol n realizarea micrii de deschidere i nchidere a ostiolelor stomatelor; 4) intervine n realizarea a diferite micri la plante (ex. seismonastii la Mimosa pudica); 5) are rol n procesul de extensie celular etc. 3.1.2.1. Aquaporinele descoperire, dovezi ale existenei lor i importan Descoperirea aquaporinelor Cea mai important descoperire pentru nelegerea conductanei celulelor vii este descoperirea unei clase de canale proteice pentru ap, numite aquaporine (Maurel i Chrispeels, 2001). Aquaporinele aparin unei familii de proteine integrale majore (MIPs), a cror mas molecular este cuprins ntre 26-30 kDa. Astfel de proteine sunt proteine integrale majore, prezente n plasmalem - PIP, dar i n tonoplast- TIP sau alte membrane - MIP (fig. 3.8.). Fig. 3.8. Model al aquaporinelor La Arabidopsis s-a raportat un set de 38 (dup Maurel i Chrispeels, 2001) aquaporine, divizate n patru subfamilii din larga familie MIP, ca baz pentru nomenclatura PIP, TIP i NIP, indicnd i localizarea subcelular (plasmalem, tonoplast), respectiv noduli (Kaldenhoff i al., 2007). Prima protein depistat a forma un canal selectiv pentru ap a fost AQP1, abundent n eritrocite i plasmalema a diferite celule epiteliale (Tzerman i al., 1999). La plante, s-a clonat i s-a exprimat funcia primei aquaporine n 1993. Prin tehnici de imunolocalizare s-a gsit a fi situat n plasmalem i respectiv tonoplast (PIPs i TIPs). Dar, i alte endomembrane au MIPs, care funcioneaz ca aquaporine (ex. proteina NOD26 din membrana simbiozomului la soia). n general, se accept faptul c aquaporinele funcioneaz ca pori sau canale, prin care apa se transport pasiv. Pe aceast cale, se asigur o mare permeabilitate osmotic (Po) pentru ap sau conductivitate hidraulic (Lp) a membranei (Vandeleur, 2007; Cavez i al., 2009). Unele canale au o selectivitate sporit pentru ap, fapt ce justific i numele de aquaporine ( TIP i - TIP) (Maurel i al., 1995). Altele permit trecerea ne-electroliilor, precum ureea (AQP3) (Ishibashi i al., 1997) sau sunt specifice pentru neelectrolii (pentru glicerol la Escherichia coli). Alte MIP sunt relativ neselective i permit de asemenea trecerea ionilor (NOD26) (Weaver i al., 1994). Avnd n vedere dificultatea msurrii permeabilitii pentru ap n canale individuale (apa nefiind ncrcat electric) i backgroundul permeabilitii bistratului lipidic pentru ap fiind relativ mare, comparativ cu folosirea tehnicii electrofiziologice (patch clamping) n cazul ionilor, aici s-a introdus un alt parametru i anume coeficientul de reflecie (). Acesta este o msur a selectivitii pasive a membranelor pentru substane, relativ la ap. Coeficienii de reflecie sunt relevani cnd se apreciaz selectivitatea aquaporinelor, prin testarea unor substane. Mercurul i agenii sulfhidril blocheaz n general aquaporinele.

41 Dovezi ale existenei aquaporinelor Un prim indiciu al activitii canalelor pentru ap este o valoare mare a permeabilitii osmotice pentru ap (Pos). Pos mai mare de 10 * 10-6 m s-1 este reprezentativ pentru permeabilitatea pentru ap, la trecerea printre moleculele lipidice (n relaie cu compoziia specific a acestora). Pentru membranele care posed canale pentru ap, Pos este cuprins ntre 100 2000 * 10-6 -1 m s . Permeabilitatea osmotic pentru ap (Pos) trebuie s fie mai mare dect permeabilitatea difuzional (Pd) pentru ap. Raportul Pos/Pd reprezint o caracteristic a cii predominante de transport a apei. O valoare egal cu 1 este tipic pentru difuziunea independent printre moleculele fosfolipidice, n timp ce membranele care conin canale proteice pentru ap prezint un raport mai mare dect unitatea. Deoarece curentul de ap care traverseaz plasmalema este condus att osmotic, ct i urmare a gradientului de presiune (care are o pondere mare), volumul de ap care traverseaz iniial membrana poate fi mare. Spre deosebire de aceasta, la traversarea tonoplastului, gradientul potenialului osmotic poate fi mai mic, constrns de extensia pn la care citoplasma i poate modifica volumul. Una dintre cile prin care poate fi compensat acest dezechilibru i care permite vacuolei s fie un tampon rapid pentru citoplasm (prevenind modificarea volumului acesteia, care n consecin ar duna citoscheletului dar i metabolismului) ar fi ca tonoplastul s aib o conductivitate pentru ap (Lp) mult mai mare, comparativ cu plasmalema. Situaia model, cu o permeabilitate mai mare a tonoplastului, comparativ cu plasmalema este susinut de msurtorile raportului Lp plasmalem: Lp tonoplast, care s-a demonstrat a fi de 1:7 la gru i 1:100 la suspensii de celule de tutun. Importana fiziologic a aquaporinelor Funcia principal a aquaporinelor se crede a fi cea de a spori rata de transport transmembranal a apei, dar pe lng aceasta, sunt transportate i alte molecule mici cu importan fiziologic (Hill i al., 2004). La nivel de esut, aquaporinele reprezint o alternativ la transportul prin apoplast i simplast. De asemenea, se sugereaz faptul c transportul transmembranal poate prezenta relevan n legtur cu multe procese, altele dect cele cu privire la transpiraie. Spre exemplu, anumii cercettori au descris reglarea expresiei aquaporinelor n flori, pe parcursul maturrii seminelor i a germinrii. Aquaporinele asigur markeri spaiali valabili pentru a explora cursul apei i substanelor, care joac un rol critic pentru dezvoltarea plantei sau pentru rspunsul plantei la diferii factori de stres biotic sau abiotic (fig. 3.9.) (Maurel i Christeels, 2001). Cercetrile efectuate de ctre Aharom i al. (2003) la Arabidopsis (tipul slbatic i transformat genetic) au demonstrat faptul c n condiii favorabile de cretere, expresia PIP1b a sporit semnificativ rata de cretere a plantei, rata transpiraiei, densitatea stomatic Fig. 3.9. Implicarea aquaporinelor n i eficiena fotosintezei. n contrast ns, expresia PIP1b diferite procese fiziologice la plante nu a avut nici un efect n condiii de stres salin, n timp ce n cazul stresului hipohidric a avut efect negativ, cauznd ofilirea mai rapid. Rezultatele au condus la sugestia c transportul apei pe calea aquaporinelor din plasmalem reprezint un factor limitativ pentru creterea i vigoarea plantei n condiii favorabile. n schimb, favorizarea transportului prin aquaporinele din plasmalem poate s nu aib un efect benefic n cazul stresului salin i s fie duntor pe parcursul stresului hidric.

42 3.1.3. Plasmoliza generare, importan Plasmoliza reprezint separarea protoplasmei celulei vegetale de peretele celular, ca urmare a pierderii de ap din protoplast, prin procesul de exosmoz. Plasmoliza apare n natur n condiii extreme. n laborator este indus prin imersarea unei celule vegetale ntr-o soluie hipertonic (puternic salin sau bogat n glucide), situaie n care apa este pierdut prin exosmoz. Dac soluia solului este mai concentrat n substane dizolvate (este hipertonic), respectiv w este mai redus, comparativ cu w sucului vacuolar celular, apa va prsi celula printr-un curent exosmotic. Un prim indiciu al manifestrii acestui fenomen este desprinderea plasmalemei de peretele celular, uor, pe la colurile celulei, aceasta fiind considerat prima faz a plasmolizei, denumit plasmoliz incipient. Pe msur ce apa prsete celula, plasmalema se desprinde mai pronunat, iar aceasta a doua faz este denumit plasmoliz concav, stelat sau neregulat. La un moment dat, coninutul celular ia o form aproape sferic i plasmalema se desprinde aproape total de peretele celular. Plasmalema mai rmne prins prin firioare Hecht (firioare asemenea firului de pr) care asigur conexiunea dintre peretele Fig. 3.10. Plasmoliza la epiderma de ceap celular i plasmalem (Buer i al., 2000). Aceasta, a treia faz a plasmolizei este denumit plasmoliz convex, sferic sau regulat (fig. 3.10.). n cursul plasmolizei celulelor, se pot detecta firioarele descoperite de Hecht (1912) (fig. 3.11.). n cazul esutului epidermei de ceap imersat ntr-o soluie de azotat de calciu, plasmoliza are loc pentru c ionii de calciu i azotat strbat uor peretele celular i ntmpin selectivitatea plasmalemei. Vacuola poziionat n centrul celulei, iniial conine o soluie diluat, cu o presiune osmotic mai sczut dect cea a soluiei de azotat de Fig. 3.11. Formarea firioarelor Hecht pe parcursul plasmolizei, la culturi calciu, poziionat de de calus de Nicotiana tabacum (dup Buer i al., 2000) cealalt parte a membranei. Vacuola pierde ap i se micoreaz. Spaiul dintre plasmalem i peretele celular se mrete, iar protoplasma se contract ctre centrul celulei. Rmn firioare ale plasmalemei, ca puncte de prindere de peretele celular. Dac celulele plasmolizate nu sunt transferate rapid din mediul respectiv n ap, pentru a avea loc deplasmoliza (revenirea la starea de turgescen), celulele mor.

43 Plasmoliza se concretizeaz deci prin desprinderea plasmalemei de peretele celular din cauza exosmozei apei, iar o celul vegetal plasmolizat este o celul aflat ntr-o stare de nesaturare cu ap. Importana fiziologic a plasmolizei 1) plasmoliza are efecte nefavorabile asupra celulei vegetale i intervine n situaia unor condiii de stres (n caz de secet, n situaia aplicrii n exces a ngrmintelor chimice etc.); 2) din punct de vedere practic ns, prin metoda plasmolizei se pot efectua anumite determinri legate de stabilirea unor indicatori fiziologici: a) se poate determina viabilitatea celulelor, cunoscut fiind faptul c numai celulele vii plasmolizeaz; b) se poate determina gradul de vscozitate al citoplasmei, pe baza stabilirii timpului de plasmoliz (respectiv a intervalului de timp scurs de la plasarea materialului biologic ntr-un plasmolizant i instalarea plasmolizei convexe). Cu ct timpul de plasmoliz este mai mare, se apreciaz c gradul de vscozitate al citoplasmei este mare, n timp ce un timp de plasmoliz scurt indic un grad mai redus de vscozitate. c) metoda plasmolizei incipiente constituie una dintre modalitile indirecte de determinare a valorii presiunii osmotice a sucului vacuolar celular; d) un caz deosebit de plasmoliz este cel denumit plasmoliz de iarn, plasmoliz indus de condiiile de mediu din perioada iernii, cnd ncetinirea absorbiei apei din sol i a eliminrii ei prin transpiraie conduce la concentrarea sucului vacuolar i la creterea rezistenei la nghe. Este aa numitul proces de individualizare a protoplasmei. e) prin provocarea n condiii de laborator a unei plasmolize avansate speciale denumit plasmoliz n calot, se poate aprecia gradul diferit de selectivitate a membranelor (tonoplastul este mai selectiv, dect plasmalema). 3.1.4 Relaiile dintre diferite fore, relativ la starea de hidratare a celulei vegetale la un moment dat Presiunea osmotic este fora care se declaneaz n vacuol (ca urmare a acumulrii n acest compartiment celular a glucidelor solubile, acizilor organici, substanelor minerale etc.) i care determin ca w sucului vacuolar s fie mai mic, dect w soluiei externe. De altfel, presiunea osmotic se definete ca diferena dintre presiunea de difuziune a apei pure i presiunea de difuziune a apei dintr-o soluie (sau deficitul presiunii de difuziune). Presiunea osmotic se exprim n atmosfere, bari sau Pascali: 1 atmosfer = 760 mm Hg (la nivelul mrii, 450 latitudine) = 1,01325 bari = 1,013 * 105 Pa = 0,1013 MPa Valoarea acestei fore poate fi determinat prin diferite metode (metoda plasmolizei incipiente, metoda crioscopic, folosirea camerei de presiune etc.) i variaz cu specia, organul, starea fiziologic, condiiile atmosferice etc. n general, se determin valori cuprinse ntre 1-3 bari (la plante hidrofile), pn la peste 100 bari (la plante xerofile). Pentru organele unei plante, valorile minime se nregistreaz la rdcin (0,5-5 bari), iar cele maxime la fructe (40 bari). Dei absorbia apei n celula vegetal este declanat de presiunea osmotic a sucului vacuolar, cantitatea de ap ptruns n celul este determinat de presiunea de turgescen i presiunea peretelui celular. Valorile celor dou fore sunt egale i de semn contrar. Relaiile dintre diferitele fore implicate sunt redate n graficul lui Hfler (1918) (fig. 3.12.).

44 Se remarc aa numita for de suciune, de fapt presiunea osmotic activ, adevrata for cu care celulele sug apa i care este caracteristic doar celulei vegetale cu perete celular celulozo- pectic i cu vacuol. Aceast for nu se regsete la soluii i poate fi exprimat prin urmtoarea relaie: Fs = Po Ppc (Pt) unde: Fs = Fora de suciune Po = Presiunea osmotic Ppc = Presiunea peretelui celular Pt = Presiunea de turgescen Valorile acestei fore sunt variabile, n raport cu starea de hidratare a celulei vegetale la un moment dat. Astfel, n cazul unei celule puternic plasmolizate (1): Fs = Po + Ficp (fora de imbibiie a coloizilor plasmatici) La celula vegetal aflat n plasmoliz incipient (2): Fs = Po La celula vegetal aflat n condiii normale de hidratare (3):

Fig. 3.12. Reprezentarea schematic a relaiilor dintre fora de suciune (Fs), presiunea osmotic (Po), presiunea de turgescen (Pt) i presiunea peretelui celular (Ppc)

Fs = Po - Pt (Ppc) La celula vegetal suprasaturat cu ap (4): Fs = 0 Cunoaterea valorilor forei de suciune a celulei vegetale prezint importan practic: constituie un indicator al gradului de hidratare al celulelor la un moment dat i se utilizeaz pentru stabilirea momentului de aplicare a irigaiilor. 3.2. Ptrunderea i transportul substanelor dizolvate n celula vegetal Plantele se caracterizeaz prin capacitatea de a menine la nivelul mediului lor intern, o compoziie diferit de cea a mediului din jurul lor, chiar dac n cazul celui din urm intervin modificri rapide sau extreme. De asemenea, are loc o micare permanent a moleculelor i ionilor ntre plant i mediu, ceea ce permite plantelor s acumuleze substane nutritive, iar pe de alt parte s elimine produi ai metabolismului. Transportul substanelor poate s fie realizat: ntre mediul extern i o celul (ex. absorbia substanelor nutritive din soluia solului, la nivelul periorului absorbant; absorbia extra-radicular); transportul la nivel celular; transportul la nivel de plant,ntre diferite puncte (ex. transport prin xilem i floem). n cele ce urmeaz, vor fi abordate principalele procese care guverneaz absorbia substanelor de ctre celula vegetal, precum i transportul celular i intercelular al acestora.

45 3.2.1 Transportul pasiv i activ al substanelor Considerm periorul absorbant, n relaie cu soluia solului. La nivelul solului srurile minerale sunt fie sub form dizolvat n soluia solului, fie sub form adsorbit pe coloizii din sol. Trebuie precizat c absorbia i adsorbia sunt dou fenomene diferite. Absorbia reprezint procesul fiziologic prin care ionii sau moleculele ptrund n celul printr-o membran i nu este doar un fenomen de suprafa, n timp ce adsorbia este un proces fizic, care const n procesul de acumulare a moleculelor, ionilor pe suprafaa de contact. Absorbia srurilor se realizeaz sub form ionic (cationi i anioni). n soluia solului, substanele se deplaseaz conform gradientului de concentraie, pe baza procesului de difuziune. Acestea iau contact cu peretele celular al periorului absorbant, care este permeabil i permite difuziunea substanelor. Substanele pot ulterior s traverseze plasmalema, pentru a ptrunde n celul sau pot s difuzeze prin peretele celular, n vederea transportului intercelular, trecnd n peretele celular al celulei vecine (cale prin apoplast). Un astfel de transport, denumit transport pasiv nu implic un consum de energie metabolic. El este guvernat de potenialul chimic al substanelor, ca sum a tuturor forelor care permit unei molecule s se deplaseze ntotdeauna de la zona cu potenial chimic mare (zona concentrat n respectiva substan), ctre zona cu potenial chimic mai mic (zona diluat n respectiva substan). n cazul de fa, fora conductoare a procesului de difuziune este diferena dintre potenialul chimic al soluiilor din interiorul celulei i soluia solului. Traversarea plasmalemei poate fi realizat pe dou ci: transport pasiv fr consum de energie metabolic, avnd la baz difuziunea i realizndu-se conform gradientului de concentraie; transport activ cu consum de energie metabolic i mpotriva gradientului de concentraie. 3.2.1.1. Transportul pasiv prin membranele biologice Difuziunea simpl reprezint una dintre cile de transport pasiv i const n aceea c moleculele traverseaz membrana cu sau fr ajutorul unor canale proteice. Canalele proteice sunt de altfel proteine membranale integrale, care i pot modifica continuu starea lor conformaional (se deschid sau se nchid). n situaia n care nu sunt implicate canale proteice, deplasarea moleculelor se realizeaz n funcie de solubilitatea lor n faza lipidic membranal (fig.3.13.). Avnd n vedere particularitile structurale ale membranelor biologice, moleculele nepolare precum O2 traverseaz foarte rapid, iar pentru molecule polare mici (H2O, CO2, glicerol etc.) permeabilitatea este mai redus. Dac n cazul apei permeabilitatea este neobinuit de mare (avnd n vedere interaciunile puternice cu gruprile polare ale Fig. 3.13. Transportul transmembranal pasiv lipidelor), pe msur ce crete mrimea i polaritatea moleculelor, permeabilitatea pentru acestea scade. Difuziunea facilitat se consider a avea loc cnd moleculele sunt transportate prin intermediul unor transportori proteici. ntr-o astfel de situaie, se asigur o rat de transport apreciabil mai mare, comparativ cu cea realizat n funcie de solubilitatea lipidic a moleculei. De asemenea, acest proces este specific pentru un singur ion sau specii de molecule, ori pentru un singur grup de molecule (Taiz i Zeiger, 2002) (fig. 3.14.).

46

Fig. 3.14. Difuziunea prin membran a substanelor

3.2.1.2 Transportul activ prin membranele biologice Transportorii care mediaz transportul activ sunt denumii adesea pompe. Transportul se realizeaz cu consum de energie metabolic i mpotriva gradientului de concentraie. Potenialul membranal sau gradientul electrochimic generat de transportul activ primar asigur energie pentru transportul activ secundar (Taiz i Zeiger, 2002) (fig. 3.15.). Pe lng aa numitele pompe, mai sunt i alte dou categorii de transportori: cotransportori i canale (fig.3.16.). Distincia ntre transportul activ i cel pasiv se poate realiza prin msurtori ale concentraiilor i ale potenialului transmembranal. Spre exemplu, pentru substane neelectrolite, se poate stabili dac au ptruns n celule sau dac au fost eliminate de celul n mod activ, ori pasiv, msurnd concentraiile interne i externe ale acestora. n cazul ionilor care posed sarcin electric, la testul anterior se adaug considerarea potenialului membranal.

Fig. 3.15. Transportul transmembranal activ

Potenialul membranal este dat n principal de transportul electrogenic al protonilor. Cnd un ion se deplaseaz n celul sau prsete celula, fr deplasarea unei sarcini electrice opuse, transmembranal se creaz un voltaj. Acest tip de transport este denumit transport electrogenic, se realizeaz cu consum de energie metabolic, adesea prin hidroliza ATP. Transportorii care mediaz transportul electrogenic se numesc pompe electrogene. ATP-azele includ pompa de protoni din plasmalema celulelor plantelor, iar eliminarea protonilor (H+) pare a fi principalul flux ionic electrogenic transplasmalem (fig. 3.17.).

Fig. 3.16. Reprezentarea schematic a unor canale pentru ioni i a unor transportori

47 Prim etap n privina caracterizrii moleculare a pompei de protoni a fost fcut de ctre Hodges i al. (1972) (citat de Serrano, 1990). Desigur, proprietile principalelor pompe de protoni din celula vegetal a plantelor superioare (H+- ATP aza din plasmalem; H+- ATP aza i H+pirofosfataza din tonoplast) sunt diferite att n privina structurii, mecanismului de aciune etc. (Hall i Williams, 1991; Silva i al., 2010). Mitchell a introdus termenul de chemiosmoz, pentru a explica legtura dintre gradientul potenialului electrochimic a protonilor, transversal membranei selectiv permeabile i performana de se face un lucru celular (Harold, 1986). n plante, gradienii de H+ au rol n transportul transmembranl prin plasmalem i tonoplast, precum i n transportul i sinteza ATP la nivelul membranelor interne ale cloroplastului i mitocondriei. Fora motrice a protonilor poate fi de asemenea folosit pentru preluarea zaharozei, mpotriva gradientului de concentraie, de obicei pe calea unui simport H+- zaharoz. Deci, zaharoza este supus unui contransport cu un proton. Cnd sunt transportai protoni n afara celulei, electrogenic se creeaz un potenial membranal, ct i un gradient de pH. Acest gradient electrochimic al H+ numit adesea fora motrice a protonilor reprezint de fapt o modalitate de depozitare a energiei libere, sub forma gradientului de H+. Dei bistraturile fosfolipidice pure sunt practic Fig.3.17. Aciunea H-ATP azei la nivelul impermeabile pentru H+, membranele plasmalemei proteine celulei vegetale conin membranale specifice, care permit H+ s difuzeze napoi n celul, dac el se deplaseaz cu un alt ion sau substan. ntr-o astfel de situaie, fora motrice generat de transportul electrogenic al protonilor este utilizat pentru dirijarea transportului multor altor substane, mpotriva gradienilor electrochimici, proces denumit cotransport. n cazul unui cotransport realizat ntr-un singur sens, denumirea este de simport, iar dac se realizeaz n direcii opuse este denumit antiport (fig. 3.18.). Prin urmare, vacuola este mai acid (pH 3-6) comparativ cu citosolul (pH 7,5). La nivel de tonoplast V-ATPaza i pirofosfataza pompeaz H+ n interiorul vacuolei, mpotriva gradientului de concentraie Membrana vacuolar conine de asemenea canale pentru Cl- i NO3-, canale care transport aceti anioni din citosol, ctre vacuol. Intrarea acestor anioni mpotriva gradienilor lor de concentraie este condus de ctre potenialul pozitiv din interior, potenial generat de pompele de H+. n consecin, prin activitatea celor Fig.3.18. Ptrunderea substanelor n celula vegetal i dou pompe de protoni, n legtur transportul local i cu activitatea canalelor pentru anioni, se determin ca n interior s se dezvolte un potenial electric pozitiv, de aproximativ 20 mV transversal tonoplastului i totodat un marcant gradient de pH.

48 Un alt ion important transportat electrogenic este calciul, permindu-se meninerea la nivelul citosolului a unei concentraii foarte mici de Ca2+, comparativ cu peretele celular i spaiile apoplastului, care sunt bogate n Ca2+. La celula vegetal, diferitele proteine transportoare permit vacuolei s acumuleze metabolii i ioni. Spre exemplu, n frunz, excesul de zaharoz generat pe parcursul fotosintezei n timpul zilei este depozitat n vacuol. Pe parcursul nopii, zaharoza este transportat n citoplasm i este metabolizat la CO2 i H2O, cu generarea simultan de ATP, din ADP i Pa. Pentru acumularea zaharozei n vacuol intervine un transportor proton-zaharoz antiport, respectiv intrarea zaharozei se realizeaz odat cu ieirea H+. Procesul este favorizat de gradientul de concentraie al acestuia (vacuol > citosol) i de potenialul negativ trans-vacuolar. De asemenea, ptrunderea dinspre citosol, n vacuol a Ca2+ i Na+ mpotriva gradienilor lor de concentraie este mediat asemntor, de ctre co-transportori, antiport cu protoni (Lodish i al., 2000). Meninerea homeostaziei pH-ului n sistemul de endomembrane necesit de asemenea activitatea pompelor de protoni. Cercetrile efectuate au evideniat importana funciilor celor dou pompe situate la nivel de tonoplast, n ceea ce privete traficul endocitic i secretor (Schumacher, 2006). Unele substane situate n membrane, precum lecitina, acizii grai i cardiolipina pot funciona ca ionofori. Cercetrile efectuate de Tyson i al. (1976) au demonstrat faptul c dintre fosfolipidele testate, cei mai activi ionofori s-au dovedit cardiolipina i acidul fosfatidic. Ionoforii interacioneaz cu cationii, formeaz complexe solubile n membran i astfel membrana poate fi traversat. Pinocitoza reprezint un mod specific de transport i const n formarea unor evaginaii, care dau natere veziculelor denumite pinocite. Compuii chimici existeni n vezicule sunt pui n libertate, fie n interiorul celulelor (endopinocitoz) traversnd plasmalema, fie n spaiul extracelular (exopincitoz) sau sunt transportai trans - tonoplast. Importana transportului transmembranal Transportul transmembranal joac un rol central n fiziologia hormonilor, prin controlul asupra creterii i dezvoltrii plantelor, ncepnd de la evoluia polaritii ntr-o singur celul, ctre complexitatea interaciunilor celulare, care induc micrile unui ntreg organ al plantei (ex. tropisme). Multe dintre aceste procese sunt controlate osmotic la nivel celular i din acest considerent sunt fondate pe necesitatea fluxului substanelor anorganice, n stare dizolvat. Canalele de anioni particip la realizarea a diferite funcii fiziologice: osmoreglarea celular, semnalizarea celular, nutriia plantelor, compartimentalizarea metaboliilor i tolerana la metale (Angeli i al., 2007). De o importan egal, chiar dac de o mai mic extindere, transportul membranal servete proceselor de translaie i n anumite cazuri, de asemenea se transmit semnale ntre celule, aa nct este condus informaia n plant. Un exemplu edificator al controlului hormonal al canalelor de ioni este cel gsit n cazul aciunii acidului abscisic (ABA) n celulele de gard ale complexului stomatic, n frunzele plantelor superioare (Blatt, 1993) (vezi Cap. 4). De altfel, ABA induce o cascad de evenimente mult mai complex dect se pare la prima vedere. S-a determinat de asemenea c la nivelul plasmalemei celulelor de gard a stomatelor, sunt dou tipuri de canale pentru K+, unul pentru ptrunderea potasiului (influx), canal care este inhibat de ABA (Schroeder i al., 1987) i un altul care activeaz ieirea (efluxul) K+. n privina posibilitilor de determinare a permeabilitii membranelor pentru ap i ioni minerali (ex. n cazul evalurii impactului unor factori asupra funcionalitii acestora) De Clerck i Geuns (1988) au descris o metod pentru msurarea permeabilitii pentru 3H2O, demonstrndu-se spre exemplu c hormonii steroizi (cortizol) pot afecta n special permeabilitatea hipocotilului, inducnd o cretere a permeabilitii membranale (De Clerck i Geuns, 1989). De asemenea, pe baza acestei metode, ct i prin utilizarea metodei conductometrice (scurgerea electroliilor -

49 electrolyte leakage) s-a determinat influena unor dereglri fiziologice la mere, asupra gradului de selectivitate a membranelor (Delian i al., 1996). De altfel, electrochimia este una dintre cele mai vechi ramuri ale chimiei fizice i de fapt ale chimiei n general. Cu toate c primul mare electrochimist a fost italianul Luigi Galvani (1737 1798) care a fcut marea sa descoperire n anul 1791, a trecut suficient timp pn la formarea celor dou mari domenii ale electrochimiei (unul ocupndu-se cu studiul coninutului ionic al lichidelor, iar cellalt cu procesele care au loc la nivelul electrozilor). Mai trziu, sub influena studiilor aprofundate ale celulei vii, a luat natere un nou subdomeniu studiul membranelor cruia Koryta (1992) i-a acordat un interes deosebit n lucrarea de sintez Ions, Electrodes and Membranes. Primul avans major n domeniul transportului ionilor a fost dezvoltarea de ctre colectivele lui Heher i Sakmann a tehnicii denumit patch clamp technique. Prin aceast tehnic, cercettorii au fost capabili pentru prima oar s detecteze deschiderea i nchiderea unui singur canal ionic din membranele celulare i s controleze riguros gradientul potenialului chimic pentru ionul de interes. Al doilea succes a fost evoluia tehnicilor moleculare de identificare a genelor i proteinelor codificate (Assmann, 2001). Modificrile privind permeabilitatea membranelor, respectiv studiile n legtur cu stabilitatea acestora, n condiiile incidenei unor factori de stres biotici sau/i abiotici, ct i gsirea celor mai potrivite esuturi pentru astfel de determinri, pot constitui mijloace de caracterizare a toleranei plantelor la aciunea factorilor nefavorabili, pentru noile creaii ale amelioratorilor. 3.3. Schimburile de gaze dintre celula vegetal i mediu Absorbia dioxidului de carbon i eliberarea de oxigen la nivelul celulelor mezofilului frunzei nu reprezint singurul schimb de gaze specific plantelor verzi. Pentru celula vegetal nu este necesar doar CO2, ci n cursul procesului de biodegradare a compuilor organici, pe parcursul respiraiei este absolut necesar O2. Prin urmare, n cazul unei plante verzi expuse la lumin, n frunzele acesteia se desfoar schimbul de gaze specific fotosintezei. Totodat, n toate celulele vii, n cadrul tuturor esuturilor se desfoar schimbul de gaze specific respiraiei (fig.3.19.).

Fig.3.19. Schimburile de gaze la nivelul plantei

Schimbul de gaze dintre celula vegetal i mediu se realizeaz prin procesul de difuziune, traversndu-se plasmalema, dar, mai nti, gazele trebuie s se dizolve ap. Pentru plantele terestre, necesitatea conservrii apei se afl n conflict cu schimburile de gaze. Trebuie realizat un echilibru ntre ceea ce nseamn pierderea apei cauzat de energia caloric provenit de la soare i de vnt, cu necesitatea absorbiei CO2 i a O2, pentru realizarea fotosintezei i respiraiei. n vederea rezolvrii acestor probleme, cele mai multe plante terestre i-au dezvoltat mecanisme specifice de compromis (vezi Cap. 4). Trebuie menionat de asemenea faptul c n cazul plantelor, schimburile de gaze sunt realizate la nivel local. Fiecare celul vie schimb gaze n mod direct cu mediul. Nu exist un sistem specializat pentru schimbul de gaze, precum n cazul celulei animale i nici un sistem

50 specializat pentru transportul acestora. La nivelul plantei exist spaii intercelulare interconectate, pline cu aer, care formeaz apoplastul intercelular. Acesta este un sistem deschis mediului extern, prin intermediul stomatelor i lenticelelor. De asemenea, acesta penetreaz pn la cele mai profunde celule ale plantelor. Astfel, gazele din mediu pot s se deplaseze prin apoplast n mod direct, ctre zonele interne ale plantei, fr a fi nevoie de traversarea membranelor. Deoarece O2 difuzeaz prin aer de 10.000 de ori mai repede dect prin lichide, sistemul de spaii intercelulare pline cu aer asigur ca toate celulele, chiar i cele mai profunde s fie aprovizionate n mod corespunztor. n esuturile plantelor, pe lng CO2 i O2 sunt transportate i alte gaze, precum etilena i ali compui ai metabolismului intermediar. ntrebri 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Enumerai i explicai principalele procese care guverneaz relaia celulei vegetale cu apa. Turgescena: definiie, condiiile de realizare i importan fiziologic. Plasmoliza: definiie, condiiile de realizare i importan fiziologic. Explicai graficul lui Hfler. Explicai transportul pasiv al substanelor prin membranele biologice. Explicai transportul activ al substanelor prin membranele biologice. Explicai schimburile de gaze dintre celula vegetal i mediu.

Bibliografie selectiv Angeli, A., Thomine, S., Franchisse, J.M., Ephritikhine, G., Gambale, F. i Barbier-Brygoom, H. 2007. Anion channels and transporters in plant cell membranes. Plant Transporters and Channels, Vol. 581: 2367-2374. Assmann, M.S. 2001. From proton pomp to proteome. Twenty five years of research on ion transport in higher plant. Plant Physiology, Vol. 125: 139 141. Buer, C.S., Weathers, P.J. i Swartzlander, Jr. 2000. Changes in Hechtian strands in cold-hardened cells measured by optical microsurgery. Plant Physiology, Vol. 122: 1365-1377. Cavez, D., Hachez, C., Chaumont, F. 2009. Maize sweet suspension cultured cells are a convenient tool for studying aquaporin activity and regulation. Plant Signaling and Behavior, Vol.4: 9, 880892. Chrispeels, M. i al. 1999. Proteins for transport of water and mineral nutrients acroos membranes of plant cells. The Plant Cells, Vol. 11: 661- 675. Hill, A.E., Shachar-Hill, B. and Shachar-Hill, Y. 2004. What are aquaporine for ? Journal Membrane Biology, Vol. 197: 1-32. Pritchard, J. 2001. Turgor Pressure. Encyclopedia of Life Sciences, Nature Publishing Group. Silva, P., Faanha, A.R., Tavares, R.m., Gers, H. 2010. Role of tonoplast proton pumps and Na+/H+ antiport system in salt tolerance of Populus euphratica Oliv. Journal of Plant Growth Regulators, Vol. 29: 23-24. Kaldenhoff, R., Bertl, A., Otto, B., Moshelion, M. i Uehleim, N. 2007.Characterization of plant aquaporins. Methods in enzymoloy, Vol. 48: 505- 531. Taiz, L. and Ziger, E. 2002. Plant Physiology. 3rd Ed. Sinauer Associates: Sunderland, Massachusetts. Taiz, L. and Ziger, E. 2006. Plant Physiology. 4rd Ed. Sinauer Associates. Tyson, C.A., Zande, H.V., Green, D.E. 1976. Phospholipids as ionophors. The Journal of Biological Chemistry, Vol. 252: 1326-1332. Vandelur, R. 2007. Grapevine root hydraulics: The role of aquaporins. Tez de doctorat.

51 CAPITOLUL 4 REGIMUL DE AP AL PLANTELOR Cuvinte cheie: regim de ap, plante higrofile, plante mezofile, plante xerofile, ap liber, ap legat, absorbie radicular, absorbie extra-radicular, transport extra-fascicular, transport fascicular, transpiraie, gutaie, stomate, hidatode, bilan hidric Obiective: definirea regimului de ap al plantelor; prezentarea categoriilor de plante n funcie de relaia lor cu umiditatea solului; prezentarea coninutului de ap al plantelor, a strilor i formelor de ap din plante; descrierea rolului apei n viaa plantei, n relaie cu particularitile structurale i proprietile fizico-chimice ale acesteia; descrierea cilor de absorbie a apei, a mecanismelor implicate i a modului n care factorii interni i externi influeneaz absorbia; consideraii practice; descrierea cilor de transport a apei, a mecanismelor implicate i a modului n care factorii interni i externi influeneaz acest proces; consideraii practice; descrierea cilor de eliminare a apei din plante, a mecanismelor implicate i a modului n care factorii interni i externi influeneaz acest proces; consideraii practice; descrierea indicatorilor fiziologici privind transpiraia; REZUMAT Regimul de ap al plantelor reprezint ansamblul proceselor de absorbie a apei din mediu, circulaia sau transportul ei n plante i eliminarea acesteia n atmosfer. n funcie de relaia lor cu umiditatea solului, plantele terestre sunt grupate de obicei n trei categorii: plante higrofile, plante mezofile i plante xerofile. Apa reprezint circa 80-95% din masa esuturilor vegetale proaspete. Coninutul de ap variaz cu specia de plant, vrsta plantei, organul i esutul. Principalele stri ale apei n plante sunt starea lichid i starea gazoas. La rndul su, apa lichid se poate gsi sub dou forme: ap liber i ap legat. Printre funciile fiziologice ale apei se pot enumera urmtoarele: este un foarte bun solvent, este un factor termoreglator, asigur transportul continuu al substanelor n plante pe distane mari, contribuie la realizarea strii de turgescen, are rol n realizarea extensiei celulare, constituie materie prim n procesul de fotosintez, determin repartizarea vegetaiei pe globul terestru etc. Absorbia apei se realizeaz pe dou ci: radicular i prin organele aeriene (extra-radicular). Rdcina este organul specializat pentru absorbie, datorit particularitilor sale morfologice, anatomice i fiziologice. nelegerea mecanismului de absorbie, precum i a influenei factorilor interni i externi asupra acestui proces prezint o deosebit importan practic. Transportul apei n plante se realizeaz pe dou ci: extra-fascicular (pe distane mici) i fascicular (pe distane mari). Transportul extra-fascicular este realizat n celula nsi, precum i pe distane mici, de la celul la celul. Transportul fascicular se realizeaz printr-un sistem specializat de transport, pe distane mari, respectiv prin xilem n cazul sevei brute i prin floem n cazul sevei elaborate. Eliminarea apei din plante se realizeaz pe dou ci: prin transpiraie i prin gutaie. Transpiraia reprezint procesul de eliminare a apei din plante sub form de vapori, la nivelul ostiolelor stomatelor, porilor cuticulei i lenticelelor. Gutaia reprezint procesul de eliminare a apei din plante sub form de picturi, la nivelul unor formaiuni specializate denumite hidatode, n condiiile n care bilanul hidric (Absorbie/Transpiraie) are valori supraunitare. Principalii indicatori fiziologici privind transpiraia sunt: rata transpiraiei, coeficientul de transpiraie, productivitatea transpiraiei, eficiena folosirii apei i bilanul hidric.

52 Regimul de ap al plantelor reprezint ansamblul proceselor de absorbie a apei din mediu, circulaia sau transportul ei n plante i eliminarea acesteia n atmosfer. Circuitul apei n sistemul sol plant - atmosfer reprezint o condiie esenial pentru existena plantelor. 4.1. Clasificarea plantelor n funcie de relaia lor cu umiditatea solului Ca factor de mediu, apa are un rol ecologic deosebit i contribuie la repartizarea plantelor pe diferite zone geografice. Astfel, n raport cu relaia lor cu umiditatea solului, plantele terestre sunt grupate n trei categorii: 1. plante higrofile: prefer solurile umede, inundate i prezint anumite adaptri specifice, pentru eliberarea uoar a apei absorbite (numr relativ mare de stomate etc.); 2. plante mezofile: triesc pe soluri cu grad mediu de umiditate (majoritatea plantelor cultivate) i nu posed adaptri specifice, precum higrofitele sau xerofitele; 3. plante xerofile: triesc n locuri cu umiditate insuficient (zone aride) sau n locuri cu concentraii mari de sruri i au adaptri speciale pentru controlul procesului de eliminare a apei (stomate dispuse n cratere, numr mai mic de stomate pe unitatea de suprafa foliar etc.). 4.2. Coninutul de ap al plantelor, strile i formele apei n plante Apa reprezint un component comun, anorganic, n toate organismele vegetale i animale, fiind necesar efecturii reaciilor metabolice. n celulele vegetale n stare de via activ, coninutul n ap este mare (80-95% din masa esuturilor vegetale proaspete) i el variaz n funcie de numeroi factori interni i externi (Dorobanu i Molea, 1985). Astfel, coninutul n ap variaz cu specia de plant, vrsta plantei, cu organul i cu esutul. Spre exemplu: fructele de tomate i castravei conin n jur de 95 % ap. esuturile meristematice i vasele lemnoase conin o cantitate mai mare de ap, comparativ cu esuturile mecanice de susinere. Coninutul cel mai mic de ap l au seminele aflate n perioada de dorman (5-15%). n cazul plantelor superioare, apa se afl n general sub dou stri: lichid i gazoas. n timpul iernii, la temperaturi negative apa se poate gsi i n stare solid, sub form de ghea, mai ales la nivelul spaiilor intercelulare. Apa lichid se afl n toate organele plantei, iar la nivel celular se regsete n pereii celulari, n citosol, n vacuol etc. n stare gazoas, apa se afl n spaiile intercelulare i n toate spaiile aerifere ale esuturilor. Apa lichid ocup ponderea i se gsete sub dou forme: ap liber i ap legat. Apa liber este localizat n porii pereilor celulari, n vacuole, n citoplasm i n vasele conductoare. Este reinut cu fore slabe, circul foarte uor, asigur turgescena celulelor i reprezint sediul de desfurare a reaciilor metabolice. Apa legat este reinut cu fore mari de ctre coloizii hidrofili ai citoplasmei i este pierdut greu. Ea nu circul n plant, nu particip la realizarea proceselor biochimice i nici la dizolvarea substanelor anorganice i organice. n condiii nefavorabile, cantitatea de ap liber scade i aceasta asigur o mai bun rezisten a plantelor la nghe. 4.3. Rolul apei n viaa plantei Apa ndeplinete numeroase funcii n plante, datorit particularitilor structurale, precum i proprietilor sale fizice i chimice. 1 Moleculele de ap (alctuite dintr-un atom de oxigen, legat covalent de doi atomi de hidrogen) sunt molecule mici, polare. n consecin, apa constituie un foarte bun solvent, pentru numeroase i variate substane (fig. 4.1.). Apa previne agregarea proteinelor i cristalizarea ionilor.

53 2 Ca urmare a numeroaselor legturi de hidrogen dintre moleculele apei, aceasta se caracterizeaz prin: valoare mare a cldurii specifice; valoare mare a cldurii latente de vaporizare. Cldura specific reprezint energia necesar pentru ridicarea temperaturii unui gram de ap, cu 10C. n cazul apei, este necesar o cantitate mai mare de energie, comparativ cu necesarul n cazul altor lichide. Pentru ap, cldura specific este Fig. 4.1. Apa ca solvent de 1,00 cal/g/oC > alcool (0,58) > aer (0,25) > cupru (0,09). Cldura latent de vaporizare reprezint energia necesar pentru separarea moleculelor apei din faza lichid i trecerea lor n faza gazoas, la o temperatur constant. Aceasta se ntmpl timpul transpiraiei. Pentru ap, la 25oC, aceasta are valoarea de 10,5 KJ mol-1 (cea mai mare valoare cunoscut pentru orice lichid; 1 kJ = 0,24 Kcal.). Deci, transpiraia faciliteaz rcirea. Energia termic este folosit pentru vaporizarea apei, deci apa este un factor termoreglator. 3 Ca urmare a manifestrilor proprietilor de coeziune, adeziune i tensiune superficial (fig. 4.2.), (fig. 4.3.) ia natere fenomenul de capilaritate. Aceasta contribuie la circulaia apei n plant, n ir continuu, n xilem i transportul simultan al substanelor. Tensiunea superficial a apei tinde s minimizeze suprafaa interfeei ap-aer.

Fig. 4.2. O bul de gaz suspendat ntr-un lichid capt o form sferic

Fig. 4.3. Forma unei picturi de ap pe o suprafa solid

4 Apa se caracterizeaz printr-o mare for (putere) de extensibilitate, respectiv fora maxim de suprafa prin care o coloan continu de ap poate rezista nainte de a fi ntrerupt (fig. 4.4.). Apa poate rezista la 30 MPa (10% din fora de extensibilitate a cuprului). 5Apa contribuie la realizarea strii de turgescen a celulelor i n consecin asigur desfurarea n condiii optime a tuturor proceselor metabolice. Apa reprezint mediul de dispersie pentru substane anorganice i organice i totodat mediu de reacie. De asemenea, apa prezint importan fiziologic pentru realizarea unor micri (deschiderea i nchiderea ostiolelor stomatelor, micri ale organelor plantelor etc.). 6 Dintre procesele fiziologice, creterea (respectiv extensia celular) este cel mai mult afectat n lipsa apei. Apa reprezint materie prim n procesul de fotosintez (donator de protoni, electroni, ct i surs de oxigen) (vezi Cap.6). 7 Din punct de vedere ecologic, pe lng ali factori (lumin, temperatur etc.) apa determin repartizarea vegetaiei pe globul Fig. 4.4. Puterea mare de extensibilitate a apei terestru.

54 4.4. Absorbia apei de ctre plante 4.4.1. Cile i mecanismul de absorbie a apei de ctre plante Apa este absorbit de ctre plante pe dou ci: I. prin rdcin (radicular) II. prin organele aeriene (extra-radicular) Rdcina este organul specializat pentru absorbia apei i a substanelor minerale. ntr-o proporie mai mic, absorbia are loc i prin organele aeriene, n special prin frunze. 4.4.1.1. Absorbia apei prin rdcin i transportul extra-fascicular ctre xilem a) Particulariti morfologice, anatomice i fiziologice ale rdcinii Faptul c rdcina este organ specializat pentru absorbia apei este dovedit prin aceea c la germinarea seminelor, rdcina este primul organ care apare. Plantulele au nevoie de ap, avnd n vedere faptul c n endosperm dispun de substane organice de rezerv i sruri minerale. Pentru a face fa cu succes acestei funcii, plantele i-au dezvoltat un sistem radicular puternic. Suprafaa de contact cu soluia solului este mrit, prin prezena i formarea periorilor absorbani. n partea apical se afl zona de cretere, iar rdcina are o cretere continu. Aceasta i permite explorarea solului i gsirea celor mai bune zone n privina prezenei apei i substanelor minerale. Vrful rdcinii este acoperit de piloriz (caliptr), care asigur protecie n timpul penetrrii printre particulele solului. Zona specializat pentru absorbie este zona periorilor absorbani (fig. 4.5.). Periorii absorbani sunt celule rizodermice modificate: celule alungite; nucleul este situat ctre vrful celulei; au o vacuol mare; Fig. 4.5. Zonele rdcinii i particulariti pereii celulari sunt bogai n caloz (un structurale glucan, care mrete permeabilitatea pentru ap); au o via scurt, n general 7-10 zile; numrul lor variaz cu specia: la plante lemnoase, precum Pinus sylvestris 217 peri / mm2; la plante ierboase, precum Secale cereale 2500 peri / mm2. Partea bazal a rdcinii denumit i zona aspr prezint cicatrice, rezultate din moartea periorilor absorbani. La nivelul acestei zone, absorbia este redus, din cauza suberificrii i lignificrii rizodermei. b) Mecanismul absorbiei apei i transportului extra-fascicular ctre xilem Ptrunderea apei n periorii absorbani, precum i transportul acesteia prin rdcin este un proces complex, avnd n vedere particularitile anatomice ale rdcinii. Stendle i Paterson (1998) au descris procesul ca un model compozit de transport, care permite diferenieri n privina deplasrii apei prin celulele individuale, precum i prin diferitele tipuri de esuturi. Deplasarea apei din soluia solului, ctre xilemul rdcinii i apoi n toat partea suprateran poate fi tratat ca un curent de fluid, printr-o structur complex, cu rezistene hidraulice diferite,

55 unele dispuse n serie (cum sunt diferitele esuturi din cilindrul central) i altele dispuse paralel (cum sunt diferitele ci celulare pentru transportul apei). Zona specializat pentru absorbia apei este zona periorilor absorbani. Apa din soluia solului strbate pereii celulari ai periorilor absorbani prin difuziune. Apa ptrunde n celule conform osmozei, dac potenialul apei din soluia solului este mai mare, dect potenialul apei sucului celular. Ajuns ns n pereii celulari, apa poate continua s circule prin difuziune, de la o celul la alta, pn la nivelul endodermului. Aceast cale de transport a apei, prin pereii celulari i spaiile intercelulare dintr-un esut reprezint calea prin apoplast. Dac apa traverseaz plasmalema i ptrunde n celul, asemntor continuitii pereilor celulari i ntre citoplasma celulelor vecine exist continuitate, prin intermediul plasmodesmelor. Aceast cale de transport prin plasmodesme, pe baza difuziunii este denumit cale celular prin simplast. Dac apa traverseaz cel puin dou membrane ntr-o celul, pe parcursul transportului su (respectiv dac apa traverseaz i tonoplastul) calea se denumete calea celular transmembranar (fig.4.6.; fig.4.7.). Prin apoplast, soluia circul cu o vitez de 10 ori mai mare, dect prin simplast. La nivelul endodermului ns, calea prin apoplast este blocat, din cauza impregnrii pereilor celulari cu suberin (substan Fig. 4.6 Cile de transport hidrofob) i formarea benzilor lui Caspary. n extrafascicular prin rdcin consecin, att apa ct i substanele dizolvate vor traversa plasmalema i vor ptrunde n citoplasma celulelor endodermului, pentru a se deplasa prin simplast, ctre celulele periciclului. De menionat faptul c, pn la nivelul endodermului, pompele de ioni de la nivelul plasmalemei acioneaz n sensul perete celular, ctre citoplasm, ceea ce conduce la generarea potenialului osmotic celular, determin endosmoza apei i realizarea unui curent de ap, ctre endoderm. Dup endoderm, pompele din plasmalem acioneaz n sensul citoplasm, ctre peretele celular i n consecin se determin exosmoza apei.

Fig. 4.7. Cile de transport extra-fascicular a apei i substanelor prin rdcin, ctre xilem

C Creterea volumului soluiei din apoplast genereaz o presiune, denumit presiune radicular, care determin ptrunderea apei n vasul lemnos i ascensiunea sevei brute. La un moment dat, seva poate curge la exterior prin seciunile ramurilor, iar procesul este denumit

56 plnsul plantelor. Presiunea radicular este o presiune activ, pentru c se consum energie metabolic pentru generarea ei i pozitiv, deoarece ea mpinge n sens ascendent. Prezena benzilor lui Caspary la nivelul endodermului constituie o adaptare, care permite realizarea presiunii radiculare. Prin urmare, rdcina acioneaz ca o pomp aspiro respingtoare, sau ca un sistem de dou pompe cu sens contrar. Transportul transversal prin rdcin este deci un proces complex. ntr-un mod simplificat, aceast cale multicelular (de la periorii absorbani pn la xilem) ar putea fi considerat ca o singur membran selectiv permeabil. Conductivitatea hidraulic a rdcinilor se afl n direct interdependen cu intensitatea respiraiei i scade odat cu descreterea ratei acestui proces. 4.4.1.2. Absorbia apei prin organele aeriene Plantele pot absorbi ap i substane nu doar prin intermediul sistemului radicular, ci i prin organele aeriene, deci extra-radicular. Dintre organele aeriene, absorbia cu cea mai mare intensitate are loc la nivelul frunzelor, datorit particularitilor lor anatomice. Pe aceast cale, plantele pot valorifica o parte din apa din precipitaii, apa sub form de rou, cu precdere n cazul plantelor ierboase de talie mic. Desigur, cantitatea de ap absorbit n mod natural prin frunze este relativ sczut, fa de necesitile plantelor, reprezentnd circa 8-10% din cantitatea necesar. De asemenea, exist variaii n funcie de specia de plant, vrsta plantei, natura cuticulei etc. Absorbia foliar prezint importan inclusiv la plantele lemnoase, aa cum s-a demonstrat recent i la Pinus strobus (Boucher i al., 2009). Rezultatele obinute de Limm i al. (2009) reliefeaz faptul c absorbia foliar asigur n mod direct hidratarea frunzelor, sporind coninutul de ap al acestora cu 2-11 %. n ceea ce privete mecanismul absorbiei prin frunze, procesul se realizeaz prin intermediul porilor cuticulari i prin ectodesme. Dac exist conexiuni ntre porii cuticulari i ectodesme, se formeaz adevrate canale. Procesele care stau la baza acestui transport sunt difuziunea sau curentul de mas. Ptrunderea n celule se realizeaz conform mecanismelor prezentate deja in Cap. 3. Frunzele cu cuticula subire (fasole) absorb mai mult dect frunzele unor plante lemnoase (tei, stejar). n cazul frunzele tinere, absorbia este mai rapid i se asigur chiar pn la 50% din necesarul de ap. Procesul este mai intens la nivelul feei inferioare a limbului frunzei, n zona din vecintatea nervurilor. La acest nivel cuticula este mai subire i n consecin, mai permeabil pentru ap. Intervin de asemenea numeroi ali factori, precum: compoziia cerurilor, coninutul n ap al frunzelor, temperatura mediului ambiant, viteza vntului etc. Spre exemplu, la frunzele ofilite (cu un deficit de saturare de 15%), fora de sugere a celulelor este mai mare, dect la frunzele ale cror celule sunt turgescente. Importana practic a absorbiei extra-radiculare: n cazul stresului hidric sever, a deficitului de ap n sol, absorbia apei de rou, din precipitaii sau irigarea prin aspersiune permite corectarea rapid a strii de aprovizionare cu ap a plantelor; prin stropirea zilnic cu ap a frunzelor, de mai multe ori, comparativ cu cele nestropite, plantele dau un spor apreciabil de mas; frunzele sunt mai mari i mai multe; absorbia apei prin frunze st la baza fertilizrii extra-radiculare (stropirea plantelor cu soluii apoase, mai ales pentru asigurarea cu microelemente), ceea ce permite corectarea rapid a unor carene nutriionale; aplicarea tratamentelor cu produse fitofarmaceutice mpotriva unor ageni patogeni se bazeaz pe absorbia foliar i apoi efectul sistemic al acestora n plant etc.

57 4.4.2. Factorii care influeneaz absorbia apei de ctre plante Procesul de absorbie a apei i a substanelor minerale de ctre plante este influenat de numeroi factori interni i externi (Scherer i al., 1996). Dintre principalii factori interni amintim: specia, vrsta plantei, rata respiraiei la nivelul celulelor rdcinii, intensitatea procesului de transpiraie, rata fotosintezei, dezvoltarea sistemului radicular, a periorilor radiculari i a potenialului lor osmotic etc. 1) Specia influeneaz procesul de absorbie prin adaptrile anatomice i morfologice, n legtur cu specializarea pentru anumite condiii de mediu. Spre exemplu, plantele xerofile au un sistem radicular ramificat, cu un potenial osmotic ridicat, cu adaptri care permit micorarea pierderilor de ap din esuturi (ex. stomate situate n cripte). n raport cu specia, difer i numrul periorilor absorbani. La plantele lemnoase exist un numr mic de periori absorbani (217 peri / mm2 la Pinus sylvestris), n timp ce la plantele ierboase numrul acestora este foarte mare. La Secale cereale s-au numrat 14 miliarde de periori absorbani, lungimea total a acestora fiind de peste 600 km, iar suprafaa lor n jur de 400 m2. 2) Vrsta plantei Necesarul de ap al plantelor variaz n funcie de fenofaz, fiind mai mare n perioada de cretere, de nspicare nflorire, de formare i cretere a seminelor i fructelor (fig. 4.8.). 3) Rata respiraiei influeneaz indirect absorbia apei, prin aceea c asigur energia biochimic necesar transportului ionilor n celule. Se Fig. 4.8. Curba tipic de folosire a apei, genereaz astfel potenialul osmotic celular i se pentru cele mai multe plante de cultur induce endosmoza. 4) Intensitatea procesului de transpiraie influeneaz prin aceea c transpiraia intens genereaz un deficit de ap la nivelul celulelor frunzelor. Prin urmare, crete fora de aspiraie a frunzelor, principala for care determin ascensiunea sevei brute prin vasele lemnoase i care totodat favorizeaz absorbia radicular. 5) Rata fotosintezei influeneaz de asemenea n mod indirect absorbia prin rdcin, prin asigurarea unei cantiti sporite de substrat respirator. Acesta, n urma respiraiei furnizeaz energie pentru transportul activ al substanelor minerale, pentru generarea potenialului osmotic i deci pentru realizarea endosmozei. Factorii externi sunt reprezentai de : umiditatea solului (mai precis disponibilitatea apei din sol), concentraia soluiei solului, temperatura i aeraia solului, lumina etc. 1) Umiditatea solului (Disponibilitatea apei din sol) La nivelul solului sunt diferite forme de ap: - apa care se scurge orizontal la suprafa (mare parte a apei din precipitaii, dup saturarea suprafeei solului) nedisponibil plantelor; - apa gravitaional, care se deplaseaz vertical sub aciunea forei de gravitaie i care doar temporar poate fi absorbit de ctre plante; - apa capilar (apa care rmne dup scurgerea la suprafa i deplasarea gravitaional), dispus ca un film subire ntre spaiile ne-coloidale ale particulelor de sol i meninut sub aciunea tensiunii superficiale; - apa de higroscopicitate sau de imbibiie (cea meninut de ctre particulele coloidale ale solului graie forelor de adsorbie existene ntre aceste particule i moleculele apei) care nu este disponibil plantelor; - apa combinat chimic (eliberat doar prin meninerea solului la 1050C), care nu este disponibil pentru absorbie.

58 Apa gravitaional circul uor descendent n sol, sub aciunea forei de gravitaie. Apa capilar este cea mai important pentru plante, deoarece ea este meninut de ctre particulele de sol mpotriva forei de gravitaie (fig. 4.9.) i reprezint forma disponibil plantelor. Fig. 4.9. Ci primare de prin Disponibilitatea apei din sol este evaluat meninere intermediul a 4 nivele importante ale coninutului de ap a a apei n sol pentru uzul solului: 1) saturaie; 2) capacitate de cmp; 3) punctul de plantelor ofilire; 4) uscat la etuv. Cnd solul este saturat, porii solului sunt plini cu ap i aproape toate spaiile de aer din sol sunt nlocuite cu ap. Apa meninut n sol ntre saturaie i capacitatea de cmp este apa gravitaional. Frecvent, pentru apa gravitaional trec cteva zile pn se scurge prin profilul solului i o parte poate fi absorbit de rdcinile plantelor. Capacitatea de cmp se definete ca fiind cantitatea de ap reinut n sol, dup drenajul apei gravitaionale, n urma ploilor sau a Fig. 4.10. Umiditatea solului irigrii. Apa meninut n sol, ntre capacitatea de cmp i disponibil plantelor (ntre punctul de ofilire este disponibil pentru uzul plantelor (fig. capacitatea de cmp i punctul 4.10.) i de denumete rezerva de ap util. de ofilire) Absorbia decurge intens la o umiditate de 75-80 % din capacitatea total pentru ap a solului. La o umiditate de peste 80 % din capacitatea total pentru ap a solului, se determin reducerea ritmului absorbiei, ca urmare a nchiderii hidropasive a stomatelor. Punctul de ofilire reprezint acel coninut ( % de ap) de ap din sol, cnd cele mai multe plante nu pot exercita o for suficient pentru a scoate apa din porii mici ai solului. Numeroase plante ajung la ofilirea permanent, iar reducerea produciei poate avea loc cu mult nainte de atingerea acestui moment. Dac umiditatea solului ajunge la o valoare egal cu cea a coeficientului de ofilire, absorbia nceteaz. n aceast privin, valorile difer cu tipul de sol (ex. la solurile nisipoase 1,02; 1,11; la solurile luto-nisipoase 6,5 6,9; la solurile luto-argiloase 15,3 16,6). Pentru argil, valorile specifice ale capacitii de cmp i coeficientului de ofilire sunt mai mari dect pentru nisip. Pentru o plant cultivat, gradul n care apa se aga de sol reprezint cea mai important caracteristic a apei din sol. Acest concept este adesea exprimat ca tensiunea umiditii solului i este o presiune negativ exprimat n bari (fig. 4.11.). Cnd valoarea Fig. 4.11. Ilustrarea devine mai negativ, se refer la o valoare crescnd. Deci, pe energiei difereniate care conduce apa din sol msur ce tensiunea apei crete (devine mai negativ), cantitatea de n rdcin, energie folosit de plant pentru a scoate apa din sol va trebui de sus n tulpin, n frunze asemenea s creasc. Astfel: - 1 bar circa 1 atm; - un sol saturat i afar n circa 0,001 bari sau mai puin; - la capacitatea de cmp: 0,05 atmosfer 0,33 bari; soluri nisipoase 0,10 bari; sol argilos 0,33 bari; - la punctul de ofilire pentru cele mai multe plante cultivate, circa 15 bari; - la plante deertice circa 50-60 bari. De asemenea, conductivitatea hidraulic a solului se modific n funcie de potenialul apei din sol (fig. 4.12.). Scderea conductivitii solului uscat este dat n principal de micrile aerului n sol, pentru a nlocui apa. Pe msura deplasrii aerului, cile de curgere a apei printre particulele

59 de sol devin mai mici i n consecin, curgerea este mai dificil. O astfel de curb este reprezentativ pentru multe soluri.

n decursul unei perioade de vegetaie, plantele extrag circa 40% din apa necesar din ptrimea superioar, 30% din urmtoarea ptrime, 20% din ptrimea a treia i 10% din ptrimea bazal a zonei rdcinii (fig. 4.13.). 2) solului Concentraia soluiei
Fig. 4.13. Preluarea apei din sol

n general, soluia solului are o concentraie de 0,05 0,15%. Fig. 4.12. Conductivitatea Apa este absorbit prin intermediul periorilor hidraulic a solului absorban i, n condiiile n care potenialul apei soluiei solului i potenialul apei pentru un este mai mare, dect potenialul apei sucului celular. Dac sol argilos soluia solului este hipertonic fa de sucul vacuolar al celulelor rdcinii, este indus exosmoza. n general, plantele de cultur nu suport concentraiile mari de sruri. Acestea le provoac seceta fiziologic, dereglri fiziologice. Unele plante cultivate suport mai astfel de condiii, precum: sfecla, tomatele, pepenele galben. Alte plante sunt sensibile: soia, fasolea, mazrea. Sunt ns i plante adaptate la condiii de sol cu concentraii mari de sruri, cum sunt unele specii de plante spontane, halofile. n raport cu tipul de adaptare la aciunea toxic a concentraiilor mari de substane minerale n sol se disting trei categorii de plante: 1 euhalofite sau halofite tipice (ex. Salicornia herbacea iarba srat) Acestea pot acumula ioni de clor sau sodiu n proporie de pn la 10%. Astfel, presiunea osmotic din celule crete pn la 100 bari i pot absorbi apa din soluia concentrat a solului. Unele halofite acumuleaz Cl i Na n vacuol, evitndu-se efectul toxic asupra citoplasmei. 2 glicohalofite (ex. specii de Artemisia pelin) Aceste plante acumuleaz n vacuol substane organice osmotic active, netoxice celulelor, precum glicerol, manitol sau prolin, ceea ce favorizeaz procesul de endosmoz. 3 crinohalofite (ex. specii din genurile Statice - imortele i Tamarix ctina roie) Ele nu suport concentraiile mari de sruri i n consecin elimin o parte din acestea pe suprafaa frunzelor, prin glande secretoare saline. 3) Temperatura solului Temperatura sczut diminueaz absorbia apei din cauza creterii vscozitii citoplasmei, reducerii activitii enzimatice, precum i a reducerii intensitii procesului de respiraie. Temperatura minim pentru absorbia apei este n jur de 00C la majoritatea plantelor. Intervalul optim de temperatur este cuprins ntre 20-300C. La temperaturi ridicate, de peste 400C absorbia se reduce sau chiar nceteaz, din cauza alterrii proteinelor enzimelor implicate n procesul de respiraie. Efectul inhibitor al temperaturilor joase se poate demonstra dac n cazul unei plante la ghiveci, la suprafaa solului se pune un strat de ghea i dac atmosfera este favorabil transpiraiei. Planta moare dup cteva ore, deoarece se instaleaz seceta fiziologic. 4) Aeraia solului Pentru realizarea absorbiei este absolut necesar o concentraie corespunztoare de oxigen la nivelul rizosferei i respectiv sistemului radicular. Prezena unei concentraii necorespunztoare de O2, respectiv creterea concentraiei CO2 la peste 10% devine toxic pentru celule.

60 n cazul inundaiilor, spaiile libere din sol fiind ocupate cu ap, plantele sufer din cauza lipsei O2. Rezistena plantelor la astfel de condiii variaz cu specia, vrsta, lumina i mai ales cu temperatura. Durata maxim de rezisten este de 1 3 zile pentru cucurbitacee; 4 6 zile la fasole i cartof; 8 10 zile la gru, porumb. 5) Lumina Efectul luminii asupra absorbiei este indirect. prin intermediul fotosintezei se asigur substratul respirator se asigur ATP pentru transportul activ al ionilor se genereaz Po se absoarbe apa la lumin ostiolele se deschid; are loc transpiraia; crete fora de aspiraie a frunzelor; este stimulat absorbia apei. 4.5. Transportul apei (i substanelor) n plante 4.5.1. Cile de transport a apei i substanelor Transportul apei i substanelor dizolvate se realizeaz pe dou ci: I. transportul extra-fascicular Transportul extra - fascicular este realizat n celula nsi, pe distane mici, de la celul la celul, prin parenchimuri (ex. de la periorul absorbant al rdcinii, ctre xilem; n mezofilul frunzei, ntre nervuri) (vezi Cap. 4). II. transportul fascicular Transportul fascicular se realizeaz printr-un sistem specializat de transport, pe distane mari. Astfel, seva brut este transportat prin vasele lemnoase ale xilemului (de la rdcin ctre alte celule ale plantei), iar seva elaborat este transportat prin vasele liberiene ale floemului (vezi Cap. 7). Seva brut este o soluie diluat care conine circa 0,05%-0,4 % substane solubile. Aceste substane provin din sol (ex. ap i sruri minerale), din reciclarea unor compui care provin din seva elaborat (ex. glucide, vitamine) dar sunt i substane sintetizate n rdcin (ex. citochinine, acid abscisic). La via de vie, concentraia glucidelor poate ajunge la 1% sau la arar zaharat, la 24,8%. Viteza de transport este n jur de 1 m/h la tutun, pn la 150 m/h la liane. Deci, compoziia i concentraia elementelor minerale i a substanelor organice depind de factori precum: specia, asigurarea cu elemente minerale a rdcinilor, asimilarea de elemente minerale n rdcini i de reciclarea nutrienilor. De asemenea, prezint importan rata transpiraiei i momentul zilei, precum i modificrile de pe parcursul ontogenezei plantelor. Transportul substanelor prin xilem Particulariti structurale i funcionale ale xilemului Xilemul reprezint cea mai lung component a cilor de transport. Comparativ cu cile complexe existente la traversarea rdcinii, xilemul este o cale simpl, de minim rezisten, care conduce apa i substanele dizolvate de la rdcini, ctre toate prile aeriene ale plantei. Este alctuit din traheide, n cazul criptogamelor vasculare i gimnospermelor. Traheidele sunt celule moarte, individuale, puse cap la cap, fusiforme, lipsite de membrane i organite, cu pereii despritori perforai, iar pereii celulari secundari sunt lignificai. La angiosperme i la un grup mic de gimnosperme numit Gnetales, xilemul este format din trahei, parenchim lemnos i fibre lemnoase. Vasele lemnoase sunt alctuite din celule moarte puse cap la cap, la care pereii despritori s-au resorbit i care prezint ngrori inelare, spiralate, punctate sau reticulate. Acestea permit meninerea deschis a lumenului vaselor, chiar sub aciunea presiunii exercitate de celulele vecine.

61 La plantele lemnoase, xilemul mai n vrst nceteaz a mai participa la transportul sevei brute i confer rezisten mecanic trunchiului. Lemnul este xilem. Cnd numrm inelele anuale ale unui pom, unul dintre inelele numrate este parte a xilemului. Din punct de vedere funcional, Holbrook i al. (2001) au sugerat faptul c celulele xilemului pot reprezenta mai mult dect nite tuburi inerte. Ele par a fi un sistem sofisticat pentru reglarea i conducerea apei ctre zone specifice ale plantei, care au mai mult nevoie de ap. Aceasta implic direcionarea i redirecionarea moleculelor de ap prin deschideri (pori) n pereii celulari adiaceni, iar deplasarea apei poate implica hidrogelurile de pectine care servesc ca liant al pereilor celulari adiaceni. Una dintre proprietile hidrogelurilor de polizaharide este aceea de a mri sau micora porul, ca urmare a imbibiiei. Acest control al deplasrii apei poate permite plantei s rspund condiiilor de stres hidric. Transportul apei i substanelor prin xilem se realizeaz pe baza curentului de mas. 4.5.2. Forele care contribuie la circulaia apei (i substanelor) prin xilem Apa i substanele minerale absorbite de ctre plant prin intermediul rdcinii trebuie transportate n ntreaga plant, ctre frunze, flori, fructe. Seva brut se ridic mpotriva gravitaiei, fr ajutorul unei pompe mecanice, pentru a atinge nlimi de peste 100 m n cazul arborilor nali. Cum se ntmpl aceasta ? TACT (Transpiraie - Adeziune Coeziune Tensiune) este un mecanism care mpinge seva Fora brut n xilem, ascendent. conductoare este gradientul potenialului apei, deci, sensul de transport este de la zona cu potenial al apei mare, ctre zona cu potenial al apei mic (fig. 4.14.). Acest mecanism const n faptul c la nivelul frunzelor are loc procesul de transpiraie. Apa sub form de vapori prsete spaiile cu aer dintre celulele mezofilului, mai ales pe cale stomatic. Apa pierdut este nlocuit prin vaporizarea stratului subire de ap din jurul celulelor mezofilului. Ca urmare a forei de coeziune dintre moleculele apei, pe msur ce apa se pierde, ea este nlocuit. Apa are puternice proprieti de Fig. 4. 14. Transportul apei n plante coeziune i pe msura pierderii este nlocuit. Se creeaz deci o tensiune (presiune negativ) a apei n xilem, ctre direcia de eliminare. Coeziunea este suficient pentru a transmite aceast for, pe toate cile, ctre rdcinii. Adeziunea apei de pereii celulari ajut de asemenea la a rezista aciunii forei de gravitaie. Deci, tensiunea creat prin procesul de transpiraie (apariia forei de aspiraie a frunzelor) cuplat cu forele de coeziune i adeziune susin coloana de ap, mpotriva forei de gravitaie. Prin urmare, transportul prin xilem este dirijat de ctre gradientul presiunii hidrostatice (presiunii radiculare) i gradientul potenialului apei. Curentul soluiei n xilem, de la rdcini, ctre tulpini este astfel unidirecional. n literatura de specialitate sunt descrise pe larg principale fore implicate n realizarea transportului prin xilem: presiunea radicular, fora de aspiraie a frunzelor i forele de coeziune, adeziune i tensiune superficial.

62 1. Presiunea radicular Aceast for se manifest primvara, nainte de formarea frunzelor, precum i n cazul n care umiditatea solului este mrit, iar transpiraia este redus. Valorile acestei presiuni sunt de regul mai mici de 0,1 MPa, dar pot ajunge pn la 0,5 MPa. Cum se explic generarea acestei fore ? Rdcina absoarbe ionii minerali din soluia diluat a solului i i transport n xilem. Ca urmare a creterii concentraiei substanelor dizolvate, crete presiunea osmotic i respectiv scade potenialul apei n xilem. Datorit scderii potenialului apei este indus absorbia apei, ceea ce determin crearea unei presiuni hidrostatice pozitive n xilem. Deci, esuturile rdcinii funcioneaz ca o celul, ca o membran osmotic, conducnd la creterea presiunii hidrostatice n xilem, urmare a acumulrii substanelor. Avnd n vedere c pentru transportul ionilor transmembranal, n general se consum energie metabolic, spunem c aceast for este activ i pozitiv. Noaptea transpiraia este aproape nul. Totui, celulele rdcinii continu s transporte activ substane minerale n cilindrul central. Acest transport activ determin scderea potenialul apei n cilindrul central, iar apa curge pasiv n rdcin mpins fiind mpotriva forei de gravitaie. Apa ajuns n frunze este adesea forat s ias afar, cauznd gutaia. Totui, n multe cazuri, presiunea radicular nu reprezint mecanismul primar al transportului prin xilem. Pomii nali aproape c nu genereaz presiune radicular. 2. Fora de aspiraie a frunzelor La nivelul frunzelor, apa i srurile minerale transportate prin vasele lemnoase sunt distribuite prin intermediul ramificaiilor acestora divizate foarte fin n nervuri.. Din nervuri, apa ajunge n celulele frunzei i de-a lungul pereilor celulari ai acestora. La suprafaa pereilor celulari se dezvolt o presiune negativ, care provoac urcarea apei prin xilem. Explicaia generrii acestei fore! Fig.4.15. Generarea forei de Apa ader pe microfibrilele aspiraie celulozice i alte componente a frunzelor hidrofile ale peretelui celular. Celulele mezofilului frunzei aflndu-se n contact direct cu atmosfera prin intermediul unui sistem bogat de spaii intercelulare, la nceput apa se vaporizeaz dintr-un strat subire de-a lungul acestor spaii. Pe msur ce apa se pierde, suprafaa ap-aer se curbeaz mult. Rezult meniscuri microscopice i tensiunea superficial generat induce o presiune negativ n ap. Aceast presiune negativ crete pe msura pierderii apei (fig. 4.15.). Prin urmare, fora de aspiraie a frunzelor este generat la interfaa aer - ap din frunz. Este o for negativ i pasiv, fiind indus de procesul de transpiraie. Aciunea ei se transmite prin xilem ctre rdcini, iar potenialul apei rdcinii devine tot mai negativ. Apa din sol este atras, ca Fig. 4.16. urmare a gradientului de difuziune. Sequoia n privina valorilor acestei fore, se apreciaz c pentru ascensiunea sempervirens apei n cei mai nali arbori (circa 100 m nlime; ) este necesar o diferen de presiune ntre baza i vrful ramurilor de circa 3 MPa. Cel mai nalt arbore cunoscut pe Terra este Sequoia sempervirens (112,34 m), n nordul Californiei (fig. 4.16.).

63 3. Forele de adeziune, coeziune i tensiune superficial Meninerea nentrerupt a coloanei sevei brute se datoreaz coeziunii dintre moleculele apei (atraciei mutuale dintre acestea), ct i adeziunii (atraciei apei de ctre peretele celular). De altfel, fora de coeziune, fora de adeziune i tensiunea superficial (care se realizeaz la interfaa ap-aer i care este foarte important n generarea forei care mpinge apa ctre vrful pomilor) dau natere forei de capilaritate. Teoria coeziunii-tensiunii (C-T) a fost propus de Dixon i Joly (1894) i conform acesteia apa urc n plante ca urmare a unei fore conductoare generat de tensiunea superficial la nivelul suprafeelor de evaporare ale frunzei (Tyree, 1997). Tensiunea este transmis printr-o coloan continu de ap, de la frunze, ctre vrfurile rdcinii i prin toate prile apoplastului, n fiecare organ al plantei. n capilarele vaselor se pot forma i bule de aer, iar numrul acestora crete, pe msur ce crete presiunea negativ (ex. datorit ngheului iarna, stresului hidric din timpul verii etc),. Prin urmare, are loc generarea embolismului, respectiv ocluzia vaselor (fenomen demonstrat prima oar de Milburn i Johnson, 1966) i prevenirea transportului apei. Cavitaia xilemului diminueaz capacitatea plantelor de a transporta seva brut din sol, ctre frunze. Prin cercetrile efectuate, s-a demonstrat c la interfaa dintre lichidul i gazul dintr-un capilar deschis la un capt se genereaz un curent de mas Marangoni, mpotriva forei de gravitaie. Denumirea a fost dat n onoarea fizicianului italian Marangoni, care l-a explicat n secolul XIX (Scriven i Sternling, 1960). Fora care ia natere la nivelul meniscului cu concavitatea mai mare (inferior) depete pe cea generat n meniscul cu concavitatea mai mic (superior). Se genereaz astfel o for, care determin ascensiunea sevei brute prin vasul lemnos. Plantele sunt capabile s refac conductivitatea hidraulic prin: producerea a noi vase de xilem, la plantele care au capacitatea de cretere secundar i care pot produce nou xilem pentru nlocuire (valabil pentru pomi i arbuti); reumplerea vaselor cavitate, prin creterea presiunii pe gaz, aa nct gazul s se dizolve n faza lichid nconjurtoare. n privina mecanismului reumplerii sunt descrise trei posibiliti: 1 presiunea radicular acioneaz cnd solul este saturat cu ap i rata transpiraiei este redus; 2 presiunea tulpinii: la unele plante este transportat apa n tulpin, cnd temperatura scade aproape de punctul de nghe sau sub punctul de nghe; 3 presurizarea local. Reumplerea local a unui singur vas, ori a ctorva celule vecine reprezint de fapt cel mai interesant mecanism din punct de vedere ecologic. Plantele pot astfel s-i refac conductivitatea pe parcursul perioadei de transpiraie activ i s se adapteze modificrilor condiiilor n timpul zilei (Clearwater i Goldstein, 2005; Shen i al., 2008). Pomii constituie un sistem potrivit pentru studiul transportului apei pe distane mari. Exist un echilibru dinamic ntre apariia embolismului i revenirea din cursul zilei. Eliberarea zilnic a apei din xilem pe calea cavitaiei poate servi la stabilizarea balanei hidrice n frunz, prin minimizarea dezechilibrului temporal, dintre aprovizionarea cu ap i cerinele pentru aceasta (Meinzer, F.C. i al. 2001). Viteza de transport a sevei brute prin xilem i destinaia substanelor Viteza de transport a sevei brute variaz cu specia (1 m/h la Nicotiana; 150 m/h la lianele din pdurile ecuatoriale), precum i cu diametrul vaselor lemnoase (la pomii fructiferi: 1-6 m/h la un diametru de 25 -75 m; 16 -45 m/h la un diametru de 100-200 m). Apa este transportat n cea mai mare parte prin apoplast, spre stomate, urmnd a fi eliminat prin procesul de transpiraie. O parte din ap este reinut de ctre celulele frunzelor pentru nevoile proprii, iar o alt parte se transport ctre vasele liberiene.

64 Substanele existente n seva brut: pot fi absorbite de celulele vii din jur; pot fi depozitate n celulele parenchimului lemnos; pot fi depozitate n celulele frunzelor; pot fi depozitate n organe de depozitare (fructe, semine etc.); pot fi translocate prin celulele mezofilului foliar spre floem, intrnd n alctuirea sevei elaborate etc. 4.6. Eliminarea apei din plante Din cantitatea total de ap i substane minerale absorbit i transportat n plant, se utilizeaz nu numai substane minerale, ci i o mic parte de ap (circa 2%). Cea mai mare parte de ap ns este eliminat n mediu (circa 98%). Eliminarea apei se realizeaz pe dou ci: I. transpiraie II. gutaie 4.6.1. Transpiraia Transpiraia reprezint procesul de eliminare a apei din plante sub form de vapori, la nivelul ostiolelor stomatelor, porilor cuticulei i lenticelelor. Procesul se desfoar n cursul zilei, precum i n cursul nopii, ponderea celui din urm fiind de doar 5% din total. Este un proces specific tuturor plantelor terestre i se desfoar cu intensitate diferit, prin toate organele plantelor, exceptnd rdcinile. Cantitatea de ap pierdut variaz cu specia. Spre exemplu, la o plant de porumb care absoarbe circa 250 litri de ap pe parcursul unui sezon de vegetaie, se elimin circa 98%. Organul specializat pentru transpiraie este frunza, deoarece: are o suprafa mare de contact cu atmosfera; are o grosime foarte mic, aa nct apa de la vasele lemnoase ajunge uor pe cele dou suprafee ale frunzei; este alctuit din dou esuturi, palisadic i lacunos, n ultimul avnd loc vaporizarea apei; este prevzut cu celule specializate (stomate): cele mai eficiente structuri pentru eliminarea apei (fig.4.17.). Importana transpiraiei Transpiraia este considerat un ru necesar plantelor. Dezavantaje: se pierd cantiti foarte mari de ap; din total ap absorbit de ctre plant se pierde circa 98%; transpiraia intens cauzeaz ofilirea temporar a plantelor n jurul prnzului (T/A supraunitar), iar persistena n timp determin ofilirea permanent; Avantaje: regleaz viteza de absorbie i continuitatea circulaiei apei i srurilor minerale n plant; asigur un control al gradului de saturare al celulelor cu ap;

Fig.4.17. Frunza - organ specializat pentru transpiraie

65 asigur reglarea temperaturii plantei (rcirea); prin transpiraie se deshidrateaz anumite esuturi de rezerv, iar procesul de maturare a fructelor este favorizat; are efecte favorabile asupra ratei creterii i dezvoltrii plantelor, n condiiile n care n sol exist suficient ap, disponibil din punct de vedere fiziologic etc. 4.6.1.1. Tipurile de transpiraie Se disting trei tipuri de transpiraie: 1. Transpiraie stomatic Transpiraia stomatic ocup ponderea (circa 90-97% din transpiraia total). Eliminarea apei are loc prin porul complexului stomatic (ostiol) situat la nivelul epidermei frunzei sau a altui organ verde al plantei (ex. tulpin). Stomatele sunt formaiuni specializate, localizate pe faa superioar a frunzelor (frunze epistomatice), pe faa inferioar (frunze hipostomatice la circa 71% dintre plantele lemnoase) sau pe ambele fee (amfistomatice majoritatea plantelor de cultur). 2. Transpiraie cuticular Eliminarea vaporilor de ap are loc de pe suprafeele acoperite de cutin, la nivelul tulpinii, fructelor, petalelor florilor, frunzelor (exceptnd ns ostiola). Cuticula reprezint un nveli abiotic generat de ctre celulele epidermice, alctuit din polizaharide, polimeri ai acizilor grai (cutin) i ceruri. Ea regleaz pierderile de ap pe cale non stomatic. Totodat, acioneaz ca substrat pentru adeziunea microorganismelor i ca prim barier protectoare mpotriva radiaiilor ultraviolete, i a atacurilor bacteriilor i ciupercilor (Mariani i Wolters-Arts, 2000; Yephremov i Schreiber, 2005). Transpiraia cuticular este mediat de porii cuticulei, de ectodesme i reprezint aproximativ 3-9% din transpiraia total. Componentele cuticulei fiind de natur lipidic au o permeabilitate sczut. Spre exemplu: la cactacee, transpiraia cuticular reprezint 1-2% din transpiraia total, la plantele mezofile 10-25%, iar la plantele hidrofile poate ajunge la 60-70%. n cazul plantelor cu cuticula foarte groas (ex. Hedera helix) nu are loc transpiraia cuticular. Apa eliminat pe aceast cale provine din apoplast sau din simplast. n cazul al doilea, apa este transportat prin ectodesme. Dac porii cuticulei corespund cu ectodesmele se formeaz adevrate canale. Raportul dintre cele dou tipuri prezentate este n general n favoarea celei stomatice. Rolul fiziologic al acestor procese a constituit subiect de cercetare pentru numeroi specialiti (Tripton i White, 1995; Kestiens, 1996; Schreiber i Riederer, 1996 etc). 3. Transpiraia lenticelar Transpiraia lenticelar se realizeaz n cazul tulpinilor, ramurilor, fructelor i frunzelor de conifere. Lenticelele sunt zone permanent deschise, respectiv mase de esut sferic biconvex la nivel de periderm (zone pline cu material celular mort). Spre exemplu: la o ramur de 1 an de Gleditsia triacanthos cu lungimea de 20 cm sunt 72-210 lenticele. Peridermul la tuberculul de Solanum tuberosum are o lenticel pe cm2 . Peridermul const din 3-15 straturi de celule suberificate. 4.6.1.2. Particularitile structurale i funcionale ale complexului stomatic Complexul stomatic este alctuit din urmtoarele componente: dou celule specializate denumite celule de gard; un orificiu numit ostiol (mrginit de celulele de gard); celule anexe; camera substomatic.

