Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Indrumator de Lucrari Practice
Indrumator de Lucrari Practice
= = g Fe
2
(SO
4
)
3
Ca i n cazul acizilor, bazelor i srurilor, echivalentul-gram a unei substane
oxidante sau reductoare se calculeaz pe baza stoicheometriei redox a reaciei la care
particip aceasta. n reaciile de oxido-reducere atomii i schimb valena. Echivalentul
se definete ca fiind raportul dintre masa molecular a compusului chimic i numrul de
electroni cedai sau primii n reacie de atomul (atomii) care se oxideaz sau se reduc.
De exemplu, n permanganometrie, n mediu acid ionul de mangan din KMnO
4
,
accept 5 electroni:
7+ 2+
2KMnO
4
+ 3H
2
SO
4
= 2MnSO
4
+ K
2
SO
4
+ 3H
2
O + 5[O]
Prin urmare, E
M
gKMnO
KMnO
4
4
5
31 6 = = , g KMnO
4
- variaia strii de oxidaie a ionului de mangan din KMnO
4
n mediu slab alcalin
sau neutru este 3.
7+ 4+
2KMnO
4
+ H
2
O = 2KOH + MnO
2
+ 3[O]
E
M
gKMnO
KMnO
4
4
3
158
3
52 7 = = = , g KMnO
4
- variaia strii de oxidaie a manganului din KMnO
4
n mediu puternic alcalin
este 1
+7 +6
2KMnO
4
+ 2KOH = 2K
2
MnO
4
+ H
2
O + [O]
12
E
gKMnO4
= = 158g KMnO
4
1. Soluii procentuale
a) Prepararea unei soluii de NaCl 10 % (m/m)
Conform definiiei 100 g soluie NaCl 10 % trebuie s conin 10 g NaCl i 90 g
ap. Se cntresc 10 g NaCl la balana tehnic care se introduc ntr-un pahar Berzelius i
se adaug 90 ml de H
2
O distilat. Se omogenizeaz amestecul cu ajutorul unei baghete
de sticl.
b) Prepararea unei soluii de CH
3
COOH 15 % (v/v)
Conform definiiei 100 ml soluie CH
3
COOH 15 % trebuie s conin 15 ml
CH
3
COOH glacial i restul H
2
O distilat. Se msoar ntr-un cilindru gradat 15 ml
CH
3
COOH glacial i se completeaz volumul cu H
2
O distilat pn la 100 ml. Se
omogenizeaz amestecul cu ajutorul unei baghete de sticl.
c) Prepararea unei soluii de Na
2
CO
3
5%(m/v)
100 ml soluie Na
2
CO
3
5 % trebuie s conin 5 g Na
2
CO
3
anhidru i H
2
O
distilat. Se cntresc 5 g Na
2
CO
3
anhidru la balana tehnic, se introduc ntr-un cilindru
gradat i se completeaz cu H
2
O distilat pn la 100 ml. Se omogenizeaz amestecul
cu ajutorul unei baghete de sticl. n cazul n care se lucreaz cu Na
2
CO
3
. 10 H
2
O se
vor lua n considerare masele moleculare pentru a se determina cantitatea n grame a
srii hidratate ce corespunde greutii de sare anhidr.
M
Na CO
anh 2 3
106
.
= M
Na CO H O
2 3 2
10
286
.
=
106 g Na
2
CO
3
anh. ............... 286 g Na
2
CO
3
.10 H
2
O
5 g Na
2
CO
3
anh. ............... x
x = 13,49 g Na
2
CO
3
. 10 H
2
O
Se vor cntri 13,49 g Na
2
CO
3
. 10 H
2
O la balan i se va proceda n modul
descris mai sus.
Regula amestecurilor
Dintr-o soluie mai concentrat se poate prepara o soluie mai diluat cu ajutorul
regulei amestecurilor. De exemplu, avnd la dispoziie o soluie de NaCl 2 % (m/m) s
se prepare 20 ml soluie NaCl 0,9 %(m/m). Valorile concentraiilor celor dou soluii,
MKMnO4
1
13
avnd concentraia mai mare, respectiv mai mic dect concentraia soluiei de preparat,
se aeaz n colurile de sus ale unui dreptunghi imaginar. Valoarea concentraiei
soluiei de preparat, se aeaz la intersecia celor dou diagonale. Valorile numerelor ce
reprezint concentraiile se scad pe diagonal (numerele mai mici se scad din cele mai
mari). Rezultatele se scriu n colurile de jos ale dreptunghiului. Aceste numere
reprezint pri n greutate din soluiile respective (grame, kilograme, etc.).
2 0
0,9
0,9 pri NaCl 2 % 1,1 pri H
2
O distilat2 pri NaCl 0,9%(m/m)
Deci, se pot amesteca 0,9 pri NaCl 2 % cu 1,1 pri H
2
O distilat pentru a
rezulta 2 pri soluie de NaCl 0,9%(m/m). Avnd n vedere c soluia NaCl 0,9%
(m/m) este diluat putem tolera conversia prilor de greutate, n volume. Adic,
20 ml (soluie) NaCl 0,9 %(m/v) ..........x ............y
x = 9 ml NaCl 2 %
y = 11 ml H
2
O distilat
Aproximaia fcut este util deoarece este mai uoar msurarea volumetric a
soluiilor n loc de cea gravimetric.
2. Soluii molare
a) Prepararea unei soluii de H
2
SO
4
0,1 M
avnd la dispoziie soluie de H
2
SO
4
20 % (m/m) cu densitatea 1,139 g/cm
3
. Conform definiiei, 1000 ml H
2
SO
4
0,1 M
conin 0,1 moli H
2
SO
4
. Deci:
1000 ml H
2
SO
4
0,1 M .................. 9,8 g H
2
SO
4
pur
100 g sol. H
2
SO
4
20 % .............. 20 g H
2
SO
4
pur
x g sol. H
2
SO
4
20 % ..9,8 g H
2
SO
4
pur
x = 49 g sol. H
2
SO
4
20 %(m/m)
14
v
m
= = =
49
1139
43 02
,
, ml sol. H
2
SO
4
20 %(m/m)
n balonul cotat de 1000 ml se introduce o cantitate de H
2
O distilat, se adaug
43,02 ml soluie H
2
SO
4
20 % i apoi se aduce la cot cu H
2
O distilat dup rcirea
amestecului la temperatura menionat pe balon (20C). Dup ce se fixeaz dopul
balonului cotat se omogenizeaz soluia prin agitare energic.
3. Soluii normale
Prepararea unei soluii de H
2
SO
4
0,1 N avnd la dispoziie soluie H
2
SO
4
20 %
(m/m) cu densitatea 1,139 g/cm
3
. Conform definiiei 1000 ml sol. H
2
SO
4
0,1 N conin
0,1 E
gH SO
2 4
. Deci:
1000 ml H
2
SO
4
0,1 N .............. 4,9 g H
2
SO
4
pur
100 g sol. H
2
SO
4
20 % ........... 20 g H
2
SO
4
pur
x g sol. H
2
SO
4
20 % .......... 4,9 g H
2
SO
4
pur
x = 24,5 g sol. H
2
SO
4
20 %(m/m)
v
m
= = =
24 5
1139
2151
,
,
, ml sol. H
2
SO
4
20 %
Noiunea de pH
Ionizarea apei i produsul ionic al apei
Dei apa pur este considerat neelectrolit, ea conduce totui curentul electric.
Acest lucru se datoreaz faptului c o parte din moleculele ei sunt ionizate. Ionizarea
apei poate fi scris conform ecuaiei:
H
2
O + H
2
O <---------> H
3
O
+
+ OH
-
Are loc un transfer de protoni ducnd la un echilibru. Constanta de aciditate a apei va fi:
K
a
=
| || |
| |
2
2
3
O H
OH O H
+
La temperatura de 25C apa se afl ionizat n proporie de o molecul la 555
milioane de molecule. De aceea se consider c, prin ionizare, concentraia apei (de la
numitor) rmne practic constant i deci poate fi nmulit cu constanta de aciditate.
15
K
a
[H
2
O]
2
= P
i
= [H
3
O
+
] [OH
-
]
Constanta P
i
este numit produsul ionic al apei sau constanta de autoprotoliz a
apei. Deoarece la temperatura de 25C produsul ionic al apei are valoarea de
10
-14
moli
2
/l
2
, nseamn c n apa pur la 25C concentraia ionilor de hidroniu, egal cu
cea a ionilor de hidroxid, este 10
-7
moli/l.
[H
3
O]
+
= [OH
-
] = 10
-7
moli/l
Scara de pH
n soluii diluate, acizii tari pot fi considerai practic ionizai complet. Astfel,
ntr-o soluie apoas 0,1N de HCl (0,1 moli/l) concentraia ionilor de hidroniu este
practic egal cu concentraia total a acidului. Este comod s se exprime concentraia
ionilor de hidroniu dintr-o soluie apoas n form logaritmic. Se numete exponent al
concentraiei ionilor de hidroniu sau pH logaritmul zecimal cu semn schimbat al
concentraiei ionilor de hidroniu din soluie (Srensen, 1909):
pH = - lg [H
3
O
+
]
Punctul neutru: O soluie apoas este neutr cnd concentraiile ionilor de
hidroniu i ionilor de hidroxid sunt egale, conform ecuaiei:
[H
3
O
+
] = [OH
-
] = 10
-7
moli/l
Punctul neutru, n soluii apoase, este la pH = 7. O soluie cu pH < 7 este acid; o soluie
cu pH > 7 este bazic.
Determinarea pH-ului cu ajutorul indicatorilor acido-bazici
Indicatori de pH (acido-bazici) sunt substane organice colorate (acizi sau baze
slabe) care i modific culoarea n funcie de pH. Condiiile pe care trebuie s le
ndeplineasc un indicator de pH sunt urmtoarele: schimbarea de culoare s fie
reversibil, i s se produc brusc, deci ntr-un interval de pH ct mai mic, s fie solubil
n ap, s aib putere de colorare (culoare intens), chiar la concentraii mici;
schimbarea de culoare s se produc la adaosul unor concentraii mici de acid sau de
baz; s fie stabil n condiiile obinuite de lucru.
Dac indicatorul este un acid slab (AH), n soluie apoas are loc reacia
protolitic:
AH + H
2
O <> H
3
O
+
+ A
-
16
n cazul albastrului de bromtimol, acidul slab AH este galben iar baza conjugat
A
-
este albastr. Prin schimbarea aciditii soluiei indicatorului i schimb culoarea
fenomen numit viraj, datorit trecerii lui din stare protonat n cea deprotonat sau
invers.
Constanta de aciditate al indicatorului va fi:
[A
-
]
Ka = [H
+
]
[AH]
n forma logaritmic:
[A
-
] [A
-
]
lg
Ka =
lg
[H
+
] +
lg
sau
- lg
[H
+
] =
-lg
Ka +
lg
[AH] [AH]
Adic:
-lg[H
+
] = pH i -lgK
a
= pK
a
, deci:
[A-] [albastru]
pH
= pKa + lg
sau pH = pKa + lg
________
[AH] [galben]
Ochiul uman nu poate distinge dect cca. 10% dintr-o culoare n prezena unei alte
culori. Dac [A
-
] = 10[AH], soluia va fi albastr i pH
1
= pK
a
+ 1. Dac 10[A
-
] = [AH],
soluia va fi galben i pH
2
= pK
a
- 1. Prin urmare:
pH
1
- pH
2
= ApH = 2
Acest interval de pH se numete intervalul de viraj al indicatorului care nseamn
intervalul de pH n care are loc schimbarea culorii indicatorului (de la albastru la galben
n cazul nostru) odat cu schimbarea pH-ului soluiei. Fiecare indicator are un interval
de viraj specific. La valori de pH inferioare intervalului de viraj indicatorul i pstreaz
culoarea, iar peste acest interval la fel. Din culoarea soluiei unui indicator se poate
aprecia pH-ul soluiei.
Indicatorii acido-bazici pot fi simpli, micti i universali. Indicatorii simpli se
caracterizeaz printr-un interval de viraj relativ mic (cca 2 uniti de pH).
Indicatorii simpli se pot folosi pentru tatonarea pH-ului necunoscut. pH-ul
necunoscut se poate estima cu o eroare de un semiinterval de viraj.
Indicatorii universali sunt amestecuri de indicatori simpli ale cror intervale de
viraj sunt parial suprapuse sau, n cazul cel mai bun, unul n continuarea celuilalt.
Indicatorii universali au intervale de viraj mai mari dect ale celor simpli. n comer se
gsesc hrtii indicatoare impregnate cu indicatori universali. Prin compararea culorii
17
obinute cu o scar de culori etalon, se poate determina pH-ul unei soluii cu o precizie
de aproximativ + 0,5 uniti pH.
n tabelul de mai jos apar cteva exemple de indicatori simpli cu caracteristicile
lor:
Denumirea
Intervalul de
viraj (ApH)
Sub interval
de viraj
n cadrul
intervalului de viraj
Peste
interval
Metil violet 1,0 - 3,2 verde albastru violet
Metil oranj 3,1 - 4,4 rou portocaliu galben
Rou metil 4,4 - 6,2 rou roz galben
Albastru de
bromtimol
6,2 - 7,6 galben verde albastru
Fenolftalein 8,2 - 10,0 incolor roz rou-violet
Sistemele tampon: sunt formate dintr-o sare hidrolizabil i acidul slab sau baza slab
rezultat prin hidroliz. O soluie care i schimb numai puin pH-ul, la adugarea unei
cantiti mici de acid sau baz tare se numete soluie tampon. O caracteristic a unei
soluii tampon este capacitatea de tamponare.
Capacitatea de tamponare a unei soluii este capacitatea ei de a se opune variaiei de pH
la adaosul de acid tare sau baz tare i se exprim prin numrul de echivaleni de acid
sau baz care schimb pH-ul unui litru de soluie cu o unitate. Ea se micoreaz prin
diluare.
Demonstrarea capacitii de tamponare:
Reactivi: Indicator Bogen (amestec de rou metil i albastru de bromtimol,
cu intervalul de viraj ntre pH 4,4-7,6)
Sol. tampon fosfat pH = 7
Sol.de HCl N/10
Sol. de NaOH N/10
18
Modul de lucru:
n dou pahare Berzelius (1, 1a) se pune ap distilat i se adaug cte 2 ml de
indicator. Dac apa este neutr culoarea soluiilor este verde. n alte dou pahare (2, 2a)
de aceiai mrime se prepar soluie tampon cu pH = 7, la care se adaug cte 2 ml
soluie de indicator obinndu-se tot culoarea verde. Se adaug cte 1 ml HCl N/10 n
paharele 1i 2 i se amestec cu bagheta: se observ o puternic variaie a culorii
soluiei din paharul 1 ceea ce indic o mare variaie a pH-ului. n paharele 1a i 2a se
adaug cte 1 ml NaOH N/10, se amestec cu bagheta i se observ la fel o mare
variaie a culorii soluiei din paharul 1a. n paharele 2 i 2a culoarea se schimb foarte
puin, deoarece pH-ul s-a modificat foarte puin.
n dou pahare Berzelius (1, 1a) se prepar soluie tampon cu pH = 7 i se adaug
cte 2 ml indicator. n alte 2 pahare (2, 2a) se prepar soluie tampon cu acelai pH, ns
de zece ori mai diluat, adugnd cte 2 ml indicator i n aceste pahare. Se pipeteaz
cte 1 ml HCl N/10 n paharele 1 i 2, i cte 1 ml NaOH N/10 n paharele 1a i 2a. Se
amestec cu bagheta. n paharele 2 i 2a se observ schimbarea mai pronunat a culorii
indicatorului deoarece, soluiile tampon fiind mai diluate, li s-a micorat capacitatea de
tamponare.
Determinarea colorimetric a pH-ului prin metoda cu soluii tampon
Principiu:
Se adaug soluiei de cercetat un anumit volum dintr-un indicator potrivit i se
compar culoarea pe care o capt soluia, cu culoarea produs de aceiai cantitate de
indicator adugat unei serii de soluii tampon cu pH-uri cunoscute. pH-ul soluiei de
cercetat va fi egal cu pH-ul soluiei de referin cu culoarea identic.
Reactivi: - Sol. de CH
3
COOH N/10
- Sol. de CH
3
COONa N/10
- Sol. de KH
2
PO
4
M/15
- Sol. de Na
2
HPO
4
M/15
- Indicator Bogen (amestec de rou metil i albastru de bromtimol)
Modul de lucru:
Se prepar n dou serii de eprubete soluii tampon cu pH diferit conform
tabelelor:
19
Tampon acetat (Walpole)
CH
3
COOH N/10 ml 8,2 6,3 4,0 2,1 1,0
CH
3
COONa N/10 ml 1,8 3,7 6,0 7,9 9,0
pH 4 4,4 4,8 5,2 5,6
Tampon fosfat (Srensen)
KH
2
PO
4
M/15 ml 8,8 7,3 5,1 2,8 1,3 0,5
Na
2
HPO
4
M/15 ml 1,2 2,7 4,9 7,2 8,7 9,5
pH 6 6,4 6,8 7,2 7,6 8,0
n fiecare soluie se adaug cte 0,2 ml indicator Bogen. Eprubetele se agit
energic pentru omogenizarea culorii. Culoarea soluiilor va fi diferit n fiecare eprubet
n funcie de pH. Se adaug 0,2 ml indicator la 10 ml din soluia de cercetat i se
omogenizeaz. Se compar culoarea obinut cu culorile seriei. Dac culoarea soluiei
cercetate este identic cu culoarea uneia din soluiile tampon (acetat sau fosfat), pH-ul
lor este identic. Dac culoarea se ncadreaz ntre culorile a dou soluii tampon
consecutive se consider c pH-ul soluiei cercetate este media aritmetic a valorilor de
pH a celor dou soluii tampon.
Volumetrie
Principiile analizei volumetrice
Analiza volumetric se bazeaz pe msurarea de volume, operaie ce se execut
comod cu vase calibrate (cilindrii gradai, baloane cotate, pipete, biurete). Principiul
analizelor volumetrice const n msurarea volumului de reactiv necesar producerii
reaciei cantitative cu substana de determinat ce se afl n soluia de analizat. Operaia
de adaos a soluiei de reactiv se face n pic- turi, din biuret i se numete titrare.