66 Celulele de gard sunt de diferite forme, dar se disting dou tipuri principale: a) tipul gramineu (sub form de haltere): specific pentru plantele ierboase i alte cteva monocotiledonate; b) tipul amarilideu (sub form reniform): la toate dicotiledonatele, multe monocotiledonate i gimnosperme (fig.4.18.). Spre deosebire de celulele epidermice obinuite, celulele de gard prezint anumite particulariti: sunt mai mici ca suprafa, comparativ cu celulele epidermice; conin cloroplaste i desfoar procesul de fotosintez, fa de celulele epidermice, care nu au cloroplaste; pereii celulari sunt inegal ngroai, comparativ cu celulele epidermice, care au perei celulari egali ca grosime; cel din jurul ostiolei este mai gros i neelastic, n timp ce pereii celulari externi sunt mai subiri i elastici; acumuleaz amidon pe parcursul nopii i n cursul zilei se realizeaz conversia la glucide, n timp ce pentru celulele mezofilului, la dicotiledonate acumularea amidonului are loc ziua, iar noaptea scade cantitatea acestuia; microfibrilele de celuloz din pereii celulari au o orientare radial de la porul stomatic; aceasta determin curbarea celulelor ctre exterior, n timpul deschiderii ostiolelor; la celulele obinuite, microfibrilele sunt orientate transversal pe axa lung a celulei i ca urmare, celulele se extind n direcia axei lor lungi; Fig. 4.18. Principalele tipuri de complexe la unele plante, celulele de gard sunt stomatice nconjurate de celule anexe; acestea sunt celule epidermice uor modificate fa de restul celulelor epidermice i acioneaz ca un tampon elastic, ntre celulele de gard i cele epidermice, protejndu-le de presiune i tensiune. Dup Davies i al. (1973), citat de Kozlowski i Pallardy (1997), mrimea stomatelor (lungimea celulelor de gard) variaz la 27 specii de pomi de la 17 la 65 m i frecvena stomatelor variaz de la circa 100, pn la 600 pe mm2 de suprafa foliar. Cile strbtute de vaporii de ap, din frunz ctre atmosfer i factorii care controleaz deplasarea vaporilor Apa provenit din vasele lemnoase este transportat prin celulele parenchimului, pe calea apoplastului i la nivelul camerei substomatice se realizeaz vaporizarea. Eliminarea vaporilor de ap existeni la suprafaa celulelor i localizai n spaiul intercelular de la nivelul acestui mediu saturat n vapori necesit o deplasare spre mediul ambiant (cu o umiditate relativ mai redus), n principal pe baza difuziunii, trecnd prin ostiolele stomatelor. Aa cum se observ n fig. 4.19., n mod arbitrar sunt strbtute trei regiuni: spaiul plin cu aer din interiorul frunzei; porul stomatic (ostiola); stratul de aer de la suprafaa frunzei. Deoarece la baza transportului st n principal difuziunea, controlul este realizat n principiu de gradientul de concentraie al vaporilor de ap, respectiv de diferena de concentraie a vaporilor din spaiile intercelulare ale frunzei i concentraia vaporilor de ap din aerul exterior (Cwv (frunz) Cwv (aer) ).

67 Un al doilea factor este rezistena difuzional a cii de transpiraie i n acest context se poate vorbi despre dou componente. Prima i totodat cea mai important este rezistena asociat cu difuziunea prin porul stomatic (rs), iar cea de-a doua este rezistena dat de stratul de aer de la suprafaa frunzei (rb). n consecin, rata transpiraiei poate fi redat prin urmtoarea ecuaie: Cwv (frunz) Cwv (aer) Transpiraia (mol m-2s-1) = -----------------------------rs + rb
Fig. 4. 19. Cile strbtute de vaporii de ap

Controlul deschiderii i nchiderii ostiolei stomatelor a) Aspecte generale Dei cuticula care acoper suprafaa organelor plantelor constituie o barier pentru pierderea apei, existena unei bariere complete pentru pierderea apei ar nsemna blocarea simultan a schimbului gazos de O2 i CO2, cu importan capital pentru desfurarea proceselor de respiraie i fotosintez. n consecin, plantele nu pot preveni difuziunea spre exterior a vaporilor de ap, fr ca n acelai timp s mpiedice ptrunderea CO2 n frunz. Rezolvarea acestei probleme implic reglarea n timp a deschiderii ostiolei. Noaptea, cnd nu are loc fotosinteza i nu se cere CO2 n frunz, ostiola este meninut mic, prevenind pierderea de ap. Primvara, n diminei cu soare, cnd necesarul de ap este mare i cnd activitatea fotosintetic este intens, cererea pentru CO2 este mare. Ca urmare, ostiola va fi deschis larg, scznd rezistena stomatic pentru difuzia CO2. n cursul verii, dimineaa, cnd cantitatea de ap din sol este redus, stomatele vor fi meninute chiar nchise sau foarte puin deschise. Astfel, planta evit deshidratarea. Acest control biologic se datoreaz celulelor de gard, care funcioneaz ca nite valve hidraulice multisenzor. Factorii de mediu, precum lumina (prin intensitatea i compoziia sa spectral), temperatura, umiditatea relativ, concentraia intracelular de CO2, statusul plantei n privina aprovizionrii cu ap i hormonii vegetali (n special acidul abscisic) sunt percepui de celulele de gard, iar semnalele induse determin rspunsuri specifice (Assmann i Shimazaki, 1999). Pe baza timpului de deschidere a ostiolei, micarea stomatelor este de dou tipuri: micarea foto - activ; micarea scoto - activ. Primul tip de micare este controlat n mod direct sau indirect de ctre lumin. Ostiolele se deschid ziua, la aproape toate plantele. Al doilea tip de micare nu este controlat de lumin. Ostiolele se deschid noaptea, la plantele cu tipul fotosintetic CAM. n general, micarea de deschidere i nchidere a ostiolei este dependent de gradul de aprovizionare cu ap a celulelor de gard (n relaie cu funcionarea pompelor de ioni i ngroarea neuniform a pereilor celulari). Dac celulele de gard sunt turgescente, ostiolele se deschid i invers, dac celulele de gard sunt plasmolizate, ostiolele se nchid. De menionat faptul c, creterea volumului celulelor de gard n stare de turgescen se face n detrimentul celulelor anex. Prin urmare, volumul complexului stomatic n ntregul su nu se modific niciodat. Sunt ns i situaii extreme, cnd spre exemplu, ostiolele stomatelor se nchid hidropasiv, n condiiile unei umiditi mrite la nivelul solului. Aceasta determin creterea strii de turgescen a celulelor, inclusiv a celor anexe, care preseaz asupra celulelor de gard i ostiola se nchide. Lipsa

68 apei din sol are un efect stresant asupra rdcinilor i se determin biosinteza acidului abscisic. Acesta este transportat n frunze. Se produce o reacie feedback, care inhib transportul ionilor n celulele de gard sau determin creterea permeabilitii membranelor i ieirea ionilor, aa nct ostiolele se nchid hidroactiv. n primele decade ale secolului trecut, conceptul clasic al fiziologiei stomatelor era ipoteza amidon-glucid simplu (propus de Lloyd n 1908). Conform acestei ipoteze, pe parcursul nopii crete cantitatea de amidon n celulele de gard, ceea ce determin nchiderea stomatelor. Ziua are loc conversia amidonului la glucide simple i se determin deschiderea stomatelor, datorit creterii presiunii osmotice la nivelul celulelor de gard i a endosmozei. Odat cu descoperirea fluxului K+ (prima raportare n 1943 de ctre Imamura n Japonia) s-a precizat rolul central al ionilor n micarea celulelor de gard. De asemenea, astzi, aceast teorie modern propus de Levitt (1974) implic pe lng transportul K+ i reglarea hormonal. De altfel, deoarece celulelor de gard mature le lipsesc plasmodesmele, ptrunderea i efluxul substanelor trebuie s aib loc pe calea canalelor i transportorilor de ioni din plasmalem. Concentraia K+ crete de cteva ori n celulele de gard, cnd ostiola este deschis (de la circa 100 mM n stare nchis, pn la 400-800 mM n stare deschis). De asemenea, n timpul deschiderii i Cl- este preluat i respectiv eliberat n timpul nchiderii. Dup Ward i al.(1995), vacuola reprezint peste 90% din volumul celulelor de gard ale stomatelor. n timpul nchiderii ostiolelor, peste 90% din anionii i potasiul din vacuol sunt transportai n celulele anex. Pentru a se realiza transportul ionilor sunt implicate mecanisme active. Observaia c protonii sunt eliminai n apoplast, n perioada deschiderii ostiolei, conduce la ipoteza c gradientul protonilor n celulele de gard genereaz o for motrice, care dirijeaz fora pentru absorbia ionilor. n urma cercetrilor efectuate de Esser i al.(1997) s-a demonstrat c acidul abscisic (ABA) a indus nchiderea ostiolelor, sugerndu-se c ABA a activat protein kinazele i/sau a inhibat protein fosfatazele, Astfel, se pot activa canalele de anioni din celulele de gard ale complexului stomatic i se poate media nchiderea ostiolelor stomatelor la Vicia faba. b) Deschiderea i nchiderea foto-activ a stomatelor La nceputul zilei, lumina stimuleaz deschiderea ostiolei la cele mai multe specii de plante, prin determinarea creterii concentraiei soluiei la nivelul celulelor de gard i scderea potenialului apei, ceea ce induce endosmoza (Schroeder i al. 2001). Creterea presiunii de turgescen a celulelor de gard determin mrirea volumului acestora i deschiderea ostiolei, n relaie i cu caracteristicile pereilor celulari. Att lumina roie, ct i lumina albastr stimuleaz deschiderea stomatelor. Rspunsul la lumin implic dou componente: o component implic spectrul de absorbie al clorofilei, urmare a prezenei cloroplastelor n celulele de gard; a doua component este activat n mod specific de lumina albastr, recepionat de fotoreceptori specifici (flavoproteine) situai n plasmalem. De altfel, rspunsurile de deschidere sunt obinute prin coordonarea semnalului luminii, conversia energiei luminoase, transportul membranal al ionilor i activitatea metabolic a celulelor de gard. Rspunsul stomatelor la lumina albastr pare a fi puternic afectat de lumina roie. Exist o interaciune ntre semnalul luminii albastre i cloroplastele celulelor de gard (Shimazaki i al. 2007). Lumina activeaz H+ ATP-aza din plasmalema celulelor de gard. Are loc transportul protonilor n apoplast i se determin hiperpolarizarea membranei plasmatice. Potenialul electric transmembranal crete la -100 mV. n consecin, se deschid canalele de K+ acionate voltaic i K+ intr n celulele de gard prin canalele in (ex. KAT1, KAR2, AKT1) (Fan i al., 2004). Anionii ptrund pe calea transportorilor de tip simport H+ / Cl- i H+ / NO3- . Acumularea ionilor, a acidului malic i a glucidelor (zaharozei) scade potenialul apei la nivelul celulelor de gard. n consecin,

69 se determin endosmoza i creterea presiunii de turgescen. Nitratul este unul dintre ionii care contrabalanseaz intrarea K+, pe baza simportului H+ cuplat cu NO3- (Guo i al. 2003). La lsarea serii, gradul de deschidere al ostiolei scade, iar noaptea stomatele sunt aproape nchise, reducndu-se transpiraia i schimbul de gaze. nchiderea stomatelor ncepe cu depolarizarea membranelor (-40 mV). Depolarizarea la ntuneric este determinat de inhibarea activitii pompei de protoni din plasmalem i activarea canalelor care mediaz efluxul pasiv al anionilor Cl-, malat2- i NO3-. Depolarizarea membranei creeaz fora conductoare pentru efluxul K+ pe baza canalelor out. De asemenea, se remarc faptul c nainte sau asociat nchiderii stomatelor crete concentraia calciului liber n citosol (Ca2+cyt) pe calea canalelor pentru Ca2+. Acestea sunt situate la nivel de plasmalem, dar i la nivelul sistemului de endomembrane. Pierderea de K+ (canalul principal out se sugereaz a fi GORK) i a anionilor determin scderea concentraiei sucului celular al celulelor de gard, efluxul apei i pierderea turgescenei celulelor de gard (fig.4.20.). Fig. 4.20. Deschiderea i nchiderea stomatelor Cercetrile efectuate de Furuichi i al. (2008) au evideniat faptul c activarea canalelor permeabile mecano- senzitive pentru Ca2+ (de ctre curbura convex) atenueaz deschiderea. Nu se promoveaz ns nchiderea lor, ceea ce constituie un nou mecanism de meninere a deschiderii ostiolei, prin senzor mecanic. Modelele canalelor de ioni i a transportorilor implicai n deschiderea i nchiderea stomatelor sunt redate n figura 4.21. i au fost de asemenea descrise recent de ctre Pandey i al. (2007). Reglarea gradului de deschidere a stomatelor n cursul zilei se realizeaz sub aciunea a diveri factori. n zilele toride de var, la prnz, din cauza transpiraiei scade gradul de turgescen al celulelor de gard i stomatele se nchid. n cazul stresului hidric la nivelul solului are loc biosinteza acidului abscisic (ABA) i transportul ctre frunze (n 1-2 ore). Creterea cantitii de ABA n celulele de gard, declaneaz efluxul ionilor, pierderea apei i a presiunii de turgescen, inducndu-se nchiderea hidroactiv a stomatelor. Aciunea sa const n descompunerea inozitol-fosfo-lipidelor din membrane. InozitolFig. 4.21. Funcionarea canalelor de ioni i cile semnalizrii fosfatul este un mesager chimic care inhib (dup Schroeder i Allen, 2001) pompele de protoni, activeaz pompele de calciu, scade potenialul bioelectric i se deschid canale de K out. De asemenea, ABA previne deschiderea stomatelor indus de lumin. ABA i Ca2+ au un efect sinergic n procesul de inhibare a deschiderii stomatelor. Creterea Ca2+ citosolic stimulat de ABA se datoreaz probabil att absorbiei de calciu din spaiul extracelular (prin canale permeabile neselective pentru Ca2+), ct i eliberrii din locurile de stocare intracelular (ex. vacuol). Umiditatea mrit n sol determin creterea gradului de turgescen a celulelor de gard, inclusiv a celulelor anex care preseaz asupra celulelor de gard, iar stomatele se nchid hidropasiv.

70 c) Deschiderea i nchiderea scoto-activ a stomatelor Pentru maximizarea eficienei folosirii apei, la suculente (i nu numai) stomatele se deschid noaptea i se menin nchise ziua. Aceasta reprezint o adaptare la condiiile de stres hidric n care triesc. Noaptea, amidonul este transformat enzimatic la acid fosfoenolpiruvic (PEP). PEP fixeaz CO2 i se formeaz acidul malic, care se depoziteaz n vacuol i se inhib propria sa sintez. Astfel, la nivelul citoplasmei scade concentraia CO2 i n consecin se favorizeaz deschiderea stomatelor. n celulele de gard, acidul malic se descompune n anionul malat i H+. Are loc schimbul protonilor, cu K+ din celule anexe, iar potenialul osmotic al celulelor de gard crete. Se determin endosmoza, celulele de gard devin turgescente i stomatele se deschid. Ziua, acidul malic depozitat n vacuole este decarboxilat, formndu-se acid piruvic i CO2. Dioxidul de carbon este redus fotosintetic prin intermediul cii C3 la nivel de cloroplast. Se formeaz astfel hidrai de carbon. n cursul zilei poate interveni o deficien de oxigen, iar n astfel de condiii, glicoliza nu poate fi urmat de ciclul Krebs. Aceasta poate determina biodegradarea anaerob a glucidelor. n consecin, se acumuleaz PEP i CO2, iar creterea concentraiei interne de CO2 menine stomatele nchise. 4.6.1.3. Influena factorilor asupra transpiraiei Procesul de transpiraie este influenat de numeroi factori externi i interni. Principalii factori externi care influeneaz transpiraia sunt: lumina, umiditatea atmosferic, temperatura aerului, curenii de aer, disponibilitatea apei n sol, aprovizionarea cu elemente minerale etc. 1. Lumina influeneaz transpiraia att n mod direct, ct i indirect. Efectul direct se datoreaz aciunii sale calorice. Frunzele au capacitatea de a absorbi energia luminoas i o mare parte din energia absorbit este transformat n energie caloric, ceea ce ridic temperatura frunzelor i intensific transpiraia. Efectul indirect este n legtur cu micarea stomatelor, respectiv la lumin ostiolele se deschid, ceea ce intensific transpiraia. 2. Umiditatea i temperatura aerului Umiditatea aerului atmosferic influeneaz procesul de transpiraie prin aceea c, pe msur ce scade umiditatea relativ a aerului, crete deficitul presiunii vaporilor de ap i respectiv se intensific transpiraia. Temperatura aerului acioneaz n interrelaie cu umiditatea relativ. La temperaturi cuprinse ntre 30-40oC, capacitatea aerului pentru vapori de ap crete. Aceasta determin scderea umiditii relative a aerului i drept urmare, transpiraia se intensific. La o temperatur ridicat, diferena dintre presiunea vaporilor de ap din mediul nconjurtor i cea din camera substomatic crete, iar transpiraia se intensific. n cazul temperaturilor excesiv de mari, n jurul prnzului, n zile de var toride, stomatele se nchid. Este o msur de protecie fa de pierderile excesive de ap. 3. Curenii de aer, respectiv vnturile cu viteze mici ndeprteaz vaporii de ap situai la suprafaa frunzei, iar transpiraia se va intensifica. Creterea intensitii transpiraiei provocat de vnt nu este ns proporional cu viteza vntului. Vnturile puternice determin nchiderea stomatelor, ca urmare a ocului mecanic indus.

71 4. Umiditatea solului Seceta solului determin sinteza ABA, transportul acestuia ctre frunze i inducerea nchiderii stomatelor, ca msur de prezervare a apei n plant. Apa disponibil din sol i accesibil plantelor (Savage i al., 1996), precum i activitatea absorbant a rdcinilor influeneaz procesul de transpiraie. Dac absorbia nu poate nlocui apa pierdut prin transpiraie, apare deficitul hidric. Un deficit hidric de durat provoac ofilirea plantelor. 5. Concentraia CO2 Stomatele se deschid la o concentraie mic de CO2 i se nchid la concentraii mari de CO2 (peste 0,05%). n privina concentraiei CO2 din atmosfer, msurtorile porometrice au evideniat faptul c, conductana stomatic la plantele crescute n condiii cu concentraii mari de dioxid de carbon a fost mai mic, dect la frunzele martor i raportat la plantele crescute la temperaturi ridicate. Tradescantia a fost capabil s regleze conductana stomatic, ca rspuns la concentraia mrit de CO2, fr a se modifica numrul relativ de stomate prezente n frunz (Boetsch i al., 1996). De asemenea, Polley i al. (1997) au reliefat faptul c o cretere a concentraiei CO2 n atmosfer a redus adesea transpiraia potenial/ suprafaa frunzei, prin reducerea conductanei stomatice. 6. Efectele nutriiei minerale asupra conductanei hidraulice a rdcinii i a expresiei aquaporinelor Transpiraia, conductana stomatic (Gs) i conductivitatea hidraulic a rdcinii (Lpr) sunt influenate n mare msur de aprovizionarea plantei cu anumite elemente minerale. Cnd n mediul de cretere sunt deficiene din acest punct de vedere, trei elemente nutritive (N,P,S) care sunt transportate i metabolizate pe diferite ci, produc efecte similare asupra Gs i Lpr (Clarkson i al., 2000). Se pune ns ntrebarea, dac nchiderea ostiolelor stomatelor i diminuarea Lpr sunt obiectivele centrale ale rspunsului la stres de nutrieni i dac sunt elicitate printr-o secven comun de evenimente. Ideea unui sistem centralizat de rspuns la stres a fost avansat de Chapin (1990). Aa cum se remarc n figura 4.22., secvena evenimentelor a fost n mod arbitrar divizat n dou ramificaii: prima reprezint rspunsurile specifice la nutrieni a sistemelor de transport, iar a doua, mai general, se axeaz pe evenimentele hidraulice i morfologice. Au existat numeroase lucrri n care s-a precizat c deficitul n anumite elemente nutritive are ca rezultat nchiderea parial i complet a stomatelor, chiar la plantele bine aprovizionate cu ap. Cercetrile efectuate n domeniu au oferit relaii clare referitor la interrelaia dintre nutriia cu N i P, conductana stomatic i extensia frunzei (ex. la bumbac). La plantele cu deficit de P s-a stabilit c rdcina a fost situsul diminurii conductanei hidraulice, fapt detectat nainte de a msura efectele asupra expansiunii frunzelor, dar c efectele asupra Lpr s-au diminuat, dac temperatura rdcinii a crescut la valori mai mari de 30oC (Radin, 1990). Deficiena n N la ovz i tomate a sczut Lpr n avans fa de efectele asupra Gs i asupra fotosintezei. S-a observat de asemenea c la plantele Fig. 4.22. Model ipotetic al aprovizionate n mod limitativ cu N i P, o mare evenimentelor proporie a asimilatelor cu carbon a fost alocat induse de stres pentru creterea rdcinii, dei nu toate speciile rspund la fel.

72 Referitor la relaia dintre conductivitatea hidraulic a rdcinii i transpiraie, n urma cercetrilor efectuate s-a evideniat c valoarea aparent a Lpr crete odat cu intensificarea ratei transpiraiei. Acest fenomen a fost interpretat n diferite moduri, mai ales dup descoperirea aquaporinelor. De asemenea, n cazul deficienelor n N s-au constatat modificri ale fluxului a doi regulatori de cretere, de la rdcin ctre frunze. Astfel, a crescut cantitatea de acid abscisic la unele specii, n timp ce concentraia citochininelor a sczut. Totui, n prezent nu sunt baze solide care s argumenteze c acest flux modificat se poate raporta la descreterea Lpr. Se cunoate faptul c, acidul abscisic poate crete Lpr, dac se aplic exogen rdcinii (Hose i Hartung, 1999). Principalii factori interni care influeneaz transpiraia sunt reprezentai de specia de plant, suprafaa foliar, structura frunzei, numrul de stomate, gradul de deschidere a ostiolelor stomatelor etc. 1. Suprafaa foliar Cu ct suprafaa foliar este mai mare, cu att cantitatea de ap pierdut prin transpiraie este mai mare. Nu exist ns o relaie de strict proporionalitate. La unitatea de suprafa, plantele mici transpir mai mult, comparativ cu plantele de talie mare. Micorarea suprafeei foliare prin nlturarea unor frunze conduce la intensificarea transpiraiei plantelor la unitatea de suprafa. n livezi spre exemplu, tierile n verde la pomii fructiferi au ca rezultat intensificarea transpiraiei la frunzele rmase, cu toate c pierderea total de ap este mai mare la pomii care n-au fost supui acestui tratament. 2. Structura frunzei Plantele xerofile prezint modificri structurale ale frunzelor, precum o cuticul mai groas, parenchim palisadic bine dezvoltat, stomate adncite n epiderm. n cazul unei bune aprovizionri cu ap, plantele xerofile pot avea o transpiraie mai intens dect mezofitele, datorit unui numr mai mare de stomate la unitatea de suprafa foliar. 3. Stomatele densitate, poziie, grad de deschidere Stomatele reprezint circa 1-2% din suprafaa limbului foliar i prezena lor pe ambele fee ale frunzelor determin o transpiraie mai intens. De obicei sunt situate pe faa inferioar a frunzelor (specii hipostomatice) sau pe ambele fee ale frunzelor (specii amfistomatice). Cu ct numrul stomatelor este mai mare i transpiraia se intensific (Saadu i al., 2009). Dac ns stomatele sunt prea dense, respectiv dac distana dintre stomate este mai mic dect de zece ori diametrul stomatei(peste 70.000 /cm2), intensitatea transpiraiei scade. Intervine aa numitul efect de margine. Numrul lor variaz de la zero (pe epiderma superioar a frunzei de mr), pn la 58.140/ 2 cm (la nivelul epidermei inferioare a frunzei de stejar). Unul dintre indicatorii utilizai este indexul stomatic (I). I = [ S/ (E + S) ] * 100 unde:

S = numrul de stomate pe unitatea de suprafa; E= numrul de celule epidermice pe aceeai unitate de suprafa O valoare mare indic o cretere rapid i un climat umed. O valoare mic indic rate mai reduse ale fotosintezei i creterii, ori adaptare pentru uscciune. n funcie de aciunea factorilor externi i interni au loc modificri ale gradului de deschidere a stomatelor, n relaie cu schimbarea gradului de aprovizionare cu ap a celulelor de gard.

73 4. Coninutul n CO2 din frunze La o scdere a concentraiei de CO2 n frunze, ostiolele stomatelor se deschid. Dac n frunze crete concentraia CO2, ostiolele se nchid. La plantele care au capacitatea de concentrare a dioxidului de carbon intern (vezi Cap.6), procesele sunt puin diferite, n sensul c acestea pot s menin un coninut intern relativ constant al CO2. 5. Raportul sistem radicular / parte suprateran O valoare mare a acestui raport determin creterea ratei transpiraiei, n timp ce o valoare redus diminueaz rata transpiraiei. Plantele mici sunt caracterizate printr-o valoare mare a acestui raport i transpir mai mult la unitatea de suprafa foliar, comparativ cu plantele mari, la care raportul este n favoarea prii aeriene. 4.6.1.4. Indicatori fiziologici privind transpiraia 1) Rata transpiraiei exprim relaia dintre cantitatea de ap eliminat prin transpiraie n unitatea de timp. Raportarea se realizeaz la material vegetal proaspt, mas substan uscat, coninut de ap sau suprafaa plantei luat n studiu. Transpiraia absolut reprezint cantitatea de ap eliminat n procesul de transpiraie de ctre ntregul organ sau organism, exprimat n grame. Transpiraia relativ reprezint raportul dintre cantitatea de ap eliminat prin transpiraie i cea evaporat de pe o suprafa egal de ap, n acelai interval de timp. n cazul frunzelor, transpiraia relativ este cuprins ntre 0,1-0,5, iar la plantele cu consum mare de ap poate ajunge la valoarea 1. 2) Coeficientul de transpiraie reprezint cantitatea de ap eliminat n procesul de transpiraie, n perioada de timp n care se biosintetizeaz un gram de substan uscat. Acest indicator (determinat n condiii controlate) ofer date utile pentru zonarea culturilor i pentru stabilirea normelor de udare. 3) Productivitatea transpiraiei reprezint cantitatea de substan uscat produs (exprimat n grame) corespunztor la 1000 g ap eliminat prin transpiraie. Valorile acestui indicator sunt n jur de 3-5 g. Spre exemplu, la specia Triticum valoarea este 3. 4) Raportul dintre moli H2O eliminai prin transpiraie/ moli CO2 fixai n cursul fotosintezei constituie un indicator al eficienei plantelor n ceea ce privete optimizarea fotosintezei i utilizarea judicioas a apei. Pentru plantele de tip C3 raportul este n jurul valorii 500. Pentru cele de tip C4 este de circa 250, iar la plantele de tip CAM poate avea valori foarte mici (chiar 50). Se folosete de asemenea reciproca raportului i acest indicator este denumit eficiena folosirii apei. Prin urmare, la plantele la care corespunde un raport al transpiraiei de 500, eficiena folosirii apei este de 1/500 sau 0,002. 5) Bilanul hidric (A/T) reprezint raportul dintre cantitatea de ap absorbit de ctre plante (A) i cantitatea de ap eliminat prin procesul de transpiraie (T), n acelai interval de timp. Activitatea vital a plantelor depinde de echilibrul dinamic ntre absorbie i transpiraie. Din punct de vedere valoric: >1 A/T poate fi: =1 <1

74 Bilanul hidric are valoarea 1 n cazul plantelor bine aprovizionate cu ap, n condiii normale, cnd cele dou procese sunt n echilibru. Este un bilan optim, care asigur o stare normal tuturor celulelor. Procesele fiziologice decurg cu intensitate mare i implicit producia de substan uscat este mare. Bilanul hidric are valoarea mai mare dect 1 cnd spre exemplu n sol este o umiditate excesiv. Dac absorbia depete transpiraia, pentru a se asigura continuitatea absorbiei i circulaiei apei n plant, precum i pentru a se evita acumularea apei n esuturile plantei i asfixia acesteia, planta recurge la eliminarea apei n exces prin gutaie. Bilanul hidric are valoarea mai mic dect 1 cnd transpiraia este mai intens dect absorbia, respectiv n condiii de secet, ceea ce determin ofilirea plantelor. Ofilirea poate fi temporar (trectoare), dac este cauzat de seceta atmosferic, precum n cazul zilele de var foarte clduroase. Frunzele i vrfurile tinere i pierd turgescena i capt aspect de ofilire. Tulpina i alte organe ns, conin ap n cantiti normale. n acest interval de timp are loc un proces de autoreglare a transpiraiei, prin nchiderea hidroactiv a stomatelor, iar transpiraia se reduce de 5-10 ori, fa de normal. Dintre modificrile care apar n cursul ofilirii temporare se pot aminti: creterea permeabilitii membranelor plasmatice; diminuarea gradului de dispersie a coloizilor, considerat ca un proces de coagulare; scderea ratei fotosintezei i respiraiei; diminuarea ratei de cretere a plantelor, rezultatul fiind scderea recoltei etc. Spre sear, odat cu scderea temperaturii i a deficitului de umiditate atmosferic, scade intensitatea transpiraiei i respectiv deficitul de ap din plant. Are loc o restabilire a saturrii celulelor cu ap, iar bilanul hidric revine la normal n cursul nopii. Un dezechilibru al regimului hidric se poate constata i n cazul solurilor reci sau al aplicrii irigrii cu ap rece, n zilele clduroase de var. Ca urmare, absorbia apei de ctre plante este inhibat, dar procesul de transpiraie se realizeaz n mod normal. Apare un deficit hidric indus de aa numita secet fiziologic, care determin ofilirea temporar. Dac ns la seceta atmosferic se adaug, se accentueaz i acioneaz i seceta solului, apare ofilirea permanent (de durat). n astfel de condiii, deficitul de ap creat n cursul zilei se accentueaz pe zi ce trece. Planta nu-i poate reface complet turgescena n cursul nopii, aa nct n ziua urmtoare intr deja cu un deficit de ap numit de Litvinov deficit restant. ntreaga activitate fiziologic i biochimic a plantei este perturbat: periorii absorbani mor (se ntrerupe legtura dintre ei i particulele solului, prin urmare aprovizionarea plantei cu ap este deficitar); stomatele se nchid hidroactiv la diferite momente din zi, transpiraia este mult diminuat, dar transpiraia cuticular poate determina accentuarea deficitului de ap; n frunzele de vrst mijlocie poate avea loc descompunerea rezervelor glucidice la compui osmotic activi, crete fora de suciune la aceste celule, se absoarbe apa de la cele btrne sau tinere i vrfuri de cretere; n timp apare deficit i n acestea, ca i n tulpin i alte organe; apar modificri la nivelul protoplasmei (scade coninutul total de ap i de ap liber, n schimb crete coninutul de ap legat; crete gradul de vscozitate; se intensific activitatea enzimelor respiratorii i deci respiraia; scade rata fotosintezei i acumularea zilnic de substan uscat; nceteaz procesul de cretere etc.) De asemenea, pe lng modificrile fiziologice induse de stresul hidric, nu lipsite de importan sunt i modificrile morfologice care intervin (Svulescu i al., 2000). n condiii de secet accentuat, cnd plantele manifest ofilirea permanent se impune aplicarea de irigaii. Rezistena plantelor la secet este diferit, fiind cunoscute plante nerezistente, plante cu rezisten mijlocie i plante rezistente. La cucurbitacee, precum i la plantele de umbr, fenomenul de ofilire apare cnd n plante deficitul de saturare cu ap este de 2-3%. n schimb, plantele fotofile, precum floarea soarelui se ofilesc la un deficit de saturare cu ap de 25-30%.

75 Importana antitranspiranilor Antitranspiranii sunt compui care se aplic plantelor pentru diminuarea transpiraiei. Spre exemplu, acetia se aplic pentru pomii de Crciun, la flori tiate, arbuti proaspt transplantai etc. Scopul aplicrii lor este acela de a prezerva apa i de a proteja plantele. Pot fi aplicai prin stropire i acoper stomatele ca un film. Se pot aplica de asemenea la nivelul sistemului radicular i determin intrarea acestuia ntr-un stadiu de dorman temporar. Totodat, aplicarea la rdcin poate nlocui efectele regulatorilor de cretere. Se controleaz astfel creterea plantelor pentru 3-4 sptmni, pn cnd se va trece la udarea regulat. Antitranspiranii se recomand pentru toate tipurile de plante containerizate. Se determin ntrzierea creterii efective, dar se mbuntete calitatea plantei. 4.6.2. Gutaia Gutaia reprezint procesul de eliminare a apei din plante sub form de picturi, la nivelul unor formaiuni specializate denumite hidatode, n condiiile n care bilanul hidric (Absorbie/Transpiraie) are valori supraunitare. Gutaia este specific plantelor din zonele ecuatoriale. n climatul rii noastre, procesul are loc cnd dup zile clduroase urmeaz nopi reci, sau cnd dup o perioad clduroas, urmeaz invazia unor mase reci de aer. Avnd n vedere faptul c solul i menine temperatura ridicat mai mult timp, iar absorbia apei continu s se realizeze, temperatura aerului fiind mic i respectiv umiditatea aerului avnd valori apropiate 100%, planta recurge la eliminarea excesului de ap prin gutaie. De altfel, pentru evitarea asfixiei i pentru asigurarea continuitii procesului de absorbie i transport n plant a apei i srurilor minerale, se recurge la acest proces. Eliminarea apei pe aceast cale presupune existena unor structuri specializate denumite hidatode (fig. 4.23.), care sunt diferite din punct de vedere anatomic i funcional ( Takeda i Glenn, 1989; Lersten i Curtis, 1991). Hidatodele pot fi nchise (active) sau deschise (pasive). Hidatodele de tip activ sunt formate din una sau mai multe celule epidermice normale sau modificate n peri (ex. la Phaseolus sunt peri uni sau pluricelulari), care acumuleaz apa i o elimin sub form de picturi, n condiii de mediu prielnice. n apropierea hidatodelor se gsesc terminaiile vaselor lemnoase, care n permanen asigur ap. Fig. 4.23 Gutaia Hidatodele de tip pasiv sunt situate n vrful frunzelor (ex. la (dupa Milic i al., Fragaria sp.). Ele constau din dou celule stomatice moarte, ntre care 1982) se afl un orificiu permanent deschis. Sub aceste celule se gsete o camer acvifer, nconjurat de un parenchim acvifer denumit epitem, la care pereii celulari sunt subiri, iar spaiile intercelulare sunt pline cu ap. Epitemul se afl n contact cu terminaiile vaselor lemnoase. Mrimea acestora, structura i abundena variaz considerabil cu specia. Ocluziunea extern a porilor pentru ap din hidatode este componenta de rezisten asociat cu absena gutaiei la frunzele btrne, la cpun (Takeda i al. (1991). Lichidul eliminat nu este o ap pur, ci este o soluie diluat (0,1- 0,9%), care conine cantiti mici de sruri minerale (mai ales calciu), glucide, azotai etc. O dovad n plus la acest argument sunt rezultatele experimentelor efectuate de French i al. (1993), care au descoperit prezena n lichidul de gutaie a virusului mozaicului tomatelor (ToMV), la plantele infectate sistemic i vizualizate prin microscopie electronic. Concentraia ToMV a fost de 0,9 +/- 0,2 micrograme / ml. Existena virusului transmisibil n fluidul de gutaie poate reprezenta un factor important al rspndirii virusurilor plantelor la culturile din ser. Mai mult dect att, studiile privind efectele vrstei frunzelor asupra gutaiei i a caracteristicilor hidatodelor asupra dezvoltrii

76 simptomelor date de Didymella bryonie (Anersw.) Rehm. la Cucumis sativum, n vederea dezvoltrii metodelor de selecie a germoplasmei, au demonstrat prin teste de ser i cmp, faptul c susceptibilitatea a crescut odat cu intensificarea gutaiei. Plantele cu o gutaie intens au fost mai susceptibile, dect plantele la care gutaia a fost absent. Umiditatea filoplanului i/sau nutriia au fost mai importante n procesul infeciei, dect deschiderea ostiolelor stomatelor. Concluzia a fost aceea c, dei important, gutaia nu a fost necesar infeciei (Amand i Wehner, 1995). Mult timp s-a considerat c lichidul de gutaie conine n principal ioni minerali i c hidatodele sunt structuri secretoare. Cercetrile recente sugereaz faptul c hidatodele sunt mult mai complexe i c sunt capabile de biosinteza Fig. 4.24. Diferite ci prin care pot fi proteinelor (filoproteine) care reprezint secretate i depozitate componente ale sistemului defensiv. Suprafaa proteinele filoplanului frunzei reprezent o frontier biologic (Shepherd i Wagner, 2007) (fig. 4.24.). ntrebri 1. Definii regimul de ap al plantelor. 2. Care este rolul apei n viaa plantei ? 3. Explicai mecanismul absorbiei apei prin rdcin. 4. Care sunt factorii care influeneaz absorbia i cum intervin acetia ? 5. Care sunt cile de transport a apei n plante ? 6. Explicai mecanismul TACT, cu privire la transportul apei prin xilem. 7. Transpiraia: definiie, importan, organ specializat. 8. Explicai mecanismul de deschidere i nchidere a stomatelor. 9. Bilanul hidric: definiie, valori, semnificaie. 10. Gutaia: definiie, importan. Bibliografie selectiv Assmann, S.M. i Shimazaki, K.I. 1999. The multisensory guard cell. Stomatal Responses to blue light and abscisic acid. Plant Physiology, Vol. 119: 809- 816. Boucher, J.F., Munson, A.D., Bernier, P.Y. 1995. Foliar absorbtion of dew influences shoot water potential and root growth in Pinus strobus seedling. Tree Physiology, Vol. 15: 819-823. Furuichi, T. i al. 2008. Mechano-sensitive channels regulate the stomatal aperture in Vicia faba. Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol. 366: 758- 762. Limm, E.B., Simonin, K.A., Bothman, A.G., Dawson, T.E. Foliar water uptake: a common water aquisition strategy for plant of redwood forest. Oecologia, Vol. 161. 449-459. Pandey, S. i al. 2007. Roles of ion channels and transporter in guard cell signal transduction. FEBS Letters, Vol. 581: 2325- 2336. Saadu, R.O., Abdulrahaman, A.A., Oladele, F.A. 2009. Stomatal complex types and transpiration rates in some tropical species. African Journal of Plant Science, Vol. 3: 107-112. Svulescu Elena, I. Svulescu, Mihaela Ioana Georgescu, Elena Delian Morphological changes induced by the water deficit on soyben leaves-Glycine max L. Merr. Anales of the University of Craiova, Vol. III (XLIV), p: 275-278, 2003. Shen, F.Y. i al. 2008. Possible causes for embolism repair in xylem. Environmental and Experimental Botany, Vol. 62: 139- 144. Shimazaki, K.I. i al. 2007. Light regulation of stomatal movement. Annual Review of Plant Biology, ol. 58: 219- 247.

77 CAPITOLUL 5 FIZIOLOGIA NUTRIIEI MINERALE Cuvinte cheie: rizosfer,semnalizare molecular, element mineral esenial i util, soluie nutritiv, fitosiderofori, micorize, simbioze rhizobiale i actinorhizale Obiective: cunoaterea rolului fiziologic al elementelor minerale eseniale i utile n viaa plantelor; nelegerea diferitelor moduri de clasificare a elementelor minerale; enumerarea metodelor de studiu i descrierea metodei fiziologice; cunoaterea interrelaiilor sol plant - microorganisme i a semnalizrii moleculare la nivelul rizosferei; nelegerea relaiei dintre deficiene i mobilitatea elementelor n plante etc.; descrierea proceselor de absorbie, transport i utilizare a elementelor minerale n plante; descrierea adaptrilor sistemului radicular pentru favorizarea absorbiei i importana practic a acestora; REZUMAT
Pentru desfurarea proceselor de cretere i dezvoltare, plantele au nevoie pe lng ap i de substane minerale, pe care le preiau din mediul nconjurtor. Aprovizionarea plantelor cu substane minerale este cunoscut sub denumirea de nutriie mineral. nelegerea modului n care plantele obin elementele minerale, cum le distribuie, cum le metabolizeaz i cum le utilizeaz pentru creterea i dezvoltarea lor reprezint o component de baz a fiziologiei plantelor, cu un impact deosebit asupra ntocmirii programelor optime de fertilizare a culturilor. Unele elemente minerale sunt considerate eseniale, altele sunt catalogate ca elemente utile. Exist diferite criterii de clasificare a elementelor minerale, dar, n funcie de rolul lor fiziologic sunt elemente cu rol de structur (sau rol plastic) i elemente cu rol n activarea unor enzime (rol catalitic). Studiul nutriiei minerale se poate realiza prin diferite metode, dar, o metod specific fiziologiei este creterea plantelor pe soluii nutritive minerale artificiale. Din punct de vedere tiinific, metoda permite efectuarea de studii privind rolul fiziologic specific al elementelor minerale, precum i cunoaterea efectelor carenei sau excesului acestora asupra creterii i dezvoltrii plantelor. Din punct de vedere practic, metoda se poate utiliza pentru cultivarea plantelor, apelnd la diferite tehnici de cultur. Avnd n vedere c plantele absorb elementele minerale n principal din sol, prin intermediul sistemului radicular, rizosfera i semnalizarea molecular la acest nivel are o importan deosebit. Totodat, interaciunile sol rdcini - microorganisme i adaptrile sistemului radicular prin relaiile de simbioz reciproc avantajoas cu unele ciuperci (micorizele) i unele bacterii (simbiozele rhizobiale i actinorhizale) favorizeaz procesele de absorbie a apei i substanelor minerale.

5.1. Rolul fiziologic general i criterii de clasificare a elementelor minerale Elemente minerale eseniale i elemente minerale neeseniale pentru plante Pentru creterea i dezvoltarea plantelor, pe lng C, H i O, care reprezint circa 98% din masa proaspt a unei plante, sunt necesare cel puin alte 13 elemente chimice, denumite nutrieni anorganici eseniali. Termenul de element mineral esenial sau absolut necesar a fost introdus de Arnon i Stout (1939). Autorii au concluzionat c pentru ca un element mineral s fie considerat esenial, trebuie s ndeplineasc trei criterii: 1 o plant dat nu trebuie s fie capabil s-i completeze ciclul su de via, n absena elementului respectiv; 2 funcia elementului mineral nu trebuie s fie nlocuit de un alt element mineral; 3 elementul mineral trebuie s fie direct implicat n metabolismul plantei. Dup Epstein (1972), elementele minerale sunt considerate ca eseniale sau neeseniale pentru plante, pe baza a dou criterii principale.

78 n primul rnd, un element mineral este considerat ca esenial pentru plante, dac planta nui poate desfura ntregul su ciclu de via, n lipsa acelui element. n al doilea rnd, se consider ca fiind esenial acel element mineral care se constituie parte a unei molecule sau constituent al plantei, care la rndul su este indispensabil plantei. Dup ali cercettori, mai poate fi luat n considerare i un al treilea criteriu, respectiv, un element este esenial dac acioneaz direct n plant i nu influeneaz un alt element (n sensul de a-l face mai disponibil, sau dimpotriv de a aciona antagonist). Un element mineral util sau neesenial este considerat acela care nu intervine n mod direct n metabolismul plantei, dar are efecte benefice. Spre exemplu, siliciul este un element util plantelor. El are un efect favorabil asupra rezistenei plantelor la boli i duntori, de asemenea, prezena sa face ca plantele s devin mai rezistente la cdere (fiind depozitat n pereii celulari, mai ales la Equisetaceae, Gramineae). Criterii de clasificare a elementelor minerale Clasificarea elementelor minerale se poate realiza dup diferite criterii: dup cantitatea necesar sau prezent n esutul vegetal; dup nevoia metabolic pentru elementul nutritiv; dup funcia sau funciile biochimice ale elementului nutritiv; dup mobilitatea sa n plant etc. Prin urmare, n lucrrile de specialitate se regsesc diferite clasificri, dar, pentru majoritatea plantelor superioare, elementele minerale eseniale sunt considerate ca fiind reprezentate de: I. macroelemente (necesare n concentraii de 1000 mg/kg substan uscat), precum C, H, O provenite din aer i ap; N, P, K (primare, provenite din sol); Ca, Mg, S (secundare, provenite din sol); II. microelemente (provenite din sol) (necesare n esuturile plantelor n concentraii egale sau mai mici dect 100 mg/kg substan uscat), ca de exemplu B, Fe, Mn, Zn, Mo, Cl, Cu, Ni (tabelul 5.1.) Aspecte generale privind rolul fiziologic al elementelor minerale Din punct de vedere a funciilor ndeplinite, elementele minerale sunt clasificate uneori n dou grupe: elemente cu rol de structur a unui compus important (rol plastic, de constituie); elemente cu rol n activarea unor enzime (rol catalitic). Nu se poate face o distincie net a acestor funcii. Spre exemplu, magneziul are att rol structural, intrnd n alctuirea moleculei de clorofil, ct i rol de activare a unor enzime. Microelementele sunt n principal activatori ai unor enzime. Ele sunt necesare n cantiti mici i multe dintre acestea sunt toxice n concentraii mari n celule. Ca urmare, plantele au dezvoltat un set de mecanisme pentru ajustarea concentraiei elementelor minerale, la cerinele fiziologice i structurale ale celulei (Giegl i al. (2009). Sub form solubil, toate elementele minerale manifest i o alt funcie, respectiv contribuie la reglarea potenialului osmotic celular.

79 Tabelul 5.1. Elementele eseniale pentru plantele superioare i concentraiile adecvate (modificat dup Brown i al., 1987). Elementul Simbolul chimic C H O N P K Ca Mg S B Fe Mn Zn Mo Cl Cu Forma disponibil pentru plant CO2 H2O O2, H2O NO3-, NH4+ H2PO4-, HPO42K+ Ca2+ Mg2+ SO42H3BO3 Fe3+, Fe2+ Mn2+ Zn2+ MoO42ClCu+, Cu2+ Concentraia n esut mg kg-1 substan uscat 450000 60000 450000 15000 2000 10000 5000 2000 1000 20 100 50 20 0,1 100 6

Carbon Hidrogen Oxigen Azot Fosfor Potasiu Calciu Magneziu Sulf Bor Fier Mangan Zinc Molibden Clor Cupru

Printre principalele funcii ale elementelor minerale se pot aminti urmtoarele: intr n alctuirea unor substane organo-minerale, care au rol plastic sau de constituie (ex. azotul n proteine; fosforul n fosfolipide); intr n alctuirea unor substane cu rol activ sau catalitic, precum enzimele: Mo i Fe n nitrogenaz etc.; intr n alctuirea unor vitamine ( ex. S n vitamina B1); intr n alctuirea unor pigmeni (ex. N i Mg n clorofil); intr n alctuirea substanelor care fac parte din lanul transportor de electroni, att n cadrul procesului de respiraie, ct i de fotosintez (ex. Fe n citocromi, Cu n plastocianin); particip la procesele de oxido-reducere, prin modificrile de valen ale Fe, Cu etc.; reprezint transportori pentru energia biochimic stocat n legturile macroergice ale acidului adenozin trifosfat (ATP); particip la procesul de descompunere a apei prin fotoliz (Mn); stimuleaz procesul de cretere (N) i procesul de respiraie (N); stimuleaz sau inhib activitatea unor enzime; regleaz potenialul bioelectric celular, potenialul osmotic i turgescena (n special K); particip la efectuarea unor micri (micarea stomatelor : K i Cl; seismonastii K) etc.

5.2. Metode de studiu a nutriiei minerale a plantelor n general, studiul nutriiei minerale a plantelor se poate efectua prin: metode chimice (o variant fiind diagnoza foliar), procednd la analiza frunzelor sau a peiolilor i astfel se determin nivelele de aprovizionare care pot determina simptome de caren sau de exces; metode agronomice, cuplate cu cele agrochimice (respectiv efectuarea de experiene mono-factoriale sau poli-factoriale n casa de vegetaie, ori n cmp); metoda fiziologic sau de cretere a plantelor pe soluii nutritive minerale artificiale;

80 Se pot utiliza i alte mijloace, precum studiile microscopice, analize spectrale, analiza esutului vegetal i a solului etc. Avnd n vedere faptul c solul este un mediu deosebit de complex, n jurul anilor 1860, trei fiziologi germani (W. Pfeffer, J. Sachs i W. Knop) au recunoscut c este dificil a determina tipul i cantitatea elementelor minerale eseniale pentru creterea plantelor. n consecin, ei au cultivat plantele cu rdcinile ntr-o soluie alctuit din sruri minerale, cu o compoziie chimic cunoscut i posibil de controlat, aa numita soluie nutritiv. O astfel de cretere a plantelor reprezint ceea ce se denumete hidroponica - cultur fr sol sau cultura pe soluie nutritiv. De asemenea, n ultimii ani s-au perfecionat tehnicile de msurare a concentraiei elementelor minerale n plante, sol i soluii nutritive. Spre exemplu, sunt utilizate spectrometre cu absorbie atomic pentru determinarea metalelor i a unor nemetale. Mai eficiente sunt ns spectrometrele cu emisie optic, cu care spre exemplu se pot determina mai mult de 20 elemente ntr-o singur soluie, n mai puin de un minut, sau mass spectrometria cu plasm (Bibak i al., 1998). 5.2.1. Creterea plantelor pe soluii nutritive minerale artificiale teoretic i practic - importan

Soluiile nutritive minerale artificiale sunt amestecuri ale unor substane minerale dizolvate n ap, n cantiti i raporturi optime pentru creterea i dezvoltarea plantelor. S-au folosit numeroase reete de soluii nutritive, dintre care mai veche i mai simpl este soluia Knop, pregtit iniial pentru hamei i folosit apoi i pentru alte specii. ns, o soluie ideal pentru o anumit specie este rareori potrivit pentru o alt specie. Ulterior, au fost mbuntite reetele de soluii nutritive, iar cteva diferene dintre diferite soluii se observ n tabelul 5.2. Tabelul 5.2. Reete de soluii minerale nutritive artificiale Soluia Hoagland i Arnon Sarea mM KNO3 6,0 Ca(NO3)2.4H2O 4,0 NH4H2PO4 1,0 2,0 MgSO4.7H2O Fe-chelat MnCl2.4H2O 0,009 H3BO3 0,046 ZnSO4.7H2O 0,0008 CuSO4.5H2O 0,0003 H2MoO4.H2O 0,0001 Soluia Evans Sarea mM ppm Ca(NO3)2.4H2O 5,0 K2SO4 2,5 KH2PO4 0,5 MgSO4.7H2O 2,0 Fe-versenate 0,5 Fe KCl 9,0 Cl MnSO4 0,25 Mn H3BO3 0,25 B ZnSO4.7H2O 0,25 Zn CuSO4.5H2O 0,02 Cu Na2MoO4 0,02 Mo Soluia Knop Sarea g l-1 KNO3 0,25 MgSO4.7H2O 0.25 Ca(NO3)2 1,0 0,25 KH2PO4 Fe3(PO4)2 urme

Soluia Knop conine doar 7 elemente minerale, dar substanele utilizate fiind impure au asigurat i alte elemente. Important n cazul acestora este faptul c soluia Evans conine azotul sub form de nitrat, dar avnd n vedere faptul c nitratul este absorbit foarte repede, se induce o cretere a pH-ului soluiei (deoarece absorbia nitratului i a altor anioni este nsoit de absorbia H+ sau eliminarea OH- pentru meninerea echilibrului sarcinilor electrice). n condiiile unui pH mrit, fierul i alte elemente precipit ca hidro-peroxizi i astfel devin indisponibile rdcinilor plantelor. Inconvenientele date de modificrile pH-ului pot fi reduse prin asigurarea unei pri din azot sub form de sruri de amoniu (ex. NH4H2PO4, precum n soluia Hoagland), deoarece absorbia NH4 i a altor cationi se realizeaz simultan cu absorbia OH- sau transferul H+ din

81 rdcin n soluia nutritiv. Recent, hidroponica a fost utilizat inclusiv pentru studiul rspunsului plantelor de tomate la aplicarea unui stimulent de micorizare (Cwala i al., 2010). Agenii de chelatare Cationii de tipul Fe i n msur mai mic Zn, Mn, Cu sunt relativ insolubili n soluii nutritive, atunci cnd sunt asigurai sub forma unor sruri anorganice comune. Aceasta se ntmpl mai ales n condiiile unui pH situat peste 5. n astfel de situaii, cationii micro - nutrieni reacioneaz cu ionii hidroxil i eventual precipit cu formare de oxizi metalici insolubili. Prin urmare, n vederea meninerii lor n soluie se folosete un agent chelatant sau chelator. Prin reacia Fe bivalent sau trivalent cu un chelatant se formeaz un chelat. Acesta este un produs solubil, format cnd anumii cationi dintr-un ligant organic doneaz electroni cationului. Spre exemplu, deficiena n Fe caracterizat prin cloroz este rspndit mai ales la plante cultivate pe soluri calcaroase i poate fi eliminat sau redus prin aplicarea la sol sau pe frunze a Fe sub form de chelat comercial numit Fe-EDDHA (Fe-etilen-diamin-di-hidroxifenil acetic acid), comercializat sub denumirea Sequestrene. Un alt chelat pentru Fe este Fe-EDTA (Fe-etilen-diamin-tetraacetic acid) (Versenate), dar acesta chelateaz i Ca2+ i nu este eficient n soluri calcaroase. Sunt descrise dou tipuri de liganzi care chelatez Fe: liganzi sintetizai de microorganisme; liganzi sintetizai de rdcinile plantelor. n privina absorbiei Fe, la angiosperme s-au descris dou strategii: strategia I (fig.5.1.) - la dicotiledonate i unele monocotiledonate, care implic eliberarea liganzilor tip fenol (ex. acidul cafeic). Acetia chelateaz Fe3+, se deplaseaz ctre suprafaa rdcinii, unde este redus la Fe2+ nc chelatat fiind. Simultan, rdcinile plantelor formeaz ageni reductori rapid (ex. NADPH), care desfoar reducerea. Prin reducere, se elibereaz Fe2+ din ligand i Fe2+ este absorbit imediat. strategia II (fig.5.2.) - caracteristic numai ierboaselor, inclusiv cereale. Acestea rspund deficienei n Fe prin formarea i eliberarea liganzilor care chelateaz puternic Fe3+. Aceti liganzi se numesc siderofori sau fitosiderofori (ex. acidul avenic, acidul mugineic). Sideroforii sunt absorbii cu fier cu tot i apoi reduc fierul coninut la Fe2+ i probabil imediat Fe 2+ este eliberat i folosit de plant. Sideroforul este fie biodegradat, fie este eliberat din nou pentru a transporta alt Fe.

Fig. 5.1. Strategia I la dicotiledonate

Fig.5.2. Strategia II la plante graminee

Ingineria genetic i amelioratorii trebuie s-i concentreze eforturile n cazul cerealelor, pentru descoperirea genelor care controleaz formarea sideroforilor, ca msur pentru ameliorarea creterii plantelor pe solurile calcaroase. n ciuda numeroaselor avantaje referitoare la studiul nutriiei minerale, din punct de vedere practic, al tehnicii de cultivare pe astfel de soluii, intervin i unele dezavantaje. Astfel, se impune aerarea soluiilor, precum i controlul compoziiei acestora. Se procedeaz la nlocuiri i suplimentri la anumite intervale de timp, avnd n vedere modificrile care intervin, urmare a absorbiei mai rapide a unor ioni, comparativ cu alii. De asemenea, ca urmare a absorbiei selective

82 sunt induse modificri de pH. Drept consecin, n sere se practic n cazul culturilor fr sol, pomparea unor astfel de soluii cu pH i compoziie monitorizate i corectate automat, din rezervoare speciale (tehnica filmului nutritiv). n privina concentraiei soluiei, aceasta trebuie meninut la valori apropiate celei specifice soluiei solului, deci la valori suficient de mici, pentru a evita fenomenul de plasmoliz la nivelul celulelor rdcinii. Dac pentru studii privind absorbia ionilor de ctre rdcini, cultura pe soluii nutritive este metoda adecvat, n cazul cultivrii, poate fi folosit nisip de cuar splat sau perlit, urmnd ca soluia s fie turnat sau picurat n cantiti n exces i la intervale adecvate de timp. De altfel, exist alte diferite tehnici bazate pe utilizarea soluiilor nutritive (ex. tehnica filmului nutritiv etc.). 5.2.2. Analiza strii de nutriie a plantei Dei simptomele de diagnostic vizual sunt mijloace extrem de rapide pentru evaluarea strii de nutriie a plantei, ele nu constituie singurele mijloace disponibile. Se pot utiliza i alte mijloace, precum studiile microscopice, analize spectrale, analiza esutului vegetal i solului etc.. Fiecare dintre aceste metode prezint particulariti n ceea ce privete precizia, rapiditatea i capacitatea de a prevedea statusul nutriional viitor. n vederea ntocmirii programelor de fertilizare a plantelor este deosebit de important a se estima asigurarea cu elemente minerale pentru plante, precum i coninutul n elemente minerale al plantelor crescute n anumite condiii de sol. n acest scop se recurge la analiza chimic a solului, precum i la analiza esutului plantei. Astfel de date coroborate cu rezultatele experimentelor de cmp fac posibile recomandri adecvate pentru o fertilizare corespunztoare, aa cum de altfel au demonstrat i rezultatele obinute de Rashid (1995). n figura 5.3. este redat relaia dintre valorile obinute n cazul studiilor privind producia sau creterea plantei (% din maximum) i concentraia unui element nutritiv n esutul vegetal. De remarcat faptul c, la un coninut mic ntr-un anume element, creterea plantei este redus. Pe msur ce crete concentraia elementului mineral n esutul vegetal, se nregistreaz i o sporire a produciei, dar pn la o anumit concentraie, de la care creterea produciei nu se mai coreleaz cu creterea concentraiei elementului mineral respectiv. Acea regiune se denumete zona adecvat. Zona sau punctul de tranziie dintre deficien i zona adecvat reprezint concentraia critic a elementului studiat. Prin urmare, acel punct reprezint coninutul minim din acel element, care se coreleaz cu creterea sau producia maxim. Dup depirea zonei adecvate, Fig. 5.3. Relaia dintre producie dac crete coninutul esutului n elementul analizat, i coninutul ntr-un element nutritiv creterea plantei i producia ncep s scad, ca urmare al esutului plantei a toxicitii. Astfel de date se pot obine prin creterea plantelor pe soluii nutritiv complete (care conin cantiti adecvate de elemente minerale) i incomplete (care conin toate elementele necesare, cu excepia elementului luat n studiu). Studiile privind efectele N, P i K, la unele specii floricole precum impatiens (Impatiens wallerana Hook), petunia (Petunia * hybrida Hort. Vilm.-Andr.), salvia (Salvia splendens F.Sellow ex Roem and Schult.) i vinca (Catharanthus roseus L.) au demonstrat faptul c, concentraia N din partea aerian a plantelor s-a corelat linear cu masa uscat a prii aeriene a plantulelor la transplantare. Concentraia P i K din soluia nutritiv utilizat n experiment, sau din esuturile prii aeriene nu a avut sau a avut un efect redus asupra creterii plantulelor. Dar, creterea concentraiei P n tulpin a fost n relaie cu creterea concentraiei P n soluia nutritiv. Salvia a fost singura specie care a prezentat un consum mare de K. Prin urmare, creterea acestor specii este determinat n principal de azot, ctre care ar trebui direcionate programele de fertilizare, n timp ce aplicarea P i K poate fi redus (Van-Jesel i al., 1998).

83 n ceea ce privete tipul de esut reprezentativ pentru astfel de studii, cercetrile au demonstrat c n general, modificrile nutriionale sunt corelate cu starea nutriional a frunzelor. Ca urmare, s-a dovedit c analiza frunzelor poate constitui un indicator mai potrivit al carenelor de nutriie, comparativ cu simptomele morfologice descrise n literatura de specialitate. 5.3. Absorbia, transportul i utilizarea substanelor minerale de ctre plante Absorbia substanelor minerale se realizeaz n principal prin intermediul sistemului radicular, dar ntr-o mic proporie are loc i absorbia prin organele aeriene (absorbia extraradicular). Substanele sunt absorbite n stare dizolvat n ap, sub form de ioni, fiind apoi transportate odat cu apa, pe cale extra-fascicular, de la celul, la celul, pe distane mici i prin esuturile specializate de transport, pe distane mari (prin xilem, i respectiv prin floem re-translocare). 5.3.1. Semnalizrile moleculare la nivelul rizosferei: interaciunile sol rdcini microorganisme Procesele de cretere i dezvoltare ale plantelor se afl sub controlul unor semnale interne, care depind de asigurarea n cantiti adecvate a elementelor minerale din sol, ctre rdcini. Solul din jurul rdcinilor plantelor poate fi considerat ca un material eterogen, complex, alctuit dintr-o faz solid, o faz lichid i o faz gazoas. Fiecare faz are la rndul su un rol important n asigurarea elementelor minerale pentru sistemul radicular. Particulele anorganice ale fazei solide reprezint un rezervor de nutrieni, precum potasiu, calciu, magneziu i fier. Totodat, asociat fazei solide sunt particulele organice care conin azot, fosfor i sulf. Faza lichid este reprezentat de soluia solului, n care sunt dizolvai ioni minerali i constituie un mediu propice pentru deplasarea acestora ctre suprafaa rdcinii. n soluia solului sunt de asemenea dizolvate gaze (CO2 i O2). Asigurarea oxigenului n faz gazoas este absolut necesar pentru desfurarea respiraiei rdcinii i respectiv pentru asigurarea energiei metabolice necesar pentru efectuarea transportului transmembranal pe cale activ. Plantele preiau cele mai multe elemente minerale din zona rizosferei. Rizosfera este de departe un mediu mai complex din punct de vedere fizic, chimic i biologic, dect mediul de deasupra solului, din jurul prii aeriene. Deplasarea energiei sau materiei, rapid, pe distane mari este limitat de amestecul fazelor solid, lichid i gaz n subteran. De asemenea, un rol important revine modificrilor extreme ale compoziiei chimice n decurs de minute i a spaiilor de milimetri, precum i densitii i diversitii organismelor n sol (Rost i Bloom, 2006). Aceast zon reprezint un mediu ecologic foarte favorabil microorganismelor, iar la majoritatea plantelor microflora rizosferei este specific. nelegerea proceselor semnalizrii moleculare i a funciilor care sunt reglate la nivelul rizosferei va juca un rol central n promovarea coexistenei benefice plantmicroorganisme, n depirea limitelor existente i stabilirea strategiilor pentru asigurarea de noi inoculani, cu aplicaii n cadrul biotehnologiilor sustenabile (Ahmad i al., 2008; Hause i Schaarschmidt, 2009). Exist numeroase i complexe exudate ale rdcinilor (tabelul 5.3.) (Dakora i Phillips (2002). Acestea nu constituie doar o surs de substrat cu carbon pentru creterea microorganismelor, ci i molecule semnal, care promoveaz chemotaxia microorganismelor din sol, ctre rizosfer.

84 Tabelul 5.3. Compui organici i enzime identificate n exudatele rdcinilor a diferite specii de plante Aminoacizi -alanina Alanina Asparagina Aspartat Cistein Cistin Glutamin Glicin Izoleucin Leucin Lizin Metionin Serin Prolin Valin Triptofan Ornitin Histidin Arginin Fenilalanin Acid aminobutiric Acid aminobutiric Acizi organici Citric Oxalic Malic Fumaric Succinic Acetic Butiric Valeric Glicolic Formic Aconitic Lactic Piruvic Malonic Aldonic Glucide Glucoz Fructoz Galactoz Maltoz Riboz Xiloz Rhamnoz Arabinoz Rafinoz Dezoxiriboz Oligozaharide Vitamine Biotin Tiamin Niacin Pantoten Riboflavin Proteine/ Nucleozide Adenin Guanin Citidin Uridin Enzime Fosfataza Acid/ Alcalina Invertaza Amilaza Proteaza

Concentraia aminoacizilor n rizosfer reprezint un rezultat al fluxurilor dintre rdcini, sol i plante, fr a se cunoate cu exactitate efluxul i influxul acestora n cadrul proceselor de exudare. Msurtorile efectuate la plante precum: trifoiul alb (Trifolium repens L.), porumb (Zea mays L.), rapi (Brassica napus L.), tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) i lucern (Medicago sativa L.) n privina glicinei sau serinei au demonstrat c efluxul glicinei a depit influxul, pentru toate aceste specii i a fost mult mai mare la Fabaceae, dect la Poaceae. Efluxul serinei a depit influxul la lucern, trifoi alb i rapi. Concluzia a fost c prezena glicinei i serinei n soluia din jurul rdcinilor este un rezultat al ratelor mari de eflux a glicinei i serinei, cu efecte fiziologice i ecologice n privina interaciunii plant sol - microorganisme (Fabien i al., 2007). Exist o comunicare chimic ntre rdcinile plantelor i alte organisme din rizosfer ( Badri i al., 2009; Hause i Schaarschmidt, 2009) (fig.5.4.). Plantele secret diferii compui, precum glucide i aminoacizi, care atrag prin chemotaxie microorganismele (1). Flavonoizii, care reprezint molecule semnal sunt implicai n iniierea simbiozelor de tip micorhizal (2), rhizobial (3) i cu fungi ne-patogeni (oomicete) (4). Acizii alifatici sunt implicai n recrutarea rizobacteriilor care promoveaz creterea (Bacillus subtilis) (5). Nematozii secret substane regulatoare de cretere (citochinine) implicate n stabilirea locului de hrnire la nivelul rdcinii (6). De asemenea, nematozii secret ali compui (acizi organici, aminoacizi, glucide) implicai n atragerea bacteriilor i realizarea BQS (7). Funciile altor substane secretate de rdcini, precum acizii grai (8), proteine (9), ct i alte interaciuni (10) rmn nc necunoscute.

85 Pe lng faptul c respectivele substane servesc ca semnale chemotactice i promotori ai creterii bacteriilor la nivelul rizosferei, exudatele controleaz de asemenea nutriia cu azot n cazul simbiozelor cu leguminoase. Plantele utilizeaz moleculele flavonoide din exudatele rdcinii, pentru a induce transcripia genelor nodulrii (nod) n rizobii, ceea ce permite formarea nodulilor i fixarea N2. Fenolii au de asemenea un rol deosebit n solubilizarea Fe, P i ali nutrieni, din cadrul surselor nedisponibile. Astfel, n Fig. 5.4. Semnalizarea chimic la nivelul rizosferei cazul deficienelor de Fe, n special dicotiledonatele elibereaz molecule fenolice, care influeneaz mobilitatea Fe i P. n cazul plantelor de lucern cu carene de Fe are loc eliberarea unui izoflavonoid de tip fitoalexin, care dizolv intens fosfatul feric. Aceasta face Fe i P disponibil pentru plant i totodat servete ca fitoalexin mpotriva infeciei cu ageni patogeni. Pe de alt parte, plantele cu suficient Fe produc exudate ale rdcinii, cu caracteristici limitate n ce privete capacitatea de dizolvare a fosfatului feric. La tomate cu deficiene de Fe are loc exudarea acidului cafeic, cu scopul solubilizrii Fe din surse insolubile de Fe. Astfel de compui fenolici permit disponibilizarea Fe i P, prin formarea unor compui relativ stabili, aa numiii chelai cu Fe i Al. Se permite astfel solubilizarea Fe i P, n vederea absorbiei de ctre plante. O strategie i mai eficient utilizat de plantele ierboase deficiente n Fe este eliberarea fitosideroforilor, substane capabile s solubilizeze compuii cu Fe. Ueno i Ma (2009) au precizat c la gramineele perene, secreia acestora este controlat de temperatura din jurul rdcinii i nu de lumin. La unele plante, sinteza i eliberarea acizilor organici reprezint un mecanism pentru detoxifierea excesului de Al intern i extern, pe calea chelatrii Al activ ntr-o form non-fitotoxic. O alt aciune a acizilor organici exudai este cea de acidifiere a rizosferei. n general, creterea rdcinilor este favorizat de un pH uor acid (5,5-6,5), iar activitatea microorganismelor difer n funcie de aciditatea solului. La un pH acid predomin ciupercile, iar la un pH cu valori mari predomin bacteriile. De asemenea, disponibilitatea ionilor depinde de valorile pH-ului, respectiv la valori mici ale pH-ului este favorizat eliberarea ionilor K+, Mg2+, Ca2+. La astfel de valori, srurile de carbonai, sulfai i fosfai sunt mai solubile, ceea ce favorizeaz absorbia lor de ctre rdcini. Ploile i descompunerea materiei organice din sol contribuie de asemenea la scderea pH-ului. n cazul regiunilor aride, distrugerea rocilor poate provoca eliberarea elementelor minerale, care acioneaz ca baze n sol, iar valoarea pH-ului crete. Prin urmare, modificrile pH-ului solului poate avea implicaii mari asupra unor procese din sol, precum structura solului, disponibilitatea elementelor minerale i splarea elementelor. Efectul imediat poate fi favorabil pentru unele plante, mai ales pentru cele care iubesc aciditatea, tinzndu-se a se face fierul mai disponibil. Pe termen lung ns, pH-ul sczut poate fi nefavorabil plantelor, iar disponibilitatea nutrienilor se va modifica. Un pH mai sczut va permite micronutrienilor s fie mai uor splai din profilul solului, rezultnd spre exemplu carene n ceea ce privete nutriia cu Zn i Cu. De asemenea, la un pH cu mult sub 5 poate crete solubilitatea pentru Al i Mn, ceea ce conduce la toxicitate pentru multe plante.Un rol important l reprezint de asemenea eliminarea de substane alelopatice la nivelul sistemului radicular (ex. juglona la nuc).

86 5.3.2. Absorbia substanelor minerale prin rdcin, transportul i acumularea ionilor minerali n plant 5.3.2.1. Absorbia substanelor minerale prin rdcin Rdcina este organul specializat funcional pentru absorbia substanelor minerale i a apei din sol. Sunt absorbite srurile minerale n stare dizolvat i sub form de ioni, existente n soluia solului, ct i direct de pe suprafaa particulelor de sol. Din soluia solului, deplasarea ionilor minerali ctre suprafaa rdcinii poate avea loc printr-un curent de mas i prin difuziune, n strns interrelaie cu viteza de transport a apei n plant, precum i cu cantitatea de nutrieni din soluia solului. Solul conine macro -nutrieni n soluii foarte diluate (10-6 10-3 M). n condiiile unei rate mari a curentului apei i a unei concentraii mari de elemente minerale n soluia solului, curentul de mas poate juca rolul predominant n asigurarea rdcinii cu nutrieni. Absorbia elementelor minerale implic parcurgerea urmtoarelor etape: deplasarea ionilor din sol, ctre suprafaa rdcinii; absorbia ionilor n celulele rdcinii; deplasarea radial a ionilor de la suprafaa rdcinii ctre xilem; translocarea ionilor din rdcin, ctre prile aeriene (Epstein, 1972). Dac se realizeaz absorbia ionilor minerali prin intermediul rdcinii, scade concentraia la suprafaa sistemului radicular, se genereaz un gradient de concentraie n soluia solului din jurul rdcinii, iar prin difuziune sporete disponibilitatea ionilor la suprafaa rdcinii. Absorbia ionilor minerali n plante se poate realiza i prin schimb de ioni. Astfel, particulele de sol (anorganice i organice) au la suprafaa lor sarcini electrice negative, ceea ce prezint importan n adsorbia cationilor minerali. Acetia nu sunt splai uor de ctre ap i se constituie ca un rezervor de nutrieni. Nutrienii minerali adsorbii astfel pot fi nlocuii cu ali cationi, iar procesul se denumete schimb cationic (fig. 5.5.). Gradul n care un sol poate adsorbi i schimba ioni se numete capacitate de schimb de cationi (specific n funcie de tipul de sol), iar o capacitate Fig. 5.5. Schimbul de cationi la suprafaa mare de schimb asigur n general o mai bun particulei de sol aprovizionare cu elemente minerale a plantelor. Spre deosebire de cationi, anionii rmn dizolvai n soluia solului i ca urmare, capacitatea de schimb de anioni a solurilor este foarte mic. Dintre anioni, cei mai solicitai sunt anionul nitrat i clor. Pentru c ei nu sunt adsorbii, sunt predispui levigrii, iar procesul are un impact negativ asupra apelor. Ritmul de absorbie a elementelor minerale este difereniat cu specia de plant. n funcie de consumul de substane nutritive, la plante se disting dou momente de baz, de care se ine seama n cadrul programelor de fertilizare: momentul critic al nutriiei; perioada de consum maxim. Momentul critic se definete ca fiind etapa, faza la care insuficiena sau absena substanelor minerale are o aciune foarte nefavorabil asupra creterii i dezvoltrii ulterioare a plantelor. Consumul maxim reprezint etapa cnd plantele preiau din sol cea mai mare cantitate dintro anumit substan mineral. n general, momentele critice apar n primele faze ale perioadei de vegetaie, iar consumul maxim apare n faze mai trzii. La pomi i via de vie, momentul critic i consumul maxim se situeaz la mijlocul ciclului anual de vegetaie. La specii legumicole, situaia este diferit n funcie de specie. Spre exemplu, se precizeaz c la ridichi consumul maxim de azot este n luna iunie, la tomate consumul maxim este la nceputul lunii august, iar la varz la mijlocul lunii iulie.

87 5.3.2.2. Absorbia substanelor minerale prin organele aeriene Plantele au capacitatea de a absorbi elementele minerale aplicate foliar, sub form de soluii. Fertilizarea foliar reprezint de altfel o modalitate de fertilizare cu efect rapid, mai ales n perioada nfloritului i a formrii fructelor, n perioada de cretere intens a plantelor, deci n perioade de consum maxim, ori n cazul n care se dorete corectarea unor carene de nutriie. Astfel, n cazul azotului se recomand aplicarea ureei (stropiri cu soluii de concentraie 45%) la specii pomicole dup recoltarea fructelor, cu puin timp nainte de cderea frunzelor. De asemenea, fosforul se aplic la pomii fructiferi i la speciile legumicole. Potasiul d rezultate bune la cartof i pomi. Totodat, se recomand aplicarea extra-radicular a calciului, borului, molibdenului, n general a microelementelor, care sunt de altfel necesare n cantiti mai mici, iar aplicarea la sol ar fi dezavantajoas din mai multe considerente. Aplicarea foliar a ngrmintelor se asociaz administrrii produselor fitofarmaceutice (pentru prevenirea i combaterea bolilor i duntorilor) sau a substanelor cu rol de reglare a creterii i dezvoltrii. Toate aceste tehnici contribuie la obinerea unor producii mai mari i de calitate superioar. 5.3.2.3. Transportul, acumularea ionilor minerali n plante i desorbia substanelor din plante Ionii minerali odat absorbii n celulele rdcinii pot fi metabolizai la acest nivel. De exemplu, ionii NO3- i NH4+ pot fi folosii pentru sinteza aminoacizilor. Ionul SO42- dup reducere intr n compoziia aminoacizilor cu sulf. O mare parte ns dintre ionii minerali circul prin plasmodesme pn la xilem, pentru a fi transportai n plante, iar o alt parte a ionilor sunt pompai activ din citoplasm, n vacuol, pentru a fi depozitai la acest nivel. n plante, cea mai mare parte a ionilor minerali absorbii sunt integrai n substane organice complexe, rezultate prin fotosintez sau sintez secundar. Astfel, azotul din nitrai i sruri cu amoniu intr n constituia aminoacizilor, a substanelor proteice; fosforul intr n acizii nucleici, n enzime, n substane care nmagazineaz energie (ATP), n fosfolipide; sulful intr n aminoacizii cu sulf (cistin, cistein, metionin). Potasiul se acumuleaz ca ion mineral liber. Totodat, elementele minerale pot trece n floem i sunt astfel re-translocate n plante. Experimentele au demonstrat c plantele excret elemente minerale absorbite anterior i aceasta se ntmpl mai ales ctre sfritul perioadei de vegetaie. De asemenea, sunt eliminate substane organice (acizi, glucide, proteine, hormoni, enzime etc.). Excreia substanelor este dependent de specie, precum i de faza de vegetaie. Leguminoasele excret cel mai mult i procesul se intensific n general, dup faza de nflorire. La sfritul perioadei de vegetaie, plantele desorb cea mai mare cantitate de ioni minerali. Precipitaiile de la sfritul perioadei de vegetaie spal practic plantele, ceea ce reprezint un proces nefavorabil (spre exemplu, pentru calitatea fructelor). Un rol important l reprezint eliminarea de substane alelopatice, la nivelul sistemului radicular (ex. juglona la nuc). Un domeniu nou al biotehnologiei mediului este fitoremedierea, care implic acumularea de ctre plante a elementelor aflate n concentraii mici, pentru a scoate poluanii anorganici din mediu. n cadrul nutriiei minerale a plantelor, atenia este direcionat ctre sporirea capacitii plantelor de a acumula eficient elementele minerale din sol, att cu scopul reducerii inputului de ngrminte minerale n sistemul agricol, ct i pentru reducerea bolilor la oameni, cauzate de deficiene ale derivailor din plante, cu precdere micronutrieni eseniali: Fe, Zn, Se. De menionat faptul c, plantele preiau din sol elemente precum: Cu, Fe, Mo, Mn, Ni, Se, Zn, elemente eseniale, dar totodat potenial toxice, dar plantele posed mecanisme biochimice complexe pentru controlul lor. Plantele au capacitatea de a prelua i detoxifia elemente neeseniale precum As, Cd, Cr i Pb. Majoritatea plantelor crescute n soluri bogate n metale posed mecanisme pentru excluderea celor potenial toxice din tulpini, folosind sistemul radicular, fie pentru pomparea ionilor metalici napoi n sol sau stocarea (sechestrarea) acestora n vacuolele celulelor rdcinii etc.

88 5.4. Rolul fiziologic al principalelor elemente minerale i dereglri fiziologice determinate de stresul nutriional Plantele au nevoie de azot, fosfor, potasiu, calciu, magneziu i sulf n cantiti relativ mari (>0,1% din masa uscat) i fiecare dintre aceste elemente minerale denumite macronutrieni sunt eseniale pentru completarea ciclului lor de via. n ultimii ani, s-au nregistrat progrese n ceea ce privete mecanismele de absorbie, transport i distribuie, precum i n legtur cu principalele lor funcii fiziologice, aa cum reliefeaz datele sintetice prezentate de Maathuis (2009). n cazul unei aprovizionri necorespunztoare cu un element mineral esenial, plantele manifest simptome de deficien acut sau cronic specifice. n literatura de specialitate sunt descrise de obicei deficienele acute, iar cunoaterea acestor simptome ajut pe cultivatori s determine cnd i cum s aplice ngrminte culturilor. Simptomele vizuale ale carenelor pot constitui mijloace de diagnostic pentru evaluarea statusului nutriional al plantei, dar, un simptom vizual individual, rareori este suficient pentru o diagnoz definitiv. Multe simptome ale unor carene clasice, precum cloroze i necroze sunt n mod caracteristic asociate cu ali factori de stres, precum salinitate, patogeni, poluare a aerului etc. Exist o serie de alte mijloace pentru diagnoz, precum studii microscopice, analiza spectral, analiza esutului vegetal, analiza solului etc. Principalii factori de care depind simptomele carenei ntr-un anume element sunt: 1) rolul fiziologic specific al elementului respectiv; 2) gradul de mobilitate al acestuia (dac acel element este sau nu translocat din frunzele btrne, ctre frunzele tinere). Un exemplu sugestiv al aciunii ambilor factori este n cazul clorozei, cauzat de carena n magneziu. Se cunoate faptul c Mg este un component esenial al clorofilei i c n lipsa acestui element nu se formeaz clorofil sau dac el este n concentraii mici, se produc cantiti mici de clorofil. La frunzele inferioare, mai btrne, cloroza este mai sever dect la frunzele mai tinere. Prin urmare, prile tinere ale unei plante au o capacitate pronunat de a prelua nutrienii mobili din prile mai btrne, iar organele reproductive, florile i seminele sunt de regul buni utilizatori de nutrieni. Din punct de vedere al gradului de mobilitate al elementelor minerale, n ordine descresctoare, acestea pot fi prezentate astfel: N, P, K, Mg, i Cl, iar mai puin mobile sunt B, Fe, Ca. Simptomele carenei sunt cu adevrat complexe, deoarece fiecare element mineral ndeplinete un numr de funcii biologice, iar fiecare funcie posed un set independent de interaciuni cu un numr variabil de parametrii ai mediului. Totodat, expresia acestor simptome variaz pentru carenele acute (cnd un element mineral nu mai este disponibil pentru o plant cu cretere rapid) sau cronice (cnd un element mineral este asigurat continuu dar n cantiti limitate, la o rata insuficient n raport cu cerinele de cretere ale plantei). n continuare sunt prezentate aspecte legate de disponibilitatea, absorbia, transportul, rolul fiziologic al principalelor elemente minerale i simptomele carenei sau excesului. Azotul Azotul constituie principalul element mineral din esuturile plantelor, reprezentnd circa 2% din total plant mas uscat. Disponibilitatea azotului are o influen major att asupra cantitii, ct i asupra calitii produciei (Stougaard, 2000). n biosfer, azotul este prezent n mai multe forme. Atmosfera conine azot molecular (N2), n proporie de circa 78 % din volum, form care nu poate fi direct asimilat de plante. Este necesar ruperea legturilor covalente triple, dintre 2 atomi (N N), iar plantele nu au aceast capacitate. Acest proces poate fi realizat de anumite microorganisme, fie sub form liber, fie asociate simbiotic cu

89 plantele superioare. Pe de alt parte, azotul prezent sub form de nitrat sau amoniu este uor asimilat de plantele superioare, fiind preluat din sol prin intermediul rdcinilor. n sol, azotul este disponibil sub diferite forme, dar dintre acestea trei forme sunt mai abundente: formele anorganice nitrat (NO3-), respectiv amoniu (NH4+) i forma organic reprezentat de aminoacizi. n mare parte, n sol azotul este prezent sub form de molecule organice complexe, care sunt transformate la amoniu prin intermediul microorganismelor, n cadrul procesului de mineralizare. Apoi, NH4+ poate fi oxidat pe calea NO2- la NO3- prin procesul denumit nitrificare. Nitratul poate fi transformat n gaze cu azot (N2, N2O, NO, NO2) prin folosirea NO3- ca acceptor de electroni n locul O2, rezultnd ceea ce se cheam denitrificare (atunci cnd disponibilitatea O2 este limitat, cnd este o concentraie mare de NO3- n sol, umiditate mare a solului, temperatur mare n sol). Disponibilitatea azotului n plante depinde de echilibrul mineralizare, nitrificare i denitrificare ((Miller i Cramer, 2004). Forma sub care este absorbit depinde de condiiile de sol, precum i de specie. n general, plantele adaptate unui pH acid tind s preia NH4+, n timp ce la valori mari ale pH-ului forma predominant este NO3-. Ambele forme sunt foarte mobile. Spre deosebire de formele anorganice, compuii organici precum aminoacizii sunt mai puin mobili. Absorbia NO3- se realizeaz prin intermediul transportorilor codificai de gene din familiile NRT1 i NRT2. Astfel, NO3- este preluat prin intermediul pompei simport din familia NRT, n timp ce NH4+ cu ajutorul transportorilor AMT care funcioneaz ca i canale de ioni sau ca simport NH3:H+. n condiii anaerobe, NH4+ reprezint de obicei forma anorganic dominant. Forma organic este transportat prin intermediul transportorilor oligopeptidici dependeni de protoni (POT/PTR). Reducerea constituie o etap important a metabolizrii azotului, care se poate realiza att n rdcin, ct i n partea aerian. Procesul implic aciunea a dou enzime importante: nitrat reductaza (1) i nitrit reductaza (2). Deci, procesele sunt separate spaial. n citosol are loc reducerea nitratului i n plastide /cloroplaste se realizeaz reducerea nitritului. n cloroplaste, nitratul (NO3-) este redus la nitrit (NO2-), prin intermediul enzimei nitrat reductaza i cu participarea NADPH+ +H+ ca agent reductor. Apoi, nitritul este redus la NH4+ n cloroplastele frunzelor sau plastidele rdcinii, prin intermediul enzimei nitrit reductaza, agentul reductor fiind de obicei feredoxina. Prin urmare, energia necesar procesului de reducere provine din oxidarea hidrailor de carbon sau n mod mai direct din produii fotosintezei, n cadrul fazei dependent de lumin. Azotul redus este asimilat Fig. 5.6. Rolul fiziologic al azotului n aminoacidul glutamat, iar surplusul de azot este NO3 (3) (fig.5.6). Rolul fiziologic Principala funcie a azotului este asigurarea aminoacizilor. De asemenea, azotul este prezent n nucleotide, care sunt constitueni ai acizilor nucleici i totodat ndeplinesc numeroase funcii precum homeostazia energetic, semnalizarea i reglarea proteic. Azotul este util n biochimia compuilor ne-proteici, precum coenzimele, pigmenii fotosintetici, metaboliii secundari i poliaminele. Dac se afl n cantiti mari, NO3- este depozitat n vacuol i contribuie n mod semnificativ la generarea turgescenei.