Pot fi urmrite volumetric numai acele reacii care au loc univoc, (fr reacii
secundare i cantitativ) i cu vitez foarte mare. Pentru marcarea sfritului reaciei,
respectiv a punctului de echivalen, se folosesc fenomene ce pot fi puse n eviden
prin observare vizual (schimbri de culoare, apariii de precipitate) sau instrumental
(poteniometru, conductometru, spectrofotometru). Pentru observarea vizual a
20
sfritului titrrii n modul cel mai obinuit se folosesc indicatorii, substane care i
schimb culoarea n punctul de echivalen.
La punctul de echivalen reactanii sunt prezeni n cantiti echivalente, deci n
amestecul de reactivi nu se afl n exces nici substana de dozat i nici reactivul titrat.
Volumul de reactiv adugat pentru atingerea punctului de echivalen se numete volum
de echivalen.
Spre a putea stabili concentraia substanei de analizat este necesar ca soluia de
reactiv folosit la titrare s fie de concentraie cunoscut, s fie suficient de stabil i s
se prepare relativ uor.
Metodele volumetrice se caracterizeaz prin rapiditate, n majoritatea cazurilor o
determinare volumetric se face n cteva minute.
Clasificarea metodelor volumetrice
Metodele volumetrice pot fi: a) directe
b) indirecte - prin retitrare
- prin intermediul unui substituent
n cazul metodelor de titrare direct, reacia dintre componentul de determinat i
reactivul de titrare este de echivalent la echivalent. Prin retitrare se titreaz excesul unui
reactant adugat soluie de analizat (vezi dozarea NH
3
). n cazul folosirii unui
substituent, produsul de reacie titrabil rezultat prin substituie se formeaz n cantitate
echivalent cu componentul de determinat (ex. complexometria).
n ceea ce privete natura reaciilor care stau la baza metodelor volumetrice,
clasificarea acestora este:
a.) metode de titrare acido-bazic sau neutralizare
b.) metode de titrare redox (permanganometria, iodometria)
c.) metode de titrare prin formare de compleci (complexometria)
d.) metode de titrare prin formare de precipitat (ex. argentometria)
Calcule n analiza volumetric
Raportul de concentraie ntre soluia real (aproximativ normal) i cea
teoretic (exact normal) se numete factorul soluiei.
Factorul exprim numrul de ml de soluie exact normal care echivaleaz cu 1
ml din soluia preparat:
21
F
V
V
t
r
= unde: V
t
- volumul teoretic (a soluiei exact normale)
V
r
- volumul real ( a soluiei preparate)
Factorul soluiilor exact normale este 1,000. Ele folosesc ca soluii etalon i cu
ajutorul lor se determin factorul soluiilor aproximativ normale. Soluiile mai diluate
au un factor subunitar, soluiile mai concentrate au un factor supraunitar. Practic
valoarea factorului trebuie s fie ntre 0,8000-1,2000.
Pe lng factor concentraia exact a soluiilor se poate exprima i cu ajutorul
titrului. Titrul unei soluii reprezint cantitatea de substan exprimat n grame din 1 ml
soluie. De exemplu: pentru o soluie de NaOH care conine 4,653 g pe litru titrul are
valoarea de 0,004653.
Tehnica titrrii
Pregtirea instrumentelor pentru titrare
Biureta se spal cu ap distilat i apoi se cltete cu soluia de titrare de dou
ori. Dup utilizarea mai ndelungat a biuretei este necesar degresarea tubului gradat al
acesteia. Aceasta se poate realiza cu amestec cromic sau cu soluie de detergent.
Se umple biureta cu soluia de titrare peste gradaia 0, apoi se scoate plnia care
a servit pentru introducerea lichidului n biuret i se potrivete la zero nivelul lichidului
lsnd s cad ncet lichidul n exces ntr-un vas colector. Dac robinetul se mic greu
sau biureta picur, se scoate robinetul, se terge de umezeal i se unge cu un strat
subire i uniform de vaselin. Partea inferioar a manonului robinetului se usuc cu
ajutorul hrtiei de filtru i apoi se introduce robinetul uns la locul lui. Bulele de aer
prezente n biuret pot s cauzeze erori la titrare ceea ce impune ndeprtarea lor.
Modul de lucru:
La nceputul titrrii dm drumul soluiei din biuret n picturi repezi agitnd n
continuu coninutul flaconului Erlenmayer, n care se gsesc, exact msurat, volumul
soluiei de titrat plus indicatorul. De obicei se observ o schimbare temporar de culoare
a indicatorului n locul unde cad picturi de reactiv n soluie. Spre sfritul titrrii
concentraia substanei de dozat scade i la contactul picturilor de reactiv cu soluia de
dozat schimbarea temporar a culorii soluiei este mai persistent. n aceast faz viteza
de picurare se reduce treptat n aa fel nct dup adugarea ultimei picturi necesare, s
fie posibil nchiderea rapid a robinetului. Pictura aderat pe vrful biuretei se
22
introduce n vasul de titrare prin atingerea de peretele interior al acestuia i se amestec
cu lichidul de titrat aplecnd vasul n direcia lichidului ce se prelinge pe peretele
vasului. Titrarea se consider terminat cnd ultima pictur produce o schimbare slab
dar sesizabil i stabil a culorii lichidului.
Erorile determinrilor volumetrice
n analizele chimice pot interveni dou tipuri de erori:
- erori sistematice
- erori ntmpltoare
Erorile sistematice au valori constante i sunt ntotdeauna pozitive sau negative.
Erorile ntmpltoare au valori i semne diferite. Ele se pot elimina prin
efectuarea unui mare numr de determinri i prin calcularea mediei aritmetice a
volumelor de echivalen cu valori apropiate. Volumele de echivalen ale cror valori
sunt exagerat de ndeprtate se exclud
Practic se efectueaz titrarea a trei probe paralele efectundu-se media aritmetic
ntre volumele de echivalen identice sau cele cu valoare foarte apropiat. Se accept o
diferen ntre volumele de echivalen mai mic sau egal cu 0,2 ml. S lum un
exemplu. Volumele de echivalen obinute la titrarea a trei probe paralele sunt: V
1
= 7
ml; V
2
= 7,1 ml; V
3
= 7,4 ml. Diferenele V
3
- V
1
i V
3
- V
2
sunt mai mari de 0,2 ml,
deci V
3
se exclude. Volumul mediu ( v
HCl
. La
baza calcului st relaia:
v
HCl
. F
HCl
= V
KHCO
3
. F
KHCO
3
10 x FKHCO3
de unde
FHCl =
v
HCl
Dozarea unei soluii de NaOH cu soluia de HCl 0,1 N cu factor cunoscut
n trei flacoane Erlenmeyer se msoar cte 10 ml sol. NaOH, se adaug cte 3
picturi de metiloranj i se titreaz cu soluie titrat de HCl 0,1 N pn la virajul
indicatorului de la galben la portocaliu. Concentraia procentual mixt a soluiei de
NaOH se exprim n g/100 ml i se calculeaz n felul urmtor:
- se face media aritmetic a celor trei volume de echivalen i se obine v
HCl
- conform definiiei concentraiei normale, 1000 ml HCl 1 N conin 1 E
gHCl
- din ecuaia reaciei chimice NaOH + HCl = NaCl + H
2
O rezult c 1 Eq
HCl
reacioneaz cu 1 Eq
NaOH
deci:
1000 ml HCl 1 N ............. 40 g NaOH
1000 ml HCl 0,1 N............ 4 g NaOH
v
HCl
F
HCl
................... x g NaOH
x =
4
1000
v F
HCl
- reprezint g NaOH coninute n volumul sol. de
NaOH titrate (10 ml).
C
NaOH
%(m/v) = 10 x, reprezint concentraia procentual mixt a soluiei de
NaOH.
27
Dozarea amoniacului prin diferen
Principiu:
Metoda direct de dozare a amoniacului cu o soluie titrat de HCl 0,1 N, n
prezen de metiloranj, este n general evitat datorit pierderilor de amoniac prin
desorbie. Este preferat metoda dozrii amoniacului prin diferen. Soluia de amoniac
se trateaz cu un volum de soluie titrat de HCl, ce conine un exces de acid i se
determin excesul de HCl prin titrare cu o soluie titrat de NaOH n prezen de
metiloranj. Reaciile sunt urmtoarele:
NH
3
+ HCl = NH
4
Cl; NaOH + HCl = NaCl + H
2
O.
Reactivi: - Soluie de HCl 0,1N cu factor cunoscut
- Metilorange, soluie alcoolic 0,1%
Modul de lucru:
n trei flacoane Erlenmeyer se introduc cte 10 ml HCl 0,1 N, 5 ml soluie de
NH
3
, 1-2 picturi de metiloranj i se titreaz excesul de acid cu o soluie titrat de
NaOH 0,1 N pn la virajul indicatorului de la rou la portocaliu.
Calcul:
1000ml HCl 0,1 N ................. 1,7 g NH
3
v
HCl
F
HCl
- v
NaOH
F
NaOH
...........x
x = g NH
3
/ 5 ml
v
HCl
F
HCl
- v
NaOH
F
NaOH
= volumul teoretic de HCl, obinut pe cale
titrimetric, ce conine cantitatea de HCl care a reacionat cu NH
3
din
prob; v
HCl
= 10 ml; v
NaOH 0,1 N
= media aritmetic a volumelor de
echivalen obinute la titrarea celor 3 probe paralele.
Concentraia soluiei de amoniac se exprim n g/100 ml, adic C
NH3
%(m/v) = 20 x
Titrarea unui acid slab cu o baz tare
Principiu:
La titrarea unui acid slab cu o baz tare se formeaz o sare hidrolizabil. De
exemplu titrarea acidului lactic cu o soluie titrat de NaOH implic urmtoarele
procese chimice:
28
CH
3
CH
OH
COOH+ Na
+
+ HO
-
CH
3
CH
OH
COO
-
+ Na
+
+ H
2
O
H
2
O H
+
+ OH
-
H
+
+ CH
3
- CH - COO
-
CH
3
- CH - COOH
OH
OH
Din ecuaii reiese c anionii acidului slab, rezultai prin ionizarea complet a
srii, se combin cu H
+
rezultai n urma procesului de disociere a H
2
O . Astfel
| |
H
+
descrete, iar
| |
OH
>
| |
H
+
ceea ce determin reacia alcalin a soluiei. La punctul
de echivalen soluia are un pH > 7. n general, soluiile apoase ale srurilor acizilor
slabi cu baze tari sunt alcaline. Se alege acel indicator al crui interval de viraj conine
valoarea pH-ului soluiei srii hidrolizabile. n cazul de fa este folosit indicatorul
fenolftalein, al crui interval de viraj este cuprins ntre 8-10 uniti de pH. Aa cum se
vede n figura de mai jos, n care acidul slab este CH
3
COOH, folosirea unui indicator cu
interval de viraj n mediul acid nu permite punerea n eviden cu precizie punctul de
echivalen al reaciei
Aplicaie: Dozarea acidului lactic cu o soluie titrat de NaOH
Reactivi: - Soluie NaOH 0,1N cu factorul cunoscut
- Soluie alcoolic de fenolftalein 0,1%
Modul de lucru:
n trei flacoane Erlenmayer se msoar cte 10 ml soluie acid lactic, se adaug
3-4 picturi de fenolftalein i se titreaz cele trei probe cu o soluie titrat de NaOH 0,1
N, pn la virajul indicatorului de la incolor la roz slab persistent cel puin 20 de
secunde .
29
Concentraia acidului lactic se exprim n procente mixte i se calculeaz n felul
urmtor:
1000 ml NaOH 0,1 N ............... 9 g acid lactic
v
F
NaOH
............................ x
x = g/10 ml c% (m/v) = 10 x
Titrarea unei baze slabe cu un acid tare
Principiu:
La titrarea unei baze slabe cu un acid tare se formeaz o sare hidrolizabil, pH-ul
n punctul de echivalen fiind mai mic dect 7. n general soluiile apoase ale srurilor
acizilor tari cu baze slabe sunt acide. De exemplu titrarea unei soluii de NH
3
cu o
soluie titrat de HCl implic urmtoarele procese chimice:
NH
3
+ H
2
O NH
4
OH
NH
4
OH + H
+
+ Cl
-
NH
4
+ Cl
-
+ H
2
O
H
2
O H
+
+ OH
-
NH
4
+ OH
-
NH
4
OH
+
+
Ionii OH
-
rezultai n urma procesului de disociere a H
2
O au tendina de a
reaciona cu o parte din ionii de amoniu formai. Astfel
| |
OH
descrete, iar
| |
H
+
>
| |
HO
V
KMnO4
Determinri permanganometrice n mediu acid
Permanganatul de potasiu n mediu puternic acid (H
2
SO
4
20%), la temperatura
de 70-80 C, se reduce la sarea manganoas (MnSO
4
) punnd n libertate oxigen,
conform reaciei cunoscute
2KMnO
4
+ 3H
2
SO
4
= K
2
SO
4
+ 2MnSO
4
+3H
2
O +5|O|
Reacia decurge autocatalitic deoarece ionii manganoi (Mn
2+
i Mn
3+
) formai
n primul moment catalizeaz reducerea n continuare a permanganatului de potasiu.
Decolorarea soluiei se produce datorit faptului c MnSO
4
format este incolor n soluii
diluate.
Soluia acid de permanganat servete n oxidimetrie, pentru dozarea
volumetric a acidului oxalic, a apei oxigenate i a altor substane (acidului azotos, etc).
Sfritul titrrii se recunoate prin dispariia sau apariia culorii violete determinate n
soluie de ionul MnO
4
-
.
Dozarea acidului oxalic (micrometod)
Principiu:
Reacia titrimetric este urmtoarea:
5(COOH)
2
+2KMnO
4
+3 H
2
SO
4
= K
2
SO
4
+2MnSO
4
+10CO
2
+8H
2
O
Reactivi: - Soluie H
2
SO
4
20%
- Soluie KMnO
4
0,01 N cu factor, F
KMnO4
, cunoscut
Modul de lucru:
n trei flacoane Erlenmeyer se msoar cte 1 ml soluie de acid oxalic de dozat.
Se adaug cte 1 ml H
2
SO
4
, 2 ml ap bidistilat i se nclzete pn la 70-80C. Se
titreaz cu KMnO
4
0,01N pn cnd soluia rmne colorat n roz slab cel puin 10
secunde.
Calcul
1000 ml KMnO
4
0,01N reacioneaz cu 0,01 Eq-gram de acid oxalic= 0,45 g acid oxalic
V KMnO
4
F
KMnO4
............................................................ x g acid oxalic
x g (COOH)
2
........................... 1 ml soluie
c%(m/v) = 100x
33
Aceast reacie nu se produce direct: o pictur de soluie de permanganat nu se
decoloreaz imediat cnd este adugat ntr-o soluie coninnd exces de acid oxalic i
sulfuric. Culoarea roz a soluiei (datorat prezenei ionului MnO
4
-
) persist, disprnd
numai dup un anumit interval de timp deoarece reacia redox corespunztoare are o
cinetic lent pn la formarea catalizatorului (Mn
3+
). Apoi ionii Mn
3+
se reduc la Mn
+2
,
care este un proces instantaneu. n ultima etap manganul (II) format reacioneaz rapid
cu ionul MnO
4
-
(VII), formndu-se Mn (III) foarte reactiv care oxideaz acidul oxalic,
finalul titrrii fiind determinat de epuizarea (COOH)
2
din prob i apariia unui mic
exces de ioni MnO
4
-
care coloreaz persistent soluia de titrat. Secvena de reacii ale
procesului autocatalitic este urmtoarea:
(1) Mn(VII) + (COOH)2 -------> Mn(III) +CO2 (lent)
(2) Mn(III) + (COOH)2 -------> Mn(II) + CO2 (instantaneu)
(3) Mn(II) + Mn(VII) ---------> Mn(III) (rapid).
n stadiul iniial viteza reaciei este controlat de etapa lent (1). De ndat ce
concentraia ionilor Mn(II) devine apreciabil, reducerea permanganatului poate s se
desfoare rapid pe calea procesului (3). Spre finalul titrrii culoarea MnO
4
-
dispare tot
mai greu datorit scderii concentraiei acidului oxalic. Reacia este accelerat n final,
ca i la nceput, prin nclzire la 70-80C .
Dozarea apei oxigenate (macrometod)
Principiu:
Dozarea se poate face tot prin titrarea direct cu permanganat n soluie de acid
sulfuric. Apa oxigenat (peroxid de hidrogen) funcioneaz att ca oxidant, dup reacia:
H
2
O
2
+2H
+
+2e
-
2H
2
O; ct i ca reductor, dup reacia: H
2
O
2
2H
+
+O
2
;
n soluie acid permanganatul de potasiu este redus dup reacia:
5H
2
O
2
+2KMnO
4
+3 H
2
SO
4
= K
2
SO
4
+2MnSO
4
+8H
2
O +5O
2
Modul de lucru:
n trei flacoane Erlenmeyer se msoar cte 10 ml soluie de ap oxigenat de
dozat. Se adaug cte 10 ml H
2
SO
4
20%. Se titreaz cu soluie de KMnO
4
0,1N cu
factor, F
KMnO4
, cunoscut pn cnd soluia rmne colorat n roz slab.
34
Calcul:
1000 ml KMnO
4
0,1N sunt echivaleni cu ...................1,7 g ap oxigenat
V KMnO4 F
KMnO4
............................................................ x g ap oxigenat
x g H
2
O
2
10 ml soluie
c% (m/v) = 10x
Iodometrie
Principiu:
Metoda se bazeaz pe sistemul redox:
I
2
+ 2e
-
<=> 2I
-
al crui potenial redox standard biochimic este E
0
' = 0,62 V (pH = 7)
n soluii de iodur coninnd ionul I
3
-
, reacia redox i valoarea potenialului redox
standard biochimic sunt:
I
3
-
+ 2e
-
<=> 3 I
-
E
0
' = 0,54 V (pH=7)
n aceste reacii, iodul molecular este oxidant, iar substanele care au un
potenial redox mai mic dect + 0,54V vor fi oxidate de ctre iod i se vor putea
determina uor. Un exemplu este reacia cu tiosulfat:
I
2
+ 2S
2
O
3
2-
2I
-
+S
4
O
6
2-
(ioni tetrationat)
Substanele care au potenial redox mai mare (substanele oxidante), cum este
ionul Fe
3+
, pun n libertate iodul molecular conform reaciei:
2Fe
3+
+ 2I
-
2Fe
2+
+ I
2
Calculul de baz al iodometriei este deci urmtorul: din cantitatea de iod eliberat
de un oxidant sau din cantitatea de I
2
redus de un reductor se poate calcula cantitatea
oxidantului sau reductorului.
Sfritul reaciei dintre substana de analizat i iod, n prezen de iodur, este
determinat cu ajutorul amidonului, care formeaz un compus colorat intens albastru, de
forma |(C
6
H
10
O
5
)
4
I|
4
-KI. Sensibilitatea indicatorului este mare, punndu-se n eviden
circa 1,5 mg iod la litru de soluie, (~10
-5
N) acidulat cu HCl sau H
2
SO
4
. Creterea
temperaturii soluiei de titrat sau prezena alcoolului metilic sau etilic micoreaz
sensibilitatea indicatorului.
Tot ca indicator n iodometrie se poate folosi o soluie alcoolic 0,2% de o-
naftol-flavon, care cu iodul d un compus colorat tot n albastru. Acest indicator este
ns mult mai sensibil dect amidonul i se poate folosi la titrarea soluiilor mai diluate
35
de iod (~10
-3
n) sau la titrarea iodometric a soluiilor colorate, n lumin ultraviolet
cnd, la un exces de iod, fluorescena albastr a indicatorului dispare. n acelai mod se
folosete i rodamina B, a crei fluorescen roie la lumina ultraviolet dispare n
prezena unui mic exces de iod.
Dozarea substanelor reductoare
Substanele reductoare pot fi dozate n dou feluri:
- substana de dozat se titreaz direct cu soluie de iod,
- substanei de dozat i se adaug soluie de iod n exces i excesul de iod se titreaz cu o
soluie de tiosulfat de sodiu cu factor cunoscut. Sfritul acestor titrri poate fi
determinat cu unul din indicatorii prezentai mai sus.
Reacia titrimetric este: 2Na
2
S
2
O
3
+ I
2
2NaI + Na
2
S
4
O
6
Stabilirea factorului soluiei de Na
2
S
2
O
3
0,01 N
Principiu:
n cazul soluiei etalon de permanganat de potasiu au loc urmtoarele reacii:
10 KI + 2 KMnO
4
+ 16 HCl = 12 KCl + 2 MnCl
2
+ 5 I
2
+ 8 H
2
O
I
2
+ 2 Na
2
S
2
O
3
= 2 NaI + Na
2
S
4
O
6
Reactivi: - Soluie de KMnO
4
0,01 N cu factorul F
KMnO4
- Soluie de HCl 15%
- Soluie de KI 0,5%
Modul de lucru:
n 3 baloane Erlenmeyer se msoar cte 10 ml soluie de permanganat 0,01 N,
se adaug cte 5 ml soluie de HCl 15% i 10 ml soluie de KI 0,5%.
Dup 5 minute de repaus se titreaz cu tiosulfat de sodiu iodul pus n libertate
pn la culoarea galben-deschis a soluiei. Se adaug 2 ml soluie de amidon 0,5% i se
continu titrarea pn la albastru pal agitnd puternic. O pictur de soluie de tiosulfat
n exces decoloreaz complet soluia.
Calcul:
Se folosete formula V
Na2S2O3
F
Na2S2O3
= V
KMnO4
F
KMnO4
VKMnO4
FKMnO4
adic F
Na2S2O3
=
VNa2S2O3
36
Dozarea substanelor oxidante
Din soluia de KI oxidanii pun n libertate iod elementar. Cantitatea de iod pus
n libertate este echivalent cu cantitatea substanei oxidante adugate. Iodul elementar
pus n libertate se dozeaz prin titrare cu tiosulfat de sodiu care reduce iodul la ioni de
iodur conform reaciei de mai sus.
Dozarea K
3
|Fe(CN)
6
| (macrometod)
Principiu:
Iodul rezultat prin oxidarea ionilor I
-
de ctre ionii |Fe(CN)
6
|
3-
conform reaciei,
2 |Fe(CN)
6
|
3-
+ 2 I
-
2 |Fe(CN)
6
|
4-
+ I
2
, este titrat cu tiosulfat de sodiu n
prezena amidonului ca indicator. Reacia are loc n mediu slab acid (CH
3
COOH) ns,
fiind reversibil, deplasarea ei spre dreapta se realizeaz prin adaosul de ioni Zn
2+
din
amestecul CH
3
COOH ZnSO
4
. Are loc reacia:
2 K
4
|Fe(CN)
6
| + 3 ZnSO
4
K
2
Zn
3
|Fe(CN)
6
|
2
+ 3 K
2
SO
4
Ireversibilitatea acestei reacii se datoreaz insolubilitii srii duble a ferocianurii.
Reactivi: - Soluie KI 0,5 %
- Soluie CH
3
COOH - ZnSO
4
(3% fiecare)
- Soluie Na
2
S
2
O
3
0,01 N cu factor cunoscut
- Soluie amidon 0,5 %
Modul de lucru:
n 3 baloane Erlenmeyer se msoar cte 10 ml fericianur de potasiu. Se adaug
cte 10 ml soluie de KI i 15 ml CH
3
COOH - ZnSO
4
. Dup 5 minute se titreaz cu
soluie de tiosulfat de sodiu 0,01N iodul pus n libertate pn la decolorarea aproape
complet a soluiei. Se adaug 2 ml soluie de amidon i se continu titrarea pn la
dispariia culorii albastre.
Calcul:
1000 ml Na
2
S
2
O
3
0,01N ..3,29 g K
3
|Fe(CN)
6
|
VF
Na2S2O3.
..........................................x g
x g K
3
|Fe(CN)
6
|.10 ml sol
c%(m/v) = 10 x
Dozarea K
3
|Fe(CN)
6
| (micrometod)
Principiu i reactivi: sunt aceeai ca i la macrometod.
37
Modul de lucru:
n 3 baloane Erlenmeyer se msoar cte 2 ml ap bidistilat. Se adaug cu
ajutorul micropipetei cte 0,10 ml fericianur de potasiu. Se adaug cte 1 ml soluie de
KI i 1,5 ml CH
3
COOH - ZnSO
4
. Dup 5 minute se titreaz iodul eliberat cu soluie de
tiosulfat de sodiu 0,01N n prezena de 0,2 ml amidon pn la dispariia culorii albastre.
Calcul:
1000 ml Na
2
S
2
O
3
0,01N ..3,29 g K
3
|Fe(CN)
6
|
VF
Na2S2O3.
..........................................x g
x g K
3
|Fe(CN)
6
|.0,1 ml sol
c%(m/v) = 1000 x
Sistemul I
2
/I
-
se gsete n concentraie foarte mic n apa de mare (0,05 mg/l), deoarece
iodul este legat n cea mai mare parte sub form organic. Plantele marine extrag iodura
din apa de mare. Iodura se regsete n cenua acestor plante. Se mai gsete iodur n
cantiti variabile (7-46 g/m
3
) n apele fosile care nsoesc petrolul i, n concentraii mai
mici, n unele ape minerale.
Iodul apare, n concentraii foarte mici, n toate vieuitoarele i este indispensabil
pentru viaa acestora. La animalele superioare, iodul este concentrat n glanda tiroid
ntr-o protein numit tireoglobulin. Lipsa de iod n apa de but, n special n unele
regiuni muntoase, determin apariia, la populaia acelor regiuni, a unor maladii ale
glandei tiroide (gu).
Complexometria volumetric
Metodele complexometrice servesc la dozarea cationilor prin titrare cu soluia
agentului complexant. Prin metodele indirecte se pot doza complexometric i anioni,
precum i substanele organice. Din numrul mare de reactivi unul frecvent folosit este
complexonul III (EDTA Na
2
) utilizat spre exemplu pentru titrarea ionilor Ca
2+
.
38
CH
2
CH
2
N
N
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
COOH
C
C
COOH
O
O
O
-
O
-
Na
+
Na
+
+ Ca
2+
CH
2
CH
2
N
N
CH
2
CH
2
COO
-
C O
O
Ca
CH
2
CH
2
C
COO
-
O
O
2-
+ 2 Na
+
+ 2H
+
complexon III complexonat de
(etilendiamino-tetraacetatul disodic) calciu
Existena mai multor cicluri pentaatomice imprim moleculei o mare stabilitate.
Stabilitatea complexului format este una din condiiile pe care trebuie s o ndeplineasc
o reacie care st la baza unei metode complexometrice. Stabilitatea se exprim
cantitativ prin constanta de stabilitate K
MY
. Dac notm cu M ionul de metal i cu Y
agentul de complexare, reacia de complexare este urmtoarea:
M + Y MY
Constanta de stabilitate este exprimat prin relaia:
| |
| | | |
K
MY
M Y
MY
=
Valoarea constantei de stabilitate depinde de natura complexului i de o serie de ali
factori, cum ar fi pH-ul soluiei.
Indicatorii folosii n complexometrie sunt indicatorii metalocromici, colorani
organici, care formeaz compleci interni cu cationii metalici, de alt culoare dect
aceea a indicatorului liber.
Indicatorul trebuie s fie ales n aa fel nct stabilitatea complexului format de
el cu ionii de metal s fie mai mic dect stabilitatea complexului format agentul de
complexare cu ionii metalici. n tabelul de mai jos sunt prezentai principalii indicatori
metalocromici, cationii pentru care sunt folosii i logaritmul constantelor de stabilitate
ale lor n mediile precizate.
39
Indicator
metalcromic
Cationi Mediu lg K
MY
Eriocrom negru T Cd
2+
Co
2+
Cu
2+
Mg
2+
Pb
2+
Zn
2+
NaClO
4
0,3N
-
NaClO
4
0,3N
-
NaClO
4
0,3N
NaClO
4
0,3N
12,74
20,00
21,38
7,00
13,19
12,31
Murexid Ca
2+
Cu
2+
Ni
2+
-
-
KNO
3
0,1N
2,68
3,50
3,36
Acid sulfosalicilic Al
3+
Cu
2+
Fe
3+
NaClO
4
0,2N
NH
4
ClO
4
0,2N
-
10,01
9,04
14,05
Ftaleincomplexon Ba, Sr, Ca
Xilenoloranj Be
2+
Bi
3+
La
3+
Pb
2+
, Zn
2+
,
Hg
2+
, Sn
2+
NaClO
4
NaNO
3
0,2N
NaClO
4
0,2N
-
-
3,92
75,60
11,67
-
-
Acid
calconcarbonic
Ca
2+
- -
Cromazurol S Al
3+
Cu
2+
Fe
3+
Ni
2+
KCl 0,2N
NaClO
4
0,1N
KCl 0,1N
-
4,32
4,10
15,60
9,30
o, o`- Dipiridil
Fe
2+
Zn
2+
KCl 0,1N
KCl 0,1N
3,70
4,35
40
Dozarea aminoacizilor prin metoda complexonometric
(metoda Budesinsky)
Principiu :
Fosfatul cupric, greu solubil n ap, reacioneaz n mediu neutru cu aminoacizii
formnd compleci de tipul chelailor. Un aminoacid monoamino-monocarboxilic
complexeaz ionii Cu
2+
n raport de 2:1 formnd un complex solubil n ap. Reacia este
urmtoarea:
6 HC
COOH
R
NH
2
+Cu
3
(PO
4
)
2
3HC
COO
R
N
H
H
Cu N
H
H
CH
OOC
R
+ 2PO
4
3-
+ 6H
+
Excesul de fosfat cupric nedizolvat se poate separa prin centrifugare sau filtrare.
Prin adugare de HCl la filtrat se elibereaz ionii cuprici din complex conform reaciei:
HC
COO
R
N
H
H
Cu
N
H
H
C
OOC
R
H + 2HCl Cu
2+
+ 2 Cl
-
+ 2 HC
COOH
R
NH
2
Ionii cuprici eliberai se dizolv prin titrare cu complexon III n prezena
indicatorului metalocromic piridilazonaftol (PAN). Reacia titrimetric de complexare
este urmtoarea:
CH
2
CH
2
N
N
CH
2
COOH
CH
2
C O
CH
2
CH
2
COOH
C O
O
O
-
-
Na
+
Na
+
+ Cu
2+
CH
2
CH
2
N
N
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
Cu
COO
-
COO
-
C
C
O
O
O
O
+ 2Na
+
+ H
+
2-
Reactivi: - soluie complexon III 0,01N cu factor cunoscut
- soluie HCl 0,01N
- indicator PAN 0,1 % n soluie etanolic
- suspensie de Cu
3
(PO
4
)
2
41
Modul de lucru:
n trei flacoane Erlenmeyer se pipeteaz cte 5 ml soluie aminoacid, 5 ml
suspensie agitat de Cu
3
(PO
4
)
2
, se agit bine i apoi se las 5 minute n repaos.
Amestecul se filtreaz i din filtrate se pipeteaz cte 5 ml n trei flacoane Erlenmeyer
curate. Se adaug ctre 1 ml soluie HCl, 3 picturi indicator PAN i se titreaz ionii Cu
2+
eliberai cu o soluie de complexon III 0,01 M pn la virajul indicatorului de la rou
violet la galben-verzui.
Calcul:
Dac se cunoate natura aminoacidului prezent se ia n calcul masa molecular a
lui. Dac este vorba de un amestec de aminoacizi monoamino-monocarboxilici
rezultatul se exprim n mg N o-aminic/100 ml sau mmoli N o-aminic/l.
1000 ml sol. complexon III 0,01 M ....................0,01 2 14 g N
v
F
Complexon III
................................... .............................. x
x = .......g/ 2,5 ml c% (m/v) = 40 x
Volumetria prin reacii de precipitare
Principii:
Soluia de reactiv formeaz cu componentul de dozat un precipitat insolubil. Din
volumul reactivului folosit pentru precipitarea complet a componentului de dozat se
calculeaz cantitatea componentului respectiv. Pot fi utilizate numai acele reacii, la
care precipitatul format are compoziie constant, reacia decurge rapid i punctul de
echivalen poate fi indicat. Fiecare metod necesit indicator aparte. Dac n cursul
titrrii se formeaz precipitat alb sau de culoare deschis, putem folosi un indicator care
cu ionul de dozat sau cu excesul reactivului d reacie de culoare sau precipitat colorat.
Dintre metodele bazate pe reacii de precipitare cea mai des utilizat este argentometria,
n care se ntrebuineaz ca reactiv AgNO
3
. Azotatul de argint (ionii de Ag
+
) formeaz
cu ionii Cl
-
, Br
-
, I
-
, SCN
-
precipitate practic insolubile.
Prepararea unei soluii de AgNO
3
0,01N
Azotatul de argint chimic pur se deshidrateaz la 210-250C. Dup rcire se
cntrete cantitatea necesar (1,6989 g/l) se dizolv i se completeaz cu ap distilat
42
la volumul necesar. Dac nu se msoar exact cantitatea teoretic de AgNO
3
, soluia va
avea factorul:
Cantitatea msurat
F
AgNO3
=
1,6989
Soluia se pstreaz n sticl brun.
Stabilirea factorului soluiei de NH
4
SCN 0,01 N
Principiu:
n vederea determinrii, un volum precis de AgNO
3
0,01 N (cu factorul
cunoscut) se titreaz cu NH
4
SCN. Are loc reacia:
AgNO
3
+ NH
4
SCN = AgSCN + NH
4
NO
3
Drept indicator servete alaunul feric. Indicarea sfritului titrrii are loc prin
urmtoarea reacie: Fe
3+
+ 3 SCN
-
= Fe(SCN)
3
Formarea sulfocianurii de fer, substan intens colorat n rou, indic un mic
exces de NH
4
SCN.
Modul de lucru:
n trei baloane Erlenmeyer se msoar cte 10 ml soluie 0,01 N AgNO
3
cu
factorul cunoscut. Se adaug 5 ml HNO
3
10% i 2 ml alaun feric ca indicator. Se
titreaz cu soluia de NH
4
SCN 0,01 N, agitnd puternic, pn la roz pal persistent. Se
calculeaz factorul din relaia:
V
SCN
F
SCN
= V
AgNO3
F
AgNO3
Dozarea clorurilor prin metoda Volhard
Principiu:
Dozarea indirect a ionului de clor dup Volhard const n urmtoarele etape. La
soluia de analizat, acidulat cu HNO
3
, se adaug n exces o soluie titrat de AgNO
3
.
Are loc reacia:
AgNO
3
+ Cl = AgCl + NO
3
Excesul de azotat de argint se titreaz cu sulfocianur n
prezen de Fe
3+
ca indicator. AgNO
3
+ SCN = AgSCN + NO
3
Modul de lucru:
n 3 baloane Erlenmeyer se msoar cte 10 ml soluie care conine ionii de Cl,
se adaug 20 ml soluie 0,01N de azotat de argint 10 ml acid azotic 10% se aduce la
43
fierbere, se adaug 2 ml alaun feric 20%. Se titreaz cu o soluie 0,01 N de NH
4
SCN
agitnd puternic, pn la roz slab, persistent timp de 5 10 secunde.
Calcul:
Rezultatul se va exprima n mM/l. Fiind vorba de o titrare prin diferen,
raionamentul este identic cu cel din cazul determinrii amoniacului.
Identificarea glucidelor
Reacii de reducere
Reaciile de reducere nu sunt specifice doar glucidele reductoare, ele fiind date
i de alte substane neglucidice cu caracter reductor. Caracterul reductor al
monozaharidelor i a unor dizaharide este datorat prezenei n molecula lor a funciunii
carbonilice, care se poate oxida, reducnd la cald i n mediu alcalin cationii metalelor
grele: Cu, Ag, Bi, precum i unele substane organice ca acidul picric, indigoul, etc.
1. Reacia Fehling
Principiu:
Gruparea carbonil din glucidele reductoare reduce la cald Cu
2+
pn la Cu
+
din
complexul solubil format n mediu alcalin cu sarea Seignette (tartrat dublu de sodiu i
potasiu). Se formeaz Cu
2
O, pulbere de culoare roie-crmizie, conform reaciilor:
CuSO
4
+ 2KOH Cu(OH)
2
+ K
2
SO
4
C
6
H
12
O
6
+ 2 Cu(OH)
2
C
6
H
12
O
7
+ Cu
2
O + 2 H
2
O
acid gluconic
Reactivi: - Reactivul Fehling se obine n urma amestecrii soluiei I i II n
volume egale, operaie ce se desfoar n momentul
ntrebuinrii.