90 n cazul carenei apar simptome de cloroz general (inclusiv nervurile), dar cu precdere la frunzele mai n vrst. n cazul carenelor severe, acestea ajung mai repede la faza de senescen i mor. Frunzele mai tinere i menin mai mult timp culoarea verde, deoarece primesc azotul sub form solubil, transportat din frunzele mai btrne. La tomate spre exemplu, apare i o coloraie roietic a tulpinilor, peiolilor i a suprafeelor inferioare ale frunzelor, cauzat de acumularea antocianilor. La plante crescute n condiii de exces de azot, frunzele sunt colorate n verde nchis, aparatul foliar este bogat, iar raportul parte aerian/rdcin este mare. Fructele de tomate crap, pe msur ce se matureaz. nflorirea i formarea seminelor este ntrziat. Referitor la impactul practicilor de fertilizare i a strii nutriionale a puieilor asupra creterii i stabilizrii plantelor n teren, interesul a fost insuficient n trecut. Cercetrile efectuate de Cabrera i Devereaux (1999) la plante ornamentale au demonstrat c procesul de cretere a plantelor a indicat un rspuns linear i pozitiv, corelat cu statusul plantelor n privina aprovizionrii cu N, la transplantare. La astfel de plante, s-au constatat dou faze distincte de cretere: una n pepinier i o alta n cadrul peisajului propriu zis. Transplantarea din pepinier n teren creeaz o perioad de stres tranziional, perioad critic pentru supravieuirea i stabilizarea acestor plante. Fosforul Fosforul este un element nutritiv esenial pentru toate formele de via (Correll, 1998). Mai mult de 90% din fosforul prezent n sol este fixat i nu poate fi folosit de ctre plante. Poate fi absorbit sub forma anorganic (Pi), n principal ca anion fosfat (PO43-) i mai puin rapid ca anion bivalent (PO42-). Abundena n sol a uneia sau alteia dintre aceste forme depinde de pH-ul solului. Prezena H2PO4- este favorizat de un pH sub 7, iar HPO42- de un pH peste 7. Absorbia Pi se poate realiza prin intermediul transportorilor cuplai cu H+. Aprovizionarea limitat cu P a determinat evoluia a diferite adaptri ale plantelor, respectiv peste 90% dintre speciile de plante posed simbioze de tip micorizal (vezi Micorizele), care totodat au impact asupra expresiei unor transportori. Spre deosebire de azot i sulf, fosforul nu sufer un proces de reducere n plant, ci rmne sub forma fosfat: fie liber, fie legat de compui organici, precum esterii. Fosfatul anorganic se gsete sub form solubil ca Pi (orto-fosfat) sau ca PP (piro-fosfat). Fosforul organic este legat n principal de gruprile hidroxil ale glucidelor sau alcoolilor, pe calea esterificrii. n mod alternativ, Pi se poate lega de alte grupri fosfat, prin legturi piro-fosfat. Formarea i desfacerea legturii piro-fosfat (1) i legturii de tip ester reprezint unul dintre mecanismele principale ale homeostaziei energetice celulare. Prin hidroliza legturii piro-fosfat a ATP se elibereaz circa 30 KJ/ mol. ATP reprezint totodat baza multor ci, precum cea a sintezei acizilor nucleici. Sunt totodat importante i alte fosfo - nucleotide: UTP, CTP i GTP care au rol n metabolismul acizilor nucleici. Un rol deosebit este acela c fosforul are rol structural, deoarece intr n alctuirea membranelor celulare. ntr-un fosfolipid (3), Pi leag partea lipofil a zonei glicerol-acid gras, de partea hidrofil a lipidului, respectiv de colin. Sarcina negativ a gruprii fosfat face ca aceast parte a lipidului s fie puternic hidrofil i compensarea sarcinii negative este realizat prin legtura electrostatic a unui cation bivalent, n special a Ca2+. Unul dintre mecanismele prin care este modulat activitatea proteinelor const n fosforilarea reversibil a proteinei. Procesul este mediat de ctre aciunea kinazelor, care transfer Pi la Ser sau Thr, i fosfataze care elibereaz Pi. n cursul fotosintezei, cerina pentru Pi la nivel de cloroplast (4) este deosebit de mare i este asigurat prin intermediul transportorului Pi triozo -fosfat (aldehida 3-fosfogliceric G3P) prezent la nivelul tilacoidelor. Implicarea P n metabolismul celular este susinut i de cantitatea mare de P depozitat n semine pentru dezvoltarea embrionului, germinare i creterea plantulei. Depozitarea este realizat n vacuole de depozitare (PSV) (5), sub form de inozitol-hexa-fosfat (IP6) (acidul fitic). Acesta

91 este un foarte bun agent de chelatare a cationilor, precum Ca2+, Mg2+ i K+ (fig.5.7.). De asemenea sechestreaz microelemente precum Fe2+ i Zn2+. n cele mai multe sisteme agricole, fosforul a fost identificat ca cel mai frecvent element esenial ntlnit, carenele limitnd producia i ca atare, continu s prezinte un interes deosebit (Jones Jr., 1998). Nivelele sub-optime de P pot determina pierderi de 5-15% din producia maxim. Eficiena folosirii fosforului (PUE) reprezint capacitatea unui genotip cultivat de a funciona bine n Fig.5.7. Rolul fiziologic al fosforului condiiile unei concentraii mici, disponibile de fosfor. Pentru a spori PUE trebuie mbuntite procesele de absorbie, translocare (transport/ partiie/ remobilizare) i utilizare intern (Shenoy i Kalagudi, 2005). n cazul carenei n fosfor, plantele au o culoare verde nchis. Uneori se acumuleaz pigmeni antocianici, iar frunzele cele mai btrne devin brun nchis i mor. Pentru c fosfatul este uor distribuit de la un organ la altul, este uor pierdut din frunzele mai btrne i se acumuleaz n frunzele mai tinere, flori, semine. Prin urmare, simptomele carenei apar mai nti la frunzele mai mature. Excesul fosforului induce o sporire a creterii rdcinii, comparativ cu creterea prii aeriene, deci invers excesului azotului. Sunt puine cercetrile sau articolele scrise despre efectul concentraiilor mari de fosfor n plante, altele dect cele care privesc n principal asocierea cu nutriia cu Zn i Fe. De asemenea, se cunoate c P promoveaz absorbia Mn. Cercetrile efectuate la tomate au sugerat c o concentraie de 1% n frunz se poate considera ca nivel critic dintre suficien i toxicitate (Jones Jr., 1998). Potasiul Potasiul este un element mineral esenial pentru plante. El reprezint cel mai abundent element n plante (pn la 10% din substana uscat). n sol, K+ se afl ca sruri anorganice solubile n ap (sulfat de potasiu, fosfat de potasiu, azotat de potasiu). Este absorbit sub form de cationi K+. Potasiul reprezint un cation schimbabil. El se afl adsorbit pe suprafaa micelelor de sol i se absoarbe prin schimb de cationi. Transportorii potasiului n plante aparin la trei familii de proteine: permeaze, pentru absorbia K+ (KT/HAK/KUP), familia transportorilor de K+ (Trk/HKT) i transportori de tip cation/proton antiport (CPA) (Gierth i Mser, 2007). Studiile electrofiziologice au sugerat un transport pasiv prin canale de ioni (AKT) i un transport activ prin cotransport simport cu H+ (HAK). Spre exemplu, la Arabidopsis, AKT1 codific un canal selectiv pentru intrarea K+, exprimat n celulele cortexului rdcinii (fig.5.8.). O mare parte din potasiul absorbit este translocat ctre partea aerian, iar procesul este mediat de canale de tipul SKOR, care elibereaz K+ n xilem. De asemenea, este meninut un flux al K+ prin intermediul floemului. Acest ciclu al K+ se consider c prezint importan n homeostazia K+ i asigur un aport constant de cationi pentru a nsoi anionii, precum NO3- n drumul lor ctre partea aerian. K+ are rol n a contrabalansa sarcina negativ a acizilor nucleici (1) i proteinelor (2). De asemenea, are rol n desfurarea reaciilor metabolice, deoarece activeaz numeroase enzime specifice (3). Spre exemplu, izo-formele vacuolar pirofosfatazei (PP aza), care determin acumularea protonilor n vacuol, sunt strict legate de K+. Un alt exemplu semnificativ este cel al

92 sintezei proteinelor mediate de ribozomi, care necesit cantiti mari de K+. De asemenea, statusul K+ n plant poate afecta metabolismul, prin reglarea transcripiei i post-transcripiei enzimelor. Principalul rol al K+ l reprezint generarea potenialului osmotic la nivelul vacuolei (4) i homeostazia apei. Dei nu intr n alctuirea unei molecule organice i nu este un element mineral de structur, potasiul este implicat n numeroase procese fiziologice i biochimice vitale pentru creterea plantelor, pentru obinerea unei recolte de calitate i pentru rspunsul plantelor la factori de stres etc. (Lester i al., Fig. 5.8. Principalele funcii ale potasiului 2010). La concentraii de sub 10g la kg substan uscat, la cele mai multe specii de plante apar deficiene. Asemenea primelor dou elemente prezentate anterior, K+ este uor distribuit din organele mature ctre cele mai tinere i ca urmare simptomele carenei apar mai nti la frunzele btrne. La dicotiledonate, frunzele se decoloreaz iniial, apoi se dezvolt leziuni necrotice. La cereale spre exemplu, mor mai nti celulele din vrful i de pe marginea frunzelor. Sulful Sulful este distribuit n plante n proporie de 0,05- 1,5%. n sol se afl sub forme anorganice i organice, fiind absorbit sub forma anionilor bivalenisulfat (SO42-) (fig.5.9.), prin intermediul transportorilor specifici care folosesc energia generat prin gradientul de H+. De asemenea, sulful poate fi preluat i prin frunze. Sulful este metabolizat n parte la nivelul rdcinii (n funcie de necesitile acesteia), dar n mare parte este translocat ctre partea aerian prin intermediul xilemului. SO42- este foarte mobil i este redus la nivelul prii aeriene. Asimilarea sulfului la nivelul plastidelor implic reducerea SO42- la SO3- i ulterior la S2- care este ncorporat n aminoacidul cistein. Cisteina poate fi direct inclus n proteine sau este transformat n metionin (1). Cisteina conine gruparea SH (tiol), grupare esenial pentru Fig. 5.9. Principalele funcii ale sulfului funcionarea proteinelor, prin formarea i ruperea legturii de sulf (2). Sulful redus (3) este distribuit n plante ca glutation (GSH). Prin urmare, rdcinile primesc cea mai mare cantitate de sulf redus pe calea floemului sub forma tripeptid glutationului (Glu-CysGly). Att la nivel celular, ct i transportul pe distane mari a glutationului se realizeaz prin intermediul transportorilor oligo- peptidici. Surplusul de sulf este depozitat n vacuole sub form de SO42-. Formarea glutationului servete ca transportor mobil al sulfului redus, dar, acesta acioneaz n general i ca tampon redox (precum agent reductor n detoxifierea speciilor reactive de oxigen). De asemenea, fitochelatinele (PCs) (4) cu structura de baz (Glu-Cys )n-Gly (cu n 2-5) au

93 afinitate pentru metale grele i ajut la detoxifierea acestora. Cercetrile recente sunt axate pe creterea producerii de fitochelatine, nu doar pentru a spori tolerana plantelor cultivate la poluani, cum ar fi Cd2+, ci i pentru mbuntirea potenialului de fitoremediere. Sulful este prezent n sulfolipide, prezente n proporie mic n tilacoidele cloroplastului i se consider c acestea au rol n stabilizarea componentelor fotosistemelor. Nivelul sulfolipidelor nu este static n membrane. n general, solurile conin suficient sulf, iar n situaia carenelor apar cloroze ale ntregii frunze, inclusiv a nervurilor. Sulful poate fi absorbit i prin ostiolele stomatelor, sub form de gaz (SO2- poluant) i H2S. Este transformat n HSO3- n prezena apei din celule i sub aceast form inhib fotosinteza i distruge clorofila. Este oxidat apoi la H2SO4, fiind cunoscut efectul toxic al ploilor acide. Nu este distribuit uor din esuturile mature ale unor specii, aa nct simptomele carenei apar nti n frunzele mai tinere, muguri, pri apicale. La unele specii ns, multe frunze devin clorozate n acelai timp sau chiar se clorozez mai nti frunzele mai btrne. Toxicitatea sa este rar, dar poate aprea n solurile saline, cu nivele mari ale srurilor cu SO42-. Calciul Calciul se afl n plante n proporie de 0,1-3,5%. Este absorbit din sol sub form de cation bivalent i pentru c este foarte puin mobil se acumuleaz mai ales n rdcina plantelor i n frunzele btrne. Asemenea potasiului, este un cation schimbabil, rmne adsorbit pe suprafaa micelelor de sol i urmeaz absorbia prin mecanismul schimbului de ioni. Un pH cu valori mari favorizeaz eliberarea ionilor Ca2+ i legarea ionilor H+, deci are loc schimbul K+ - H+. Calciul ptrunde n rdcin prin intermediul canalelor permeabile pentru Ca2+ (fig. 5.10.), unele fiind selective, altele ne-selective. Pentru c este relativ imobil tinde a fi sechestrat in vacuola celulelor mature. Calciul are rol structural i rol de mesager secundar. n plant este utilizat pentru sinteza pereilor celulari, unde microfibrilele de celuloz sunt legate de glicani i pectine. Gruprile carboxil ale pectinelor opuse pot fi coordonate electrostatic de ctre Ca2+ i se confer astfel rigiditate pereilor celulari. Este necesar pentru funcionarea corespunztoare a membranelor biologice. Ca2+ interacioneaz cu gruprile fosfat ale fosfolipidelor, n mod predominant la nivelul feei dinspre peretele celular. Eliberarea calciului sau nlocuirea cu un alt cation compromite rapid integritatea membranei. Aa se explic de altfel efectele negative ale stresului salin i Fig.5.10. Principalele funcii ale calciului faptul c metalele grele precum cupru induc scurgerea electroliilor. Concentraia calciului la nivel de citosol este meninut la valori mici de circa 100 nM, avnd n vedere faptul c, Ca2+ formeaz sruri insolubile cu sulfaii i fosfaii. Aa se explic rolul Ca2+ ca un ideal mesager secundar i faptul c o serie de stimuli (inclusiv factori abiotici i biotici de stres) determin modificri rapide ale Ca2+ liber din citosol. La nivelul citosolului, mpreun cu proteina calmodulin, formeaz complexul calmodulin - calciu, cu implicaii n reglarea multor procese metabolice. Deoarece este un element foarte puin mobil, simptomele carenei se manifest la frunzele tinere (necroza vrfurilor i marginilor, rsucirea frunzelor), apoi necrozarea mugurilor terminali.

94 Sistemul radicular al plantelor n deficit de calciu, apare scurt i puternic ramificat, iar numeroi cercettori consider calciul ca elementul creterii rdcinii. La fructele de tomate, n ser, carena calciului provoac putrezirea zonei pistilare (blossom ent rot- BER). Cercetrile efectuate de Marcelle i Bodson (1979) au reliefat c rezultatele sunt comparabile cu cele cunoscute la mere. n ambele cazuri, K, Ca i Mg sunt implicate n apariia dereglrilor fiziologice. Pe de alt parte, Saure (2001) a precizat faptul c BER poate fi cauzat de dou categorii de factori cu importan egal: o susceptibilitate ridicat la diferii factori de stres, ca urmare a creterii activitii giberelinelor active i a scderii coninutului de calciu, ceea ce mrete permeabilitatea membranelor, iar n al doilea rnd pot interveni unii factori de stres (deficit hidric, salinitate ridicat etc.). La mere, calciul acioneaz antagonist N, iar apariia dereglrilor fiziologice a fost mult studiat. Spre exemplu, un coninut relativ mare de Ca n fruct, asociat cu un raport mic al K/Ca i K+Mg/Ca sunt indicatori ai unei maturri lente, ai ntrzierii senescenei (Marcelle, 1990). n legtur cu apariia ptrii amare (bitter pit), aplicarea tratamentelor cu calciu (azotat de calciu 1,5% cu 1-2 luni nainte de recoltarea sau chiar nainte de depozitare) previne apariia acestei dereglri fiziologice. Cercetrile efectuate de Dris i al. (1998) au reliefat incidena dereglrilor fiziologice la soiuri de mere, dup 3 luni de pstrare n proporie de 2-13%, iar dup 6 luni o proporie de 10-95%. Fructele care au avut un coninut de calciu de sub 45 mg/kg mas proaspt au fost susceptibile la bitter pit i ptarea Jonathan (Burzo i al., 2000; Delian i al., 1996, Delian i al.,2000). Excesul de calciu determin scderea permeabilitii membranelor plasmatice i reduce creterea fructelor. Cercetrile efectuate la tomate, cu privire la compoziia i calitatea acestora, au demonstrat faptul c, coninutul total n licopen i caroten a sczut odat cu creterea concentraiei calciului n soluia nutritiv, datorit reducerii absorbiei K (Paiva i al., 1998). Magneziul Magneziul se afl n plante n procent de 0,05- 0,7%, iar concentraia sa n sol variaz ntre 0,05-0,5%. n sol se afl sub form de magnezit, dolomit, sulfat de magneziu i silicai. Mg este absorbit sub form de Mg2+, fiind un element schimbabil. Magneziul este constituent al clorofilei i este prezent n numeroase procese fiziologice ca activator al enzimelor. Stimuleaz de asemenea asocierea unitilor ribozomale, pentru formarea ribozomilor (fig.5.11.). Simptomele carenei (cloroz Fig. 5.11. Principalele funcii ale magneziului inter-nervuri, conducnd la necroze) apar mai nti la frunzele btrne, datorit mobilitii mrite a acestui element mineral. O alt caracteristic este abscisia prematur a frunzelor. La mr este specific desfrunzirea lstarilor, rmnnd doar cteva frunze n vrf, iar dereglarea fiziologic este denumit boala n penson. La spanac, frunzele capt consistena hrtiei i prezint pete albicioase. Fierul Fierul este necesar n cantiti mai mici comparativ cu principalele elemente, dar mai mari fa de microelemente. Ca urmare, unii autori l consider macroelement, alii microelement. El se afl n sol sub form de oxizi i hidroxizi i este absorbit att sub form de ion feros (Fe2+), ct i de ion feric (Fe3+). Prima form se regsete n cazul solurilor acide, iar cea de-a doua

95 n cazul celor alcaline i neutre. Din cauza insolubilizrii sale, se recomand folosirea agenilor de chelatare. Cercetrile efectuate de Tomasi i al. (2009) prin utilizarea aplicrii foliare, au condus la ideea c sporirea eficienei folosirii fierului implic i activarea mecanismelor de absorbie care opereaz la nivelul frunzelor. Starea fiziologic activ este forma bivalent, iar la nivel celular are loc trecerea de la forma trivalent, la cea bivalent. Fierul intr n alctuirea enzimelor implicate n transferul electronilor, respectiv n citocromi. Este oxidat reversibil de la fier bivalent, la fier trivalent n timpul transferului electronilor. Este constituent al catalazei, peroxidazei, feredoxinei etc. Acioneaz de asemenea ca i co-factor pentru numeroase enzime. Are un rol deosebit n respiraie i fotosintez. Carena specific const n cloroza inter-nervuri, mai nti la frunzele tinere, fiind greu mobil. n cazul carenei severe, prelungite, se clorozeaz i nervurile, iar ntreaga frunz devine albicioas. Cuprul Cuprul este necesar plantelor n cantiti mici, sub forme de urme, iar cantitile mari existente n sol sunt toxice pentru plante. n cazul solurilor bogate n turb, adugarea de sulfat de calciu determin creterea productivitii. Este obinut din sol mai ales din calcopirit (CuFeS2), iar absorbia se realizeaz sub form de ioni cuprici (Cu++). Asemenea fierului, cuprul este asociat cu numeroase enzime implicate n procesele de oxido-reducere (ex. n plastocianin, care intervine n transferul electronilor pe parcursul fazei de lumin a fotosintezei; citocrom oxidaza; polifenol oxidaza). Este co-factor pentru enzimele reductoare. Este de asemenea fungicid. Simptomele carenei se observ mai nti la vrful frunzelor tinere, care apar verde-nchis, apoi apar pete necrotice, care se extind bazal pe marginile frunzelor. n condiii de deficien sever, frunzele cad prematur. Borul Borul este prezent n sol n cantiti foarte mici. Plantele l utilizeaz sub forma anionilor borat (BO3-) i tetraborat, iar disponibilitatea sa scade cu creterea valorii pH-ului. Exist sub trei forme: acid boric, borat de calciu sau magneziu i respectiv ca silicai. Borul are un rol deosebit n metabolismul hidrailor de carbon, a lipidelor i hormonilor. El influeneaz translocarea glucidelor, absorbia activ a srurilor i procesul de nodulare la leguminoase. Simptomele carenei se manifest la frunzele tinere i mugurii terminali, sub form de pete necrotice, cu deformarea, decolorarea i dezorganizarea esuturilor meristematice. n cele din urm, are loc moartea punctelor de cretere. Se pierde dominana apical, plantele devin puternic ramificate, dar apexurile ramurilor se necrozeaz repede, din cauza inhibrii diviziunii celulare. Dintre speciile pomicole, mrul este foarte sensibil la carena n bor. Are loc deformarea, suberificarea i crparea fructelor. De asemenea, structuri precum fructele, rdcinile i tuberculii prezint necroze i brunificri ale esuturilor interne. Zincul Zincul este necesar sub form de urme, iar concentraiile mari sunt toxice. El se afl n sol sub form mineral cu fier i magneziu (ex. magnetit). Plantele l folosesc sub form de Zn2+ adsorbit pe suprafaa particulelor de sol i pe materiile organice sub form schimbabil. Este disponibil plantelor n condiiile solurilor acide. Are un rol important n sinteza proteinelor (n absena sa se nregistreaz o cretere marcant a nivelului compuilor solubili cu azot). Este un element mineral cu rol important n activitatea unor enzime. Este necesar la unele plante pentru sinteza clorofilei. De asemenea, zincul favorizeaz procesul de cretere al plantelor, deoarece stimuleaz formarea triptofanului (care se consider a fi un precursor al auxinei).

96 Carena n Zn induce reducerea creterilor inter-nodale, frunzele sunt mici, apar cloroze inter-nervuri la frunzele mai btrne (ex. fasole), urmate de apariia petelor necrotice, cu extindere de la vrf, ctre margini. Pomii sunt foarte afectai de carena n Zn. Frunzele rmn mici, ca o rozet boala micilor frunze, mai ales la piersic. La gutui, frunzele se nglbenesc, se alungesc, iar la prun apar pete brune n pulpa fructelor. La cire i pr, mugurii floriferi se desfac puin, ovarul nu crete, iar fructele cad. Siliciul Acest element mineral util are un efect favorabil asupra rezistenei plantelor la boli i duntori. De asemenea, plantele devin mai rezistente la cdere, fiind depozitat n pereii celulari (mai ales la Equisetaceae, Gramineae). Efectul metalelor grele asupra fiziologiei plantei Metalele grele, precum Cd, Pb, Cu, Ni au numeroase efecte directe i indirecte asupra tuturor proceselor fiziologice din plante (Kastori i al., 2000). Concentraiile mari de metale grele altereaz funciile enzimelor, deterioreaz membranele celulare, provoac dezechilibre hormonale i induc modificri structurale i ultrastructurile, inhib fotosinteza, i elongaia celular etc. n general, cercetrile n domeniu s-au axat pe efectele metalelor grele asupra fotosintezei i nutriiei minerale. Experimentele efectuate n cultur hidroponic au avut ca scop cuantificarea efectelor a diferite concentraii de metale grele asupra morfologiei i anatomiei rdcinii i frunzelor. S-a evideniat faptul c la nivelul rdcinii s-a acumulat o concentraie maxim a metalelor grele, comparativ cu frunzele i tulpinile. Excesul de metale grele a redus volumul rdcinilor, suprafaa total i lungimea total a acestora. De asemenea, s-a redus nlimea plantelor, suprafaa foliar i grosimea mezofilului, iar densitatea stomatelor a crescut. Toate aceste modificri au influenat regimul hidric al plantelor. 5.5. Adaptri ale sistemului radicular pentru favorizarea aprovizionrii plantei cu ap i substane minerale 5.5.1. Simbioza dintre ciupercile micorizante i rdcinile plantelor - Micorizele A tri mpreun este o situaie comun lumii biologice, n special n cazul plantelor i n condiiile mediului subteran (Bonfante-Fasolo i Silvia Perotto, 1992). Asociaiile simbiotice dintre anumite plante i microorganisme joac un rol important n mbuntirea caracteristicilor solului i totodat mbuntesc creterea, precum i nutriia mineral a plantelor (Diouf i al., 2003). Odat cu colonizarea ecosistemelor terestre, plantele i-au Fig. 5.12. Micoriza (sol plant dezvoltat numeroase mijloace pentru a face fa aciunii a ciuperc) diferii factori biotici i abiotici, iar una dintre cele mai reuite strategii este capacitatea sistemului radicular de a stabili relaii mutuale, simbiotice, reciproc avantajoase, cu microorganisme, respectiv cu diferite grupe de ciuperci (fig. 5.12.; fig.5.13.). Micorizele sunt simbioze dintre rdcinile plantelor superioare cu hifele unor ciuperci i se regsesc la peste 90 % din speciile de plante, fiind difuze i adesea nespecifice. Astfel, cnd miceliul ciupercii colonizeaz i leag mpreun rdcinile a dou sau mai multe plante, aparinnd uneori mai multor specii, se formeaz o reea micorizal comun (CMN). Aceasta este o component major a ecosistemelor terestre, cu efecte importante asupra comunitii plantelor (Selosse i al., 2006).

97

Fig. 5.13. Diferite tipuri de interaciuni

5.5.1.1. Principalele avantaje ale plantelor cu micorize i importana practic a micorizelor Micorizele prezint o importan deosebit pentru plante i pentru ecosistem. Printre principalele beneficii pentru plante se pot aminti: creterea capacitii de aprovizionare cu substane nutritive, prin extinderea volumului de sol accesibil plantelor; absorbia nutrienilor, care n mod normal sunt sub form inaccesibil plantelor; unele ectomicorize i ciuperci ericoide au capacitatea de a biodegrada compui fenolici n sol, care la rndul lor pot s interfereze cu absorbia de nutrieni; asigur protecie fa de agenii patogeni i nematozi; efecte non-nutriionale asupra plantelor, de tipul modificrilor regimului hidric, concentraiei fitohormonilor, asimilarea carbonului etc.; beneficii legate de creterea produciei, acumularea elementelor minerale, efecte asupra reproducerii, modificri de cretere n privina arhitecturii rdcinii, esutului vascular; evitarea plantelor competitive non-gazd; transfer semnificativ al carbonului, prin intermediul miceliului, cu efecte asupra reducerii competiiei ntre plante i asigurrii stabilitii ecosistemelor, transfer de nutrieni de la plante moarte, la plante vii etc.

98 Alte roluri ale micorizelor n ecosistem: asigurarea ciclului nutrienilor i prevenirea pierderii din ecosistem; transport de carbon din rdcinile plantelor, ctre alte organisme din sol implicate n procese ale ciclului de nutrieni; hifele din sol pot interveni n ciclul nutrienior, prin preluarea de substane de la ciuperci saprofite; fructificaiile ciupercilor micorizante i rdcinile cu micorize constituie surse de hran i habitat pentru nevertebrate; influeneaz populaiile microbiale din sol i exudatele de la nivelul micorizosferei i hifosferei; hifele micorizelor vezicular arbusculare contribuie la realizarea structurii solului, respectiv la agregarea particulelor de sol etc. Prin urmare, datorit funciilor lor n exploatarea eficient a resurselor minerale din sol i a rolului lor bioprotector mpotriva a numeroi ageni patogeni de sol, micorizele sunt instrumente potrivite pentru supravieuirea multor specii de plante n diferite ecosisteme, inclusiv a multor specii de plante cultivate. Cercetrile ultimilor ani cu privire la asociaiile simbiotice micorizale i noile metode moleculare aplicate n investigaiile comunitilor fungice micorizale au deschis o perspectiv multifuncional, incluznd mobilizarea azotului i fosforului din polimerii organici, eliberarea nutrienilor din particulele minerale sau suprafaa rocilor, efecte asupra ciclului carbonului, interaciunea cu plantele mico heterotrofe, medierea rspunsului plantelor la factorii de stres (uscciune, acidifierea solului, metale toxice, patogeni), precum i o varietate de posibile interaciuni cu grupuri de alte miroorganisme din sol (Finlay, 2004). n continuare sunt prezentate cteva exemple privind importana practic a micorizelor. n urma studiilor efectuate n condiii controlate, prin infectarea rdcinilor la via de vie, cv. Pinot Blanc, cu Pseudomonas fluorescens i Glomus mosseae, cel mai semnificativ rezultat a fost c ambele tratamente efectuate au redus simptomele clorozei la via de vie altoit pe portaltoiul sensibil (101-14) (Bavaresco i Fogher, 1996). La cpun, tratamentele cu ciuperci vezicular arbusculare, asociate cu aplicarea fosforului au sporit masa uscat i proaspt a tulpinilor; suprafaa frunzelor i numrul de frunze, comparativ cu aplicarea doar a fosforului. Se demonstreaz de altfel c practic, este posibil creterea numrului stolonilor la cpun, prin inocularea plantelor cu VAM, tehnic care poate fi folosit de productorii de material sditor, pentru producerea platelor certificate de cpun (Khanizadeh i al., 1995). De asemenea, ciupercile vezicular-arbusculare simbiotice la cpun au favorizat creterea i absorbia nutrienilor (Kawai i Hotta., 1994), iar la Vinca s-a determinat o toleran a plantei la alcalinitatea apei de irigare i respectiv o sporire a absorbiei P, asociat cu sporirea activitii fosfatazei alcaline (Cartmill i al., 2008). Totodat, cercetrile au demonstrat c plantele de cartof pre-inoculate cu VAM au rezistat mai eficient la infecia cu patogenul Rhizoctonia solani, comparativ cu plantele ne-micorizate (Nasim i al., 1996). n cazul plantelor de fasole, eficiena simbiozei a depins de combinaia particular a ciupercii care provoac VAM, rasa de Rhizobium implicat, precum i soi, iar n toate combinaiile VAM i rhizobia au sporit semnificativ producia de psti (Daniels-Hylton, 1994). Referitor la rezistena plantelor de tomate n condiii ale concentraiilor mari de sruri n sol, n urma cercetrilor efectuate de Coperman i al.(1996) s-a demonstrat c dei AM originar din soluri saline nu a promovat creterea plantelor, reducerea concentraiei clorului n frunz, mediat de ciupercile arbuscular-micorizale, la nivele moderate de salinitate, poate avea implicaii benefice pentru supravieuirea plantelor pe soluri saline. Trebuie de asemenea remarcat efectul benefic al inoculrilor cu VAM asupra legumelor cultivate n condiii aride (Tarafdar i Rao, 1997).

99 Bethlenfalvay i Barea (1994) au reliefat rolul micorizelor n cadrul agriculturii durabile. VAM colonizeaz rdcinile plantelor, dar i solul din jurul acestora. Ele transfer elementele minerale din sol n plant i respectiv substanele cu carbon din plante, ctre sol, avnd deci un dublu rol, att asupra plantei, ct i asupra compoziiei microflorei solului. Experienele cu ciuperca Glomus mosseae (Nicol i Gerd.) Gerd. nu au modificat semnificativ producia de smn (8%), dar s-a mbuntit agregarea particulelor de sol cu 400%, ntr-un sol bogat n materie organic i fosfor. n cazul unui sol cu coninut mic de materie organic i fosfor, producia de smn a crescut semnificativ (57%), dar au fost doar modificri mici n ce privete agregarea particulelor de sol (50%). Deci, alocarea carbonului n plant (msurat ca producie de smn) i sol (msurat ca formare a agregatelor stabile n ap) este influenat de VAM. Se pare c ciupercile micoritice afecteaz i controleaz din punct de vedere biologic, dou aspecte ale agriculturii durabile: producia plantelor i calitatea solului. Producerea artificial a micorizelor cu ciuperci eficiente reprezint o alternativ fa de chimizarea solului, prin creterea eficienei de preluare a nutrienilor i reducerea necesitii de administrare a ngrmintelor. Se poate asigura dezvoltarea unor plante, care, altfel, tolereaz greu solurile cu fertilitate sczut sau diferite sisteme improprii (Zamfirache i Toma, 2000). Micorizele arbusculare influeneaz benefic calitatea solului, prin aciunea combinat a hifelor extracelulare i a glomalinei. Glomalina este o substan de natur proteic, insolubil, hidrofob (Bedini i al., 2009), a crei concentraie variaz de la 1,6 la 2,3 mg /g sol (Bedini i al., 2010). De asemenea, Ingleby i al. (2007) au demonstrat beneficiile inoculrii cu fungi micorhizali pentru creterea plantelor lemnoase i au confirmat c plantele de cultur i arborii mpart aceiai fungi micorizali. Plantele lemnoase acioneaz ca rezervoare pentru fungii micorizali inoculani sau indigeni, pentru plantele de cultur din jur sau alt vegetaie anual. 5.5.1.2 Tipuri de micorize n funcie de morfologia lor, de specia de plant i respectiv ciuperca implicat, se pot distinge cteva tipuri de asociaii simbiotice dintre rdcinile plantelor i unele specii de ciuperci: ectomicorize, endomicorize, micorizele specifice plantelor ericacee, micorizele specifice orhideelor, tipul arbutoid, tipul monotropoid specific pentru Monotropa. Cele de tip arbutoid sunt specifice la Arbutus i Pyrola, sunt sub form de manta de hife, reea Hartig, dar totodat penetreaz i pereii celulari ai celulelor epidermei. n principal ns, se poate vorbi despre dou grupuri mari: 1) ectomicorize (ECM) Acestea sunt specifice pentru Angiosperme i Gymnosperme lemnoase (Fagaceae, Betulaceae, Salicaceae, Juglandaceae etc.). Ciupercile care intervin ca microsimbioni aparin la Zygomycota, Ascomycota, Basidiomycota. Ciupercile alctuiesc o manta de hife n jurul rdcinilor (exceptnd esutul meristematic din apexul rdcinii), iar o parte din miceliu dezvolt hif e inte Fig. 5.14. Aspectul unei rcel rdcini ula care prezint ectomicoriz re, pen etrnd printre celulele corticale, alctuind ceea ce se denumete reeaua Fig.5.15. Detalii privind ectomicorizele Hartig (fig.5.14., fig.5.15.).

100 Hifele care intr n alctuirea mantalei, plus cele din reeaua Hartig reprezint circa 40% din totalul miceliului. Restul de 60% se prelungesc n sol i formeaz o reea, cu o capacitate sporit de absorbie. 2) endomicorize (ENM) Astfel de micorize se ntlnesc la aproape toate speciile erbacee angiosperme (exceptnd unele specii de Chenopodiaceae i Crucifere). Aa numitele micorize vezicular arbusculare se gsesc la circa 90% din plantele de pe glob. Ciupercile implicate aparin diviziunii Glomeromycota. n cazul acestui tip de micoriz, hifele odat ptrunse n rdcini nu se rspndesc doar n spaiile intercelulare, ci ptrund n interiorul celulelor cortexului. La acest nivel, se formeaz structuri de tip ovoid denumite vezicule sau de tip rmuros, denumite arbusculi (fig. 5.16.; fig.5.17.). Arbusculii par a fi de altfel locul unde are loc transferul substanelor minerale ntre ciuperc i planta gazd. n vezicule se depoziteaz substane de rezerv. Deci, ciuperca nu formeaz un manon, iar cantitatea hifelor este mai redus, comparativ cu masa total a rdcinilor, Fig. 5.16. Aspectul unei fr a depi 10% din masa acestora. rdcini care prezint Rolul acestor micorize este acela de a uura absorbia endomicoriz de tip fosforului i a urmelor de metale, spre exemplu zinc i cupru. vezicular arbuscular Cercetrile au demonstrat c n urma existenei asociaiilor, rata de transport a fosforului a fost de 4 ori mai mare dect n cazul rdcinilor neinfectate. n ceea ce privete mecanismul transferului elementelor minerale, dac n cazul ectomicorizelor, fosforul anorganic poate fi eliberat din hife n reeaua Hartig, urmnd a fi absorbit de celulele corticale, la VAM mecanismul pare mai complex. Substanele nutritive pot fi eliberate din arbusculi intaci, n celula infectat, urmnd a difuza n celulele cortexului. Unii arbusculi pot s degenereze n mod continuu. n acest caz coninutul lor este practic deversat n celula gazd, de unde urmeaz a fi repartizat n ntreaga plant. Fig.5.17. Detaliu privind endomicorizele Desigur, fiind vorba despre asociaii simbiotice, ciuperca primete de la gazd glucide, n schimbul favorizrii absorbiei de ctre aceasta a elementelor minerale din sol. Extinderea unor astfel de asociaii depinde de starea de fapt a gazdei, relativ la nutriia sa. n cazul deficienelor n aprovizionarea cu fosfor, tind a se forma micorize. Dac plantele sunt crescute ntr-un sol fertilizat corespunztor, micorizele tind s dispar. Micorizele de tip ericoid (ERM) Astfel de micorize sunt caracteristice plantelor din familia Ericaceae (arbuti i subarbuti cu frunze cztoare sau persistente). Ciupercile implicate aparin diviziunilor Ascomycota i Basidiomycota. Fiziologia micorizelor ericoidale difer n parte de ectomicorize i VAM. Caracteristic pentru ERM este procesul degenerrii hifelor micobiontului n interiorul celulei plantei. Micobiontul d plantei n special fosfor, azot i anumite microelemente i primete de la plant glucide. ERM d posibilitatea creterii unor specii de plante pe soluri de altfel nepretabile creterii acestora i sporesc rezistena fa de efectele metalelor grele. n acest sens, trebuie amintit faptul c s-a reuit mrirea rezistenei unor plante cultivate, prin infectarea cu ciuperci micoritice, care s le permit dezvoltarea pe terenuri " obosite" sau prea poluate cu metale grele. Metoda se practic deja la via de vie, pe solurile saturate cu Cu2+ , procednd la infecii cu ciuperci, care provoac formarea endomicorizelor - VAM.

101 Micorizele orchideoidale (ORM) Acest tip de micoriz este diferit de celelalte tipuri, fiind limitat la familia Orchidaceae (fig. 5. 18.).

Fig. 5.18. Micorizele la orhidee

Ciupercile asociate orhideelor sunt frecvent reprezentate de Basidiomycota ale ordinului Tulasnellales, care n mod normal sunt parazite. Sunt ns i forme saprofite, capabile s utilizeze substraturi cu carbon, precum celuloza i lignina. Este o situaie cu totul diferit, deoarece direcia de transport a glucidelor este cu totul opus, de la ciuperc, la plant. Micoriza este important pentru germinarea seminelor i n continuare, pentru creterea orhideelor. Plantulele de orhidee sunt complet dependente de ciuperca partener, n ceea ce privete absorbia nutrienilor i deci a creterii. Ciuperca nu formeaz o manta de hife, ci hifele penetreaz n interiorul celulelor. n principal, ciuperca transform hidraii de carbon n protocormul orhideelor. Odat cu formarea cloroplastelor i deci cu desfurarea fotosintezei, importul hidrailor de carbon devine mai puin important. Orhideele verzi, mature, sunt privite ca autotrofe, dac ne referim la asigurarea lor cu hidrai de carbon. Totui, rata lor de cretere rmne dependent de activitatea metabolic a miceliului. Absorbia fosforului, rmne s fie realizat prin intermediul ciupercii. Mutualismul simbiotic poate ns devia n orice moment ctre parazitism, iar rezultatul ulterior este moartea plantei. Pe de alt parte, o anumit ciuperc simbiotic poate fi eliminat de orhidee. Un exemplu extrem de endomicoriz este cel de la orhidea Neottia nidus-avis (heterotrof), care triete exclusiv pe seama endomicorizei. 5.5.1.3. Particulariti ale micorizelor vezicular- arbusculare Compatibilitatea plantelor cu ciuperci micorizante Compatibilitatea plantelor cu ciuperci micorizante constituie un fenomen generalizat i vechi. Specii aparinnd la cca 90 % din familiile de plante sunt capabile s stabileasc micorize vezicular arbusculare. Probele fosilizate sugereaz c simbioze de acest fel au existat cu > 400 milioane ani n urm, n esuturi ale primelor plante terestre (Remy i al., 1994). Prin urmare, capacitatea plantelor de a forma AM trebuie s fie sub controlul mecanismelor care s-au conservat n noile specii de plante, care au aprut pe parcursul evoluiei. Aceast compatibilitate implic de asemenea faptul ca anumite procese de recunoatere selectiv specifice plantelor, s fac discriminarea ntre microorganismele benefice i cele duntoare. Determinanii genetici eseniali pentru stabilirea AM sunt comuni la o parte extins a regnului vegetal. n ciuda numrului mare de gazde i a originii foarte ndeprtate, micorizele vezicular arbusculare sunt formate prin intermediul unor ciuperci ficomicete septate aparinnd la 4 genuri: Glomus, Gigaspora, Acaulospora i Sclerocystis. n ultimii ani au fost efectuate studii multiple privind AM. Exist totui numeroase carene n privina fiziologiei i geneticii lor, pe de o parte din cauza complexitii sistemului biologic i pe de alt parte statutului ciupercilor micorizante arbusculare, ca simbioni obligai. Totui, cercetrile recente au permis parcurgerea unor pai importani ctre elucidarea mecanismelor din plante care guverneaz simbiozele arbusculare, folosind mutante de plante "

102 micoriza- deficiente", tehnici de citologie i biologie molecular i comparnd interaciunile plantelor cu microorganismele, n alte sisteme. Spre exemplu: a fost identificat o nou clas de proteine cunoscut sub numele de hidrofobine, izolate n ectomicoriza i hifele ciupercii Pisolithus tinctorius (Martin i al., 1995), posibil a fi implicate n procesul de agregare a hifelor i realizarea legturii cu rdcinile pantelor, n vederea formrii mantalei (Tagu i al., 1996). Colonizarea rdcinii, recunoaterea i rspunsul la nivel celular Stabilirea relaiilor simbiotice implic dezvoltarea unor adaptri specifice pentru ambii parteneri i coordonarea programelor lor de dezvoltare, cu semnale specifice. Plantele produc un semnal timpuriu, pentru a iniia interaciunea. Ciuperca produce cel puin trei semnale: unul difuzibil, un al doilea la nivel local, care permite plantei s detecteze poziia apresorului i n cele din urm un semnal autonom celulei, n celulele colonizate, care induc expresia genelor. La nivel de plant, s-a identificat recent semnalul iniial, respectiv strigolactona. De asemenea, s-au caracterizat componentele programului simbiotic, din punct de vedere genetic i anatomic (Reinhart, 2007). Totodat, cercetri recente au abordat bazele moleculare ale recunoaterii i au precizat cile comune n cazul asociaiilor altor microorganisme cu plantele, precum i cile specifice micorizelor arbusculare ( Requena i al. 2007) (fig. 5.19.). Schimbul de semnale i recunoaterea dintre planta gazd i ciuperci micorizante arbusculare se iniiaz nainte ca partenerii s intre n contact fizic. Astfel, metaboliii exudai de rdcinile plantelor, sporesc n mod specific germinaia sporilor i creterea ciupercii, comparativ cu exudatele rdcinilor plantelor non-gazde, care n-au acest efect. Dei, flavonoizii au fost propui ca i molecule active (Phillips i Tsai, 1992), ei nu sunt n mod absolut eseniali n interaciunile gazd- ciuperc (Becard i al., 1995). Cel dinti fenomen definit al recunoaterii n ciuperc este inducerea de ctre gazd a ramificrii hifelor, urmat de formarea apresoriilor pe suprafaa rdcinii. Celulele epidermice i hipodermice care vin n contact cu aceste prime structuri ale infeciei nu exprim modificri citologice Fig. 5.19. Ci ale recunoaterii, n vederea stabilirii simbiozei semnificative sau rspunsuri tipice de aprare (GianinazziPearson i al., 1996). Ciuperca invadeaz rdcina, att intercelular ct i intracelular. Reacia plantei la traversarea de ctre o hif a celulei epidermice sau hipodermice este aparent redus la sinteza unei membrane derivat din gazd i depunerea de material specific pentru peretele celular, n mod continuu, n jurul ciupercii. Dezvoltarea ciupercii este limitat la nivelul esuturilor externe ale rdcinii i hifele nainteaz ncet ctre parenchimul cortical intern, unde miceliul prolifereaz intercelular de-a lungul rdcinii. Aici, hifele se ramific intracelular i difereniaz structuri caracteristice acestei simbioze - arbusculi. Arbusculii sunt structuri efemere. Arbusculii individuali i ating dezvoltarea complet n cteva zile,

103 apoi ncep s degenereze. La nivelul celulelor care conin arbusculi sunt induse modificri citologice de amploare. Vacuolele se reduc ca mrime, n timp ce volumul relativ al citosolului crete, iar organitele celulare (mitocondrii, plastide, dictiozomi i reticulul endoplasmatic) prolifereaz. Acumularea apocarotenoizilor sugereaz o reorganizare dramatic a plastidelor responsabile pentru biosinteza acestor compui. Plastidele par a fi organite cheie pentru stabilirea interfeei simbiotice, n cazul micorizelor arbusculare (Fester i al., 2007). Odat cu dezvoltarea arbusculului i reactivarea compartimentrii celulare, nucleul celulei plantei se deplaseaz ctre centrul celulei i este supus hipertrofierii. Este evident c, o asemenea reorganizare a coninutului celulei gazd necesit sinteza unor componente ale citoscheletului, deoarece n celulele colonizate este nsoit de activarea transcripional a genei din plant pentru - tubulin (Bonfante i al., 1996). Nucleul este caracterizat prin creterea sensitivitii nucleazei i dispersia cromatinei. Toate aceste modificri reflect o de-condensare a cromatinei, care este un indiciu al unei puternice activiti de transcripie a genomului plantei, n celulele cu arbusculi. naintarea ramificaiilor ciupercii n celulele gazd provoac sinteza de novo a membranei periarbusculare (PAM). Aceasta este derivat din membrana plasmatic periferic i nconjoar complet arbusculul. Suprafaa rezultat la contactul dintre protoplastul celulei gazd i celule ciupercii, creeaz interfaa simbiotic. Este o zon special a apoplastului, zon pentru realizarea schimbului de nutrieni dintre simbionii micorizei. Interfaa simbiotic i rolul acesteia n realizarea schimburilor ntre simbioni Biosinteza intens a membranei periarbusculare este asociat cu activitatea de construire specific a peretelui celular. De altfel, ca i n situaia celulelor epidermei sau hipodermei, materialul specific este depozitat mpotriva invadrii hifelor ciupercii, de ctre protoplasma celulei plantei. Totui, n celulele parenchimului cortical, acest material specific pentru perete celular se subiaz progresiv spre exterior, n jurul ciupercii n cretere, formnd un matrix de fibrile dezorganizate, care separ membrana periarbuscular de peretele celular al arbusculului, crendu-se o zon interfacial de 100 nm sau mai puin. Cnd arbusculii ncep s devin senesceni, materialul fibrilar ncapsuleaz structurile fungice ajunse la colaps. Ulterior, nucleul gazdei, citoplasma i vacuola i recapt aspectul dinainte ca celula s fie invadat, ceea ce demonstreaz dezvoltarea plasticitii celulelor parenchimului cortical al rdcinii. Semnificaia compoziiei moleculare a interfeei simbiotice este n prezent un subiect nc de dezbtut. Peretele celular derivat al plantei poate n mod simplu s previn contactul fizic dintre peretele celular al hifei i suprafaa protoplastului celulei plantei. Totui, detecia n acest compartiment celular a proteinei din grupul 1-PR, care nu-i depozitat n jurul hifelor care traverseaz celulele epidermice i hipodermice poate reflecta un rspuns defensiv nespecific, care poate contribui la controlul rspndirii ciupercii n gazd (Gianinazzi- Pearson i al., 1996). Proteinele PR implicate n rspunsul defensiv al plantelor includ: chitinaze acide sau bazice i 1.3-glucanaze, care sunt hidrolaze antimicrobiene (Collinge i al., 1994). O alt posibilitate, ar fi ca moleculele acumulate n interfaa simbiotic s poat aciona ca semnale pentru recunoaterea ntre plante i ciuperci. Mai mult dect att, pn cnd nu sunt cunoscute capacitile heterotrofe ale ciupercilor arbusculare, nu se poate exclude faptul c, precursorii peretelui celular asigur de asemenea o surs de carbon redus simbiontului fungic (Smith i Smith, 1990). n ceea ce privete natura chimic a moleculelor transferate transversal interfeei simbiotice, aceasta nu este definit. ns, n contextul general al micorizelor plantelor, esutul micorizal funcioneaz ca un rezervor fungic pentru carbonul asigurat ca fotosintetizant i ca surs de fosfat, transportat din sol, n rdcin, pe calea ciupercii (Shachar-Hill i al., 1995). Schimbul nutritiv poate fi asigurat prin transportul pasiv al soluiilor n interfa, urmat de absorbia activ de ctre celulele simbiont, traversnd membranele. Trebuie precizat c membrana periarbuscular (PAM) nu este diferit structural i citochimic de plasmalema periferic. Faptul c la nivelul ei are loc un transport activ deriv din observaia c exist o H+ - ATP-az i activiti ale fosfatazei nespecifice, la interfaa simbiotic a ctorva plante. Rolul principal al H+ - ATP-azei ar fi acela de transport al nutrienilor, n ambele sensuri. Deversarea fosfatului din apoplastul interfacial, n

104 celula plantei, va avea loc mpotriva gradientului de concentraie. Fora motrice a protonilor poate asigura energia necesar pentru transportul acestui anion ntr-un sistem simport. Pomparea protonilor odat cu activarea pompei de protoni n membrana (PAM), poate acidifia apoplastul interfacial. Scderea pH-ului este posibil s contribuie la scderea fermitii peretelui celular, lucru observat n timpul dezvoltrii arbusculilor, fie prin ruperea legturilor acid-labile, fie prin activarea enzimelor litice n peretele celular (Rayle i Cleland, 1992). Modularea H+-ATP-azei la nivelul plasmalemei de ctre proteinkinaze a fost implicat n transducia semnalului, care regleaz rspunsul defensiv al plantei n interaciunea cu patogenii fungici (Xing i al., 1996). 5.5.2. Fixarea biologic a azotului Simbiozele de tip rhizobial i actinorhizal Azotul este elementul nutritiv necesar plantelor n cea mai mare cantitate. n agricultur, disponibilitatea azotului are o influen major att asupra cantitii ct i asupra calitii produciei (Stougaard, 2000). n biosfer, azotul este prezent n mai multe forme: atmosfera conine azot molecular (N2), n proporie de circa 78 % din volum. Aceast form nu poate fi direct asimilat de plante, fiind necesar ruperea legturilor covalente triple, dintre 2 atomi (N N). Plantele nu au aceast capacitate. Pe de alt parte, azotul prezent sub form de nitrat sau amoniu este uor asimilat de plantele superioare. Fixarea azotului molecular prin aciunea microorganismelor se desfoar n cursul procesului denumit " fixarea biologic a azotului ". Acest proces se realizeaz fie prin intermediul bacteriilor care triesc libere, fie prin intermediul celor asociate simbiotic cu plantele superioare, n special cele care aparin familiei Leguminosae. Acesta reprezint principalul proces prin intermediul cruia azotul ptrunde n ecosistemele naturale, iar fixarea asociat cu plantele vasculare contribuie n cea mai mare msur la azotul adugat (Cleveland i al., 1999). Se cunosc o varietate de microorganisme care pot contribui la fixarea azotului. n cazul plantelor superioare se pot aminti cteva asociaii simbiotice (tabelul 5.4.). Tabelul 5.4. Asociaii simbiotice pentru fixarea azotului molecular la plante superioare Nr. crt. 1 2 3 Planta Plante leguminoase Alnus Ierburi tropicale Microorganismul Rhizobium, Bradyrhizobium Frankia Azospirillum

Dup unii cercettori, bacteriile implicate n acest proces aparin la patru genuri: Rhizobium Bradyrhizobium Sinorhizobium Azorhizobium - Photorhizobium este un alt grup, propus recent. 5.5.2.1. Particulariti fiziologice ale stabilirii simbiozei bacterie- rdcin Asociaia simbiotic dintre o bacterie fixatoare de azot i rdcina plantei se realizeaz n cadrul unor structuri multicelulare denumite noduli. Microsimbionii capabili de formarea nodulilor sunt diferii: Rhizobia - unicelulare, Gram- negative; Frankia- filamentoase, ramificate, Gram-pozitive.

105 Din punct de vedere al formrii nodulilor i al funcionalitii lor, cel mai bine caracterizate sunt asociaiile dintre rdcinile plantelor leguminoase din familia Fabaceae i bacteria Rhizobium. Rhizobia realizeaz simbioz i cu o specie din familia Ulmaceae, respectiv Parasponia andersonii. Sunt ns i cteva plante din alte familii denumite plante actinorizale. Ele constau din 22 genuri de arbuti lemnoi i pomi din 8 familii. n literatura de specialitate se menioneaz faptul c din 122 genuri de Rosaceae, numai 4 genuri fixeaz azotul pe cale biologic (ex. din Betulaceae Alnus, din Eleagnaceae Eleagnus, Hipophae). Frankia poate interaciona cu diferite dicotiledonate, membre a 8 familii diferite, denumite colectiv plante actinorizale (Benson i Silvester, 1993). Baker i Mullin (1992) au menionat faptul c gazde actinorizale de arbori i arbuti s-au identificat la diferite familii din Betulaceae, Eleagnaceae. Myricaceae, Rhamnaceae, Casuarinaceae, Coriaricaceae, Rosaceae i Datiscaceae. n cazul simbiozei, ca i n condiii de bacterii libere, Frankia poate forma vezicule de fixare a N2 la captul filamentelor sale. n aceste vezicule, nitrogenaza bacterian este protejat de O2 de o " anvelop " multistratificat care const din hopanoizi (lipide sterolice bacteriene). Leguminoasele i plantele actinorizale pot stabili de asemenea asociaii simbiotice cu ciuperci din ordinul Glomales. Condiiile necesare pentru fixarea azotului molecular Procesul de fixare a azotului molecular se realizeaz prin intermediul enzimei nitrogenaza, enzim foarte sensibil la concentraii mari de oxigen. Deoarece nitrogenazele sunt inactivate ireversibil de O2, procesele de fixare a azotului pot avea loc n condiii anaerobe. Astfel, fiecare dintre microorganismele prezentate funcioneaz n condiii naturale anaerobe, sau pot crea condiii anaerobe interne, n prezena oxigenului. n cazul asociaiilor simbiotice ntre bacterii i rdcinile plantelor, cantitatea de oxigen liber este redus datorit ratei ridicate a respiraiei simbionilor pe de o parte i a prezenei unei proteine care leag oxigenul (leghemoglobina) pe de alt parte. Caracteristica interaciunii plant gazd (macrosimbiont) i endofit (microsimbiont) este apariia unei structuri specifice, aa numitul " nodul , care se dezvolt la nivelul rdcinilor, dup ce bacteria i gazda se recunosc reciproc. Proteina leghemoglobin este prezent n citosolul nodulilor, la o concentraie mare (700 M n nodulii de soia) i d nodulilor culoarea roz. Poriunea globin este produs de planta gazd, ca rspuns la infecia provocat de bacterie, iar hemul este produs de simbiontul bacterial. Leghemoglobina se crede a avea rol de tampon pentru concentraia de oxigen n nodul, permind respiraia fr a nhiba nitrogenaza. De asemenea, ea acioneaz ca transportor de oxigen, uurnd difuzia acestuia prin stratul care nconjoar celulele bacteriene simbionte. Deci, acioneaz n mod similar hemoglobinei n cadrul sistemului circulator animal. Cercetrile efectuate de Pierrette i al. (2005) au demonstrat de asemenea c expresia aquaporinelor n celulele corticale interne la nodulii de soia s-a gsit a fi implicat n mecanismul de difuziune a O2 n noduli. S-au efectuat studii comparative n privina expresiei aquaporinelor PIP i -TIP att n celule cortexului, ct i celulele vecine. S-a demonstrat c PIP1 i PIP2 au fost exprimate mai mult n celulele cortexului i n endoderm, dect n periciclu i n celulele infectate, n timp ce -TIP au avut o distribuie similar celor PIPs. Concluzia a fost c aquaporinele PIPs i -TIP se exprim puternic att n plasmalema, ct i n tonoplastul celulelor nodulilor de la nivelul cortexului. Aceast distribuie semnific rolul posibil n privina fluxului apei, asociat cu reglarea conductanei pentru difuzia O2 i ulterior desfurarea activitii nitrogenazei. La nivel de endoderm, aceste aquaporine pot fi de asemenea implicate n transport de nutrieni ntre zona infectat i sistemul vascular. n mod obinuit, Rhizobium triete liber n sol, iar formarea nodulilor are loc numai cnd planta este crescut ntr-un sol cu deficit de azot i numai dac este prezent n sol o bacterie compatibil cu gazda. Aceast selecie fcut de gazd semnific faptul c speciile de Rhizobium pot recunoate planta gazd i invers (tabelul 5.5).

106 Tabelul 5.5. Tipuri de asociaii simbiotice ale plantelor cu specii de Rhizobium Nr.crt. 1 2 3 4 5 Dezvoltarea nodulilor Cercetrile efectuate de Wopereis i al. (2000) au precizat c primele semnale secretate de planta gazd n rizosfer pot fi (izo)flavonoizi, stachidrine sau acizi aldonici (cel mai bine studiai fiind flavonoizii). Aceste molecule induc chemotaxia pentru rhizobia i expresia genelor nodulrii (nod). n timpul formrii nodulilor, la leguminoase, rdcinile plantelor secret flavonoizi, care induc transcripia genelor nod rizobiale. Acestea codific proteinele care catalizeaz sinteza factorilor Nod, respectiv a unor lipo- chito- oligozaharide n plant (Long, 1996). Factorii Nod induc primele etape ale formrii nodulilor, prin inducerea diviziunii celulare n cortex. Noile celule vor forma primordiul nodulului. Simultan, bacteria intr n rdcin i se deplaseaz ctre celulele primordiului, infecteaz aceste celule i primordiul se dezvolt ntr-un nodul matur. Daidzeina i genisteina (izoflavonoizi produi de soia - Glycine max) sunt inductori eficieni ai genelor nod la Bradyrhizobium japonicum, dar inhib expresia genelor nod la S. meliloti (Hirsch i al., 2001). Pe lng flavonoizii exudai de multe leguminoase, lucerna (Medicago sativa) elibereaz trigonelin n rizosfer. Trigonelina activeaz specific expresia unei clase de gene n Rhizobium meliloti (genele tre), care aparent sunt implicate n catabolismul trigonelinei (Boivin i al., 1990). Autorii au sugerat c trigonelina poate fi folosit ca surs de hran de ctre bacterie, pe parcursul tuturor stadiilor relaiei simbiotice, inclusiv n rizosfer i n nodulii plantei gazd. Formarea nodulilor la nivelul rdcinii implic dou procese simultane: infecia i organogeneza nodulilor. Diferitele stadii ale acestor procese sunt redate n figura 5.20. (dup Taiz i Tiger, 2006). Bacteriile migreaz ctre rizosfer, se ataeaz de plant pe calea unui receptor al plantei i respectiv a unei proteine de pe suprafaa bacteriei - ricadesin (Smit et al., 1987) i infecteaz periorul absorbant. Se consider c rdcinile leguminoaselor secret proteine care leag glucide (ex. lectine). n cursul infeciei, se parcurg mai multe etape: fixarea bacteriei pe vrful periorilor induce curbarea pronunat a acestora; curbarea se crede a fi stimulat de producerea de ctre bacterie a hormonului auxin; bacteria induce hidroliza peretelui celular al periorului, permind accesul direct al celulelor bacteriene pe faa extern a plasmalemei; invaginarea plasmalemei (datorit fuziunii veziculelor membranale derivate din ComplexulGolgi) i pe msur ce tubul se extinde n interior, se depoziteaz un nou strat subire de perete celular. Se formeaz astfel o structur tubular, cunoscut la Rizobia ct i la Frankia, ca fir de infecie. Cnd firul de infecie atinge baza celulei periorului absorbant, fuzioneaz cu plasmalema i elibereaz bacteria n buzunare ale apoplastului. Membrana firului infeciei fuzioneaz cu plasmalema celulei gazd. Bacteria din apoplast, aparent degradeaz peretele celular, pentru a avea acces la plasmalema celulei subepidermale i procesul infeciei se repet. Dup ce firul de infecie ajunge la primordiul nodulului, bacteria este eliberat n celulele primordiului, printr-un proces asemntor endocitozei. n timpul acestui proces, rhizobia devine nchis de o membran derivat din celulele plantei, membrana peribacterioidului (PBM). PBM mpreun cu bacteria i spaiul dintre bacterie i PBM formeaz simbiozomul. n simbiozom, rhizobia difereniaz n forma endosimbiotic - bacterioizi - i ncepe fixarea N2. Specii de Rhizobium R.leguminosarum R.trifolii R.faseoli R.meliloti R. japonicum Gazde preferate mazre trifoi fasole lucern soia

107 n cazul nodulilor la non-leguminoase, respectiv la Parasponia, bacteria nu difereniaz bacterioizi. Iniierea diviziunii celulei nu este urmarea infeciei. De obicei, diviziunea celulelor cortexului precede infecia i are loc la cteva celule distan, fa de avansarea firului de infecie. Mecanismul reactivrii mitozei nu este nc clar, dar se sugereaz c factorii Nod afecteaz balana fotohormonilor n cortexul rdcinii. De exemplu, noduli liberi de bacterii pot fi indui n rdcinile leguminoaselor, cu Escherichia coli, care produce citochinine (Cooper si Long, 1994). n timpul nodulilor formrii este indus n periciclul rdcinii expresia primei gene de nodulare - ENOD 40. Adugarea unor factori Nod exogeni Fig. 5.20. Stadiile iniierii i dezvoltrii nodulului la rdcina de soia este suficient pentru activarea acestei gene (Frassen i al., 1995). Aceasta demonstreaz c pe lng epiderm i cortex i periciclul poate rspunde la factori Nod. Nodulinele sunt clasificate n dou grupe, dup momentul formrii lor: noduline timpurii (ENOD) identificate pe parcursul procesului de infecie i a formrii nodulilor i noduline trzi, a cror exprimare are loc n nodulii aflai n stare de funcionalitate. Pentru plantele actinorizale, nodulii sunt derivaii ai primordiilor rdcinilor laterale. Nu exist proteine analoage cu nodulinele din leguminoase. Nodulinele trzii sunt induse naintea fixrii azotului i includ principalele enzime implicate n asimilarea azotului, metabolismul carbonului i protecia nitrogenazei fa de oxigen, precum i proteinele localizate n membrana peribacterioidal. Nodulii leguminoaselor au o organizare asemntoare unei tulpini. Ei prezint un sistem vascular periferic, n contrast cu sistemul vascular central la actinorizale i nodulii de la Parasponia. n cazul simbiozelor actinorizale, substanele implicate n interaciunea plant Frankiaciuperci nu au fost n mod clar identificate. Infecia intracelular a fost ns descris la genurile Myrica, Comptonia, Alnus i Casuarina (Berry i Sunell, 1990). 5.5.2.2. Procese fiziologice i biochimice privind fixarea azotului molecular Procesul de fixare a azotului molecular se realizeaz n noduli i este catalizat de enzima nitrogenaz. n cazul nodulilor de soia i mazre, sinteza enzimei are loc imediat ce bacteria este eliberat din firul de infecie. Aproximativ n acelai timp, n celulele gazdei este produs leghemoglobina, care d nodulilor culoarea roz. La Rhizobium i Bradyrhizobium, dezvoltarea

108 activitii nitrogenazei este paralel cu represia glutamin sintetazei (GS). Bacterioizii pot reduce N2 la NH4, dar nu pot asimila NH4+ n compui organici. Acest ultim rol este preluat de gazd. La Azorhizobium, se poate fixa i asimila N2 ex-plant (Dreyfus i al., 1988). Reacia general privind fixarea azotului molecular n prezena complexului enzimatic nitrogenaz este urmtoarea : nitrogenaza N2 + 8 e + 8 H ------------ 16 ATP
+

2NH3 + H2 + 16 ADP + 16 Pa

Dei amoniacul (NH3) este produsul direct al reaciei, el este repede ionizat la amoniu - NH4+. Nitrogenaza reprezint un complex enzimatic care se poate separa n dou componente: proteina cu Fe; proteina cu MoFe. Nici una din cele dou componente nu are efect catalitic singur. Proteina cu Fe este mai mic i const din dou subuniti identice, de 30.000- 70.000 Da, n funcie de organism. Este extrem de sensibil la O2, cu un "half-time" de 30-45 s. Proteina cu MoFe are 4 subuniti, iar masa total este de 180.000- 235.000 Da. Este inactivat de O2, "half-time" este de 10 min. n cadrul reaciei catalizat de nitrogenaz, proteina feredoxin are rol de a dona Fig. 5.21. Schema reaciilor catalizate de electronii la proteina cu Fe, care apoi va reduce nitrogenaz proteina cu MoFe. n ambele etape este implicat hidroliza ATP. Proteina cu MoFe reduce substratul reprezentat de N2 (fig.5.21.). n ceea ce privete sursa original de electroni i protoni, aceasta o constituie de fapt hidraii de carbon formai n frunze n timpul fotosintezei i apoi translocai prin floem n nodulii rdcinii. Cel mai abundent hidrat de carbon translocat (cel puin la legume) este zaharoza. Biodegradarea n bacterioizi (prin respiraie), permite reducerea NADP+, la NADPH2. La unele organisme fixatoare de azot, n timpul oxidrii acidului piruvic are loc reducerea unei proteine numit flavodoxin. Apoi, flavodoxina, NADH2 sau NADPH2, reduc feredoxina, sau o protein similar, care este foarte eficient n privina reducerii N2, la NH4+. Dup fixare, NH3 (probabil ca NH4+) este translocat n afara bacterioizilor. n citosolul celulelor care conin bacterioizi (dar extern PBM) este transformat n glutamin, acid glutamic, asparagin i n multe specii, n compui bogai n azot, numii ureide. Principalele dou ureide la legume sunt: alantoina (C4 N4 H6 O3) i acidul alantoic (C4 N4 H8 O4). Asparagina i ureidele se deplaseaz din celulele care conin bacterioizi, n celulele periciclului adiacente esuturilor vasculare. La multe specii, aceste celule Fig. 5.22.Model al relaiilor dintre nitrogenaz i sunt modificate ca celule de transfer, care reaciile din bacterioizi i citosol secret activ compui cu azot n xilem (fig. n nodulii leguminoaselor 5. 22.).

109 Tipuri de noduli i reglarea numrului nodulilor La leguminoasele erbacee pot fi gsite dou tipuri principale de noduli: 1) noduli cu cretere determinat (ex. Glycine, Phaseolus) Meristemul nceteaz devreme activitatea sa. Au form sferic, iar forma lor final rezult din creterea celulelor, mai degrab dect din diviziunea celulei. Au via scurt i sunt nlocuii permanent pe parcursul sezonului de cretere. La momentul umplerii boabelor, n general pierd capacitatea de fixare a N2 , deoarece planta hrnete mai degrab smna n dezvoltare, dect nodulii. Fasolea are n general mai puin de 100 noduli/plant, soia are cteva sute, iar arahidele pot avea 100 sau mai muli noduli pe o plant bine dezvoltat. 2) noduli cu cretere nedeterminat (ex. Pisum, Medicago) Sunt caracterizai prin existena unui meristem persistent al nodulului. Au form alungit i cilindric. Exemple - la mazre, trifoi, lucern. Pentru a exista o relaie simbiotic i a nu se ajunge la parazitism, numrul nodulilor trebuie s fie controlat. De altfel, formarea lor este inhibat, dup ce un numr de noduli s-a format (Wall i Huss-Danell, 1997). Aceast autoreglare lisete la cteva mutante monogene de leguminoase, care exprim ceea ce se denumete tip supernodulativ. De altfel, prile aeriene au o cretere redus, ceea ce indic faptul c relaia cu Rhizobium a devenit de tip parazitar. Experimentele avnd la baz altoirea la leguminoase au relevat faptul c exist un factor implicat n aceast autoreglare, un factor activ chiar n cazul unor specii diferite. Probabil este vorba despre un semnal translocabil, format n rdcinile afectate. Acesta induce formarea unui factor translocabil n tulpin, care controleaz formarea unui anumit numr de noduli. Natura molecular a acestor semnale nu este cunoscut. Probabil este vorba despre compui asemntori cu acidul abscisic, implicai n inducerea unui stadiu dormind (Mc Carty, 1995). n privina autoreglrii nodulrii, a fost caracterizat o mutant la Lotus hypernodula har 1ceea ce sugereaz c reglarea numrului nodulilor este parte integrant a mecanismelor care controleaz dezvoltarea rdcinilor laterale (Wopereis i al., 2000). Factori genetici implicai n fixarea simbiotic a N2 i importana practic a cunoaterii acestora Avnd n vedere existena ca organisme libere, dar i ca organit, Rhizobium trebuie s fie capabil s-i modifice programul genetic. Multe dintre genele necesare pentru nodulare i fixare a azotului sunt situate ntr-o plasmid circular, mare, denumit plasmida Sym (de la simbioz). n cadrul acestei plasmide se gsesc genele nod, implicate n specificitatea infeciei i formarea nodulilor. n ceea ce privete funciile biochimice ale produilor genei nod, acestea nu sunt pe deplin elucidate. n cazul Rhizobium, un caz particular este gena nod D, care pare a fi sub influena direct a flavonelor/ izoflavonelor i care regleaz i alte gene ale complexului " nod". Toate rizobiile recunosc spectrul strin al (izo) flavonoizilor, ca inductori sau antiinductori. Descrierea unor mutante ale genelor nod, care mutante blocheaz diferite stadii ale infeciei i nodulrii a permis zonarea genelor nod n dou regiuni distincte n cadrul plasmidei Sym, corespunztor " genelor comune " i " genelor cu specificitate de gazd ". Ultimele funcioneaz numai n cazul particular al unei gazde. Genele implicate n fixarea azotului, care de fapt devin active n timpul ultimelor stadii ale dezvoltrii nodulilor sunt denumite fie gene nif, fie gene fix. n cadrul acestei categorii sunt incluse genele structurale pentru nitrogenaz, precum i un numr de gene regulatoare. Genele nif H codific subunitatea - protein cu Fe, iar genele nif D i nif K codific subunitile alfa i beta i respectiv proteina cu MoFe. Referitor la genele fix, o posibil funcie este biosinteza hemului. Precursorul hemului este acidul -aminolevulinic (ALA). Mutaiile n genele Rhizobium pentru sinteza ALA provoac producerea nodulilor albi, incapabili de fixarea azotului. Totodat, deosebit de important este

110 interaciunea dintre genele Nod ale plantei i genele nod, nif i fix ale bacteriei. Cum anume are loc coordonarea complexelor procese de infecie i dezvoltare a nodulilor este nc un subiect deosebit de fascinant. Continuarea studiilor n acest domeniu se impune nu doar strict din punct de vedere teoretic, ci trebuie evideniat nsi importana practic. Cercettorii vor fi capabili s mreasc spectrul plantelor capabile pentru acest proces, cuprinznd i alte specii (de exemplu cereale). Astfel, pe lng creterea productivitii pe terenurile mai slab aprovizionate cu azot, este util a se reduce dependena agriculturii de ngrmintele chimice cu azot, pentru a cror producere se consum o cantitate enorm de energie. Privitor la posibilitatea determinrii eficienei nitrogenazei, deoarece este foarte costisitor a determina n mod direct fixarea N2, se poate estima activitatea nitrogenazei prin gaz cromatografie. Se apeleaz la reacia de reducere a acetilenei, la etilen, reacie care implic 2 electroni (fa de 8 necesari pentru reducerea azotului molecular) i 2 H+. Determinarea reducerii acetilenei este valabil pentru studii comparative. Oentru determinri cantitative precise privind fixarea azotului este absolut necesar msurarea direct a N2 redus, prin mass spectroscopie. Calculele privitoare la consumul energetic pentru fixarea azotului molecular au demonstrat c se consum 12 g carbon organic, pentru 1 gram N2 fixat. 5.5.3. Asemnri i deosebiri structurale i funcionale dintre simbiozele arbuscularmicorhizale i noduli ntre micorize i bacteriorize exist asemnri, dar i deosebiri (fig. 5.23.), dintre care amintim: celulele parenchimului cortical constituie locul pentru dezvoltarea micorizelor arbusculare i al organogenezei nodulilor; o membran derivat din plant nconjoar interfaa fiziologic activ dintre simbioni, n cazul ambelor sisteme; flavonoizii care eliciteaz genele nod rizobiale favorizeaz creterea hifelor la ciupercile micorizante arbusculare i probabil mediaz un factor Nod inducnd stimularea colonizrii rdcinii. Ca urmare a similitudinilor existente, ca i a legturilor strnse dintre anumite gene care determin nodularea i formarea micorizelor arbusculare la legume, se scoate n eviden existena unor mecanisme comune, care guverneaz cel puin o parte a interaciunilor n cazul celor dou tipuri de simbioze. n ciuda asemnrilor existente, exist totui importante deosebiri. Spre exemplu, un numr de genotipuri de legume non-nodulante sunt capabile s formeze micorize. Anumite componente ale firului de infecie pentru nodulare nu sunt sintetizate n jurul simbiontului fungic, n rdcinile micorizale (Perotto i al., 1994). Semne ale simbiozelor micorizal arbusculare au fost nregistrate n fosile, nainte de evoluia speciilor de legume. Aceasta pune n discuie Fig. 5.23. Structura nodulului i a interesanta posibilitate ca pe parcursul evoluiei, micorizei: A. Nodul actinorhizal pd. Periderm; B. Nodul nedeterminat la rhizobiile s fi putut exploata procesele din plante leguminoase; C. Nodul determinat la implicate n interaciunile simbiotice cu ciuperci leguminoase; D. Structura micorizei. micorizal arbusculare i le-au modificat, pentru un cu (dup Diouf i al., 2003) totul alt scop, acela al dezvoltrii nodulilor (Gollotte i al., 1995).

111 ntrebri 1. Ce se nelege prin element mineral absolut necesar, dar element mineral util ? Dai exemple. 2. Ce reprezint o soluie nutritiv mineral artificial i care este importana teoretic i practic a acesteia ? Exemple. 3. Ce este rizosfera i ce importan prezint semnalizarea molecular la acest nivel ? 4. Ce rol fiziologic au elementele minerale n viaa plantei ? 5. Micorizele: definiie, tipuri, importan practic. 6. Fixarea biologic a azotului molecular: mecanism i importan practic. Bibliografie selectiv Arnon D. I. i Stout P. R. 1939. The essentiality of certain elements in minute quantity for plants with special reference to copper. Plant Physiol., Vol. 14: 371375. Badri, D.V., Weiser, T.L., van der Lelie, D., Vivanco, J.M. 2009. Rhizosphere chemical dialogues: plant-microbe interactions. Current Opinion in Biotechnology, Vol. 20: 642-650. Burzo, I., Delian Elena, Crciun, C. 2000. Ultrastructural changes induced by the physiological disorders fruits and vegetables, Acta Horticulturae, Vol. 553: 255-256. Bonfante-Fasolo, P. i Perotto, S. 1992. Plant and endomycorrhizal fungi: the cellular and molecular basis of their interaction. In Molecular Signals in Plant-Microbe Communications. Editor Desh Pal S. Verma. Cartmill, A.D. i al. 2008. Arbuscular mycorrhizal fungi enhance tolerance of vinca to high alkalinity in irrigation water. Scientia Horticulture, Vol. 115: 275- 284. Dakora, F.D. i Phillips, D.A. 2002. Root exudates as mediators of mineral aquisition in lowmineral environments. Plant and Soil, Vol.245: 35- 47. Delian Elena, Geuns, J.C.M., Voican Ana Viorica. 1996. Variaia coninutului n poliamine i acizi grai n merele sntoase i afectate de unele dereglri fiziologice. Studii i Cercetri de Biologie. Ed. Academiei Romne, Vol.48: 65-69. Epstein, E. 1972. Mineral Nutrition of Plants: Principles and Perspectives. Wiley, New York. Epstein, E. i Bloom, A.J. 2005. Mineral nutrition of plants: Principles and Perspectives, Second Edition. Sinauer, Sunderland, Massachusetts. Fester, T., Lohsea, S. i Halfmanna, K. 2007. Chromoplast development in arbuscular mycorrhizal roots. Phytochemistry, Vol. 68: 92- 100. Finlay, R.D. 2004. Mycorrhizal fungi and their multifunctional roles. Mycologist , Vol. 18: 91 96. Giehl, R.FH., Meda, A.R., von Wirn, N. 2009. Moving up, down and everywhere: signaling of microelements in plants. Current Opinion in Plant Biology, Vol. 12: 320-327. Gierth, M., Mser, P. 2007. Potassium transporters in plants involvement in K+ acquisition and homeostasis. FEBS Letters, Vol. 581: 2348-2356. Hause, B., Schaarschmidt. 2009. The role of jasmonates in mutualistic symbioses between plants and soil-born microorganisms. Phytochemistry, Vol.70: 1580-1599. Hirsch, A.M. i al. 2001. What makes the Rhizobia Legume symbiosis so special. Plant Physiology, Vol 127: 1484- 1492. Lester, G.E., Jifon, J.L., Makus, D.J. 2010. Impact of potasium nutrition on food quality of fruit and vegetables: a condensed and concise review of literature. Better Crops, Vol. 94: 18-21. Maathuis, F.JM. 2009. Physiological functions of mineral macronutrients. Current Opinion in Plant Physiology, Vol. 12: 250-258. Marcelle, R.D. 1990. Prediciting storage quality from preharvest fruit mineral analysis, a review. Acta Hort. , Vol. 274: 305- 313.

112 Miller, A.J. i Cramer, M.D. 2004. Root nitrogen aquisition and assimilation. Plant and Soil, Vol. 274: 136. Minorsky, P.V. 2002. Trigonelline: A diverse regulator in plants. Plant Physiology, Vol. 128: 7- 8. Selosse, M.A. i al. 2006. Mycorrhizal networks: des liaisons dangereuses? Trends in Ecology and Evolution, Vol. 21: 621 628. Shenoy, V.V. , Kalagugi, G.M. 2005. Enhancing plant phosphorus use efficiency for sustainable cropping. Biotechnology Advances, Vol.23: 501-613. Reinhart, D. 2007. Programming good relations development of the arbuscular mycorrhizal symbiosis. Current Opinion in Plant Biology, Vol. 10: 98- 105. Rost, T.L. i Bloom, A.J. 2006. Root structure and function. Annals of Botany, Vol. 97: 837-838. Zamfirache Maria Magdalena i Toma C. 2000. Simbioza n lumea vie. Ed. Univ. Alexandru Ioan Cuza.

113 PARTEA II CAPITOLUL 6 NUTRIIA CU CARBON LA PLANTE Cuvinte cheie: plante autotrofe, plante heterotrofe, plante mixotrofe, fotosinteza, cloroplast, pigmeni clorofilieni, pigmeni carotenoizi, radiaii luminoase fotosintetic active, faza de lumin, faza enzimatic, RUBISCO, plante C3, plante C4, plante CAM, fotorespiraie, punct de compensaie pentru lumin, punct de compensaie pentru CO2, recolta biologic, recolta agricol Obiective: descrierea tipurilor de nutriie cu carbon la plante; cunoaterea i nelegerea procesului de fotosintez; cunoaterea factorilor externi i interni care influeneaz intensitatea fotosintezei; importana practic a acestor cunotine; cunoaterea i nelegerea procesului de fotorespiraie; nelegea interrelaiei dintre fotosintez i recolt; REZUMAT Plantele i pot asigura nutriia cu carbon pe baza a trei tipuri de nutriie: autotrof, heterotrof i mixotrof. Fotosinteza sau asimilaia clorofilian este procesul complex, prin care plantele autotrofe verzi sintetizeaz primii compui organici (trioze), din substane anorganice (dioxid de carbon, ap i sruri minerale) n prezena radiaiilor luminoase captate de pigmenii asimilatori (n special clorofil), proces n urma cruia se pune n libertate oxigen. Organul specializat pentru fotosintez este frunza, datorit particularitilor sale structurale i funcionale. La nivel celular, fotosinteza se desfoar n cloroplaste, organite specializate pentru acest proces. n cloroplast se gsesc pigmenii asimilatori (clorofilieni i carotenoizi) care au rol n captarea energiei luminoase provenit de la soare i n transformarea acesteia n energie biochimic potenial. Radiaia luminoas fotosintetic activ include radiaiile spectrului luminos vizibil, cu lungimea de und cuprins ntre 400 i 700 nm. n privina mecanismului fotosintezei sunt descrise dou faze: faza dependent de lumin, care se desfoar n tilacoidele cloroplastului i faza enzimatic, care se desfoar n stroma cloroplastului. Enzima cheie a acestui proces este ribulozo 1,5 bis- fosfat carboxilaza-oxigenaza (RUBISCO). n funcie de modul de desfurare a fazei enzimatice se disting plante de tip C3, plante de tip C4 i plante CAM. Fotorespiraia reprezint procesul eliberrii de CO2, dependent de lumin, proces caracteristic celulelor fotosintetic active i care difer n multe privine de producerea de CO2 i consumul de O2 care au loc n mitocondrie. Procesul de fotosintez este influenat de numeroi factori interni (pigmeni asimilatori, factori care in de caracteristicile protoplastului, structura i vrsta frunzelor, acumularea de fotoasimilate n relaie cu cerinele pentru acestea, coninutul n elemente minerale al frunzelor, hormoni etc.), precum i de factori externi (lumina, temperatura, concentraia CO2, concentraia O2, starea solului n ceea ce privete prezena apei i a elementelor minerale, prezena unor poluani n sol i aer etc.). Fotosinteza st la baza produciei biologice. Agronomii sunt preocupai de productivitatea economic a prilor plantei, nu doar de masa total a plantei. Recolta agricol este partea valoroas, util din punct de vedere economic: producia economic ha-1an-1 (masa proaspt semine, fructe, plante furajere etc.). Recolta biologic sau total este dat de fotosinteza real (biomas), din care se scad pierderile. Deoarece producerea recoltei i sporirea produciei economice nu corespund ntotdeauna cu profitabilitatea, cercetrile n domeniu trebuie direcionate ctre obinerea unei producii mari, de calitate i acceptabil economic.