- Soluia I: CuSO
4
35 g/1000 ml soluie
- Soluia II: 150 g sare Seignette i 90 g NaOH la 1000 ml soluie
- Soluii 2% de glucoz, fructoz, lactoz.
Modul de lucru:
Se amestec ntr-o eprubet 1 ml reactiv Fehling I cu 1 ml reactiv Fehling II se
adaug 2 ml soluie de glucid i se nclzete pn la fierbere agitnd continuu. n
prezena unui glucid reductor se formesaz un precipitat rou-crmiziu de Cu
2
O.
44
2. Reacia Benedict
Principiu:
Glucidele reductoare reduc la cald n mediu alcalin hidroxidul de cupru de
culoare albastr n oxid de cupru (I) de culoare roie-crmiziu. Reacia Benedict
prezint avantajul c se folosete un singur reactiv, ionul de Cu
2+
fiind complexat n
soluie de ctre citratul de sodiu.
Reactivi: - Reactivul Benedict: 173 g citrat de sodiu i 100 g Na
2
CO
3
anhidru se dizolv n 800 ml H
2
O distilat fierbinte, se filtreaz i
se aduce volumul la 850 ml. Se dizolv separat 17,3 g CuSO
4
5
H
2
O n 100 ml H
2
O distilat, se adaug sub agitare primei soluii
i se completeaz volumul soluiei finale la 1000 ml.
- Soluii 2% de glucoz, fructoz, lactoz.
Mod de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 1 ml soluie de glucid i 3 ml reactiv Benedict, se
nclzete pn la fierbere agitnd continuu. Apariia unui precipitat rou-crmiziu
implic existena n soluie a glucidului reductor.
3. Reacia Tollens
Principiu:
Glucidele reductoare reduc la cald Ag
+
, din azotatul de argint amoniacal, la Ag
metalic care se depune pe pereii eprubetei sub forma unei oglinzi (oglinda de argint),
conform reaciilor:
AgNO
3
+ NaOH AgOH + NaNO
3
AgOH + 2 NH
3
[Ag(NH
3
)
2
]OH
C
6
H
12
O
6
+ 2 [Ag(NH
3
)
2
]OH C
6
H
12
O
7
+ 2 Ag + 4NH
3
+ H
2
O
Reactivi: - soluie AgNO
3
5% n ap distilat
- soluie NH
4
OH 20%
- soluii 2% de glucoz, fructoz, lactoz.
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 1 ml AgNO
3
, se adaug pictur cu pictur soluie
de amoniac pn la dizolvarea precipitatului format iniial. Se adaug 1 ml soluie
glucidic i se introduce eprubeta ntr-o baie de ap nclzit la fierbere. n cazul
45
existenei unui glucid reductor n soluia glucidic se formeaz oglinda de argint.
nclzirea eprubetei se poate face i direct la flacr sub agitare blnd.
4. Reacia Nylander
Principiu:
Gruparea carbonil din glucidele reductoare reduce azotatul de bismut n bismut
metalic de culoare neagr.
Reactivi: - Reactivul Nylander: 20 g azotat bazic de bismut, 40 g sare
Seignette i 100g NaOH se dizolv n ap pentru 1000 ml soluie.
- Soluii 2% de glucoz, fructoz, lactoz.
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 1 ml soluie glucidic i 1 ml reactiv Nylander, se
nclzete pn la fierbere agitnd continuu. n prezena unui glucid reductor n soluie
apare un precipitat negru-brun.
5. Reacia Barfoed
Principiu:
Reacia Barfoed permite diferenierea monozaharidelor reductoare, pentru care
reacia este pozitiv, de dizaharidelor reductoare pentru care reacia este negativ.
Principiul reaciei const n reducerea n mediu acid a ionilor de Cu
2+
la Cu
+
din Cu
2
O,
care se depune pe fundul eprubetei sub forma unui precipitat rou-crmiziu. De fapt
reacia este potrivit att pentru monozaharide ct i pentru dizaharide reductoare.
Diferena const n vitezele de reacie foarte diferite: mari pentru monozaharide; mici
pentru dizaharidele reductoare.
Reactivi: - Reactivul Barfoed: 13,3 g acetat de cupru se dizolv n 200 ml
H
2
O distilat, se filtreaz i se adaug 1,8 ml acid acetic glacial.
- Soluii 2% de glucoz, fructoz
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 1 ml soluie glucidic i 2 ml reactiv Barfoed, se
nclzete pn la fierbere agitnd continuu timp de 1-2 minute. Apariia unui inel de
precipitat rou-crmiziu la suprafaa soluiei i depunerea de precipitat rou-crmiziu
pe fundul eprubetei pune n eviden prezena monozaharidelor.
46
6. Reacia cu acidul picric
Principiu:
Glucidele reductoare reduc una din gruprile nitro ale acidului picric (de
culoare galben) la grupare amino, cu formare de acid picramic (de culoare brun-roie).
Aceast reacie poate servi la dozarea colorimetric a glucidelor reductoare (metoda
Crecelius-Seifert).
Reactivi: - acid picric 0,5%
- glucoz 1%
- NaOH 10%
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 1 ml soluie de glucoz, 2 ml acid picric i 1 ml
NaOH. Se nclzete pn la fierbere, agitnd continuu pn la apariia unei coloraii
roii-brune.
Reacii de culoare
Reaciile de culoare sunt specifice monozaharidelor care sub aciunea acizilor
minerali concentrai se deshidrateaz i se transform n furfurol sau n derivai ai lui.
HO - C - C - OH
H
H
2
C CH - CHO
O O
H
H H
3 H
2
O
O
CHO
pentoz
furfurol
CHO
O
3 H
2
O
H H
H
O O
CH - CHO HC
H
HO - C - C - OH
HO - CH
2
-
HO - H
2
C -
hexoz
hidroximetil - furfurol
47
Furfurolul i derivaii lui pot reaciona cu fenolii, n urma reaciei rezultnd
compui colorai.
1. Reacia Molisch
Principiu:
n prezena acidului sulfuric concentrat, monozaharidele (pentozele, hexozele) se
transform n furfurol (hidroximetil furfurol) care reacioneaz cu o-naftolul n raportul
1:2 formnd produi de condensare de culoare violet. Aceast reacie o dau la cald
toate glucidele deorece, sub aciunea H
2
SO
4
conc. ele hidrolizeaz punnd n libertate
monozaharidele.
R
CHO
+
OH
OH
H
H
H
2
O
O
O
OH
OH
CH
R
Reactivi: - reactivul Molisch: soluie alcoolic 5% de alfa-naftol
- H
2
SO
4
conc.
- soluie de glucoz 1%
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 1 ml soluie glucoz 1%, se adaug 1-2 picturi din
soluia de alfa-naftol i apoi se toarn cu precauie pe peretele nclinat al eprubetei
48
H
2
SO
4
conc. La suprafaa de contact a celor dou straturi de lichide cu densiti diferite
se formeaz un inel violet.
2. Reacia Bial
Principiu:
Reacia Bial servete la identificarea pentozelor, pentru care reacia este
pozitiv, fa de hexoze, ea fiind negativ.
n prezena acizilor minerali tari, pentozele reacioneaz cu orcina (5-metil-
rezorcina) formnd produi de condensare de culoare violet sau albastru-verde n
funcie de natura acidului folosit.
Reactivi: - reactivul Bial: 6 g orcin se dizolv n 200 ml alcool etilic 96%
i se adaug 40 picturi sol. FeCl
3
10%
- HCl conc.
- soluie 1% de fructoz, arabinoz, glucoz
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 2 ml sol. de pentoz, iar n alt eprubet 2 ml soluie
de glucoz. Se adaug n fiecare eprubet 10 picturi reactiv Bial i cte 2 ml HCl conc.
Se agit coninutul eprubetelor, se astup cu dopuri de vat i se las ntr-o baie de ap
ce fierbe timp de 10 minute. Coninutul eprubetei n care se gsete soluia de pentoz
devine albastru-verzui.
3. Reacia Seliwanoff
Principiu:
Reacia Seliwanoff servete la diferenierea cetozelor de aldoze. Monozaharidele
n prezena HCl conc. reacioneaz cu rezorcina (sau ali polifenoli) formnd produii
de condensare colorai. Reacia este mai rapid i mai intens n prezena cetozelor,
cnd se obin produi colorai n rou dect n prezena aldozelor, cnd se obin produi
colorai n roz deschis.
Reactivi: - reactivul Seliwanoff: 0,15 g rezorcin, 100 ml HCl conc., 200
ml H
2
O distilat.
- soluie de fructoz, glucoz 2%
Modul de lucru:
ntr-o eprubet se introduce 1 ml soluie fructoz i n alt eprubet 1 ml soluie
de glucoz. Se adaug n ambele eprubete cte 2 ml reactiv Seliwanoff i se nclzesc
49
probele pn la fierbere. Dup rcire, coninutul eprubetei cu fructoz se coloreaz n
rou, iar a celei cu glucoz n roz slab.
Reacia cu fenilhidrazina
Reacia este specific glucidelor reductoare i are ca rezultat formarea
osazonelor. Osazonele diferitelor glucide se deosebesc ntre ele prin structura cristalin
ceea ce determin imagini microscopice diferite, aa cum se vede n figura de mai jos.
De asemenea ele se deosebesc prin solubilitate, puncte de topire.
Principiu:
Reacia glucidelor reductoare cu fenilhidrazina decurge n dou etape:
- la rece, se formeaz fenilhidrazina
- la cald, n prezena unui exces de reactiv, se formeaz osazona specific
glucidului folosit. Cetonele reacioneaz ca i aldozele. Prin RMN s-a
dovedit c osazonele au o structur chelatic ciclic.
Reactivi: - fenilhidrazin solid
- CH
3
COONa H
2
O
- acid acetic glacial
- soluii 10% de glucoz, lactoz, maltoz
Modul de lucru:
Se introduc cte 5 ml soluie de glucoz, lactoz i maltoz n cte o eprubet, se
adaug 0,5 ml acid acetic glacial, puin fenilhidrazin i o cantitate dubl de acetat de
sodiu. Se agit i se introduc eprubetele ntr-o baie de ap la fierbere timp de 1/2 de or.
50
Dup rcire apar cristalele galbene specifice, care se vor examina la microscop, punnd
1-2 picturi din fiecare prob pe o lamel de sticl.
H
C = O
HC - OH
R
+ H
2
N - NH - C
6
H
5
H
2
O
R
HC - OH
C = N - NH - C
6
H
5
H
glucid
reductor
fenilhidrazin
fenilhidrazon
H
C = N - NH - C
6
H
5
H-C - OH
R
+ H
2
N - NH - C
6
H
5
NH
3
C
6
H
5
- NH
2
R
C = O
C = N - NH - C
6
H
5
H
H
C = N - NH - C
6
H
5
C = O
R
fenilhidrazin
H
2
O
+ H
2
N - NH - C
6
H
5
R
C = N - NH - C
6
H
5
C = N - NH - C
6
H
5
H
osazon
Identificarea dizaharidelor
Dizaharidele pot fi reductoare - maltoz, lactoz sau nereductoare - zaharoza.
Dup o prealabil hidroliz a legturii glicozidice i cele nereductoare vor da reaciile
caracteristice de reducere i culoare ale monozaharidelor.
51
Reactivi: - reactiv Benedict
- reactiv Barfoed
- acid clorhidric 10%
- hidroxid de sodiu 10%
- soluii 2% de zaharoz, lactoz, maltoz
Modul de lucru:
Se introduc cte 2 ml soluie maltoz, zaharoz i lactoz n cte o eprubet, se
adaug 2 ml reactiv Benedict i se nclzesc soluiile pn la fierbere. Reacia este
pozitiv n cazul maltozei i a lactozei care sunt dizaharide reductoare. ntr-o alt
eprubet se introduc 2 ml zaharoz, 3 picturi HCl 10% i se aduce soluia la fierbere.
Dup rcire se neutralizeaz cu 3 picturi de NaOH 10%, se adaug apoi 2 ml reactiv
Benedict i se nclzete din nou la fierbere. Reacia va fi pozitiv pentru c n urma
hidrolizei au rezultat dou monozaharide reductoare.
Identificarea polizaharidelor
Principiu:
Polizaharidele cu importan biologic - amidonul, dextrinele, glicogenul -
formeaz cu iodul la rece combinaii colorate diferit:
- amidonul cu iodul - albastru
- dextrinele cu iodul - brun-rou clar
- glicogenul cu iodul - crmiziu opalescent
Aceste combinaii sunt termolabile, la cald culoarea dispare i reapare la rcire
ceea ce sugereaz termodisocierea lor.
Reactivi: - soluie apoas de iod: se amestec 0,2 g I
2
cu 1 g KI i 2 ml ap
distilat. Dup dizolvare se completeaz la 100 ml cu ap
distilat.
- soluii 2% de amidon, dextrine, glicogen
Modul de lucru:
Se introduc cte 2 ml soluie amidon, dextrin, glicogen n cte o eprubet. Se
adaug apoi 1-2 picturi soluie de iod i se observ culorile obinute. Se verific
dispariia culorilor prin nclzirea eprubetelor i reapariia lor la rcire.
52
Identificarea glucidelor
1. Reacia cu iod
incolor rou-brun albastru
amidon
monozaharide clar opalescent
dizaharide dextrine glicogen
sol.fr glucid
2. Reacia Benedict (sau Fehling)
pozitiv negativ
glucid reductor glucid nereductor
soluie fr glucid
3. Reacia Barfoed
pozitiv negativ 3'.Hidroliz acid
monozaharid dizaharid
4.Reacia Bial 4".Reacia de formare a osazonelor
4'.Reacia Benedict
pozitiv negativ maltosazona lactosazona
pentoze hexoze
pozitiv negativ
zaharoza sol.fr glucid
5. Reacia Selivanov
pozitiv negativ
fructoz glucoza
53
Identificarea aminoacizilor i proteinelor
Reacii de culoare
Reaciile de culoare nu sunt specifice moleculei proteice ca un tot, ci sunt date
de prezena n molecula proteic a unor componente structurale, cum ar fi legturile
peptidice n cazul reaciei biuretului sau prezena unor anumii aminoacizi n cazul
celorlalte reacii.
Reacia biuretului
Principiu:
Substanele care conin legturi peptidice (ncepnd cu tripeptidele) reacioneaz
cu Cu
2+
n soluie puternic alcalin dnd o coloraie caracteristic violet, purpurie,
datorit formrii unui complex colorat n care ionul Cu
2+
este unit prin legturi
coordinative cu heteroatomi ai aminoacizilor angajai n legtura peptidic. Aceast
reacie se folosete i pentru dozarea substanelor proteice prin metod
spectrofometric.
Simboliznd cu R
i
respectiv R
i+1
radicali ai aminoacizilor legai prin legtura
peptidic, aceast legtur se poate reprezenta n felul urmtor:
Cel mai simplu compus care d aceast reacie este biuretul, de unde i numele
reaciei. Formula biuretului este:
Reactivi: - Sol. CuSO
4
1%
- Sol. NaOH 10%
Mod de lucru:
La 1-2 ml soluie de cercetat se adaug un volum egal de NaOH i 3-5 picturi
de soluie de CuSO
4
. Se obine o coloraie albastr - violet, fotometrabil.
54
Reacia ninhidrinei
Principiu:
Ninhidrina (tricetohidrindenhidrat) reacioneaz cu aminoacizii n soluie
apoas, neutr sau slab alcalin i la cald, cu formarea unui compus colorat. Coloraia
variaz pentru diverii aminoacizi de la roz, rou la albastru-violet (purpura lui
Ruhemann) i este galben pentru prolin, galben-brun pentru hidroxiprolin. Aceast
reacie este dat nu numai de aminoacizi, ci i de peptide i proteine. Reacia cu
ninhidrin este una din reaciile generale folosite pentru identificarea i dozarea
aminoacizilor n special la metoda cromatografic.
Reactiv: - Sol. de ninhidrin 0,1% cu adaos de piridin.
Mod de lucru:
La 2-3 ml soluie de cercetat se adaug 0,5 ml soluie de ninhidrin, se nclzete
soluia la fierbere cca 30 secunde, apoi se rcete. Se observ formarea unei coloraii
albastru-violet (fiindc se lucreaz cu un amestec de aminoacizi).
Reacia xantoproteic
Principiu:
Aceast reacie este caracteristic aminoacizilor aromatici. Astfel fenilalanina,
tirozina, triptofanul dau o coloraie galben la nclzire cu acidul azotic concentrat.
Reacia este datorat nitrrii nucleului benzenic, respectiv imidazolic. Se poate da ca
exemplu reacia fenilalaninei cu acidul azotic:
Reactivi: - HNO
3
conc.
- Sol. NaOH 5%
Mod de lucru:
La 1 ml soluie de cercetat se adaug cteva picturi de HNO
3
concentrat. Apare
un precipitat alb sau o tulburare. Dup fierberea coninutului 1-2 minute apare o culoare
55
galben. La fierbere precipitatul se poate dizolva parial sau complet. Dac dup rcire
soluia se alcalinizeaz, culoarea se intensific, se schimb n galben portocaliu.
Apariia petelor galbene pe piele n urma aciunii acidului azotic concentrat se explic
tot prin reacia xantoproteic.
Reacia Adamkiewicz-Hopkins-Cole(reacia triptofanului)
Principiu:
Triptofanul (aminoacid care se gsete n aproape toate proteinele) d cu acidul
glioxilic (OHC-COOH) o coloraie violet. Se folosete ca reactiv acidul acetic glacial,
care conine ca impuritate acid glioxilic.
Reacia este specific nucleului indolic, astfel produii obinui prin
descompunerea triptofanului (indolul i derivaii si) dau i ei reacia pozitiv.
Reactivi: - Acid acetic glacial
- Acid sulfuric concentrat
Mod de lucru:
La 2 ml soluie de cercetat se adaug 2 ml acid acetic glacial, se amestec i se
introduc pe fundul eprubetei 2 ml H
2
SO
4
concentrat. La suprafaa de separaie se
formeaz un inel violet. Reacia se folosete n laboratoarele clinice pentru diferenierea
meningitei tuberculoase de meningitele de alt etiologie, aceast reacie fiind pozitiv
numai din lichidul cefalo-rahidian al pacienilor cu meningit tuberculoas. Meningita
este inflamaia membranelor care nvelesc creierul i mduva spinrii.
Reacia tioaminoacizilor (reacia cisteinei, cistinei)
Principiu:
Prin fierberea unei soluii alcaline coninnd tioaminoacizi sau proteine ce conin
n molecul aminoacizi cu sulf, sulful se elibereaz ca sulfur de sodiu (Na
2
S). Sulfura
de sodiu rezultat se trateaz cu acetat de plumb i se formeaz un precipitat negru-brun
de sulfur de plumb.
Reactivi: - Sol. de NaOH 30%
- Sol. de acetat de plumb 10%
Mod de lucru:
La 1 ml soluie de cercetat se adaug acelai volum de NaOH 30% i se fierbe 3-
5 minute. Dup fierbere se adaug 1-2 ml soluie de acetat de plumb i se fierbe din nou.
Se obine un precipitat sau numai o coloraie brun-neagr.
56
Reacia Pauli (reacia histidinei i tirozinei)
Principiu:
Tirozina, histidina i proteinele coninnd aceti aminoacizi, formeaz prin
cuplare cu acidul diazobenzensulfonic, un colorant azoic roz care se intensific la rou
prin alcalinizare. Sinteza srii de diazoniu are loc prin reacia:
Reacia de cuplare este urmtoarea (se ia n considerare i alcalinizarea):
Sarea de diazoniu + tirozin + NaOH
Reactivi: - Sol. de acid sulfanilic 1% n HCl 10%
- Sol. de NaNO
2
5%
- Sol. de Na
2
CO
3
30% sau NaOH 10%
Mod de lucru:
Se diazoteaz 1 ml soluie de acid sulfanilic adugnd 1 ml soluie de nitrit de
sodiu. Se amestec acidul diazobenzensulfonic obinut cu 1 ml soluie de cercetat i
dup neutralizare cu 3-4 ml soluie de Na
2
CO
3
(sau cteva picturi de NaOH) se obine
o coloraie roie.
O
-
Na
+
CH
2
I
H - C - NH
2
I
COO
-
Na
+
N=N
SO
3
-
Na
+
+ H
2
O
Colorant
azoic
57
Reacia Sakaguchi (reacia argininei)
Principiu:
Soluiile care conin substane cu radicalul guanidinic n molecul, dau n mediu
alcalin n prezena alfa-naftolului i a hipocloritului sau hipobromitului de sodiu
combinaii colorate n rou.
Reactivi: - Soluie de hipoclorit de sodiu
- Soluie alfa-naftol: se dizolv 0,1 g alfa-naftol n aprox. 25 ml
alcool etilic i se dilueaz cu ap la 100 ml.
- Soluie de NaOH 10%
Mod de lucru:
Se ia ntr-o eprubet 1 ml soluie proteic diluat i se alcalinizeaz cu 1 ml
soluie NaOH 10%. Se adaug 1 ml soluie alfa-naftol i soluia de hipoclorit de sodiu
pictur cu pictur pn la apariia unei culori viinii. Culoarea dispare la cald.
Reacii de precipitare ale proteinelor
Principiu:
Proteinele sunt precipitate de acizi minerali (H
2
SO
4
, HNO
3
, HCl) sau organici
(acid tricloracetic, tanic, ferocianic, sulfosalicilic), soluii concentrate de sruri (sulfat
de sodiu, sulfat de amoniu, etc.), alcooli (metanol, etanol, etc.), aceton, ioni de metale
grele (sruri de argint, mercur, cupru, plumb), nclzire. Precipitarea poate fi reversibil
sau ireversibil.
Precipitarea salin
Principiu:
Proteinele sunt macromolecule hidratate n soluie apoas. Dac srurile
metalelor uoare sau de amoniu (sulfat de amoniu, sulfat de sodiu, clorur de sodiu,
sulfat de magneziu) adugate soluiilor proteice ating o anumit concentraie,
deshidrateaz particulele proteice, care precipit. Precipitatul de protein obinut prin
precipitare salin poate fi redizolvat prin micorarea concentraiei srii (prin dializ,
diluare), deci este o precipitare reversibil.
Deoarece proteinele precipit la concentraii diferite de sruri, precipitarea salin
(salting-out) poate fi folosit i pentru fracionarea proteinelor. Astfel globulinele
58
precipit n soluii semisaturate de sulfat de amoniu, iar albuminele numai n soluii
saturate de sulfat de amoniu.
Reactivi: - Sol. de protein (ser sanguin uman, bovin sau cabalin)
- Sol. saturat de (NH
4
)
2
SO
4
- (NH
4
)
2
SO
4
solid
- NaCl solid
- MgSO
4
solid
- Acid acetic glacial
Mod de lucru:
ntr-o eprubet se toarn 3 ml soluie de protein. Se adaug acelai volum de
soluie saturat de sulfat de amoniu. Astfel obinem o soluie semisaturat de
(NH
4
)
2
SO
4
. Dup cteva minute precipit globulinele. Precipitatul se separ prin
filtrare. Filtratul conine albuminele. Se pune n filtrat sulfat de amoniu solid pn la
saturare (cnd noi cantiti de sare nu se mai solv). n aceast soluie vor precipita
albuminele.
n dou eprubete se toarn cte 3 ml soluie de protein. ntr-una din eprubete se
adaug NaCl, n cealalt MgSO
4
, pn la saturare. Dup cteva minute n ambele
eprubete precipit globulinele. Precipitatul se filtreaz. Filtratul conine albuminele
deoarece srurile adugate nu precipit albuminele n soluie neutr. Filtratul se
aciduleaz cu cteva picturi de acid acetic glacial. n aceast soluie slab acid
precipit albuminele.
Precipitarea cu ionii metalelor grele
Principiu:
Proteinele cu srurile metalelor grele (plumb, cupru, mercur, argint, etc.)
formeaz combinaii greu solubile. Precipitarea se produce deja la concentraii mici de
sruri i precipitatul obinut n acest caz nu se mai dizolv dup micorarea
concentraiei srii prin diluare sau dializ, deci este o precipitare ireversibil.
Reactivi: - Sol. de HgCl
2
10%
- Sol. de CuSO
4
10%
- Sol. de Pb(CH
3
COO)
2
10%
- Sol. de AgNO
3
5%
59
Mod de lucru:
n 4 eprubete se toarn cte 1 ml soluie de protein. n fiecare eprubet se
adaug pictur cu pictur soluie din fiecare reactiv. n toate eprubetele se formeaz
precipitate. Acetatul de plumb i sulfatul de cupru nu trebuiesc adugate n exces,
deoarece precipitatul format se solv n exces de reactiv (salting-in).
Precipitarea cu acizii minerali
Reactivi: - HNO
3
conc.
- HCl conc.
- H
2
SO
4
conc.
Mod de lucru:
n 3 eprubete se toarn cte 1 ml de acid azotic, clorhidric respectiv sulfuric. n
fiecare eprubet se stratific cu precauie cte 1 ml din soluia de protein. La suprafaa
de separare dintre cele dou soluii se obin precipitate albe sub form de disc (inel).
Apoi eprubetele se agit. Precipitatele formate se dizolv n exces de acid clorhidric i
sulfuric, dar nu i n exces de acid azotic. Precipitarea proteinelor cu acid azotic
concentrat servete pentru punerea n eviden a proteinelor din urin patologic.
Precipitarea cu acizi organici
Acidul tricloracetic i acidul sulfosalicilic sunt reactivii specifici pentru
precipitarea proteinelor. Acidul tricloracetic este foarte adecvat pentru deproteinizarea
lichidelor biologice (de ex. ser sanguin), deoarece precipit numai proteinele din soluie,
nu i produii de degradare ai acestora. Se mai folosete ca precipitant amestecul de acid
picric cu acid citric (reactiv Esbach), util n determinarea cantitativ a proteinelor.
Reactivi: - Sol. de acid sulfosalicilic 20%
- Sol. de acid tricloracetic 10%
- Sol. de acid picric 1,2%
Mod de lucru:
ntr-o eprubet la 1-2 ml soluie de protein se adaug cteva picturi de reactiv.
Se formeaz un precipitat abundent.
60
Precipitarea prin nclzire
Principiu:
Proteinele la nclzire coaguleaz. Coagularea este cea mai rapid la punctul
izoelectric. n mediu puternic acid sau bazic proteinele nu coaguleaz la nclzire,
deoarece sarcina electric le confer o mai mare stabilitate n stare dizolvat.
Reactivi: - Sol. de CH
3
COOH 1%
- Sol. de CH
3
COOH 10%
- Sol. de NaOH 10%
- NaCl crist.
Mod de lucru:
n 5 eprubete se toarn cte 1-2 ml soluie de protein. Se adaug reactivi
conform tabelului.
Nr. eprubetei Adaos
1. . -
2. . 2-3 pic. acid acetic 1%
3. . 10-15 pic. acid acetic 10%
4. . 10-15 pic. acid acetic 10% + NaCl (cteva cristale)
5. . 10-15 pic. NaOH 10%
Aceste eprubete se supun nclzirii i se observ apariia precipitatelor.
Dozarea aminoacizilor monoamino-monocarboxilici prin metoda Srensen
Principiu:
Aminoacizii au o structur amfiionic. Din aceast cauz soluiile lor,
datorit capacitii de tamponare, micoreaz saltul de pH la adaosul de acid sau
baz tare. n consecin aminoacizii nu pot fi titrai prin metode acidimetrice sau
alcalimetrice curente.
Adugndu-se soluiei de aminoacid un exces de formaldehid, se blocheaz
gruparea amoniu. Rezult o baz Schiff, care se comport ca un acid slab
(carboxilic). Aciditatea gruprii carboxilice se titreaz cu NaOH, n prezena
fenolftaleinei ca indicator.
R - CH - COO
-
+ H
2
C = O R - CH - COO
-
+ H
2
O + H
+
I I
NH
3
+
N = CH
2
Baz Schiff
61
R - CH - COO
-
+ H
+
+ NaOH R - CH - COO
-
Na
+
+ H
2
O
I I
N = CH
2
N = CH
2
Reactivi: - Sol. de NaOH N/10 cu factorul F
NaOH
- Fenolftalein 0,1% n soluie alcoolic
- Formaldehid (substana este foarte reactiv, se autooxideaz,
deci conine i acid formic ca impuritate. Prezena acestui acid ar
da eroare la titrare. Din acest considerent formaldehida este
alcalinizat cu NaOH n prezen de fenolftalein pn la virajul
indicatorului).
Mod de lucru:
n 3 baloane Erlenmeyer se msoar cte 10,0 ml soluie prob de aminoacid
(pH ~ 6). Trebuie adus i aceast soluie la pH = 9, de aceea se pun cte 3 picturi de
fenolftalein i se adaug pictur cu pictur sol. de NaOH pn la apariia culorii roz.
Acest volum de NaOH folosit nu se ia n considerare la calcul. n fiecare balon se
adaug cte 2 ml soluie de formaldehid, sub aciunea creia soluia devine acid (pH ~
3). Astfel dispare culoarea roz, soluia devenind incolor. Fiecare soluie se titreaz cu
soluie de NaOH pn la virajul indicatorului. Variaiile de pH sunt reprezentate pe
urmtoarea schem:
pH
14
9
6
3
0
Alcalini-
zare
+CH
2
O Titrare
cu NaOH
62
Calcul:
ntruct se lucreaz cu un aminoacid oarecare monoamino-monocarboxilic sau
cu un amestec de aminoacizi monoamino-monocarboxilici, nu putem folosi greutatea
molecular la calcul. Din acest considerent rezultatul se exprim n mg % azot alfa-
aminic sau n mmoli N aminic/l. Dac volumul mediu de titrare a probelor se noteaz cu
Vm, calculul este urmtorul:
1 ml NaOH 0,1 N . . . . . . . . . . . .1,4 mg N aminic
Vm F
NaOH
. . . . . . . . . . . . . . X mg . . . . . . 10 ml prob
Y mg . . . . . .100 ml prob
100
Y = 10 X mg N % = X mmoli N aminic/l.
14
Identificarea nucleoproteinelor
Principiu:
Scheletul structural al acizilor nucleici este construit din baze azotate, pentoze i
acid fosforic. Prin hidroliz acid aceste aceste subuniti se elibereaz i pot fi puse n
eviden
Reactivi: - Sol de H
2
SO
4
5%
- Sol. de NH
3
10%
- HNO
3
conc.
- Sol. de molibdat de amoniu
- Sol. amoniacal de AgNO
3
- Reactiv Bial
- HCl conc.
Modul de lucru:
a) Hidroliza: ntr-un balon cu fund rotund se introduc 5-10 g drojdie de bere, la
care se adaug 40 ml H
2
SO
4
5%. Se astup balonul cu un dop prevzut cu un refrigerent
ascendent i se fierbe 60-90 minute. O parte din hidrolizat se filtreaz i se mparte n 3
eprubete n care se identific prile componente ale acizilor nucleici.
b) Identificarea pentozelor: n prima eprubet se adaug 10 picturi reactiv Bial
i 2 ml HCl conc. Se agit coninutul eprubetei se astup cu un dop de vat i se las pe
o baie de ap ce fierbe timp de 10 minute. Coninutul eprubetei se coloreaz n albastru
verde.
63
c) Identificarea H
3
PO
4
: In a doua eprubet se adaug soluie de NH
3
pn la
reacia slab alcalin, apoi cteva picturi de HNO
3
conc., 1 ml soluie de molibdat de
amoniu. La nclzire se obine un precipitat galben de fosfomolibdat de amoniu.
d) Identificarea nucleobazelor: n a treia eprubet se adaug soluie de NH
3
pn
la reacia alcalin, se filtreaz i se adaug cca. 1 ml soluiei amoniacal de AgNO
3
.
Dup ctva timp se formeaz un precipitat floconos galben-brun de sruri ale bazelor
purinice. Identificarea bazelor purinice din hidrolizat se poate face i cu ajutorul reaciei
murexidului. Murexidul este un colorant provenit din produsul de oxidare cu HNO
3
conc. a bazelor purinice i amoniac.
Modul de lucru:
1-2 picturi din soluia de analizat se usuc pe o plac de porelan pe baie de
ap. Cu baghet se adaug o pictur de HNO
3
conc. Dup evaporare se atinge cu o
baghet nmuiat n amoniac. Apare o coloraie roie care se schimb spre albastru
violaceu cnd se adaug o pictur de NaOH.
Vitamine
Identificarea vitaminelor prin metoda cromatografic
Principiu:
Cromatografia este o metod fizico-chimic de separare a componenilor unui
amestec, care utilizeaz fenomenele ce au loc la interfaa a dou faze. Ea poate fi
folosit n scopuri analitice sau preparative. Pe suprafaa dintre dou faze dintre care
una este staionar (faza solid sau lichid adsorbit pe un material poros) i una
mobil (solvent lichid sau gaz) pot avea loc fenomene de adsorbie, schimb de ioni sau
partiie ntre dou faze lichide nemiscibile.
Faza staionar la cromatografia n strat subire este constituit dintr-un strat de
silicagel sau oxid de aluminiu n stare dispers depus pe o lam de sticl. Developarea
se face cu un solvent apolar (benzen, toluen, petrol) sau un amestec de solveni apolari.
Dac substanele cromatografiate sunt incolore, decelarea petelor (spoturilor)
formate pe placa cromatografic se face cu ajutorul unor reactivi care dau reacii de
culoare cu substanele amintite.
Identificarea componenilor se poate face:
64
- prin decuparea spoturilor i analiza lor ulterioar prin metode chimice sau fizice.
- prin aplicarea simultan pe plac a substanelor etalon, spotul format de o anumit
substan cunoscut se va gsi dup developare la aceeai distan de punctul de start ca
i acela dat de componentul identic din amestec.
- prin determinarea valorii (raportul dintre distana parcurs de spot i de frontul
solventului n acelai interval de timp) R
f
este caracteristic pentru fiecare substan n
condiii de lucru standardizate.
Modul de lucru:
a) Pregtirea plcii cromatografice
Se prepar prin agitarea silicagelului n alcool etilic (2 g silicagel, 6 ml alcool) o
suspensie care se toarn pe suprafaa unei plci de sticl. Prin micarea plcii se ntinde
ct mai uniform suspensia i se continu micarea plcii pn cnd prin evaporarea
alcoolului mobilitatea suspensiei scade i suspensia rmne nemicat. Dup uscarea
complet a plcii laturile longitudinale se terg pe o lime de 0,5 cm.
b) Aplicarea amestecului de analizat
La o distan de 1 cm de la unul din capetele plcii, cu ajutorul unei capilare se
aplic soluia de cercetat precum i soluiile etalon din vitamine urmrite. Diametrul
maxim admis al probelor aplicate este cca. 5 mm. Cantitatea minim de vitamin
aplicat este aproximativ 3 g.
c) Developarea
Plcile se introduc ntr-un vas cu toluen cu captul pe care s-au aplicat soluiile,
aezat n solvent. Placa n timpul developrii are o poziie nclinat la 20-30 fa de
orizontal. Solventul migreaz prin capilaritate de-a lungul stratului de adsorbant.
Pentru a mpiedica evaporarea, cromatografia se face ntr-o atmosfer saturat cu
vaporii solventului, adic vasul este ermetic nchis.
d) Localizarea petelor
Dup uscarea plcilor, componentele migrate sunt evideniate cu ajutorul unui
strat subire de H
2
SO
4
98% turnat pe plac cu ajutorul unei pipete n aceeai parte n
care au fost aplicate probele. Poziia plcii trebuie s asigure deplasarea acid sulfuric n
sensul n care s-a fcut developarea. Vitaminele liposolubile n contact cu acid sulfuric
se coloreaz astfel: vitamina A albastru-violet, | - carotenul albastru, vitamina D
2
galben-portocaliu, vitaminele E, K
1
, K
2
, K
3
brun.
65
Dozarea iodometric a acidului ascorbic din urin
(metoda Palladin)
Principiu:
Acidul ascorbic este oxidat n mediu acid de I
2
la acid dehidroascorbic
Iodul necesar oxidrii rezult din interaciunea KIO
3
cu KI n mediu acid.
Dup oxidarea complet a vitaminei C iodul n exces d o culoare albastr n
prezena amidonului.