114 6. 1. Tipuri de nutriie cu carbon la plante Compuii organici (alctuii n principal din trei elemente: carbon, hidrogen i oxigen) reprezint circa 95% din masa uscat a esuturilor vegetale. Nutriia cu carbon la plante constituie un subiect de interes deosebit. Din punct de vedere a modului n care plantele i asigur nutriia cu carbon (sau obin substanele organice) se disting trei tipuri de nutriie: I. Nutriia autotrof este caracteristic plantelor care pot realiza sinteza de substane organice folosind ca materii prime substane anorganice. Desigur, pentru a se realiza sinteza acestora este nevoie de energie. n funcie de tipul de energie folosit, plantele autotrofe se mpart n dou grupe: 1) plante autotrofe fotosintetizante, adic acelea care posed pigmeni fotoasimilatori i care folosesc energia provenit din radiaiile luminoase; 2) plante autotrofe chimiosintetizante, adic acele plante care folosesc energia provenit din descompunerea unor substane. II. Nutriia heterotrof este caracteristic plantelor care utilizeaz compui organici simpli, provenii din organisme vegetale i animale vii sau moarte. Prin urmare, astfel de plante pot fi: 1) plante heterotrof saprofite, care au capacitatea ca prin intermediul enzimelor s descompun organisme vegetale i animale moarte i s utilizeze ca hran compui organici simpli; 2) plante heterotrof parazite, care absorb compui organici simpli din organisme vegetale i animale vii. Spre deosebire de prima categorie (mai ales bacterii i ciuperci), n acest grup pe lng acele plante inferioare sunt i plante superioare, precum Cuscuta, Orobanche, Lathraea etc. III. Nutriia mixotrof sau mixt, care cuprinde: 1) plante mixotrof semiparazite: de exemplu, Vscum album, care absoarbe apa i srurile minerale din vasele lemnoase ale pomilor, dar realizeaz i procesul de fotosintez; 2) plante mixotrof carnivore (ex. Drosera, Nepenthes, Dionaea), care pe lng realizarea procesului de fotosintez i completeaz necesarul de azot, cu aminoacizii absorbii din insectele capturate i descompuse cu ajutorul enzimelor. 6. 2. Fotosinteza 6.2.1. Definiie, ecuaie general, importan Fotosinteza sau asimilaia clorofilian este procesul complex prin care plantele autotrofe verzi sintetizeaz primii compui organici (trioze), din substane anorganice (dioxid de carbon, ap i sruri minerale) n prezena radiaiilor luminoase captate de pigmenii asimilatori (n special clorofil), proces n urma cruia se pune n libertate oxigen. Ecuaia general a fotosintezei este redat n figura 6.1.

Fig. 6.1. Ecuaia general a fotosintezei

Importana fotosintezei reiese din analiza componentelor ecuaiei generale:

115 1) se utilizeaz dioxidul de carbon, permind meninerea unei concentraii relativ constante n atmosfer de 0,03 % (300 ppm); Se estimeaz c anual, prin procesul de fotosintez se fixeaz circa 75*1012 kg de carbon (sub form de CO2), producndu-se 1700 milioane tone de substan uscat. 2) se produce oxigen, absolut necesar vieii, iar concentraia acestuia n atmosfer se menine la circa 21%; Raportul dintre volumul de oxigen eliberat n fotosintez i cel de oxigen utilizat n procesul de respiraie pe parcursul unei zile este de 10:1. 3) se utilizeaz energia solar, inepuizabil, ntr-un proces specific doar plantelor, prin care ele i pregtesc propria lor hran; 4) se asigur hran pentru toate organismele vii; 5) rezult nti glucide simple (trioze) i ulterior sunt transformate n alte categorii de substane, precum: lipide, proteine, acizi nucleici, ali compui organici (unele sunt utile n industria farmaceutic, a parfumurilor, a buturilor etc.; substanele de rezerv din plante:- glucide, lipide, proteine - surse importante pentru alimentaia omului, animalelor); 6) lemnul se folosete n industria construciilor, combustibililor, papetriei etc.; 7) fotosinteza asigur substrat pentru respiraie, iar energia eliberat n cursul acestui proces este utilizat pentru desfurarea a diferite procese metabolice. 6.2.2. Sediul fotosintezei la nivelul plantei i la nivel celular Procesul de fotosintez se desfoar n esuturile verzi ale plantei (frunze, cotiledoane, muguri, tulpini, rdcini aeriene, flori, fructe), expuse la lumin, dar, organul specializat este frunza. La nivel celular, fotosinteza se desfoar n cloroplaste, organite specializate pentru acest proces. Frunza este organul specializat pentru fotosintez, datorit unor particulariti anatomice i funcionale, dintre care amintim: suprafa mare de contact cu aerul atmosferic i grosime redus, ceea ce favorizeaz absorbia unor cantiti mari de dioxid de carbon i energie luminoas; prezena la nivelul epidermei frunzelor a unui numr de stomate, facilitndu-se ptrunderea dioxidului de carbon i n general schimbul de gaze; structur bifacial, care permite difuzia uoar a dioxidului de carbon pn la celulele asimilatoare (C3) sau Kranz (C4); un sistem fascicular bogat, care asigur pe de o parte materiile prime pentru desfurarea fotosintezei i pe de alt parte transportul fotoasimilatelor; Fig. 6.2. Diagrama frunzei la dicotiledonate prezena n celulele frunzelor a cloroplastelor, (A) i monocotiledonate (B) organite specializate pentru desfurarea fotosintezei (fig. 6.2.). Cloroplastele sunt organite specializate, adevrate uzine biosintetice. Adaptrile lor sunt legate de suprafeele mari ale membranelor tilacoide i de prezena pigmenilor asimilatori (fig.6.3.). De reamintit faptul c, din punct de vedere structural, cloroplastele sunt nconjurate de o membran dubl lipoproteic: la exterior este o membran lipoproteic neted, iar membrana lipoproteic intern prezint numeroase pliuri denumite tilacoide.

116 Pigmenii asimilatori (clorofile, caroteni i xantofile) i proteinele (transportoare de electroni, pompe de protoni etc.) sunt localizate n tilacoide, unde se desfoar faza dependent de lumin. La nivelul fluidului central denumit strom se desfoar faza independent de lumin (faza enzimatic). 6.2.3. Condiii prioritare pentru desfurarea fotosintezei Printre condiiile de baz necesare desfurrii fotosintezei amintim: pigmenii asimilatori, lumina, apa, dioxidul de carbon etc. 6.2.3.1. Pigmenii asimilatori A) Tipuri de pigmeni asimilatori Pigmenii asimilatori sunt molecule organice complexe colorate. Datorit dublelor legturi conjugate, n cadrul unui sistem biologic ei absorb energia luminoas din regiunea vizibil a spectrului elecromagnetic i o transform ntr-o form de energie chimic. La plantele superioare, pigmenii asimilatori sunt reprezentai de dou categorii: pigmenii clorofilieni sau verzi (clorofila a i clorofila b); pigmenii carotenoizi sau galbeni (n principal caroteni i xantofile). Structural, o molecul de clorofil const dintr-un cap i o coad (asemntoare unei spatule) (fig. 6.3.). Capul const din nucleul tetrapirolic i un inel izopentil carbon dispus sub form ciclic. n centrul nucleului tetrapirolic se afl atomul de magneziu. De scheletul porfirinic, la al 7lea carbon se leag coada sau fitolul (C20H39OH). Aceasta este o component hidrofob (alcoolul unei hidrocarburi superioare), care conine o dubl legtur. clorofila a : C55H72O5N4Mg - prezint la carbonul 3 o grupare metil (CH3) i este larg rspndit n organismele productoare de oxigen. clorofila b : C55H70O6N4Mg - are n locul gruprii metil o grupare aldehidic (CHO) i este prezent la alge verzi, briofite i angiosperme. n general, raportul clorofil a/ clorofil b este de 3/1, dar crete la plantele iubitoare de lumin.

Fig. 6.3. Structura cloroplastului i a moleculei de clorofil

117 Carotenoizii sunt reprezentai de: caroteni i xantofile. Carotenul are culoarea portocaliu, cu formula C40H56 i mai abundeni sunt i carotenul. Carotenii sunt hidrocarburi nesaturate, constituite numai din carbon i hidrogen. Difer doar prin modul de aranjare n spaiu a moleculelor lor. Xantofilele sunt derivai ai carotenului, caracterizate prin prezena oxigenului (C40H56O2). Exemple de xantofile: luteina, zeaxanthina, violaxanthina. Au culoare galben i se afl n cantitate mai mare n membrane, comparativ cu carotenii. n frunzele tinere, raportul caroten: xantofile este de 1:2. Dup activitatea specific: sunt pigmeni asimilatori cu rol n captarea energiei luminoase, dar fotochimic inactivi (cromofori anten) i pigmeni asimilatori fotochimic activi, localizai n centrele de reacie. Carotenoizii, pe lng rolul de pigmeni anten, un rol deosebit le revine n fotoprotecie, evitndu-se fotooxidarea clorofilei. B) Biosinteza pigmenilor asimilatori Biosinteza pigmenilor asimilatori se realizeaz prin cicluri biochimice diferite i la nivelul unor situsuri specifice. Astfel: - pigmenii clorofilieni se biosintetizeaz n cloroplaste, n cadrul ciclului acidului aminolevulinic; - pigmenii carotenoizi se biosintetizeaz n cloroplaste i cromoplaste, prin ciclul acidului mevalonic. Pentru biosinteza clorofilei, o prim faz const n conversia acidului glutamic, la acidul 5- aminolevulinic (ALA) (prin legarea de o molecul de ARNt). Din dou molecule de acid aminolevulinic se formeaz o molecul de porfobilinogen (PBG), iar 4 astfel de molecule vor forma nucleul tetrapirolic protoporfirina IX. Pn la aceast etap, procesele sunt similare n cazul hemului. Apoi, n cazul clorofilei se inser Mg, iar n cazul hemului se inser Fe. Urmtoarea faz este formarea inelului 5 (E) prin ciclizarea unuia dintre lanurile acidului propionic, pentru a forma protoclorofilida. Calea implic reducerea uneia dintre legturile duble ale inelului D, folosindu-se NADPH++H+. La angiosperme, procesul este realizat cu ajutorul luminii i este catalizat de enzima protoclorofilid oxidoreductaza (POR). Bacteriile care nu produc oxigen realizeaz reacia fr lumin, folosind un set diferit de enzime. Cianobacteriile, algele, plantele inferioare i gimnospermele conin ambele ci (calea POR dependent de lumin i calea independent de lumin). Plantele angiosperme crescute la ntuneric nu au clorofil, deoarece enzima POR necesit lumin. La lumin, aceste plante etiolate devin repede verzi. Etapa final n biosinteza clorofilei este ataarea cozii fitolului. Procesul este catalizat de enzima clorofil sintetaz (Malkim i Nyogi, 2000). Clorofila sufer un proces continuu de biosintez i biodegradare, rennoindu-se ntr-un ritm de 40% n 2-3 zile. Biosinteza carotenoizilor se realizeaz prin ciclul acidului mevalonic, din acetil CoA, cu parcurgerea unor etape intermediare. Precursorul este deci acidul mevalonic. Acesta este transformat n geranil geranil pirofosfat, printr-o secven de reacii ciclice, cunoscut sub numele de ciclul terpenoid. Dintre compuii intermediari se pot aminti: acidul mevalonic, izopentil pirofosfat, geranil pirofosfat, fitoen, licopen i caroten. Geranil geranil pirofosfatul reprezint precursorul imediat al carotenilor. Procesul este codificat de genele nucleare PSY 1, PDS, LYC etc. Prin ncorporarea unei molecule de oxigen la caroten, se formeaz xantofila. Pentru sinteza carotenoizilor nu este necesar lumina. Biosinteza pigmenilor asimilatori este influenat de factori precum: lumina (care acioneaz prin intermediul fitocromului i criptocromului, inducnd transcripia genelor Lhcb care codific biosinteza enzimelor implicate n sinteza clorofilei), temperatura (de exemplu, temperatura optim pentru sinteza clorofilei este 26-280C; pentru licopen 16-220C; pentru caroten 25-290C), oxigenul (necesar pentru desfurarea reaciilor de oxidare, care au loc n cursul biosintezei clorofilei i carotenoizilor), substanele minerale (spre exemplu N, Mg) etc.

118 C. Proprietile pigmenilor asimilatori Pigmenii asimilatori se caracterizeaz prin diferite proprieti fizice i chimice specifice. Dintre proprietile fizice se pot aminti: absorbia energiei luminoase, care este folosit n desfurarea fazei dependente de lumin; solubilitatea n solveni organici: aceton, alcool, eter de petrol, benzen etc.; culoare diferit: clorofila a este verde albstruie; clorofila b este verde glbuie; carotenul este portocaliu; xantofila este galben-portocalie; fluorescena proprietatea clorofilei de a absorbi radiaiile luminoase cu lungime de und mic i ncrctur energetic mare (de exemplu albastre, cu lungimea de und n jur de 400 nm) i de a emite fotoni cu lungime de und mare i ncrctur energetic mic (de exemplu roii, cu lungimea de und n jur de 700 nm); foto-oxidarea reprezint reacia de descompunere a moleculei de clorofil sub aciunea luminii (carotenoizii ns sunt mai stabili din acest punct de vedere). Dintre proprietile chimice amintim: reacia cu bazele, ceea ce conduce la descompunerea clorofilei i formarea clorofilinelor; reacia cu acizii minerali i formarea feofitinei (de culoare brun), deoarece magneziul din molecula de clorofil este nlocuit cu hidrogenul din acid. 6.2.3.2. Lumina Lumina este o condiie de baz pentru desfurarea fotosintezei, din mai multe considerente. Lumina intervine n desfurarea fazei de lumin, cnd energia luminoas este transformat n energie biochimic potenial. Lumina este implicat n procesul de sintez a enzimelor care intervin n fotosintez. Spre exemplu, prin intermediul fitocromului i a criptocromului se induce transcripia care codific biosinteza enzimei cheie a fotosintezei RUBISCO i a proteinelor din antenele fotoreceptoare. Lumina este un factor determinant n biosinteza clorofilei. Pentru a nelege relaia pigmeni asimilatori lumin desfurarea fotosintezei, se vor aborda cteva aspecte generale privind lumina. Lumina alb este alctuit din totalitatea radiaiilor care alctuiesc spectrul vizibil ROGVAIV (fig. 6.4.), cu lungimea de und de la circa 700 nm, la circa 400 nm. Deci, lumina considerat ca o und se caracterizeaz printr-o lungime de und i o frecven. Energia unui foton depinde de lungimea de und, fiind invers proporional cu aceasta. Astfel, un foton cu de 400 nm are de 2 ori energia unui foton cu de 800 nm din infrarou. Unitatea de msur a cantitii poate fi moli m-2s-1 unde moli se refer la numrul de fotoni (1 mol de lumin = 6,02 * 1023 fotoni, numrul lui Avogadro). Radiaia fotosintetic activ (PAR) reprezint regiunea spectrului electromagnetic care induce fotosinteza i include radiaiile cu lungimea de und cuprins ntre 400 i 700 nm. Modul de exprimare n fiziologie este densitatea fluxului fotonilor fotosintetici (PPFD) sau PPF (deoarece densitate nseamn cu totul altceva).

Fig. 6.4. Spectrul electromagnetic

119 ntr-o zi nsorit, PAR se situeaz n jur de 2000 moli m-2s-1 (valori mai mari pot fi msurate la altitudini mari). Valoarea corespunztoare n uniti de energie este circa 400 W m-2 [1W = 1 joule (J) s-1 ] . Coeficientul de utilizare a energiei luminoase Cunotinele privind interceptarea i absorbia luminii sunt fundamentale pentru nelegerea multor aspecte ale creterii i productivitii plantelor (Rosati i al., 2001). n general, din lumina complet (100%) incident pe faa superioar a frunzei este absorbit doar o parte (70%), iar din restul (30%) o parte (20%) este reflectat i o alt parte (10%) trece prin frunz (lumin transmis). Din total lumin absorbit (70%), 20% este pierdut prin disipare termic, 4549% este emis sub form de fluorescen i doar n proporie de 15% rmne a fi folosit n fotosintez (radiaia luminoas ce va fi transformat n energie biochimic potenial) (fig. 6.5.). Cantitatea de lumin folosit n fotosintez se Fig. 6.5. Coeficientul de utilizare a energiei luminoase denumete coeficient de utilizare a energiei luminoase i aceasta variaz cu specia (de exemplu: sfecl 2,1; ovz 3,3; porumb 4,5). Agrawal (2010) a propus conceptul denumit contanta solar fotosintetic, care exprim valoarea energiei produs sub form de biomas, prin intermediul motorului fotosintetic, folosind banda vizibil, prezent n constanta solar standard (1340 W m-2), n condiii ideale. Valoarea sa este estimat la 70 W m-2, corespunztor la un echivalent al biomasei de 4,5 x 10-6 kg m-2 s-1. Fotoprotecia la plante Plantele au o relaie de dragoste/ur cu lumina (Mller i al., 2001). Ca organisme fotosintetizante ele necesit lumin pentru a tri, dar, prea mult lumin poate provoca creterea producerii speciilor reactive de oxigen, cu efecte duntoare. Pentru desemnarea reducerii capacitii fotosintetice indus de expunerea la un exces de lumin s-au folosit diferii termeni: fotoinhibiie, fotooxidare, fotoinactivare, fotolabilitate, solarizare i reacii fotodinamice (Krause, 1988), dar mai frecvent n ultimii ani se folosete termenul fotoinhibiie. Consecinele fotoinhibiiei sunt: reducerea eficienei fotosintezei pentru absorbia CO2 i eliberarea O2; scderea convexitii curbei fotosintezei ca rspuns la lumin; reducerea activitii fotochimice a fotosistemului II etc. n privina rspunsului plantelor la o cantitate excesiv de energie luminoas, dac n urm cu circa 20 de ani se accepta ideea c succesul plantelor n mediul lor de via este susinut de strategiile care maximizeaz rata procesului de fotosintez, astzi, acest punct de vedere pare depit. Ort (2001) preciza c reglarea fotosintezei, ca rspuns la factorii mediului nconjurtor este dinamic i este dominat de un proces fotoprotectiv, respectiv aa numita disipare termic nonfotosintetic a luminii absorbite. Numeroase studii au reliefat c n mod frecvent, peste jumtate din energia luminoas absorbit de clorofila dispus n cadrul fotosistemului II la frunzele sntoase, poate fi redirecionat, printr-un proces care opereaz n acest fotosistem, conducnd la eliberarea excesului fluxului fotonilor sub form de cldur. Acest proces de disipare termic se afl n competiie cu emisia de fotoni cu lungime de und mare (prin fluorescen) i cu consumul n cadrul reaciilor fotochimice (fotosintez).

120 Carotenoizii, pe lng rolul lor n captarea energiei luminoase i transmiterea acesteia moleculelor de clorofil, au rol n protecia clorofilei mpotriva foto-oxidrii, la intensitate luminoas mrit. n cursul fotosintezei, moleculele de clorofil devin excitate i se combin cu oxigenul molecular formnd complexul clorofil oxigen, care permite inactivarea moleculelor de clorofil, urmat de distrugerea lor. Dar, rareori are loc foto-oxidarea, deoarece n general, moleculele de clorofil activate revin la starea de baz, prin fluorescen sau participarea efectiv la fotosintez. n privina efectelor protectoare ale carotenoizilor (non-epoxi), acetia se leag de complexul clorofiloxigen i formeaz un derivat epoxid, elibernd moleculele de clorofil. Prin urmare, carotenoidul nsui devine oxidat. Carotenoidul non-epoxi poate fi regenerat din derivatul su epoxi, printr-o reacie la ntuneric, catalizat de enzima carotenoid deepoxidaza. Importana ciclului xantofilei a devenit mai clar n ultimii ani (Szabo i al., 2005). Cel mai abundent pigment din categoria xantofilelor n tilacoide este luteina, dar se afl de asemenea violaxantina (Vio), un derivat al -carotenului. Vio este sintetizat din zeaxantin, pe calea anteraxantin, n condiii de iluminare slab, prin activitatea zeaxantin epoxidazei. La lumin intens scade pH-ul n lumen i la o valoare critic, violaxantin de-epoxidaza transform violaxantina, napoi la zeaxantin. Ultima este absent n membranele tilacoidale, n condiii normale de lumin. Scderea pH-ului n lumen activeaz interconversia pigmenilor de tip xantofile, n timp de minute, ca parte a ciclului xantofilei, aa cum se remarc n fig.6.6. Deci, de la violaxantin (o xantofil cu dou grupri epoxid) se trece la anteraxantin (o grupare epoxid) i apoi la zeaxantin (fr grupare epoxid). Reacia de deepoxidare este catalizat de violaxantin de-epoxidaza (VDE) (o protein de circa 43 kDa, codificat de nucleu i localizat n lumenul tilacoidelor). O alt enzim este zeaxantin epoxidaza Fig.6.6. Ciclul xantofilei (ZE) (flavin adenin dinucleotid). n privina fotosistemului I, foarte rar se vorbete despre participarea sa la procesul de fotoprotecie la plante. Un nivel redus al radiaiilor luminoase determin eficien n privina reducerii CO2, atingndu-se un maximum teoretic. Explicaia este dat prin aceea c n astfel de condiii, cantitatea de lumin absorbit de antenele fotoreceptoare se afl n echilibru. 6.2.4. Mecanismul procesului de fotosintez Mecanismul procesului de fotosintez a constituit i constituie o preocupare pentru numeroi oameni de tiin. n prezent, se consider c procesul de fotosintez se desfoar n dou faze: I - faza dependent de lumin, care se desfoar n tilacoidele cloroplastelor; II - faza independent de lumin sau enzimatic, care se desfoar n stroma cloroplastelor (fig.6.7.). Aceasta se poate desfura i la ntuneric, atta timp ct este disponibil ATP i NADPH+ + H+.

121 6.2.4.1. Faza dependent de lumin la plantele superioare Principalele procese care se desfoar n faza dependent de lumin constau n : absorbia energiei luminoase i transformarea ei n energie biochimic potenial, respectiv formarea de ATP (substan bogat n energie), precum i NADPH2 (substan cu un puternic caracter reductor); Ambele substane urmeaz a fi folosite n faza a doua a fotosintezei, n procesul fixrii CO2. fotoliza moleculelor apei: punerea n libertate a protonilor, electronilor i a oxigenului molecular; - absorbia dioxidului de carbon (ex. la plantele C3 stomatele sunt deschise la lumin). Structuri specifice implicate
Fig. 6.7. Fazele procesului de fotosintez

Desfurarea acestor procese se datoreaz existenei la nivelul tilacoidelor cloroplastului a unor structuri specifice, respectiv a 4 complexe proteice principale i a pigmenilor asimilatori. nainte de a prezenta modul de realizare a proceselor amintite, se impune cunoaterea alctuirii acestor complexe. Astfel, principalele complexe sunt: fotosistemul II (FS II); complexul citocrom b6- citocromf; fotosistemul I (FS I); complexul ATP-sintetaz. La nivelul ambelor fofosisteme se gsesc pigmenii asimilatori, care alctuiesc antene fotoreceptoare (complexe de clorofile, caroteni i proteine), cu rolul de a capta energia fotonilor i de a o transmite spre centrele de reacie. Fotosistemul II const dintr-un complex proteic (polipeptidic) integral, care conine centrul de reacie reprezentat de clorofila a 680. Toate polipeptidele sunt codificate de genomul cloroplastului. Prin urmare, exist un complex anten care capteaz i transmite energia luminoas la clorofila a 680. Asociat centrului de reacie i interfeei membran-lumen se gsete complexul productor de oxigen (CPO) care este alctuit din polipeptidele periferice, codificate de gene nucleare. Aceste polipeptide se crede a ajuta la legarea Ca2+ i Cl-, ambele elemente fiind eseniale pentru fotoliza apei. De asemenea, din FSII fac parte plastochinonele. Plastochinonele sunt chinone speciale situate n plastide, care transport 2 electroni de la FS II, ctre FS I i care transport de asemenea H+ dinspre strom, ctre lumenul tilacoidelor. Mai este prezent feofitina, o molecul de clorofil a modificat, prin aceea c atomul central de Mg2+ al clorofilei este nlocuit cu doi atomi de H+. Plastochinona este solubil n lipide i liber s difuzeze n membran, n timp ce plastocianina poate difuza n mediul apos al lumenului tilacoidelor. Difuzibilitatea celor dou este important, pentru c rezolv incompatibilitatea spaial a fotosistemelor i a Cit b6f. Se apreciaz c FS II este situat cu precdere n tilacoidele granale. Clorofila a din centrul de reacie al FS II primete energia luminoas prin rezonan inductiv de la aproximativ 250 molecule de Cl.a i Cl.b (prezente n numr aproape egal) i de la numeroase xantofile. Aceti pigmeni alctuiesc complexul de captare a energiei luminoase n cadrul FS II (numit

122 LHCII). Ei funcioneaz ca un sistem anten, care absoarbe energia luminoas i trimite energia de excitaie ctre Cl.a680. O alt funcie a FS II este folosirea energiei luminoase pentru reducerea plastochinonei oxidate (PQ) i formarea plastochinonei reduse (PQH2), folosind electronii provenii de la ap. Complexul citocrom b6 - citocromf const din 4 polipeptide integrale (citocrom b6, cit.f, proteina cu 2Fe-2S i componenta IV, care nu are Fe i a crei funcie nu este cunoscut), dintre care 3 conin Fe. n timpul transportului electronilor, el permite desfurarea reducerii la Fe2+, apoi din nou oxidarea la Fe3+. Prezena fierului (cu posibilitatea modificrii valenei) permite transportul electronilor, prin oxidarea plastochinonei reduse i reducerea unei proteine mici, mobile, care conine Cu (plastocianin). De asemenea, este provocat transportul protonilor din strom, n lumen. Aceasta ajut la separarea electronilor i protonilor rezultai din ap, cu concursul complexului productor de oxigen. Complexul citocrom b6-f se afl n concentraii egale n tilacoidele stromei i tilacoidele granale. Funcia principal este transportul electronilor de la FS II, ctre FS I. Fotosistemul I este constituit din antene fotoreceptoare (circa 100 molecule de clorofila a i b n proporie de 4:1, caroteni), centru de reacie clorofila a700, precum i transportori de electroni asociai cu polipeptidelele centrului de reacie. Transportorii de electroni asociai cu polipeptidele din centrul de reacie sunt numii A0, A1 i X, fiind identificai ca: A0- o molecul de clorofil a; A1- probabil o filochinon (vitamina K1); X- o protein cu Fe-S, asemntoare cu cea din complexul anterior, dar conine 4Fe-4S i nu 2Fe-2S. El oxideaz plastocianina redus i transfer e- la o form solubil a proteinei cu Fe-S (feredoxin) situat ctre strom. Electronii sunt apoi folosii la reducerea NADP+ i mpreun cu H+ rezult NADPH++H+. Ca localizare n cloroplast- FSI este situat exclusiv n tilacoidele stromei i zonele de contact cu grana (faa dinspre strom). Toate centrele Fe-S pot prelua (via un Fe3+) i transfera (via Fe 2+) numai un electron odat, chiar dac sunt mai muli Fe. Acest fotosistem absoarbe energia luminoas independent de FS II, dar el conine un centru de reacie care primete electronii originari de la ap i trecui prin centrul de reacie al FS II. n centrul de reacie este clorofila a - P700. FS I primete energia prin rezonan inductiv de la cca 100 molecule de clorofil a i b (raportul lor 4:1), dispuse n sistemul anten, numit LHCI. Are rol n a oxida pastocianina redus i a transfera electronii la o forma solubil a proteinei cu Fe-S, numit feredoxin. Feredoxina este o protein periferic situat ctre strom. Electronii de la feredoxin sunt folosii apoi pentru reducerea NADP+ i mpreun cu protonii rezult NADPH2. Reacia este catalizat n strom de enzima feredoxin- NADP+ oxido-reductaz. ATP- sintetaza Este situat de-a lungul FS I, numai n tilacoidele stromei i zonele de contact cu grana. Const din dou pri principale: o " tulpin" numit CF0, care se ntinde de la lumen i traverseaz membrana tilacoidal ctre

strom;

o parte sferic, " o pies cap " numit CF1, catalitic, situat n strom, cu rol n conversia ADP i a fosforului anorganic, la ATP i H2O. Structura ATP- sintetazei din cloroplast este foarte asemntoare cu a celor din mitocondrie i din bacteria Escherichia coli.

123 Desfurarea proceselor specifice fazei de lumin Desfurarea proceselor n faza de lumin este redat n figura 6.8.. Energia luminoas este captat simultan de ctre antenele fotoreceptoare care aparin ambelor fotosisteme i este transmis prin rezonan inductiv de la o molecul de pigment la alta, pn la centrele de reacie (clorofila a 680 i clorofila a 700). Moleculele de clorofil din centrele de reacie vor intra ntr-o faz de excitaie, n consecin vor expulza un e- (deci se vor oxida). Dar, n scurt timp ele i vor reveni la starea de baz, prin primirea unui e- (deci se vor reduce). De unde vine acest e- ? Corofila a 680 primete e de la moleculele de H2O, electron care se elibereaz n urma Fig. 6.8. Principalele procese care au loc n faza dependent de lumin fotolizei apei. Clorofila a 700 primete e- de la FSII, electron transportat prin lanul de proteine transportoare. Prin urmare, e- expulzat de clorofila a680 este transportat ctre plastochinon (PQ), care n prezena a 2e- i a 2H+ preluai dinspre strom se reduce i rezult PQH2. Plastochinona redus este mobil n bistrat i cedeaz e- la complexul citb6-citf i H+ n lumen, apoi reface drumul. De la citb6-citf e- sunt cedai plastocianinei, care la rndul su i cedeaz clorofilei a700 din FSI. Aa i revine molecula de clorofil la starea iniial, deoarece tocmai spuneam c a pierdut un e-. De la FSI, e- este transportat ctre feredoxin i prin intermediul enzimei feredoxin-NADP oxidoreductaza i a protonilor (H+) se formeaz NADPH++H+. Spunem c a avut loc transportul aciclic al electronilor (cci ei nu se mai ntorc la FSII) i n urma acestui transport s-a format substana cu un puternic caracter reductor. Exist ns i posibilitatea ca e- de la feredoxin s nu mai fie transferai la NADP+. Feredoxina redus (Fdxred) interacioneaz cu Fdx plastochinon oxidoreductaza, care permite transferul electronilor la chinone. Plastochinona poate apoi s fie oxidat de complexul cit.b6f , permind translocarea protonilor transmembranal. Apoi, se continu ciclul amintit anterior, deci are loc un transport ciclic al electronilor. n urma acestui transport nu se formeaz NADPH++H+, dar transportul n plus de protoni folosete la sinteza suplimentar de ATP. Dar, cum revine clorofila a680 la starea de baz ? Clorofila a680 primete electronul de la molecula de H2O. Electronul rezult n urma fotolizei apei. Procesul este realizat de ctre complexul productor de oxigen (CPO). Un rol deosebit revine ionului Mn (cu diferitele sale stri de oxidare: Mn2+, Mn3+, Mn4+) (fig. 6.9.). Acest model schematic denumit mecanismul de stare S a fost propus de Kok i al. (1970). El const ntr-o serie de 5 stadii cunoscute ca S0 ....S4, care reprezint n mod succesiv forme mai oxidate ale sistemului enzimatic de oxidare a apei. Stadiul S4 produce O2, fr un ulterior imput de lumin i apoi se revine la starea S0.

124 n urma oxidrii unei molecule de ap sunt eliberai 2epentru transport. Primul compus care - i primete, cte unul o dat este aminoacidul tirozin din polipeptidul D1, urmnd apoi transferul la P680. Deci, lumina provoac oxidarea P680 i P680+ acioneaz apoi ca un atractant de electroni (oxidant). P680 cedeaz electronii feofitinei i aceasta i cedeaz plastochinonelor, pentru a cror reducere sunt necesari i protoni. Necesitatea a doi electroni i a 2 protoni pentru reducerea PQ este important n fotofosforilarea fotosintetic, pentru c protonul folosit vine din strom, apoi, cnd mai trziu + PQH Fig. 6.9. Strile succesive 2 este oxidat, H este transferat de la ea, n lumenul de oxidare n cadrul CPO tilacoidei. Rezultatul reducerii PQ la FS II i apoi oxidarea de ctre cit.b6, citf l constituie transportul a doi protoni din strom, ctre lumen. Aceti protoni sunt apoi transportai napoi, prin intermediul ATP- sintetazei, n cadrul procesului care conduce la formarea de ATP. De la plastochinone, electronii sunt transportai la complexul cit.b6-f i cit.f cedeaz un electron la PC oxidat. Ca urmare, aceasta se reduce. Fiecare plastocianin mobil transport un electron de-a lungul lumenului tilacoidei, ctre FS I. Acceptorul iniial este P700, care-l primete numai n momentul cnd tocmai a pierdut unul. Pierderea unui electron are loc cnd energia luminoas a fost transferat de la LHC I, la P700. Fiecare electron de la P700 trece la componentele: A0, apoi la A1 i respectiv la compusul cu 4Fe-4S. n final, feredoxina mobil accept un electron i-l transfer la NADP+, formndu-se NADPH++ H+ n strom. Iat deci c n faza de lumin electronii sunt transportai de la H2O ctre NADP+ i sunt depozitai temporar n NADPH+H+, nainte de a participa la reducerea CO2. Raiunea pentru care este necesar energia luminoas este aceea c apa este termodinamic dificil de oxidat, iar NADP+ este moderat dificil de redus. Dar, n urma fotolizei apei rezult i H+. Ce se ntmpl cu protonii (H+) ? Protonii se acumuleaz la concentraii mari n lumenul tilacoidelor (pH 5) (cei rezultai din fotoliza apei, dar i cei transportai dinspre strom) de circa 1000 de ori mai mari, dect n strom (pH 8). Se creeaz deci un puternic gradient al protonilor ctre strom i deoarece tilacoidele sunt impermeabile pentru H+, transportul se realizeaz prin intermediul ATP sintetazei. ATP sintetaza este orientat n membrana tilacoid cu o grupare hidrofil ctre strom i un canal hidrofob, care permite protonilor s difuzeze spontan de la lumen, ctre strom. Msurtorile au indicat un raport de 4H+/ATP, iar dup modelul transportului neciclic, transferul net a doi electroni prin lanul de transport are ca rezultat acumularea a ase protoni n lumen. Ideea c gradientul de pH poate asigura energia pentru formarea ATP n cloroplaste, mitocondrie i bacterii a fost nti propus de Peter Mitchell- 1961 n Anglia, teoria numindu-se teoria chimiosmotic. Astzi, explicaia este dat prin aceea c CF1 sufer o modificare conformaional (binding change mechanism) ceea ce conduce la formarea de ATP (Boyer, 1997). Formarea de ATP n relaie cu transportul de protoni odat cu transportul aciclic al electronilor de la H2O ctre NADP+ se numete fotofosforilare aciclic. Formarea de ATP fr implicarea FSII i fr a se forma NADPH++H+, dar cu concursul transportului ciclic al electronilor se numete fotofosforilare ciclic. Prin urmare, rezult mai mult ATP, dect NADPH++H+.

125 6.2.4.2. Faza independent de lumin (enzimatic) a fotosintezei reducerea dioxidului de carbon i sinteza hidrailor de carbon Pentru nceput, trebuie subliniat faptul c desfurarea acestei faze comport anumite particulariti la diferite specii de plante. Ca urmare, se descriu aa numitele ci metabolice: C3, C4 i CAM. Calea C3 este specific celor mai multe specii de plante. Se desfoar n stroma cloroplastului. Se folosesc produii fazei dependente de lumin, pentru reducerea fotosintetic a CO2 (PCR). Produsul organic primar detectat este un acid cu 3 atomi de carbon. Pentru cile C4 i CAM, de precizat faptul c faza enzimatic const n parcurgerea a dou etape: a) asimilarea carbonului de ctre un compus cu 3 atomi de carbon i formarea unuia cu patru atomi de carbon; procesul este realizat n celulele mezofilului (la plante de tip C4) i n timpul nopii (la plante de tip CAM); b) reducerea fotosintetic a CO2, asemenea mecanismului plantelor C3: n celulele tecii perivasculare (la C4) i n cursul zilei (la CAM). Deci, cele dou etape sunt separate n spaiu, la plantele C4 i separate n timp, la plantele CAM. A) Calea C3 Ciclul Calvin Reducerea fotosintetic a carbonului (PCR) Ciclul Calvin sau calea C3 de reducere fotosintetic a carbonului a fost elucidat pentru prima oar n anii 1950, de ctre Melvin Calvin, Andrew Benson i James A. Bassham. n cadrul acestei ci are loc reducerea fotosintetic a dioxidului de carbon, cu participarea produilor fazei de lumin (ATP i NADPH++H+), ntr-un ir de reacii denumite n mod sintetic ciclul Calvin (ciclul reducerii fotosintetice a carbonului PCR). Acceptorul CO2 este o substan cu 5 atomi ce carbon ribulozo-1,5-bisfosfat. Enzima care catalizeaz aceste reacii este ribulozo-bis-fosfat carboxilaza-oxigenaza (RUBISCO), o enzim care funcioneaz n toate organismele fotosintetizante, exceptnd cteva bacterii fotosintetizante. Aproximativ 1/2 din coninutul total al proteinelor din frunze se afl n cloroplaste i circa 1/2 este reprezentat de RUBISCO. Cercetrile efectuate pe alga verde unicelular - Chlorella folosind 14CO2 au reliefat c produsul primar detectat rezultat prin fixarea CO2 a fost un acid cu 3 atomi de carbon - acidul 3fosfogliceric. Aa se explic i denumirea cii C3. Acelai produs a fost detectat i la alte plante. Etapele principale ale reducerii fotosintetice a CO2 pe calea C3 Principalele etape ale reducerii fotosintetice a CO2 sunt: 1) carboxilarea: fixarea CO2 i H2O la ribulozo 1,5 bisfosfat, printr-o reacie catalizat de RUBISCO i formarea a 2 molecule de acid 3-fosfogliceric. 2) reducerea carbonului fixat: gruparea carboxil a acidului 3- fosfogliceric este redus la aldehid 3-fosfogliceric. n aceast reacie este necesar ATP i NADPH2, respectiv pentru fiecare mol de CO2 fixat, se folosesc 2 NADPH2 i 2ATP. Al treilea ATP se folosete n faza a treia. 3) - regenerarea acceptorului de CO2, respectiv regenerarea ribulozo 1,5 - bisfosfat, folosinduse cea de-a treia molecul de ATP (fig. 6.10.). Dup unii cercettori, se apreciaz existena unei a patra etape, respectiv sinteza produilor finali. Practic, din 6 molecule de aldehid fosfogliceric, una este pus n libertate, iar 5 molecule sunt folosite pentru regenerarea acceptorului.

126 Unele molecule de aldehid 3-fosfogliceric pot fi utilizate n cloroplast, pentru biosinteza amidonului, ca form tranzitorie la plantele amidonofile. Altele, sunt transformate n dihidroxiaceton fosfat, care poate fi transferat n afara cloroplastului. La nivelul citosolului se sintetizeaz hexozele, respectiv glucozo-1,6-difosfat (din dou molecule de aldehid 3-fosfogliceric). Dintr-o molecul de aldehid 3fosfogliceric i una de dihidroxiaceton fosfat rezult fructozo 1,6-difosfatul. Dintr-o molecul de glucoz i una de fructoz se formeaz zaharoz. Zaharoza reprezint principala form de transport a glucidelor n plante. Glucoza i fructoza constituie substrat pentru respiraie. Compuii intermediari rezultai sunt folosii Fig. 6.10. Reducerea fotosintetic a carbonului - Ciclul pentru biosinteza altor substane Calvin organice n plante. A.1. Fotorespiraia Fotorespiraia reprezint procesul eliberrii de CO2, dependent de lumin, proces caracteristic celulelor fotosintetic active i care difer n multe privine de producerea de CO2 i consumul de O2 care au loc n mitocondrie. Fotorespiraia sau ciclul acidului glicolic implic cooperarea ntre un cloroplast, un peroxizom de frunz i o mitocondrie (fig. 6.11.) (Somerville, 2001). Procesul se datoreaz faptului c enzima RUBISCO implicat n ciclul Calvin posed o funcie dubl, carboxilazic (rezultatul fiind formarea n cloroplast a 2 molecule de acid fosfogliceric) i oxidazic (cnd prin fixarea O2 la acceptor se formeaz 1 molecul de acid fosfogliceric i 1 molecul de acid fosfoglicolic). + CO2 [ C6 ] 2 P- gliceric Carboxilaza(C) RUBIS-P Oxigenaza(O) P-glicolic + P- gliceric +O2 Cele dou reacii catalizate de RUBISCO sunt competitive. Ratele acestora depind de concentraiile dioxidului de carbon i oxigenului, precum i de temperatur. Astfel, concentraia mic de O2 i respectiv concentraia mare de CO2 stimuleaz carboxilarea i nhib cea de-a doua reacie. n cazul unor concentraii normale n aer ale O2 i CO2 i la o temperatur de 25oC, raportul ntre reaciile catalizate de oxigenaz i carboxilaz este de circa 0,4: 1. De asemenea, activitatea oxigenazei este stimulat mult mai mult de temperaturile ridicate, comparativ cu activitatea carboxilazei. Inhibarea fotosintezei la plantele C3 de ctre O2 a fost demonstrat nc din anul 1920, de ctre biochimistul german Otto Warburg. Procesul a fost numit efectul Warburg (Warburg, 1920). n 1971, Ogren i Bowes au demonstrat experimental c O2 poate inhiba fixarea CO2 de ctre RUBISCO, ceea ce a explicat aparent efectul Warburg.

127 Ciclul C2 de biodegradare a acidului glicolic a) Cantitatea destul de mare de acid glicolic sintetizat la lumin nu poate fi utilizat n continuare n cloroplast. n acest organit, acidul fosfoglicolic format este transformat n acid glicolic, sub aciunea fosfoglicolat fosfatazei (PGP). b) La plantele superioare, acidul glicolic difuzeaz ntr-un tip special de peroxizomi, specifici celulelor frunzelor asimilatoare i denumii peroxizomi de frunz . Acidul glicolic este metabolizat n cadrul ciclului fotosintetic oxidativ al carbonului (ciclul C2). Cele mai importante funcii enzimatice ale peroxizomilor frunzei sunt: - oxidarea acidului glicolic, n prezena O2 la acid glioxilic, sub aciunea glicolat oxidazei (GOX), concomitent cu transferul electronilor la oxigen i formarea apei oxigenate; apa oxigenat (H2O2) format este descompus sub aciunea catalazei. acidul glioxilic este transaminat prin intermediul a dou transaminaze: serin: glioxilat aminotransferaza sau Glu: glioxilat aminotransferaza. Rezult glicina, care va reprezenta substratul a dou enzime mitocondriale. c) Glicina este transportat ctre mitocondrie, unde are loc decarboxilarea oxidativ prin intermediul complexului glicin decarboxilazei (GDC). Rezult CO2, amoniu i grupul metilen al metilen tetrahidrofolat (C1- THF). Serin hidroximetil transferaza (SHMT) ataeaz unitatea metilen, la cea de-a doua molecul de glicin, pentru a rezulta serina. n timp ce pierderea Fig. 6.11. Fotorespiraia: reprezentare schematic CO2 fixat anterior este un proces i organite celulare implicate costisitor energetic, dar neduntor, amoniul este citotoxic. Este nevoie ca amoniul s fie reasimilat n mod eficient. Serina difuzeaz napoi n peroxizom, unde este dezaminat la hidroxipiruvat. Acesta este redus la acid gliceric, cu ajutorul hidroxipiruvat reductazei. Acidul gliceric intr n cloroplast i este fosforilat la acid 3- fosfogliceric, un intermediar al ciclului Calvin. Amoniul eliberat este folosit de glutamin sintaza, pentru producerea glutaminei. Semnificaia fotorespiraiei Din punct de vedere fiziologic, semnificaia acestui ciclu nu a fost pe deplin lmurit. Specialitii n domeniu consider ca fiind foarte potrivit utilizarea termenului leakage point = punctul de scurgere al ciclului Calvin. Fotorespiraia are ca rezultat pierderea pn la 25% din carbonul fixat pe parcursul asimilrii fotosintetice a carbonului. n ciuda pierderii nete de carbon, ciclul fotorespirator permite regsirea n compui cu 3 atomi de carbon (ciclul C3) a 3 moli de carbon (ca acid 3 fosfogliceric) pentru fiecare carbon fotorespirat sub form de CO2. S-a demonstrat de altfel faptul c la multe plante, fixarea net a CO2 poate fi sporit cu 30%-60%, dac este eliminat O2. Prin urmare, la plantele C3 rata reducerii fotosintetice a carbonului este limitat din cauza procesului de fotorespiraie.

128 Cercetri recente ns au evideniat o nou cale de a reduce pierderile fotorespiratorii la Arabidopsis thaliana, prin eliberarea CO2 n jurul enzimei RUBISCO. Aceast cale se bazeaz pe ncorporarea unei ci bacteriene la nivel de cloroplast, pentru catabolismul substratului fotorespirator reprezentat de acidul glicolic (Kebeish i al., 2007). Conversia acidului glicolic direct la acid gliceric determin la plantele transgenice sporirea productivitii, prin mbuntirea fotosintezei (Khan, 2007). Unii cercettori consider peroxizomii ca remaneni ai organitelor respiratorii existente cu foarte mult timp n urm, iar fotorespiraia ca un defect evolutiv al metabolismului autotrof. ns, ambele activiti (oxigenazic i carboxilazic) ale enzimei RUBISCO au fost observate la toate plantele, inclusiv la bacterii fotoautotrofe. Fotorespiraia poate fi considerat ca un mecanism pentru detoxifierea acidului glicolic. Aceast interpretare este susinut de cercetrile cu mutante, la care unele enzime ale ciclului C2 lipsesc. Aceste mutante cresc normal, dac reacia oxigenazic a RUBISCO este inhibat cu o concentraie mare de CO2 sau o concentraie mic de O2. Fr asigurarea unor astfel de condiii (respectiv ntr-o atmosfer normal) aceste plante mor, ca urmare a acumulrii n cantiti mari a acidului glicolic i deci a toxicitii acestuia. Mai mult, a fost descris un nou mecanism de aprare fa de agenii patogeni, mecanism n care enzima fotorespiratorie serin: glioxilat aminotransferaza (SGT) joac un rol major (Taler i al., 2004). Alte ci de desfurare a fazei enzimatice la plantele superioare La multe plante superioare nu se desfoar procesul de fotorespiraie. Aceasta se ntmpl nu pentru c enzima RUBISCO ar prezenta alte caracteristici. Explicaia n astfel de situaii este dat prin aceea c aceste plante dispun de mecanisme specifice de concentrare a CO2 n jurul enzimei RUBISCO. Prin urmare, existena unei concentraii suficient de mari de dioxid de carbon n jurul enzimei face ca activitatea oxigenazic s fie blocat. n literatura de specialitate, pentru plantele superioare sunt descrise dou mecanisme de concentrare a CO2 la situsul de carboxilare al enzimei (fig. 6.12.). Un al treilea mecanism a fost descris la cianobacterii, alge, respectiv - pompa pentru CO2. 1)- faza enzimatic pe calea C4 Calea const n parcurgerea a dou etape separate spaial: 1) - ciclul de asimilare fotosintetic a carbonului (PCA sau ciclul C4); 2) - ciclul de reducere fotosintetic a carbonului (PCR sau ciclul C3). 2)- faza enzimatic pe calea CAM Calea const n parcurgerea a dou etape separate n timp: 1) - ciclul de asimilare fotosintetic a carbonului (PCA sau ciclul C4); 2) - ciclul de reducere fotosintetic a carbonului (PCR sau ciclul C3). n lucrarea de sintez a lui Keeley i Rundel (2003) sunt prezentate date interesante cu privire la evoluia mecanismelor C4 i CAM. Asimilarea fotosintetic a carbonului pe calea C4 Aceast cale a fost descoperit n anul 1966 de ctre doi cercettori australieni Hatch M.D i Slack C.R.. Este cunoscut i sub denumirea de calea Hatch- Slack. Se ntlnete la circa 18 familii de plante (pe jumtate comparativ cu rspndirea cii CAM), fiind restrns la nivelul plantelor angiosperme, n special plante erbacee. Exemple de astfel de plante: trestia de zahr, porumb, sorg, mei etc.

129 La dicotiledonate are o pondere extrem de redus (mai puin de 1%). Majoritatea plantelor C4 sunt din ordinul Caryophyllidae, incluznd familiile Chenopodiaceae, Amaranthaceae i Polygonaceae, cu 550, 250 i respectiv 80 specii. De asemenea, C4 se regsete la Rosidae (Euphorbiaceae) i Asteridae (Asteraceae). Calea C4 se desfoar i la plantele angiosperme acvatice submerse, att monocotiledonate, ct i dicotiledonate. La plantele C4 anatomia frunzei prezint anumite particulariti. n jurul vaselor conductoare exist un strat de celule ce alctuiete teaca perivascular (care conine numeroase cloroplaste), iar celulele mezofilului situate n jurul tecii perivasculare au un numr mic de cloroplaste. Structura frunzei este de tipul Kranz (Kranz- Crown / Halo) (fig. 6.13.). Dac literatura veche punea semnul egal ntre acest mecanism i anatomia Kranz, acum sunt exemple clare de plante C4 (plante acvatice i terestre) fr aceast structur. Fa de flexibilitatea expresiei CAM, plantele C4 n general sunt obligate la folosirea sistemului, cu excepia plantelor acvatice. Genul Flaveria (fam. Asteraceae) este neobinuit, deoarece conine specii C3, C4 i specii intermediare C3-C4. Aceast diversitate face ca Flaveria s fie subiect interesant n cadrul studiilor evenimentelor moleculare care nsoesc tranziia de la fotosinteza C3, la C4. Plantele de acest tip au un avantaj n competiia cu plantele de tip C3, n condiii de Fig. 6.12. Comparaie ntre fotosinteza de tip uscciune, temperaturi mari, limitri n privina N C4 i CAM sau CO2. Capacitatea lor de a elimina fotorespiraia poate conduce la rate fotosintetice semnificativ mai mari i capacitatea de a menine rate mari n ceea ce privete eficiena folosirii apei. La plantele lemnoase, calea C4 se ntlnete rar. Totui, sunt i exemple de astfel de plante, precum arbustul lemnos Euphorbia forbesii, care crete n pdurile deschise din insulele Hawai. Cercetrile efectuate n ultimii ani au stabilit mecanismele fiziologice i biochimice ale concentrrii CO2, care creeaz n celulele tecii perivasculare a frunzelor C4 o concentraie mare a CO2 i s-au stabilit anumite particulariti ale fotosintezei. Dup Edwards i al.(2001), cerinele minime pentru concentrarea CO2 sunt: o amplificare celular specific a enzimelor implicate n acest tip de fotosintez (ex. fosfoenolpiruvat carboxilaza n mezofil i C4 acid decarboxilazele, precum i RUBISCO n celulele tecii perivasculare), ct i o adaptare a activitii fotosistemelor i a transportului electronilor; existena unor translocatori specifici de metabolii; conectarea prin simplast a celor dou zone separate spaial; bariere pentru difuziunea CO2 ntre locul fixrii sale n celulele mezofilului i locurile de eliberare a dioxidului de carbon i respectiv de refixare n celulele tecii perivasculare. Prin urmare, calea C4 presupune cooperarea celor dou tipuri de celule, n vederea concentrrii CO2 n celulele tecii perivasculare. Sunt parcurse patru etape: 1) - asimilarea CO2, respectiv carboxilarea acceptorului reprezentat de acidul fosfo enol piruvic (PEP) n celulele mezofilului; procesul este catalizat de enzima fosfoenol piruvat carboxilaz; rezultatul acestei reacii este formarea unor acizi cu 4 atomi de carbon (acidul malic sau acidul aspartic); 2) - transportul acizilor formai anterior, nspre celulele tecii perivasculare; 3) - decarboxilarea acestor acizi cu patru atomi de carbon, n celulele tecii perivasculare; formarea unui compus cu 3 atomi de carbon i eliberarea de CO2, care urmeaz a fi redus la hidrai de carbon pe calea ciclului C3;

130 4) - transportul acidului cu trei atomi de C, care a rezultat prin decarboxilare (acidul piruvic sau alanina), napoi spre celulele mezofilului i regenerarea acidului fosfo enol piruvic, ca acceptor de CO2 (fig. 6.13.). Fa de enzima RUBISCO, fosfoenolpiruvat carboxilaza (PEP carboxilaza) are anumite avantaje, precum: afinitate mare pentru CO2, lipsa afinitii pentru O2. Temperaturile mari au efecte reduse asupra activitii ei. n literatura de specialitate sunt descrise trei variante ale cii C4. Principala diferen o constituie acidul C4 transportat n celulele tecii perivasculare (acid malic sau acid aspartic) i maniera decarboxilrii. Denumirea cii are la baz enzima care catalizeaz reaciile de decarboxilare: - enzima malic dependent de NADP (NADP-ME) gsit n cloroplaste; - enzima malic dependent de NAD (NAD-ME) gsit n mitocondrie; - fosfoenolpiruvat carboxikinaza (PEP-CK) din citosol. Reacia de carboxilare catalizat de PEP carboxilaza este comun celor trei variante. Ea are loc n citosolul celulelor mezofilului i folosete mai degrab HCO3- ,dect CO2 ca i substrat. n cazul NADP-ME, acidul oxalic este redus la acid malic n cloroplastele mezofilului de ctre NADPH++H+ folosind NADP: malat dehidrogenaza. Acidul malic format intr n cloroplastul celulei tecii perivasculare i aici este supus decarboxilrii oxidative, rezultnd acid piruvic. Dioxidul de carbon eliberat n celulele tecii perivasculare este transformat n hidrai de carbon, prin ciclul Calvin. Acidul piruvic este transportat napoi n mezofil i este transformat n acid fosfoenolpiruvic, n cloroplastul celulei mezofilului. Aceast reacie este comun tuturor celor trei variante. Un alt proces localizat n cloroplastele celulelor mezofilului la cele trei variante este reducerea acidului 3-fosfogliceric la triozo-fosfai, care are loc n cadrul ciclului Calvin propriu cloroplastelor la plante C3. Spre deosebire de acestea, toate variantele C4 export acidul 3fosfogliceric din celulele tecii perivasculare, pentru reducere, n cloroplastele mezofilului. Dup reducere, triozo-fosfaii sunt Fig. 6.13. Anatomia Kranz i faza enzimatic pe calea transportai napoi n cloroplastele C4 celulelor tecii perivasculare, fiind folosii pentru operarea ciclului Calvin. O posibil explicaie pentru aceast splitare a ciclului Calvin ntre cloroplastele tecii perivasculare i cele ale mezofilului ar fi de a restriciona activitatea de transport a electronilor i a eliberrii O2 n teaca perivascular. Astfel, se evit nivelele de oxigen care ar favoriza fotorespiraia (Bowyen i Leegood, 1997). Plantele C4 difer nu doar n privina asimilrii CO2 , ci i n privina asimilrii azotului. Ambele enzime, nitrat reductaza i nitrit reductaza sunt localizate n celulele mezofilului i sunt absente n celulele tecii perivasculare (Vanghn i Campbell, 1988). Aceasta este probabil cauza eficienei sporite a utilizrii fotosintetice a azotului (NUE) la plantele C4, comparativ cu plantele C3. Faza enzimatic pe calea CAM Calea CAM (metabolismul acizilor la Crassulaceae) este numit astfel dup familia de plante la care un astfel de mecanism a fost observat pentru prima oar. ns, aceast cale de concentrare a CO2 nu este specific doar acestei familii de plante.

131 Este cunoscut numai la plantele vasculare, aparinnd la circa 33 familii de plante. Ca urmare a distribuiei largi, pare a fi aprut n mod independent de un numr de ori, fiind anterioar cii C4. Majoritatea speciilor CAM sunt din diviziunea Anthophyta, monocotiledonate dar i dicotiledonate. Speciile CAM terestre sunt de obicei suculente de deert, n special din familiile: Cactaceae, Crassulaceae, Asteraceae. Nu toate Crassulaceele desfoar CAM. Prin urmare, suculena nu este o precondiie la plantele CAM. De exemplu, Tillandsia usneoides (epifit America de Sud) din fam. Bromeliaceae nu-i suculent, dar desfoar CAM. n condiii terestre, plantele anuale sunt doar rar de tipul CAM, deoarece creterea efemer a constituit un mod de selecie mpotriva ratelor reduse de cretere. O excepie este specia anual Mesemryanthemum crystallinum (Aizoaceae - plant cu frunze suculente), care poate folosi calea C3, dar trece i la calea CAM, crescut fiind n sol salin. La Cactaceae, plantulele sunt de tipul C3 i mai trziu trec la calea CAM. Nu se tie cu exactitate dac aceasta se datoreaz stresului, modificrilor programate de dezvoltare sau ambelor cauze. Speciile epifite aparin n special monocotiledonatelor din Lilianae (Orchidaceae din care 60% CAM) i Bromelianae (Bromeliaceae din care se estimeaz c 50% sunt CAM), dar i dicotiledonatele Asclepiadaceae (90% CAM) i Cactaceae (100% CAM). De asemenea, calea CAM se regsete la plante acvatice care produc spori Lycophyta din genul Isotes, dar i la 5 familii din Anthophyta (att monocotiledonate, ct i dicotiledonate). Se estimeaz c 6% dintre plantele terestre (inclusiv epifite) i 6% din flora acvatic posed CAM. Specificitatea const n faptul c, n general, plantele adaptate mediilor uscate (exemplu cactuii) recurg la un astfel de metabolism. Deci, pentru plantele terestre factorul selectiv este stresul hidric i necesitatea sporirii eficienei folosirii apei. n timp ce plantele C4 devin mai eficiente la intensiti luminoase mari, la CAM influene mari prezint temperatura, umiditatea atmosferic, salinitatea. De obicei, cile C4 i CAM se exclud una pe alta. Excepie face planta dicotiledonat suculent C4 Portulaca oleracea, care este capabil s gseasc calea optim n condiii naturale. De altfel, plantele CAM crescute n condiii optime n ceea ce privete disponibilitatea apei exprim timp de 24 de ore absorbia CO2 att pe cale CAM ct i pe calea C3. Ratele de cretere sunt extraordinare. n ceea ce privete maximizarea eficienei folosirii apei, o plant tipic CAM pierde 50-100 g ap pentru fiecare gram de CO2 asimilat, comparativ cu plantele de tip C3 i C4 care pierd 400 - 500 g i respectiv 250-300 g ap. Eficiena mrit a folosirii apei deriv din faptul c ostiolele stomatelor se deschid n perioada rece a nopilor deertice i se nchid n timpul zilelor calde i uscate. Deoarece vaporii de ap i CO2 au aceeai cale de difuziune (ostiola Fig. 6.14. Faza enzimatic pe stomatelor), asimilarea CO2 se realizeaz noaptea (fig.6.14.). calea CAM Noaptea are loc fixarea CO2 de ctre acidul fosfoenolpiruvic, proces catalizat de enzima fofoenolpiruvat carboxilaza i rezult acidul oxal acetic. Acesta este redus apoi la acid malic. Carbonul este depozitat temporar subcelular n vacuol, sub form de acid malic (vacuole mari specifice celulelor plantelor CAM). Ziua, la plantele terestre ostiolele stomatelor se nchid (reducndu-se pierderea apei), dar avnd ca rezultat un deficit intern de dioxid de carbon. Aceast problem se rezolv prin decarboxilarea acidului malic depozitat n cursul nopii. Pe msur ce acidul malic din vacuole se consum (fiind decarboxilat sub aciune enzimatic), dioxidul de carbon nu se pierde (ostiolele fiind nchise), ci este redus la hidrai de carbon, prin intermediul cii C3.

132 Existena unei concentraii interne mrite a CO2 (nivelul dioxidului de carbon n cursul zilei ajunge la de 2 pn la 60 de ori nivelul mediului) face ca activitatea oxigenazic a RUBISCO s fie blocat, iar cea carboxilazic favorizat. Att plantele terestre, ct i acvatice (CAM) exprim o plasticitate extraordinar cu privire la contribuia acestui mecanism de concentrare a CO2 la bugetul de carbon (C) al plantelor. La multe specii CAM, fixarea pe parcursul nopii asigur aproape tot ctigul de C. Altele ns au o contribuie mai mic sau deloc i rolul primar al CAM este reciclarea carbonului provenit din respiraie. Prin urmare, sunt desemnate specii CAM obligate sau specii CAM flexibile, ceea ce implic att componenta genetic, ct i plasticitatea fenotipic. Paralel C3,C4, CAM Dei procesul de fotosintez este influenat de numeroi factori interni i externi, diferene privind rata fotosintezei intervin chiar n condiii identice, la specii de plante care aparin tipurilor metabolice C3, C4 i CAM. Cteva dintre particularitile acestor specii sunt prezentate sintetic n tabelul 6.1. Tabelul 6.1. Paralel ntre plantele C3, C4 i CAM (dup Hoffman, 1987, citat de Sebanek, 1992) Nr. 1 2 3 4 Specificaie
Specii

C3
Pisum sativum Cucurbita pepo

C4
Zea mays Sorghum bicolor

CAM

5 6 7 8 9 10 11 12

Agave americana Opuntia vulgaris Habitat natural Climat temperat Uscciune, radiaie solar Condiii aride, intens temperaturi mari ziua i mici noaptea Structura frunzei Mezofil difereniat n Mezofil cu prezena tecii Mezofil cu vacuole esut palisadic i perivasculare mari lacunos Structura Tipic, cu grana Dimorfism: Numr mic de grana Clorofila a : clorofila cloroplastului Clorofila a : clorofila - n celulele mezofilului b = 3:1 a : b = 3:1 b = 3:1 - n teaca perivascular, agranale a : b = 5:1 Enzime fixatoare a RUBISCO PEP carboxilaza i PEP carboxilaza i CO2 RUBISCO (separate RUBISCO (separate spaial) n timp) Produi primari Acid fosfogliceric Acid oxalacetic Acid oxalacetic (4C) (3C) (4C) Punctul de 45 60 L L-1 < 5 L L-1 Variabil, n jur de compensaie pentru 200 L L-1 CO2 Fotorespiraia Atinge 1/3 din Foarte mic sau absent Foarte mic fotosinteza brut Valori maxime ale 15 - 30 mol CO2 m-2 35 45 mol CO2 m-2 s-1 1 5 mol CO2 m-2 s-1 1 fotosintezei nete s Rata maxim a 0,5 2,0 g s.u. dm-2 4 - 5 g s.u. dm-2 zi-1 0,012 0,020 g s.u. -1 creterii zi dm-2 zi-1 Producia anual de 22,0 +,- 3,3 t ha-1an-1 38,6 +,- 16,9 3 t ha-1an-1 Variaii mari n datele substan uscat disponibile Coeficientul de 450 900 g H2O g-1 250- 350 g H2O g-1 s.u. 45 55 g H2O g-1 s.u. transpiraie s.u.

133 6.2.5. Factorii care influeneaz fotosinteza Procesul de fotosintez este influenat de numeroi factori interni (pigmeni asimilatori, factori care in de caracteristicile protoplastului, structura i vrsta frunzelor, acumularea de fotoasimilate n relaie cu cerinele pentru acestea, coninutul n elemente minerale al frunzelor, hormoni etc.), precum i de factori externi (lumina, temperatura, concentraia CO2, concentraia O2, starea solului n ceea ce privete prezena apei i a elementelor minerale, prezena unor poluani n sol i aer etc.). 6.2.5.1. Factorii interni care influeneaz fotosinteza 1. Specia Intensitatea fotosintezei variaz n funcie de tipul fotosintetic al speciei (vezi paralela C3, C4, CAM). Spre exemplu, la plantele C4 cu structura Kranz, rata fotosintezei este mai mare comparativ cu plantele C3, deoarece cloroplastele sunt situate att n celulele mezofilului, ct i n celulele tecii perivasculare. Dubla fixare a CO2 asigur o productivitate mai mare. Cele mai mici valori ale intensitii fotosintezei se nregistreaz la plantele suculente din deert, care desfoar tipul fotosintetic CAM. 2. Prezena pigmenilor asimilatori reprezint o condiie de baz pentru desfurarea fotosintezei, avnd n vedere implicarea lor n captarea energiei solare i transformarea acesteia n energie chimic. Dup unii cercettori, rata fotosintezei este direct proporional cu concentraia pigmenilor asimilatori, dei, nu ntotdeauna datele din literatura de specialitate converg ctre aceast corelaie. 3. Caracteristicile protoplastului, precum gradul de hidratare al acestuia influeneaz spre exemplu activitatea enzimatic. Un grad corespunztor de hidratare va avea efect benefic i din acest punct de vedere, iar rata fotosintezei va fi mai mare. Totodat, apa reprezint materia prim pentru fotosintez (surs de H+, e-, O2). 4. Vrsta frunzelor n frunzele tocmai formate sau etiolate nu are loc fotosinteza. La frunzele tinere, intensitatea fotosintezei este mai mic, dect intensitatea respiraiei. Pe msura creterii frunzelor, capacitatea de a face fotosintez sporete. Rata maxim a fotosintezei se nregistreaz de regul la frunzele mature, care au atins dimensiunea specific. La unele specii, valorile maxime se nregistreaz cnd frunza are o suprafa de 30% din maximum, pn la 100%. Pe msura mbtrnirii frunzei, intensitatea fotosintezei ncepe s scad, probabil n strns corelaie cu scderea coninutului de clorofil (Jiang i al., 2006). 5. Cantitatea de fotoasimilate i cerinele pentru acestea Acumularea de produi ai fotosintezei la situsul de desfurare a procesului (glucoz, fructoz, pentru plantele zaharofile sau amidon tranzitoriu, la plante amidonofile) conduce la o ntrziere/inhibiie a fotosintezei. Un astfel de mecanism feedback de inhibiie intervine atunci cnd rata de translocare i utilizare a substanelor organice produse, ctre zonele de consum sau de depozitare scade. S-a constatat spre exemplu c ndeprtarea tuberculilor, seminelor sau fructelor (care sunt utilizatori) conduce la inhibarea fotosintezei dup cteva zile, mai ales la frunzele vecine, care translocau n mod normal substane la aceste organe. De asemenea, speciile cu rate fotosintetice mari au i rate relativ mari de translocare i deci menin fixarea rapid a CO2. 6. Gradul de deschidere a stomatelor influeneaz ptrunderea dioxidului de carbon, materie prim n fotosintez. Conductana stomatic i fotosinteza msurate la punctul de saturaie pentru lumin descresc n medie cu 43% i respectiv 33% pe parcursul sezonului secetos, de diminea cnd tensiunea xilemului este mic, ctre mijlocul dup amiezii, cnd tensiunea xilemului atinge maxima zilnic. Conductana stomatic reprezint un parametru de referin n privina rspunsului fotosintetic la via de vie, n condiii de uscciune (Medrano i al., 2002). Studiile microscopice pe baza fluorescenei clorofilei la frunze intacte, asupra cloroplastelor celulelor de gard dispuse abaxial au reliefat variaii n privina porului stomatic, a mrimii celulelor de gard la specii diferite, a numrului de cloroplaste, precum i a orientrii acestora (Lawson i al., 2003).

134 7. Coninutul n elemente minerale din frunze Spre exemplu, un deficit de N i Mg poate determina reducerea ratei fotosintezei. 8. Hormonii S-a demonstrat c acidul giberelic i citochininele sporesc productivitatea fotosintezei i activitatea carboxilazic a enzimei RUBISCO. Cercetrile recente au condus la concluzia c gradienii luminoi n cadrul aparatului foliar al plantei au ca rezultat reducerea activitii citochininelor n frunzele umbrite, ca o consecin a importului din xilem. Prin urmare, citochininele sunt implicate n reglarea aclimatizrii fotosintezei ntregii plante la gradieni luminoi (Boonman i al., 2007). 9. Starea de sntate a plantei n cazul plantelor afectate de factori de stres biotic i abiotic intervin modificri ale ratei fotosintezei, n raport cu factorul de stres, cu severitatea stresului etc. Spre exemplu, n cazul aciunii ciupercii Ustilago maydis, la Zea mays, n toate stadiile de dezvoltare, ciuperca a indus formarea galelor n frunze, iar rspunsul la concentraia de CO2, punctul de compensaie pentru CO2 i activitatea enzimatic caracteristic plantelor C3 a demonstrat ca n esuturile infectate a fost prevenit stabilirea fotosintezei de tip C4 (Horst i al., 2008) (fig.6.15.).

Fig.6. 15. Schimbul de gaze caracteristic frunzelor la Z. mays sub incidena ciupercii Ustilago maydis (dup Horst i al., 2008)

135 6.2.5.2. Factorii externi care influeneaz fotosinteza 1) Lumina reprezint materie prim i condiie prioritar pentru fotosintez. n absena sa procesul nu are loc. Aciunea sa este direct, prin implicarea n excitarea moleculelor de clorofil i fotoliza apei, dar i indirect prin controlul micrii stomatelor (permind difuziunea CO2 din mediul extern, ctre situsul fotosintezei). Lumina influeneaz fotosinteza prin cantitatea sa (sau intensitate), prin calitate (sau compoziie spectral), dar i prin durata de aciune. a) Intensitatea fotosintezei este mic la valori mici ale intensitii luminoase i crete proporional cu creterea intensitii luminii, pn la anumite limite. La o intensitate luminoas foarte mare, fotosinteza este inhibat, ca urmare a solarizrii constituenilor celulei fotosintetice i a nchiderii stomatelor. Din acest punct de vedere, necesitile plantelor variaz cu specia. Plantele heliofile necesit o intensitate luminoas mai mare, comparativ cu ombrofitele. n cazul unei frunze expus la intensiti luminoase diferite, dar cu o concentraie normal de CO2 n aer (0,03%), constatarea va fi urmtoarea: la ntuneric nu are loc fixarea net de CO2 (cu excepia plantelor CAM); la lumin slab, pierderile de CO2 prin respiraie depesc fixarea CO2 n fotosintez; dup un anumit nivel al intensitii luminii, denumit punct de saturaie cu lumin, creterea intensitii luminii nu determin creterea n continuare a ratei fotosintezei. La microalge, punctul de saturaie pentru lumin a fost atins la circa 400 moli fotoni m-2s-1 (Is) (fig. 6.16.). Se remarc faptul c la ntuneric are loc absorbia de O2 deoarece se realizeaz respiraia i se consum 3 mmol O2 [mol Chl] -1 s-1. Rata eliberrii O2 crete linear odat cu creterea intensitii luminii, la valori mici ale intensitii acesteia. Este domeniul intensitii luminii la care fotosinteza opereaz cu maximum de eficien n procesul de conversie a energiei solare (Zhu i al., 2008). La intensiti luminoase Fig. 6.16.Curba de saturaie pentru lumin, la microalge mai mari, eliberarea de O2 i rata (dup Melis, 2009) fotosintezei nregistreaz un platou, la circa 40 mmol O2 [mol Chl] -1 s-1. Aceasta reprezint rata saturrii fotosintezei n funcie de lumin (Fmax). ntre ntuneric i punctul de saturaie exist o intensitate a luminii la care intensitatea fotosintezei este egal cu intensitatea respiraiei (altfel spus cele dou procese se afl n echilibru, deci schimbul de CO2 este zero), denumit punctul de compensaie pentru lumin. Valoarea sa variaz cu specia, cu temperatura la care se face determinarea, cu concentraia CO2. Din acest punct de vedere sunt diferene majore ntre plantele crescute n plin soare (10-20 mol m-2 s-1 ) i plantele de umbr (1-5 mol m-2 s-1 ). Valorile mai reduse n ultimul caz sunt explicate prin rata foarte redus a respiraiei, ceea ce de altfel constituie o adaptare de baz a acestor plante pentru a supravieui n condiii de mediu n care lumina este un factor limitativ. Doar la intensiti luminoase situate peste punctul de compensaie pentru lumin pot avea loc creteri ale masei uscate a plantelor.

136 Fotoaclimatizarea se realizeaz att la nivel de cloroplast, ct i la nivel de frunz. La nivel de cloroplast au loc modificri privind coninutul de proteine, pigmeni, enzime ale ciclului Calvin, modificri ale raportului chl a / chl b; modificri ale raportului FS II / PS I etc. La nivel de frunz, intervin modificri morfologice (cele de plin soare au frunze mai groase, cu mai multe celule columnare la nivelul mezofilului). Cloroplastele plantelor de umbr conin mai multe tilacoide, dect cloroplastele plantelor de soare. n tilacoidele plantelor crescute la umbr, raportul clorofil a/clorofil b este mai sczut i de asemenea, este o valoare redus a raportului protein solubil/clorofil. Structura cloroplastelor de pe partea umbrit a frunzelor poate fi similar cu cea a cloroplastelor plantelor de pe pardoseala pdurii. Pentru plantele de umbr (inclusiv cele de interior), n condiii de plin soare, rata fotosintezei este mai mic, dect la plantele cultivate sau crescute n teren deschis. Rspunsul fotosintetic este saturat la valori mici ale intensitii luminii, comparativ cu alte specii, iar la o intensitate luminoas sczut, intensitatea fotosintezei este mai mare, comparativ cu alte specii. Punctul de compensaie pentru lumin are valori mici. Pentru plante de tip C3, punctul de saturaie este situat la - din lumina total solar, cu excepia unora precum floarea soarelui, care nu devin saturate pn aproape de intensitatea total a luminii i au maxime apropiate plantelor de tip C4. Pentru plantele de tip C4, punctul de saturaie este situat la valori foarte mari ale intensitii luminii, chiar dublu fa de cele de tip C3. Intensitatea fotosintezei atinge valori chiar de peste 40 mol m-2 s-1 CO2. (fig. 6.17.). b) n privina calitii luminii, trebuie precizat faptul c este activ n fotosintez lumina vizibil a spectrului electromagnetic solar (PAR) (R- rou: O- oranj; G-galben; V-verde; A- albastru; I- indigo i V-violet). Cele mai active sunt radiaiile roii i albastre, n timp ce radiaiile verzi sunt slab absorbite (ele trec prin frunz sau sunt reflectate) Deci, fotosinteza este mai intens n rou i albastru. Fa de PAR, se interpreteaz pe de o parte Fig. 6.17. Rspunsul a trei specii dicotiledonate la intensiti luminoase spectrul de absorbie al pigmenilor i pe de alt modificate parte spectrul de aciune al acestora (fig. 6.18.). Din acest punct de vedere, n general se remarc o oarecare suprapunere a curbelor specifice. Att spectrul de absorbie, ct i cel de aciune prezint dou maxime (n rou i albastru) i un minim n verde. Discrepana n regiunea de absorbie a carotenoizilor de la 450 la 550 nm indic faptul c transferul energiei de la carotenoizi la clorofile nu este att de eficient, precum transferul ntre clorofile. Experimentele bazate pe folosirea carbonului marcat au indicat faptul c, lumina roie favorizeaz formarea unei cantiti mai mari de hidrai de carbon. Lumina albastr favorizeaz formarea n cantiti mai mari a proteinelor, mai ales n condiiile unei abundene de azot n nutriia plantelor. c) De asemenea, cantitatea total de asimilate se coreleaz pozitiv cu durata de iluminare. S-a constatat ns c expunerea plantelor la lumin intermitent determin Fig. 6.18. Spectrele de absorbie i obinerea unei cantiti mai mari de fotoasimilate, de aciune ale pigmenilor comparativ cu lumina continu, probabil datorit folosirii asimilatori produilor fazei dependente de lumin imediat n cadrul reaciilor enzimatice. Totodat, rata fotosintezei este mai mare la plantele expuse la lumin slab, pentru o perioad

137 mai lung de timp, dect la plantele expuse la lumin puternic, pentru perioade mai scurte de timp. 2) Temperatura Fotosinteza se realizeaz n limite largi ale temperaturii, n funcie de specia de plant (habitatul natural). Spre exemplu, lichenii pot ncepe fotosinteza la -18oC; cianobacteriile realizeaz acest proces la 75oC i chiar peste aceast limit; plantele din zona temperat fotosintetizeaz la valori ale temperaturii cuprinse n general ntre 0oC - 35oC. ntre 0oC - 35oC, odat cu creterea temperaturii o cu 10 C, fotosinteza se intensific de circa 1,5 ori (Q10 de temperatur legea lui Vant Hoff). La peste 30oC, eficiena fotosintezei la plantele C3 scade mai mult, Fig. 6.19. Influena temperaturii comparativ cu situaia celor de tip C4. La temperaturi asupra ratei fotosintezei mari, la primele se intensific procesul de fotorespiraie, ca urmare a creterii raportului O2 dizolvat/ CO2 dizolvat (fig. 6.19.). La unele plante, n zona temperat fotosinteza are loc i la 0oC i chiar la valori negative la unele conifere (ctre -35oC). Temperaturile mici inactiveaz enzimele, iar cele mari le denatureaz, ceea ce determin reducerea, respectiv inhibarea fotosintezei. 3) Disponibilitatea CO2 Concentraia CO2 n atmosfer este de 0,03% (330 ppm). O dublare (o cretere de pn la 700 ppm) pentru o perioad scurt a concentraiei dioxidului de carbon sporete productivitatea fotosintezei la plantele de tip C3, dac nu intervine alt factor limitativ (de exemplu intensitate luminoas redus). Dac ns se depesc 10-15 zile, dioxidul de carbon devine toxic i provoac daune. La plantele C3, una dintre explicaii este aceea c odat cu creterea raportului CO2/O2 fotorespiraia scade i corespunztor, valorile fotosintezei nete cresc. De asemenea, creterea concentraiei de dioxid de carbon determin scderea conductanei stomatice pentru vaporii de ap. La plantele C4 ns, fotosinteza este n general saturat la concentraii ale CO2 apropiate de 400 mol mol-1, chiar n condiiile unei intensiti luminoase mrite. Diferenele sunt evidente dac se reduce concentraia de CO2 sub nivelul din atmosfer, iar intensitatea luminii se menine deasupra punctului de compensaie pentru lumin: la plantele C3 (ex. floarea soarelui) fotosinteza atinge valoarea zero la o concentraie a CO2 de 35-45 mol mol -1; la plantele C4 (ex. porumb) fixarea net a CO2 continu pn la concentraii mai mici, de 0- 5 mol mol -1. Asemenea cazului intensitii luminoase, n cazul CO2 se utilizeaz un indicator denumit - punctul de compensaie pentru CO2 = concentraia CO2, la care cantitatea de CO2 fixat n fotosintez este egal cu cantitatea de CO2 eliminat prin respiraie (fig. 6.20.) Dac se scade concentraia O2 de la o valoare normal n aer de circa 21%, la circa 2%, diferenele n ceea ce privete punctul de compensaie pentru CO2 pot disprea. La plantele C4 rmne la fel, iar la plantele C3 se apropie de zero. Se pune ntrebarea: care este factorul limitativ, intensitatea luminii sau concentraia CO2? La plantele C3, de obicei, ambii factori sunt limitativi, dar nu n mod absolut Fig. 6.20. Punctul de compensaie pentru aceeai frunz. pentru dioxidul de carbon n condiii de ser, se resimte necesitatea unui plus de dioxid de carbon, pentru a se asigura o cretere maxim, mai ales iarna, cnd serele sunt nchise. Se practic fertilizarea cu

138 dioxid de carbon, folosind tancuri de mare presiune, arderea unor materiale etc. Concentraia CO2 nu trebuie s depeasc 1000-1200 mol mol -1 , cci poate deveni toxic sau determin nchiderea stomatelor. 4) Concentraia de O2 Concentraia normal n mediu este de 21%. O scdere la circa 2% determin o cretere a ratei fotosintezei de 1,5-2 ori. Creterea concentraiei de O2 scade rata fotosintezei la plantele C3 i CAM, corelat cu creterea activitii oxigenazei i scderea activitii carboxilazei la nivelul RUBISCO. n consecin, se ajunge la o pierdere de noi fotoasimilate, prin procesul de fotorespiraie. 5) Umiditatea solului i aerului Umiditatea solului influeneaz negativ rata fotosintezei n cazul ambelor extreme. Insuficiena determin ofilirea, cu consecine asupra celulelor asimilatoare. Excesul apei n sol determin o insuficien a oxigenului necesar pentru desfurarea procesului de respiraie la nivelul rdcinilor i deci efecte negative asupra absorbiei. O umiditate sczut n atmosfer determin nchiderea stomatelor. Asociat cu o temperatur ridicat provoac o intensificare a transpiraiei, mai ales la orele prnzului, vara, ceea ce conduce la o scdere a ratei fotosintezei. 6) Prezena elementelor minerale n sol De prezena unor elemente minerale n sol, precum N i Mg depinde formarea clorofilei. O serie de alte elemente minerale influeneaz desfurarea a diferite procese legate de fotosintez: fosforul este necesar pentru realizarea fosforilrii; manganul intervine n fotoliza apei; Cu este prezent n plastocianin etc. 7) Poluanii atmosferici Poluani precum SO2, NO2, O3 se dizolv n ap la nivelul protoplastului, determin acidifierea sucului celular i perturb activitatea enzimatic. Este cunoscut importana meninerii valorilor corespunztoare ale pH-ului la nivel de citosol. Totodat, la valori reduse ale pH-ului are loc nchiderea stomatelor i n consecin se perturb procesul de difuziune a gazelor. Desigur, impactul negativ al poluanilor atmosferici asupra fotosintezei se nregistreaz dac concentraia acestora depete anumite limite. 6.2.6. Legtura dintre fotosintez i recolt. Msuri de sporire a recoltei Fotosinteza st la baza produciei biologice, respectiv biomas ha-1an-1. Agronomii sunt preocupai de productivitatea economic a prilor plantei, nu doar de masa total a plantei. Recolta agricol este partea valoroas, util din punct de vedere economic: producia economic ha-1an-1 (masa proaspt semine, fructe, plante furajere etc.). Recolta biologic sau total este dat de fotosinteza real (biomas), din care se scad pierderile: Recolta biologic = FST RS1T1 P unde: F = intensitatea fotosintezei (g s.u. m-2zi-1); R= intensitatea respiraiei (g s.u. m-2zi-1); S = suprafaa de asimilaie (m2); S1 = suprafaa de respiraie (m2); T = timpul de fotosintez (zile); T1 = timpul de respiraie (zile); P = masa prii pierdute n timpul vieii plantei (frunze, flori, fructe, rdcini etc.). Ali indicatori utilizai pot fi: producia financiar = bani ha-1an-1; producia financiar net sau profitabilitatea (producia financiar costurile) = bani ha-1an-1. Sporirea biomasei se coreleaz cu o serie de factori limitativi ai produciei (tabelul 6.2.).