Reactivi: - soluie HCl 2%;
- soluie KI 0,1N;
- soluie KIO
3
0,004N;
- soluie amidon 0,5%.
Modul de lucru:
Se cntrete 1 g din produsul vegetal de analizat (ace de brad, fructe de mcee,
etc.) i se tritureaz cu o soluie de HCl 2% i 5g nisip de cuar splat prealabil cu HCl.
Triturarea ncepe cu o mic cantitate de HCl. Dup aceea masa omogen se pune ntr-un
vas de 50ml, se spal mojarul cu acid clorhidric 2% i dup introducerea soluiei de
splare n vasul cotat, se aduce la semn cu HCl 2%. Lichidul se las s se limpezeasc,
decanteaz i se filtreaz prin vat. Primii 10ml se arunc.
Cnd se lucreaz cu urin se iau 10ml urin n vasul gradat, se aduce la cot cu
HCl 2%, se amestec i se filtreaz.
10 ml din filtrat se pun ntr-un flacon conic, se adaug 30ml ap distilat, 5ml
soluie de iodur de potasiu i 5ml HCl 2%. Se titreaz cu o soluie de iodat de potasiu
0,004N folosind ca indicator amidon. Culoarea albastr trebuie s se menin 30
secunde.
O
C
HC
+ I
2
HO C
C HO
HO CH
CH
2
OH
O O
CH
2
OH
CH HO
C
C
HC
C
O
O
O
+ 2HI
66
Calculul: se efectueaz innd cont de faptul c 1ml soluie KIO
3
0,004N
corespunde la 0,352mg acid ascorbic (M. acid ascorbic =176). Rezultatul se raporteaz
la 100g produs analizat sau la cantitatea de urin eliminat in 24 ore.
Valori normale 50-150 mol/zi (10-30mg/zi). Variaiile lor nu sunt concludente
din punct de vedere clinic. De aceea se folosete proba ncrcrii cu acid ascorbic.
Se administreaz intravenos 1000mg acid ascorbic i dup ce se colecteaz urin
timp de 5 ore, adugnd la fiecare fraciune de urin cte 10% acid acetic glacial.
n mod normal se elimin in 5 ore cel puin 400mg acid ascorbic. O eliminare
mai sczut pledeaz pentru hipovitaminoz sau avitaminoz C.
Enzime
Introducere
Enzimele, biocatalizatori proteici, sunt produse de materia vie i prezena lor
este necesar pentru desfurarea reaciilor chimice n toate sistemele biologice.
Enzimele au i nsuiri ale catalizatorilor utilizai n reaciile chimice din lumea nevie.
Ele sunt ns superioare acestor catalizatori n mai multe privine:
a) Asigur reaciilor chimice pe care le catalizeaz viteze cu cteva ordine de
mrime mai mari,
b) Reaciile pe care le catalizeaz au loc n condiii blnde: temperatur sub
50C, presiune atmosferic, pH n jurul valorii 7, for ionic moderat. Comparativ,
catalizatorii chimici acioneaz la temperaturi ridicate, presiuni mari i valori extreme
de pH;
c) Au specificitate foarte mare ceea ce asigur ca n reaciile pe care le
catalizeaz s nu participe dect substraturile pentru care enzimele sunt specifice.
Multe enzime au i nsuiri nentlnite la catalizatorii chimici cum sunt:
a) Activitatea lor poate fi reglat (mrit sau micorat) de anumii efectori;
b) Catalizeaz reacii endergonice imposibile d.p.d.v. termodinamic prin
transferul energiei libere necesare de la reacii exergonice.
Cinetica enzimatic studiaz viteza reaciilor catalizate de enzime n funcie de
concentraia substratului [S], de concentraia enzimei [E] i de influenele unor factori
fizico-chimici cum sunt: temperatura, pH-ul, cofactori, etc. Concepia unanim admis n
enzimologie c formarea din substrat a produsului de reacie implic existena
complexului enzim-substrat (ES), redat prin ecuaia:
67
K1 K3
E + S ES ------> E + P,
K2
a fost statuat n primul rnd innd cont de alura dependenei vitezei reaciilor
catalizate de enzime de concentraia de substrat (Leonor Michaelis i Maud Menten,
1913).
Din punct de vedere al localizrii enzimele se clasific n:
Enzimele secretate cu rol activ n plasm, ca de exemplu:
a) enzimele plasmatice funcionale, produse n special n ficat (ceruloplasmina)
b) enzimele coagulrii, lipoproteinlipaza (LPL), lecitin-colesterol-aciltransferaza
(LCAT).
Nivelul lor plasmatic scade cu lezarea celulelor productoare.
Enzimele secreto-excretate, provenind din glandele exocrine i pancreas. Ele
sunt excretate i acioneaz la nivelul tubului digestiv, de exemplu amilaza, lipaza,
tripsina. Activitile lor cresc n plasm prin lezarea celulelor de origine sau prin
prezena unui obstacol la nivelul cilor excretorii precum i prin creterea
permeabilitii membranei celulelor secretorii;
Enzimele celulare cu loc de aciune n celulele din care provin, a cror activitate
plasmatic crete prin lezarea celulelor de origine. Exemple sunt glutamic-oxalacetic
transaminaza (GOT), glutamic-piruvic transaminaza (GPT), lactat dehidrogenaza
(LDH), fosfataza alcalin i acid, creatin kinaza (CK), etc.
Concentraia majoritiilor enzimelor celulare este constant n timp. Fac
excepie enzimele inductibile/represibile i enzimele plasmatice funcionale intracelular
cum ar fi CK (creatin kinaza), GOT, LDH, GPT, GDH (glutamat dehidrogenaza), GT
(-glutamil-transaminaza), SDH (sorbitoldehidrogenaza), OTC (ornitin transcarba-
milaza) fosfatazele acid i alcalin, ale cror concentraii cresc sau scad n anumite
stri patologice (leziuni de esut).
Din punct de vedere medical, enzimologia contribuie astzi n msur
hotrtoare la cunoaterea cauzelor a numeroase boli, diagnosticul i urmrirea evoluiei
acestora, elaborarea pe baze tiinifice a medicamentelor.
68
Influena concentraiei substratului asupra
vitezei de reacie enzimatic
Concentraia substraturilor celor mai multe enzime variaz destul de mult n
funcia de starea metabolic a esutului i de ali factori. Dependena vitezei de reacie
de concentraia substratului constituie aspectul cel mai important al cineticii enzimatice.
Una din principalele mrimi ale cineticii enzimatice este activitatea enzimatic.
Pentru exprimarea activitii enzimatice se folosesc n prezent mai multe sisteme
de uniti ceea ce ngreuneaz interpretarea rezultatelor. Uniunea Internaional de
Biochimie recomand exprimarea activitii enzimelor n mod unitar, n uniti
internaionale (UI sau U). Unitatea internaional de activitate enzimatic reprezint
cantitatea de enzim care transform un mol de substrat ntr-un minut, la 25 C, n
condiii optime (concentraia maximal a substratului, fora ionic a tamponului, pH
optim).
1UI = 1 mol substrat /min.
Conform SI unitatea de msur a activitii enzimatice este katalul.
1 katal = 1 mol substrat / sec
Se folosesc subunitile ( m, , n, p) katalului. n determinrile pe lichide
biologice se raporteaz activitatea enzimei la 1000 ml (vezi tabelul limitele valorilor
normale. Se folosete de asemenea exprimarea i n miliuniti internaionale pe
mililitru (mU/ml) ceea ce de fapt nu modific valorile numerice respective. Chiar i
atunci cnd se utilizeaz UI, apar diferene ale valorilor limitelor normale, datorit
varietii metodelor folosite pentru determinri.
Principiu:
Pentru o cantitate dat de enzim, viteza,v, a reaciei enzimatice crete odat cu
creterea concentraiei substratului |S|, pn cnd ntreaga cantitate de enzim se
satureaz cu substrat. Se atinge astfel viteza
maxim,v
max
, care nu va fi depit chiar dac
n continuare concentraia substratului va
crete, n cazul n care substratul n exces nu
inhib propria enzim. Acest principiu este
descris de ecuaia Michaelis-Menten (pentru
deducere vezi cursurile de biochimie):
69
| |
| | S K
S
v v
M
+
=
max
unde K
M,
constanta lui Michaelis.
Reprezentarea grafic a lui v n funcie de |S| (temperatura, pH-ul i |E| fiind
constante) este o curb cu alur hiperbolic. Din analiza curbei reiese c v crete liniar
cu creterea |S| numai pentru valori mici ale acesteia, apoi creterea se face tot mai lent
pentru ca la concentaii mari de substrat, viteza reaciei s rmn constant. Fiecare
enzim se caracterizeaz prin valorile particulare K
M
i v
max
ale lor.
Determinarea constantei lui Michaelis pentru ureaz
Principiu:
n determinarea experimental se va folosi ca substrat ureea i ca enzim ureaza
din boabe de soia. Ureaza catalizeaz urmtoarea reacie:
Viteza de reacie este proporional cu cantitatea de amoniac eliberat n unitatea de timp
(1min). Aceasta se determin prin titrare cu o soluie de HCl cu factor cunoscut.
HCl + NH
3
---------> NH
4
Cl
Cunoscnd concentraiile substratului din probe care se consider constante pe parcursul
fazei de incubaie i calculnd vitezele de reacie, exprimate n moli uree transformai
ntr-un minut, pe baza datelor titrimetrice se face reprezentarea grafic (v, [S]) din care
se poate calcula K
M
pentru ureaz.
Reactivi: - Soluie de uree 0,1 M
- Soluie de uree 1,0 M
- Soluie de ureaz: fie o soluie de enzim cristalizat, fie o
suspensie de fin de soia. Se pstreaz n frigider.
- Soluie de tampon fosfat 0,1 M, pH=7
- Soluie de CuSO
4
5%
- Indicator rou de metil 0,1% n soluie alcoolic
O=C
NH
2
H
2
O CO
2
+ 2NH
3
ureaz
+
NH
2
70
Modul de lucru:
Conform tabelului se prepar o serie de 6 probe introducndu-se n toate aceeai
cantitate de enzim i soluii de concentraii cresctoare ale substratului. n tabel vor fi
consemnate pe baza datelor experimentale (titrimetrice) i a efecturii calculelor,
valorile a
i
, m i v
i
(i=1,6).
n proba martor se inactiveaz enzima, nainte de a se introduce substratul,
adugnd 5 picturi soluie CuSO
4
5%. Reaciile chimice (n cazul probelor 1-6),
declanate n momentul amestecrii enzimelor cu substratul, sunt lsate s se
desfoare timp de 25 min., apoi sunt ntrerupte prin adaosul inhibitorului, adic a cte 5
picturi soluie CuSO
4
. Se msoar n fiecare prob cantitatea de NH
3
format, prin
titrarea cu soluie de HCl n prezena indicatorului rou metil (3 picturi) care vireaz de
la galben la rou. Culoarea galben dat de indicator, naintea virajului, se datoreaz
amestecului coloristic cu culoarea albastr dat de ionii Cu
2+
hidratai.
Calculul:
1mol HCl........................................1 mol NH
3
..................1/2moli uree
1000 ml HCl N/20............................................. ........._____1_____moli uree
2.20
(a
i
-m) ml..............................................................................x
i
____________
x
i
= (a
i
-m)25 moli uree transformai n 25 minute
v
i
= (a
i
-m)25/25 = a
i
-m moli uree/ 1 min.
Reprezentarea grafic
Pe un sistem rectangular de axe de coordonate trasat pe hrtie milimetric se
aplic pe ordonat o scar a valorilor vitezelor de reacie. Pe abscis se trec
concentraiile molare ale ureei din cele ase probe menionate n tabel. Se reprezint
grafic punctele (v
i
, [S]). Curba hiperbolic se traseaz printre punctele experimentale.
Poriunea dreapt, paralel cu abscisa (corespunztoare saturrii E cu S), se prelungete
pn la intersecia cu ordonata, intersecia corespunznd valorii v
max
. La valoarea v
max
/2,
se duce o dreapt paralel cu abscisa pn la intersecia cu curba i de la aceast
intersecie se duce o dreapt paralel cu ordonata pn la intersecia cu abscisa. Acest
punct corespunde valorii K
M
(concentraia de substrat corespunztoare semi-vitezei
maxime). Ea este ntr-o prim aproximaie constanta de disociere a complexului
enzim-substrat (ureaz-uree). Deci, se stabilesc (1) v
max
, (2) v
max
/2 i (3) K
M
.
71
72
Interpretarea rezultatelor
Valorile mari ale K
M
corespund unei legturi slabe ntre E i S iar valorile mici
ale K
M
corespund unei legturi puternice ntre E i S. Valorile lui K
M
pentru diverse
enzime sunt cuprinse ntre 10
-1
- 10
-6
moli/litru. n cazul ureazei, K
M
~10
-2
moli/litru
ceea ce plaseaz aceast enzim n rndul celor cu afinitate (constant de stabilitate a
complexului E-S) mic fa de substrat.
Determinarea activitii catalazei sanguine
Principiu: Catalaza din snge este o oxidoreductaz foarte activ, care
descompune apa oxigenat, n ap i oxigen molecular: 2 H
2
O
2
2 H
2
O + O
2
Activitatea ei se determin prin dozarea apei oxigenate rmas nedescompus
ntr-un sistem cu concentraia iniial a H
2
O
2
cunoscut. Este o metod indirect:
catalaza dintr-un microlitru de snge acioneaz asupra unei cantiti determinate de ap
oxigenat; excesul de ap oxigenat se dozeaz prin titrare cu KMnO
4
n mediu acid;
din diferen se calculeaz numrul catalazic.
+7 -1 +2 0
2 KMnO
4
+ 5 H
2
O
2
+ 3 H
2
SO
4
2 MnSO
4
+ K
2
SO
4
+ 8 H
2
O + 5 O
2
+7 + 5e +2
Mn Mn
-2 - 2e 0
O
2
O
2
Reactivi: - Snge diluat 1 (v/v)
- Soluie de H
2
O
2
2%
- Soluie de H
2
SO
4
20%
- Soluie de KMnO
4
N/10 cu factorul F
KMnO4
cunoscut
Mod de lucru: n patru flacoane Erlenmeyer se pipeteaz:
Proba 1 Proba 2 Martor 1 Martor 2
Ap distilat (ml) 2 2 2 2
Snge diluat (ml) 1 1 1 1
- - se fierbe i se rcete
Ap oxigenat (ml) 2 2 2 2
Repaus 30 la temperatura camerei
Acid sulfuric (ml) 5 5 5 5
Titrare cu KMnO
4
pn la
roz slab stabil (ml)
b
1
b
2
a
1
a
2
Media =b
1
+b
2
/ 2 = b
m
Media =a
1
+a
2
/ 2 = a
m
x 2
x 5
73
Calculul:
Volumul mediu de titrare pentru probe (b
m
) este mai mic dect cel pentru martori
(a
m
) deoarece catalaza descompune o parte din apa oxigenat din probe.
1ml KMnO
4
N/10----------------------------------------------------------1,7 mg H
2
O
2
(a
m
-b
m
)F
KMnO4
--------------------------------------------------------------x
x = (a
m
-b
m
)F
KMnO4
1,7 mg H
2
O
2
descompuse de catalaza din 1 ml snge diluat
1/1000 (1l snge integral). Aceast valoare se numete numr catalazic.
Interpretarea rezultatelor
Valorile normale ale numrul catalazic (cifre catalazice) sunt cuprinse nte 14-18.
Acatalazemia este o deficien nnscut, a catalazei din eritrocite i alte esuturi,
avnd ca principal simptom gangrena cavitii bucale. Dac se face concomitent i
hemograma, se poate calcula i Indicele catalazic = (a
m
-b
m
)F
KMnO4
1,7 / nr. globule
roii (n milioane).
Indicele catalazic este cel care are valoare de diagnostic. Este sczut n cancer,
anemie, caexie i n 80 % din afeciunilor hepatice.
Determinarea activitii transaminazelor
(metoda colorimetric cu 2,4-dinitrofenilhidrazin)
Principiu:
Transaminazele catalizeaz reacia de transfer a gruprii amino de la un alfa-
aminoacid la un alfa-cetoacid. Transaminazele cu cea mai mare importan clinic sunt:
glutamic-oxalacetic-transaminaza (GOT, aspartat aminotransferaza-AST) i glutamic-
piruvic-transaminaza (GPT, alanin aminotransferaza-ALT). Acestea catalizeaz
urmtoarele procese reversibile:
oxaloacetat
aspartat
glutamat
o cetoglutarat
piruvat
alanin
GOT
(AST)
GPT
(ALT)
74
GOT este o enzim localizat n proporie de 60% n citoplasm i 40% n
mitocondrii, n special n muchiul scheletic, miocard i ficat. n reacia catalizat de
GOT se folosete ca substrat amestecul aspartat-o-cetoglutarat din care rezult
oxalacetat i glutamat. Oxalacetatul se decarboxileaz spontan trecnd n piruvat.
Piruvat rezult i din reacia catalizat de GPT avnd ca substrat amestecul
alanina-o-cetoglutarat Piruvatul rezultat din aceste reacii reacioneaz cu 2,4-dinitro-
fenil-hidrazina n mediu alcalin dnd dinitro-fenil-hidrazona corespunztoare de culoare
roie, care se determin fotometric:
Datorit faptului c i ceilali alfa-cetoacizi prezeni (alfa-cetoglutarat) formeaz
fenil-hidrazone, cu absorbii la diferite lungimi de und, se msoar extincia dinitro-
fenil-hidrazonei piruvatului la lungimea de und de 520 nm unde fenil-hidrazona alfa-
cetoglutaratului absoarbe slab.
Intensitatea coloraiei produse este proporional cu intensitatea activitii
enzimei. Activitatea transaminazelor se calculeaz n funcie de cantitatea de acid
piruvic care se formeaz ntr-un minut.
Reactivi: - Substrat GOT: 1,50 g K
2
HPO
4
, 0,20 g KH
2
PO
4
, 0,039 g alfa-
cetoglutarat de sodiu (sau 0,030 g acid alfa-cetoglutaric) i 1,57 g
aspartat de sodiu (sau 1,32 g acid aspartic) se dizolv n aproximativ
80 ml ap bidistilat. Se ajusteaz cu NaOH 0,4N pH-ul soluiei la
7,4 apoi se completeaz volumul la 100 ml cu ap bidistilat.
- Substrat GPT: 1,50 g K
2
HPO
4
, 0,20 g KH
2
PO
4
, 0,030 g acid alfa-
cetoglutaric (sau 0,039 g alfa-cetoglutarat de sodiu) i 1,78 g alanin
se dizolv n aproximativ 80 ml ap bidistilat, se aduce pH-ul la 7,4
cu NaOH 0,4N, apoi se completeaz la 100 ml cu ap bidistilat.
- Soluie de 2,4-dinitro-fenil-hidrazin 1 mM n HCl 2M: se dizolv
19,8 mg dinitro-fenil-hidrazin n 10 ml HCl (d = 1,19 g/cm
3
) i se
completeaz la 100 ml cu ap bidistilat.
75
- Soluie standard de piruvat de sodiu 2 mM: se dizolv n 100 ml ap
bidistilat 22 mg piruvat de sodiu (1 ml soluie conine 2 moli
piruvat). Se adaug 0,3 ml cloroform pentru conservare.
- Soluie NaOH 0,4N
Modul de lucru:
Att pentru GOT ct i pentru GPT se pregtesc cte trei eprubete: prob (P),
standard (S) i blanc (B).
GOT GPT
P S B P S B
Sol.substrat GOT (ml) 0,5 0,5 0,5 - - -
Sol.substrat GPT (ml) - - - 0,5 0,5 0,5
Se incubeaz 5 minute la 37C
Ser (ml) 0,1 - - 0,1 - -
Sol.standard PIR (ml) - 0,1 - - 0,1 -
Se incubeaz la 37C 60 minute 30 minute
Sol.2,4-dinitrofenilhidrazin (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Ser (ml) - - 0,1 - - 0,1
Sol.NaOH 0,4 N (ml) 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Se omogenizeaz coninutul eprubetelor i dup 5 minute se citete extincia
probelor (EP) i a standardului (ES) fa de blanc, la 520 nm, n cuva de 1 cm.
Calcul:
tiind c soluia standard conine 0,2 moli piruvat /0,1 ml se calculeaz
cantitatea de piruvat rezultat din reacia pentru fiecare enzim i se exprim activitatea
enzimatic n moli piruvat format/min./1000 ml ser (n condiiile de lucru) i se
noteaz cu X:
Pentru GOT: X=(EP/EB) 0,2 (1/60) (1/0,1) 1 000 moli piruvat
Pentru GPT: X=(EP/EB) 0,2 (1/30) 1 000 moli piruvat
Activitatea enzimatic real nu este dat direct de valoarea obinut colorimetric,
deoarece hidrazona colorat se formeaz i cu alfa-cetoglutarat din substrat, iar pe de
alt parte, condiiile nu sunt cele optime (37C n loc de 25C i prezena alfa-
cetoglutaratului care formeaz hidrazon). S-au calculat tabele de corecie prin
76
comparaie cu datele obinute cu metoda de referin, care exprim activitatea
enzimatic real, msurnd spectrofotometric n UV transformarea NADH + H
+
in
NAD
+
, n prezena enzimelor indicatoare: malat-dehidrogenaza (MDH) n amestec cu
GOT i lactat-dehidrogenaza (LDH) n amestec cu GPT.
Reaciile enzimatice sunt urmtoarele:
GOT
alfa-cetoglutarat + L-aspartat --------------> L-glutamat + oxalacetat
MDH
oxalacetat + NADH + H
+
----------------> L-malat + NAD
+
GPT
alfa-cetoglutarat + L-alanina --------------> L-glutamat + piruvat
LDH
piruvat + NADH + H
+
----------------> L-lactat + NAD
+
Din tabelul de corecie se citete activitatea enzimatic real (determinat prin metoda
enzimatic) exprimat n Uniti Internaionale (UI = moli/min./l, 25C) care
corespunde valorilor X calculate.
UI UI UI UI
X GOT GPT X GOT GPT X GOT GPT X GOT GPT
2 2 1 26 23 9,5 54 60 23 80 38
4 3 2 28 25 10 56 24 82 39
6 5 2,5 30 27 11 58 25 84 40
8 6 3 32 29 12 60 26 86 42
10 7 4 34 31 13 62 27 88 44
12 9 4,5 36 33 14 64 29 90 46
14 11 5 38 35 15 66 30 92 48
16 13 6 40 37 16 68 31 94 50
18 15 7 42 39 17 70 33 96 52
20 17 7,5 44,46 41,44 18,19 72 34 98 54
22 19 8 48 47 20 74 35 100 56
23 20 8,5 50 51 21 76 36 102 60
24 21 9 52 55 22 78 37
Observaii:
1. Dac activitatea enzimatic depete 60 UI se va repeta determinarea cu incubaie
scurt: 20 de minute pentru GOT si 10 minute pentru GPT. Rezultatele obinute se
vor nmuli cu 3. Este de preferat ca n locul scurtrii timpului de incubaie s se
77
fac diluii ale serului 1:5, 1:10, 1:20 n ap distilat i se reia cu fiecare diluie
tehnica de lucru de la nceput. La calcul se ine seama de diluie.
2. Sticlria utilizat trebuie s fie perfect curat, splat n final cu mult ap distilat,
deoarece urme de detergeni pot inhiba considerabil activitatea enzimatic.
Interpretarea valorilor obinute
Valori normale: GOT: Aduli: 2-20 UI. Copii sub 3 luni: pn la 40 UI
GPT: Aduli: 2-16,5 UI. Copii pn la 5 ani: 0,2-13 UI
Valori patologice: n cazul leziunilor celulare mai uoare crete activitatea GPT,
ea fiind o enzim citoplasmatic, iar n cazul leziunilor mai grave crete i activitatea
GOT (GOT este prezent i n microsomi)
GOT : - creteri marcate ( 10-100 ori ) n: infarct miocardic, hepatit viral acut,
necroza toxic a ficatului
- creteri moderate n: hepatite cronice, icter mecanic, mononucleoza infecioas,
anemii hemolitice, boli ale musculaturii striate
GPT: - creteri marcate ( ~ 100 ori ) n: hepatita viral acut, necroza toxic a ficatului
- creteri moderate n: hepatite cronice, ciroz, mononucleoza infecioas,
hepatita de staz cardiac.
Raportul de Ritis: GOT/GPT ~ 1,2-1,3. n leziunile inflamatorii ale ficatului
acest raport scade datorit creterii mai mari ale activitii GPT. n leziunile necrotice
raportul crete datorit creterii mai marcate a activitii GOT.
Determinarea activitii fosfatezei alcaline
(Metoda Bodansky)
Fosfatazele sunt un grup de enzime cu rol important n metabolism, capabile s
hidrolizeze esterii fosforici, elibernd acid ortofosforic. n snge ntlnim n special un
grup de fosfomonoesteraze care acioneaz diferit, n funcie de pH-ul mediului i de
prezena unor efectori (ionul de Mg
2+
).
Cele mai importante enzime din grupa fosfomonoesterazelor sanguine sunt:
fosfataz alcalin - acioneaz la pH 8,4 - 9,1
fosfataz acid - acioneaz la pH 5,1 - 6,0
78
Fosfatazele alcaline sunt foarte rspndite n corpul animal. Cele mai bogate
surse sunt: epiteliul intestinal, prile n cretere ale oaselor, rinichi, glandele mamare,
leucocite.
Principiu:
Sub aciunea catalitic a fosfatazei alcaline serice |glicerolfosfatul de sodiu
este hidrolizat eliberndu-se fosfat monosodic.
CH
2
CH
CH
2
OH
OH
CH
2
CH
CH
2
OH
OH
O P OH
O
O
-
Na
+
+ HOH OH + NaH
2
PO
4
Activitatea enzimei se determin doznd cantitatea de ioni fosfat eliberat, printr-
o metod colorimetric.
Ionul fosfat reacioneaz cu acidul molibdenic rezultnd un complex
fosfomolibdenic care este redus de sulfitul de sodiu i hidrochinon la albastru de
molibden, care este alctuit dintr-un amestec de oxizi de molibden n stri de oxidare
diferite.
HPO
4
2-
+12 MoO
4
2-
+ 23 H
+
+ 3 NH
4
+
(NH
4
)
3
PMo
12
O
40
+ 12H
2
O
Oxizii de molibden sunt att de fin dispersai nct intensitatea culorii obinute
este proporional cu cantitatea de molibden din fosfomolibdat, deci cu cantitatea de
fosfor din prob. Deci global, procesul respect legea Lambert Beer n ce privete
concentraia fosforului.
Reactivi: - soluie de substrat de | glicerolfosfat de sodiu pH -9,6, 0,5g
| glicerolfosfat de sodiu la care se adaug 0,425 g veronal sodic, totul se dizolv n cca
50 ml de ap, n balon cotat de 100 de ml Se adaug 2,2 ml NaOH 0,1 N. Se
completeaz la 100 ml cu ap distilat i se ajusteaz la pH 9,6
- NaOH N/10
- Hidrochinon 1%
- Sulfit de sodiu 20%
- Acid tricloracetic 10%
- Molibdat de amoniu 2,5%
- Soluie etalon de fosfat: KH
2
PO
4
p.a. se usuc cteva zile n
exicator. Se cntresc 4,3866 g, se dizolv n puin ap i cu ap, se aduce la semn la
79
balon cotat de 1000 ml, se adaug cteva picturi de cloroform drept conservant.
Aceast soluie conine 1 mg de fosfor / 1 ml.
Curba de etalonare
Pentru realizarea curbei de etalonare, se dilueaz de 50 de ori soluia etalon,
astfel 1ml soluie conine 20 g fosfor. Se msoar ntr-o serie de eprubete 0,5; 1; 2; 3;
4 i 5 ml din aceast soluie standard. La fiecare prob se adaug cte 2 ml acid
tricloracetic 20% i ap pn la 10 ml. Dup amestecare, din acest amestec se msoar
cte 5 ml ntr-o alta eprubet, dup care se adaug 2 ml molibdat de amoniu 2,5%, 1 ml
hidrochinon i 2 ml sulfit de sodiu. Dup 5 minute se citete exticia i se reprezint
grafic lund pe ordonat extincia la =610 nm n cuv de 1 cm, iar pe abscis cantitatea
de fosfor n g (adic 5, 10, 20, 30, 40, 50 g)
Modul de lucru:
n dou eprubete se msoar cte 5 ml substrat (pH = 9,6). Prima eprubet se
menine timp de 5 minute la 37 C dup care se introduce 1 ml ser i se las astupat
jumtate de or la 37 C.
n eprubeta a doua se msoar 1 ml ser i deoarece acesta constituie martorul, se
introduc 4 ml acid tricloracetic 10% pentru inactivarea enzimei. Dup incubarea de o
jumtate de or, prima eprubet se trateaz cu 4 ml acid tricloacetic 10%. Att proba
ct i martorul se agit energic 1-2 minute i se filtreaz, iar din filtrat se iau cte 5 ml
n dou pahare Erlenmeyer i se dozeaz cantitatea de fosfat anorganic dup cum
urmeaz.
Se adaug n fiecare pahar, n ordine, 1 ml molibdat de amoniu, 1 ml sulfit de
sodiu, 1 ml hidrochinon i 2 ml ap bidistilat. Dup 20 de minute de repaus se citete
extincia probei fa de martor la = 610 nm.
Calcul:
Se face pe baza curbei de etalonare. Rezultatul se exprima n uniti Bodansky
(UB). O unitate Bodansky este activitatea fosfatazic pentru care 1 mg fosfor este
eliberat ntr-o or la 37 C i pH = 9,6 de 100 ml ser din substratul de |glicerolfosfat.
Valori normale: Aduli: 2 - 4 U.B. / 100 ml ser
Copii: 2 - 8 U.B. / 100 ml ser
Sugari: 3 10 U.B. / 100 ml ser
Transformarea unitilor Bodansky, n uniti internaionale (mU/ml sau UI/l) se
face nmulind cu factorul de conversie 8,3.
80
Modificrile patologice apar n dou mari categorii de afeciuni: osoase i
hepatobiliare. Astfel crete mult n boli n care exist o activitate crescut a
osteoblastelor: Boala Paget (osteodistrofie deforment), hipoparatiroidismul primar i
secundar, rahitism infantil, osteomalacie, metastaze osoase ale unor tumori maligne,
icter prin obstrucie (dozarea fosfatazei constituind n acest caz un mijloc biochimic de
diagnostic diferenial al icterelor).
O cretere fiziologic se observ n sngele matern aproximativ n trimestrul trei
al sarcinii i atinge maximumul n timpul travaliului. La ft, concentraia seric a
fosfatazei crete, dar este sub valoarea matern i se nsoete de fixarea ionilor Ca
2+
i
3
4
PO . Concentraia mai mare n sngele matern se explic printr-o trecere
transplacentar de la ft la mam.
Scderea fosfatazei alcaline apare n ciroz hepatic, hepatit cronic.
Fosfataza acid are valori normale cuprinse n intervalul 4,5 13,5 UI/l (enzim
total) i 0,05 3,6 UI/l (fraciunea prostatic). Valorile cresc n carcinomul de prostat
(cu metastaze osoase), boala Gaucher, prostatit acut i cronic, necroz hepatic
datorat hepatitelor acute i cornice.
Determinarea activitii amilazei serice prin
metoda Wohlgemuth.
Prin aciunea amilazei salivare (o-amilaza) asupra amidonului, n cavitatea
bucal, se rup legturile 1,4-glicozidice. Cum legturile 1,6 ca i cele 1,4 din vecintatea
ramificaiilor, nu pot fi desfcute de ctre o-amilaz, produii de digestie a amidonului
vor fi, pe lng maltoz, fragmente oligozaharidice de dimensiuni variabile - dextrine
limit. Dextrinele limit sunt hidrolizate ulterior, sub aciunea unei hidrolaze, amilo-1,6-
glucozidaza, la maltoz care, n intestin este hidrolizat la glucoz de maltaz.
Activitatea amilazic a intestinului se datoreaz trecerii amilazelor pancreatice i
salivare n snge. pH-ul optim al amilazei salivare este aproape de neutralitate,
cofactorul fiind ionul Cl
-
.
Prin adugarea de iod, amidonul rmas dup reacia enzimatic d un compus de
adiie iod-amidon, de culoare albastr a crei intensitate este proporional cu
concentraia amidonului rmas dup incubaie i invers proporional cu activitatea
enzimatic. Coloraia roie care poate s apar n soluiile cu amidonul parial hidrolizat
se datoreaz complexelor iod-dextrine.
81
Principiu:
Se determin cantitatea minim de amilaz seric necesar pentru a hidroliza
complet 2 mg amidon, n 30 minute la 38
C.
Reactivi: - Soluie de NaCl 0,9%
- Soluie de amidon 0,1%
- Soluie de KI
3
N/10
Modul de lucru:
Se iau 8 eprubete care se numeroteaz de la 1 la 8. n fiecare se introduce cte un
ml soluie NaCl 0,9%. n prima eprubet se adaug 1 ml ser. Pipeta se spal de 3 ori
prin aspirare n amestecul din prima eprubet i cu aceeai pipet se trece 1 ml din
amestec n a doua eprubet. Din nou se spal pipeta prin aspirare n a doua eprubet i
se trece 1 ml n a treia. Operaia se repet pn la ultima eprubet din care se arunc 1
ml din amestec. n acest mod se obine urmtoarea serie de diluii succesive ale serului:
1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, adic 1/2
n
unde n este numrul de ordine al
eprubetei.
Se adaug apoi n fiecare eprubet cte 2 ml soluie amidon. Se agit i se
aeaz n baie de ap la 38C. Dup 30 de minute se scot, se rcesc repede la un curent
de ap, apoi n fiecare se introduc cte 1-2 picturi de soluie de iod. Se agit i se
observ culoarea format. Culoarea galben indic lipsa amidonului, cea roie arat
prezena produilor intermediari de hidroliz (dextrine), iar cea albastr semnaleaz
prezena amidonului nehidrolizat. Se noteaz ultima eprubet n care amidonul a fost
hidrolizat.
Cu aceast metod nu se poate face diferen ntre amilaza salivar i cea
pancreatic. Exist, ns, metode electroforetice pentru a diferenia cele dou izoenzime:
migrarea electroforetic a amilazei salivare este mai rapid dect a celei pancreatice.
Calcul:
Rezultatul se exprim n uniti Wohlgemuth (UW). Unitatea amilazic Wohlgemuth
reprezint cantitatea de enzim necesar pentru a hidroliza un mg amidon n 30 minute
la 38C. Pentru calcul se consider ultima diluie n care nu apare culoarea albastr.
Rezultatul n uniti Wohlgemuth se obine nmulind diluia cu 2. De exemplu, dac
coloraia albastr apare n eprubeta a 5-a nseamn c amidonul a fost hidrolizat pn la
a 4-a eprubet. Calculm diluia acestei eprubete care este 1/16 fa de serul iniial.
Dac: 1/16 ml ser hidrolizeaz 2ml sol. amidon 0,1% atunci, 1 ml ser hidrolizeaz x ml
sol. amidon 0,1% sau x mg amidon.
82
12
x = = 32 UW
1/16
Interpretarea valorilor obinute:
Valori fiziologice: n snge: 8-32 U.W.
n urin : 8-64 U.W.
Valori patologice: - activitatea amilazic sczut apare n afeciunile
pancreatice, gastrice i duodenale.
- activitatea amilazic crescut apare n afeciuni ale
ficatului, vezicii biliare, n alterri ale funciei renale, afeciuni ale glandei salivare
(parotidit acut, sialadenit), sarcin extrauterin, fiindc cantiti mici de amilaz
exist n trompele uterine, infarct intestinal. Valoarea diagnostic a amilazemiei se
coreleaz cu tulburrile digestive, pancreatita acut, parotidita epidemic.
Observaii:
1. Amilaza seric este stabil timp de o sptmn dac serul se ine la frigider sau
congelator.
2. Saliva conine de 1000 ori mai mult amilaz dect serul de aceea este necesar ca
pipetrile s se fac cu atenie evitndu-se scurgerea salivei n pipet.
3. Eprubetele vor fi bine splate cu ap distilat, de asemenea i pipetele, nlturndu-
se urmele de detergent care ar putea influena reacia enzimatic.