139 Tabelul 6.2. Factori limitativi ai produciei Factori fici Factori variabili - lumina costisitori ieftini - temperatura - umiditatea solului (irigare) - densitatea plantelor - concentraia - fertilitatea solului (fertilizare) - momentul CO2 - bolile i duntorii platelor semnatului - tipul de sol etc. (tratamente fitosanitare) - genotipul Deoarece producerea recoltei i sporirea produciei economice nu corespund ntotdeauna cu profitabilitatea, cercetrile n domeniu trebuie direcionate ctre obinerea unei producii mari, de calitate i acceptabil economic. 6.3. Nutriia autotrof chimiosintetizant Acest tip de nutriie este specific unor grupe de microorganisme (bacterii) lipsite de pigmeni asimilatori (deci incapabile de fotosintez) i care pentru sinteza substanelor organice folosesc energia chimic eliberat n urma unor reacii chimice de oxidare. 1) Bacteriile nitrificatoare transform NH3 la nitrat NO3 Nitrosomonas 2NH3 + 3O2 2HNO2 + 2H2O + E Nitrobacter 2HNO3 + E 2HNO2 + O2 2) Sulfobacteriile i asigur energia prin oxidarea hidrogenului sulfurat i a sulfului elementar. Exemple: Thiotrix, Beggiatoa, Thiobacillus. a) 2H2S + O2 2S + 2H2O + E b) 2S + 2H2O + 3O2 2H2SO4 + E Sulful format pe cale microbiologic este asimilat uor de ctre plantele superioare. 3) Ferobacteriile, precum Thiobacillus ferrooxidans triesc n apa care conine sruri de fier i i procur energia transformnd srurile feroase (II) n sruri ferice (III). Fe2+ Fe3+ + e- + E 4) Hidrogenbacteriile sunt specii cu proprieti morfologice i fiziologice foarte variate (de exemplu: Nocardia autotrophica, Pseudomonas facilis). Crescute ntr-un mediu organic sunt saprofite, dar ntr-un mediu anorganic (care conine H2,O2, CO2) oxideaz H la H2O, cu eliberare de energie. 2H2 + O2 2H2O + E 5) Bacterii oxidante ale monoxidului de carbon (CO) (precum Hydrogenomonas carboxydonorans) oxideaz CO la CO2, n prezena O2, iar energia rezultat este utilizat pentru sinteza ATP. 2CO + O2 2CO2 + E 6) Metanbacteriile (Methanomonas sp.) oxideaz metanul la CO2. CH4 + 2O2 CO2 + 2H2O + E 6.4. Nutriia heterotrof Plantele saprofite (numeroase plante inferioare: bacterii, ciuperci) sunt cele care au capacitatea de a biodegrada substane organice complexe, hrnindu-se cu compuii simpli rezultai. Se pot mpri n dou categorii: plante facultativ saprofite (care la baz sunt parazite, dar pot crete i ca saprofite n situaia absenei gazdei potrivite); plante obligat saprofite (care de drept sunt saprofite i nu pot crete pe organisme vii, ca parazite).

140 Dup cerinele lor pot fi: plante omnivore, adic cele care se hrnesc cu un numr mare de compui organici, biodegradnd o gam larg de resturi vegetale i animale (ex. Penicillium); plante specializate, adic cele care pot biodegrada numai un singur compus organic (ex. Saccharomyces). Exemple de plante saprofite: bacterii (Lactobacillus), alge (Polytoma), fungi (drojdii, Mucor, Penicillium, Agaricus), unele specii de Lycopodium, angiosperme (Monotropa, Neottia). Importana lor const n faptul c ele contribuie la realizarea circuitului substanelor n natur. Plantele parazite sunt att plante inferioare ct i superioare, care extrag compui organici simpli din organisme vii, pe seama crora se hrnesc i care sunt numite plante gazd. Sunt dou categorii de plante parazite: 1) - plante obligat parazite; 2) - plante facultativ parazite Plantele obligat parazite nu pot tri n absena gazdei (fie ca endoparazit sau ca ectoparazit), n timp ce plantele facultativ parazite sunt saprofite, dar pot crete i ca parazit. Exemple de plante obligat parazite: fungi (Pythium, Phytophthora etc.), angiosperme (Cuscuta, Rafflesia). Plantele superioare pot fi : parazite pe tulpin (ex. Cuscuta); parazite pe rdcin (ex. Orobanche, Lathraea, Rafflesia) (fig. 6.21.). Cuscuta reflexa este Convolvulaceae cu tulpina subire, glbuie, fr frunze, dar cu flori. Se propag prin ramificaiile tulpinii i prin seminele care germineaz n sol. Plantulele nu au cotiledoane, sunt filamentoase, iar dup un timp necesit o gazd, altfel mor. n contact cu gazda (trifoi, lucern, vi-de-vie) dezvolt haustori (printr-un proces enzimatic) i penetreaz Fig. 6.21. Plante parazite esuturile vasculare de unde preia hrana. Urmeaz o micare rotativ n jurul tulpinii gazdei i la maturitate se desprinde complet de sol, depinznd de gazd. Cuscuta formeaz vetre de atac, unde planta gazd moare, iar planta parazit face o reea pe suprafaa solului. Este foarte greu de combtut. Seminele sunt foarte mici i greu de separat. n practic, se procedeaz la decuscutare. Orobanche ramosa prezint tulpini aeriene ramificate. Ea nu are culoare verde i se termin cu o inflorescen. Haustorii ptrund n rdcin. Lathraea scvamaria prezint o tulpin cu frunze mici, glbui, la capt cu multe flori, iar subteran are un rizom cu solzi. Rdcinile adventive emit haustori, prin intermediul crora paraziteaz rdcina gazdei. Rafflesia arnoldi este regina paraziilor. Este cea mai mare floare, cu un diametru de 1 m i masa de 11 kg. Este polenizat de psri i seminele sunt diseminate de elefani. 6.5. Nutriia mixotrof I. Nutriia mixotrof semiparazit (facultativ parazit pe tulpin) Vscum album este o specie tropical de culoare verde, cu ramificaie dichotomic (fig.6.22.). La noi n ar crete pe pomi btrni. Are o nutriie fofosintetizant, dar fiind fixat pe arbore prin

Fig. 6.22. Vscum album

141 intermediul haustorilor, extrage ap i substane minerale din planta gazd. Unii specialiti consider acest tip de nutriie ca o simbioz. II. Nutriia mixotrof insectivor (carnivor) Acest tip de nutriie caracterizeaz un grup de plante care triesc n zone mltinoase. Necesarul de azot i-l asigur din aminoacizii rezultai din biodegradarea insectelor mici, pe care le captureaz. Astfel de plante sunt: Nepenthes, Sarracenia, Cephalotus (denumite plante ulcior, datorit aspectului frunzelor), Drosera, Dionaea etc. (fig. 6.23.). 1) Nepenthes cuprinde 67 specii ale familiei Nepentheaceae i triete n regiunile tropicale ale Australiei i Asiei, ca plant agtoare, arbust sau epifit. Prezint frunze mari, cu baza larg fotosintetizant i la capete cu ulcioare cilindrice (20-25 cm lungime). Insectele sunt atrase de capacul colorat al ulciorului i de mirosul substanelor secretate n ulcior, prin intermediul celulelor secretoare. Spre partea anterioar a ulciorului sunt periori cu vrful ndreptat n jos. Insecta este capturat i digerat pn la aminoacizi, care sunt absorbii de plant. Ceea ce rmne urmeaz a fi biodegradat de bacterii i alte microorganisme. Peiolul este ca un crcel alungit, contribuind la meninerea ulciorului n poziie vertical, prin prinderea de un suport. 2) Sarracenia cuprinde 10 specii i aparine familiei Sarraceniaceae. Triete n regiunile temperate de-a lungul Atlanticului. Mai popular este specia Sarracenia purpurea. Este o plant acvatic i spre deosebire de Nepenthes, aici, ntreaga frunz este transformat n ulcior i frunzele sunt sesile. Insectele sunt atrase de ctre nectarii i de ctre capacul colorat al ulciorului. Perii zonei glandulare superioare previn scparea insectelor i urmeaz descompunerea lor prin intermediul bacteriilor. 3) Drosera aparine familiei Droseraceae, cu 6 genuri, dintre care mai cunoscute sunt Drosera, Dionaea i Aldrovanda. Drosera cuprinde 100 specii care triesc n Africa de Sud i Australia. Este o plant acvatic, mai comun fiind D. rotundifolia. Are frunze rotunjite: la plantele Fig. 6.23. Plante carnivore mature sunt 6-12 frunze dispuse n rozet. Pe partea superioar acestea au peri tentacule, umflate, cu vrf care secret un suc roietic ce strlucete n lumina soarelui, ca picturile de rou. Aa se explic i denumirea plantei: roua soarelui. Insectele sunt atrase de picturile secretate, iar tentaculele se curbeaz alctuind o capcan. Fluidul conine mai ales proteaze, care biodegradeaz insecta la aminoacizi. Dup absorbia aminoacizilor, poziia tentaculelor se restabilete, pentru a se capta o nou insect. 4) Dionaea este un gen care cuprinde o singur specie D. muscipula, care triete n SE Americii. Frunzele sunt dispuse n rozet, peiolul este bine dezvoltat, iar lamina are la vrf doi lobi modificai n dou flci, fiecare falc cu civa dini. Lobii sunt n legtur la mijlocul capacului i deschii ntr-un unghi de 40-45 0, formnd o trap. Partea superioar a fiecrei flci prezint 3 peri senzitivi, conin glande mici digestive i sunt denumii peri trgaci. Dac o insect se aeaz pe capcan, prul senzitiv este stimulat, stimulul se transmite la capacul median i provoac curbarea lobilor laminei. n acelai timp, spinii marginali se ntreptrund, ceea ce ajut la capturarea insectei. Urmeaz digestia efectuat de ctre substanele secretate de glandele digestive, iar proteinele sunt biodegradate la aminoacizi. Dup completa digestie a insectei, frunzele i revin, pentru a efectua o nou captur.

142 ntrebri 1. Care sunt tipurile de nutriie cu carbon la plante ? 2. Fotosinteza: definiie, ecuaie general, importan. 3. Organul i organitul specializat pentru fotosintez. Argumente. 4. Tipurile de pigmeni asimilatori i proprietile acestora. 5. Lumina: condiie prioritar pentru fotosintez. 6. Mecanismul fotosintezei: aspecte generale. 7. Faza dependent de lumin: localizare la nivel celular i procese principale realizate. 8. Faza enzimatic a fotosintezei: localizare la nivel celular i procese principale realizate. 9. Fotorespiraia: definiie, organite celulare implicate, importan fiziologic. 10. Paralel ntre plantele C3, C4 i CAM. 11. Principalii factori interni care influeneaz fotosinteza i importana practic. 12. Principalii factori externi care influeneaz fotosinteza i importana practic. 13. Relaia dintre fotosintez i recolt. Bibliografie selectiv Agrawal, D.C. 2010. Photosynthetic solar constant. Lat. Am. J. Phys. Educ., Vol. 4: 46-50. Boonman, A. i al. 2007. Cytokinin import rate as a signal for photosynthetic acclimation canopy light gradients. Plant Physiology, Vol. 143: 1841- 1852. Horst, R.J., Engelsdorf, T., Sonnewald, U., Voll, L.M. 2008. Infection of maize leaves with Ustilago maydis prevent establishement of C4 photosynthesis. Journal of Plant Physiology, Vol. 165: 19-28. Jiang, C.H., Gao, H.Y., Zou, Q., Jiang,G.M. i Li, L.H. 2006. Leaf orientation, photorespiration and xanthophyll cycle protect young soybean leaves against high irradiance in field. Environmental and Experimental Botany, Vol. 55: 87- 96. Keeley, J.E. and Rundel, P.W. 2003. Evolution of CAM and C4 carbon- concentration mechanisms. Int. J. Plant Sci. 164 (3 Suppl): S55-S77). Kebeish i al. 2007.Chloroplastic photorespiration bypass increases photosynthesis and biomass production in Arabidopsis thaliana. Nat. Biotechnol., Vol. 25: 593-599. Khan, M.S. 2007. Engineering photorespiration in cloroplasts: a novel strategy for increasing biomass production. Trends in Biotechnology, Vol. 25: 437- 440. Krause, G.H. 1988. Photoinhibition of photosynthesis. An evaluation of damaging and protective mechanisms. Physiologia Plantarum. Vol.74: 566- 574. Medrano, H. i al. 2002. Regulation of photosynthesis of C3 plants in response to progressive drought: stomatal conductance as a reference parameter. Annals of Botany, Vol. 89: 895- 905. Mller, P. i al. 2001. Non-photochemical quenching. A response to excess light energy. Plant Physiology, Vol. 125: 1558- 1566. Noctor, G. i Foyer, C.H. 1998. A re-evaluation of the ATP: NAD(P)H budget during C3 photosynthetic contribution from nitrate assimilation and its associated respiratory activity. J. Exp. Bot., Vol. 49: 1895-1897. Somerville, C. 2001. An early Arabidopsis demonstration. Resolving a few issues concerning photorespiration. Plant Physiology, Vol. 125: 20 - 24. Szab, J. i al. 2005. Light and oxygenic photosynthesis: energy dissipation as a protection mechanism against photo- oxidation. EMBO Reports, Vol. 6: 629- 634. Taler, D., Galperin, M., Benjamin I., Cohen, Y. i Kenigsbuch, D. 2004. Plant R genes that encode photorespiratory enzymes confer resistance against disease. Plant Cell, Vol. 16: 172- 184. Zhu, X.G., Long, S.P., Ort, D.R. 2008. What is the maximum efficiency with photosynthesis can convert solar energy into biomass ?. Current Opinion in Biotechnology, Vol.19: 153-59.

143 CAPITOLUL 7 TRANSPORTUL SUBSTANELOR ORGANICE N PLANTE Cuvinte cheie: floem, sev elaborat, translocare, curent de mas sub presiune generat osmotic, alocare, partiie Obiective: cunoaterea interrelaiei dintre structura floemului i rolul su fiziologic; cunoaterea tipurilor i formelor de substane translocate prin intermediul floemului; cunoaterea i nelegerea mecanismului de translocare prin floem; cunoaterea proceselor de depozitare a substanelor de rezerv; cunoaterea factorilor care influeneaz translocarea i a modalitilor de sporire a recoltei edibile; REZUMAT Transportul substanelor organice n plante se realizeaz prin intermediul unui esut specializat, respectiv prin floem. Acest transport pe distane mari poart denumirea de translocare. Exist o serie de dovezi ale translocrii asimilatelor prin floem, precum: decorticarea inelar, inelarea scalariform, analiza chimic a sucului floemic, utilizarea izotopului radioactiv 14CO2 sau tehnica folosirii afidelor. Din punct de vedere structural, floemul const din: celule liberiene, celule anexe, celule parenchimatice i n unele cazuri fibre, sclereide, celule care conin latex (laticifere). ntre particularitile structurale i rolul fiziologic al floemului exist o strns interrelaie. Sensul de translocare a asimilatelor este dinspre zonele de formare (de la surse), ctre zonele de metabolizare sau de depozitare (ctre utilizatori). Direcia de transport poate fi una ascendent, descendent i radial (lateral), avnd n vedere anumite reguli anatomice i de dezvoltare. n general, viteza transportului se situeaz la o medie de circa 1 m h-1, cu variaii de la 30 la 150 cm h-1. Seva elaborat (sucul floemic) conine cantiti mari de substane dizolvate, n medie 15-25% substan uscat, iar pH-ul are valori mari (7-8). Apa reprezint componentul major. Odat cu apa sunt transportate n principal glucide, dar i aminoacizi, proteine, acizi organici, proteine, potasiu, clor, fosfat, magneziu, hormoni. n privina glucidelor, principala form de translocare o reprezint zaharoza. Translocarea de la celulele surs, ctre celulele utilizator const n parcurgerea a trei etape: un transport pre-floem (pe distan mic), un transport prin floem pe distane mari i un transport post-floem (pe distan mic). Pentru a explica transportul prin floem, astzi, cea mai acceptat ipotez este cea a curentului de mas sub presiune generat osmotic. n privina depozitrii substanelor n diferite organe de depozitare sunt de remarcat anumite caracteristici n funcie de specie i de organ Procesul de translocare este influenat de factori externi i interni, precum: lumina, temperatura, oxigenul, umiditatea, elementele minerale, hormonii, nhibitorii etc. Alocarea presupune reglarea distribuiei glucidelor ctre diferite ci metabolice, respectiv ctre diferite forme de substane. Partiia presupune distribuia difereniat a glucidelor n plant, ctre diferite esuturi. Pentru sporirea recoltei edibile, fa de recolta biologic, una dintre cele mai recente modaliti este selecia i extinderea n cultur a unor soiuri caracterizate prin perfecionarea transportului asimilatelor ctre prile edibile ale plantelor. De asemenea, scopul cercetrilor n domeniu este i acela de a aplica msuri eficiente n cadrul tehnologiilor de cultivare a plantelor, pentru a reduce la minimum pierderile de fotoasimilate. Produii fotosintezei sunt transportai din frunzele mature, ctre zonele de cretere (frunze tinere, vrfuri de cretere, rdcini n formare, flori, fructe) dar i ctre cele de depozitare (inclusiv rdcini) prin intermediul unui esut specializat, respectiv prin floem. Acest transport pe distane mari poart denumirea de translocare. Floemul servete de asemenea la transportul apei, precum i a altor diferii compui n ntreaga plant. Unii dintre acetia ajung n frunzele mature prin xilem. O parte dintre acetia pot fi transferai din frunze, fr a suferi vreo modificare sau alii pot fi metabolizai naintea redistribuirii.

144 7.1. Particulariti structurale i funcionale ale floemului Interrelaia dintre structura floemului i rol su fiziologic Floemul este alctuit din: celule liberiene; celule anexe; celule parenchimatice; n unele cazuri fibre, sclereide, celule care conin latex (laticifere) (fig. 7.1.). Celulele liberiene mature se caracterizeaz prin anumite particulariti structurale, care le deosebesc de alte celule vii ale plantelor: de obicei nu au nucleu i tonoplast; sunt lipsite de microtubuli, microfilamente, Compexe Golgi i ribozomi; posed plasmalem i anumite organite oarecum modificate, precum mitocondrii, plastide i reticul endoplasmatic neted; pereii celulari sunt nelignificai. Deci, celulele liberiene se deosebesc de vasele lemnoase ale xilemului, care sunt celule moarte, fr plasmalem i care au pereii celulari secundari lignificai. Celulele liberiene se caracterizeaz de asemenea prin existena unor suprafee care prezint pori (a unor site). Diametrul porilor variaz de la mai puin de 1 m, pn la circa 15 m. La gimnosperme, toate zonele sit sunt mai mult sau mai puin asemntoare. Porii sunt relativ nespecializai i par a fi umplui cu diferite membrane aflate n caviti mediane ale celulari, fiind pereilor continue cu REn opus zonei sit. La angiosperme exist o specializare mai pronunat a celulelor liberiene. Astfel, n Fig. 7.1. Structura floemului unele zone se difereniaz plci ciuruite. Plcile ciuruite prezint pori mai mari, situai n general la capetele celulelor liberiene i se formeaz o serie longitudinal de celule, care alctuiesc vasul ciuruit. Plcile ciuruite sunt de fapt canale deschise, care permit transportul ntre celule (fig.7.2.). La dicotiledonate, vasele liberiene sunt de obicei bogate n proteina floemic numit proteina P (phloem protein). Aceast protein lipsete la gimnosperme i este ntlnit rar la angiosperme monocotiledonate. Proteina se poate afla sub form diferit (tubular, fibrilar, granular i cristalin) n funcie de specie i de vrsta celulei. Funcia proteinei- P pare a fi sigilarea celulelor liberiene deteriorate, prin etaneizarea porilor plcii ciuruite.

Fig.7.2. Complexul celule anex celule liberiene

145 Pe termen lung, o soluie la problemele deteriorrii n cazul multor specii de plante este producerea calozei (-1-3 glucan) n porii sitei. Sinteza calozei se realizeaz prin intermediul enzimei calozo sintaza situat n plasmalem. Substratul este asigurat din zona citoplasmatic, iar produii sunt depozitai ntre plasmalem i peretele celular. Depunerea calozei de ran apr n mod eficient esutul. Pe msura revenirii la starea normal, caloza dispare din aceti pori. Caloza definitiv se poate depune n cazul celulelor moarte sau vaselor liberiene supuse obturrii, datorit formrii esuturilor secundare. La plantele perene se poate depune caloza asociat strii de dorman - caloza de dorman, urmnd ca n primvar s aib loc dizolvarea acesteia. Fiecare vas liberian este asociat cu una sau mai multe celule anexe. Cele dou tipuri de celule rezult prin diviziunea unei singure celule mam. Celulele anex sunt de trei tipuri: celule anexe obinuite, celule de transfer i celule intermediare. Pentru celulele anexe obinuite, cloroplastele conin tilacoide bine dezvoltate, peretele celular este neted i este strbtut de un numr relativ mic de plasmodesme. La unele dicotiledonate ierboase, transferul substanelor ctre vasele liberiene este facilitat de existena unor invaginri ale peretelui celular n cazul unor celule anexe sau celule parenchimatice. Prin aceasta se mrete suprafaa plasmalemei, necesar pentru preluarea asimilatelor n cursul exportului (Ade-Ademilua i Botha, 2008). Astfel de celule se denumesc celule de transfer (fig.7.3.). La gimnosperme, funcia celulelor anexe este Fig.7.3. Celul de transfer preluat de celulele albuminoide (care nu provin din aceeai celul mam, precum la angiosperme). Ambele tipuri de celule anexe sunt specializate pentru preluarea substanelor din apoplast. Celulele intermediare au numeroase plasmodesme, care asigur conexiunea cu celulele vecine. Au numeroase vacuole mici, lipsesc grunciorii de amidon din cloroplaste i tilacoidele sunt slab dezvoltate. Rolul lor este de a realiza transportul prin simplast a glucidelor, de la celulele mezofilului, ctre vasele liberiene, n situaia n care nu se realizeaz transportul prin apoplast. Dintre funciile metabolice critice ale celulelor anexe se pot aminti: sinteza proteinelor, suplimentarea cu ATP (graie prezenei a numeroase mitocondrii), precum i transportul asimilatelor de la celulele productoare ale mezofilului, ctre celulele liberiene. Celulele parenchimatice asigur transportul lateral i totodat ele depoziteaz hran. Fibrele floemice au rol de suport n cadrul esutului, fr a fi implicate n procesul de translocare. Dovezi ale translocrii substanelor organice prin floem Experimentele clasice bazate pe decorticarea inelar (Marcello Malpighi, 1686, apoi Mason i Maskell, 1928) (fig. 7.4.), respectiv ndeprtarea parenchimului cortical i a liberului sub forma unui inel n jurul tulpinii unei plante lemnoase cu ramuri i frunze (deci n cursul vegetaiei) au condus la concluzia c intervenia nu a avut efect imediat asupra transpiraiei. n schimb, transportul glucidelor a fost blocat n zona n care s-a ndeprtat scoara. Glucidele s-au acumulat deasupra inelrii, deci n zona dinspre frunze, n timp ce n partea inferioar esuturile au fost private de glucide. Pe aceast baz, se practic n horticultur aa numitul procedeu de decorticare a ramurilor, cu scopul de a favoriza creterea formaiunilor situate n partea de deasupra.

146 Metoda inelrii scalariforme a fost folosit n ara noastr de ctre Em. C. Teodorescu i C.T. Popescu (1915) i s-a precizat rolul esutului liberian n transportul fotoasimilatelor n plante. La nivelul zonei inelate s-a lsat o fie ngust de scoar i liber, n plan orizontal, legat fiind aceast zon cu partea neafectat. S-a constatat formarea de elemente liberiene noi, n partea inferioar a fiei orizontale. n partea de sus i pe Fig.7.4. Decorticarea inelar i efectele prima treapt a decorticrii s-a format un esut de sale cicatrizare. Experiena a condus la concluzia c transportul ascendent i descendent al sevei elaborate se face prin vasele liberiene i ntr-o mai mic proporie prin parenchimul liberian. Analiza chimic a floemului la plantele de bumbac (Mason i Maskell, 1928-1934) a demonstrat acumularea substanelor hrnitoare n floem. Aplicarea izotopului radioactiv 14 CO2 (Rabideau i Burr, 1945) la o frunz iluminat i monitorizarea substanelor marcate pe traseul ascendent i descendent n tulpin, la punctul de ataare a frunzei a indicat faptul c floemul este calea de translocare a substanelor n plante. Tehnica folosirii afidelor (Kennedy i Mittler, 1953) presupune inseria stiletului ntr-o celul liberian. Dup 2-3 ore de hrnire are loc anestezierea insectei, tierea stiletelui, Fig. 7.5. Tehnica folosirii afidelor colectarea sevei elaborate i ulterior analiza sucului din stilet (fig. 7.5.) (Esau, 1961). Principala substan organic identificat a fost zaharoza. Direcia de transport a substanelor prin floem n general, se afirm c transportul prin xilem este realizat n sensul rdcin, ctre prile aeriene ale plantelor, deci ascendent, iar transportul prin floem este efectuat n sens invers, descendent. Trebuie precizat faptul c transportul prin floem nu se realizeaz n mod exclusiv ntr-o anumit direcie. Sensul de translocare a asimilatelor este dinspre zonele de formare (de la surse), ctre zonele de metabolizare sau de depozitare (ctre utilizatori). n categoria surse sunt incluse: un organ exportator, n mod tipic o frunz matur, care produce n exces fa de propriile nevoi; un organ de depozitare, pe parcursul fazei de export a dezvoltrii sale. n categoria utilizatori sunt incluse: orice organ nefotosintetizant al plantei sau organe fotosintetizante, care nu produc suficieni produi pentru asigurarea propriilor nevoi de cretere sau necesitilor de depozitare (ex.: rdcini, tuberculi, fructe n dezvoltare, frunze imature). Direcia de transport poate fi una ascendent, descendent i radial (lateral). n general, transportul prin floem este unul descendent, de la frunze, ctre rdcini, deci de la prile verzi unde are loc biosinteza hranei, ctre prile non-verzi ale plantei. Direcia ascendent intervine n cazul seminelor n curs de germinare sau n cazul apexurilor tulpinii situate deasupra

147 aparatului foliar. n cazul seminelor n curs de germinare are loc hrnirea viitoarei plantule prin mobilizarea substanelor organice de rezerv, iar n cazul apexurilor acestea sunt aprovizionate cu fotoasimilate. Un transport ascendent se poate evidenia i n cazul apariiei de noi creteri vegetative la pomii fructiferi, n cursul perioadei de primvar. La fructele n cretere i semine n curs de dezvoltare se realizeaz un transport radial, pe principul surs - utilizator. De asemenea, exist i un transport bidirecional, n apropierea apexurilor sau a punctelor de cretere a nodurilor tulpinii. Substanele nutritive primite de la frunzele mature sunt transportate ctre punctele de cretere, deci ascendent, dar i descendent, ctre zonele de depozitare sau ctre anumite zone de consum. Un organ poate fi la un moment dat surs, iar la un alt moment dat utilizator. Spre exemplu, rdcina de depozitare la sfecla slbatic bienal (Beta vulgaris ssp. maritima) este utilizator pe parcursul primului sezon de cretere. Astfel, acumuleaz glucide de la frunzele surs, iar n sezonul al doilea aceeai rdcin devine surs. Are loc mobilizarea glucidelor i utilizarea lor pentru producerea de noi organe aeriene i n final formarea organelor reproductive. La sfecla de zahr cultivat (Beta vulgaris ssp. vulgaris) rdcina i poate spori masa uscat pe parcursul ambelor sezoane. Prin urmare, frunzele reprezint sursa pe parcursul stadiilor de nflorire i fructificare. n acest caz s-a realizat selecia pentru capacitatea rdcinilor de a aciona ca utilizatori pe parcursul tuturor stadiilor creterii i dezvoltrii. n privina interrelaiei dintre surs i utilizator trebuie precizat faptul c se respect anumite reguli anatomice i de dezvoltare. Astfel, la plantele erbacee pot fi considerate urmtoarele aspecte generale: 1) apropierea surs-utilizator reprezint un factor semnificativ; Frunzele mature superioare aprovizioneaz cu asimilate vrfurile tulpinilor n cretere, frunzele imature, n timp ce frunzele bazale aprovizioneaz n special rdcinile. Frunzele dispuse median asigur cu asimilate n ambele sensuri. 2) pe parcursul creterii i dezvoltrii plantelor se modific importana unor utilizatori; Dac pe parcursul creterii vegetative utilizatorul principal l reprezint rdcina i vrfurile n cretere, n timpul dezvoltrii reproductive, asimilatele sunt direcionate primordial ctre fructe. n cazul frunzelor, pe parcursul procesului gradual de evoluie are loc tranziia de la utilizator, la surs. Spre exemplu, frunzele plantelor dicotiledonate i ncep dezvoltarea ca organe utilizator. Tranziia ctre statutul surs ncepe mai trziu, cnd frunza are o mrime de circa 25% i este complet cnd frunza a atins 40-50% din mrimea caracteristic. La pomii tineri, direcia asimilatelor este preponderent ctre organele vegetative: trunchi, frunze, rdcini. La pomii pe rod, transportul este direcionat ctre fructe i tulpini. Desigur, prezint importan i forma de coroan. Astfel, n cazul plantaiilor super intensive, direcia de transport a asimilatelor este preponderent ctre fructe i frunze, n timp ce n plantaiile clasice, ctre trunchi i coroan. 3) frunzele cu rol de surs vor aproviziona utilizatorii cu care au legturi vasculare directe; 4) n cazul n care intervin tieri sau rniri i sunt afectate cile de transport dintre surse i utilizatori, pot s apar ci alternative pentru translocarea asimilatelor; De altfel, anumite intervenii efectuate plantelor horticole, precum tierile la pomi, ndeprtarea copililor (ex. la tomate), crnitul sau ciupitul etc. sunt menite s direcioneze asimilatele ctre utilizatorii de maxim interes, n vederea unei productiviti maxime.

148 Viteza de transport a substanelor prin floem Viteza de transport a substanelor prin vasele liberiene poate fi exprimat pe dou ci: vitez de transport - distan linear parcurs n unitatea de timp (cm h-1); rat a transferului de mas - cantitatea de material care trece printr-o seciune transversal a vaselor liberiene, n unitatea de timp (g cm-2h-1); Ambii indicatori pot fi determinai folosind substane marcate radioactiv. Cel mai simplu experiment este cel care utilizeaz marcarea cu 11C sau 14C a CO2, aplicarea la o frunz surs i ulterior monitorizarea cu un detector adecvat pe traseu sau la sosire, la esutul utilizator. n general, rata transportului se situeaz la o medie de circa 1 m h-1, cu variaii de la 30 la 150 cm h-1. Spre exemplu: la sfecla de zahr, rata translocrii este de 85-100 cm h-1, iar la trestia de zahr 270 cm h-1. Este evident faptul c viteza de transport este mare i depete rata unei difuziuni pe distane mari. n consecin, de acest aspect se ine cont n redarea explicaiilor cu privire la mecanismele propuse n privina explicrii transportului prin floem. 7.2. Substane translocate i mecanismul de translocare prin floem 7.2.1. Tipuri i forme de substane translocate prin floem Seva elaborat conine cantiti mari de substane dizolvate, n medie 15-25% substan uscat, iar pH-ul are valori mari (7-8). n privina tipurilor de substane translocate prin floem, cantitativ, cea mai abundent substan este apa, n care sunt dizolvate diferite substane. Dintre substanele organice, glucidele ocup ponderea (tabelul 7.1.), iar dintre acestea, zaharoza poate atinge 90% din substanele dizolvate. De asemenea, sunt prezeni n cantiti mari aminoacizii. Glutamina i asparagina pot reprezenta 90% din aceast fracie. Nitratul i amoniul sunt de obicei n cantiti mici (Van Bensichem i al., 1988). Sunt de asemenea abundeni acidul citric i acidul malic. Se afl totodat vitamine, hormoni, proteine i ATP. Dintre elementele minerale, potasiul este prezent n cea mai mare concentraie, urmat de fosfor, magneziu i sulf. Concentraia calciului este foarte mic. Tabelul 7.1. Compoziia sucului floemic la Ricinus communis (dup Hall i Baker, 1972) Componentul
GLUCIDE Aminoacizi Acizi organici Proteine K Cl PO42Mg

Concentraia (mg ml-1)


80,0- 106,0 5,2 2,0-3,2 1,45-2,20 2,3-4,4 0,355-0,675 0,350-0,550 0,109-0,122

Pentru glucide, principala form de transport o reprezint zaharoza. Este un glucid nereductor i se consider c glucidele nereductoare sunt mai puin reactive. Glucidele reductoare precum glucoza, manoza sau fructoza conin expus o grupare aldehid sau ceton i sunt foarte reactive. De asemenea, sunt i ali hidrai de carbon mobili, care conin zaharoz legat de un numr variabil de molecule de galactoz: zaharoz + 1 molecul galactoz = rafinoz; zaharoz + 2 molecule galactoz = stahioz; zaharoz + 3 molecule galactoz = verbascoz. Sub form de polioli, glucidele se transport ca manitol i sorbitol (fig. 7.6.). Sorbitolul prezint cea mai mare importan n cazul speciilor: Malus, Pyrus, Persica etc.

149 Azotul este transportat n proporie mare sub form de aminoacizi i amide (acid glutamic/ glutamin, acid aspartic/ asparagin). n general, n plante, compuii cu azot sunt transportai sub forme diferite, n raport cu calea fascicular de transport: - prin floem, aproape n totalitate sub form organic; - prin xilem, fie ca nitrat, fie ca parte a unei molecule organice. n cazul xilemului, forma de transport a azotului depinde de specia luat n studiu. Speciile care nu dispun de o asociaie simbiotic depind de nitratul din sol. La cele care posed noduli, exist o dependen fa de N2 atmosferic, mai degrab dect de nitratul din sol. Dup conversia la forma organic, azotul este transportat prin xilem, de obicei ca amide sau ureide (alantoin, acid alantoic, citrulin). La alte specii, n xilem sunt prezente att forma nitrat, ct i molecule organice bogate n azot (amide: Fig. 7.6. Glucide translocate prin floem asparagin, glutamin). De menionat faptul c, n toate cazurile n care azotul este asimilat n compui organici n rdcini, att energia necesar ct i scheletele de carbon pentru asimilare deriv din asimilatele transportate ctre rdcini, pe calea floemului. n frunzele mature, nivelele azotului sunt meninute la valori stabile. Se indic faptul c cel puin o parte din excesul compuilor cu azot sosii pe calea xilemului trebuie s fie redistribuit prin floem, ctre fructe i frunze tinere. Pe parcursul senescenei frunzelor cresc concentraiile compuilor cu azot n floem. Spre exemplu, la specii lemnoase, frunzele senescente mobilizeaz i export compui cu azot n esutul lemnos, n vederea depozitrii la acest nivel. La plantele ierboase ns, exportul este direcionat n general ctre semine. Ionii minerali sunt de asemenea redistribuii din frunzele senescente, dup aceeai regul. De asemenea, hormonii, precum auxine, gibereline, citochinine i acid abscisic sunt n parte transportai prin floem. Lipidele se gsesc n cantitate mic n exudatele floemice. Sunt transportai i nucleotid-fosfai, enzime, vitamine, substane anorganice (K,Mg, fosfat, Cl). Ca, S i Fe sunt aproape excluse din floem. 7.2.2. Cile de parcurs, de la surs ctre utilizator i mecanismul de transport Transportul fotoasimilatelor implic urmtoarele trei etape: transportul pre- floem Se realizeaz de la cloroplastul celulei asimilatoare, pn la cele mai fine vase conductoare din frunz. Este un transport de distane mici, pentru ncrcarea floemului. transportul prin floem Este un proces de translocare pe distane mari. transportul post- floem Este un transport pe distane mici, realizndu-se descrcarea floemului. Transportul din cloroplastele mezofilului, ctre vasele liberiene ale frunzelor mature n cazul tipic al unei plante care transport zaharoza, sunt parcurse urmtoarele etape: 1) triozo-fosfaii formai n cursul fotosintezei trebuie mai nti s fie transportai din cloroplast n citosol, unde are loc conversia la zaharoz;

150 2) deplasarea zaharozei din celulele mezofilului, ctre celulele vecine celulelor liberiene (cale care implic o distan de doar 2 - 3 celule), deci calea de transport pe distane mici; 3) transportul activ al zaharozei n vasele liberiene (ncrcarea floemului floem loading) (fig. 7.7.). Ulterior, zaharoza i alte substane sunt supuse unui proces de export (translocare departe de surs). Acest proces se realizeaz prin sistemul floem, ctre utilizator. Este ceea ce reprezint transportul pe distane mari. Deci, ncrcarea floemului la surs i descrcarea la utilizator se crede c produce fora conductoare a translocrii. Odat neles acest Fig. 7.7. ncrcarea floemului mecanism, va fi posibil creterea productivitii plantelor prin sporirea acumulrii fotosintetizatelor n esuturile utilizator edibile (ex. seminele n cazul cerealelor). La nivelul frunzelor surs, concentraia glucidelor este mai mare n celulele vaselor liberiene i n celulele anexe, dect n mezofil. Spre exemplu, la sfecla de zahr, presiunea osmotic (Po) n mezofil este de circa 1,3 MPa, n timp ce n celulele vaselor liberiene i celulele anexe este de circa 3,0 MPa. Transportul zaharozei nseamn c se realizeaz mpotriva gradientului de concentraie. Este deci evident un transport activ al acestei substane. Rutele de transport pot fi: transportul prin simplast (prin plasmodesme), transportul prin apoplast (prin peretele celular), sau un transport mixt, n funcie de specie. n cazul apoplastului, glucidele ar putea fi eliberate activ din apoplast n vasele liberiene i celulele anexe, prin intermediul unui transportor consumator de energie, localizat n plasmalema acestor celule (fig.7.8.) (cazul sfeclei de zahr). Prin aceasta exist i posibilitatea specificitii i selectivitii pentru molecula transportat. La speciile cucurbitaceae ns, distribuia Fig. 7.8. Transportul activ al plasmodesmelor n diferite tipuri de celule este zaharozei asemntoare. De asemenea, presiunea osmotic din celulele mezofilului este similar cu cea din floem. Prin urmare, ruta mezofil, ctre floem este n totalitate una prin simplast. n cazul acizilor organici i a hormonilor, a cror concentraie n seva elaborat este mai mic comparativ cu cea a hidrailor de carbon, este posibil ca ncrcarea floemului s nu se realizeze n mod activ. Astfel de substane pot difuza direct printre fosfolipidele plasmalemei complexului vase liberiene - celule anexe sau prin intermediul transportorilor pasivi situai n plasmalema acestor celule. Odat ajunse n vasul liberian, substanele sunt preluate de curentul de mas.

151 Mecanismul transportului prin floem Mecanismul translocrii prin floem a constituit subiect de cercetare ncepnd din anii 1930. Au fost emise o serie de ipoteze n acest sens. Ipoteza difuziunii precizeaz c circulaia substanelor organice care ntr n compoziia sevei elaborate se realizeaz independent de circulaia apei. Baza acestui transport o reprezint gradientul de concentraie dintre zona de asimilaie (surs) i zona de consum (utilizator). Aceast ipotez nu poate explica ns viteza mrit de circulaie a sevei elaborate, comparativ cu viteza specific n cazul unui proces de difuziune. Kursanov (1949) a propus ipoteza metabolic, conform creia transportul sevei elaborate se bazeaz pe proprietatea citoplasmei din zona plcilor ciuruite, de a contribui la procesul de translocare. Zona respectiv funcioneaz ca o pomp metabolic. O alt ipotez este cea a curentului electroosmotic (Fensom, 1957; Spanner, 1958). Se presupune c baza transportului electroosmotic o constituie prezena proteinelor P la nivelul porilor plcilor ciuruite, ncrcai electric. Nici aceast ipotez nu poate explica transportul anionilor. De asemenea, proteinele P nu sunt prezente n vasele liberiene ale tuturor speciilor de plante superioare. n general ns, se menioneaz c transportul ar putea fi de dou tipuri, pasiv i activ, dar c n fiecare caz este necesar energie. n situaia transportului pasiv, energia este necesar doar pentru meninerea n stare funcional a vaselor liberiene. n cazul celui activ, energia este necesar pentru translocarea n vasele liberiene. Dintre toate ipotezele emise n acest sens, astzi, cel mai mult acceptat este ipoteza curentului de mas sub presiune, generat osmotic, descris n prima parte a sec. XX de ctre Ernst Mnch (1926, 1927, 1930) candidat principal al mecanismului de transport a metaboliilor pe distane mari ( Willenbrink, 2002; Kargol i al, 2003) (fig. 7.9.). Se consider c transportul soluiei prin vasele liberiene este coordonat de un gradient de presiune generat osmotic, ntre esuturile surs i esuturile utilizator. Acest gradient este o consecin a ncrcrii floemului la surs i a descrcrii sale la utilizator. ncrcarea activ la surs genereaz o presiune osmotic mrit n vasele liberiene, ceea ce determin endosmoza apei i creterea presiunii de turgescen. La utilizator, deci la captul cii de translocare are loc descrcarea floemului i scade presiunea osmotic n floem. Presiunea osmotic n floem fiind mai mic comparativ cu cea din xilem, se permite efluxul apei i n consecin scade presiunea de turgescen din vasele liberiene, la nivelul zonei utilizator. Modelul implic deci o circulaie a apei prin plante, ntre cile xilem i floem. Deci, apa se deplaseaz odat cu substanele, pe baza curentului de mas. Deplasarea apei se datoreaz gradientului de presiune i nu gradientului potenialului apei. De altfel, Kargol i Kargol (1996) au propus un sistem integrat al translocrii apei n plante pe distane Fig. 7.9. Model al curentului de mas sub presiune mari, sistem mprit n patru stadii generat osmotic interconectate.

152 n primul stadiu apa traverseaz radial rdcina, n drumul su din sol ctre xilem. n al doilea stadiu are loc transportul apei de-a lungul xilemului, de la rdcin ctre frunze, deci n mod obinuit ascendent. n al treilea stadiu apa traverseaz esuturile frunzei, mai ales prin simplast, iar n cea mai mare parte odat ajuns la nivelul pereilor celulari ai celulelor mezofilului i la nivelul cuticulei, se pierde n atmosfer n urma procesului de vaporizare i de realizare a transpiraiei. O cantitate relativ mic de ap rmas la nivel de apoplast este preluat de ctre celulele frunzelor. Din aceast ap i din fotoasimilate produse n celulele fotosintetizante se constituie soluia care se deplaseaz ctre vasele liberiene i deci va avea loc transportul apei prin floem. Prin urmare, vorbim despre al patrulea stadiu de transport al apei prin floem, pe distane mari, ctre locurile de utilizare. Kargol i al. (2003) aduc unele modificri ale sistemului integrat propus de Kargol i al. (2001) n sensul de a-l face mai apropiat de realitatea biologic (fig. 7.10.). Principalul element al sistemului este modelul lui Mnch, care din punct de vedere fizic const din dou osmometre (A i B) conectate printr-un tub, care imit componentele floemului plantei. Analiznd translocarea apei n plante pe distane mari, autorii au concluzionat c se poate vorbi despre similariti cu circulaia sngelui n organismul animal.

Fig. 7.10. Schema sistemului integrat de translocare a apei in plante (modificat dup Kargol i al., 2003)

Mai mult, s-a pus problema localizrii inimii n plant i formulrii mecanismului de operare a acesteia. Studiile efectuate au admis c inima la plante este situat n frunze i funcioneaz pe principul osmotic. Inima pompeaz apa din apoplastul frunzelor, n vasele liberiene, iar cea de-a doua presiune corespunztoare contraciei inimii este cauza transportului apei i asimilatelor prin floem (transportul sub forma curentului de mas). Pe de alt parte Thompson (2006) a propus un model (fig.7.11.) avnd n vedere faptul c structura floemului reflect o funcie dubl. Una este cea de transport a fotoasimilatelor prin plante, i o alta o reprezint schimbul de substane ntre floem i esuturile din jur. Floemul este alctuit din complexe n serie (celule liberiene, celule anexe) (SECC) i fiecare complex SECC se afl ntr-un schimb constant cu esutul din jur. Un astfel de concept integrator al funcionrii pe distane mari i mici ar necesita o abandonare a controlului curgerii, ca urmare a diferenelor de turgescen surs-utilizator.

Fig. 7.11. Model al fluxului substanelor prin floem

153 Translocarea substanelor din vasele liberiene, n celulele esuturilor utilizatoare (descrcarea floemului) Translocarea substanelor n organele utilizatore (de exemplu: rdcini n formare, tuberculi, structuri reproductive etc.) este denumit export. Evenimentele importului sunt la modul simplu inversul etapelor care au avut loc la nivelul sursei, in cazul ncrcrii floemului. Procesul presupune trei etape: descrcarea vaselor liberiene, respectiv glucidele transportate prsesc vasele liberiene ale esutului utilizator; transportul pe distane mici, respectiv dup descrcarea floemului glucidele sunt transportate ctre celulele utilizator, pe calea mecanismului de transport pe distane mici; depozitarea sau metabolizarea glucidelor n celulele utilizator. Depinde de utilizator dac intervine un transport prin simplast sau unul prin apoplast: 1) la utilizatorii vegetativi (rdcini, frunze tinere) importul i transportul n celulele primitoare este de obicei realizat prin simplast; 2) la utilizatorii care depoziteaz substane organice, precum rdcinile sfeclei de zahr, tulpinile trestiei de zahr, are loc importul n apoplast a zaharozei, nainte de a intra n simplastul utilizatorului; 3) la organe reproductive (semine n dezvoltare) este necesar un transport prin apoplast, deoarece nu sunt conexiuni prin simplast ntre esuturile maternale i esuturile embrionului. Pentru realizarea importului, prezint o deosebit importan activitatea metabolic de la nivelul esuturilor utilizatoare. Energia metabolic produs este necesar n mod direct pentru realizarea reaciilor de biosintez i indirect pentru preluarea nutrienilor. 7.3. Factorii care influeneaz translocarea prin floem Procesul de translocare este influenat de numeroi factori externi i interni, precum: lumina, temperatura, oxigenul, umiditatea, elementele minerale, hormonii, inhibitorii etc. Lumina influeneaz procesul de translocare prin intensitatea sa, n sensul c o lumin intens sporete translocarea, mai ales ctre rdcin. Intensificarea fotosintezei n condiiile radiaiilor luminoase roii i albastre accentueaz i rata de translocare. Lumina are mai degrab un rol indirect, n ceea ce privete rata de transport prin floem. Desigur, n cazul unor condiii optime n ceea ce privete factorul lumin, se va produce o cantitate mai mare de fotoasimilate. n consecin, crete concentraia substanelor organice la zona surs, ceea ce necesit un export imediat i implicit o translocare mai rapid ctre utilizator. Temperatura influeneaz procesele de ncrcare i descrcare a floemului, n sensul c la temperaturi mici se reduce translocarea. Valorile optime sunt situate ntre 25-350C. Rata de transport crete odat cu creterea temperaturii, pn la valori situate n jur de 350C, urmnd s scad peste aceste limite. Desigur, stresul termic (n cazul ambelor extreme) induce un proces de inhibare a translocrii, prin blocarea plcilor ciuruite. Stresul hipohidric afecteaz n special transportul pe distane mici, n vederea ncrcrii floemului i ntr-o msur mai mic transportul prin floem. Dintre elementele minerale, s-a determinat c borul favorizeaz procesul de translocare a zaharozei. n privina hormonilor: acidul indolil acetic i acidul giberelic sporesc rata translocrii, iar citochininele influeneaz translocarea substanelor cu azot.

154 Inhibitorii metabolici precum azida; 2,4-dinitrofenol; cianid reduc rata de translocare, prin efectele asupra metabolismului celulelor implicate n procesele de ncrcare i descrcare a floemului. Modaliti de sporire a recoltei edibile, prin modificarea alocrii i partiiei asimilatelor Creterea i dezvoltarea plantelor se realizeaz dependent de controlul partiiei hidrailor de carbon, iar mecanismul de reglare a alocrii carbonului fixat, ctre diferite esuturi nu este pe deplin neles la nivel molecular (Slewinski i Braun, 2010). Trebuie fcut distincia ntre procesul de alocare i procesul de partiie. Alocarea presupune reglarea distribuiei glucidelor, ctre diferite ci metabolice, respectiv ctre diferite forme de substane. Partiia presupune distribuia difereniat a glucidelor n plant, ctre diferite esuturi. Pentru sporirea recoltei edibile, fa de recolta biologic, una dintre cele mai recente modaliti este selecia i extinderea n cultur a unor soiuri caracterizate prin perfecionarea transportului asimilatelor ctre prile edibile ale plantelor. De asemenea, scopul cercetrilor n domeniu este i acela de a aplica acele msuri tehnice n cadrul tehnologiilor de cultivare a plantelor, care reduc la minimum pierderile de fotoasimilate. Se impune totodat existena unei coordonri a vitezei sintezei amidonului n cloroplast, cu sinteza zaharozei n citosol. Cercetrile au demonstrat ns faptul c plantele de zi scurt permit o rat mai mare de sintez a amidonului, n timp ce plantele de zi lung prezint o rat mai redus de acumulare a amidonului. De asemenea, la plantele de zi scurt, viteza de translocare a asimilatelor este mai mic. Existena unei competiii pentru asimilate face ca reducerea esutului vegetativ (frunze tinere) s aib ca rezultat o dirijare sporit a asimilatelor ctre esuturile reproductive (ex. semine), care de altfel sunt foarte buni acumulatori de asimilate. 7.4. Depozitarea substanelor organice de rezerv n privina depozitrii substanelor n diferite organe de depozitare, sunt de remarcat anumite caracteristici n funcie de specie i de organ. Organele de depozitare acumulnd glucide la concentraii mari, este necesar un transport membranal activ, cu un consum de energie pentru asigurarea transportului, mpotriva gradientului de concentraie. n interiorul unei celule, transportorii zaharozei sunt: zaharoz /H+ simport localizat n plastid, tonoplast i pasmalem. Transportul independent de consumul de energie mediat prin difuziune facilitat s-a determinat la nivel de tonoplast, n celulele de depozitare i funcioneaz ca un eflux n plasmalema tegumentului seminelor de leguminoase i vful rdcinii. Exist de asemenea evideniat biochimic mecanismul de transport antiport cu protoni, la nivel de plasmalem i tonoplast (Khn i Grof, 2010). n cazul tuberculilor de Solanum tuberosum, transportul din vasele liberiene n celulele parenchimului se realizeaz prin simplast, deci prin plasmodesme. Existena acestei ci se datoreaz prezenei unui numr mare de plasmodesme, a numrului mic de transportori proteici de la nivelul plasmalemei, precum i faptului c floemul este nconjurat de endoderm (cu prezena ngrorilor lui Caspary),ceea ce determin blocarea transportului prin apoplast. Zaharoza ajuns n celulele parenchimului de depozitare este hidrolizat la glucoz i fructoz, prin intermediul enzimei invertaza. Monoglucidele sunt hidrolizate la triozofosfai, form sub care sunt transportai n amiloplaste, prin intermediul unui transportor proteic. Ca urmare, la nivelul celulelor parenchimului de depozitare scade concentraia glucidelor reductoare i prin aceasta se menine gradientul de difuziune. n cazul strugurilor, n faza de cretere rapid (15 zile de la antez), ntre vasele liberiene, celulele anex i parenchimul liberian se gsete un numr mare de plasmodesme. Aceasta indic realizarea unui transport prin simplast (Xia i Zhang, 2000). Zaharoza ajuns pe aceast cale n

155 celulele mezocarpului este transportat activ prin tonoplast i se acumuleaz n vacuol. Se determin astfel meninerea gradientului de difuziune, dintre vasele liberiene i celulele parenchimului de depozitare. Dup 45 de zile de la antez, s-a constatat existena unui numr redus de plasmodesme ntre vasele liberiene, celulele anex i parenchimul liberian. Aceasta evideniaz scderea ritmului de transport al substanelor prin simplast. De altfel, n cadrul utilizatorului, zaharoza poate fi metabolizat la nivel de citosol sau n vacuol, nainte de a fi depozitat, ori de a intra n ci metabolice asociate cu creterea esutului. Dac are loc o descrcare apoplasmic a floemului, exist i posibilitatea metabolizrii pariale n apoplast sau dac nu, poate traversa apoplastul fr a suferi modificri. La nivel de apoplast intervine invertaza, care hidrolizeaz la glucoz i fructoz i apoi glucoza i/sau fructoza pot intra n celulele utilizator. n cazul plantelor oleaginoase, la care sinteza lipidelor are loc n semine, substratul l reprezint tot zaharoza. Prin biodegradarea zaharozei i utilizarea produilor din ciclul glicolitic, precum i a acetil CoA n procesul de sintez a acizilor grai, se menine fluxul de difuziune dintre vasele liberiene i celulele din cotiledoane. Cercetrile efectuate n cazul seminelor n curs de dezvoltare, precum soia, au condus la concluzia c att intrarea zaharozei n apoplast ct i preluarea n embrion sunt mediate de transportori i sunt deci procese active. La cereale, cum este cazul la gru, preluarea n embrion este activ. Efluxul zaharozei din esutul maternal este pasiv, deoarece treapta urmtoare activ menine concentraia zaharozei n apoplast la valori sczute. n cazul porumbului, invertaza situat la nivelul peretelui celular (ce determin hidroliza zaharozei la glucoz i fructoz) contribuie la meninerea unei concentraii sczute a zaharozei n apoplast. n general, preluarea glucidelor din apoplast pare a se realiza prin intermediul unui transport de tip simport: glucid-H+. ntrebri 1. 2. 3. 4. 5. Care sunt principalele particulariti structurale i funcionale ale floemului ? Explicai direcia de transport a substanelor prin floem. Care sunt tipurile i formele de substane translocate prin floem ? Explicai mecanismul de transport a substanelor prin floem. Particulariti cu privire la depozitarea substanelor organice de rezerv.

Bibliografie selectiv Ade-Ademilua, O.E. i Botha, C.E.J., 2008. The level of wall ingrowths protrusion in transfer cells is a function of the sink/source state of the leaf. Am. J. Plant Physiol., 3: 67-72. Fensom, D.S. 1957. The bioelectric potentials of plants and their functional significance. I. An electrokinetic theory of transport. Canadian Journal of Botany, Vol. 35: 573- 582. Goldsmith, M.N.H. 1977. The polar transport of auxin. Annu. Rev. Plant Physiol., Vol. 28: 439478. Kargol, M. and Kargol, A. 1996. A synthetic approach to biophysical theories of water translocation in plants occuring over long distances. Current Topics in Biophysics, Vol. 20: 149-153. Kargol, A. 1996. An integrated approach to water transport in a plant over long distances. J. Biol. Phys., Vol. 23: 157-173. Kargol, A. 2001. A mechaniscistic model of transport processes in porous membrane generated by osmotic and hydraulic pressure. J. Memb. Sci., Vol. 191: 61-69. Kargol, M., Suchanek, G., Przestalski, M. i Kargol, A. 2003. Modification of integrated system of long distance transport of water in plants. Where the plant has its heart? Current Topics in Biophysics, Vol. 27: 3-9.

156 Kennedy, J.S. i Mittler, T.E. 1953. A method of obtaining phloem sap via the mouth- part of aphids. Nature. Vol 171: 528- 529. Khn, C. i Grof, C.P.L. 2010. Sucrose transporters of higher plants. Current Opinion in Plant Biology, Vol. 13: 288-298. Slewinski, T.L. i Braun, D.M. 2010. Current perspectives on the regulation of whole plant carbohydrate partitioning. Plant Science, Vol.178: 341-349. Thompson, M.V. 2006. Phloem: the long and the short of it. Trends in Plant science, Vol. 11: 2632.

157 CAPITOLUL 8 BIODEGRADAREA SUBSTANELOR ORGANICE DE REZERV Cuvinte cheie: substane organice de rezerv, respiraie, biodegradare enzimatic, glicoliz, ciclul Krebs, transportul electronilor i fosforilarea oxidativ, ciclul glioxilic, ciclul pentozo fosfat, ciclul respirator alternativ, biodegradarea anaerob, factori interni i externi Obiective cunoaterea i nelegerea procesului de respiraie la plante; cunoaterea etapelor specifice de biodegradare a diferitelor tipuri de substane organice de rezerv; cunoaterea i nelegerea procesului de biodegradare a amidonului, principalul poliglucid de rezerv la celula vegetal; cunoaterea i nelegerea mecanismului respiraiei mitocondriale; cunoaterea i nelegerea ciclului respirator alternativ; cunoaterea cilor de biodegradare anaerob a substanelor organice de rezerv; cunoaterea factorilor interni i externi care influeneaz respiraia; importana practic a acestor cunotine; REZUMAT Respiraia reprezint un proces fiziologic complex, caracteristic pentru toate fiinele vii. Procesul const n oxidarea controlat a substanelor organice de rezerv (glucide, proteine, lipide, acizi organici), cu producere de energie, CO2 i H2O, ca produi finali. Indiferent de natura substratului, n general se pot deosebi trei etape principale ale biodegradrii. n cazul amidonului, care constituie principalul glucid de rezerv, cele trei etape sunt: - biodegradarea enzimatic, pn la glucoz; - glicoliza, sau scindarea glucozei la dou molecule de acid piruvic; - biodegradarea acidului piruvic prin respiraie aerob mitocondrial sau pe cale anaerob, fermentativ. Prima etap se realizeaz n amiloplaste, iar principalele enzime implicate sunt: -amilaza, - amilaza i amidon fosforilaza. Nu se produce energie metabolic. Glicoliza se desfoar n citosol i rezult dou molecule de acid piruvic, precum i o mic cantitate de energie metabolic. La nivelul mitocondriei se desfoar biodegradarea aerob a acidului piruvic, n prezena oxigenului molecular. Procesul const n desfurarea ciclului Krebs, a transportului electronilor, precum i a fosforilrii oxidative. Rezult o cantitate mare de energie metabolic, stocat sub form de ATP. n total, n urma biodegradrii unei molecule de glucoz rezult 38 moli de ATP. n cadrul celulei vegetale, lanul de transport al electronilor este puternic ramificat. Prin urmare, sistemul fosforilrii oxidative dispune de cteva ci alternative de transport a electronilor, precum: - calea NAD(P)H dehidrogenazelor de tipul II; - calea oxidazei alternative. Ambele ci sunt specifice plantelor. De asemenea, exist un transportor alternativ de protoni, aa numita protein necuplat (UCP) care se gsete i la celula animal. La unele organe vegetative bogate n glucide de rezerv (tuberculi de cartof, celule vii situate n profunzime la fructe, n cazul terenurilor inundate), acidul piruvic rezultat n glicoliz este metabolizat pe cale fermentativ, cel mai adesea pe cale alcoolic sau pe cale lactic. Procesul de respiraie este influenat de numeroi factori interni i externi, iar cunoaterea acestora prezint o deosebit importan practic. 8.1. Respiraia Definiie, Ecuaie general, Importan Respiraia reprezint procesul fiziologic caracteristic pentru toate fiinele vii. Procesul const n oxidarea controlat a substanelor organice de rezerv (glucide, proteine, lipide, acizi organici), cu producere de energie, CO2 i H2O, ca produi finali. n cursul procesului rezult i produi intermediari.

158 Din punct de vedere al proceselor chimice care se desfoar, n general acestea constau n scindri hidrolitice, oxidri, reduceri, decarboxilri, fosforilri, defosforilri, chiar i sinteze. Produii rezultai sunt mai sraci n energie, dect cei iniiali. Dar, procesul de biodegradare nu servete doar pentru producerea de energie. Adeseori, prin intermediul unor ci metabolice se formeaz noi compui n plante, n urma unor reacii de sintez. Dac substratul respirator este glucoza i biodegradarea este total, ecuaia general poate fi redat astfel: C6H12O6 + 6 O2 E (2870 kJ) + 6CO2 + 6 H2O Din punct de vedere biologic, respiraia este un proces de oxidare. Respiraia propriu-zis (adic oxidarea biologic a substanelor organice) trebuie deosebit de oxidarea pe care o efectueaz spre exemplu bacteriile autotrofe chimiosintetizante, n scopul obinerii de energie, pentru asimilarea autotrof a carbonului. Ambele procese sunt n esen oxidri biologice, dar, finalitatea fiziologic este diferit. Respiraia se desfoar n mod continuu, n toate celulele active i constituie mai mult dect un simplu schimb de gaze (absorbie de O2 i eliberare de CO2). Este un proces complex de oxido-reducere, respectiv de oxidare a compuilor organici la CO2 i de reducere a oxigenului absorbit, n prezena hidrogenului, cu formare de H2O. Respiraia este un proces de ardere biologic, diferit de arderea fizic (tabelul 8.1.). n 1872, Louis Pasteur a descoperit viaa fr oxigen liber i folosea pentru desemnarea acestui proces expresia fermentaie. Astzi, termenul de fermentaie se aplic mai mult pentru desemnarea proceselor de biodegradare diferite de respiraia propriu-zis, dirijate tehnologic i a cror denumire special este n funcie de produsul final (ex. fermentaie alcoolic) sau compusul iniial (ex. fermentaia celulolitic). Tabelul 8.1. Unele diferene ntre respiraie i arderea fizic
Nr. crt. Respiraia Este un proces fiziologic Oxigenul se combin n mod indirect cu substratul, iar energia se produce treptat Cea mai mare parte a energiei este ncorporat n cadrul moleculelor de ATP (o mic parte este eliberat sub form de cldur) Se realizeaz la temperatura camerei Arderea Este un proces fizic Oxigenul se combin n mod direct cu substratul i simultan se produce energie ntreaga cantitate de energie este eliberat sub form de cldur Se realizeaz la temperaturi foarte mari (2000C- 3000C)

1 2 3 4

Importana biologic a respiraiei deriv din ecuaia general: energia produs n cursul respiraiei este utilizat n desfurarea a diferite procese metabolice: re sinteza compuilor implicai n desfurarea proceselor metabolice; meninerea gradientului ionilor i metaboliilor; procese implicate n adaptarea la stres; cea mai mare cantitate de energie este utilizat n turnoverul proteinelor; respiraia total (ca sum a respiraiei de cretere - respiraie de sintez sau respiraie constructiv i respiraiei de ntreinere - respiraie bazal ) este esenial pentru creterea a noi esuturi i meninerea funcionalitii esuturilor existente; dioxidul de carbon eliberat are rol important n balana carbonului celulelor individuale, a plantelor ntregi i ecosistemelor, precum i n ciclul global al carbonului n natur (Bruhn, 2002); produii intermediari rezultai n cursul respiraiei (acetil CoA, succinil CoA etc.) sunt utilizai n diferite procese anabolice (acetil CoA este folosit n sinteza aminoacizilor i acizilor grai; succinil CoA este folosit pentru sinteza clorofilei) etc.

159 8.2. Etapele procesului de biodegradare a substanelor organice de rezerv Substanele organice de rezerv sunt reprezentate de glucide, lipide i proteine. n cea mai mare parte a cazurilor, transformarea macromoleculelor glucidice ca i a altor substane organice de rezerv conduce la formarea hexozelor (n mod esenial glucoz) sau pentozelor. Indiferent de natura substratului, se pot deosebi trei etape principale ale biodegradrii. Dac facem referire la amidon, care reprezint principalul glucid de rezerv, cele trei etape sunt: biodegradarea enzimatic pn la glucoz; glicoliza, sau scindarea glucozei la dou molecule de acid piruvic; biodegradarea acidului piruvic prin respiraie aerob mitocondrial sau pe cale anaerob, fermentativ. n cele ce urmeaz, vor fi prezentate succint unele aspecte privind biodegradarea a diferite tipuri de substane de rezerv i se va insista asupra biodegradrii amidonului. 8.2.1. Etapa I-a - Biodegradarea enzimatic a substanelor organice de rezerv Biodegradarea enzimatic a substanelor organice de rezerv se realizeaz la nivelul organitelor specifice de depozitare a acestora i nu rezult energie metabolic. n privina glucidelor, principalul glucid de rezerv la celula vegetal a plantelor superioare l reprezint amidonul. Acesta este localizat la nivel celular pe de o parte n cloroplast (ca form tranzitorie de depozitare a fotoasimilatelor), dar mai ales n amiloplaste, ca substan organic de rezerv. De asemenea, sunt depozitate ca substane organice de rezerv i alte glucide nereductoare, precum fructanii, zaharoza, dar i glucide simple. Pentru biodegradarea enzimatic a amidonului, principalele enzime implicate sunt: amilaza, - amilaza i amidon fosforilaza. Dintre aceste enzime, se pare c numai -amilaza poate ataca granulele intacte de amidon, aa nct celelalte dou categorii vor aciona asupra produilor amilazelor. Amilazele de tip -amilaza atac legturile 1,4 att n cadrul amilozei, ct i al amilopectinei, inducnd eliberarea de produi lungi. Nu poate ataca legturile 1,6 ale amilopectinelor, iar biodegradarea amilopectinei se rezum la formarea unor dextrine. Amilazele de tip -amilaz hidrolizez amidonul la -maltoz (diglucid cu proprieti reductoare). Amilazele sunt enzime hidrolitice, cu aciune ireversibil. Amidon fosforilazele biodegradeaz amidonul ncepnd de la capetele nereductoare, folosind n acest scop o grupare fosfat i nu o molecul de ap. Ele nu sunt hidrolaze, ci enzime fosforolitice. De asemenea, reacia catalizat este reversibil in vitro. Legturile 1,6 din cadrul amilopectinei, precum i alte legturi care nu au fost rupte de enzimele prezentate anterior, pot fi atacate de anumite enzime de deramificare. La plante, au fost descrise trei tipuri principale de astfel de enzime: o pululaz, o izoamilaz i o limit dextrinaz (Manners, 1985). De obicei, maltoza se acumuleaz rareori n cursul hidrolizei amidonului, deoarece ea este hidrolizat la dou molecule de glucoz, sub aciunea enzimei maltaza. Fructanii sunt hidrolizai prin intermediul enzimelor fructofuranozidaze. Zaharoza este biodegradat printr-o reacie hidrolitic ireversibil, sub aciunea invertazelor. O alt enzim care concur la hidroliza zaharozei este zaharozo-sintaza, iar reacia este reversibil. Proteinele sunt depozitate n proteinozomi. Pot fi biodegradate sub aciunea proteazelor, care scindeaz molecula proteic n fragmente polipeptidice. Peptidazele de tip endopeptidaze i Fig.8.1. Aciunea exopeptidaze hidrolizeaz polipeptidele i le transform n aminoacizi. peptidazelor Aminopeptidazele i ncep aciunea prin extremitile NH2 i carboxipeptidazele ncep atacul prin extremitile COOH (fig. 8.1.).

160 Lipidele (trigliceridele) sunt depozitate n sferozomi i sub aciunea lipazelor sau esterazelor se realizeaz biodegradarea la glicerol i acizi grai. 8.2.2. Etapa a II-a de biodegradare a substanelor organice de rezerv Procesele care au loc prezint particulariti n funcie de substrat. Glucoza este biodegradat prin glicoliz. Aminoacizii sunt transportai din proteinozomi n citoplasm, unde are loc dezaminarea. Se formeaz cetoacizi i se elibereaz NH3. Produii biodegradrii enzimatice a lipidelor urmeaz ci specifice: a) glicerolul poate fi transformat n aldehid gliceric, care poate fi folosit ulterior n ciclul glicolitic (deci biodegradare) sau n fotosintez pentru producerea hexozelor; b) acizii grai sunt transportai din sferozomi pn n glioxizomi, unde sunt biodegradai prin -oxidare sau ciclul Linen (fig. 8.2.). De fiecare dat, la scurtarea lanului rezult cte o molecul de acetil CoA. Spre exemplu, pentru un acid gras cu 18 C, ciclul conduce la formarea a 9 moli de acetil CoA. La producerea fiecrui mol de acetil CoA se formeaz i 5 moli de ATP. Formarea celor 5 moli de ATP se explic prin transferul electronilor la FAD+ i Fig.8.2. Biodegradarea acizilor grai prin - oxidare NAD+ ; formarea FADH2, precum i NADH+ + H+ i ulterior oxidarea acestora la nivelul mitocondriei. Prin urmare, rezult un total de 45 moli ATP, corespunztor a 1350 kJ. Acetil CoA poate fi utilizat n continuare n dou moduri: intr la nivelul mitocondriei n desfurarea ciclului Krebs sau este metabolizat direct n glioxizomi, n ciclul glioxilic (fig. 8.3.). Deci, n cadrul ciclului Krebs, acetil CoA este oxidat la 2 molecule de CO2 generndu-se ATP, nefiind o sintez net, dac ciclul sfrete cu acid oxalacetic, exact acelai compus cu care sa nceput. Pentru a exista precursori biosintetici, cele dou reacii de producere a Fig. 8.3. Ciclul acidului glioxilic CO2 n cadrul ciclului acidului citric trebuie evitate. Se poate realiza aceasta prin intermediul ciclului acidului glioxilic, care preia compuii cu doi carboni i-i transform n compui cu 4 carboni.

161 Pe parcursul creterii plantelor sunt necesare cantiti mari de polizaharide. Spre exemplu, n cursul germinrii seminelor, ciclul glioxilic permite sinteza glucozei din lipide. Menionm faptul c prin acest ciclu se evit etapele prin care se pierde dioxid de carbon n ciclul Krebs, ns etapele: acetil CoA acid citric acid izocitric sunt identice. n continuare, intervin izocitrat liaza, cu scindarea acidului izocitric la acid succinic i acid glioxilic, de unde deriv i numele ciclului. Are loc apoi o condensare a acidului glioxilic cu acetil CoA, sub aciunea malat sintazei, rezultnd acidul malic. Acidul malic, precum i acidul oxalacetic pot fi transformai n acid fosfoenol piruvic, care reprezint substrat al fosfoenolpiruvat carboxikinazei, o prim enzim a gluconeogenezei. 8.2.2.1. Biodegradarea glucozei pe calea glicolizei prima faz a respiraiei Glucoza rezultat din biodegradarea amidonului sau glucoza depozitat n vacuol este transportat n citosol, unde se desfoar glicoliza. Glicoliza sau ciclul EMP (EMP Embden, Meyerhof, Parnas) este cea mai veche i comun cale cunoscut, privitoare la degradarea hexozelor. Biodegradarea glucozei, cu formarea a dou molecule de acid piruvic (compus cu 3 atomi de carbon), ca form tranzitorie, reprezint prima faz a respiraiei. Termenul de glicoliz a fost introdus n 1909 i semnifica liza glucidelor, respectiv degradarea glucozei la alcool etilic. Reaciile individuale ale procesului au fost descoperite de ctre cercettori germani interesai de producerea alcoolului prin intermediul drojdiilor, precum i de ctre ali cercettori preocupai de degradarea glicogenului la acid piruvic, n celulele musculare. Stadiile glicolizei Glicoliza poate fi mprit n dou stadii: A. Stadiul pregtitor, care necesit energie B. Stadiul oxidativ, care elibereaz energie Stadiul pregtitor implic fosforilarea, izomerizarea i splitarea glucozei. La nceput are loc fosforilarea glucozei, prin intermediul unei molecule de ATP i rezult glucoza 6- fosfat. Urmeaz izomerizarea glucozei 6-fosfat, la fructoza 6-fosfat. Are loc apoi o a doua fosforilare, respectiv fructoza 6-fosfat este transformat n fructoza 1,6 difosfat, prin utilizarea unei molecule de ATP. n continuare, fructoza 1,6 difosfat este splitat la 2 molecule, cu cte 3 atomi de carbon: aldehida 3fosfogliceric i dihidroxiaceton fosfat, substane interconvertibile. Stadiul oxidativ implic fosforilarea, oxidarea (prin dehidrogenare), izomerizarea i deshidratarea. Aldehida 3-fosfogliceric este fosforilat prin intermediul fosfatului anorganic rezultnd aldehida 1,3-difosfogliceric. Aceasta este supus unei dehidrogenri, prin intermediul coenzimei NAD+, producndu-se acidul 1,3-difosfogliceric. Fosforilarea la nivel de substrat const n acceptarea de ctre ADP a unei grupri fosfat de la acidul 1,3-difosfogliceric, proces n urma cruia rezult o molecul de ATP i acidul 3fosfogliceric. Acidul 3-fosfogliceric este izomerizat la acid 2-fosfogliceric. Acidul 2-fosfogliceric este deshidratat, cu producerea acidului fosfoenol piruvic. A doua fosforilare la nivel de substrat const n transferul gruprii fosfat de la acidul fosfoenol piruvic, la ADP, cu formarea ATP i a acidului piruvic. Astfel, se ncheie glicoliza (fig. 8.4.).

162

Fig. 8.4. Reaciile specifice glicolizei

Prin urmare, caracteristicile specifice i rolul glicolizei pot fi rezumate astfel: are loc n toate organismele vii (procariote, eucariote); este cel mai vechi stadiu al respiraiei (denumit fiind i faza anaerob a respiraiei aerobe); implic fosforilare, dehidrogenare i modificri intramoleculare (rearanjare a atomilor n cadrul moleculelor); oxidarea are loc doar prin dehidrogenare, fr a fi implicat oxigenul molecular i nu se elibereaz CO2; producerea de ATP (2 molecule) i NADH+ + H+ (2 molecule); ATP-ul este produs prin transfer direct a fosfatului de la substrat, la ADP. Deci, producerea de ATP este distinct de sinteza de ATP prin fosforilare oxidativ, care utilizeaz transportul electronilor. NAD+ este un cofactor de natur organic, asociat cu multe enzime, care catalizeaz reaciile redox celulare. formarea unor molecule care pot iei din ciclu, servind sintezei altor constitueni; acidul piruvic produs poate fi oxidat n mitocondrie, cu producerea unor cantiti mari de ATP; Glicoliza i ciclul Krebs nu sunt singurele ci prin care plantele obin energie, din oxidarea glucidelor la CO2 i H2O. O cale alternativ glicolizei este ciclul pentozo fosfat. Ciclul pentozo fosfat Deoarece n acest ciclu de reacii alternative sunt intermediari glucozo-fosfai care conin cinci atomi de carbon, calea este numit pentozo-fosfat (PPP- pentozo-phosphat-pathway) sau ciclul pentozo-oxidativ. Unii compui ai ciclului PPP sunt de asemenea membri ai ciclului Calvin (C3 al fotosintezei), n care glucozo-fosfaii sunt sintetizai n cloroplaste. Diferena esenial ntre ciclul Calvin i ciclul PPP este aceea c n ultimul caz, glucozo-fosfaii sunt mai degrab degradai, dect sintetizai (fig.8.5.).

163 Principalele caracteristici i rolul ciclului PPP: ciclul PPP poate fi considerat o rut alternativ a compuilor succesiv degradai prin glicoliz; glicoliza i ciclul PPP au anumii reactani n comun; glicoliza i ciclul PPP au loc n citosol, fiind interconectate; diferena important este aceea c, n ciclul PPP, acceptorul de electroni este ntotdeauna NADP+, n timp ce n glicoliz, acceptorul comun, obinuit este NAD+. este produs NADPH++H+, nucleotid care poate fi oxidat n mitocondrie, formndu-se ATP; NADPH+ + H+ este specific folosit n numeroase reacii de biosintez, care necesit un donor de Fig. 8.5. Schema ciclului pentozo fosfat electroni; este produs eritroza 4fosfat, compus care constituie un punct de plecare pentru reaciile n care se produc numeroi compui fenolici, cum sunt precursorii antocianilor, ligninei, fitoalexinelor; este produs riboza-5-fosfat, care reprezint precursorul unitilor riboz i deoxiriboz necesare n nucleotide. Prin urmare, ciclul PPP este esenial n plante, ca i glicoliza i ciclul Krebs. 8.2.3. Etapa a III-a de biodegradare a substanelor organice de rezerv Mitocondria-organitul specializat pentru desfurarea respiraiei: particulariti structurale i funcionale Mitocondriile sunt organite celulare nconjurate de o membran dubl lipoproteic. Membrana extern este neted i conine circa 7% din proteine, iar cea intern este prevzut cu pliuri, denumite criste mitocondriaale (conine circa 50-60% din proteine). Spaiul dintre cele dou membrane poart numele de spaiu intermembranal (probabil 1-2% din proteine). Fluidul intern delimitat de criste este denumit matrix (cu 30% din proteine). Cele dou membrane difer din punct de vedere al compoziiei chimice i al proprietilor specifice. Astfel, membrana extern este permeabil pentru numeroi metabolii cu masa molecular mic i nu conine transportori. Membrana intern se constituie ca o adevrat barier dintre citoplasm i matrix. Este impermeabil pentru majoritatea substanelor i conine numeroi transportori de electroni, precum i ATP sintaza, care contribuie la fosforilarea oxidativ. Principalul rol fiziologic al mitocondriilor este acela de producere de energie biochimic n cursul procesului de respiraie aerob. Mitocondriile sunt considerate de altfel uzinele energetice ale celulei . 8.2.3.1. Mecanismul biodegradrii aerobe a acidului piruvic (respiraiei mitocondriale) - faza a doua a respiraiei Faza a doua a respiraiei presupune parcurgerea urmtoarelor trepte: 1) reacia de legtur dintre glicoliz i ciclul Krebs 2) ciclul Krebs sau ciclul acidului citric 3) transportul electronilor i fosforilarea oxidativ

164 1) Reacia de legtur dintre glicoliz i ciclul Krebs Acidul piruvic rezultat n citosol intr n matrixul mitocondriei, prin intermediul unui transportor, care la nivelul membranei interne mitocondriale schimb acidul piruvic, cu OH-. Aici are loc conversia la acetil CoA, prin decarboxilare oxidativ (cu implicarea complexului enzimatic al piruvat dehidrogenazei - PDH) i combinarea unitii acetat cu 2C, cu un compus care conine sulf (coenzima A).Totodat, n timpul formrii acetil CoA, pe lng pierderea de CO2 se pierd i 2 atomi de H+. H+ este acceptat de ctre NAD+ i rezult NADH+ + H+ (fig.8.6.). 2) Ciclul Krebs

Fig.8.6. Reacia de legtur

Acest ciclu de reacii a fost propus de ctre biochimistul englez Hans A. Krebs, n 1937, pentru a explica cum anume acidul piruvic este degradat n muchiul pieptului porumbeilor. Este denumit de asemenea ciclul acidului citric sau ciclul acidului tricarboxilic, avnd n vedere faptul c primul produs al ciclului Krebs este un acid tricarboxilic (acidul citric). Totodat, este denumit ciclu amfibolic, avnd n vedere c anumii intermediari sunt utilizai n procese anabolice (sinteza aminoacizilor, sinteza lipidelor, sinteza pigmenilor etc.). Ciclul Krebs se desfoar n matrixul mitocondrial i const dintr-o serie de reacii precum condensare, deshidratare, hidratare, dehidrogenare, decarboxilare, fosforilare (fig. 8.7.). Acetil CoA este supus unui proces de condensare cu acidul oxal acetic (4C) rezultnd acidul citric (6C). Coenzima A se ntoarce, pentru a forma o nou molecul de acetil CoA. Urmeaz eliberarea unei molecule de ap i formarea acidului cis-aconitic. Apoi, prin hidratarea celui din urm se formeaz acidul izocitric (izomer al acidului citric). Prin dehidrogenarea (prima) acidului izocitric rezult acidul oxalo-succinic (6C) i NAD+ este redus la NADH+ +H+. Prin decarboxilarea acidului oxalo-succinic se formeaz acidul cetoglutaric (cu 5 C, dicarboxilic) i o molecul de CO2. Are loc conversia acidul - cetoglutaric la succinil CoA (4C), printr-o dehidrogenare (a doua) i o decarboxilare. Se produce deci o nou molecul de CO2, iar protonii eliberai sunt acceptai de ctre NAD+, cu formarea NADH+ +H+. Urmeaz formarea acidului succinic (4C), n urma eliberrii CoA din acetil CoA i totodat are loc fosforilarea la nivel de substrat, rezultnd o molecul de ATP. CoA este nlocuit de o grupare fosfat i aceasta este ulterior transferat la GDP (guanozin difosfat) formndu-se GTP (guanozin trifosfat). Acesta din urm cedeaz gruparea fosfat la ADP (adenozin difosfat) i astfel rezult molecul de ATP. Acidul succinic este transformat n acid fumaric (4C), iar hidrogenul rezultat n urma dehidrogenrii (a treia) este acceptat de ctre FAD+, cu formare de FADH2. Prin a doua hidratare, are loc transformarea acidului fumaric, n acid malic (4C). Urmeaz cea de-a patra dehidrogenare, care conduce la formarea acidului oxal acetic (4C) i a NADH+ +H+. Iat deci, ciclul se ncheie i totodat poate fi reluat. Prin urmare, ciclul Krebs este nsoit de eliberarea unor electroni din acizii organici intermediari i transferul acestor electroni la NAD+, formndu-se 3 molecule de NADH+ + H+ i o molecul de FADH2 pentru o molecul de acid piruvic oxidat. Deci, dintr-o molecul de glucoz se formeaz 6 molecule de NADH ++ H+ i 2 molecule de FADH2. De asemenea, dintr-o molecul de glucoz se formeaz dou molecule de ATP. Nici o enzim dehidrogenazic a acestui ciclu nu folosete NADP+, ca acceptor de electroni. De altfel, NADP+ este de obicei aproape nedetectabil n mitocondriile celulelor plantelor, n timp ce n cloroplaste este abundent NADP+ i adesea puin NAD+.

165

Fig. 8.7. Reaciile specifice ciclului Krebs

Rolul fiziologic al ciclului Krebs: formarea compuilor intermediari, importani pentru sinteza unor substane precum aminoacizi, acizi grai, pigmeni, acizi nucleici; Intermediari ai ciclului Krebs sunt precursori pentru diferite reacii de biosintez. Astfel, acidul -cetoglutaric, succinil CoA, acidul fumaric i acidul oxalacetic sunt precursori pentru molecule importante. Prin transaminare, are loc conversia acidului glutamic la -cetoglutaric i invers. Acidul glutamic este precursor pentru sinteza altor aminoacizi i nucleotide purinice. Succinil CoA este precursor pentru porfirine. Acidul oxalacetic poate fi transaminat pentru a forma acid aspartic, care la rndul su devine precursor pentru ali aminoacizi i nucleotide pirimidinice. Acidul oxalacetic este substrat pentru gluconeogenez. Acidul citric poate fi transportat n afara mitocondriei, n citosol, unde este biodegradat prin intermediul ATP-citrat liazei, cu formare de acid oxalacetic i acetil CoA. Acetil CoA este precursor pentru acizii grai. Acidul oxalacetic produs este redus la acid malic, care poate fi transportat napoi n matrixul mitocondrial. Aici este reoxidat la acid oxalacetic sau acid malic i poate fi decarboxilat oxidativ la acid piruvic, de ctre enzime malice, urmnd a fi transportat napoi n mitocondrie. Experimentele recente au evideniat complexitatea organizrii i operrii ciclului n plante (Sweetlove i al., 2010). reducerea NAD+ i a FAD+ la compui donatori de electroni (NADH+ + H+ i FADH2), care apoi vor fi oxidai i se va produce ATP; sinteza direct a unei cantiti limitate de ATP (o molecul de ATP, pentru o molecul de acid piruvic oxidat); 3) Transportul electronilor i fosforilarea oxidativ Pentru asigurarea continuitii ciclului Krebs, coenzimele reduse trebuie reoxidate i aceasta se realizeaz prin transferul electronilor rezultai ctre O2, rezultnd H2O ca produs final. n cazul organismelor care posed mitocondrii, procesul implic o serie de transportori de electroni, dispui astfel nct s creasc potenialul redox, respectiv raportul dintre potenialul reductor i potenialul oxidativ.

166 Principalele componente ale lanului transportor de electroni Pentru realizarea procesului de transport al electronilor concur n principal patru complexe proteice integrale, situate la nivelul membranei mitocondriale interne (fig. 8.8.): 1) complexul I NADH-dehidrogenaza. Rolul su este de a asigura oxidarea NADH+ + H+ produs n matrixul mitocondrial i de a transfera electronii la ubichinon (UQ). 2) complexul II succinat : ubichinon oxidoreductaza. Acest complex catalizeaz oxidarea acidului succinic, la acid fumaric n timpul operrii ciclului Krebs i asigur transferul electronilor rezultai la ubichinon. Ubichinona, denumit i coenzima Q este o benzochinon, solubil n lipide. Exist liber n faza hidrofob a membranei mitocondriale interne i asigur att un transport de electroni, ct i un transport de protoni. Din punct de vedere structural i funcional se aseamn cu plastochinona prezent n membranele tilacoide ale cloroplastelor. Prin activitatea sa n cadrul a ceea ce se denumete ciclul Q (forma oxidat a coenzimei Q- ubichinona; semichinona intermediar; forma redus a coenzimei Q- QH2- ubiquinol) se asigur pomparea unui proton n plus per electron transportat, ceea ce sporete gradul de conservare a energiei. Ubichinona asigur legtura dintre complexul I i complexul III.

Fig. 8.8. Lanul transportor de electroni i fosforilarea oxidativ (dup Rasmusson, 1991)

3) complexul III- ubichinon:citocrom c oxidoreductaza. Acesta oxideaz ubichinona redus prin intermediul complexelor I i II i transfer electronii rezultai la citocromul c. Citocromul c este o protein membranal periferic, mic (12,5 KDa), localizat n spaiul intermembranal. El reprezint singura protein din lanul de transfer a electronilor, care nu se constituie ca parte a unui complex proteic membranal integral. Citocromul c redus este oxidat de complexul IV. 4) complexul IV- citocrom c oxidaza. Acesta reprezint complexul terminal din seria transportorilor de electroni. El oxideaz citocromul c i transfer electronii la oxigenul molecular. Pe parcursul transportului electronilor exist trei situsuri de conservare a energiei, la nivelul complexelor I,III i IV. La nivelul acestora, protonii sunt transportai transversal prin membrana intern, genernd o for motrice, care conduce la sinteza ATP-ului. F0F1 ATP sintetaza nu este parte a lanului transportor de electroni. Complexul este asociat cu membrana intern i are un rol primar n fosforilarea oxidativ. Ca urmare, poate fi numit complexul V. Componenta F1, multiproteic, periferic (solubil n ap) conine sediul catalitic al conversiei ADP i Pa la ATP. De altfel, procesul se realizeaz n matrixul mitocondrial. Componenta F0 este un complex proteic integral, care transport H+ transversal prin membran (fig. 8.9.). Cercetrile recente asupra structurii zonei F1 au redat date noi i importante cu privire la mecanismul sintezei ATP. Pentru aceste descoperiri John i al. au primit premiul Nobel n Chimie

167 n anul 1997. Componenta F1 este alctuit din cel puin 5 uniti diferite (trei , trei , una , una i una ). n privina mecanismului de sintez a ATP, cel mai acceptat este cel denumit binding change mechanism- propus iniial de Paul Boyer. Caracteristica cheie a acestuia este aceea c modificrile conformaionale n protein sunt critice. Energia depozitat n gradientul protonilor nu este folosit direct pentru sinteza ATP, ntr-un sens clasic, ci mai degrab este folosit pentru eliberarea legturii strnse a ATP, de situsul su catalitic de legare pe enzim. 8.2.3.1.1. Bilanul energetic al biodegradrii glucozei

Fig. 8.9. Complexul ATP sintetaza

n cadrul glicolizei, dintr-o molecul de glucoz se formeaz 4 molecule de ATP. ns, ctigul net este 2 molecule de ATP, deoarece 2 molecule s-au folosit pentru fosforilrile primei trepte. De asemenea, se formeaz 2 molecule de NADH+ +H+. Prin oxidarea acestora n cadrul lanului de transport a electronilor se formeaz 6 molecule de ATP (cci prin oxidarea unei molecule de NADH+ +H+ se genereaz 3 moli de ATP). n consecin, glicoliza are ca rezultat formarea a 10 moli de ATP, din care doi moli fiind consumai n prima treapt, ctigul net este de 8 moli de ATP, echivalentul a 240 kJ. n cadrul reaciei de legtur dintre glicoliz i ciclul Krebs, pentru o molecul de glucoz se formeaz 2 molecule de NADH+ +H+. Oxidarea ulterioar a acestora conduce la formarea a 6 moli de ATP. n ciclul Krebs, prin oxidarea unei molecule de acetil CoA se formeaz 3 molecule de + NADH +H+ i o molecul de FADH2, deci dintr-o molecul de glucoza rezult 6 molecule de NADH+ +H+ (echivalentul a 18 moli de ATP), respectiv 2 molecule de FADH2 (echivalentul a 4 moli de ATP). Prin fosforilarea la nivel de substrat mai rezult de asemenea 2 moli de ATP (per glucoz). Prin biodegradarea glucozei se formeaz n total 38 moli ATP (tabelul 8.2.), corespunztor a 1140 kJ (38 ATP * 30 kJ). Aceasta reprezint 40% din energia rezultat din procesul de biodegradare a glucidelor (2870 kJ). Restul de 60% se elimin n mediul ambiant, sub form de cldur. ATP-ul reprezint forma de depozitare i totodat forma sub care este transportat energia biochimic. Tabelul 8.2. Bilanul energetic n funcie de moleculele produse n cazul biodegradrii glucozei
Specificaia Glicoliz Citosol Matrixul mitocondrial Transportul electronilor i fosforilarea oxidativ 2 x (3 ATP) 2 x (3 ATP) 2 x (9 ATP) 2 x (2 ATP) Molecule de ATP 2 ATP 6 ATP 6 ATP 2 ATP 18 ATP 4 ATP 38 ATP

2 ATP 2 NADH+ + H+ Acid piruvic 2 x 1 NADH+ + H+ Acetil CoA Ciclul Krebs 2 x (1 ATP) 2 x ( 3 NADH+ + H+) 2 x (1 FADH+ + H+) TOTAL

168 8.2.3.1.2. Ci alternative, prin care se evit conservarea energiei, n cursul fosforilrii oxidative La celula vegetal, lanul de transport a electronilor este puternic ramificat. Aceasta determin ca sistemul fosforilrii oxidative s dispun de cteva ci alternative de transport a electronilor: calea NAD(P)H dehidrogenazelor de tipul II (NADH dehidrogenaza aparine tipului I de dehidrogenaze); calea oxidazei alternative (AOX), ambele fiind specifice plantelor. De asemenea, exist un transportor alternativ de protoni, aa numita protein necuplat (UCP) care se gsete i la celula animal. UCP din mitocondria plantelor are circa 32 KDa i secvena genei a fost raportat prima oar la plante n anul 1997 (Laloi i al., 1997). NAD(P)H dehidrogenazele de tipul II concureaz complexul I (NADH dehidrogenazele de tipul I). AOX conduce la neglijarea complexelor III i IV, iar proteina necuplat neglijeaz ATP sintetaza (Rasmusson i al., 2004). Teoretic, dehidrogenaza adiional dinspre matrix, poate fi competitiv cu complexul I, pentru oxidarea NADH+ +H+ generat n urma operrii ciclului Krebs. Totui, datele recente sugereaz faptul c enzima acioneaz mai probabil ca o NADPH dehidrogenaz. NAD(P)H dehidrogenaza de pe faa dinspre spaiul intermembranal este cunoscut ca dehidrogenaz extern. Ea poate oxida att NADH+ +H+, ct i NADPH+ +H+generate n citosol, dat fiind permeabilitatea membranei externe pentru molecule de pn la 3 KDa mrime. Ambele dehidrogenaze doneaz electronii direct la ubichinon. Cu toate acestea, nici una nu catalizeaz translocarea protonilor prin membrana intern. n consecin, n timpul transferului electronilor ntre NAD(P)H i ubichinon este pierdut energie sub form de cldur i nu este folosit pentru sinteza ATP. n cazul aciunii UCP, se permite realizarea transportului protonilor din spaiul intermembranal, ctre matrix, fr a avea loc o sintez de ATP. Diferenierea ntre NADH dehidrogenaza (tipul I) i dehidrogenazele alternative (tipul II) este aceea c prima este nhibat specific de rotenone, n timp ce dehidrogenazele de tipul II sunt rezistente la nhibitorii specifici complexului I (rotenone, capsaicin, piericidin) (Melo i al., 2004). Oxidaza alternativ constituie o alt caracteristic ce difereniaz mitocondria celulei vegetale de mitocondria celulei animale. Recent, au fost prezentate date noi cu privire la implicarea sa n respiraia cianid rezistent (Ho i al., 2007). AOX este o oxido-reductaz care nu efectueaz transport de protoni. Ea se difereniaz de citocrom-c oxidaza normal, prin faptul c este insensibil la cianid (CN-), azide (N3-) i monoxid de carbon (CO), toate acestea nhibnd citocrom c oxidaza. Cu toate acestea, transportul electronilor prin ciclul alternativ poate fi specific nhibat de anumii compui, precum acidul salicilhidroxamic (SHAM). Determinrile efectuate privind rata respiraiei n perioada imbibiiei i germinrii embrionilor de gru au demonstrat care sunt concentraiile adecvate ale acidului salicilhidroxamic (SHAM), pentru a nhiba ciclul cianid rezistent, fr vreun efect secundar (Psenakova i al. , 1995). n cazul acestui ciclu respirator alternativ, electronii de la nivelul ubichinolului (forma redus a ubichinonei) nu sunt transportai mai departe n cadrul cii obinuite, ci are loc transferul lor la oxigenul molecular, rezultnd H2O ca produs final. Nu se genereaz un transport de protoni, iar energia eliberat n timpul transportului electronilor de la ubichinol, prin ciclul alternativ este pierdut sub form de cldur. Prin urmare, dou dintre situsurile de conservare a energiei (complex III i IV) sunt neglijate. Rolul ciclului respirator alternativ Acest ciclu poate juca un rol semnificativ n procesul de respiraie, dat fiind faptul c: n anumite condiii, operarea acestui ciclu inutil poate fi necesar pentru meninerea ratei de transport mitocondrial a electronilor;

169 De exemplu, n situaia n care fluxul absolut al reductantului este ridicat, precum n cazul operrii ciclului fotorespirator n esuturile fotosintetizante, ciclul alternativ este benefic. AOX ca i dehidrogenazele de tipul II pot aciona ca enzime care reoxideaz surplusul de + NADH +H+ n cazul unui supraflux de e- (Millenaar i Lambers, 2003). Activitatea sa este mai intens n celulele bogate n glucide, cum ar fi dup o fotosintez rapid, intensificat. De asemenea, opereaz cnd glicoliza i ciclul Krebs au loc neobinuit de rapid, iar ciclul normal nu poate manipula toi electronii disponibilizai. Se asigur astfel continuitatea ciclului Krebs, n condiiile n care disponibilitatea ADP este redus. Prin cile alternative se permite de asemenea desfurarea fotosintezei, prin oxidarea excesului de NADPH+ +H+ format n cloroplast. La fructe climacterice precum mango (Mangifera indica) rata respiraiei a crescut de peste 6 ori la maximul climacteric. O asemenea respiraie a fost asociat cu evitarea fosforilrii, ca urmare a insenzitivitii la cianid i s-a determinat abundena proteinei AOX pe parcursul maturrii (Cousidine i al., 2001). n condiii de stres termic (temperaturi joase), cnd electronii trecui prin ciclul principal sunt oarecum restricionai, transportul prin ciclul alternativ poate fi n competiie cu transportul prin ciclul principal; n cazul stresului indus de temperaturi joase s-a constatat o activitate sporit a AOX, ca urmare a formrii speciilor reactive de oxigen (ROS). ROS pot provoca daune proteinelor, lipidelor i prin urmare reacia celulei este aceea de a limita formarea lor. AOX contribuie la prevenirea suprareducerii lanului de transport a electronilor i prin aceasta scade producerea de ROS (Maxwell i al., 1999). De asemenea, activitatea UCP poate ca i AOX s scad supraproducerea i formarea ROS (Fernie i al., 2004). Activitatea celor dou proteine distincte a fost evideniat de asemenea la tuberculii de cartof pstrai la temperaturi joase, ori expui mbtrnirii artificiale (Pinheiro i al., 2004). Conceptul unei stri redox celulare a creat o platform robust pentru stabilirea importanei reglrii redox n biologia stresului (Potters i al., 2010). calea AOX este implicat n ciclul acidifiere/deacidifiere la plantele CAM; n cursul nopii este asimilat CO2 formndu-se acid malic, care este stocat n vacuol. Ziua, CO2 fixat este eliberat prin intermediul enzimelor malice localizate n mitocondrie (conform cu posibilele ci de decarboxilare descrise anterior). Cercetrile efectuate la Kalancho drigremontiana (Robinson i al., 1992) au evideniat creterea ratei respiraiei n frunze cu 35% la nceputul zilelor calde. Aceasta s-a datorat sporirii activitii AOX, desigur n relaie cu metabolizarea acidului malic. Pe msura dispariiei acidului malic, respectiv la mijlocul zilei, activitatea AOX a revenit la nivelul activitii specifice pe parcursul nopii. Prin urmare, n acest caz, o mare parte a acidului malic a fost oxidat pe calea enzimelor malice din mitocondrie. Cantitatea de NADH+ +H+ format n exces n matrix a fost oxidat n mare parte pe calea AOX. calea AOX este n mod specific activ n speciile termogenice (creterea temperaturii la Araceae n cursul nfloririi); Spre exemplu, expresia genei AOX este puternic pe parcursul termogenezei la Dracunculus vulgaris care biodegradeaz hidraii de carbon (Ito i Seymour, 2005), iar la P. sellonum care biodegradeaz lipide, producerea de cldur poate fi asociat cu proteinele necuplate. Recent, rolul AOX n termogenez a fost pus n discuie prin Fig. 8.10. Rata respiraiei i a descoperirea proteinelor necuplate, inclusiv la producerii de cldur (sus) i spadixul termogen la Symplocarpus foetidus i temperatura receptaculului central (jos) receptaculii termogeni la lotus (Nelumbo nucifera) la Nelumbo nucifera (Watling i al., 2006). n aceste cazuri, rata respiraiei crete aproape liniar, pe msur ce

170 temperatura scade sub 300C, iar temperatura medie a florii este aproape constant (fig. 8.10.) (Seymour i Schultze-Motel, 1998). Conform cu legile simple ale fizicii, pentru a se menine o temperatur stabil la nivelul florii, rata producerii de cldur la acest nivel trebuie s fie proporional cu diferena de temperatur dintre aceasta i aer. 8.2.3.2. Biodegradarea anaerob a acidului piruvic Biodegradarea anaerob a acidului piruvic se realizeaz n absena oxigenului molecular din atmosfer. Este specific unor plante inferioare anaerobionte (precum unele bacterii i ciuperci) i se realizeaz sub aciunea enzimelor produse de microorganisme, fiind denumit fermentaie. Procesul se ntlnete i la unele organe vegetative ale plantelor superioare, bogate n glucide de rezerv (tuberculi de cartof, celule vii situate n profunzime la fructe, n cazul terenurilor inundate etc.). De asemenea, biodegradarea anaerob poate fi pus n eviden la seminele n curs de germinare, n cazul n care lipsete oxigenul. n astfel de situaii, acidul piruvic rezultat n glicoliz este metabolizat pe cale fermentativ, cel mai adesea pe cale alcoolic sau cale lactic. n acest caz, enzimele care catalizeaz reaciile biochimice sunt proprii celulelor vii ale esutului respectiv. 8.2.3.2.1. Mecanismul cilor fermentative la plantele superioare i importana practic A) Calea fermentativ alcoolic Acidul piruvic rezultat n urma glicolizei este biodegradat la nivelul citosolului. Are loc decarboxilarea acidului piruvic la aldehid acetic, sub aciunea enzimei piruvic decarboxilaz. Ulterior, aldehida acetic este redus la alcool etilic, iar procesul este catalizat de enzima alcool dehidrogenaz. Prin urmare, dintr-o molecul de glucoz se formeaz dou molecule de alcool etilic, dou molecule de dioxid de carbon i dou molecule de ATP (fig.8.11.). Conform ecuaiei generale, se remarc faptul c spre deosebire de biodegradarea aerob, n cazul cii fermentative alcoolice nu rezult ap endogen, rezult o cantitate mic de dioxid de carbon i Fig.8.11. Calea fermentativ alcoolic cantitatea de energie rezultat este mic (deoarece o parte din energie rmne ncorporat n produii intermediari ex. alcool). B) Calea fermentativ lactic Acidul piruvic este supus unei hidrogenri i dintr-o molecul de glucoz rezult dou molecule de acid lactic i o cantitate redus de energie (fig.8.12.). Nu rezult dioxid de carbon, deoarece acidul piruvic nu este decarboxilat. Prin urmare, pentru biodegradarea glucozei, glicoliza este o etap comun att biodegradrii aerobe, ct i celei anaerobe. n continuare se remarc anumite deosebiri: n urma biodegradrii anaerobe a acidului piruvic nu rezult ap endogen; se produce o cantitate mic de CO2 (calea Fig.8.12. Calea fermentativ alcoolic) i nu rezult CO2 (calea lactic); lactic rezult o cantitate mic de energie n cazul cilor fermentative; viteza de biodegradare este mult mai mare; este metabolizat o cantitate mai mare de substrat respirator; produii finali ai biodegradrii anaerobe sunt: alcoolul etilic, acidul lactic etc.

171 Importana cilor fermentative la plantele superioare Plantele superioare aflate n condiii de anaerobioz pot supravieui un anumit timp, prin desfurarea biodegradrii anaerobe a acidului piruvic i utilizarea cantitii reduse de energie biochimic rezultat n urma acestui proces. Astfel de situaii pot aprea n cazul esuturilor profunde, la fructe supramaturate, precum i la rdcinile plantelor inundate. Pentru organele plantelor pstrate n condiii cu o concentraie redus de oxigen i o concentraie ridicat de dioxid de carbon, generarea condiiilor de anaerobioz total sau parial asigur supravieuirea acestora o perioad scurt de timp. Dac ns se prelungete timpul de meninere ntr-un astfel de mediu, se determin acumularea alcoolului etilic i aldehidei acetice, substane care devin toxice pentru celule. Spre exemplu, n esuturile fructelor cu un grad mai avansat de maturitate, acumularea aldehidei acetice i a alcoolului etilic determin deprecierea calitativ a merelor i perelor, iar aceast dereglare fiziologic este denumit brunificarea intern de supramaturare. n cazul cartofilor timpurii lsai pe sol sub aciunea radiaiilor solare se nregistreaz o intensificare a procesului de respiraie, n relaie direct cu creterea temperaturii. Ca urmare a faptului c cerinele pentru oxigen sunt mai mari, comparativ cu cantitatea care poate ptrunde ctre zonele interne, se creeaz condiii de anaerobioz. Aceasta determin brunificarea intern de origine fermentativ i din cauza autolizei celulelor se formeaz adevrate caverne. Aceast dereglare fiziologic este cunoscut sub numele de inima neagr a cartofului. Pentru cartofii de toamn depozitai n vrac, dac ventilaia este necorespunztoare, se poate de asemenea determina biodegradarea anaerob a glucidelor i brunificarea esuturilor din mijlocul tuberculilor. Inundarea de lung durat a terenurilor determin de asemenea biodegradarea anaerob la nivelul celulelor rdcinii. 8.3. Factorii care influeneaz procesul de respiraie i importana practic a cunotinelor privind respiraia plantelor Intensitatea procesului de respiraie este influenat de numeroi factori interni (specia, vrsta plantei, organul i esutul plantei etc.) i externi (temperatura, compoziia atmosferei, umiditatea etc.). De asemenea, exist relaii cantitative ntre respiraie, cretere, fotosintez, absorbia elementelor minerale etc. Pentru nelegerea acestor relaii s-a introdus conceptul a dou componente principale ale respiraiei: respiraia de cretere (Rc) cea asociat cu conversia substanelor organice pe parcursul formrii noilor structuri celulare n timpul creterii; respiraia de ntreinere (R)- n legtur cu meninerea principalelor funcii i structuri n condiiile creterii zero. Relaia dintre producerea de substan uscat i cantitatea de substan consumat a fost definit de Tanaka (1977) i redat prin ceea ce se denumete eficiena creterii. Desigur, consumul substanelor n respiraie este absolut necesar, n vederea asigurrii pe de o parte a energiei necesare desfurrii proceselor fiziologice i pe de alt parte a scheletelor cu carbon, pentru sinteza a noi substane. Dar, trebuie pe ct posibil mrit eficiena respiraiei i a coeficientului de cretere. S-a determinat c rata respiraiei pe parcursul nopii a fost proporional cu cantitatea de CO2 absorbit n timpul zilei. De asemenea, s-a estimat c eliberarea de CO2 noaptea corespunde cu circa 14 % din absorbia zilnic. Cercetrile au condus la concluzia c circa 25% din asimilate sunt cheltuite n respiraie. Respiraia de ntreinere este proporional cu masa uscat a plantelor i depinde foarte mult de temperatur. n general, plantele pierd 1-2% din carbonul asimilat pentru meninere. n primele stadii de cretere, pierderile sunt mai mici, dect la plantele mature. n cazul asigurrii unei atmosfere mbogite n CO2, la soia s-a demonstrat o cretere a coeficientului de respiraie cu 34%, odat cu creterea concentraiei de CO2, n timp ce coeficientul

172 de cretere nu a fost afectat semnificativ (Thomas i Griflin, 1994). Modificrile respiraiei de ntreinere s-au corelat cu o cretere cu 33% a concentraiei totale de hidrai de carbon nestructurali n frunz. Concentraia de azot a frunzelor de soia nu a fost afectat de mbogirea cu CO2 a atmosferei. Prin urmare, intensificarea respiraiei de ntreinere poate fi o consecin a sporirii acumulrii hidrailor de carbon nestructurali. Factorii interni care influeneaz respiraia 1) Specia Avnd n vedere diversitatea speciilor de plante este de ateptat ca i metabolismul acestora s difere i prin urmare inclusiv rata respiraiei s prezinte variaii funcie de specie. Astfel, la plantele inferioare (bacterii, ciuperci) rata respiraiei este mult mai mare, comparativ cu valorile medii a tuturor organelor nregistrate la plantele superioare. 2) Vrsta plantei Dac se consider intensitatea respiraiei la o plant de floarea soarelui, de la germinare i pn dup nflorit, trebuie precizat c pe parcursul imbibiiei i al germinrii se nregistreaz o activitate respiratorie intens. De asemenea, respiraia se menine la valori mari pe parcursul creterii vegetative, urmnd ca nainte de nflorire rata respiraiei s nceap s scad. 3) Organul i esutul plantei La o plant ntreag matur, rata respiraiei este dat de activitatea metabolic a frunzelor tinere, a rdcinilor i a florilor n formare. Valorile minime se nregistreaz n cazul rdcinilor, iar valorile maxime n cazul florilor. n general, esuturile fiziologic active, precum esuturile meristematice au o intensitate respiratorie mai mare, comparativ cu alte esuturi. esuturile tinere au respiraie mai intens dect esuturile mature, care au o mai mic mas fiziologic activ. n cazul pomilor spre exemplu, respiraia lstarilor este mai rapid pe unitatea de mas uscat, comparativ cu respiraia ramurilor. Respiraia frunzelor tinere este mai intens, dect la frunzele btrne. Dac facem referire la diferite organe i esuturi, rata respiraiei prezint o deosebit importan practic pentru meninerea calitii, n special n perioada post-recolt. ! Intensitatea respiraiei constituie un indicator pentru aprecierea gradului de perisabilitate a diferitelor organe ale plantelor. n general, durata de pstrare variaz invers proporional cu rata respiraiei. Respiraia asigur compui care influeneaz rata proceselor metabolice, cu efecte directe asupra parametrilor calitativi: fermitate, coninut n glucide, arom, savoare etc. Spre exemplu, perioada de pstrare la brocoli, salat, mazre, spanac (toate cu rate respiratorii mari) este scurt: 2-7 zile, comparativ cu cea a merelor, cepei, cartofului, semine uscate (toate cu rate respiratorii mai mici). Seminele uscate i menin calitatea pe parcursul mai multor ani (tabelul 8.3.). Tabelul 8.3. Rata respiraiei unor produse diferite ca perisabilitate Clasa Foarte mic Mic Moderat Mare Foarte mare Extrem de mare Limitele la 50C (mg CO2/kg/h) <5 5-10 10-20 20-40 40-60 >60 Produse Nuci Mere, citrice, ceap, cartof, struguri Caise, banane, ciree, piersici, pere, prune, ardei, tomate Cpuni, afine, conopid, avocado Flori tiate, varza de Brussels Ciuperci, spanac, mazre, brocoli

n cazul seminelor, a bulbilor, a tuberculilor etc. caracterizate printr-o perioad de dorman, n acest interval de timp rata respiraiei este redus. De exemplu, la semine, intensitatea respiraiei este de 0,007-0,009 mg CO2/kg/h i crete marcant n timpul germinrii (600 mg CO2/kg/h).

173 ! Intensitatea procesului de respiraie reprezint unul dintre indicatorii utilizai pentru precizarea momentului de intrare i ieire din dorman a mugurilor (rdcinoase, cartofi, ceap, pomi fructiferi, material sditor horticol etc.) i a embrionilor seminelor. 4) Stadiul de dezvoltare al organului Aa cum s-a precizat anterior, rata respiraiei are valori mici la organe precum, nuci, tuberculi, n schimb, esuturile cu meristeme vegetative i florale, precum asparagus i brocoli au rate respiratorii mari. Pe msura maturrii organelor plantei, rata respiraiei n mod tipic nregistreaz un declin. Prin urmare, produsele horticole recoltate n perioada creterii active (de exemplu multe legume i fructe imature) au rate respiratorii mari. n schimb, fructele mature, mugurii dorminzi i diferite organe de depozitare au rate respiratorii mici. n privina fructelor, prezint o deosebit importan modificrile ratei respiraiei pe parcursul dezvoltrii lor, dar mai ales n preajma momentului maturrii, ct i n perioada postrecolt. n general, la toate fructele se nregistreaz valori mari ale respiraiei cnd acestea sunt tinere, n cursul diviziunilor intense i ale extensiei celulare. Urmeaz un declin gradual, lent la fructe i organe de depozitare ne-climacterice i rapid n esuturi vegetative i fructe imature. Declinul rapid reflect probabil reducerea cantitativ a substratului respirator, care este sczut n astfel de esuturi. n cazul multor specii ns (cum este i cazul merelor), declinul este la un moment dat ntrerupt de o intensificare rapid a respiraiei pe parcursul maturrii, aa numitul climacteric. Acest moment coincide cu maturitatea de consum i este precedat de o intensificare a biosintezei etilenei. Procesul presupune Fig. 8.13. Intensitatea respiraiei in parcurgerea a patru faze distincte: minim cazul comportamentului climacteric i preclimacteric, cretere climacteric, picul climacteric non-climacteric i declinul post-climacteric (fig. 8.13.). Din acest punct de vedere se disting: fructe climacterice (mere, caise, banane, kiwi, nectarine, piersice, pere, prune, tomate etc.); fructe neclimacterice (struguri, cpune, afine, ciree, lmi, castravei, ananas etc.). Aciunea etilenei (hormon de maturare al plantelor) se manifest n mod specific n funcie de specie. La speciile climacterice devanseaz apariia climactericului respirator, n timp ce la cele neclimacterice, tratamentele cu etilen pot determina apariia unui maximum climacteric. ! n cazul organelor climacterice, intensitatea procesului de respiraie constituie un indicator pentru aprecierea momentului optim de recoltare, avnd n vedere c faza de preclimacteric corespunde cu momentul de recoltare a fructelor destinate pstrrii ndelungate, n timp ce faza de climacteric corespunde cu maturitatea de consum. Exist o relaie strns ntre rata respiraiei i viaa de raft: pentru multe legume (ex. castravei, salat) i fructe neclimacterice (ex. cpuni) calitatea prezint valori maxime la recoltare, iar condiiile de pstrare sunt optimizate pentru a se preveni diminuarea calitii; n contrast, multe flori (ex. garoafe, trandafiri), fructe neclimacterice (ex. lmi, portocale) i fructe climacterice ex. (banane, tomate) se recolteaz nainte de a atinge cele mai bune caracteristici calitative, iar condiiile de pstrare sunt optimizate pentru a se permite dezvoltarea calitii optime. n primul caz, sinteza de noi compui organici nu este necesar, deoarece prin aceasta se permite reducerea calitii (enzime care distrug clorofila la salat). n al doilea caz, sinteza pigmenilor i a substanelor volatile (licopen la tomate i esteri amilici la banane), pierderea

174 clorofilei (la banane i lmi), precum i conversia amidonului la glucide simple (la mere i banane permind ndulcirea) sunt procese necesare pentru dezvoltarea caracteristicilor calitii maxime. ! Rata respiraiei reprezint unul dintre indicatorii folosii pentru precizarea condiiilor optime de pstrare a legumelor, fructelor, seminelor i a materialului sditor horticol (temperatur, umiditate, compoziie a atmosferei etc.) aa nct respiraia s se desfoare lent, iar consumul de substane energetice s fie ct mai redus. 5) Substratul respirator Pe de o parte, prezint importan cantitatea substratului respirator, respectiv existena n cantiti suficiente a substanelor de rezerv, n special amidon, fructani, alte glucide. Alturi de acestea pot fi utilizate lipide, proteine, acizi organici, alcooli etc. n cazul unei nutriii deficitare i a acumulrii unei cantiti reduse de substrat, rata respiraiei este redus. Referitor la natura substratului respirator, spre exemplu, compoziia fructului este cea care determin care anume substraturi sunt utilizate pentru respiraie. Aceasta se exprim sub forma ctului respirator (coeficientului respirator) (RQ) i reprezint raportul dintre CO2 produs n respiraie / O2 consumat n acest proces (msurai n moli sau volume). Pentru glucide, valorile lui RQ sunt apropiate de 1, < 1 pentru lipide i > 1 pentru acizi organici (ex. 1,33 pentru acidul malic). Valorile mai mari indic de obicei o respiraie anaerob sau biodegradri datorate senescenei. La fructe n cursul maturrii, cnd are loc conversia amidonului la glucide simple se nregistreaz o cretere a ratei respiraiei. ! Valoarea ctului respirator reprezint un indicator pentru aprecierea ritmului de biodegradare a substanelor de rezerv. 6) Coninutul n ap al celulelor n cazul rdcinilor, a tulpinilor i frunzelor, variaiile mici ale coninutului de ap nu influeneaz evident intensitatea procesului de respiraie. Aciunea acestui factor se manifest pregnant asupra seminelor. Dac coninutul de ap depete cu circa 4-6 % umiditatea critic (7-8 % la seminele oleaginoase i 12-14 % la cele amidonoase) seminele germineaz, iar respiraia se intensific. n cazul pstrrii seminelor, pentru prelungirea perioadei de pstrare, seminele trebuie s aib un coninut redus de ap (12-14% la cereale; 7-9% la semine de oleaginoase; 14-15% n cazul seminelor leguminoaselor), iar respiraia trebuie meninut la valori reduse. Dac umiditatea depete anumite valori, respiraia devine intens, are loc eliberarea de energie, mai ales energie caloric, ceea ce provoac creterea temperaturii n masa seminelor. De asemenea, rezult ap endogen, care face s creasc umiditatea seminelor, iar respiraia se intensific. Ca urmare, se creeaz condiii pentru dezvoltarea a diferite microorganisme i se ajunge la autoncingerea seminelor, ca i la deprecierea fnului stocat cu un coninut mare de ap. Pentru tuberculi, bulbi, rizomi, rdcini tuberizate etc. puse la pstrat, trebuie mai nti s fie lsai s se zvnte i de asemenea trebuie ndeprtate prile rnite la recoltare, deoarece asemenea zone respir foarte intens i este favorizat instalarea microorganismelor. 7) Starea de sntate a plantei Lezarea mecanic a esuturilor determin o intensificare a procesului de respiraie, avnd n vedere cerinele sporite de energie biochimic n cadrul reaciilor de biosintez a noi substane n scopul cicatrizrii leziunilor. n cazul atacului unor ageni patogeni, n general, n cele mai multe situaii intensitatea procesului de respiraie este mai mare, comparativ cu plantele sntoase. Intensificarea respiraiei se poate datora: reaciei celulelor i esuturilor plantei gazd la daunele provocate de agentul patogen; modificrilor ultrastructurale; sporirii activitii unor enzime; intensificarea activitii unei pri a sistemului oxidativ; necuplarea procesului de transport a electronilor cu sinteza ATP; creterii consumului de substane bogate n energie (ATP, NADH) etc.

175 Factorii externi care influeneaz respiraia 1) Temperatura Temperatura reprezint cel mai important factor care afecteaz rata respiraiei i n general rata respiraiei crete exponenial ntre 10-250C, odat cu creterea temperaturii, dar sub 100C, rspunsul tipic este aproximativ liniar. Prezint o importan deosebit n special n perioada postrecolt, deoarece are efecte marcante asupra ratei de desfurare a reaciilor biologice n general. Procesul de respiraie se desfoar n limite largi de temperatur, chiar la temperaturi negative (-70C la gru i -30..-400C la conifere), iar ntre 00C i 400C, rata respiraiei decurge conform legii lui Van't Hoff, respectiv la creterea temperaturii cu 100C se nregistreaz n medie o dublare a intensitii respiraiei. Acest coeficient de temperatur specific pentru un interval de 100C este denumit Q10 i se calculeaz ca raport al ratei respiraiei la o temperatur mai mare i rata respiraiei la o temperatur mai mic cu 100C (Q10 = R 2/R1). La temperaturi mai mari, Q10 are de obicei valori mai mici, dect la temperaturi mai mici (tabelul 8.4.). Tabelul 8.4. Valorile Q10 pentru diferite intervale de temperaturi Temperatura (0C) 0-10 10-20 20-30 30-40 Q10 2,5-4,0 2,0-2,5 1,5-2,0 1,0-1,5

La temperaturi mai mari (peste 350C) are loc o diminuare a ratei respiraiei ca urmare a alterrii enzimelor. n cazul tuberculilor de cartof, pentru pstrare n depozit se recomand asigurarea unei temperaturi cuprinse ntre +4oC - +7oC. Dac temperatura este sub +4oC respiraia este lent, mai lent dect viteza de hidroliz a amidonului i ca urmare se acumuleaz glucide solubile, apare fenomenul de ndulcire a cartofilor. Dac temperatura de pstrare este peste +7oC, procesul de respiraie se intensific i se consum o cantitate mare de substan organic de rezerv. Totodat, pentru pstrarea rdcinoaselor (sfecl, morcov) se recomand o temperatur de +4o - +5oC. 2) Compoziia atmosferei Asigurarea oxigenului reprezint o condiie pentru desfurarea respiraiei, ns variaiile normale ale acestuia n aer au efecte foarte reduse asupra respiraiei frunzelor sau tulpinilor, cci rata difuziunii sale n respectivele organe este suficient, pentru a menine la nivele normale concentraia la nivel mitocondrial. O difuziune mai lent are loc n cazul unor organe precum rdcini de morcov, tuberculi de cartof, alte organe de depozitare, dar i n aceste cazuri s-a determinat o respiraie mitocondrial, chiar dac la valori foarte mici. Difuziunea oxigenului prin spaiile intercelulare permite deplasarea de la frunze la rdcini. Dintre plantele cultivate, doar orezul tolereaz condiiile anoxe, iar o modificare morfologic de adaptare a rdcinilor este formarea esutului aerenchim. Prin urmare, asigurarea condiiilor realizrii respiraiei de la semnat (pentru favorizarea germinrii) i trecerea la starea de via activ a organelor vegetative (bulbi, tuberculi, rizomi etc.), prin pregtirea corespunztoare a stratului arabil constituie o condiie absolut necesar desfurrii procesului. Din punct de vedere practic, un factor important al supravieuirii n condiii de hipoxie, ori anoxe este capacitatea de exprimare a diferite gene, gene care codific sinteza unor enzime care ajut la depirea stresului metabolic. Raportul dintre concentraia dioxidului de carbon i respectiv a oxigenului din aer prezint o importan deosebit, mai ales pentru pstrarea produselor horticole n perioada post-

176 recolt. Reducerea concentraiei de oxigen din depozitele cu atmosfer controlat la 3% a determinat n cazul legumelor i fructelor diminuarea intensitii procesului de respiraie. De altfel, o diminuare a concentraiei de oxigen de la 21%, la 3%, concomitent cu creterea celei de dioxid de carbon de la 0,003%, la 3% constituie un procedeu tehnologic aplicat pentru pstrarea merelor i perelor, procedeu cunoscut sub denumirea de atmosfer controlat. n astfel de condiii, intensitatea respiraiei n cazul merelor se reduce de la un nivel de 100% n condiiile atmosferei cu o compoziie normal, la 37,5-61,4%. Cercetrile efectuate de ctre Miquel i al. (2004) au condus la concluzia c, contrar celor prezentate anterior, rata specific a respiraiei nu este n general redus cnd plantele sunt crescute la concentraii mari de CO2 , deoarece efectele directe ale dioxidului de carbon asupra enzimelor respiraiei sunt irelevante, relativ la ratele specifice ale respiraiei organelor. 3) Umiditatea solului Umiditatea solului influeneaz rata respiraiei n cazul ambelor extreme. Excesul genereaz condiii de anaerobioz la nivelul sistemului radicular i deci determin inhibarea respiraiei, n timp ce insuficiena apei din sol determin nchiderea hidroactiv a stomatelor i totodat limitarea aprovizionrii cu oxigen, precum i inhibarea fotosintezei. ntrebri 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Respiraia: definiie, ecuaie general, importan. Etapele biodegradrii amidonului, ca substan organic de rezerv. Biodegradarea glucozei pe calea glicolizei. Mecanismul respiraiei mitocondriale. Bilanul energetic al biodegradrii glucozei. Importana ciclului respirator alternativ. Principalele ci fermentative la plantele superioare i importana acestora. Influena factorilor interni i externi asupra respiraiei importana practic.

Bibliografie selectiv Bruhn, D. 2002. Plant respiration and climate change effects. Ph.D Thesis. Univ. of Copenhagen. Ho, L.M.H. i al. 2007. Characterization of the regulatory and expression context of an alternative oxidase gene provides insights into cyanide-insensitive respiration during growth and development. Plant Physiology, Vol. 143: 1519- 1533. Ito , K. and Seymour, R.S. 2005. Expression of uncoupling protein and alternative oxidase depend on lipid or carbohydrate substrates in thermogenic plants. Biol. Lett., Vol. 1: 427-430. Laloi, M., Klein, M., Riesmeier, J.W., Muller-Rober, B., Fleury, C., Bouillaud, F. and Ricquier, D. 1997. A plant cold-induced uncoupling protein. Nature, Vol. 389: 135-136. Maxwell, D.P. i al. 1999. The alernative oxidase lowers mitochondrial reactive oxygen production in plant cell. Plant Biology, Vol. 96: 8271- 8276. Melo, A:M.P., Bandeiras, T.M., Teixeira, M. 2004. New insights into type II NAD(P)H: quinone oxidoreductases. Microbiology and Molecular Biology Review, Vol. 68: 603-616. Miquel, A. et al. 2004. Plant respiration and elevated atmospheric CO2 concentration: cellular responses and global significance. Annals of Botany, Vol. : 1-10. Pinheiro, H.A. i al. 2004. Activity of alternative oxidase and plant uncoupling mitochondrial protein in potato tubers stored at low temperature or submitted to artificial aging. Braz. J. Plant Physiol., Vol. 16: 69- 76. Potters, G., Horemans, N., jansen, M.A.K. 2010. The cellular redox state in plant stress biology A charging concept. Plant Physiology and Biochemistry, Vol 48:292-300. Sweetlove, L.J., Beard, K.F.M., Nunes-Nesi, A., Fernie, A.R., Ratcliffe, R.G. 2010. Not just a circle: flux modes in the plant TCA cycle. Trends in Plant Science, 1-9.

177 CAPITOLUL 9 FIZIOLOGIA CRETERII I DEZVOLTRII PLANTELOR Cuvinte cheie: ciclu ontogenetic, cretere, dezvoltare, specii monocarpice, specii policarpice, meristem, merez, auxez, difereniere, polaritate, regenerare, dominan apical, corelaii, tropisme, nastii, nutaii, gene ale nfloritului, fotoperiodism, fitocrom, vernalizare, termoperiodism, senescen, abscisie, moarte, factori interni i externi, fitohormoni Obiective: definirea termenilor: cretere i dezvoltare a plantelor; explicarea paticularitilor specifice creterii plantelor: etapele creterii celulare i creterea organelor plantelor; cunoaterea unor aspecte generale privind regenerarea i polaritatea, fiziologia altoirii, dominana apical i corelaiile la plante; cunoaterea micrilor de orientare a creterii plantelor, a importanei lor biologice i nelegerea mecanismului de realizare a acestora; cunoaterea i nelegerea proceselor care controleaz tranziia de la creterea vegetativ, la dezvoltarea reproductiv; cunoaterea factorilor externi i interni care influeneaz creterea i dezvoltarea plantelor; importana practic a acestor cunotine; REZUMAT Ciclul ontogenetic al plantelor const n parcurgerea fazelor de tineree, de maturitate i senescen, care culmineaz cu moartea. Derularea acestor faze este influenat de aciunea a numeroi factori externi i interni (n special hormonii vegetali). Creterea plantelor este un proces complex, morfologic, fiziologic i biochimic, care const n sporirea ireversibil a numrului de celule, a volumului i masei unei celule, a unui organ sau a ntregii plante. Dezvoltarea include ansamblul modificrilor calitative, coordonate genetic, care conduc la parcurgerea fazelor ciclului ontogenetic i la realizarea capacitii de nmulire a plantelor. Plantele au capacitatea de a forma noi organe post embrionar, datorit unor seturi de celule localizate la nivelul meristemelor. Dup unii specialiti se disting trei etape ale creterii unei celule vegetale: creterea embrionar, creterea prin elongaie i diferenierea celular. Spre deosebire de animale, creterea organelor plantelor nu este uniform. Exist anumite zone specializate, fiind descrise din acest punct de vedere dou tipuri de cretere: creterea primar i creterea secundar. Prin desfurarea proceselor de cretere n mod flexibil, plantele rspund condiiilor mediului ambiant. Pentru plantele fixate n sol, principalele tipuri de micri de cretere sunt: tropismele, nastiile i nutaiile. Pe parcursul ontogenezei plantelor superioare, tranziia de la creterea vegetativ, la dezvoltarea reproductiv, respectiv tranziia de la mugurele vegetativ, la mugure floral reprezint o faz critic de maxim importan. Procesul poate fi divizat n 4 etape, care se desfoar ntr-o secven temporal. Ca rspuns la factorii de mediu i la semnalele endogene, planta comut de la creterea vegetativ, la creterea reproductiv. Procesul este controlat de un grup mare de gene, denumite gene ale timpului de nflorire. Semnalele diferitelor ci ale timpului de nflorire sunt integrate i astfel se permite activarea unui grup mic de gene, denumite gene ale identitii meristemului. Aceste gene determin identitatea floral (ex. LEAFY). Genele identitii meristemului activeaz genele identitii componentelor florale, n regiuni discrete ale florii (ex. modelul ABCE). Genele identitii componentelor florale activeaz genele care determin diferitele tipuri de celule i esuturi, care vor reprezenta cele patru componente florale. Creterea i dezvoltarea plantelor sunt procese influenate de numeroi factori interni i externi.

178 9. 1. Aspecte generale privind creterea i dezvoltarea plantelor Ciclul ontogenetic al plantei cuprinde urmtoarele evenimente secveniale: germinarea/naterea, stadiul juvenil, maturitatea, senescena i moartea. Prin urmare, pe parcursul ciclului lor de via, plantele trec prin cteva perioade de tranziie ale dezvoltrii (Burie i Dean, 2006) (fig.9.1.). Prima dintre acestea este germinarea, respectiv tranziia de la modul embrionar de cretere, la cel postembrionar (vezi Cap. 10). Dup germinare, plantula trece printr-o faz vegetativ juvenil i nu este capabil s nfloreasc. Urmeaz tranziia ctre faza vegetativ adult, cnd poate rspunde semnalelor inductive florale. Odat cu tranziia la nflorire, planta intr n faza reproductiv. Meioza marcheaz tranziia la faza gametofitic, iar fuziunea gameilor n cursul fecundrii ncepe faza embrionar a urmtoarei generaii. Multe dintre aceste procese sunt reglate de factorii de mediu, cu scopul alinierii dezvoltrii la condiiile favorabile de mediu, maximiznd astfel succesul reproducerii. Creterea plantelor este un proces complex, morfologic, fiziologic i biochimic, care const n sporirea ireversibil a numrului de celule, a volumului i masei unei celule, a unui organ sau a ntregii plante. Creterea reprezint una dintre cele mai importante proprieti fiziologice ale organismelor vii, inclusiv a plantelor. Astfel, creterea rdcinilor spre sursele de ap i de substane minerale asigur aprovizionarea plantei cu substane nutritive. Mrirea suprafeei frunzelor asigur captarea corespunztoare a radiaiilor solare. Exemple comune de cretere sunt: germinarea seminei i formarea plantulei, iniierea florii, formarea fructului etc. Creterea plantei cuprins ntre apariia plantulei i iniierea florii este denumit cretere vegetativ. Creterea realizat n perioada dintre iniierea florii i devoltarea fructului este

Fig. 9.1. Tranziii de dezvoltare pe parcursul ciclului de via al plantei

denumit cretere reproductiv. Creterea vegetativ este urmat de creterea reproductiv sau generativ. Dezvoltarea include ansamblul modificrilor calitative, coordonate genetic, care conduc la parcurgerea fazelor ciclului ontogenetic (tineree, maturitate i senescen) i la realizarea capacitii de nmulire a plantelor. Pe parcursul ontogenezei, creterea este nsoit de morfogenez i difereniere. Prin urmare, derularea n timp a proceselor de cretere i difereniere poate fi denumit n general dezvoltare, cunoscut fiind utilizarea noiunilor de cretere i dezvoltare a plantelor. Morfogeneza reprezint realizarea formei i mrimii celulelor i organelor. Diferenierea este procesul prin care celulele sufer modificri structurale i biochimice, care le permit desfurarea unor funcii specifice.

179 Dup numrul fazelor reproductive din cursul vieii unei plante se disting dou categorii de specii: 1) - specii monocarpice (caracterizate printr-o singur faz reproductiv) La rndul lor, acestea pot fi: specii efemere (care parcurg ciclul ontogenetic n circa 5-6 sptmni); specii anuale: care i completeaz ciclul de via (smn - pn la floare) ntr-un singur sezon de cretere (multe plante cultivate); specii bianuale: care cresc vegetativ pe toat perioada sau o parte a perioadei unui sezon de cretere i triesc i n al doilea sezon de cretere, pe parcursul cruia ele nfloresc, formeaz semine i mor; unele specii perene (ex. Bambusa nfloree dup 50 de ani, apoi moare; Agave americana). 2) - specii policarpice (caracterizate prin mai multe faze reproductive) n acest caz, dou faze reproductive sunt separate de perioade vegetative: specii perene: care triesc cteva sau mai multe sezoane de cretere, pe parcursul crora are loc att creterea vegetativ, ct i nflorirea. Speciile policarpice nu-i transform toate meristemele vegetative, n unele reproductive sau determinate. Speciile perene lemnoase (arbuti i pomi) pot folosi doar unii muguri axilari pentru formarea florilor, meninnd mugurii terminali vegetativi (sau mugurii terminali pot forma flori, n timp ce mugurii axilari rmn n stare vegetativ). Astfel de specii devin adesea reproductive numai dup un numr de ani i pn atunci se spune c sunt n stadiu juvenil. Cercetrile din ultimii ani au contribuit la obinerea unor rezultate semnificative n privina nelegerii tranziiilor de dezvoltare a plantelor, n mod particular cele privitoare la tranziia de la stadiul juvenil, la cel adult i tranziia la nflorire. Factorii de mediu, precum: fotoperioada, intensitatea luminii i temperatura mediului ambiant, alturi de fitohormonul acid giberelic influeneaz n mod semnificativ momentul tranziiei de la faza vegetativ juvenil, la faza vegetativ adult. 9.2. Particulariti ale creterii plantelor Diferena major dintre plante i animale este aceea c plantele au capacitatea de a forma noi organe post embrionar. Acest potenial este atribuit unor seturi de celule localizate la nivelul anumitor zone speciale, care conin celule formate recent prin diviziune celular, n cadrul meristemului (Sharma, i Fletcher, 2002). n cursul embriogenezei sunt generate dou populaii de celule meristematice, denumite meristeme primare. Meristemul apical al tulpinii (SAM) genereaz toate prile aeriene ale plantei, n timp ce meristemul apical al rdcinii (RAM) genereaz prile subterane (figurile 9.2.; 9.3.; 9.4.; 9.5.). SAM se formeaz n timpul dezvoltrii embrionului i calea specific n care el este organizat permite plantei s produc organe pe parcursul vieii. La plantele cu flori, SAM const din trei domenii radiale distincte, n dependen cu poziia relativ a celulelor (fig. 9.3.). Zona central de celule din vrful SAM corespunde unei populaii mici de celule pluripotente ale tulpinii, celule care se divid ncet, pentru meninerea unui rezervor de celule ale tulpinii (Steeves i Sussex, 1989). Celulele din zona central sunt nconjurate de o regiune cu celule aflate ntr-o frecvent diviziune, numit zona periferic. Celulele din zona periferic sunt ncorporate n organe laterale, pe flancurile meristemelor. n straturile profunde ale meristemului, sub zona central sunt coloane largi de celule vacuolizate din zona rib, care asigur celule pentru formarea mduvei, ce alctuiete esuturile interne ale meristemului. Celulele SAM pot fi de asemenea aranjate n straturi distincte, numite tunica i corpus, pe baza modului lor de diviziune (Kaplan i Cooke, 1997). Meristemul apical al rdcinii este situat sub scufie, deci subterminal i se formeaz din meristemul embrionar, compus din celule iniiale, trietajate i derivatele lor.

180 O alt categorie o reprezint meristemele secundare (cambiu i felogen), care sunt neclare pn la germinare i zonele meristematice ale nodurilor la monocotiledonate i ale frunzelor la plantele ierboase.

Fig. 9.2. Meristemele primare i tipuri de cretere

Celulele meristematice sunt mici, izodiametrice, au pereii celulari subiri i nucleul mare. Sunt bogate n citoplasm, nu au vacuol central i n loc de cloroplaste conin plastide foarte mici necolorate (proplastide). Printre celulele meristematice nu sunt spaii intercelulare. Meristemele nu trec prin faza de senescen i sunt considerate ca potenial fr de moarte.

Fig. 9.3. Complexitatea meristemului apical al tulpinii (SAM)

Fig. 9.4. Meristemul apical al rdcinii (RAM)

Unele organe ale plantelor au o cretere determinat, respectiv cresc pn la o anumit dimensiune, apoi creterea nceteaz (frunze, flori, fructe), urmnd eventual senescena i moartea. Alte structuri, precum tulpina vegetativ i rdcina au o cretere nedeterminat. Meristemele se rennoiesc permanent. Dac ns un meristem vegetativ nedeterminat devine reproductiv, adic ncepe s formeze floare, el devine determinat.

181

Fig.9.5. Localizarea meristemelor apicale

9.2.1. Etapele creterii celulare Dup unii specialiti se disting n principiu trei etape ale creterii unei celule vegetale: I. creterea embrionar (diviziunea celular sau mereza); II. creterea prin elongaie (extensia, expansiunea celular sau auxeza); III. diferenierea celular. Aceste etape nu sunt n mod strict separate n plant. n unele esuturi ele decurg n paralel sau chiar se suprapun. Acelai lucru se poate petrece la celulele individuale. Celula n diviziune poate s-i nceap creterea, n timp ce celula n cretere poate s diferenieze. 9.2.1.1. Creterea embrionar Creterea embrionar sau mereza este localizat n esuturile meristematice: apicale (ale tulpinii i apexurile rdcinii), intercalare (nodurile tulpinilor la ierburi) i secundare (cambiu i felogen). Ciclul de via al unei celule este determinat nti de toate de ciclul celular (fig. 9.6.), respectiv ciclul diviziunilor mitotice ale nucleului, care const n dou faze principale : interfaza (necesar pentru dublarea numrului cromozomilor i sporirea deci a coninutului de ADN nuclear, sinteza de ARN i a proteinelor; chiar dublarea volumului celulei); mitoza (diviziunea nucleului n doi nuclei fii). Interfaza se divide n: faza G1 (postmitotic sau presintetic), cnd ntreaga celul crete (att nucleul ct i citoplasma), faza S (sintetic), cnd coninutul de ADN este dublat i faza G2 (premitotic, postsintetic). Mitoza la rndul ei presupune parcurgerea a 4 faze: profaza, metafaza, anafaza i telofaza. Obiectivul acesteia este diviziunea cromatinei n dou ansambluri de cromozomi identici, ct i includerea fiecrei poriuni ntr-un nucleu. S-a determinat c fazele G ar fi periodele de repaus ale celulei. Ele asigur punctele de control, care determin intrarea n urmtoarea faz i dac da, cnd anume.

182 Anumite elemente ale controlului diviziunii celulei sunt comune pentru procariote i eucariote. Gradul conservrii pe parcursul evoluiei este surprinztor la eucariote. Parcurgerea fazelor ciclului celular la specii foarte diferite (precum cele de la drojdii i oameni) este coordonat de o clas comun de protein kinaze, a cror implicare n reglarea ciclului celular a fost studiat de Mironov i al.(1999). Rolul major n acest Fig. 9.6. Diagrama ciclului celular control revine protein kinazelor dependente de ciclin (CDKs). Acestea pot fosforila proteinele responsabile pentru forarea celulei s intre n urmtoarea faz a ciclului. Sunt descrise dou tipuri de cicline: cicline mitotice, care controleaz intrarea n faza mitotic a ciclului celular i cicline G1, care controleaz ieirea din faza G1 i intrarea n faza S. De asemenea, Minorsky (2002) a precizat faptul c trigonelina (N-metil nicotinamida) s-a dovedit eficace n inducerea stoprii fazei G2 a ciclului celular, n apexurile rdcinilor, la multe specii de plante. Dei cu mult timp nainte, trigonelina a fost considerat ca un posibil hormon, ideea a fost foarte puin acceptat. S-a demonstrat apoi c efectul unor astfel de substane nu se limiteaz doar la reglarea ciclului celular. Derularea i durata fazelor ciclului celular depinde de temperatur, precum i de asigurarea cu ap, O2, glucide etc. O importan deosebit prezint hormonii vegetali. Sunt eseniale citochininele, care stimuleaz diviziunea celular. Se pare de asemenea c citochininele regleaz translaia proteinelor necesare pentru ciclul celular, afectnd mai ales faza G2. Totodat, giberelinele stimuleaz tranziia de la faza G1, la faza sintetic. Planul de diviziune este variat. Dac noul perete celular care se formeaz ntre cele dou celule fiice este situat ntr-un plan aproximativ paralel cu suprafaa cea mai apropiat a plantei, diviziunea este numit periclinal (paralel cu perimetrul). Dac noul perete celular se formeaz perpendicular pe suprafaa apropiat, diviziunea se numete anticlinal. Spre exemplu: stadiile iniiale ale formrii frunzelor la monocotiledonate i dicotiledonate sunt similare, cu toate c exist variaii n ceea ce privete morfologia acestora. nceputul formrii frunzei Fig. 9.7. Stadiul iniial al formrii frunzei la monocotiledonate i dicotiledonate const n diviziunea periclinal a celulelor din straturile de celule situate sub epiderm. Dup primele diviziuni periclinale, au loc i diviziuni anticlinale. Se formeaz o mic umfltur, care apoi va evolua ntr-o frunz (fig. 9.7.).

183 n cazul cambiului au loc dou tipuri de diviziuni celulare: aditiv i multiplicativ. Diviziunea aditiv implic diviziunea periclinal a celulei cambiale primare iniiale fusiforme, pentru a produce celulele mam pentru xilem i floem. Acestea se vor divide, pentru a produce celulele xilemului i floemului. Diviziunea multiplicativ const n diviziunea anticlinal a celulelor fusiforme iniial i asigur expansiunea circumferenial a cambiului. 9.2.1.2. Creterea prin elongaie Dup finalizarea ciclului diviziunii celulare, celulele pot s-i continue creterea, fr o ulterioar diviziune. n aceast perioad are loc creterea evident a volumului celulei i intensificarea proceselor de sintez a proteinelor structurale, a enzimelor, precum i a componenilor polizaharidici ai pereilor celulari. Se realizeaz de asemenea diviziunea plastidelor i mitocondriilor, precum i unirea vacuolelor mici, ntr-o vacuol mare central. O caracteristic aparte este creterea n lungime a celulelor (cum este cazul celulelor unor organe precum tulpina i rdcina), deci predominant ntr-o singur direcie, drept pentru care etapa se denumete elongaie. Creterea dimensiunilor celulei n 2 sau 3 direcii se denumte expansiune. n privina mecanismului elongaiei au fost emise diferite ipoteze. n general ns, se accept c elongaia se datoreaz pe de o parte absorbiei intense a apei i generrii presiunii de turgescen (creterea pasiv), iar pe de alt parte creterii peretelui celular (creterea activ). Un rol deosebit revine hormonului auxin i ca urmare, aceast etap mai poart denumirea de auxez (fig. 9.8.; fig.9.9.).

Fig. 9.8. Reprezentare schematic a rolului auxinei n etapa extensiei celulare

Fig. 9.9. Rolul auxinei la nivelul peretelui celular

Auxina stimuleaz H+-ATP-azele din plasmalem, care pompeaz protonii din citoplasm nspre peretele celular i se determin acidifierea apoplastului. n astfel de condiii, este stimulat activitatea enzimelor hidrolitice, care modific peretele celular. Cosgrove (1997) a izolat dou proteine din hipocotilul plantelor de Cucumis sativum, proteine care poteneaz creterea acid i care au fost numite expansine. Pe lng aceasta, deschiderea canalelor de intrare a K+ permite asigurarea unui echilibru de sarcin transmembranal. De asemenea, este determinat un influx al apei i se genereaz turgescena. Presiunea de turgescen creat determin creterea suprafeei pereilor celulari. Totodat, prin activarea enzimelor hidrolitice sunt rupte legturile dintre microfibrilele de celuloz, producndu-se o relaxare a peretelui celular. Pentru stabilirea legturilor dintre microfibrile i deci pentru refacerea structurii peretelui celular la noile dimensiuni intervin sintetazele. Acestea catalizeaz reaciile biochimice de integrare a noi substane i refacerea legturilor n zonele n care s-a produs extensia.

184 Polaritatea i extensia celular la plante Polaritatea este o proprietate a unei celule, a unui organ sau a plantei ca ntreg, de a prezenta doi poli, unul bazal i un altul apical. Plantele sunt structuri axiale, dar n acelai timp structuri polare. La nivel celular, stabilirea i meninerea polaritii este o condiie a controlului diviziunii i extensiei celulei (fig. 9.10.). Faptul c plantele sunt structuri axiale i totodat polare reprezint caracteristici cheie ale dezvoltrii plantelor. Polaritatea pare a fi un fenomen stabil. n ceea ce privete " extensia " celulelor plantelor, sunt descrise dou mecanisme: Fig. 9.10. Stabilirea i meninerea polaritii la pentru periori radiculari i tuburi polinice este zigotul algei brune Fucus aa numita " tip growth "; La celulele cu " tip growth ", sinteza peretelui celular i extensia celulei sunt n esen sinonime. Creterea are loc prin depunerea de nou material constituient al peretelui celular, ctre "vrf". spre deosebire de acestea, creterea celulelor la organismele multicelulare, n organe multicelulare implic extensia uniform a unei mari suprafee a peretelui celular primar, ceea ce se denumete "cretere difuz" (fig. 9.11.). Deoarece rigiditatea pereilor celulari limiteaz extensia protoplastului, mrimea i forma celulelor individuale este Fig. 9.11. Tipuri de cretere a celulelor determinat de proprietatea peretelui celular care le nconjoar. La celulele cu cretere difuz, extensia se crede a avea loc printr-o combinare a absorbiei apei i a a slbirii peretelui celular i respectiv a sintezei de perete celular, procese aflate sub control celular. De fapt, creterea difuz se afl frecvent i sub control hormonal. Ca urmare a absorbiei apei i a creterii presiunii de turgescen ce se direcioneaz ctre exterior n toate direciile, peretele celular tinde de asemenea s se extind n mod egal n toate direciile, datorit dispunerii randomizate a componentelor sale structurale. La unele celule ns, la care pereii celulari au o aranjare anizotrop a microfibrilelor de celuloz (ex. la pereii celulari ai celulelor de form cilindric, ca la tulpin i rdcin, cu dispunere transversal a microfibrilelor, pe axa lor lung), extensia se realizeaz n unghiuri drepte, pe direcia predominant a microfibrilelor. Prin urmare, unghiul sub care sunt depozitate microfibrilele de celuloz (sub controlul direct al microtubulilor) reprezint o component de baz a creterii plantei i a morfogenezei. 9.2.1.3. Diferenierea celular Diferenierea celulelor este procesul prin care o celul fiic primete proprieti metabolice, structurale i funcionale distincte de cele ale celulei mam. Dup unii specialiti este considerat ca o etap a dezvoltrii, fiind determinat de modificri calitative. Diferenierea celulelor este frecvent reversibil, mai ales la esuturi detaate i meninute n cultur. n figura 9.12. se red modul de difereniere a celulelor de gard ale complexului stomatic.

185 Celulele difereniaz prin reglarea expresiei genelor i nu prin alterarea genomului propriu. Fac excepie celulele care-i pierd nucleul, precum vasele liberiene la maturitate i celulele moarte ale xilemului. Identitatea celulelor la nivelul epidermei se coreleaz cu: coninutul de ADN nuclear; cu hormonii vegetali; interaciunea dintre mezofil i epiderm; caracteristicile cuticulei; perceperea i distribuirea semnalelor ce regleaz densitatea, distribuia i funcionarea stomatelor. Mai multe esuturi ale plantei au Fig. 9.12. Diferenierea celulelor de gard ale complexului potenialul de a influena stomatic dispunerea final i numrul stomatelor pe suprafaa frunzei (Bergmann, 2004). Studiile efectuate la planta model A. thaliana au condus la identificarea factorilor cheie de transcripie i a cilor semnal care controleaz procesul de difereniere (Peterson i al., 2010). Prin urmare, celulele difereniate posed n general informaia genetic necesar pentru dezvoltarea unei plante ntregi. Aceast proprietate este denumit totipoten. Asemenea celule dedifereniaz i pot reiniia diviziunea celular. n condiii corespunztoare de hran i hormoni, celulele pot chiar s regenereaze ntreaga plant. Fig. 9. 13. Regenerarea Un exemplu fascinant de totipoten este cel al plantelor mici formate din frunzele de Kalanchoe (fig. 9.13.) (Costa i Shaw, 2007). Cnd frunzele sunt nc ataate de plant, grupuri mici de celule localizate la nivelul sinusurilor marginilor frunzei prolifereaz i dau natere unor plantule mici, cu tulpini i rdcini. Plantulele se detaeaz spontan, cad pe sol, unde continu s creasc i s se extind. 9.2.2. Particulariti ale creterii organelor plantelor zonele Creterea plantelor se realizeaz graie unor zone specializate, respectiv meristematice, n care celulele se divid rapid. Sunt descrise din acest punct de vedere dou tipuri de cretere: creterea primar - care se realizeaz la nivelul zonelor apicale ale tulpinii i rdcinii, precum i la nivelul frunzelor i mugurilor; creterea secundar - respectiv creterea n diametru a tulpinilor i rdcinilor. Ambele tipuri de cretere sunt asociate cu zonele meristematice, n care celulele se divid rapid. A) Creterea rdcinii Primul organ care apare de obicei n timpul germinrii seminelor este radicula. La unele specii, precum Pinus lambertiana, diviziunea celular are loc n radicul, nainte ca germinarea s fie complet. La alte specii, precum porumb, salat, mitoza este redus nainte ca radicula s penetreze tegumentul, iar elongaia se datoreaz creterii celulelor care s-au format n perioada dezvoltrii embrionului, la nivelul plantei mam. Rdcina principal se formeaz din radicula embrionului, iar rdcinile secundare din periciclu. Celulele situate apical rezult prin aciunea unui meristem apical. Pe msur ce ajung la maturitate, ele difereniaz i devin apte s perceap stimulul reprezentat de fora de gravitaie i s

186 secrete mucopolizaharide. Acestea le faciliteaz penetrarea n sol i totodat protejeaz meristemul apical de stresul mecanic. n urma procesului de diviziune a celulelor meristemului apical iau natere progenitorii tuturor celulelor rdcinii. La nivelul zonei de elongaie situat subapical (fig.9.14.) are loc extensia rapid a celulelor, dei ele pot continua s se divid i pe parcursul extensiei. Dup ce diviziunea i extensia s-au ncheiat, celulele parcurg etapa de maturare, rezultnd diferite tipuri de celule. Spre exemplu, cilindrul central al esutului vascular este nconjurat de endoderm, care la rndul su este nconjurat de straturi de celule corticale i apoi rizodermice. Tot n aceast zon se formeaz periorii absorbani, care constituie un Fig. 9. 14. Elongaia rdcinii indiciu c extensia s-a finalizat. Rdcinile laterale i la mazre ramificaiile se formeaz prin diviziunea celular n stratul de periciclu, de la periferia cilindrului vascular. Ele cresc spre exterior, n unghiuri drepte fa de esutul vascular, preseaz celulele cortexului i penetreaz prin rizoderm. Pentru plantele lemnoase, pe parcursul unui sezon anual de vegetaie se nregistreaz dou perioade de cretere maxim: una n aprilie-mai i o a doua n septembrie-octombrie. De altfel, primvara, creterea rdcinilor precede procesul de cretere a lstarilor. Toamna, creterea rdcinilor este mai lent i se continu pn spre iarn, mai ales n cazul rdcinilor foarte profunde. n perioada de var, ritmul de cretere este lent, corelat cu o umiditate mai redus n sol. B)Creterea tulpinii primare Meristemul apical al tulpinii (SAM) se formeaz la nivelul embrionului i reprezint locul de origine a noi frunze, ramuri i componente florale. Structura de baz a acestuia este asemntoare la numeroase plante superioare (angiosperme i gimnosperme). Tulpina se formeaz din tulpinia embrionului, iar ramurile iau natere din mugurii laterali. Dac mugurii principali i cei dorminzi sunt distrui, se pot forma ramuri noi, prin diviziunea celulelor cambiului, formndu-se un con de cretere. n raport cu partea axei embrionare care prezint cea mai intens alungire, se distinge creterea hipogee i creterea epigee (vezi Cap.10). Creterea tulpinii se realizeaz n lungime i n grosime. Creterea n lungime Spre deosebire de rdcin, la care meristemul este situat subapical, la majoritatea plantelor superioare, creterea n lungime a tulpinii se realizeaz prin intermediul esuturilor meristematice dispuse mai departe de vrf, chiar la civa cm (gimnosperme i dicotiledonate), deci este o cretere terminal. Sunt ns i plante la care intervine i o cretere intercalar, datorit prezenei esuturilor meristematice la baza fiecrui internod, cum este cazul la Gramineae i Equisetaceae, sau la baza tulpinii (ca la Amarylis). Fiecare internod prezint ctre partea superioar celule mai n vrst i celule mai tinere n apropierea bazei, ele fiind derivate din meristemul intercalar. n ceea ce privete mugurii plantelor lemnoase, formarea i diferenierea au loc ctre sfritul verii i toamna. Urmeaz o perioad de dorman, pn primvara. Odat cu existena unor condiii optime de cretere are loc trecerea lor la viaa activ i se formeaz lstari, care cresc n special graie elongaiei celulelor. Desigur, desmuguritul la plantele pomicole spre exemplu are loc difereniat, n funcie de condiiile de mediu i mai ales n funcie de particularitile specifice speciei. Creterea n grosime Tulpina crete n grosime ca urmare a activitii esuturilor meristematice secundare (cambiul i felogenul). La speciile lemnoase, datorit influenei factorilor de mediu, are loc o cretere ritmic, att din punct de vedere diurn, ct i din punct de vedere sezonier. n general, creterea n grosime ncepe la circa 3-18 zile dup deschiderea mugurilor, formndu-se primele

187 celule ale inelului de ngroare anual. Procesul dureaz 2-4 luni, n funcie de specie i de condiiile de mediu. La pomi, creterea n grosime a tulpinii este mai redus n faza de tineree, urmnd s devin mai intens i s ating un maximum la maturitate, dup care scade treptat, odat cu instalarea senescenei. C) Creterea frunzelor Semnul primar al dezvoltrii frunzei, att la gimnosperme ct i la angiosperme const de regul n diviziuni ale unuia dintre cele trei straturi exterioare de celule, din apropierea apexului tulpinii. Dezvoltarea frunzelor implic numeroase interaciuni genetice complexe, semnalizarea dintre diferite celule vecine sau dintre esuturi mai ndeprtate, ceea ce modific evoluia ulterioar a celulelor (Kidner, 2010). Frunzele se pot forma i n absena meristemului apical, n cazul culturilor de celule. Prin urmare, frunzele se pot autoorganiza spontan ntr-un meristem, iar auxinele i citochininele n anumite proporii pot conduce la iniierea frunzelor. Diviziunea periclinal, urmat de creterea celulelor fiice determin formarea unei protuberane, respectiv primordiul frunzei. Diviziunea anticlinal determin sporirea suprafeei primordiului, ambele tipuri prezentnd importan ulterior. Primordiul frunzei nu se formeaz randomizat n jurul apexului tulpinii. Fiecare specie se caracterizeaz printr-un anumit mod de aranjare denumit filotaxie, rezultnd astfel frunze opuse, alterne etc. (Chapms i Perrz, 1987). Filotaxia se exprim sub forma unei fracii ordinare (3/8) n care numrtorul indic de cte ori trebuie nconjurat tulpina, pentru a junge la prima frunz de pe acelai rnd, iar numitorul semnific numrul de frunze care se regsesc pe acest parcurs. De asemenea, perioada de timp dintre iniierea a dou primordii foliare este caracteristic pentru o anumit specie i poart denumirea de plastocron. Spre exemplu, la specia Malus domestica, soiul Cox Orange Pippin s-a determinat c n medie plastocronul este de 7 zile (Fulford, 1966). Creterea n suprafa a limbului foliar se realizeaz la plantele monocotiledonate prin intermediul meristemului bazal. Aceasta explic i posibilitatea continurii creterii la Gramineae, dup cosire, respectiv permite otvirea. La plantele dicotiledonate intervin meristemele situate la baza limbului, n vrf i marginal. Predomin iniial creterea apical, apoi creterea bazal, lateral sau pe toat suprafaa limbului. Adesea, creterea frunzelor se realizeaz de manier bidirecional (creterea n grosime fiind redus, comparativ cu creterea n suprafa). De altfel, forma limbului se modific pe parcursul creterii sale, ca urmare a vitezei diferite de cretere n diferitele sale poriuni, a orientrii frunzei i a intensitii relative n funcie de timp. Spre exemplu, la cluna (Tropaeolum sp.), limbul foarte tnr este de form dentat, urmnd ca printr-o cretere uniform sau izotrop (egal n toate direciile), precum la Tropaeolum peltoforum, forma decupat s se menin i n stadiu adult (fig. 9.15.). La speciile care au frunzele perforate (ex. Monstera deliciosa), creterea se realizeaz n anumite zone, ceea ce face s apar acele orificii cu suprafee diferite. Creterea n grosime se realizeaz prin activitatea esutului meristematic dispus sub epiderma superioar. De altfel, pe lng meristemul marginal, frunzele au i un meristem submarginal, abaxial, adaxial i intercalar. Graie acestor meristeme se formeaz variatele tipuri de frunze sau/i se determin gofrarea lor. Analiznd dinamica creterii funzelor se obine o curb sigmoid, iar dimensiunile acestora Fig. 9.15. Creterea difereniat a depind de poziia pe plant. Frunzele apicale i bazale frunzelor au cele mai mici dimensiuni, n timp ce frunzele cu poziie intermediar au dimensiunile cele mai mari.

188 Indicele suprafeei foliare (LAI), ca raport ntre suprafaa total a funzelor i suprafaa proieciei lor pe sol reprezint unul dintre principalii indicatori fiziologici sintetici privind numrul de frunze, suprafaa acestora i poziia lor pe plant. Spre exemplu, pentru o plant ipotetic ale crei frunze sunt dispuse orizontal, LAI are valoarea egal cu 1. Stomatele, canalele i pungile secretoare se formeaz din celule izolate, definitive ale epidermei i ale parenchimului foliar. Creterea peiolului se realizeaz graie meristemelor dispuse pe toat ntinderea sa, dar activitatea acestuia este mai intens n zona din apropierea limbului foliar. D) Creterea florilor Mugurii vegetativi competeni s rspund factorilor care determin inducia floral, comut de la creterea vegetativ, la creterea reproductiv, respectiv are loc formarea primordiilor organelor florale i se formeaz mugurii florali. Astfel, la Vitis, mugurii florali se formeaz n luna mai. Pentru arborii fructiferi, mugurii florali se formeaz n lunile iunie i iulie. Pentru cele mai multe specii, organele florale sunt deja difereniate la nceputul lunii septembrie, apoi se intr n perioada de dorman. La cele mai multe angiosperme se formeaz flori bisexuate (perfecte), n timp ce la unele (spanac) florile sunt dioice (imperfecte), coninnd staminele (brbtesc) i pistilul (femeiesc) pe plante individuale diferite. Speciile monoice (porumb, castravete) posed flori cu stamine i flori cu pistil situate n diferite poziii de-a lungul aceleiai tulpini. Raportul dintre acestea determin producia (ex. la castravei). Anteza (deschiderea florii) permite polenizarea i n timp ce unele flori rmn deschise de la antez, pn la abscisie, altele se nchid i se deschid la anumite momente ale zilei, pentru cteva zile (lalea). Dup antez i polenizare petalele se vetejesc, mor i cad rapid. La Portulaca grandifolia, Ipomea tricolor deschiderea florii are loc dimineaa i vetejirea corolei se realizeaz dup amiaza trziu. La alte specii (anumii trandafiri i dahlia) se pierd petale nc turgescente. E) Creterea seminelor i fructelor Smna deriv din zigot, sac embrionar i ovul, iar ovarul d natere fructului (pericarp). Fructele formate numai cu participarea ovarului sunt reprezentate de pstaie la Phaseolus, silicv la Brassica, capsul la Papaver, drup la Prunus, bac la Lycopersicon, cariops la graminee. Fructele se pot forma i prin diviziunea i extensia celulelor altor componente florale. Receptaculul mpreun cu ovarul fromeaz fructul poam la Malus, Pirus, Cydonia etc.; bac la Ribes i achen la Helianthus. Fructele compuse, precum soroza la Morus i glomerula la Beta vulgaris se formeaz cu participarea nveliului floral. Au loc o serie de modificri anatomice i chimice. Zaharoza, glucoza i fructoza se acumuleaz n ovule, pn cnd nucleul endospermului devine nconjurat de pereii celulari, dup care concentraia acestor glucide scade, pe msura folosirii lor pentru formarea peretelui celular i sinteza amidonului sau lipidelor. Glucidele amintite provin n mare parte din zaharoza transportat prin floem, n seminele i fructele tinere. n semine i fructe imature, azotul este prezent sub form de proteine, aminoacizi i amide (glutamin i asparagin). Pe msur ce are loc depozitarea proteinelor n vezicule proteice scade concentraia aminoacizilor i amidelor. O importan deosebit pentru longevitatea seminei o reprezint activitatea enzimelor i a acizilor nucleici, n cursul dezvoltrii seminei. Pentru ca o smn matur s germineze dup o perioad lung de timp, trebuie s posede enzimele necesare germinrii i stabilizrii plantulei, sau s posede informaia genetic pentru sinteza acestora. n ceea ce privete compoziia chimic a prilor edibile ale fructelor i transformarea hidrailor de carbon pe parcursul maturrii, sunt numeroase date n literatura de specialitate. Intervin de asemenea modificri ale cloroplastelor (transformarea n cromoplaste bogate n carotenoizi), acumularea pigmenilor antocianici, a componentelor aromei (esteri, aldehide, cetone, alcooli).

189 Prezena seminelor are o importan deosebit pentru creterea fructelor, cum ar fi de exemplu creterea normal la cpun. Extensia celular este favorizat de hormonii vegetali, precum auxinele (Percy i al., 1998), substane care sunt sintetizate n semine i care apoi difuzeaz n pulpa fructului. De altfel, cercetrile efectuate n domeniu au demonstrat corelaia pozitiv care exist ntre numrul de semine dintr-un fruct i dimensiunea acestuia. Producerea normal de fructe fr semine se denumete dezvoltarea fructelor partenocarpic i este specific fructelor care produc multe ovule imature (ex. banane, ananas etc.). Partenocarpia poate aprea din dezvoltarea ovarului fr polenizare (ex.banane), din creterea fructelor stimulate sau polenizare, dar fr fecundare (anumite orhidee) sau din fertilizare, urmat de avortarea embrionilor (struguri, piersici, ciree). Pentru nelegerea reproducerii sexuate, conceptul central este alternana de generaii, n cadrul creia o generaie multicelular diploid alterneaz cu o generaie multicelular haploid (fig.9.16.). Pentru angiosperme, generaia sporofitic diploid ocup ponderea i produce flori. Florile produc spori, care dezvolt gametofii: gametofiii femeli (megagametofiii) denumii saci embrionari se dezvolt n megasporangii, iar gametofiii brbteti (microgametofiii) denumii grunciori de polen se dezvolt n microsporangii. La nivelul ovulului, o celul (megasporocit) se divide meiotic, pentru a produce patru megaspori haploizi. Megasporul supravieuitor (trei degenereaz) urmeaz trei diviziuni mitotice i se Fig. 9.16. Dezvoltarea gametofiilor i fuziunea gameilor produc opt nuclei haploizi, n aceeai celul (trei nuclei la un capt, trei la cellat capt i doi situai la mijloc). Ulterior formrii peretelui celular, evoluia megasporofitului de form eliptic va fi urmtoarea: la un capt vor fi trei celule, celula ou (gametul femeiesc) i dou celule numite sinergide (care particip n mod indirect la procesul de fertilizare, prin atragerea i acceptarea tubului polinic). La cellalt capt al megagametofitului sunt trei celule antipode, care eventual degenereaz. n zona central sunt doi nuclei polari. Grunciorul de polen const din mai puine celule i nuclei, comparativ cu sacul embrionar. Formarea polenului ncepe de la o celul microsporocit la nivelul anterelor, care se divide meiotic. Fiecare microspor haploid rezultat i formeaz un perete celular, urmeaz o diviziune mitotic naintea deschiderii anterelor i se elibereaz cele dou celule ale grunciorului de polen, respectiv celula tub i celula generativ. Evoluia ulterioar a grunciorului de polen este ntrziat, pn cnd polenul ajunge pe stigmat. Transferul polenului de la antere pe stigmat reprezint procesul de polenizare. Fructele (n special cele crnoase) i n general organele de rezerv se caracterizeaz printr-o cretere care se realizeaz cu o intensitate comparabil, tridimensional n spaiu. Diviziunile i

190 extensiile celulelor nu sunt localizate n general de o manier strict, ntr-o anumit zon a unui organ, ci sunt dispersate n toate prile sale. Are loc o cretere difuz. Se disting anumite etape de cretere: iniial o cretere prin diviziune, apoi extensia (creterea n volum) i diferenierea. Procesul de diviziune are durate diferite (la mere 3-4 sptmni, la pr 68 sptmni). n mod sumar, creterea fructelor poate fi reprezentat prin dou curbe de cretere, diferite: curba sigmoid, cum este cazul la mere, pere, tomate, castravei, cpuni; curba dublu sigmoid, cum este cazul la struguri, ciree, piersici etc. (fig.9.17.). n cel de-al doilea caz sunt dou perioade de cretere rapid, separate de o perioad intermediar, cu creteri foarte reduse sau absente. n primul stadiu al creterii rapide, ovarul i coninutul su cresc rapid, exceptnd embrionul i endospermul. n stadiul 2, care este un platou, are loc creterea embrionului i endospermului, lignificarea endocarpului i o mic cretere a peretelui ovarului. n stadiul 3, are loc creterea rapid a mezocarpului, ceea ce conduce la sporirea rapid a mrimii fructului, urmat de maturare. Fig. 9.17. Curba creterii fructelor n horticultur, utilizarea substanelor (dup Jakson, 1975) regulatoare de cretere a devenit de o deosebit importan, ca urmare a capacitii lor de a influena mrimea, culoarea i forma fructelor. S-a precizat c endospermul i embrionul din semine produc auxin, care se deplaseaz n afar i stimuleaz creterea endospermului. Mrimea i forma fructelor este strns legat de numrul seminelor i de distribuia lor n fruct. n acest context, cele mai multe cercetri, inclusiv cercetri la nivel molecular s-au efectuat la cpun (Reddz i Poovaiah, 1990). Regenerarea Fiziologia altoirii Dominana apical - Corelaiile Regenerarea i polaritatea regenerrii Prin regenerare se nelege capacitatea unui organism de a deveni complet, din nou, dup ce pri din el au fost pierdute. Astzi, termenul de regenerare se folosete i atunci cnd un organism ca ntreg se dezvolt din pri izolate ale unui organism (ex. din butai) (fig.9.18.), inclusiv din celule somatice individuale. Se constat c inversnd poziia butailor (direcia curentului de auxin rmnnd constant), locul de formare a rdcinilor i organelor aeriene nu se modific. Dezvoltarea armonioas a unei plante implic pe lng creterea i diferenierea esuturilor existente i plasarea la locul Fig. 9.18. Polaritatea potrivit, coordonat, a noilor organe (ramuri i rdcini regenerrii la butai de tulpin secundare). n anumite condiii particulare, aceast organogenez normal poate fi completat prin organogenez suplimentar, provocnd apariia organelor de novo. Organogeneza particular st la baza multiplicrii vegetative. Ca urmare, cunoaterea condiiilor necesare acestei organogeneze a permis dezvoltarea a numeroase tehnici horticole, devenite astzi clasice. n paralel, progresele din domeniul culturilor de esuturi, regenerarea de plante ntregi pornind de la fragmente de organe sau celule izolate este foarte mult dezvoltat in vitro.

191 Fiziologia altoirii Dup Molisch, termenul transplantare descrie orice unire artificial i ulterioara cretere mpreun a unei pri dintr-o plant, cu o alt plant. Cea mai important tehnic a transplantrii este altoirea (fig. 9.19.), respectiv acea tehnic n care pri dintr-o plant cu muguri sunt separate i transferate pe o alt plant, devenind un tot. Tehnica altoirii are o importan deosebit n practic, pentru ameliorarea plantelor cultivate, iar din punct de vedere fiziologic prezint importan teoretic. Procesele care au loc n urma altoirii altoiului pe un portaltoi sunt urmtoarele: ambii parteneri formeaz un calus lemnos, respectiv la nceput un esut amorf, alctuit din celule parenchimatice conectate lax. Acest calus Fig. 9.19. se dezvolt din cambiul partenerilor. Prin urmare, numai la plantele care Altoirea posed cambiu, altoirea se realizeaz cu succes. Ambele esuturi provenite cresc treptat mpreun i formeaz esuturi vasculare ntre altoi i portaltoi. Deci, ambii parteneri contribuie la reuita existenei lor. Cu toate c se pot forma i plasmodesme ntre parteneri, n general, numai substanele originare din xilem i floem (ap, ioni minerali, zaharoz, anumite substane secundare i hormoni) sunt transportate de la un partener, la altul. Ambii parteneri se dezvolt dup propria lor informaie genetic i aceasta constituie de altfel baza tehnicii altoirii n horticultur. Practic, trebuie acordat mare atenie faptului c n general altoirea reuete numai ntre specii foarte apropiate i de regul numai n interiorul familiei. Explicaia poate fi aceea c, partenerii trebuie s se asemene n privina sistemelor lor hormonale, ct i n privina metabolismului secundar. Se pot altoi de asemenea mai muli altoi, diferii genetic, pe acelai portaltoi. Dac compatibilitatea se menine, ei vor coopera de regul, dar fiecare rmne strict diferit ca sistem de dezvoltare. Dominana apical Dominana apical reprezint o corelaie de cretere a plantelor, respectiv dominana mugurelui apical al tulpinii, asupra mugurilor laterali sau a apexului rdcinii asupra rdcinilor laterale. Corelaiile de cretere sunt interaciuni fiziologice dintre organe i esuturi, care contribuie la asigurarea unei integriti structurale armonioase a plantelor. Cele mai multe studii au fost efectuate asupra dominanei apicale a mugurelui terminal al tulpinii, fiind mai accesibil experimentelor, dar i pentru c prezint un interes deosebit pentru cultivatorii de plante, ct i pentru amelioratori. Din punct de vedere practic, prezint importan deosebit tehnicile care reduc dominana apical i care induc procesul de ramificare, pentru multe specii de plante cultivate (ex. la specii de pomi fructiferi sau la via de vie se aplic tieri specifice). Sunt ns i situaii cnd se dorete intensificarea dominanei apicale (ex. tutun, bumbac, cpun). Gradul n care diferite specii de plante sunt sub incidena dominanei apicale este difereniat (nhibare complet a mugurilor laterali la Pisum sativum; lipsa dominanei apicale la Kochia scoparia). Referitor la mecanismul dominanei apicale i la factorii care o determin sunt numeroase date i numeroase teorii, precum: teoria nhibiiei directe de ctre auxin (Thimann i Skoog, 1933. 1934); teoria nutriional (Goebel, 1900); teoria nhibiiei indirecte de ctre auxin (Snow, 1925) etc.); nu lipsii de atenie sunt n general hormonii vegetali, dar i ali factori. Studiind efectul de stimulare/nhibare a creterii la muguri axilari prelevai de la plante de mazre, n vrst de 21 zile (ca sistem model pentru studiul eliberrii mugurilor din dominana apical, fr influena altor organe), Balla i Prochazka (2000) au analizat expresia PsDRM1 i PsDRM2, ca markeri ai dormanei. Auxina are efect nhibitor asupra creterii mugurilor axilari, n timp ce citochininele promoveaz creterea acestora (fig. 9.20.). Mecanismul creterii mugurilor axilari depinde mai degrab de raportul celor doi hormoni, dect de nivelul absolut al fiecruia. De asemenea, cteva lucrri indic faptul c acidul abscisic

192 (ABA) prezent n mugurii axilari este corelat cu dormana mugurelui. Declinul acidului abscisic dup decapitare precede creterea mugurelui, n timp ce aplicarea auxinei pe seciune reface nivelul ABA, la cel existent naintea decapitrii. Modelul a fost propus pentru mecanismul de control al dominanei apicale de ctre hormonii vegetali. Controlul creterii mugurilor axilari implic deci o reea de semnale i mecanisme feedback de reglaj, iar transportul bazipetal al auxinei un reprezint exemplu n acest sens (fig.9.21.).
Fig. 9.20. Model al controlului dominanei apicale

Strigolactonele, descrise anterior ca semnale de natur carotenoidic exudate de rdcini, s-a descoperit ca sunt hormoni sau precursori ai hormonului (hormonilor) care nhib de asemenea procesul de ramificare (Umehara i al., 2008; Dun i al., 2009; Rameau, 2010). 9.2.3. Evaluarea creterii plantelor Fazele creterii i interpretarea lor Conform cu aspectul curbei redat n figura 9.22., la nceputul creterii se nregistreaz o perioad de laten (de adaptare la mediu, de sintez a enzimelor specifice, de mobilizare a substanelor de rezerv etc.), apoi se disting trei faze principale: 1) faza de cretere logaritmic); accelerat (exponenial
Fig. 9.21. Transportul polar, bazipetal al auxinei

sau

Viteza de cretere (V) sporete proporional cu timpul i eficiena creterii (R) este constant.
Fig. 9.22. Reprezentarea schematic a curbei fazelor creterii

Pentru prima oar, indexul eficienei sau indexul eficacitii de cretere (R) n cursul fazei accelerate a fost formulat matematic de Bleckman, care a exprimat aceasta prin ecuaia progresiilor exponeniale. De aici deriv i denumirea fazei faza exponenial, sau faza logaritmic.

2) faza linear, care se caracterizeaz printr-o vitez constant de cretere:

193

Ca durat de timp este variabil, dar uneori ocup cea mai mare parte a curbei (ex. la creterea rdcinilor, a tulpinilor). 3) faza de ncetinire a creterii sau de senescen, care se caracterizeaz prin diminuarea progresiv a creterii, apoi o anulare a vitezei i a eficienei creterii (a ncorporrii i acumulrii de noi materiale ca substane proprii). De altfel, n aceast faz intervin numeroi factori limitativi (ex. consumarea substanelor de rezerv, scderea coninutului de hormoni etc.) sau creterea coninutului unor factori nhibitori (ex. substane toxice, deeuri). Indicatori privind creterea plantelor Analiza creterii presupune efectuarea de msurtori la plante individuale, incluznd: ratele creterii relative i absolute; rata asimilaiei nete; suprafaa foliar specific; masa specific a frunzelor; raportul S/R etc. Rata creterii relative (RGR) indic sporirea masei uscate a materialului vegetal, dup un interval de timp, n relaie cu masa iniial. Raportul suprafeei foliare (LAR) reprezint raportul dintre suprafaa foliar i total biomas. Spre exemplu: floarea soarelui i sfecla de zahr au LAR cu valori mari, n timp ce la plante precum pinul, situaia este opus. Pinul are n schimb un RGR mai mare de zece ori. Rata asimilaiei nete (NAR) reprezint ctigul net de asimilate al unei plante, pe unitatea de suprafa foliar i timp. Indexul suprafeei foliare (LAI) reprezint raportul dintre suprafaa foliar i suprafaa solului ocupat de cultur. Se impune optimizarea strategiilor de producie pentru maximizarea absorbiei luminii, prin utilizarea unei densiti corespunztoare a frunzelor i aranjarea spaial pentru acoperirea suprafeei solului i promovarea expansiunii rapide a frunzelor. La cele mai multe plante cultivate, este necesar un LAI de 3-5, pentru maximizarea producerii de substan uscat. Culturile furajere pot necesita un LAI de 8-10. Rata creterii recoltei (CGR) reprezint ctigul n privina masei plantelor, pe unitatea de suprafa de teren i pe unitatea de timp. Unele plante sunt mai eficiente dect altele i totalul creterii masei recoltei poate fi comparabil cu creterea masei produciei economice. Rezult un alt indicator, denumit coeficientul sau indexul de partiie, care reprezint expresia eficienei plantei de a transforma asimilatele, n producie economic. Durata suprafeei foliare (LAD) exprim magnitudinea i persistena suprafeei frunzelor pe parcursul perioadei de cretere a plantelor. La gru, s-a constatat c acest indicator se coreleaz semnificativ cu recolta. Un parametru important este raportul dintre creterea tulpinii/ creterea rdcinii, cunoscut ca raportul S/R. Dei este controlat genetic, raportul este puternic influenat de factorii de mediu, precum deficit de ap, temperaturi extreme, compactare etc. Indexul recoltei reprezint raportul dintre producia economic/ producia biologic * 100 i reliefeaz deplasarea substanei uscate ctre prile recoltabile ale plantei. La cereale spre exemplu, creterea produciei de semine poate fi dat de creterea indexului recoltei. Plantele nu produc mai mult substan uscat total, ci partiia poate fi mai pronunat ctre producerea seminelor. 9.3. Micrile de cretere la plante Micarea reprezint o proprietate fiziologic a materiei vii (a protoplasmei vii n stare de hidrosol), dar i o nsuire a plantelor ca organisme. Prin desfurarea proceselor de cretere n mod flexibil, plantele rspund condiiilor mediului ambiant.

194 9.3.1. Factori implicai i mecanismul general de realizare a micrilor Una dintre particularitile specifice de cretere a plantelor este orientarea lor n mediul ambiant, n spaiu. Aceast capacitate prezint o deosebit importan din punct de vedere biologic. Diferena n ceea ce privete micarea plantelor i animalelor deriv din modul diferit de nutriie al acestora. Plantele i sintetizeaz propria hran, iar animalele depind de plante, pentru hrnirea direct sau indirect. Prin urmare, n cazul animalelor, micarea este esenial. Pe de alt parte, dac n cazul animalelor are loc deplasarea dinspre locurile periculoase, improprii, ctre zone cu un climat propice, plantele i orienteaz creterea spre factorii favorabili (surse de ap, lumin corespunztoare, substane minerale etc.) sau se feresc (fug) de factorii nocivi. Aceast proprietate are la baz o serie de caracteristici ale celulelor vii: sensibilitatea, excitabilitatea, adaptabilitatea etc. precum i existena unor mecanisme specifice de realizare a micrilor. Factorii responsabili pentru astfel de micri sunt de origine endogen (acionnd i n situaia unor condiii constante de mediu), fr a implica o stimulare a extensiei, ori de origine exogen (constituindu-se ca un semnal care declaneaz o modificare diferenial de cretere), de cele mai multe ori avnd loc o curbur a unui organ al plantei. Pentru realizarea micrilor este necesar aciunea unui stimul, iar n vederea reaciei de rspuns la stimul se impune parcurgerea unui mecanism n lan care include: stimuli Stimulii sunt reprezentai n general de factori de mediu (temperatur, umiditate, lumin, fora de gravitaie, ageni de natur mecanic sau electric etc.). Pentru a fi sesizat de receptori, intensitatea stimulului trebuie s depeasc o anumit valoare minim de prag. receptori Receptorii sunt diferii n raport cu tipul stimulului. Spre exemplu, n cazul luminii, receptorii pot fi reprezentai de pigmenii fotoreceptori. De precizat faptul c, doar anumite regiuni ale plantei sunt sensitive la stimuli i nu ntreaga plant. Astfel de regiuni sunt vrful rdcinii sau celulele sub apicale de la nivelul tulpinii. Stimulul este recepionat la nivelul specific, urmnd transmiterea unui semnal ctre zona de rspuns. sistem de transformare a informaiei ntr-un semnal i de transmitere ulterioar a semnalului Transmiterea excitaiei se poate realiza pe diferite ci: modificarea activitii enzimatice, modificarea permeabilitii membranelor plasmatice, modificarea potenialului bioelectric, pe cale hormonal, cu participarea altor compui organici etc. rspunsul Mecanismul de realizare a rspunsului variaz n raport cu tipul de micare. Rspunsul va avea loc dup ceva timp de la aciunea stimulului, aa numitul timp de reacie. Durata induciei dat de stimul este denumit timp de prezentare. Cu ct este mai mare timpul de prezentare, cu att se distruge capacitatea plantei de a rspunde la orice stimulare ulterioar. Timpul de prezentare este invers proporional cu intensitatea stimulului. Intensitatea redus a stimulului necesit un timp de prezentare mai lung, n vederea producerii unui rspuns, n timp ce o intensitate mare a stimulului va induce un rspuns ntr-un interval mai scurt de timp. 9.3.2. Clasificarea micrilor la plante Pentru plantele fixate n sol, principalele tipuri de micri de cretere sunt: tropisme nastii nutaii

I. II. III.

195 9.3.2.1. Tropisme Tropismele sunt micri de cretere difereniat (cu realizarea unei curburi) a organelor plantelor, n funcie de direcia de aciune a unui factor extern, precum: lumina (fototropism), fora de gravitaie (gravitropism), ap (higrotropism), rspuns la atingere (tigmotropism), anumite substane chimice (chimiotropism), rspuns direcional ctre ntuneric (skototropism), curent electric (electrotropism) etc. Direcia curburii este determinat de excitant i tropismele pot fi pozitive (dac are loc curbura ctre direcia de aciune a factorului inductiv) sau negative (dac se realizeaz curbura n sens opus direciei de aciune a stimulului extern). Sunt bine cunoscute micrile gravitrop pozitive ale rdcinii i gravitrop negative ale tulpinii. Fototropismul reprezint micarea de cretere orientat a organelor plantelor, n funcie de direcia de aciune a fluxului luminii sau gradieni luminoi. Lumina reprezint una dintre condiiile eseniale pentru desfurarea fotosintezei. Pentru perceperea luminii, plantele i-au dezvoltat o varietate de fotoreceptori, care absorb n principal lumina roie i albastr. Prezint o importan biologic deosebit, avnd n vedere faptul c aa numitul mozaic al frunzelor care apare spre exemplu n coroana pomilor permite o utilizare ct mai eficient a energiei luminoase. Acest aspect este valabil pentru plantele crescute n teren, ct i pentru cele de apartament, cele din urm orientndu-i frunzele ctre fereastr. Fototropismul a fost studiat de foarte mult timp (Darwin, 1880; Sachs, 1887) i a fost localizat zona fototropic sensitiv (n vrful coleoptilului). Aceasta a condus la experimentele lui Went i astfel a fost descoperit auxina. Ca receptor pentru rpunsurile fototropice au fost identificate pentru prima oar fototropinele, n plasmalema celulelor la plantulele etiolate de mazre (Gallangher i al., 1988). Fototropinele sunt protein kinaze activate de lumin i implicate n realizarea gradienilor difereniali ai auxinei, observai n cazul plantulelor iluminate cu lumin unilateral albastr. De asemenea, importana auxinelor n rspunsul fototropic a fost n mod clar demonstrat prin studii genetice (Liscum i Reed, 2002). Ulterior, s-a demonstrat c ele mediaz i deplasarea cloroplastelor, micarea stomatelor i expansiunea frunzelor. n privina transduciei semnalului, n 1926 ipoteza Cholodny a fost demonstrat de Went, privind faptul c iluminarea pe o parte a unui organ provoac transportul auxinei ctre partea umbrit. n consecin, are loc nhibarea creterii prii iluminate. Distribuia inegal a auxinei pe cele dou pri se crede a fi cauza rspunsului prin curbare, dei, dac s-a blocat deplasarea lateral a auxinei nu s-au obinut Fig. 9.23. Micarea fototrop pozitiv diferene (fig. 9.23.). Din punct de vedere fiziologic, fototropismul poate fi difereniat de alte rspunsuri dependente de lumin (ex. nastii) pe baza a dou criterii: rspunsul direcional i bazele celulare ale rspunsului de cretere. Un comportament interesant este urmrirea soarelui (fig. 9.24.) Fig. 9.24. n cazul florii soarelui. Cnd capitulul este tnr, urmrete soarele. Dup Heliotropismul ce devine matur, se ndreapt la rsritul soarelui cu faa ctre est i rmne n respectiva poziie toat ziua. Gravitropismul reprezint micarea de cretere a organelor plantelor sau chiar a unei singure celule, n funcie de direcia de aciune a forei de gravitaie. Asemenea fototropismului, prin aceste micri de cretere plantele utilizeaz mai bine spaiul i absorb mai bine CO2 i lumina solar.

196 Se disting: micri gravitrop pozitive micri gavitrop negative Creterea n poziie vertical (a unei tulpini sau rdcini) se denumete ortogravitropism. Creterea orizontal se denumete diagravitropism, iar cea ntr-un anumit unghi (00< < 1800) este denumit plagiotropism. Organele care nu manifest nici un rspuns la aciunea forei de gravitaie se denumesc agravitrope. Dac o plant este plasat n poziie orizontal, tulpina se va curba n sus (gravitrop negativ), iar rdcina se curbeaz n jos (gravitrop pozitiv). n privina mecanismului de realizare, ncepnd din jurul anilor 1970 se consider c percepia forei de gravitaie se realizeaz de ctre statolite (plastide care conin amidon- ex. amiloplaste). Celulele care conin statolite sunt denumite statocite (Wilins, 1984). Actina, (component a citocheletului) se consider a juca un rol major n perceperea i transducia gravitaiei la rdcinile plantelor (Minorsky, 2002). Lanul reaciilor const n: detecia stimulului gravitaiei deplasarea statolitelor ctre baz (starea fizic); percepia statolitele blocheaz partea bazal a celulei, pentru veziculele Golgi (faza fiziologic); reacia veziculele sunt redirecionate ctre partea superioar a celulei, ceea ce permite sporirea ncorporrii de material n peretele celular i curbarea. Teoria Cholodny-Went sugereaz c la o plantul dispus orizontal, tulpina i rdcina, ca rspuns la fora de gravitaie acumuleaz auxin (IAA) pe partea bazal (inferioar). La tulpin, IAA favorizeaz creterea prii bazale, provocnd curbarea n sus. S-a acceptat ideea c rdcinile sunt mai sensibile la concentraii supraoptimale de auxin, comparativ cu tulpina. Acumularea auxinei pe Fig. 9.25. Model al redistribuirii partea inferioar a rdcinii nhib creterea n respectiva auxinei i calciului zon, n timp ce partea superioar crete normal (fig. n timpul gravitropismului la 9.25. ). rdcin Astfel, auxina sintetizat n partea suprateran este transportat ctre rdcin, prin intermediul sistemului fascicular de transport. n cazul rdcinii poziionate vertical, statolitele din vrful rdcinii se depoziteaz la baza celulelor, iar auxina i ionii de calciu transportai acropetal n rdcin sunt redistribuii n mod simetric, ctre prile laterale. Auxina este apoi transportat ctre zona de elongaie, prin celulele cortexului i favorizeaz creterea celulelor prin elongaie. Dac rdcina este poziionat orizontal, statolitele se orienteaz ctre baza celulelor. Se induce transportul polar al auxinei i calciului, nspre jumtatea inferioar a vrfului rdcinii. Urmeaz transportul bazipetal prin cortex. Tigmotropismul reprezint micarea de rpuns la atingere. Un exemplu comun este tigmotropismul crceilor la contactul cu un suport (fig. Fig. 9.26. Tigmotropismul 9.26.). Chimiotropismul este fenomenul de cretere a organelor plantelor, ca rspuns la aciunea substanelor chimice (ex. micarea de cretere a tubului polenic ctre glucide; micarea tentaculelor la Drosera, ca rspuns la substane organice i anorganice).

197 Higrotropismul este micarea de rspuns a unui organ al plantei la factorul ap. Rdcinile sunt higrotrop pozitive. De asemenea, tuburile polenice cresc higrotrop pozitiv. 9.3.2.2. Nastii Nastiile sunt micri de curbare reversibil a organelor plantelor. Direcia de realizare a curburii este impus de morfologia i structura organului plantei i se produce ca rspuns la un stimul extern. Comparativ cu tropismele, care presupun dirijarea ctre un factor extern, la nastii, micarea este orientat n raport cu planta i nu este controlat de direcia factorului cauzal. Factorii inductivi pot fi reprezentai de temperatur (termonastii) Fig. 9.27. Albizzia sau lumin (fotonastii). Nictinastiile sunt observate de obicei la plante din fam. Fabaceae (ex. Robinia pseudocacia), fam. Mimosaceae (ex. Albizzia julibrissin) sau din fam. Oxalidaceae (ex. Oxalis ) i sunt reglate de ceasul biologic, cu ciclul de circa 24 ore (fig.9.27.) (fig.9.28.) Este cunoscut aa numitul somn al frunzelor de salcm, fiind descris rolul celulelor de la nivelul pulvinulelor, respectiv celule care devin turgescente n timpul Fig. 9.28. Nictinastii la Oxalis deschiderii frunzelor (celule extensoare) i cele care devin flasce (celule flexoare). Termonastiile la florile de Tulipa gesneriana i Crocus vernus (care sunt foarte sensibile la temperatur) determin rspunsul repetat, prin deschiderea i nchiderea periantului. Micarea se datoreaz creterii inegale i asincrone a celulelor situate pe faa intern i extern a bazei petalelor. Aa se explic i faptul c florile de primvar, care la majoritatea speciilor sunt termonastice rmn nchise n cursul zilelor reci (fig. 9.29.) Fig. 9.29. Crocus (Grdina Descoperirea ceasului biologic s-a bazat pe observaiile Botanic U.S.A.M.V.B) micrilor nictinastice la Mimosa pudica (Bnning, 1973). Aceste micri are au loc n mod natural, dar intervin i aa numitele tigmonastii n cazul unor efecte externe (atingere, nclzire, rcire rapid, stimul electric etc.) (fig.9.30.). Chiar dac este stimulat doar o singur frunz, stimulul se transmite n plant (probabil pe baza a dou mecanime: electric i chimic), fiind influenate i celelalte frunze. Din punct de vedere a importanei pentru plant, se pare c prin lsarea n jos a frunzelor sunt ndeprtate insectele, nainte ca acestea s atace frunzele. Referitor la rspunsul chimic elicitat de potenialul de aciune (modificrile de voltaj), Rica (1916) (cercettor italian) a precizat c rspunsul este dat de o substan care Fig. 9. 30. Rspunsul la atingere la circul prin xilem, odat cu curentul de transpiraie. Mimosa pudica Substana a fost numit formal factorul lui Rica i ulterior a fost denumit turgorin. Studiile efectuate de Schildknecht (1983, 1984) asupra compuilor care activeaz pulvinulii frunzelor de Mimosa i Acacia karroo (ultima nefiind sensibil la atingere, dar exprim micri nictinastice) au demonstrat c factorii periodici care intervin in micarea frunzelor (PLMFs) la Acacia par a fi -glucozide ale acidului galic. S-a sugerat

198 apoi c aceti compui formeaz o nou clas de hormoni vegetali i au fost numii turgorine, deoarece acetia acioneaz asupra turgescenei celulelor pulvinulilor. Din punct de vedere a mecanismului de realizare, aceste micri pot fi determinate de modificri de turgescen i modificri ale elasticitii pereilor celulari, fiind prin urmare reversibile. Pot fi de asemenea datorate diferenei de cretere (extensie celular) a celulelor unui organ. Dei s-a crezut c turgorinele controleaz astfel de micri, cercetrile efectuate de Ueda i al.(2001) au demonstrat existena unor substane care controleaz deschiderea, respectiv a altor substane care controleaz nchiderea frunzelor, la cteva plante nictinastice (tabelul 9.1.). Tabelul 9.1. Factori ai micrii frunzelor n plantele nictinastice
Specia Mimosa pudica Albizzia julibrissin Cassia mimosoides Lespedeza cuneata Substane implicate n nchiderea frunzelor Potasiu 5-O--gluco-piranozilgentisat Potasiu -D-glucopiranozil 12-hidroxi jasmonat Potasiu chelidonat Potasiu D-idarat Substane implicate n deschiderea frunzelor Mimopudin Cis-p-cumaroilagmantin Calciu 4-O- -o- glucopiranozil ciscumarat Potasiu lespedezat

Prin urmare, controlul chimic al nictinastiilor poate fi reprezentat asemenea figurii 9.31. Pulvinulii sunt organe care regleaz poziia frunzelor i astfel intervin n activitatea fotosintetic a multor familii de angiosperme, n special Fabaceae. Majoritatea informaiilor cu privire la micri se bazeaz pe modificrile de form i mrime a celulelor parenchimatice corticale (celulelor motoare) cauzate de modificarea turgescenei, ca rspuns la fluxurile K i Cl, precum i a altor ioni. Din acest considerent,

Fig. 9.31. Controlul chimic al nictinastiei la Lespedeza cuneata

Fig. 9.32. Tigmonastii la plante carnivore

micarea frunzelor este similar n multe privine cu micarea stomatelor. Cercetrile indic faptul c pe lng modificrile turgescenei celulelor motoare, micrile pulvinulului sunt date de alterarea configuraiei microfilamentelor de actin. Mai mult, este evident c nu doar celulele corticale, ci i aparatul vascular al pulvinulilor particip la redistribuirea ionilor i la transmiterea stimulului, pe parcursul micrii frunzei (Rodrigues i Machadoa, 2008). De asemenea, la plantele carnivore au loc tigmonastii (fig. 9.32.).

9.3.2.3. Nutaii Nutaiile sunt micri autonome ale unui organ al plantei (independente de factori externi), care se nclin periodic, n diferite poziii n spaiu. De fiecare dat, zona de cretere prezint o curbur sau nutaie, ca urmare a unei extensii inegale a celulelor situate la extremitile opuse ale orgaului respectiv.

199 Micarea se realizeaz dependent de specie, organ, vrst i condiii de cretere, fiind caracterizat de o anumit form, amplitudine (ex. la plantele volubile au loc micri foarte ample), sens, perioad i vitez. Astfel, prin nutaie, dup germinarea seminei, cotiledoanele de fasole tocmai ieite din sol efectueaz o micare brusc, din poziia cu vrful n jos, iau poziia orizontal i se deschid complet. Sunt descrise dou tipuri de nutaii: nutaie plan: cnd vrful tulpinii oscileaz n jurul unui plan; nutaie circular (circumnutaie): cnd vrful tulpinii descrie un cerc sau elips n jurul verticalei (fig. 9.33.). Circumnutaia st la originea nfurrii tulpinilor volubile n jurul unui suport (dei micarea popriu- zis se realizeaz prin tigmotropism). Dac lipsete suportul, tulpina crete sub form helicoidal i pentru c nu se ataeaz de un suport, se ncovoaie. Dac exist un suport, tulpina se ncolcete de la dreapta la stnga (fasole, zorele, volbur). Asemenea micri sunt foarte evidente i la crcei, la care ncolcirea este de asemenea autonom i se poate realiza fr vreun contact cu un suport, chiar la nceputul creterii lor. 9.4. Controlul formrii florilor Pe parcursul ontogenezei plantelor superioare, o faz critic de maxim importan este tranziia de la creterea vegetativ, la dezvoltarea reproductiv, respectiv tranziia de la mugurele vegetativ, la mugure floral. Pentru unele plante, aceast tranziie marcheaz sfritul creterii vegetative. n cazul altora, creterea poate nsoi nflorirea, ori nceteaz dup ce nflorirea este complet. Un prim stadiu al fazei reproductive este iniierea florii, respectiv modificri fiziologice interne n cadrul meristemului, care preced orice schimbare morfologic. Reorientarea mugurelui vegetativ, de la formarea structurilor frunzei, ctre formarea componentelor florale poate fi explicat pe baza ipotezei c anumite gene, denumite gene ale nfloritului sunt activate acum n mod secvenial. Inducia floral reprezint o manifestare a realizrilor genetice i a particularitilor fiziologice ale plantei, n condiii corespunztoare de mediu, n esen cele privitoare la temperatur i durata zilnic de iluminare (fotoperioad). Inducia floral la pomii fructiferi maturi difer considerabil de procesele similare la plantele anuale/bianuale. n timp ce la ultimele inducia floral este mai ales un proces calitativ, reglat genetic, n cazul pomilor, rolul predominant l au semnalele interorgane (corelative), ceea ce face ca procesele induciei florale s fie mai ales cantitative. Astfel de semnale integreaz numeroi factori de mediu i practici horticole. Se formeaz un mesaj, care n cele din urm induce o cretere nedeterminat a meristemului vegetativ, care va comuta fie la modificri ctre formarea unui meristem generativ sau pentru a-l menine n stadiu vegetativ (Bangerth, 2006). Primul semn vizibil al tranziiei ctre nflorire poate fi o modificare a unuia sau a mai multor meristeme apicale n cadrul tulpinii. Pe parcursul creterii vegetative, un meristem apical continu s produc frunze, muguri laterali i internoduri (fig. 9.34. a). Florile pot aprea singure sau grupate, constituind o inflorescen. Prin urmare, dac un meristem vegetativ apical devine un meristem inflorescenial, el nceteaz a mai produce frunze, muguri laterali i internoduri. Va produce alte structuri: structuri unice, asemntoare unor frunze, denumite bractee, precum i noi meristeme, n unghiurile dintre bractee i internoduri (fig. 9.34. b). Aceste meristeme noi pot fi de asemenea meristeme infloresceniale, ori pot fi meristeme florale, fiecare dintre ele dnd natere unei flori. La rndul su, un meristem floral tipic produce patru structuri consecutive, dispuse n cercuri concentrice sau spirale: sepale, petale, stamine i carpele, separate prin internoduri foarte scurte, meninnd floarea compact (fig. 9.34.c). Spre deosebire de meristemele vegetative apicale

Fig. 9.33. Circumnutaii la plantele volubile n timpul creterii

200 i unele meristeme infloresceniale, meristemele florale sunt responsabile pentru creterea determinat, limitnd creterea florii la o dimensiune i form particular. Prin urmare, meristemele florale se formeaz din marginile laterale ale SAM. Din punct de vedere structural, meristemul apical al tulpinii i meristemul floral prezint similariti, cci ambele conin un rezervor de celule la nivelul apexului, care contribuie la organogeneza flancurilor. Ca rezultat, ambele tipuri de meristeme mpart un numr de gene reglatoare i mecanisme pentru dezvoltare i meninere. n ciuda acestor similariti, meristemele tulpinale i florale difer n anumite privine. Una dintre diferene este tipul i modul de aranjare a formaiunilor laterale pe care le produc. n general, SAM formeaz frunze i Fig. 9.34. nflorirea i meristemul apical meristemele asociate lor ntr-o aranjare n spiral, n timp ce meristemele florale genereaz sepale, petale, stamine i carpele, n cercuri concentrice. O alt diferen major este c SAM este nedeterminat i crete nedefinit, n timp ce meristemul floral este determinat i creterea se termin odat ce toate componentele florale au fost formate (Sharma i Fletcher, 2002). Meristemele florale se dezvolt din flancurile SAM, similar primordiilor frunzei, dar cu destinaii diferite. 9.4.1. Principii de baz ale formrii florilor Elucidarea mecanismelor de baz, genetice i moleculare ale formrii florilor a fost posibil n urma cercetrilor efectuate la trei specii dicotiledonate: Antirrhinum majus, Arabidopsis thaliana i Petunia hybrida. Jack (2004) a prezentat un studiu bibliografic pe aceast tem, atenia fiind concentrat pe rezultatele cercetrilor efectuate pe planta Arabidopsis, corespunztor a trei direcii de studiu: integrarea semnalelor induciei florale, de cre un grup mic de integratori florali; activarea genelor identitii meristemului floral, de ctre genele identitii meristemului floral; interaciunile dintre genele identitii componentelor florale, n special cele din clasele A i C. Un prim principiu de baz n domeniul formrii florii a fost modelul ABC iniiat n anii 1990 i bazat pe experimente genetice efectuate la Antirrhinum i Arabidopsis. Corespunztor celor 4 tipuri de componente florale dispuse n serii concentrice, de la exterior ctre interior (sepale, petale, stamine i carpele), modelul ABC stabilete c trei activiti, A, B i C determin specificitatea componentelor florale, ntr-o manier combinatorie. n ultimii ani, a devenit evident c exista un al patrulea set de gene Sepallata (SEP) conform experimentelor efectuate la petunia i tomate. Modelul ABC a fost revizuit, genele SEP au fost ncadrate n clasa E i a rezultat modelul ABCE (fig. 9.35.). ncadrarea n clasa E s-a datorat faptului c anterior, la petunia s-au caracterizat gene ale clasei D (FBP 7, FBP 11), cu specificitate pentru identitatea placentei i ovulului. Pentru unele plante (ex. Aquilegia) intervine o variaie a identitii componentelor florale, ceea ce sugereaz un program ABC mai complex. Floarea are n mod clar difereniat un al cincelea component floral, staminodium (Kramer i al., 2007). Cercetri recente au reliefat faptul c gena MOSAIC FLORAL ORGANS1 (MFO1/MADS6) de tipul AGAMOUS-LIKE6 (AGL6) regleaz identitatea componentelor florale i a meristemului floral la orez (Oryza sativa) (Ohmori i al., 2009). Diversitatea morfologic a florilor la angiosperme ar putea fi i un rezultat al modificrilor privind reglarea expresiei genelor ABCE (Liu i Mara, 2010).

201 Se pot distinge dou tipuri de variabilitate n privina controlului molecular al dezvoltrii diferitelor tipuri de flori: variaii ale reelei moleculare care controleaz dezvoltarea florii, ntre specii cu arhitectura floral similar i la care rezultatul final este acelai (patru componente florale: sepale, petale, stamine, carpele); variaii ntre specii cu arhitectura floral diferit (exemple clasice la monocotiledonate: lalea, graminee) Fig. 9.35. Modelul ABCE al (Rijpkema i al., 2010). identitii componentelor florale Al doilea principiu important implic rolul central al genei LEAFY (LFY), care este un activator major al ieirilor cilor induciei florale. n al doilea rnd, ea este un activator cheie al genelor ABC. n sens larg, formarea florii poate fi divizat n 4 etape, care se desfoar ntr-o secven temporal: Ca rspuns la factorii de mediu (ex.: fotoperioad, temperatur) i la semnalele endogene, planta comut de la creterea vegetativ, la creterea reproductiv. Procesul este controlat de un grup mare de gene, denumite gene ale timpului de nflorire. Semnalele diferitelor ci ale timpului de nflorire sunt integrate i astfel se permite activarea unui grup mic de gene, denumite gene ale identitii meristemului. Aceste gene determin identitatea floral (ex. LEAFY). Genele identitii meristemului activeaz genele identitii componentelor florale, n regiuni discrete ale florii (ex. modelul ABCE, dup modelul ABC al anilor 1990). Genele identitii componentelor florale activeaz genele care determin diferitele tipuri de celule i esuturi, care vor reprezenta cele patru componente florale. Promovarea funcionalitii genelor timpului de nflorire se consider a se realiza prin intermediul a patru ci principale (fig. 9.36.). 1) Fotoperioadele lungi i ceasul circadian Genele multor ci n cazul zilelor lungi codific proteine mplicate n perceperea luminii. La Arabidopsis, ceasul circadian este resetat de ctre semnalele luminoase, care sunt percepute de fitocromi (phyA, pn la phyE) pentru rou i rou ndeprtat i criptocromi (cry1 i cry2) pentru lumina albastr. Lumina i componentele ceasului circadian Fig. 9.36. Promovarea funcionalitii conduc la activarea expresiei genelor CONSTANS genelor timpului de nflorire (dup (CO), FLOWERING LOCUS T (FT) i GIGANTEA Balazques, 2000) (GI) (Koornneef i al., 1991), precum i la reglarea stabilitii i activitii proteinei CO (Hayama i Coupland, 2004). Pentru reglarea stabilitii proteinei CO, semnalele phyA i cry funcioneaz ntr-o manier antagonist semnalelor phyB. Semnalele phyA i cry protejeaz proteina CO de la degradare, n timp ce semnalele phyB promoveaz degradarea (Valverde i al., 2004). Mutantele CO nfloresc trziu, n special n fotoperioade lungi. Supraexpresia genelor CO determin nflorirea foarte timpurie.

202 2) Giberelinele Calea implic promovarea nfloririi de ctre gibereline. Mutantele cu deficiene n biosinteza GA (precum ga 1) exprim o ntrziere marcant a timpului de nflorire, cnd sunt crescute n zile scurte. Se sugereaz faptul c acidul giberelic este un stimulator important al nfloririi, n absena promovrii procesului prin zile lungi (Moon i al., 2003). 3) Calea autonom Aceast cale implic controlul nfloririi ntr-o manier independent de fotoperioad. Spre exemplu, Arabidopsis (plant facultativ de zi lung) nflorete mai rapid, cnd este crescut n zile lungi. Planta poate eventual s nfloreasc i cnd este crescut n fotoperioade scurte, noninductive. 4) Vernalizarea La multe specii de plante crescute n zonele temperate, nflorirea se realizeaz ca rspuns la tratamentele cu temperaturi joase pozitive (de obicei cuprinse ntre 0-100C), care imit trecerea peste iarn. Cercetrile recente au sugerat de asemenea rolul acidului ascorbic n inducia floral (Barth i al., 2006). Datorit funciei sale eseniale ca i cofactor pentru biosinteza acidului giberelic i acidului abscisic, acidul ascorbic pare a influena nu doar nivelul endogen, dar i semnalele acestor hormoni. Prin aceasta este afectat dezvoltarea florii i evoluia senescenei, ntr-o manier dependent de fotoperioad i /sau ritmul circadian. Dup Bangeerth (2009), inducia floral la pomii fructiferi este diferit de cea a plantelor anuale / bianuale (tabelul 9.2.). Tabelul 9.2. Aspecte comparative a dou modele implicate n inducia floral la plante anuale/ bianuale (stnga) i plante perene (dreapta) Modelul calitativ molecular-genetic Factorii care influeneaz inducia floral Modelul cantitativ - semnal pe distane mari Factorii care influeneaz inducia floral

Fotoperioada; temperaturile joase (vernalizarea); Factori exogeni: temperaturile joase (pomi subtropicali) gibereline; factori autonomi necunoscui (+); intensitate luminoas mare (zona temperat) (+); stimuleaz inducia floral distribuia apei (unii pomi tropicali) (+); fotosintez intens (suficieni hidrai de carbon) (+); producerea i transportul unor LDS (semnale hormonale pe distane mari) ctre meristeme accesibile /non-accesibile Florigen (proteine ale induciei florale): Factori endogeni: numr mare de fructe/semine (-); produse i transportate din frunze sau alte esuturi creteri vegetative puternice (concentraie mare de acid ctre SAM giberelic) (-); tipul de portaltoi (puternic/slab)(-/+); localizarea mugurilor de-a lungul tulpinii (accesibili/ non-accesibili promotorilor florali) (+/-) Expresia genelor timpului de nflorire / Practici horticole: nutriie optim mai ales cu N (+); identitatea meristemului (tranziia morfogenetic) ndeprtarea parial a fructelor tinere (+); Inelare, incizie (+); tieri n zona prii aeriene (iarna/vara) (-/+); tieri la nivelul sistemului radicular (+) Morfogeneza floral Hormonii, ca semnale pe distane mari : gibereline (-); acidul indolil acetic (-); citochininele (+); etilena (+?) (+) promoveaz nlorirea; (-) inhib nflorirea;

203 9.4.1.1. Fotoperiodismul i ceasul circadian nflorirea multor angiosperme la aproximativ aceeai dat n fiecare an este un rspuns la modificarea lungimii nopii i zilei, pe msura derulrii sezoanelor. Aceasta se ntmpl chiar dac nceputul creterii a avut loc la date diferite. Cu excepia zonei ecuatoriale, trecerea anului este marcat printr-o continu, dar puternic variaie reproductibil n ceea ce privete durata zilei (Brian, 2006). n 1920, cercettorii Garner i Allard au studiat comportamentul unei mutante nou descoperit la tutun, o varietate denumit Maryland Mammoth, care a crescut foarte nalt i avea frunze foarte mari. Aceasta nu a nflorit n cursul verii, aa cum se ntmpl n mod normal la plante de tutun, ci nflorirea a avut loc doar ctre sfritul lunii decembrie. Experimentele de iluminare artificial iarna i ntuneric artificial vara au demonstrat c planta a fost afectat de fotoperioad. Deoarece planta nflorea numai cnd era expus la perioade scurte de lumin (mai puin de 12 ore de lumin pe zi ) a fost denumit plant de zi scurt. Deci, lungimea critic a zilei pentru Maryland Mammoth este 12 ore. Rspunsul de cretere, dezvoltare sau metabolic al plantelor la durata de iluminare zilnic este denumit fotoperiodism. Fotoperioada reprezint perioada de timp n cursul a 24 de ore, n care plantele sunt expuse la lumin. Plantele care nfloresc ca rspuns la durata de iluminare zilnic sunt denumite fotoperiodic senzitive. Dup Thomas (1993), plantele fotoperiodic senzitive pot fi mprite n trei categorii: 1) plante de zi scurt (SDP) (ex. 10/14 ore lumin/ ntuneric) Aceste plante nfloresc numai cnd numrul orelor de ntuneric din cursul a 24 de ore depete un nivel critic (planta msoar lungimea perioadei de ntuneric cu scopul de a nflori), cum este cazul la sfritul verii, toamna sau primvara. Se comport astfel plante precum poinsetia, crizantema etc. 2) plante de zi lung (LDP) (ex. 16/8 ore lumin/ntuneric) Aceste plante ncep nflorirea numai cnd durata nopii scade sub un nivel critic, aa cum se ntmpl primvara i vara. Este cazul unor plante precum spanac, salat, trifoi etc. 3) plante neutre La aceste plante nceputul declanrii nfloririi nu este controlat de fotoperioad. Ele sunt deci independente att la lungimea nopii, ct i a zilei, precum tomate, trandafiri, orez etc. Unele plante sunt fotoperiodic senzitive numai cnd sunt tinere i devin neutre, pe msura ce nainteaz n vrst. De asemenea, unele plante sunt intermediare, adic nfloresc numai la o fotoperioad intermediar, aa cum este trestia de zahr. Sunt i alte dou grupe de plante: plante de zi scurt-lung (SLDP) care nfloresc cnd sunt expuse zilelor scurte, urmate de zile lungi i plante de zi lung-scurt (LSDP), care pentru a nflori au mai nti nevoie de zile lungi, apoi de zile scurte. Spre exemplu, trifoiul alb i alte plante SLDP nfloresc n cursul zilelor lungi, nainte de mijlocul verii. Cellalt grup, respectiv LSDP nu pot nflori pn cnd zilele lungi de var sunt urmate de unele mai scurte, deci ele nfloresc numai n toamn (ex. Kalanchoe este LSDP). S-a determinat c lungimea nopii este de fapt adevratul factor care determin nflorirea la SDPs i LDPs. Descoperirea s-a realizat prin ntreruperea nopii, iar constatarea a fost c un fle de lumin roie la plante de zi scurt a prevenit nflorirea, n schimb, la plantele de zi lung a fost favorizat nflorirea. ntreruperea zilei cu un scurt interval de ntuneric nu a avut nici un efect la SDPs i LDPs. Prin urmare, plantele de zi scurt sunt corect denumite plante de noapte lung, iar cele de zi lung, plante de noapte scurt.

204 n tabelul 9.3. sunt redate cteva exemple de specii SDP i LDP. Msurarea lungimii zilei n plante este realizat de ceasul circadian, care controleaz ritmurile circadiene ale expresiei genelor i comportamentul care este observat la eucariote (inclusiv insecte, ciuperci, plante i vertebrate). Tabelul 9.3. Exemple de specii SDP i LDP (modificat dup Thomas i Vince- Prue, 1997) Plante de zi scurt (SDP) SDP calitative sau absolute (nfloresc numai n zile scurte)
Fragaria x ananassa Glycine max Biloxi Kalancho blossfeldiana Nicotiana tabacum Maryland Mammoth Oryza sativa Pharbitis nil Xanthium strumarium SDP cantitative (nflorirea este accelerat de zile scurte) Cannabis sativa Cucumis sativus (unele soiuri) Glycine max Helianthus annuus, tuberosus Nicotiana tabacum Rhododendron spp. Ricinus communis Zea mays

Plante de zi lung (LDP) LDP calitative sau absolute (nfloresc numai n zile lungi)
Avena sativa (forma de primvar) Hyoscyamus niger (anual) Jasminum grandiflorum Lolium temulentum Nicotiana sylvestris Papaver somniferum Trifolium pratense LDP cantitative (nflorirea este accelerat de zile lungi) Antirrhinum majus Arabidopsis thaliana Dianthus caryophyllus Hemerocallis fulva Hordeum vulgare (forma de primvar) Linum usitatissimum Petunia hybrida Pisum sativum

Dup Eckardt (2000), ceasul circadian la eucariote are trei componente: un ceas oscilator, care creaz periodicitatea; intrrile, care sincronizeaz sau antreneaz oscilatorul n funcie de ciclul zi - noapte i ieirile, care constituie ritmurile rezultate n expresia genelor i comportamentului. La Arabidopsis thaliana, ceasul circadian i controlul cilor nfloririi implic genele GIGANTEA (GI), CONSTANS (CO) i FLOWERING LOCUS T (FT), promovnd nflorirea n zile lungi. De altfel, genele multor ci n cazul zilelor lungi codific proteine implicate n perceperea luminii (de exemplu fitocromul A i criptocromul 2) sau componente ale ceasului circadian (GIGANTEA i ELF). n cadrul acestei ci, GI regleaz ritmurile circadiene i nflorirea i acioneaz naintea genelor CO i FT. Aceasta sugereaz faptul c GI poate regla nflorirea indirect, prin afectarea ritmurilor circadiene. S-a propus c efectul GI asupra nfloririi nu este indirect, prin efectul su asupra reglrii ceasului circadian. Mai degrab, GI acioneaz de asemenea n nucleu, pentru a promova mai direct expresia genelor timpului de nflorire (Mizoguchi i al., 2005). Mutantele CO nfloresc trziu, n special n fotoperioade lungi, n timp ce supraexpresia genelor CO determin nflorirea foarte timpurie. De asemenea, mutantele FT nfloresc trziu n zile lungi, deoarece imputul pentru activarea FT este promovat de ziua lung, via CO. Genele ceas codific proteine reglatoare, care interacioneaz pentru a produce oscilaiile circadiene. Ceasul controleaz activitatea genei CONSTANS, iar produsul (proteina CO) se acumuleaz n una din fazele ciclului ceasului, faza n care se las noaptea. n nopi lungi (zile scurte) proteina CO este determinat n cursul nopii (fig. 9.37.). Fotoperiodismul, fitocromul i florigenul Se pun o serie de ntrebri: cine msoar ciclurile zi-noapte ? care sunt lungimile de und efective ? ce pigment este implicat ?

205 ct de rapid este rspunsul ? cum circul acesta etc. ? ! Frunza matur este receptorul, chiar dac exist doar o parte din frunz. Lumina albastr nu are efect. Doar lumina roie trebuie aplicat, pentru a se elicita un rspuns. Spre exemplu, tratamentul unei singure frunze cu condiii inductive de zile scurte a fost suficient pentru a induce nflorirea la Xanthium strumarium (Zeevaart, 1976). Fotoperioada este msurat n frunz, dar mugurele distal devine o floare. Prin urmare, trebuie s existe un semnal sau semnale, care s se transmit ctre apexul tulpinii. Reprezentarea schematic a transportului acestui semnal este redat n figura 9.38. (Imaizumi i Kay, 2006).

Fig. 9. 37. Reglarea circadian a ARNm pentru genele CONSTANS (CO)

De asemenea, aa cum s-a anticipat prin experimentele de altoire, pentru promovarea nfloririi este necesar expresia CO n sistemul vascular al frunzei. intele CO includ FT i SOC1. FT interacioneaz cu FD (factor de transcripie a bZIP). FT este predominant exprimat n sistemul vascular, n timp ce FD se la exprim nivelul apexului Fig. 9. 38. Reprezentarea schematic a tulpinii. Se transportului semnalului nfloriririi sugereaz faptul c ARNm al FT sau proteina pot n mod fizic s se deplaseze n plant. Fig. 9.39. Interaciunile dintre Deplasarea se realizeaz din sistemul vascular al frunzei, unde fotoperioad i cile acesta este indus de CO, ctre apex. Aici interacioneaz cu FD, FLC stimuleaz expresia AP1 i apoi se activeaz nflorirea (Burie i Dean, 2006) (fig. 9.39.). ! Fitocromul este un fotoreceptor descris de ctre Borthwick i Hendricks n 1959. Este de fapt primul receptor identificat n plante i cunoscut pn la nceputul anilor 1990, cnd s-au identificat un numr de trei receptori posibili. S-au identificat cel puin trei clase de fotoreceptori: fitocromii Pr i Pfr, criptocromii i UV fototropinele (Joanne i Donying, 2001). Fitocromul este o protein solubil, cu masa molecular de circa 250 kDa. Este un homodimer, constituit din dou subuniti echivalente: molecule proteice, conjugate cu o molecul care absoarbe lumina (comparabil cu rhodopsin). Fiecare subunitate are dou componente: o molecul pigment care absoarbe lumina, denumit componenta cromofor i un lan polipeptidic numit apoprotein. Apoproteina este un monomer cu masa molecular de circa 125 kDa. mpreun, cele dou componente alctuiesc holoproteina (Andel i al., 1997) (fig. 9.40.). La plante sunt identificai 5 fitocromi: fitocromul A, fitocromul B, precum i fotocromii C, D i E. n timp ce tipurile C,D i E sunt absente n anumii taxoni, tipurile A i B sunt larg

206 rspndite i reprezint principalii mediatori ai rspunsurilor induse de radiaiile luminoase roii/rou ndeprtat (Mathews, 2010). Fitocromul poate exista sub dou forme interconvertibile: Pr absoarbe radiaiile luminoase roii (r - 660 nm). Este forma stabil sau inactiv, ori de depozitare. Pfr absoarbe radiaiile luminoase rou ndeprtat (fr - 730 nm). Este forma instabil i n multe cazuri este considerat a fi forma activ. Studiile genetice, moleculare i fotobiologice au permis identificarea unui grup de factori de transcripie, denumii factori de interaciune cu fitocromul (PIFs), care leag n mod direct fitocromii fotoactivai. Componeni ai familiei PIFs s-a Fig. 9.40. Structura fitocromului demonstrat a controla reglarea expresiei genelor sub controlul luminii, n mod direct sau indirect (Castillon i al., 2007). Relaia de interconversie este urmtoarea: absorbia luminii roii de ctre Pr determin transformarea n Pfr; absorbia luminii rou ndeprtat de ctre Pfr determin transformarea n Pr; la ntuneric, Pfr se transform spontan n Pr (fig. 9.41.). Fotoreversibiltatea fitocromului este exprimat n cadrul fenomenului de ntrerupere a nopii. Lumina roie transform Pr la Pfr, ceea ce nhib nflorirea la plante de zi scurt. La plantele de zi lung, aparent, Pfr favorizeaz nflorirea. La plante neiluminate, fitocromul este prezent sub forma Pr. Aceast form este convertit de lumina roie la Pfr, care absoarbe lumina rou ndeprtat. La rndul su, Pfr poate fi transformat napoi n Pr, prin Fig. 9.41. Procese care intervin intermediul luminii rou-ndeprtat. n reglarea turnovrului fitocromului n celule Cercetrile au demonstrat c n cele mai multe cazuri, forma fiziologic activ este Pfr. n situaia n care nu s-a gsit o relaie direct a unui rspuns, cu cantitatea Pfr, s-a considerat ca fiind determinant raportul Pfr/Pr. Dar, cum intervine fitocromul ? Lumina provenit de la soare este mai bogat n radiaii roii (660 nm), dect n radiaii rou-ndeprtat (730 nm). Astfel, la apusul soarelui, toat cantitatea de fitocrom este Pfr. Pe parcursul nopii, are loc conversia Pfr napoi la Pr ,care reprezint forma necesar pentru eliberarea semnalului nfloririi. Prin urmare, planta are nevoie de 8,5 ore de ntuneric, pentru a se transforma tot Pfr prezent la apusul soarelui, n forma Pr, aa nct s urmeze reacii suplimentare, care s permit eliberarea unui semnal al nfloririi (florigen). Dac procesul este ntrerupt de un fle de lumin roie - 660 nm, Pr este imediat transformat n Pfr i sarcina nopii este nendeplinit. O expunere ulterioar la lumina

207 rou-ndeprtat (730 nm) permite conversia pigmentului napoi la forma Pr i astfel treptele necesare eliberrii florigenului pot fi completate. Expunerea la nceputul nopii la lumin intens rou ndeprtat seteaz ceasul nainte cu circa dou ore i astfel se elimin necesitatea conversiei spontane a Pfr la Pr . Efectul l reprezint probabil transportul unei substane n decurs de ore ctre tulpin, prin floem i o plant expus unei fotoperioade corecte, poate stimula prin altoire nflorirea altei plante (expus incorect fotoperioadei). La Papaver somniferum L.(plant de zi lung, cu o lungime critic a zilei (lumin/zi) de 1416 ore), nflorirea a fost indus de 2 sau mai multe fotoperioade lungi sau de o singur perioad de lumin, mai mare de 24 ore (Gentner i al., 2001). nflorirea nu a fost controlat de iluminarea cu lumin roie, rou ndeprtat sau ambele tipuri. Deci, nu s-a demonstrat implicarea fitocromului (dei prezena sa nu a fost exclus). Se pare c lumina controleaz nflorirea, prin ceea ce se cheam reacie de nalt energie. Florigenul ca semnal al nfloririi a fost descris prima oar de Chailakhyan, fiziolog rus, n 1937 (Chailakhyan, 1968). El a demonstrat c inducia floral poate fi transmis prin altoirea unei plante induse, pe una neindus. Pentru a se verifica dac florigenul din plantele de zi scurt este identic funcional cu cel al plantelor de zi lung, s-au efectuat experimente bazate pe altoire. Dac o frunz de Nicotiana tabacum (cv. Maryland Mammoth - SDP) este altoit pe Nicotiana sylvestris (LDP), ultima nflorete de asemenea n zile scurte. Dac o frunz de N. sylvestris (LDP) este altoit pe SDP, ultima nflorete n condiii de zile lungi. S-a demonstrat astfel c florigenul la SDP este identic cu cel de la LDP, deci este vorba probabil despre aceeai substan. La plantele neutre, de asemenea se formeaz florigen. Aciunea acestuia este aceeai ca la plante fotoperiodic senzitive, dar formarea sa este independent de durata de iluminare zilnic. Prin urmare: n frunzele plantelor se produce o substan asemntoare unui hormon (florigen); Este probabil un complex de substane, care sunt conduse ctre meristemul tulpinii, cu scopul de a le stimula s treac de la creterea vegetativ, la formarea florilor; florigenul nu este specific speciei; El poate fi transferat membrilor aceleiai specii, membrilor unui gen i membrilor a diferite genuri. Transferabilitatea pare a fi limitat doar de acceptabilitatea la altoire. Pare a fi important o bun conexiune ntre floemul a doi parteneri. Altoirea la monocotiledonate este foarte dificil i transferul florigenului prin altoire nu a avut succes. S-a demonstrat ns necesitatea altor tehnici. Florigenul este fiziologic nespecific. El poate fi uor schimbat ntre plante de zi scurt, zi lung (fig.9.42.) i plante neutre. Este deci identic la toate plantele. Principala diferen ntre plantele de zi lung i cele de zi scurt este aceea c producerea florigenului are loc numai ntr-un anumit program de Fig. 9.42. Patru exemple de plante Crassulaceae, la care lumin (inductiv), care difer la cele nflorirea este indus la un altoi neindus, prin dou tipuri de plante. transmiterea florigenului, de la un portaltoi indus floral
(dup Zeevaart, 2006)

208 Rspunsul esuturilor vegetative la aciunea florigenului are loc dac aceste esuturi sunt n stadiul competent de a rspunde la acest stimul. La unele plante, rspunsul are loc dac apexul vegetativ a atins o anumit dimensiune. La nivel molecular, evocarea floral (modificrile iniiale citologice i morfologice care intervin ntr-un meristem apical al unei plante plasat n condiii fotoperiodice favorabile induciei florale) se refer la procesele n care genele reglatoare sunt activate n meristemul competent (O ' Neill, 1989). Ulterior, ipoteza lui Chailakhyan a fost modificat i s-au conturat 2 clase de hormoni florali: gibereline i antezin. Chailakhyan considera c n cursul fotoperioadelor non-inductive, plantele de zi lung produc antezin i nu gibereline, n timp ce plantele de zi scurt produc gibereline i nu antezin. Existena unui hormon al nfloririi a stat sub semnul ntrebrii peste 60 de ani, deoarece rspunsul privitor la nflorire s-a gsit a fi mult mai complex. Totui, exprimente recente sugereaz c florigenul exist. Existena sa este susinut de experimente care indic faptul c substana care comand nflorirea este produs sau activat n frunzele plantei i trebuie s treac timp de la plecarea sa din frunz, nainte ca planta s poat nflori. Sunt cteva descoperiri ale ultimilor ani n privina fotoperiodismului i atributelor florigenului, folosind pentru astfel de studii planta de zi lung Arabidopsis thaliana (Imaizumi i Kay, 2006; Zeevaart, 2006). Modelul coincidenei externe propus ca ipotez de ctre Bnning n 1936 este astzi cel mai apropiat de rezultatele studiilor genetice. Lumina joac dou roluri cruciale. Un rol este acela de a reseta ceasul circadian. Ea are importan pentru generarea oscilaiei zilnice a unui component reglator cheie, cu expresia picului dup masa trziu. Al doilea rol este reglarea activitii acestui component. Rspunsurile fotoperiodice vor fi comandate numai cnd nivelurile reglatorului aflate peste o limit de prag coincid cu lungimea zilei, ca factor extern. La plantele de zi lung, funcia reglatorului cheie este de a promova nflorirea. Pentru c ceasul circadian seteaz ntotdeauna expresia picului reglatorului dup masa trziu, coincidena cu lumina are loc mai mult n zile lungi i mai puin n zile scurte. n consecin, reglatorul este mai activ n zile lungi, ceea ce are ca efect accelerarea nfloririi. La plantele de zi scurt, factorul reglator funcioneaz prin a nhiba inflorirea. 9.4.1.2. Giberelinele La cteva plante de zi lung i bienale, dac sunt crescute n fotoperioade non-inductive, nflorirea poate fi determinat prin tratament cu giberelin (Lang i Lyons,1994). Giberelinele induc probabil exensia (creterea) plantelor n rozet i la unele LDP, elongaia rapid a tulpinii pare a fi interconectat cu activarea genelor nfloritului. Mutantele cu deficiene n biosinteza GA (ex. ga1) exprim o ntrziere marcant a timpului de nflorire, dac sunt crescute n zile scurte. Comparnd diferite gibereline, s-a concluzionat c unele sunt exclusiv n relaie cu inducia nfloritului (Takahachi i al., 1991), dei exist i lucrri care menioneaz c acestea nu au nici un efect. La multe plante ierboase din zona temperat, nflorirea este indus de zile lungi sau de tratamente cu GA3. La Lolium temulentum este nevoie de o singur zi lung, pentru iniierea nflorescenei. Aceast cerin poate fi asigurat n zile scurte neinductive, printr-o singur aplicare a unei gibereline pe frunz sau pe apexul tulpinii (Evans i al., 1990). S-au pus ntrebri precum: care gibereline induc evocarea floral? care induc elongaia tulpinii? unele influeneaz ambele procese? Cheia o constituie legtura lanului lactonei, cu conversia GA19 la GA20 i GA24 la GA9. Aceast etap implic 20-oxidaza, a crei activitate crete n zile lungi, aa cum s-a demonstrat la Arabidopsis (Xu i al., 1997)

209 9.4.1.3. Redirecionarea autonom La mazrea de grdin (Pisum sativum) spre exemplu, momentul redirecionrii apexului vegetativ este determinat genetic (ca n cazul soiurilor cu nflorire timpurie sau trzie), poate fi influenat de factori externi, dar factorii provenii din frunze nu influeneaz n mod semnificativ procesul. Calea autonom este necesar att n fotoperioade scurte, ct i n fotoperioade lungi. Calea autonom cuprinde un grup de ase gene (FCA, FT, FLD, FVE, FPA i LD). n cazul mutaiilor se produc fenotipuri cu nflorire trzie. Deoarece aceste mutante nu prezint defecte n ceea ce privete capacitatea lor de a rspunde la zile lungi i semnale ale vernalizrii, s-a sugerat c ele pot rspunde la un semnal intern de dezvoltare. De asemenea, genele autonome funcioneaz n diferite subgrupe, pentru promovarea nfloririi Asemenea cilor induse de genele vernalizrii (PIE i VIP), inta major a genelor autonome este represia FLC. 9.4.1.4. Vernalizarea Vernalizarea reprezint o accelerare a capacitii de nflorire a unor specii de plante, ca rspuns la expunerea seminelor mbibate sau a mugurilor, la aciunea temperaturilor coborte, pozitive (cuprinse ntre 2-12 0C) (Chouard,1960). Arabidopsis din regiunile cu ierni reci adopt o strategie reproductiv cunoscut ca ciclul de via anual de iarn. Aceste plante germineaz n cursul verii, cresc vegetativ n cursul iernii i nfloresc numai ca rspuns la zilele lungi din primvar, dup ce au fost expuse la una, pn la trei luni cu temperaturi joase. Arabidopsis cu un ciclu de via anual rapid, de var, nu necesit vernalizare. Germinarea, creterea i nflorirea au loc n aceeai var. Cercetrile cu privire la genele responsabile pentru conferirea cerinelor pentru vernalizare la Arabidopsis au condus la gsirea a dou gene alele dominante: genele flowering locus C (FLC) i Frigida (FRI) care acioneaz n mod sinergic (fig. 9.43.) (Putterill i al., 2004). FLC este un represor important al nfloririi. Numeroase gene diferite, inclusiv cele ale cilor vernalizrii i ciclului autonom regleaz Fig. 9.43. Controlul multiplu expresia sa. La ecotipuri care n mod normal au o nflorire al expresiei genei FLC trzie, FRI acioneaz prin a spori i vernalizarea prin a reduce nivelele FLC (Johanson i al., 2000). FLC are de asemenea un rol prioritar n vernalizare. Vernalizarea promoveaz nflorirea, prin reducerea nivelului ARNm pentru FLC. Durata de reducere este proporional cu timpul de vernalizare i este strns corelat cu timpul de nflorire. Michaels i Amasino (2000) au propus un model reostat al timpului de nflorire. Sporirea nivelelor FLC este asociat cu conversia unei specii sau ecotip, de la tipul de cretere anual, la unul de plant bianual. La multe specii de plante crescute n zonele temperate, nflorirea se realizeaz ca rspuns la tratamentele cu temperaturi joase. Astfel de plante sunt numite termoinductive. Un exemplu clasic este cel al seminelor anumitor cereale, cum este cazul la gru i secar. Din acest punct de vedere sunt: plante cu vernalizare obligatorie; n general, la plantele lemnoase este necesar expunerea la temperaturi coborte, pentru a putea nflori. Excepie fac Castanea sativa i Siringa vulgaris, la care mugurii florali se formeaz n anul n care are loc nflorirea. plante fr exigene la vernalizare; Spre exemplu: la grul de toamn, seminele germineaz toamna de vreme, perioada de iarn este parcurs sub form de plantul i temperaturile coborte sunt facultative. plante indiferente; Plantele anuale de var (cum este i cazul tomatelor) nu necesit vernalizare, pentru a parcurge ntreg ciclul de via.

210 a) Vernalizarea cerealelor de toamn Grul de primvar se seamn primvara, nflorete n acelai an i este o plant anual. Grul de toamn este bianual, se seamn n toamn i nflorete n vara anului urmtor. Dac grul de toamn nu este expus la temperaturi joase pozitive n primul an de via, nu va nflori normal n cel de-al doilea an. Implicaiile acestor descoperiri au fost de un deosebit interes pentru agricultur n Rusia, deoarece grul de toamn produce mai mult dect cel de primvar, dar nu poate fi cultivat n anumite zone ale Rusiei, cci iernile sunt mult prea reci pentru a supravieui. Experimentele efectuate n anii 1900 n Rusia au demonstrat c dac seminele grului de toamn sunt prembibate i prercite, pot fi semnate n primvar i vor nflori normal n acelai an (chiar n zonele nefavorabile). n urma experimentelor efectuate la secar, soiul Petkus, Gregory i Purvis (1952) au concluzionat c forma de primvar nu necesit vernalizare. Soiul Petkus este o plant tipic de zi lung (LDP) i n astfel de condiii, apexul formeaz structuri reproductive dup circa 7 frunze formate. n zile scurte ns (10 ore) formeaz flori numai dup formarea a 12 frunze. Varietatea de toamn, care germineaz n condiii de temperaturi mari (180C) produce 12 frunze nainte de a nflori. Dac ns seminele germinate sunt inute la circa 10C pentru cteva sptmni, devin precum cele de la varietatea de primvar. De asemenea, se poate produce i devernalizarea, dac seminele germinate se in la 25-400C timp de 4 zile. Vernalizarea nu nseamn totul sau nimic. Este un proces lent, cantitativ, n care prelungirea periodelor de frig cauzeaz o progresiv nflorire mai timpurie, pn cnd este atins un punct de saturaie. S-a considerat c n acest proces ar fi implicat un mesager chimic denumit vernalin. Mesagerul chimic se consider a fi reprezentat de un complex de substane, care se gsesc n mod normal n esuturile plantelor i care determin expresia genelor nfloritului. Rspunsul grului la vernalizare este determinat genetic de ctre genele Vrn-A1, Vrn-B1 i Vrn-D1 (denumite anterior Vrn1, Vrn2 i Vrn3), fiecare dintre acestea avnd una sau dou forme alele (Kosner i Pnkov, 2002). Situsul de aciune al vernalizrii pare a fi meristemul tulpinal al embrionului. Efectul nregistrat astfel este transmis pe parcursul germinrii i a creterii plantelor, pe calea diviziunii celulare succesive, precum i pe parcursul ramificrii sistemului radicular. Prin urmare, exist o clar separare temporal ntre perceperea frigului i comutarea de la creterea vegetativ, la creterea reproductiv. La unele specii, aceast memorie a vernalizrii poate fi meninut pn la 330 zile (Lang, 1965). Flood i Halloran (1986) au precizat c vernalizarea poate avea loc n trei stadii ale ciclului de cretere a plantelor de gru: pe parcursul germinrii, pe parcursul creterii vegetative i pe parcursul formrii seminei la nivelul plantei mam. Cercetrile recente i analiza molecular a celor dou gene, Vrn-A1 i Vrn-B1, precum i studiul efectelor asupra expresiei FLC sugereaz faptul c meninerea vernalizrii prin diviziuni multiple este o Fig. 9. 44. Model al reglrii genelor vernalizrii i fotoperioadei, de ctre reminescen a fenomenului epigenetic. Modificrile modificrile factorilor de mediu, la strilor epigenetice sunt adesea corelate cu dezvoltarea cerealele de toamn fotoperiodic unor alterri impuse n metilarea ADN genomic i n senzitive (dup Distelfeld i al., 2009) structura la locusul FLC, ca baze ale acestei memorii celulare a vernalizrii (Habu i al., 2001). n figura 9.44. este prezentat un model care ilustreaz expresia principalelor gene ale vernalizrii i fotoperioadei, pe parcursul creterii cerealelor de toamn fotoperiodic senzitive.

211 b) Vernalizarea plantelor bianuale Aceste plante (la care ciclul de via se ncheie n doi ani) necesit un sezon pentru cretere vegetativ i au nevoie de tratament cu frig pentru a nflori. Sunt i multe plante perene (care nfloresc n fiecare an fr a muri), care au o cerin strict pentru temperaturi joase, n vederea nfloririi. La Hyoscyamus niger (LDP), plant bianual, n primul an se formeaz o rozet vegetativ, cu o rdcin de depozitare a substanelor de rezerv. n al doilea an, dup un numr de zile lungi, se formeaz o tulpin lung cu flori. Vernalizarea plantelor nu se poate face n stadiul de smn sau plantul. Efectul temperaturilor joase este perceput doar dac intervin n faza de rozet, cnd meristemul vegetativ este n stadiul competent pentru perceperea stimulului. S-a constatat c giberelinele (ex. GA3) sunt capabile s nlocuiasc tratamentele cu temperaturi joase. Aceasta nu ndreptete a se afirma cu precizie c tratamentele cu frig ar induce formarea giberelinelor endogene. La Arabidopsis (plant care crete ca o rozet pn la iniierea floral, cnd se formeaz tulpini florale lungi) acidul giberelic este factorul major care st la baza formrii tijelor florale. Vernalizarea nu doar sporete biosinteza GA n rozeta vegetativ, ci de asemenea sporete senzitivitatea tulpinii la GA (Oka i al., 2001). c) Vernalizarea plantelor perene La Geum urbanum frunzele sunt dispuse n rozet, iar subteran prezint un rizom. Primvara apar lstari, pe care se formeaz flori. Mugurele terminal al rozetei nu se vernalizeaz i astfel se asigur perenitatea. Numeroase date interesante referitoare la aceast specie se regsesc ntr-o lucrare ampl a lui Taylor (1997). La plantele lemnoase, efectele temperaturilor joase pot fi n relaie cu reducerea perioadei dormanei la muguri i activarea genelor endogene. Spre exemplu, n mugurii de Juglans regia s-au gsit nhibitori puternici toamna i iarna. Primvara de vreme, acetia sunt nlocuii de ctre substane stimulatoare, n special gibereline. Se menioneaz faptul c, probabil, giberelinele contribuie la vernalizare, chiar n condiii naturale. Din punct de vedere fiziologic, ntre vernalizare i dorman sunt numeroase similariti (Metzger, 1996): pentru inducia nfloririi i inducia ieirii din dorman, optimum de temperatur este cuprins ntre 0-100C; situsul de percepie este reprezentat de regiunile meristematice ale mugurelui; perioada de frig pentru ieirea din dorman este similar cu cea care asigur inducia unei nfloriri maxime. Termoperiodismul Termoperiodismul reprezint procesele de rspuns ale plantelor la diferite optimumuri de temperatur pe parcursul zilei i al nopii. Modificrile periodice zilnice ale optimului de temperatur sunt manifestri ale ritmurilor endogene, controlate de ceasul fiziologic. Spre exemplu, la tomate (Lycopersicon lycopersicum) creterea cea mai bun se realizeaz n condiiile de lumin date, dac temperatura este de circa 26oC ziua i 17-20oC noaptea. Efectul pozitiv al temperaturilor mici se manifest numai dac acestea acioneaz noaptea, nu pe parcursul zilei. Modificrile de temperatur sunt de asemenea favorabile pentru legarea fructelor. Condiiile optime sunt atunci cnd noaptea temperaturile sunt cuprinse ntre 15-20oC. De asemenea, termoperiodismul are un rol deosebit de important pentru nflorirea plantelor cu bulbi i rizomi (lalea, narcise, zambile etc.). Primvara de vreme, graie rezervelor din bulb apar

212 frunzele, apoi rapid apare floarea sau inflorescena. Dup nflorire, se reconstituie un nou bulb la lalea sau vechiul bulb nchide noi tunici, ncepnd a se forma din centrul bulbului, unde se acumuleaz rezerve. La sfritul primverii (iunie), frunzele se usuc i mugurii rmn n repaus toat vara, n solul mai mult sau mai puin cald. n timpul acestei perioade, mugurele apical poate s diferenieze, n momentul cnd frunzele s-au uscat. Dac bulbul este foarte mic, el va rmne vegetativ. Solul trebuie s ating 8-9o C, pentru ca organele formate s treac starea de dorman i s poat primvara urmtoare s nfloreasc. Este deosebit de important cunoaterea diferitelor stadii de dezvoltare a bulbilor i exigenele termice optime pentru fiecare dintre acestea. Astfel, va fi posibil s plasm bulbul matur (dup uscarea prii aeriene) n condiii care vor accelera organogeneza. Se va permite astfel obinerea de flori i n alt perioad, conform cu cerinele. Olandezii (mari productori de bulbi) sunt interesai n mod deosebit de aceast organogenez. Iat spre exemplu, la Tulipa se disting urmtoarele stadii: I- mugurele apical nc vegetativ; II- debutul organogenezei; P1- ciclul extern de perigon format; P2- ciclul intern de perigon format; A1- primul rnd de stamine format; A2- al doilea rnd de stamine format; G- formarea gineceului n luna iunie, bulbii se gsesc mai mult sau mai puin n stadiul II. Referitor la condiiile de asigurat pentru inducia floral, se practic diferite scheme de tratament. La Hyacinthus apare o inflorescen, iar dezvoltarea ncepe cu florile de la baz. Stadiile parcurse sunt: I- mugure apical nc vegetativ; II- nceputul formrii inflorescenei; Pr- primii muguri florali vizibili; Br.- bracteea este vizibil P1- primul ciclu cu petale formate; P2- al doilea ciclu cu petale formate; A1- formarea primului ciclu de stamine; A2- al doilea ciclu de stamine formate; G- formarea ginecelui. ntre 15-20 iunie, cnd plantele sunt n stadiul I sau II, sau mai devreme, se ncepe pregtirea pentru forat. Dac stadiul II este atins sau chiar depit, se poate ncepe pregtirea cu temperaturi ridicate, cu 23oC timp de 10 zile, la sfrit obinndu-se inflorescene mari. 9.5. Fiziologia legrii, maturrii i senescenei fructelor Legarea fructului reprezint creterea rapid a ovarului, care se realizeaz de obicei dup polenizare i fecundare, procese care au o importan deosebit pentru producerea de semine viabile. Sunt ns i situaii cnd se dezvolt fructe fr a avea loc polenizarea i fecundarea, iar procesul este denumit partenocarpie. Partenocarpia poate fi: vegetativ (fructul se dezvolt fr polenizare, ex.ananas) sau stimulativ (necesit stimulul polenului, fr ns o ulterioar fecundare pentru a lega fructul, ex. strugurii Black Corinth). Aplicarea auxinelor sintetice precum NAA s-a dovedit eficace n promovarea legrii fructelor la cpun, tomate, vinete. Citochininele sintetice au mbuntit legarea fructelor la struguri. Creterea numrului fructelor legate s-ar putea explica prin capacitatea citochininelor de a mobiliza asimilatele, ctre zona unde s-au aplicat. n privina maturrii fructelor, trebuie n primul rnd fcut distincia dintre procesele de: maturitate de recoltare, maturitate de consum (ripening) i senescen (Dennis Jr., 1986). Spre

213 exemplu, n cazul merelor, la maturitatea de recoltare fructele ajung la capacitatea de a se coace propriu zis. Coacerea fructului (ripening) este procesul n cursul cruia fructul matur devine n totalitate edibil i include numeroase evenimente fiziologice. Senescena esutului unui fruct urmeaz maturitii de consum i este un proces de deterioare, conducnd eventual la moarte. Maturarea fructelor este un proces natural, ireversibil, iar la anumite fructe este asociat cu un climacteric respirator (ex. mere) sau facilitat prin detaarea fructului de pe pom. Mrul fiind un fruct climacteric, etilena endogen se menine n limite mici (< 0,1 ppm) pn la maturitate, apoi crete rapid permind maturarea. Aceasta include creterea ratei respiraiei (climacteric), sinteza de enzime, scderea fermitii mezocarpului, conversia amidonului la glucide simple, sinteza substanelor volatile etc. (Pech i al., 1994). Maturarea fructelor i manipularea procesului prezint o importan deosebit n practica horticol. Tomatele au servit ca model primar pentru studiul dezvoltrii i maturrii fructelor (Giovannoni, 2007), fiind descrise cteva gene implicate n procesul de expansiune celular, n relaie n special cu diviziunea celular i ciclul celular. Procesul de maturare a fost studiat mai mult, au fost descrise gene importante, precum cele care regleaz etilena, aa cum reliefeaz rezultatele obinute de Vrebalov i al. (2009). Cercetrile n domeniu i practicile postrecolt au menirea s prelungeasc durata de pstrare a fructelor, prin ntrzierea fazei de senescen i controlul procesului de ripening a fructelor recoltate n stadiu de fruct matur, dar necopt. Aceasta se poate realiza prin scderea temperaturii lor sau prin modificarea compoziiei gazoase a mediului de pstrare, respectiv scderea concentraiei de O2 i a concentraiei de etilen i adjustarea corespunztoare a concentraiei de CO2 (Bower i Cutting, 1988). Pentru un anumit fruct (specie), o rat mrit a respiraiei este de obicei asociat cu reducerea perioadei vieii de raft. De asemenea, rata respiraiei indic rata deteriorrii calitii i valorii nutritive (Phan i al., 1975). Cunoaterea modificrilor metabolice asociate cu maturitatea de consum este esenial pentru mbuntirea pstrrii fructelor proaspete, precum i pentru prevenirea dereglrilor fiziologice care pot fi iniiate pre sau postrecoltare (Burzo, 1986; Delian i al., 1996, 2000; Dilley, 2000). Este cunoscut faptul c etilena este implicat n acest proces n cazul multor fructe. Modalitatea de valorificare a acestor cunotine poate fi urmtoarea: pentru a grbi i a uniformiza maturitatea de consum (conform cu cerinele pieei) pot fi aplicate tratamente cu etilen, substane chimice care elibereaz etilen sau compui care stimuleaz biosinteza acestui hormon; pentru a ntrzia maturarea (n scopul prelungirii vieii de raft) se provoac blocarea sintezei etilenei sau a aciunii ei, ori eliminarea etilenei din jurul fructelor. n privina direciilor de viitor pentru tehnologia postrecolt a produselor horticole, date interesante sunt prezentate n lucrarea de sintez a lui Sharples (1990). De asemenea, aspecte privind biologia maturrii i senescenei merelor au fost prezentate de Dilley i al.(1993). 9.6. Senescena, abscisia i moartea Ciclul de dezvoltare al plantelor presupune parcurgerea fazelor de tineree (perioad n care predomin procesele de cretere i n care planta nu este apt s nfloreasc), de maturitate (n cadrul creia planta conine esuturi juvenile, dar i adulte, diferite din punct de vedere morfologic i fiziologic, ultimele fiind capabile s produc flori) i respectiv faza de mbtrnire sau senescen, care culmineaz cu moartea (moartea natural reprezint punctul culminant al senescenei). Derularea acestor faze difer n funcie de specia de plant: la anumite plante perene, ntreaga parte suprateran moare n fiecare an (rdcinile ns supravieuiesc i dau natere la noi muguri); la plantele anuale, ntreaga plant moare n fiecare an, exceptnd seminele etc.

214 Senescena poate fi observat fie la toat planta sau la unele pri ale plantei: frunze, flori, fructe. Senescena este un proces fundamental n cadrul dezvoltrii plantelor superioare. Este un proces controlat genetic, aflat sub aciunea factorilor de mediu i n strns interdependen cu hormonii vegetali. Dei se manifest difereniat n cadrul a diferite organe ale plantelor, din punct de vedere biochimic, procesele care au loc par a fi similare. Natura biochimic a acestora nu este pe deplin elucidat, dar se pare a fi reglate de procesele de transcripie a ADN, alturi de care un rol deosebit revine hormonilor. Dac mbtrnirea (aging) este un proces pasiv (indus de numeroi factori, mai ales exogeni, cu inducerea unui declin graduat al proceselor fiziologice: n special al funciilor genetice i membranale), fa de care organismele difer n privina susceptibilitii lor, senescena este considerat un proces activ, ordonat, n cadrul cruia pare a fi implicat sinteza de nou ARN i de enzime noi. Ca argumente n acest sens pot fi: capacitatea condiiilor lipsite de oxigen i a nhibitorilor respiraiei de a bloca simptomele senescenei, fr omorrea esuturilor, cel puin nu foarte repede; multe procese care par a fi componente ale senescenei, necesit energie. De altfel, meninerea structurilor i a activitii mitocondriale pn foarte trziu n cadrul fazei de senescen este nc o dovad a importanei acestor organite (uzine energetice) n aceste procese. Ambele procese ns conduc la pierderea homeostaziei, ceea ce provoac moartea unei celule, a unui grup de celule sau ale organismului ca ntreg. Datorit importanei economice a senescenei s-au efectuat numerose cercetri pentru ntrzirea sa, folosind tratamente hormonale ale plantelor ca ntreg, ale unor organe ale plantelor sau a organelor detaate de plant, practic frecvent postrecoltare. Dup Leopold (1961) senescena este de 4 tipuri: 1) Senescena total la plantele anuale, unde toate prile aeriene devin senescente i ntreaga plant moare, dup parcurgerea fazei reproductive. Senescena apare mai nti la flori, fructe, frunze i n cele din urm la rdcini. 2) Senescena prii superioare apare n prile aeriene, iar prile subterane rmn dorminde n perioade nefavorabile (cnd devin senescente prile supraterane). n perioade favorabile, aceste tulpini/rdcini dorminde dau prin nmugurire noi plante. Este tipul de senescen comun plantelor perene. 3) Senescena plantelor lemnoase are loc numai n frunzele plantelor, iar aceasta ajut simultan planta s reziste condiiilor nefavorabile, prin minimizarea transpiraiei i competiiei pentru nutrieni. 4) Senescena progresiv este una gradual, care apare nti la frunzele btrne, n continuare la noile frunze, apoi la tulpin i n final la sistemul radicular. n privina necanismului senescenei au fost propuse trei teorii: 1) Teoria nutriional a fost propus de Molisch n 1928. Se consider c deficiena nutriional este cauza senescenei. Fructele i apexurile n cretere sunt utilizatori marcani de nutrieni. Eliminarea fructelor, seminelor sau vrfurilor tinere asigur mai muli nutrieni frunzelor i ntrzie senescena. Dar, teoria nu este universal valabil. Senescena nu poate fi ntrziat la plante anuale cu fructe, prin aplicarea de ngrminte. 2) Teoria hormonal consider implicarea acidului abscisic i al etilenei. Nooden i Leopold (1978) au propus termenul de hormonul morii, pentru agentul cauzal al senescenei. Poate fi un produs chimic al seminelor n curs de dezvoltare, care se transloc prin xilem, ctre prile vegetative, la specii monocarpice. Ar fi ceva diferit de etilen i acid abscisic. De altfel, nu a fost detectat un astfel de compus. Au fost ns izolate trei substane:

215 acidul 4 clor indol acetic; 4 clor acetil aspartat mono etil ester i acidul jasmonic, care ar putea aciona ca hormoni ai morii. De asemenea, deficiena n auxine i citochinine poate induce senescena. Senescena este rezultatul alterrii balanei hormonale, care previne genele s continue codificarea acelorai enzime, aa cum era situaia la celulele mai tinere. 3) Teoria exudrii de enzime hidrolitice de ctre vacuole. Pierderea progresiv a semipermeabilitii bistratului lipidic al tonoplastului are ca efect scurgerea de substane i pierderea funcionalitii membranelor. Ruperea tonoplastului elibereaz enzimele hidrolitice, care diger materiale celulare, asemenea lizozomilor celulelor animale. Abscisia este procesul fiziologic de detaare a unui organ multicelular (frunze, flori, fructe) de planta mam. Abscisia urmeaz fazei finale a senescenei i reprezint ultima faz a vieii organului. Din punct de vedere morfologic i anatomic, la jonciunea organului cu corpul plantei se formeaz o zon de separaie (abscisie): la frunze, la baza peiolului, la nod; la frunze compuse, la jonciunea pulvinulilor i la esuturile suport. nainte de abscisie frunzele pot fi fie galbene, fie moarte. Zona de abscisie este format din 1,2 rnduri de celule sau mai multe celule parenchimatice: fr lignin i suberin; cu protoplasma dens; mult amidon; spaii mici intercelulare i plasmodesme puternic ramificate. Lamela median se dizolv i conectarea se mai face slab prin esutul vascular, urmnd ca i acesta s se rup. Dup abscisie, stratul extern de celule, tulpina sau ramura formeaz un strat protector, prin dezvoltarea peridermului, respectiv a celulelor suberificate. n vasele conductoare se formeaz tiloze pentru blocaj. Din punct de vedere biochimic, se intensific producerea enzimelor hidrolitice (celulaze, enzime pectice etc.). Pectaii de calciu din lamela median sunt hidrolizai la acid pectic i pectin solubil n ap. Crete activitatea peroxidazei, ceea ce determin distrugerea auxinei. Auxina i citochinina ntrzie abscisia, n timp ce acidul abscisic i etilena accelereaz procesul. Moartea este o consecin fireasc a vieii i intervine atunci cnd metabolismul nceteaz. 9.7. Factorii care influeneaz creterea i dezvoltarea plantelor 9.7.1. Factorii externi care influeneaz creterea i dezvoltarea plantelor Procesul de cretere i dezvoltare a plantelor este influenat de numeroi factori externi (temperatur, lumin, umiditate, gravitaie, electricitate, magnetism, substane minerale din sol, oxigenul din sol, etc.), precum i de factori interni, dintre care cele mai semnificative efecte sunt date de hormonii vegetali. Temperatura influeneaz creterea plantelor n mod difereniat, prin punctele cardinale de cretere (minim, optim i maxim) specifice fiecrei specii de plante. Rspunsul plantelor la aciunea temperaturii este denumit termomorfogenez. Rspunsul plantelor fa de variaiile de temperatur se supune legii lui Van, t Hoff. Dac temperatura crete cu 10oC (n intervalul 5oC-35oC), rata creterii se mrete de 2-3 ori. Temperatura la care se nregistreaz cea mai intens rat de cretere se denumete temperatur optim, iar cea la care ncepe procesul se numete temperatur minim. Valorile acestor temperaturi sunt diferite n raport cu genotipul, probabil datorit diferenelor n ceea ce privete Q10 de temperatur a unor enzime sau din cauza intensificrii sau scderii sintezei sau activitii acestora. n general, temperaturile mai mari de 30oC reduc rata creterii. Temperaturile aa numite cardinale (minim, optim i maxim) nu sunt constante, ci se modific odat cu vrsta plantei. Se consider c ar exista la fiecare specie un aa numit optimum armonic de temperatur, la care toate funciile fiziologice decurg cu maximum de intensitate. Pentru o anumit specie, cerina pentru temperatur poate fi exprimat prin constanta termic vegetativ. Aceasta reprezint suma temperaturilor medii zilnice de pe parcursul perioadei de vegetaie. Spre exemplu: constanta termic vegetativ la cartof este 1300-3000oC, la porumb 2370-3000oC, iar la grul de toamn 2560-3000oC (ebanek, 1992).

216 Un rol deosebit n modificarea ritmului de cretere l prezint schimbrile de temperatur de la zi, la noapte. Astfel, la unele specii care i au originea n zonele temperate, procesele de cretere sunt cu att mai intense, cu ct diferena de temperatur de la zi, la noapte este mai mare. De exemplu: la tomate se realizeaz o cretere normal, dac diferena de temperatur de la zi, la noapte este de minim 7oC, respectiv circa 25oC ziua i circa 18oC noaptea. Diferena dintre temperatura zilei (DT) i temperatura nopii (NT) (definit ca DT minus NT = DIF) influeneaz puternic lungimea internodiilor i nlimea plantei (Moe i Heins, 1990). Plantele crescute n condiii de DT>NT sunt mai nalte la maturitate, dect cele crescute la DT<NT. n privina termomorfogenezei, din multe puncte de vedere exist asemnri cu fotomorfogeneza, respectiv: lumin roie (Pr/Pfr >) = DT < NT; lumin rou ndeprtat (Pr/Pfr <) = DT > NT. Lumina este un factor reglator al creterii i dezvoltrii plantelor (Briggs i al., 1996). Ea influeneaz procesul de cretere prin intensitatea sa (fiind cunoscute plante fotofile i ombrofile), prin durata sa de aciune (spre exemplu plantele sunt adaptate la condiii de zi scurt sau de zi lung, n funcie de originea lor geografic), ct i prin compoziia sa spectral. Rspunsul plantelor la aciunea luminii este denumit fotomorfogenez. Seminele de salat (Lactuca sativa) sunt sensibile la anumite lungimi de und pe parcursul procesului de germinaie. Astfel, ele germineaz dup iluminare cu lumin roie - R- 660 nm, dar nu germineaz dup iluminare cu lumin rou ndeprtat-FR-730 nm. Efectele luminii roii i rou ndeprtat s-au gsit a fi reversibile, iar efectul total este dependent de tipul ultimei iluminri. S-a emis ipoteza c aceste reacii sunt mediate de fitocrom, cu cele dou forme structurale diferite cunoscute ( Pr - P660 i Pfr - P730) i care se pot transforma una n cealalt, dup iluminare cu o anumit lungime de und. La plantele neiluminate, fitocromul este prezent sub forma Pr. Aceast form este transformat de lumina roie, la forma care absoarbe lumina rou-ndeprtat, deci Pfr. La rndul su, forma Pfr, poate fi transformat napoi la Pr, prin intermediul luminii rou-ndeprtat. Cercetrile au demonstrat c n cele mai multe cazuri, forma fiziologic activ a fitocromului este Pfr, iar n situaia n care nu s-a gsit o relaie direct, a unui rspuns, cu cantitatea de Pfr, s-a considerat ca fiind determinant raportul Pfr/ Pr. De asemenea, n privina proporiei fitocromilor, dac umbrirea crete, scade raportul Pfr/Ptotal. Prin simularea radiaiilor naturale (cu modificarea coninutului n Pr) s-a demonstrat c, cu ct este mai mare coninutul n Pr (respectiv dac este mai mic Pfr/Ptotal), cu att rata extensiei tulpinii este mai mare la plantele de plin soare (Morgan i Smith, 1979). Nu doar lumina este factorul care regleaz apariia i dispariia Pfr, ci Pfr trece spontan n Pr la ntuneric, proces denumit reversia la ntuneric. Privitor la mecanismul de aciune s-a demonstrat c sinteza i activitatea a numeroase enzime se afl sub controlul fitocromului. Dup iluminare cu lumin roie, crete cantitatea total de ARN i n special cea de ARNm. De asemenea, au loc foarte rapid modificri ale plasmalemei (modificarea proprietilor electrice, a potenialului membranal), probabil i datorit modificrilor structurale ale plasmalemei, n legtur cu fitocromul aflat n relaie cu aceasta. De altfel, localizarea fitocromului pare a fi cu precdere n regiunile meristematice, sau zone care au fost nu demult meristematice (ex. muguri, vrful coleoptilului). La nivel celular, s-a gsit a fi localizat att n citosol, ct i asociat organitelor, inclusiv plastidelor i nucleului. Pe lng procesul de germinare a seminelor, lumina influeneaz de asemenea procesul de cretere a organelor plantelor. Astfel, lumina roie stimuleaz creterea tulpinii, dar nhib creterea limbului foliar. n cazul aciunii luminii ultraviolete, creterea tulpinii este mai redus (nanism). Explicaia pare a fi dat de aciunea fotooxidativ a radiaiilor ultraviolete asupra auxinei, hormon stimulator de cretere i favorizarea biosintezei acidului abscisic, care este un hormon ce nhib creterea. n privina intensitii luminii, dac plantele fotofile sunt crescute n condiii de lumin insuficient are loc alungirea exagerat a tulpinii, asociat cu dezvoltarea insuficient a esutului mecanic i a frunzelor (care au un coninut redus de clorofil), iar fenomenul se denumete etiolare.

217 Dimpotriv, plantele crescute n condiii de iluminare optim au tulpini viguroase, frunze colorate intens n verde i dimensiunea lor este apreciabil. Cercetrile efectuate de Moe i Heins (1990) au reliefat c n general lumina roie (R) sau cea caracterizat printr-un raport mare al Pr/Pfr (ex. lmpile fluorescente), aplicat ca metod de prelungire a zilei sau pentru ntreruperea nopii (NI) blocheaz elongaia tulpinii i induce ramificarea lateral. Lumina FR sau cea cu un raport mic al Pr/Pfr (ex. lmpile incandescente) activeaz puternic elongaia tulpinii i nhib ramificarea lateral. Ca urmare, lumina are un rol deosebit n procesul denumit fotomorfogenez. Cunotinele n domeniu permit dirijarea procesului de cretere a plantelor, prin aplicarea tehnologiilor corespunztoare de cultur, n funcie de scopul urmrit. n practica horticol spre exemplu, unele legume precum sparanghel, revent, elin se pstreaz n biloane de pmnt, pentru a asigura o turgescen ridicat a celulelor i frgezirea esuturilor ngropate. La plantele din rsadnie, ritmul de cretere i implicit gradul de vigurozitate poate fi dirijat, prin modificarea regimului de iluminare (fie prin ridicarea ferestrelor, fie prin stropirea geamurilor cu var). Lmpile incandescente (Pfr) i fluorescente (Pr) au efect aproape egal n promovarea nfloririi la unele plante de zi lung (LDP). Totui, lmpile incandescente nu pot fi recomandate ca propice pentru iluminarea fotoperiodic n vederea induciei nfloririi la plantele LDP, dac se doresc a fi compacte, bine ramificate. Se pot folosi lmpi care asigur un raport Pr/Pfr >. 9.7.2. Hormonii vegetali i rolul lor n creterea i dezvoltarea plantelor Termenul de hormon a fost introdus n fiziologia plantelor n anul 1910 de ctre Fitting. Asemenea hormonilor animali, hormonul vegetal s-a definit ca fiind un compus organic sintetizat ntr-o anumit parte a plantei i translocat ntr-o alt parte, unde n concentraii foarte mici provoac un rspuns fiziologic. Denumirea de hormon vegetal sau fitohormon a fost stabilit de un grup de cercettori preocupai de reglarea chimic a creterii i dezvoltrii plantelor, n frunte cu Dr. Thimann, n anul 1948 (van Overbeek i al., 1954). Hormonii vegetali includ substane care stimuleaz creterea, dar i substane care ntrzie astfel de procese. Trebuie fcut distincia ntre hormonii de cretere i regulatorii de cretere. n categoria regulatorilor de cretere sunt cuprinse substane naturale, dar si substane sintetice, caracterizate printr-o activitate hormonal. n categoria hormonilor de cretere sunt cuprinse doar substanele produse n mod natural n plante i care se caracterizeaz prin activitate hormonal. Prin urmare, toi hormonii de cretere sunt regulatori de cretere, n schimb, nu toi regulatorii de cretere sunt hormoni de cretere. 9.7.2. 1. Mecanismul general de aciune a hormonilor vegetali n primul rnd, pentru ca un hormon s acioneze trebuie s fie prezent n cantitate suficient n celule. n al doilea rnd, hormonul trebuie recunoscut i legat specific de proteine, denumite proteine receptor. n al treilea rnd, proteina receptor trebuie s sufere anumite modificri metabolice, care s permit amplificarea semnalului hormonal sau mesagerului (fig.9.45.).

Fig. 9.45. Ci de transducie a semnalelor la plante

218 Curba doz-rspuns pentru hormonii cunoscui se prezint aa cum se observ n figura 9.46. Referitor la mecanismul de aciune, conform celor dou clase generale de hormoni din sistemele animale (hormoni steroidici i peptidici), ambele regsindu-se probabil i n sistemele vegtale sunt descrise dou moduri de aciune (fig.9.47.). un complex Clasa steroizilor formeaz hormon/receptor n citoplasm, care apoi este transportat n nucleu, unde este sintetizat ARNm, rezultnd un anume rspuns. Pentru a doua clas, legtura hormon- receptor are loc la nivelul plasmalemei, are loc modificarea enzimei adenilat ciclaz i activarea AMP ciclic din ATP, urmnd a aciona ca un mesager secundar pentru un anume rspuns.

Fig. 9.46. Curba doz - rspuns

9.7.2.2. Principalele clase de hormoni vegetali i funciile acestora Principalele clase de hormoni vegetali descrise n literatura de specialitate sunt: auxine, gibereline, citochinine, etilena, acidul abscisic, acidul jasmonic i brassinolide (tabelul 9.4.). n literatura de specialitate hormonii vegetali sunt clasificai ca: hormoni primari: auxine, gibereline, citochinine, acid abscisic, etilen; hormoni secundari: acidul jasmonic, brassinosteroizii, juglona, acidul salicilic, poliaminele; ali hormoni: hormonii peptidici, oligozaharide, fosfolipide, ARNm sau proteine;
Fig. 9.47. Mecanismul de aciune al hormonilor

Astfel, poliaminele i turgorinele pot fi considerate substane cu rol de reglare a creterii plantelor. Dac pn n 1991 hormonii polipetidici i feromonii s-a crezut c se gsesc numai n animale i drojdii, iar plantele nu emit sisteme semnal care includ semnale polipeptidice, astzi, polipeptidele sunt catalogate ca o nou clas de hormoni. n 1991 a fost descoperit un polipeptid alctuit din 18 aminoacizi (hormon cu rol de apare), respectiv sistemin, precum i precursorul su, prosistemin, n frunzele de tomate (Ryan i Pearce, 2001). Sisteminul din tomate a fost primul polipeptid semnal identificat n plante, n cursul unor cercetri privind agentul chimic responsabil pentru inducia sistemic a nhibitorilor proteinazei n frunzele tomatelor. Componentele active s-au gsit a fi reprezentate de fragmente oligogalacturonice derivate din pereii celulari ai celulelor plantelor. De asemenea, s-a gsit c oligogalacturonidele pot activa sinteza fitoalexinelor, substane chimice cu rol defensiv. Codificarea genetic pentru sistemine s-a efectuat la cartof, ardei, dar nu la tomate. n ciuda diferenelor structurale dintre polipeptidele semnal defensive, s-a propus ca polipeptidele derivate din plante, care semnalizeaz genele defensive local sau sistemic s fie denumite sistemine.

219 Fitosulfokinele reprezint o nou clas de hormoni polipeptidici care regleaz diviziunea celular, fiind purificate i caracterizate n suspensia de celule de asparagus. S-a gsit c acestea promoveaz organogeneza n rdcini, muguri i embrioni la diferite specii de plante. Tabelul 9.4. Principalii hormoni vegetali structur i funcii Nr Hormonul vegetal Structur . crt . 1. Auxina (acidul 3- Natura chimic a auxinei, ca acid 3- indolil-acetic) reprezint primul hormon vegetal descoperit la sfritul secolului al XIX-lea, n urma studiilor lui Charles Darwin i ale fiului su Francis asupra creterii plantelor, n special asupra creterii plantelor ctre lumin (fenomen cauzat de o cretere asimetric i denumit fototropism). indolil-acetic (IAA) a fost descris de Kogl i al. (1931). Este sintetizat din indol sau triptofan. Promovarea creterii intervine la concentraii molare de 10-3 pn la 10-8. Astzi, sunt cunoscute de asemenea i un numr de auxine sintetice: acidul - naftil acetic (NAA), acidul indolil-3- butiric (IBA), acidul 2,4- diclorfenoxiacetic (2,4D) etc.

Funcii principale

Aparin unui grup de compui naturali numii terpenoizi. Sunt de fapt diterpene ciclice, rezultate prin condensarea a patru uniti izoprenice cu 5 C. Precursorul apropiat este o diterpen, care conine 4 uniti izopren. Calea de biosintez este cea a acidului mevalonic. Pn la GA12 aldehid, fiecare treapt este asemntoare la toate plantele. De la acest moment, la diferite specii de plante sunt utilizate ci diferite, pentru formarea a peste 100 gibereline cunoscute pn acum. -

2.

Giberelinele au fost descoperite n anul 1926 n Japonia de ctre fitopatologul Kurosawa, ca produs al ciupercii Giberella fujikuroi (stadiul perfect) sau Fusarium moniliforme (forma asexuat), care produce boala foolish seedling la orez (plantele cresc nalte, dar nu produc semine).

elongaia celular (concentraia optim pentru favorizarea procesului este de 10-5 la 10-6 M, iar concentraiile supraoptimale pot avea efect nhibitor, urmare a producerii etilenei i deci a nhibrii creterii prin elongaie); rspunsuri tropice (micri de cretere orientat precum fototropismul i gravitropismul); dominana apical (nhib creterea mugurilor laterali, precum acioneaz i mugurele apical); promovarea formrii rdcinii i favorizarea formrii rdcinilor adventive; stimularea diviziunii celulare, a activitii cambiale la altoire i vindecarea rnilor la plante; creterea fructelor; producerea fructelor n absena seminelor viabile partenocarpia; ntrzierea cderii premature a fructelor, abscisiei frunzelor i promovarea producerii etilenei; iniierea nfloririi i expresia sexelor; auxina ca erbicid etc. favorizeaz fie elongaia celular, fie diviziunea celular, fie ambele procese; inducerea procesului de legare a fructelor, inclusiv promovarea partenocarpiei i efecte asupra diferenierii sexelor; nflorirea i pigmentarea florilor; mobilizarea compuilor organici de rezerv, efecte asupra germinrii seminelor i dormanei; prevenirea senescenei etc.

3.

Citochininele sunt derivai purinici, descoperii n urma studiilor cu privire la

Citochininele pot fi naturale sau sintetice. Din punct de vedere structural, baza citochininelor o reprezint adenina (aminopurin), cu lanul lateral legat de o

diviziunea celular; elongaia celular; regenerarea in vitro i formarea organelor;

220
factorii care stimuleaz nutriia i regenerarea culturilor de esuturi vegetale. grupare NH2 n poziia 6. Alte substane cu aciune citochininic au o structur complet diferit, aa cum sunt derivaii ureei (ex. difenilureea). germinarea seminelor, creterea celulelor i morfogenez; ntrzierea senescenei; promovarea translocrii substanelor etc. inducia dormanei seminelor i mugurilor; abscisia; hormon de stres; efecte asupra nfloririi plantelor etc.

4.

Acidul abscisic (ABA) a fost descoperit ca un nhibitor de cretere, cu rol deosebit n dormana seminelor i mugurilor. Este considerat un hormon de stres (indus de lipsa apei, soluri saline, temperaturi joase i nghe). Etilena reprezint singurul hormon vegetal de natur gazoas, sintetizat n cantiti mici de ctre plante i care pare a coordona numeroase rspunsuri fiziologice i morfologice ale plantelor Brassinosteroizii (brassinolidele) sunt steroizi izolai din grunciorii de polen ai plantelor de rapi. Astzi, se cunosc a fi prezeni i n alte specii.

Este alctuit din trei uniti izoprenice (15C). Prin urmare, este un terpenoid,cu strnse legturi cu carotenoizii. Biosinteza sa se realizeaz pe dou ci alternative: fie pe o cale direct, din acidul mevalonic, fie o cale indirect, care implic ruperea unui precursor carotenoid, alctuit din 40 atomi de carbon.

5.

6.

Etilena (C2H4) se sintetizeaz din Sadenozil-L-metionin, pe calea acidului 1aminociclopropan -1-carboxilic (ACC). Enzimele care catalizeaz cele dou reacii sunt: ACC sintaza i ACC oxidaza. Semnalele din mediu, ct i cele endogene regleaz biosinteza, n principal prin expresia difereniat a genelor ACC sintazei, care reprezint enzima cheie responsabil de reglarea producerii etilenei. Dei biosinteza lor nu a fost pe deplin elucidat, toi brassinoizii naturali sunt cunoscui a fi derivai ai 5-cholestanului. Din punct de vedere chimic, sunt similari hormonilor steroizi animali. Exist aceleai gene, care codific sinteza steroizilor.

maturarea fructelor; senescena la plante; nflorirea i expresia sexelor; factor de stres; abscisia frunzelor i fructelor etc.

considerai ca avnd efecte pleiotrope (influeneaz creterea plantelor, germinarea seminelor, rizogeneza, nflorirea i senescena); acioneaz att n modificarea metabolismului plantei, ct i n protejarea fa de factorii de stres; acioneaz n general n relaie cu ali hormoni (unul dintre cele mai importante efecte pare a fi relaia strns cu IAA, cu care acioneaz sinergic) etc. este implicat n realizarea reaciei de hipersenzitivitate (HR), adic aceea restricionare a infeciei patogenului, la nivelul unei suprafee mici, n jurul punctului iniial de penetrare i apariia unei leziuni necrotice i respectiv inducia morii celulare programate (PCD) etc.

7.

Acidul salicilic (SA) reprezint o important molecul semnal n plante. Este un compus fenolic, implicat n procesul inducerii rezistenei sistemice dobndite (SAR) mpotriva unui spectru larg de ageni patogeni (ciuperci, bacterii i virusuri). Acidul jasmonic (JA) i alte structuri derivate precum metil jasmonatul (MeJA) sunt substane cu

Studiile efectuate au indicat faptul c acidul salicilic provine din fenilalanin, pe calea acidului cinamic i acidului benzoic. Cercetrile recente au precizat c procesul de sintez a SA urmeaz calea izocorismat.

8.

Sinteza jasmonailor se realizeaz din acidul linolenic, care este oxidat de ctre lipoxigenaz (LOX), cu formare de acid 13-hidroperoxilinolenic

- regleaz rspunsurile de aprare ale plantei fa de stresul biotic (anumii patogeni i insecte), dar controleaz i procese de dezvoltare etc.

221
funcii semnal derivate din lipide Poliaminele sunt compui organici cu azot, cationici, cu greutatea molecular mic. Cele mai rspndite poliamine n plante sunt putrescein (diamin) (1,4diaminobutan), spermidin (triamin) (4-azaoctan-1,8diamin) i spermin (tetraamin) (4,9diazadodecan-1,12diamin).

9.

n timp ce biosinteza poliaminelor la multe organisme este iniiat prin decarboxilarea ornitinei (Orn) cu formarea putresceinei pe calea Orn decarboxilazei (ODC), plantele i multe microorganisme pot genera putresceina din arginin (Arg), pe calea Arg decarboxilazei (ADC) i agmatin ureohidrolazei sau agmatin iminohidrolazei

- sunt implicate n numeroase procese ale reglrii senescenei i morfogenezei, precum i n rspunsul la aciunea factorilor de stres

ntrebri 1. Creterea i dezvoltarea plantelor: definiii i aspecte generale. 2. Care sunt etapele creterii celulare ? 3. Cum se explic elongaia celular ? 4. Precizai principalele particulariti ale creterii organelor plantelor. 5. Care este mecanismul general de realizare a micrilor de cretere la plante ? 6. Precizai tipurile de micri ale plantelor fixate n sol, explicai mecanismul specific de realizare a acestora i importana biologic. 7. Precizai principiile de baz ale formrii florilor. 8. Ce reprezint fotoperiodismul ? Dai exemple de plante fotoperiodic senzitive. 9. Cum explicai implicarea fitocromului i florigenului n fotoperiodism. 10. Ce reprezint vernalizarea ? Exemple. 11. Ce sunt hormonii vegetali i care este mecanismul general de aciune al acestora ? 12. Precizai principalele tipuri de hormoni vegetali i rolul lor fiziologic.

Bibliografie selectiv Asin, L. i Vilardell, P. 2006. Effect of paclobutrazol and prohexadione-calcium on shoot growth rate and growth control in Blanquilla and Conference pear. Acta Horticulturae, Vol. 727: 133138. Bergmann, D.C. 2004. Integrating signals in stomatal development. Current Opinion in Plant Biology, Vol. 7: 26- 32. Bnning, E. 1973. The Physiological Clock, Third edition, London. Costa, S. i Shaw, P. 2007. Open minded cells: how celll can change fate. Trends in Cell Biology, Vol. 17: 101- 106. Darwin, C. 1880. Power of movement in Plants (John Murray: London). Distelfeld, A., Li, C., Dubeovsky, J. 2009. Regulation of flowering in temperate cereals. Current Opinion in Plant Biology, Vol. 12: 178-184. Gallangher, S. i al. 1988. Light induced changes in proteins found associated with plasma membrane fractions from pea stem sections. Proc. Natl. Acad. Sci., Vol. 85: 8003 8007. Gowda, V.N. i al. 2006. Influence of GA3 on growth and development of Thompson seedless grapes (Vitis vinifera L.). Acta Horticulturae, Vol. 727: 239- 242. Greene, D.W. 2006. Effect of auxin inhibitors on fruit growth and fruit set of McIntosh, Delicious and Golden Delicious apples. Acta Horticulturae, Vol. 727: 225- 262.

222 Kidner, C.A. 2010. The many roles of small RNAs in leaf development. J. Genet. Genomics, Vol. 37: 13-21. Liscum, E. i Reed, J.W. 2002. Genetics of Aux/IAA and ARF action in plant growth and development. Mol. Biol., Vol.49: 387 400. Mathews, S. 2010. Evolutionary studies illuminate the structural-functional model of plant phytocromes. The Plant Cell, Vol.22: 4-16. Minorsky, P.V. 2002. No role for actin in stem gravitropism. Plant Physiology, Vol. 128: 325- 326. Minorsky, P.V. 2002. Trigonelline: A diverse regulator in plants. Plant Physiology, Vol. 128: 7- 8. Ohmori, S., Kimizu, M., Sugita, M., Miyao, A., Hirochika, H., Uchida, E., Nagato, Y., Yoshida, H. 2009. MOSAIC FLORAL ORGANS1, an AGL6-like MADS box gene, regulates floral organ identity amd meristem fate in rice. The Plant Cell, Vol. 21: 3008-3025. Peterson, K.M., Rychel, A.L., Torii, K.U. 2010. Out of the mouths of plants: the molecular basis of the evolution and diversity of stomatal development. The Plant Cell, Vol.22: 296-306. Rameau, C. 2010. Strigolactonees, a novel class of plant hormone controlling shoot branching. Comptes Rendus Biologies. Vol.338: 344-349. Rodrigues, T.M. i Machadoa, S.R. 2008. Pulvinus functional traits in relation to leaf movements: A light and transmission electron microscopy study of the vascular system. Micron, Vol. 39: 716. Sachs (von), J. 1887. Lectures on the Physiology of Plants (Clarendon: Oxford). Sharma, V.K. i Fletcher, J.C. 2002. Maintenance of shoot and floral meristem cell proliferation and fate. Plant Physiology, Vol. 129: 31- 39. Shimizu- Sato, S i Mori, H. 2001. Control of outgrowth and dormancy in axilary buds. Plant Physiology, Vol. 127: 1405- 1413. Ueda, M. i al. 2001. Molecular approach to the nyctinastic movement of the plant controlled by a biological clock. Int. J. Mol. Sci., Vol. 2: 156 164. Vrebalov, J., Pan, I.L., Arroyo, A.J.M., McQuinn, R., Chung, M., Poole, M., Rose, J., Seymour, G., Grandillo, S., Giovannoni, J., Irish, V.F. 2009. Fleshy fruit expansion and ripening are regulated by the tomato SHATTERPROOF gene TAGL1. The plant Cell, Vol.21: 3041-3062. Zeevaart, J.A.D. 2006. Florigen coming of age after 70 years. The Plant Cell, Vol.18: 1783-1789.

223 CAPITOLUL 10 DORMANA SAU STAREA DE REPAUS LA PLANTE Cuvinte cheie: ecodormana, paradormana, endodormana, dormana plantei ntregi, dormana mugurilor, dormana seminelor Obiective: definirea dormanei i nelegerea mecanismului general al dormanei la plante; cunoaterea diferitelor tipuri de dorman la plante, precum i a factorilor care controleaz inducia, meninerea i ieirea din dorman; REZUMAT Dormana sau starea de repaus la plante reprezint o stare de adaptare la condiiile nefavorabile de mediu, fixat pe cale ereditar. Ea se caracterizeaz prin suspendarea temporar a creterilor vizibile ale structurilor plantei care conin un meristem i prin diminuarea intensitii proceselor fiziologice. Starea de dorman se poate instala la planta ntreag, la muguri i la embrioni. Se disting trei tipuri de dorman: ecodormana, paradormana i endodormana. n privina mecanismului fiziologic al dormanei, concepia clasic susine c rolul principal revine hormonilo. coala francez de fiziologie consider c dormana este controlat genetic. Controlul genetic implic prelucrarea semnalelor din mediul ambiant, transformri moleculare i modificri celulare, care n cele din urm conduc la transformri fiziologice. La plantele lemnoase, dormana se instaleaz la toate organele perene, dar mai nti la muguri, apoi la trunchi, ramuri i n cele din urm la rdcin, cu efecte specifice asupra proceselor fiziologice i efecte la nivel celular. Toamna, momentul care marcheaz intrarea n dorman este cel al cderii frunzelor. Intensitatea maxim a procesului se nregistreaz ns la circa o sptmn, pn la o lun dup cderea frunzelor. Plantele perene, precum pomii din zonele temperate se deosebesc de alte plante, prin capacitatea de a-i suspenda i relua creterile n mod repetat, ca un mecanism de rspuns la factorii de mediu i condiiile datorate sezoanelor. Perenitatea necesit cel puin un meristem cu cretere nedeterminat, care continu creterea n sezonul urmtor. Iniierea, meninerea i eliberarea din dorman a mugurilor implic interaciunea factorilor genetici, chimici i de mediu. O smn n stare de dorman este cea care nu are capacitatea de a germina ntr-o perioad specific de timp, n situaia oricrei combinaii a factorilor fizici normali de mediu, care sunt de altfel favorabili germinrii acesteia, dup ce smna devine non-dormind. Avnd n vedere faptul c dormana este determinat att de factori morfologici, ct i de proprietile fiziologice ale seminei, s-a propus un sistem de clasificare cuprinztor, care include cinci clase de dorman: fiziologic, morfologic, morfo-fiziologic, fizic i combinat (fizic-fiziologic). Germinarea seminelor reprezint un complex de modificri morfologice, anatomice, fiziologice i biochimice, care permit trecerea embrionului de la starea de via latent din punct de vedere biologic, la starea de via activ. Dormana sau starea de repaus la plante reprezint o stare de adaptare la condiiile nefavorabile de mediu, fixat pe cale ereditar. Ea se caracterizeaz prin suspendarea temporar a creterilor vizibile ale structurilor plantei care conin un meristem i prin diminuarea intensitii proceselor fiziologice (Lang, 1987). Dormana poate fi asociat cu diferite structuri ale plantei, care apar n momente diferite ale evoluiei i poate avea drept explicaie adaptarea plantelor la diferite habitate i la condiii climatice variate (Shefferson, 2009). Starea de dorman se poate instala: la planta ntreag (ex. specii lemnoase, arbuti); la muguri (ex. mugurii plantelor lemnoase; cazul unor organe subterane ale plantelor: ex. bulbi, rizomi, tuberculi); la embrioni (ex. semine).

224 Dormana reprezint un mecanism important, care asigur sincronizarea sezonier a creterii. De asemenea, ea are i o important funcie morfogenetic, contribuind la controlul arhitecturii plantei. 10.1 Tipuri de dorman, factori implicai i mecanism fiziologic general Tipuri de dorman i factori implicai Dormana este cauzat de factori interni, precum i de factori externi. Pentru a face diferenierea ntre dormana impus de cele dou categorii de factori, se poate utiliza urmtoarea clasificare : dormana forat aflat sub control exogen (factori externi, precum aprovizionarea cu ap, temperatura, cerine specifice fa de lumin i ali factori de mediu cu caracter limitativ); dormana profund aflat sub control endogen (factori interni, precum cei care previn creterea, chiar dac sunt favorabile condiiile de mediu). Lang (1987) a propus termenul de dorman i un sistem al terminologiei, care poate fi aplicat oricrei structuri a plantei, n raport cu factorul cauzal: A) ecodormana dormana cauzat de unul sau mai muli factori de mediu, care au un efect nespecific (la semine, termenul este similar cu dormana forat); B) paradormana datorat factorilor fizici sau semnalelor biochimice de origine exogen structurii afectate (ex. dominana apical; dormana datorat diferitelor Fig. 10.1. Ciclul a trei tipuri de dorman, structuri care nconjoar embrionul precum i semnalele generale i sezoanele seminelor); asociate cu dormana buruienilor perene, C) endodormana reglat de factori plantelor lemnoase (arbuti i arbori), fiziologici, din interiorul structurii mugurilor tuberculilor respective (ex. dormana profund a mugurilor) (fig.10.1.). Ecodormana este impus de factorii externi de mediu, precum frigul sau stresul hidric, factori care induc semnale critice, care previn creterea. Unul dintre aceste semnale cheie este acidul abscisic. Un set complex al semnalelor hormonale activate de ctre variai factori de mediu i condiii fiziologice este redat n figura 10.2. Paradormana este cel mai bine studiat i uneori se refer la dominana apical sau inhibiie Fig. 10.2. Cile reglrii dormanei la corelativ. Este procesul care permite plantelor s plante aloce resurse pentru reproducere i s controleze (dup Horvath i al., 2003) arhitectura plantei, maximiznd captarea luminii. Totodat, permite regenerarea, n situaia n care intervin daune la tulpini individuale. Endodormana constituie rezultatul modificrilor fiziologice interne la nivelul mugurelui, prevenind creterea pe parcursul tranziiei sezoanelor, cnd condiiile de mediu sunt adesea fluctuante, ntre ceea ce permite sau inhib creterea. Este un mecanism important pentru protecia mugurilor vegetativi, asigurnd nenceperea creterii la nivelul meristemelor, pn cnd nu au revenit condiiile permisive stabile.

225 Semnalele respective interacioneaz n procesul de reglare a fazelor specifice ale diviziunii celulare i dezvoltrii. Etilena i fitocromul joac un rol semnificativ n endodorman. Auxina are un rol deosebit n paradorman. Acidul abscisic, acidul giberelic i citochininele par a juca roluri semnificative, dar antagoniste, n toate cele trei tipuri de dorman. Se remarc de asemenea faptul c acidul abscisic, acidul giberelic, auxina i citochinina au roluri definite n reglarea componentelor specifice ale mecanismului de reglare a ciclului celular. Asemnrile existente n privina semnalelor din mediu care regleaz inducia endodormanei i ieirea din dorman, respectiv a celor care regleaz nflorirea i vernalizarea au reprezentat primele indicii cu privire la conexiunile mecanismelor de semnalizare pentru aceste procese (Horvat, 2009). Mecanismul fiziologic al dormanei Concepia clasic susine c rolul principal revine hormonilor. Dup descoperirea acidului abscisic (ABA) n semine (Milborrow, 1968) s-a precizat c acesta este un inhibitor de cretere i respectiv un stimulator al intrrii n dorman. Substana se acumuleaz n esuturile plantelor din zonele temperate, expuse la fotoperioade scurte i temperaturi coborte. coala francez de fiziologie consider c dormana este controlat genetic i n acest sens au fost identificate gene specifice. Dup Martin (1991), controlul genetic implic prelucrarea semnalelor din mediul ambiant, transformri moleculare i modificri celulare, care n cele din urm conduc la transformri fiziologice. Implicarea factorilor de mediu i efectele ulterioare sunt redate in figura 10.3. Controlul transcripiei poate avea un rol cheie n reglarea rspunsurilor fiziologice, care caracterizeaz fazele distincte ale ciclului celular: activitate - dorman. Represia expresiei ciclinelor de ctre semnalul zilelor scurte reprezint un mecanism cheie al inducerii suspendrii creterii. Astfel, semnalele din mediu pot modula diferite aspecte ale ciclului celular (activitate dorman), prin modularea nivelului hormonilor cheie, precum acidul abscisic i acidul giberelic, acionnd la nivelul transcripiei (Karlberg i al., 2010).

Fig.10.3. Mecanismul fiziologic general al dormanei

226 10.2. Dormana plantei ntregi La plantele lemnoase, dormana se instaleaz la toate organele perene, dar mai nti la muguri, apoi la trunchi, ramuri i n cele din urm la rdcin. Dac facem referire la pomi, toamna, momentul care marcheaz intrarea n dorman este cel al cderii frunzelor. Intensitatea maxim a procesului se nregistreaz ns la circa o sptmn, pn la o lun dup cderea frunzelor, avnd consecine asupra desfurrii unor procese fiziologice i efecte la nivel celular: nceteaz procesul de fotosintez; se anuleaz fora de aspiraie a frunzelor i ca urmare se diminueaz procesul de absorbie a apei (i srurilor minerale) i ascensiunea sevei brute; vasele liberiene sunt blocate cu caloz i se diminueaz translocarea substanelor n plant; scderea temperaturii determin creterea vscozitii citoplasmei, scderea vitezei curenilor citoplasmatici, precum i diminuarea activitii enzimatice (inclusiv diminuarea intensitii respiraiei); pierderea apei determin concentrarea sucului celular i apariia plasmolizei de iarn; din punct de vedere citologic se remarc ntreruperea plasmodesmelor; are loc hidroliza amidonului depozitat ca substan organic de rezerv n organele perene, ceea ce conduce la acumularea glucidelor solubile; pe parcursul dormanei are loc modificarea balanei hormonale, respectiv scade lent coninutul de acid abscisic i se biosintetizeaz hormoni stimulatori de cretere; ctre sfritul iernii, n esuturile aflate n dorman se nregistreaz o intensificare lent a proceselor fiziologice i biochimice, corelat cu ieirea din dorman; primele modificri sunt cele n legtur cu absorbia apei din sol; are loc hidroliza calozei din vasele liberiene; se refac plasmodesmele; se intensific activitatea enzimatic; crete rata respiraiei i respectiv producerea de ATP; se intensific procesele de biosintez i de utilizare a substanelor de rezerv, pentru creterea mugurilor vegetativi i floriferi; se formeaz frunzele, ceea ce permite realizarea procesului de fotosintez. 10.3. Dormana mugurilor la plantele lemnoase Perenitatea Plantele perene, precum pomii din zonele temperate se deosebesc de alte plante, prin capacitatea de a-i suspenda i relua creterile n mod repetat, ca un mecanism de rspuns la factorii de mediu i condiiile datorate sezoanelor. n principiu, perenitatea necesit cel puin un meristem cu cretere nedeterminat, care continu creterea n sezonul urmtor. Iniierea, meninerea i eliberarea din dorman a mugurilor implic interaciunea factorilor genetici, chimici i de mediu. 10.3.1. Fazele i controlul dormanei mugurilor Dup Powell (1987) sunt descrise patru faze ale dormanei mugurilor: I. inducia dormanei Faza se caracterizeaz prin reducerea drastic a concentraiei stimulatorilor de cretere i sporirea evident a activitii inhibitoare, urmare n special a influenei unor factori de mediu (temperatura, lumina); II. meninerea dormanei Metabolismul i stimulatorii creterii se menin la valori reduse. Inhibitorii se afl la concentraii mari. Factorii de mediu fluctuani pe parcursul acestei perioade nu au efect imediat,

227 dar, modificrile lor pot scurta perioada de dorman. Se poate determina ieirea prematur din dorman i chiar expunerea la condiii ulterioare nefavorabile (ex. ngheuri); III.trgaciul Este perioada n care se nregistreaz o senzitivitate excesiv la factorii de mediu sau anumite semnale. Se determin scderea drastic a concentraiei inhibitorilor i o cretere rapid a nivelului stimulatorilor de cretere. IV. dezmuguritul sau germinarea Este faza n care concentraiile mari ale stimulatorilor i mici ale inhibitorilor permit intensificarea activitii enzimatice (fig. 10.4.). Deci, controlul dormanei implic n principal factori endogeni (variaia concentraiilor substanelor stimulatoare de cretere, n raport cu cea a substanelor inhibitoare de cretere), precum i factori exogeni (temperatura, lumina etc.). Ciclului sezonier dintre cretere i dorman i s-a acordat mai puin atenie, mai ales n privina factorilor endogeni (Rohde i al., 1995), n ciuda importanei sale pentru comportamentul plantelor perene. ntr-o lucrare de sintez recent se reconsider acest ciclu, n vederea unei noi definiii pentru dorman (Rhode i Bhalerao, 2007). Din punct de vedere horticol i ecologic, descrierea dormanei n cadrul unei structuri (mugure, cambiu i smn) necesit nelegerea mecanismelor moleculare la nivel celular, care guverneaz tranziia la aceasta i ieirea din dorman.

Fig.10.4. Modificri generale ale nivelului hormonilor vegetali pe parcursul celor patru stadii ale dormanei

Dormana este definit ca incapacitatea de a iniia creterea (fie elongaia, fie diviziunea celular) din meristeme (i alte organe i celule cu capacitate de a nceta creterea) n condiii favorabile. ncetarea creterii reprezint o prim treapt ctre instalarea dormanei i este provocat de factori de mediu precum fotoperioada, frigul sau uscciunea. Fotoperioada este cunoscut de foarte mui ani ca factor ce guverneaz ncetarea creterii la multe plante lemnoase din climatul temperat, inclusiv planta model Populus sp. Frunzele percep fotoperioada i se emite un semnal ctre apex, unde se instaleaz inactivitatea. Odat ce creterea a ncetat, stadiul dormind devine progresiv stabilit i are ca rezultat incapacitatea celulelor meristematice de a rspunde la semnale promotoare ale creterii. Meninerea dormanei nu este pe deplin cunoscut, dar, n mod mecanicist se afirm c celulele meristemului pot fi izolate de substanele stimulatoare de cretere, precum giberelinele. Celulele meristematice sunt simplastic izolate (prin depunerea calozei) de celulele vecine, dup tranziia la endodorman. Ieirea din dorman necesit expunerea la temperaturi joase, asemenea cerinelor vernalizrii. Expunerea de lung durat la temperaturi joase (nu pe termen scurt ca la vernalizare) restabilete capacitatea de a crete, dar nu promoveaz creterea. La arbori i arbuti din zone temperate s-a demonstrat c zilele scurte controleaz ncetarea creterii i inducia dormanei. Cercetrile recente n privina efectelor radiaiilor luminoase roii,

228 rou ndeprtat i albastre asupra creterii i formrii mugurilor au precizat rolul important al sistemului de fitocromi, ca senzor al lungimii zilei. Totodat, se sugereaz rolul unuia sau a mai multor receptori ai luminii albastre. Sistemul de fitocromi interacioneaz aparent cu biosinteza fitohormonilor, n particular gibereline. La unele specii pomicole, precum Malus pumilla Mill i Pyrus communis L. nu s-a determinat vreun efect al fotoperioadei asupra ncetrii creterii i induciei dormanei. n schimb, temperatura joas s-a dovedit foarte eficace (Heide i Prestrud, 2005). Paradoxal este faptul c acelai regim de temperatur care induce dormana acestor specii controleaz i eliberarea din dorman. De asemenea, la un numr de specii la care ncetarea creterii are loc n fotoperioade scurte, o temperatur sczut n cursul nopii poate provoca aceleai efecte, chiar n condiii de zile lungi. Astfel de studii indic faptul c aciunea fitocromului este afectat de temperatur i se sugereaz existena unei ci independente de fotoperioad (Olsen, 2006). n privina interaciunii dintre fotoperioad i temperatur, cercetrile efectuate la specii de Prunus, asemenea altor specii aparinnd subfamiliei Pomoidae, familia Rosaceae au reliefat c aceste specii sunt insensibile la fotoperioadele scurte, la temperaturi relativ mari. Rspunsul fotoperiodic al speciilor de Prunus este puternic dependent de temperatur (Heide, 2008). Ieirea din dormana de iarn este controlat genetic i s-a constatat c se realizeaz dup acumularea unui numr specific de ore cu temperaturi coborte pozitive. Aceast cerin previne creterea pe parcursul perioadelor tranzitorii calde, de pe parcursul iernii. Astfel, dup Richardson i al. (1974), citat de Burzo i al. (2004), doar temperaturile cuprinse ntre 2,50C 9,10 C sunt active pentru ieirea din dorman. Temperaturile cuprinse ntre 12,5 15,9, respectiv cele situate sub 1,4 sunt inactive. Temperaturile situate peste 160 C au un impact negativ asupra ieirii din dorman a mugurilor. Necesarul de uniti de frig variaz cu specia i soiul (Malus : 200 -2000; Persica: 200 1100; Cerasus: 500- 1300; Armeniaca: 150- 900). Conversia temperaturilor n uniti de frig este prezentat n tabelul 10.1. O unitate de frig const n expunerea mugurilor timp de o or la temperaturi active specifice. La mr i pr, la care ncetarea creterii i inducia dormanei sunt controlate de temperaturile joase i nu de fotoperioad s-a determinat c sunt necesare temperaturi de 60C sau 90C pentru cel puin 6 sptmni, n vederea ieirii din dorman i reluarea creterii (Heide i Prestrud, 2005). Tabelul 10.1. Conversia temperaturilor n uniti de frig Temperatura (0C) 1,4 1,5 2,4 2,5 9,1 9,2 12,4 12,5 15,9 16,0 18,0 18,1 21,0 21,1 23,0 Uniti de frig 0 0,5 1,0 0,5 0 -0,5 -1,0 -2,0

Dei acest tip de dorman are o deosebit importan i prezint multiple caracteristici comune cu dormana seminelor, progresul cunotinelor n domeniu este mai lent, comparativ cu studiile privind dormana seminelor. La via de vie, n cazul aplicrii tratamentelor cu frig s-a nregistrat o faz a endodormaei, pn la 400 uniti de frig, apoi, a urmat ecodormana (fig. 10.5.). Dormana mugurilor a fost divizat n dou faze:

229 de la zero, la 300 uniti de frig, caracterizat prin creterea concentraiei zaharozei, prolinei, putresceinei i spermidinei, ceea ce indica aclimatizarea la temperatura joas pozitiv; dup acumularea a 300 ore de frig, caracterizat prin activarea marcant a activitii invertazei acide, acumularea glucidelor solubile i declinul putresceinei / spermidin, ca un nceput al relurii creterii, direct responsabile pentru procentul mare de dezmugurire. Creterea activitii invertazei acide asigur mugurilor capacitatea de a atrage din esuturile nconjurtoare carbon, iar spermina i spermidina activeaz meristemul, care reia creterea activ (Mohamed i al., 2010).

Plantele lemnoase perene au diferite tipuri de muguri (apicali, adventivi, axilari) i n plus intervin problemele tehnice. Pomii sau arbutii trebuie crescui i meninui n condiii controlate, pentru a imita ciclul anual de cretere. Printre aspectele comune se pot aminti: temperaturile optimale i limitele de variaie pentru ieirea din dorman; cerinele de frig pentru muguri i semine; reducerea potenialului de cretere atunci cnd frigul este ntrerupt cu temperaturi mari sau stimularea, ori inhibarea germinrii/ dezmuguritului prin intermediul hormonilor (Powell, 1987).

Fig. 10.5. Efectul tratamentelor cu frig asupra ieirii din dorman a mugurilor la via de vie (dup Mohamed i al., 2010)

10.4. Dormana altor muguri Dormana la tuberculii de Solanum tuberosum Deoarece tuberculii sunt tulpini subterane modificate, ei prezint anumite caracteristici specifice tulpinii. Ochiurile lor sunt muguri axilari i rmn inactivi n prezena mugurelui apical. Dormana se instaleaz i are o intensitate maxim, ct timp tuberculii sunt fixai nc pe plant. Cnd sunt tiai n fragmente pentru plantat, dominana apical este pierdut i mugurii cresc, dac dormana este ntrerupt. Spre deosebire de semine, tuberculii de cartof necesari pentru consum, dar i pentru plantare n vederea nfiinrii unei noi culturi se pstreaz n stare hidratat. Ca urmare, fiind foarte perisabili, este esenial asigurarea unor condiii post-recolt care s previn pierderile. Practica impune i utilizeaz metode pentru a prelungi dormana peste iarn, inclusiv tratamente chimice

230 (Sorce i al., 2005), pentru ca preul n momentul vnzrii s fie ct mai mare. Dormana care i caracterizeaz i care se afl sub control genetic (Parish i Cobb, 1998) reprezint una dintre condiiile care le favorizeaz supravieuirea i comportamentul n perioada pstrrii (Elias i al., 1995). Totui, certificarea precum cartof de smn impune o ntrerupere prematur a dormanei, pentru a testa dac probele respective sunt libere de ageni patogeni. Timpul necesar pentru ntreruperea dormanei este mai redus, dac tuberculii s-au pstrat la o temperatur de circa 200C, dect dac s-au pstrat la temperaturi mai mici. Pentru ntreruperea dormanei tuberculilor de cartof, precum i a altor tulpini subterane pot fi efectuate tratamente chimice cu diferite substane: 2-cloretanol, gibereline, ap nclzit etc. De asemenea, dormana poate fi indus sau prelungit prin stropirea cu hidrazid maleic, fie foliar nainte de recoltare, fie stropirea tuberculilor dup recoltare. Sunt de preferat ns tratamente cu substane care au o toxicitate redus, precum monoterpenele (Sorce i al., 2005). Pentru tuberculii destinai consumului este dorit o perioad lung de dorman, pentru prelungirea perioadei de pstrare. Pentru cartofii de smn se prefer o perioad scurt de dorman. n privina fiziologiei tuberculului de cartof, dormana se poate considera ca o tranziie de la utilizator, la surs. Cnd iese din dorman, tuberculul preia funcia de surs, susinnd metabolic creterea mugurelui, prin utilizarea substanelor de rezerv, amidon i proteine. Momentul expresiei genei G1-1 n mugurii tuberculului este n acord cu posibilul rol al acestei gene n meninerea funciei de utilizator (Agrimonti i al. 2007). Dormana bulbilor, rizomilor, tuberobulbilor, rdcinilor tuberizate n general, cercetrile cu privire la astfel de organe au vizat asigurarea condiiilor optime de pstrare (n special efectul temperaturii n relaie cu timpul) care au ca efect i respectiv drept rezultat formarea florilor n momentele dorite i avnd caracteristicile dorite. Scopul cercetrilor n domeniu a fost acela de a scurta timpul pn la nflorire, adic de a fora procesul. Spre exemplu, bulbii trebuie s ating o anumit dimensiune critic, nainte de a rspunde temperaturilor de pstrare (prin formarea primordiilor florale). La lalea, n unele cazuri se formeaz nti primordiile florale, alteori frunzele i florile se formeaz simultan. La unele specii, primordiile florale se formeaz nainte ca bulbii s fie recoltai, ceea ce permite un control minim al formrii florilor n perioada pstrrii. Alteori, primordiile florale se formeaz n perioada pstrrii, deci dup recoltare, n var, ns naintea replantrii care se efectueaz toamna. Aceasta permite un control mai facil al momentului nfloririi. 10. 5. Dormana la semine O smn n stare de dorman este cea care nu are capacitatea de a germina ntr-o perioad specific de timp, n situaia oricrei combinaii a factorilor fizici normali de mediu, care sunt de altfel favorabili germinrii acesteia, dup ce smna devine non-dormind (Baskin i Baskin, 2004). Dormana reprezint un factor reglator de o deosebit importan, utilizat de plante pentru supravieuirea speciilor, n sensul planificrii creterii n sezoanele favorabile i pentru desfurarea procesului de germinare n locuri i momente dorite. Este totodat un rspuns la anumii stimuli i nu n ultimul rnd permite rspndirea seminelor prin intermediul animalelor (Leopold, 1996). nelegerea clar a dinamicii bncii de semine este crucial pentru conservarea biodiversitii plantelor rare (Satterhwaite i al. 2007). Dormana seminelor reprezint o modalitate cheie de adaptare a plantelor pentru asigurarea bncii de semine din sol. Intrarea n dorman se realizeaz n general pe plant, odat cu maturarea seminelor i deshidratarea lor. La unele specii, seminele nu au perioad de dorman i pot germina imediat dup recoltare. Alte semine, n condiii de umiditate mrit pot germina chiar nainte de recoltare, pe plant (ex. gru ncolit n spic). n condiii optime de pstrare, durata perioadei de dorman variaz ntre 3- 15 ani i peste 15 ani (cereale) fr a fi afectat capacitatea germinativ.

231 Tranziia n cazul seminelor n dezvoltare, de la faza acumulrii substanelor de rezerv, la deshidratarea lor este asociat cu expresia unor gene specifice i cu modificri metabolice n consecin. O proporie semnificativ a expresiei acestor gene i a efectelor metabolice induse n cursul deshidratrii se aseamn cu cele care caracterizeaz germinarea seminelor. Prin urmare, pregtirea seminelor pentru germinare ncepe deja pe parcursul perioadei de deshidratare (Angelovici i al., 2010). 10.5.1. Tipuri de dorman la semine Dormana este determinat att de factori morfologici, ct i de proprietile fiziologice ale seminei. S-a propus un sistem de clasificare cuprinztor, care include cinci clase de dorman: dormana fiziologic; dormana morfologic; dormana morfo-fiziologic; dormana fizic; dormana combinat (fizic-fiziologic)(tabelul 10.2.). Tabelul 10.2. Tipurile de dorman la semine Dormana fiziologic
Dormana fiziologic reprezint cea mai rspndit form i poate fi divizat pe trei niveluri: profund, intermediar i non-profund. n cazul celei profunde, embrionul prelevat de la astfel de semine fie nu germineaz, fie produce plantule anormale. Tratamentele cu acid giberelic nu determin ieirea din dorman i sunt necesare cteva luni de stratificare la frig (subtipul a) sau la cldur (subtipul b), pentru ca germinarea s aib loc. Ex. Acer platanoides (dorman fiziologic profund) i Acer pseudoplatanus (dorman fiziologic intermediar). Majoritatea seminelor au o dorman fiziologic non-profund. Embrionii prelevai de la astfel de semine produc plantule normale. Tratamentele cu acid giberelic pot provoca ieirea din dorman (n raport cu specia). De asemenea, efecte similare au scarificarea, post-maturarea n cursul pstrrii n stare uscat, precum i stratificarea la frig sau cldur.

Dormana morfologic
Dormana morfologic se manifest n seminele cu embrionii incomplet dezvoltai (n privina mrimii), dar difereniai. Astfel de embrioni nu sunt dorminzi din punct de vedere fiziologic, ci doar necesit timp pentru a crete i germina. Ex. Apium graveolens.

Dormana morfo-fiziologic
Dormana morfo-fiziologic este caracteristic seminelor cu embrioni incomplet dezvoltai, dar pe lng aceasta intervine i o component fiziologic. Astfel de semine necesit un tratament pentru ieirea din dorman, fie o combinare a stratificrii la cald sau/i frig, ori aplicarea tratamentelor cu acid giberelic. Spre exemplu: seminele de mr se expun prin stratificare n nisip umed i turb la 40C i dup circa 2,5 luni germineaz 100%, n condiiile unei temperaturi de 250C, dup 12 zile. Tehnica se mai numete prercire. Un alt exemplu: Fraxinus excelsior.

Dormana fizic
Acest tip de dorman este dat de nveliurile seminei, tari i multistratificate, care practic mpiedic ptrunderea apei. Ea acioneaz ca un mecanism de aprare, prezervnd smna n stare uscat, chiar n condiii de umiditate. Germinarea poate fi indus artificial, prin distrugerea tegumentului, permindu-se ptrunderea apei. n condiii naturale, nmuierea tegumentului se realizeaz sub aciunea microorganismelor, trecerea prin tubul digestiv al animalelor, psrilor sau abraziune mecanic, alternare nghe/dezghe i la unele specii chiar prin foc. Exemple de plante caracterizate genetic prin dorman fizic: Leguminoseae, Malvaceae, Cannaceae, Geraniaceae, Chenopodiaceae, Convolvulaceae, Solanaceae.

Dormana combinat (fizic- fiziologic)


Dormana combinat este evident n semine cu tegumentul impermeabil pentru ap, combinat cu dormana fiziologic embrionar. Ex. Geranium.

232 10.5.2. Mecanismul dormanei seminelor Pentru explicarea mecanismului dormanei seminelor s-au propus diferite teorii: teoria controlului hormonal Acidul abscisic i etilena induc dormana, n timp ce acidul giberelic i citochininele provoac ieirea din dorman. La seminele n stare uscat, tratamentele cu temperaturi joase i expunerea la lumin determin creterea nivelului giberelinelor n semine i implicit favorizeaz germinarea. teoria temperaturii i a schimburilor de gaze Restricionarea ptrunderii oxigenului cauzat de caracteristicile tegumentului, precum i temperatura ridicat induc dormana. Efectele se datoreaz inhibiiei activitii citocrom oxidazei, component a lanului de transport a electronilor n cadrul lanului respirator, ceea ce are ca rezultat producerea unei cantiti mai reduse de energie. Absorbia unei cantiti mari de oxigen determin oxidarea substanelor inhibitoare existente n semine i n consecin se iese din dorman. teoria controlului metabolic Energia metabolic produs la nivelul seminei exercit un control major asupra dormanei. Blocarea lanului respirator la un anume nivel n cazul seminei aflate n stadiu dormind determin blocarea sintezei ATP. Totodat, hormonii vegetali pot aciona prin intermediul sintezei unor enzime. Producerea inhibitorilor de cretere este favorizat de o concentraie mic de oxigen, deci n cazul unui metabolism lent. Inhibitorii de cretere determin represia genelor, n timp ce stimulatorii de cretere determin activarea genelor. Numeroase cercetri au condus la identificarea ca factori cheie pentru reglarea dormanei seminelor a acidului abscisic, necesar pentru inducia dormanei (Graeber i al., 2010) i a acidului giberelic, pentru inducia germinrii. Ieirea din dorman poate fi realizat prin scarificare, stratificare, eliminarea inhibitorilor, lumin, alternana temperaturilor, tratamente cu temperaturi joase, tratamente cu hormoni stimulatori de cretere etc. Cercetri recente au condus la o serie de clarificri, aa cum este identificarea proteinei SPATULA (SPT) (Penfield i al. 2005), ca factor de transcripie i reglator cheie al germinrii, prin orchestrarea interaciunii dintre lumin i frig n controlul ieirii din dorman, precum i nelegerea modului n care semnalele din mediu sunt interpretate de ctre factorii de transcripie (Tsiantis, 2006). Balana hormonal dintre acidul abscisic ca promotor al dormanei i gibereline, ca promotori ai germinrii constituie teoria de baz. Lumina, temperatura i alte semnale funcioneaz prin a modula sinteza i perceperea acestor hormoni n semine. Dei, cile prin care respectivii hormoni vegetali controleaz dormana n seminele mbibate rmn nc de studiat, s-a precizat faptul c reglarea rspunsului la acidul giberelic prin regulatori reprezentai de proteinele DELLA este necesar pentru dorman. S-a prezentat un model, prin care se obine integrarea semnalului hormonal i reglarea dormanei (Penfield i al. (2006). 10.5 3. Germinarea seminelor Germinarea seminelor reprezint un complex de modificri morfologice, anatomice, fiziologice i biochimice, care permit trecerea embrionului de la starea de via latent din punct de vedere biologic, la starea de via activ. Cunoaterea tipurilor de dorman la semine, precum i a interrelaiei dintre ieirea din dorman i inducerea procesului de germinare sau prevenirea germinrii prezint o importan deosebit n legtur cu posibilitatea manipulrii dormanei n agricultur. Dup Khan (1996), factorii care provoac ieirea din dorman sau inducia dormanei sunt difereniai de cei care induc sau previn germinarea (tabelul 10.3.).

233 Tabelul 10.3. Factorii care induc dormana sau ieirea din dorman, comparativ cu factorii care previn sau induc germinarea Factori care induc dormana (DIF) Lipsa acidului giberelic (GA) Inhibiia sintezei GA Prelungirea expunerii la ntuneric la GPF Factori care favorizeaz ieirea din dorman sau care previn dormana (DRF sau DPF) Prezena GA Sinteza GA Umezeal Frig Iluminare Factori care previn germinarea (GPF) Temperaturi joase Potenial al apei mic Anaerobioz Inhibitori (ex. ABA) Temperaturi mari Inhibiie tegumentar Factori care induc germinarea (GIF) Temperatura moderat Potenial al apei mare Citochinine Etilen Oxigen

Din punct de vedere agronomic, se consider c o smn a germinat atunci cnd a aprut o plant autotrof, fr a se ine cont de procesele fiziologice implicate. Dup Evenary (1957), germinarea este procesul delimitat de nceputul hidratrii seminelor i nceputul creterii radiculei. Aceast definiie este acceptat de fiziologi. Se consider c germinarea este ncheiat, n momentul cnd radicula a strpuns tegumentul. Ceea ce urmeaz constituie un proces de cretere. n funcie de partea axei embrionare care prezint cea mai intens alungire, se disting dou tipuri principale de cretere (germinare) (fig. 10.6.). creterea epigee (germinarea epigee); Cotiledoanele ajung deasupra solului, ca urmare a elongaiei marcante a hipocotilului, n timp ce axa epicotil are dimensiuni mici. Dintre plantele cu cretere epigee se pot meniona: Phaseolus vulgaris, Cucumis sativus, Allium cepa, Lactuca sativa etc. creterea hipogee (germinarea hipogee); Cotiledoanele rmn n sol, axa hipocotil are dimensiuni mici, iar epicotilul se alungete, mpingnd plumula deasupra solului. Dintre plantele cu cretere hipogee se pot aminti: Zea mays, Pisum sativum, Triticum aestivum, Tradescantia spp. etc.

Fig. 10.6. Creterea epigee (a) i creterea hipogee (b)

234 10.5.3.1. Fiziologia i biochimia germinrii seminelor Pe parcursul germinrii seminelor se petrec o serie de evenimente fiziologice i biochimice. n privina absorbiei apei, germinarea include n mod clasic trei faze: imbibiia seminelor i reiniierea proceselor metabolice (faza I); faza de lag a absorbiei apei sau germinarea n sens strict (faza II); absorbia intens din nou a apei, odat cu apariia radiculei, altfel denumit i faza de cretere (faza III) (Savage Finch i Leubner- Metzger, 2006) (fig.10.7.).

Fig. 10.7. Curba de absorbie a apei, de ctre semine n cursul germinrii

Imbibiia este un proces fizic de adsorbie a apei de ctre suprafeele hidrofile, conducnd la sporirea masei i volumului seminelor care se mbib. Este un proces reversibil. Creterea radiculei marcheaz trecerea de la stadiul reversibil, la cel ireversibil. Trebuie fcut distincia ntre imbibiie, ca proces fizic i cretere, ca proces fiziologic (proces ireversibil), dei ambele conduc la sporirea masei i volumului celulelor. Imbibiia face ca tegumentul s fie permisiv pentru ptrunderea oxigenului, iar hidratarea protoplasmei favorizeaz reiniierea activitii enzimatice. Aceast activitate contribuie la biodegradarea substanelor complexe de rezerv (glucide, proteine, lipide) (vezi Cap. 8.) la substane mai simple, posibil de utilizat n ciclul respirator. Pe lng procesul de absorbie a apei, din punct de vedere fiziologic, o atenie deosebit este acordat procesului de respiraie. Din acest punct de vedere se pot evidenia de asemenea trei faze (fig. 10.8.), corespunztor de altfel etapelor germinrii (fig. 10.9.). n cadrul primei faze, corespunztor imbibiiei, intensitatea respiraiei crete. Urmeaz apoi a se menine la o rat relativ constant, pe parcursul etapei de germinare n sens strict, dup care crete din nou, odat cu procesul de alungire a radiculei. n primele stadii ale germinrii, respiraia este una de tip cianid rezistent.

Fig. 10.8. Intensitatea respiraiei (L O2 g-1s.u. h-1) achenelor de Bidens radiata la 250C i la lumin (dup Rollin, 1975)

Fig. 10.9. Fazele germinrii seminelor la soia

235 Au loc de asemenea modificri hormonale. Din acest punct de vedere, acidul giberelic s-a dovedit a fi un factor inductor al germinrii (fig.10.10. la orz), fr a fi considerat un hormon promotor universal valabil. n cazul seminelor de cereale, acidul giberelic este sintetizat la nivelul axei embrionare i are loc translocarea ctre stratul celulelor cu aleuron. Aici are loc secreia enzimelor cu aciune hidrolitic, care sunt trimise ctre endosperm, unde determin hidroliza substanelor de rezerv. Citochininele promoveaz de asemenea germinarea. Acidul abscisic ns inhib sinteza - amilazei i n consecin blocheaz biodegradarea amidonului. n figura 10.11. sunt prezentate sintetic evenimentele fizice i fiziologice care au loc pe parcursul germinrii seminelor.

Fig.10.10. Acidul giberelic, ca promotor al germinrii

Fig. 10.11.Evoluia evenimentelor fizice i metabolice pe parcursul germinrii i creterii timpurii a plantulelor (dup Nonogaki i al., 2010)

236 Condiiile pentru germinare i criterii de apreciere a germinrii seminelor Capacitatea germinativ a seminelor depinde de numeroi factori interni i externi. Specia constituie un factor determinant al duratei de timp ct se pstreaz aceast proprietate fiziologic. Conform longevitii specifice, seminele se mpart n trei categorii: 1. - semine microbiotice (cu longevitate scurt); Acestea nu supravieuiesc mai mult de 3 ani. Exemple de astfel de semine pot fi cele de Populus, Tilia (cteva zile sau cteva sptmni); Allium cepa, Zea mays (2 ani); Pisum sativum, Phaseolus vulgaris (3 ani). Spre deosebire de celelalte tipuri, multe dintre acestea nu suport procesul de deshidratare, sunt bogate n ap, embrionul lor rmne activ i moare prin deshidratare. n stadiul de deshidratare natural, metabolismul lor este foarte redus, ns nu ajunge la zero, deoarece ele nu sunt total lipsite de ap. Prin urmare, acest metabolism din perioada de dorman este totui necesar pentru supravieuirea seminelor. 2. - semine mezobiotice (cu longevitate medie); Acestea supravieuiesc o perioad de timp cuprins ntre 3 i 15 ani. Reprezint categoria n care sunt cuprinse majoritatea speciilor. Exemple de astfel de specii: Rumex, Sinapis (4 ani); Daucus, Spinacea (5 ani); Beta vulgaris, Cucurbita pepo (6 ani); Cucumis sativus, Cichorium intybus (10 ani); Digitalis lanata (15 ani). 3. - semine macrobiotice (cu longevitate mare); Acestea pot supravieui mai mult de 15 ani. Sunt numeroase exemple de specii de plante la care seminele i pstreaz viabilitatea peste 50 sau 100 de ani. Spre exemplu, seminele de Chenopodium album germineaz chiar i dup 1700 ani. Evaluarea germinrii n cazul unui lot de semine presupune testarea n condiii controlate (umiditate, temperatur) n laborator, de obicei n vase Petri pe hrtie de filtru umectat, avnd n vedere prevederile STAS n acest sens. Evoluia procesului de germinare n timp (numrnd seminele germinate n dinamic) se marcheaz prin trasarea curbei de germinare, care de fapt reprezint evoluia procesului de germinare cumulat, n funcie de timp. n general, o astfel de curb are aspect sigmoid, caracterizat printr-o perioad de laten la nceput, corespunztor imbibiiei i germinrii n sens strict. n privina derulrii procesului, n mod schematic se pot prezenta patru tipuri de curbe, care se pot regrupa n dou familii (fig. 10.12.).

Fig. 10.12. Curbe teoretice ale germinrii seminelor

Aa cum se observ n cazul primei curbe, toate seminele germineaz, iar procesul este foarte regrupat. Pentru a doua curb, procesul este foarte etalat n timp. Alteori, procentul maxim de germinare este atins foarte rapid (curba 3) sau germinarea este foarte lent (curba 4). Este evident faptul c, n cazul unui lot de semine, nu toate seminele au aceeai capacitate de germinare.

237 n general, pentru evaluarea germinrii seminelor, pe lng stabilirea curbei de germinare se stabilesc energia germinativ (seminele cu energie germinativ mare germineaz ntr-un timp mai scurt i dau plantule mai viguroase) i facultatea germinativ (care arat n ce msur embrionul seminei este capabil s germineze i n condiii favorabile s devin o plantul). Un alt indicator deosebit de util este cel denumit coeficientul de velocitate al germinrii seminelor (Cv) propus de Kotowski (1926). Dintre condiiile externe de maxim importan se pot aminti: apa, oxigenul, temperatura (factori absolut necesari n limite optime), lumina sau ntunericul etc. 1. Apa trebuie asigurat sub form lichid i n cantitate suficient. Ea permite realizarea imbibiiei, respectiv hidratarea coloizilor, urmat de hidroliza substanelor organice de rezerv, la substane osmotic active. Se intensific activitatea enzimatic, ct i procesul de absorbie ulterioar a apei. Cantitatea de ap absorbit n cursul imbibiiei depinde: pe de o parte, de natura substanelor care se mbib; i pe de alt parte, de natura substanelor dizolvate n soluia solului. n cazul seminelor amidonoase, gradul de imbibiie exprimat ca spor procentual de mas este de circa 45- 50%, n timp ce la seminele albuminoide se ajunge la circa 100 120%. Totodat, n contact cu soluia solului seminele pierd o parte din substanele solubile, deoarece membranele biologice sunt deteriorate. Cantitatea de substane pierdute este dependent de ritmul de refacere a membranelor biologice, ceea ce se coreleaz cu coeficientul de velocitate al germinrii seminelor. Spre exemplu, determinrile scurgerii electroliilor totali i ale Ca2+ n special, n cazul seminelor de soia obinute n condiii variate de stres hidric, au demonstrat c un coeficient de velocitate cu valori mici este corelat cu o scurgere masiv a electroliilor n perioada imbibiiei, precum i cu o pierdere accelerat a calciului (Delian i al., 2000). De asemenea, natura cationilor din soluia solului influeneaz gradul de imbibiie. De altfel, moleculele i ionii hidrofili cu solubilitate similar n lipide penetreaz n celule cu viteze diferite, invers proporionale cu mrimea lor n stare hidratat. n cazul litiului (Li) cu masa atomic 6.9, care are doar un singur strat de electroni, are un diametru de 0,12 nm n stare nehidratat i leag circa 5 molecule de H2O. Spre deosebire de acesta, K (masa atomic 39,1) are cteva straturi de electroni i un diametru nehidratat de 0,27 nm, n schimb leag doar 4 molecule de H2O. Litiul hidratat este deci puin mai mare, dect potasiul hidratat i difuzeaz mai lent prin membranele biologice. Cationii bivaleni, precum: Ca2+, Mg2+ leag circa 20 molecule de H2O i sunt absorbii mult mai ncet, dect cationii monovaleni. Lipsa apei sau stresul hipohidric afecteaz negativ germinarea seminelor. Cercetrile efectuate la mazre i soia, n condiii de laborator, prin inducerea stresului hipohidric au demonstrat o reducere a facultii germinative, dar mai ales a energiei germinative, odat cu accentuarea severiti stresului hidric (Voican i al., 1995; Delian i al, 2003). 2. Oxigenul este absolut necesar pentru germinarea seminelor, avnd n vedere utilizarea sa n procesul de respiraie. Din punct de vedere cantitativ, cerinele speciilor sunt difereniate. Multe semine germineaz n condiiile unei concentraii de 2-5% oxigen. n anumite cazuri, un exces de oxigen devine nefavorabil germinrii n sens strict. 3. Temperatura interfer cu oxigenul, prin aceea c influeneaz viteza de consum a oxigenului de ctre embrion i totodat modific solubilitatea oxigenului. La temperatur ridicat crete gradul de solubilitate a acestui gaz. n cazul seminelor merelor spre exemplu, s-a demonstrat c embrionul necesit mai mult oxigen, n cazul unei temperaturi ridicate a atmosferei. Temperatura intervine n mod direct, prin aceea c o temperatur ridicat induce n general o intensificare a reaciilor metabolice. Pe parcursul celor trei faze ns, temperatura optim este diferit. Pentru primele faze, optimul termic este mult inferior celui specific fazei de cretere. Aciunea indirect a temperaturii se concretizeaz prin efectul su asupra solubilitii oxigenului n embrion.

238 Temperatura optim pentru germinare variaz cu specia de plant, cu originea acesteia etc. Spre exemplu, la speciile din climatul temperat, n general, temperaturile necesare sunt situate la valori mici (chiar 00C), comparativ cu speciile tropicale, care necesit cel puin 20-250C pentru a germina. De asemenea, este foarte dificil a preciza care sunt temperaturile cardinale (minim, optim i maxim) pentru o anumit specie, avnd n vedere variabilitatea existent de la soi la soi, stadiul de maturitate al seminelor, vrsta acestora etc. Este totodat cunoscut faptul c seminele multor specii de rozacee (piersic, prun, cire) nu germineaz pn nu au fost expuse cteva sptmni sau luni la temperaturi joase i oxigen, n condiii de umezeal. Aceast practic de meninere a seminelor pe timpul iernii n lzi cu nisip umed este denumit stratificare. Pentru c sunt necesare i temperaturi joase, se folosete i denumirea de pre-rcire. Probabil c n aceast perioad dispar inhibitorii sau se acumuleaz anumii fitohormoni stimulatori, precum giberelinele i citochininele. 4. Lumina este un factor important pentru germinarea anumitor tipuri de semine. n literatura de specialitate sunt descrise trei categorii de semine: semine pozitiv fotosensibile; Acestea germineaz mai uor la lumin, dect la ntuneric. Dintre acestea, unele chiar nu germineaz la ntuneric i sunt denumite cu fotosensibilitate pozitiv strict (ex. Lactuca sativa). semine cu fotosensibilitate negativ; Astfel de semine nu germineaz sau germineaz greu la lumin (ex. Phaecelia tanacetifolia). semine non-fotosensibile; Ele germineaz att la lumin, ct i la ntuneric. n aceast categorie sunt cuprinse numeroase specii de plante cultivate (multe leguminoase, tomate etc.). Din cele prezentate mai sus reiese importana luminii albe n general, dar, trebuie precizat c lumina intervine i prin compoziia sa spectral sau prin calitatea sa. Lumina incandescent spre exemplu este net mai eficace n inhibarea germinrii seminelor cu fotosensibilitate negativ, comparativ cu lumina fluorescent. n privina duratei de aciune a luminii, n general, seminele cu fotosensibilitate pozitiv necesit pentru stimularea germinrii o iluminare de scurt durat, altele ns solicit o iluminare de lung durat sau iluminare scurt, repetat. Referitor la mecanismul de aciune al luminii, odat cu descoperirea fitocromului (vezi Cap.9) i a conversiei sale de la fitocrom activ, la fitocrom inactiv i invers s-a reuit interpretarea multor procese fiziologice, inclusiv implicarea sa n procesul de germinare. La seminele pozitiv fotosensibile, fitocromul Pr este transformat de lumina roie, la forma activ Pfr inducnd germinarea. Pentru seminele la care lumina inhib germinarea, concentraia fitocromului activ este aparent suficient de mare, pentru a fi indus germinarea chiar la ntuneric. La seminele iluminate intervine efectul luminii rou-ndeprtat, care transform Pfr la forma inactiv Pr. 5. Pe lng factorii menionai, procesul de germinare se afl de asemenea sub incidena unor inhibitori fie naturali, fie artificiali (ex. etilena, acidul cianhidric, derivai fenolici, alcaloizi, acidul abscisic etc.). Spre exemplu, seminele de tomate nu germineaz n fruct, chiar dac temperatura este propice i este asigurat umiditatea. Dac ns seminele se scot din fruct, se zvnt i apoi se seamn, ele vor germina. Germinarea are loc chiar dup scoaterea din fruct i splarea lor. Explicaia privind imposibilitatea germinrii n fruct este dat de existena unui pH sczut (Bewley i Black, 1984). Pot fi de asemenea prezeni i ali inhibitori, precum acidul abscisic. Inhibitori ai germinaiei seminelor se pot afla i n frunze, rdcini i alte organe ale plantelor. 6. Totodat, stresul biotic are un impact major asupra capacitii germinative a seminelor, precum i asupra vigorii plantulelor (Delian, 2006; Delian i al., 2006).

239 ntrebri 1. Definii starea de dorman i precizai principalele tipuri de dorman la plante. 2. Explicai mecanismul fiziologic general al dormanei. 3. Precizai care sunt modificrile fiziologice i citologice n cazul dormanei plantei ntregi. 4. Precizai fazele dormanei mugurilor la plantele lemnoase i caracteristicile acestora. 5. Definii dormana seminelor i precizai tipurile de dorman la semine. 6. Definii germinarea seminelor i precizai etapele acestui proces. 7. Definii imbibiia seminelor i explicai factorii care influeneaz acest proces. 8. Cum se poate evalua capacitatea germinativ a seminelor? 9. Explicai rolul apei n cursul procesului de germinare a seminelor. 10. Explicai rolul temperaturii n cursul procesului de germinare a seminelor. Bibliografie selectiv Agrimonti, C. i al. 2007. G1-1 and LeG1/LeG1-2 genes are involved in meristem activation during breakage of dormancy and early germination in potato tubers and tomato seeds. Plant Science, Vol. 173: 533- 541. Baskin, J.M. i Baskin,C.C. 2004. A classification system for seed dormancy. Seed Science Research,Vol. 14:1-16. Burzo, I., Delian Elena, Dobrescu Aurelia, Voican Viorica, Bdulescu Liliana. 2004. Fiziologia plantelor de cultur, Vol. I. Procesele fiziologice din plantele de cultur. Ed. Ceres, Bucureti. Delian Elena, Voican Ana, Bdulescu Liliana, Svulescu Elena.2003. Physiological particularities at pea (Pisum sativum L.) seed germination in water stress conditions. Analele Universitii din Craiova, Vol. III (XLIV), p: 279-283. Delian Elena. 2006. Fiziologia stresului biotic la plante. Editura Cartea Universitar, Bucureti. Delian Elena, Gheorghie C., Bdulescu Liliana, Cristea Stelica. 2006. Physiological quality of wheat seeds under black point incidence.. XXXVI ESNA Annual Meeting Iai- Romania, Proceedings: 899-906. Delian Elena. 2008. Fiziologia plantelor. Ed. Printech, Bucureti. Graeber, K., Linkies, A., Mller, K., Wunchova, A., Rott, A., Leubner-Metzgeer, G. 2010. Cross species approaches to seed dormancy and germination: conservation and biodiversity of ABAregulated mechanism and the Brassicaceae DOG1 genes. Plant Mol. Biol., Vol.73: 67-87. Heide, O.M. i Prestrud, K. 2005. Low temperature, but not photoperiod, controls growth cessation and dormancy induction and realise of apple and pear. Tree Physiology, Vol. 25: 109- 114. Heide, O.M. 2008. Interaction of photoperiod and temperature in the control of growth and dormancy of Prunus species. Scientia Horticulture, Vol. 115: 309- 314. Horvath, D.P. i al. 2003. Knowing when to grow: signals regulating bud dormancy. Trends in Plant Science, Vol. 8: 534- 540. Horvath, D. P. 2009. Common mechanisms regulate flowering and dormancy. Plant Science, Vol. 177: 523-531. Karlberg, A., Englund, M., Petterle, A., Molnar, G., Sjdin, A., Bako, L., Bhalerao, R.P. 2010. Analysis of global changes in gene expression during activity-dormancy cycle in hybrid aspen apex. Plant Biotechnology, Vol. 27: 1-16. Klimeov, J. i Klime, L. 2007. Bud bank and their role in vegetative regeneration- A literature review and proposal for simple classification and assessment. Perspectives in Plant Ecology, Evolution and Systematics, Vol. 8: 115- 129. Lang , G.A. 1987. Dormancy: a new universal terminology. Hort Science, Vol. 22: 817- 820. Olsen, J.E. 2006.Mechanism of dormancy regulation. Acta Horticulturae, Vol. 727: 157- 165. Penfield, S. i al. 2005. Cold and light control seed germination through the bHLH transcription factor SPATULA. Current Biology, Vol. 15: 1998- 2006.

240 Penfield, S. i al. 2006. DELLA- mediated cotyledon expansion breaks coat-imposed seed dormancy. Current Biology, Vol. 16: 2366- 2370. Rohde, A. i Bhalerao, R.P. 2007. Plant dormancy in the perennial context. Trends in Plant Science, Vol. 12: 217- 223. Satterhwaite, W.H. i al. 2007. Seed banks in plant conservation: case study of Santa Cruz tarplant restoration. Biological Conservation, Vol. 135: 57- 66. Savage Finch, W.E. i Leubner- Metzger, G. 2006. Seed, dormancy and the control of germination. New Phytol., Vol. 171: 501- 523. Shefferson, R.P. 2009. The evolutionary ecology of vegetative dormancy in mature herbaceous perrenial plants. J. Ecol., Vol. 97: 1000-1009. Tsiantis, M. 2006. Plant development: multiple strategies for breaking seed dormancy. Current Biology, Vol. 16: R25- R27. Voican Viorica, Delian Elena. 1995. Cercetri privind unele procese fiziologice la germinarea seminelor de mazre n condiii de stres hidric. Lucrri tiinifice, seria A, Vol. XXXVIII, p. 9-35. Voican Viorica, Ungureanu Livia, Delian Elena. 1996. Particularitile morfo-anatomice i fiziologice la Gleditsia triacanthos L. privind germinarea seminelor. Lucrri tiinifice, Seria A, XXXIX, p. 35-43.