Explorarea echilibrului acido-bazic
Modificrile echilibrului acido-bazic a lichidelor din organismul viu, duc la
acidoz sau alcaloz. pH-ul sngelui este cuprins n intervalul 7,35-7,45. n mod
normal, raportul echivalenilor de HCO
3
-
i H
2
CO
3
este de 20/1, de exemplu 24 mEq
bicarbonat i 1,2 mEq acid carbonic. n locul raportului [HCO
3
-
]/[H
2
CO
3
], un raport mai
practic este [HCO
3
-
]/pCO
2
unde pCO
2
este presiunea parial a CO
2
din snge.
Scderea acestui raport duce la acidoz, iar creterea lui la alcaloz. Dac scade
numrtorul, este vorba de acidoz respiratorie (reducerea eliminrii prin expiraie a
CO
2
) sau metabolic. Creterea raportului datorit creterii numrtorului indic o
alcaloz metabolic. Scderea raportului [HCO
3
-
]/pCO
2
datorat creterii pCO
2
produce
acidoz respiratorie. Creterea raportului determinat de scderea pCO
2
produce alcaloz
83
respiratorie. n funcie de modificrile pH-lui se realizeaz acidoza sau alcaloza
compensat sau decompensat. Cnd pH-ul nu este modificat este vorba de acidoz sau
alcaloz compensat. Cnd pH-ul scade sub 7,35 este vorba de acidoz decompensat,
iar cnd pH-ul crete peste 7,45 se poate vorbi de alcaloz decompensat. Valori ale pH-
ului sngelui sub 6,9 sau peste 7,9 sunt incompatibile cu viaa. Cele mai importante
sisteme tampon care funcioneaz permanent n organism sunt: sistemul bicarbonat/acid
carbonic, sistemul fosfailor (HPO
4
2-
/H
2
PO
4
-
), sistemul proteinelor si sistemul
hemoglobinei (deprotonat/protonat).
Determinarea rapid a rezervei alcaline (bicarbonat actual)
Principiu:
Bicarbonaii din ser sunt descompui cu acid azotic, cu degajare de CO
2
, iar
excesul de acid azotic se titreaz n prezen de rou de fenol cu soluie de hidroxid de
sodiu.
Reactivi: - soluie acid azotic 0,1 N cu factorul F
HNO3
- soluie rou de fenol 0,04% n alcool etilic de 60%;
- soluie de hidroxid de sodiu 0,1 N cu factorul F
NaOH
Modul de lucru:
La 1 ml ser nehemolizat se adaug 1 ml soluie acid azotic 0,1N i 4 picturi
soluie rou de fenol 0,04%. Se agit timp de 2 minute pentru ndeprtarea dioxidului de
carbon. Se microtitreaz cu v ml soluie de hidroxid de sodiu 0,1N pn la primul viraj
portocaliu.
Calcul:
1 ml NaOH 0,1N ..................................................0,1mEq
3
HCO
NaOH HNO
F v F
3
................................................... x mEq
3
HCO
x = rezerva alcalin dintr-un ml ser.
Obsevaie: Factorul soluiei de HNO
3
0,1N se determin prin titrare cu soluia de
NaOH 0,1N cu factor cunoscut, folosind rou de fenol ca indicator.
Metoda Astrup
Spre deosebire de msurtorile de bicarbonai i de pH efectuate n plasm,
metoda Astrup ine cont i de rolul tamponului de hemoglobin i de intervenia
anhidrazei carbonice din eritrocite. Metoda se bazeaz pe relaia invers proporional
dintre pCO
2
i valorile de pH din snge. Este o micrometod n care se utilizeaz un
84
electrod capilar de sticl pentru msurarea pH-ului (dozarea poteniometric a pH-ului
cu electrod de sticl, pag.183). Determinrile se fac din snge capilar. Se msoar trei
valori de pH (n condiii anaerobe, n condiii de pCO
2
sczut i pCO
2
crescut). Cu
ajutorul acestor trei valori se pot calcula factorii principali ai echilibrului acido-bazic
dintr-o nomogram.
Ioni anorganici
Determinarea potasiului seric
Potasiul este un important cation intracelular pentru organism. n celul, parial,
el este slab legat cu proteinele i cu ionul fosfat. n tulburrile metabolice celulare
nsoite de o scdere a potenialului energetic (diabet zaharat, acidoze, hipertiroidism
etc.) celula pierde din acest motiv i potasiul care este ulterior eliminat. Cation principal
n fluidul intracelular, K
+
este implicat n funcia nervoas i muscular, n funcionarea
Na
+
/K
+
-ATP-azei. n timpul contraciei musculare, potasiul din spaiul intracelular trece
n cel extracelular, iar n locul lui n celul intr sodiul. Supradozarea cu ioni K
+
determin scderea (oprirea) activitii cardiace, ulcerul intestinului subire. Necesarul
zilnic de potasiu este de 1,875-5,625 g /kilocorp
Sursele: vegetale, fructe (nuci, banane, mere, struguri, portocale) boabe de cereale
semine de floarea soarelui, carne slab.
Principiu:
Hexanitrocobaltiatul (III) trisodic (Reactiv Konninck) formeaz cu ionul K
+
n
soluii neutre, un precipitat galben cristalin de hexanitrocobaltiat (III) dipotasic-
monosodic. Gruprile nitro din compus se oxideaz n mediu acid cu KMnO
4
n exces.
Excesul de KMnO
4
se titreaz iodometric cu tiosulfat de sodiu.
Na
3
[Co(NO
2
)
6
] + 2 KCl-------------> NaK
2
[Co(NO
2
)
6
] + 2NaCl
5 NaNO
2
+ 2 KMnO
4
+ 3 H
2
SO
4
----> 5 NaNO
3
+ 2 MnSO
4
+ K
2
SO
4
+3 H
2
O
2 KMnO
4
+ 10 KI + 8 H
2
SO
4
------------> 5 I
2
+ 2 MnSO
4
+ 6 K
2
SO
4
+8 H
2
O
I
2
+ 2 Na
2
S
2
O
3
--------------------------------> Na
2
S
4
O
6
+ 2 NaI
Reactivi: - Reactiv Konninck (hexanitrocobaltat (III) trisodic). Prepararea
reactivului Konninck:
85
- Soluia A: Se dizolv 1,25 g Co(NO
3
)
3
n 2,5 ml H
2
O. Dup dizolvare se adaug
0,0625 ml CH
3
COOH glacial.
- Soluia B: Se dizolv 56 g NaNO
2
n 9 ml H
2
O bidistilat, prin nclzire.
Soluia A se amestec cu soluia B. Pentru ndeprtarea vaporilor nitroi se
trece prin soluie un curent de aer timp de 60 minute (tromp de vid). Se las
n repaus 2 ore dup care se filtreaz. Dac culoarea se nchide din nou se
trece din nou un curent de aer.
- Alcool etilic 70
- Soluie fosfat disodic 5%
- H
2
SO
4
20%
- KMnO
4
0,01N
- KI 10%
- Amidon 1%
- Na
2
S
2
O
3
0,05N
Modul de lucru:
ntr-o eprubet de centrifug se msoar:
- 1 ml reactiv Konninck (Sol.A + B), apoi 1 ml ser. Se agit i se las n repaos
20 minute. Eprubeta se supune centrifugrii la 2000 rpm timp de 10 minute. Dup
decantarea lichidului supernatant, precipitatul sedimentat se spal cu 5 ml etanol iar
dispersia etanolic se supune din nou centrifugrii i decantrii
Precipitatul rmas se dizolv cu 5 ml fosfat disodic, prin fierbere 5 minute.
Soluia se golete ntr-un flacon Erlenmeyer de 100 ml iar eprubeta se spal n flacon cu
1 ml H
2
SO
4
20%. n tabel apar cantitile de reactivi care se introduc n flaconul
Erlenmeyer cu prob i n unul cu martor.
Prob Martor
Precipitat dizolvat -
H
2
O bidistilat (ml) - 5
H
2
SO
4
20% (ml) 1 2
KMnO
4
0,01N (ml) 20 20
Repaus 20 minute (ml)
KI 10% (ml) 3 3
Amidon 1% (ml) 2 2
86
Proba i martorul se titreaz cu Na
2
S
2
O
3
0,05N pn la dispariia culorii albastre
determinate de prezena I
2
.
Calcul:
1 ml Na
2
S
2
O
3
0,05N corespunde la 0,065 5 mg K
mg K% = (v
1
- v
2
) 5 0,065 100; unde v
1
= nr. ml Na
2
S
2
O
3
folosii la titrarea
martorului i v
2
= nr. ml Na
2
S
2
O
3
folosii la titrarea probei
Valori normale: 13-21 mg/100 ml ser; 3,3-5,4 mmol/l
Variaii patologice: - Hiperpotasemii: arsuri intense, hemoragii, infarct
miocardic, sindroame maligne, pancreatite acute hemoragice, necroze viscerale,
insuficien suprarenal acut sau cronic, sindrom hemolitic, nefrit acut sau cronic.
- Hipopotasemii: diaree, vomismente, nefropatii tubulare, acidoze diabetice, com
diabetic, administrare prelungit de diuretice, hipercorticism suprarenal, boala
Cushing, tumor suprarenal, tratament cortizonic.
Deficiena de potasiu apare dup rniri sau terapie cu diuretice. Deficiena de potasiu
determin slbirea tonusului muscular, paralizii, confuzii mentale.
Dozarea flamfotometric a potasiului seric
n ultimul timp, metodele chimice de determinare ale potasiului au fost nlocuite
prin analiza flamfotometric. Factorii care au favorizat utilizarea flamfotometriei ca
metod uzual n laboratoarele clinice pentru determinarea n lichidele biologice a
metalelor alcaline (Na
+
i K
+
) i metalelor alcalino-pmntoase (Ca
2+
i Mg
2+
), au fost:
simplitatea metodei, rapiditatea metodei, consumul minim de substane, limita de eroare
(2-3%) apropiat de limita de eroare din determinrile chimice.
Principiu:
Serul nehemolizat se dilueaz cu ap bidistilat, apoi se pulverizeaz ntr-un
dispozitiv special cu ajutorul unui curent de gaz purttor. Aerosolii formai n urma
pulverizrii se amestec cu unul din amestecurile de gaze: metan-aer, propan-aer sau
acetilen-aer care arde ntr-un arztor special (Brenner), dnd natere la spectre
caracteristice. Liniile spectrale ale potasiului pot fi selecionate cu ajutorul unui filtru.
Lumina flcrii este proiectat cu ajutorul unei oglinzi concave, prin filtrul de selecie,
pe o celul fotoelectric, ceea ce produce un fotocurent, care se poate msura cu ajutorul
87
unui galvanometru. Intensitatea fluxului luminos este proporional cu concentraia
ionilor K
+
din ser. Alte detalii privind aceast analiz instrumental sunt cuprinse n
capitolul privind unele aparate de analiz fizic de la sfritul ndrumtorului.
Dozarea calciului i magneziului
Dozarea calciului
Rolul calciului n organism
Calciu este cel mai abundent mineral din organismul uman. Un adult de 70 kg
conine n esuturi aproximativ 1,2 kg calciu. Aportul zilnic necesar de calciu este 1
gram, din care se absorb doar 10-20%. Calcemia (concentraia plasmatica a calciului)
normal este 9-11 mg%, 4,5-5,5 mEq/l sau 2,25 -2,75 mmol/l. Calciul ndeplinete n
organism un rol plastic participnd prin combinaiile sale insolubile la structura
scheletului osos a crui principal component mineral este hidroxiapatita,
3Ca
3
(PO
4
)
2
Ca(OH)
2
i un rol dinamic sub form de ioni Ca
2+
prezeni n fluidele, cum
ar fi plasma sau urin, sub forma a trei fraciuni:
1. Calciu legat de proteine (proteinate de calciu) aproximativ 1 mmol/l. Aceast form
depinde de concentraia relativ a proteinelor i calciului din plasm. Pe baza acestei
dependene se poate aprecia fraciunea de calciu ionizat, cunoscnd calciul total din
ser sau plasm i nivelul proteinei din ser sau plasm. Tehnica const n folosirea
nomogramei MacLean i Hastings, cunoscnd cei doi parametri amintii anterior se
citete direct valoarea calciului ionizat de pe nomogram.
2. Calciul legat de molecule mici (compleci de calciu sau chelai) acizi organici,
numit i calciu complexat dializabil. Acesta poate strbate membranele
semipermeabile (celofan) spre deosebire de calciul legat de proteine.
3. Calciul liber, forma biologic activ ce intervine n coagularea sngelui n activarea
enzimelor (proteaze), n buna funcionare a inimii, muchilor i nervilor.
Determinarea cationului calciu n snge
Calciul este cationul prezent predominant n spaiul extracelular. n laboratoarele
de analize clinice, calciul din snge se poate doza prin diferite metode. Metodele fizice
folosite sunt: fotometria de flacr, spectroscopie de absorbie atomic, folosirea
electrozilor ion-selectivi. Metodele chimice folosite sunt precipitarea calciului sub
88
form de oxalat i apoi dozarea oxalatului de calciu format cu ajutorul permanganatului
de potasiu i metoda complexonometric. Metodele optice sunt descrise n principiu la
sfritul ndrumtorului. Metodele poteniometrice cu electrod pentru Ca
2+
utilizeaz un
milivolmetru cu impedan de intrare mare similar cu pH-metrului care n locul
electrodului de sticl utilizeaz electrodul selectiv pentru ionii de Ca
2+
.
Metodele chimice (volumetrice) sau fizice cu excitare (flamfotometrie,
spectroscopie de absorbie atomic) permit determinarea concentraiei totale a calciului.
Singurele metode care pot determina calciul ionizabil (singurul care este biologic activ)
sunt metodele nernstiene, adic cele care folosesc electrozi selectivi.
Toi electrozii selectivi au ca particularitate o parte care este numit n mod
curent membran. Aceast membran confer selectivitatea electrodului. Membranele
sunt de mai multe tipuri: membrane de sticl (pentru msurarea pH-ului), membrane
solide (pentru msurare concentraiei F
-
, CN
-
) i membrane lichide (pentru msurarea
Ca
2+
, Mg
2+
).
Electrodul membran-lichid pentru Ca
2+
este constituit din urmtoarele
componente principale:
- Un fir de argint metalic acoperit cu clorur de argint, scufundat ntr-o soluie de
CaCl
2
- Un rezervor central n care se afl CaCl
2
i firul de argint
- O membran poroas millipor de PVC care joac rolul unui suport inert,
impregnat cu o soluie organic compus din sarea de calciu a acidului
didecilfosforic dizolvat ntr-un solvent nemiscibil cu apa (de exemplu: di n -
octil fenil fosfat).
Ionul de calciu este comun att soluiei apoase (soluie a crei concentraie vrem
s-o determinm) ct i soluiei organice cu care este impregnat membrana millipor.
n aceast soluie organic se va reine ionul de calciu de ctre un contraion (ion cu
semn opus), n cazul de fa didecil fosfatul, care fiind insolubil n ap nu poate prsi
soluia organic. ntre cele dou soluii (apoas i organic) apare o diferen de
potenial nernstian (respect legea lui Nernst).
Diferena de potenial este msurat cu ajutorul instrumentului, care este gradat
direct n uniti de concentraie a ionilor de Ca
2+
(pCa). Concentraia ionilor de calciu,
poate fi apreciata i indirect folosindu-se nomograme. Sunt dou tipuri de nomograme
utilizate n acest scop. Nomograma MacLean-Hastings cu ajutorul creia se poate
89
deduce concentraia calciului ionizat, cunoscnd calciu total din ser sau plasm i
concentraia total a proteinelor din ser sau plasm.
Cea de a doua nomogram utilizabil pentru deducerea concentraiei Ca
2+
, se
bazeaz pe faptul c ionizarea ionilor de calciu variaz linear n funcie de pH-ul
serului sau plasmei. Acest tip de extrapolare se poate face numai ntre limitele variaiei
pH-ului fiziologic (6,8 - 7,8), pentru c numai n aceast plaj de pH variaia este linear
(vezi figura de mai jos).
n diagrama pH-Ca
2+
liber prezentat, ordonata (concentraia ionilor de Ca
2+
)
este divizat nelinear. Cunoscnd valorile pCa i pH (msurate cu electrozii selectivi
corespunztori) se poate stabili natura tulburrii de care sufer pacientul
(hiper/hipoparatiroidism primar, acidoz/alcaloz acut, etc.).
Dozarea calciului prin metoda permanganometric
Principiu
Se precipit ionul de calciu sub form de oxalat de calciu. Precipitatul format se
dizolv n acid sulfuric, iar acidul oxalic eliberat se va titra cu o soluie de permanganat
de potasiu, pn la apariia unei coloraii slab roz.
90
CaCl
2
+ (COONH
4
)
2
(COO)
2
Ca + 2NH
4
Cl
(COO)
2
Ca + H
2
SO
4
(COOH)
2
+ CaSO
4
5(COOH)
2
+ 2KMnO
4
+ 3H
2
SO
4
2MnSO
4
+ K
2
SO
4
+ 10CO
2
+ 8H
2
O
Reactivi: - soluie de oxalat de amoniu 4% (soluie saturat)
- soluie de hidroxid de amoniu 2%
- soluie de acid sulfuric 1N
- soluie de permanganat de potasiu 0,01 N cu factorul F
KMnO4
Modul de lucru:
Se pipeteaz 1 ml ser, 1 ml soluie saturat de oxalat de amoniu i 2 ml de ap
bidistilat ntr-o eprubet de centrifug. Se amestec prin agitare i se las minim 30 de
minute n repaus. Se centrifugheaz timp de 10 minute la 4000 turaii pe minut.
Supernatantul se ndeprteaz printr-o singur rsturnare a eprubetei i peste precipitat
se adaug 4 ml din soluia de hidroxid de amoniu 2%, se agit, apoi se centrifugheaz.
Se ndeprteaz supernatantul cum s-a artat mai sus i se mai face o splare cu soluia
de hidroxid de amoniu, se centrifugheaz i se elimin supernatantul. Peste precipitatul
astfel splat se adaug 2 ml acid sulfuric 1N i se ajut dizolvarea prin nclzire pe o
baie de ap la 60-70C. Se recomand ca temperatura s nu depeasc 70C pentru a
se evita descompunerea acidului oxalic. Se titreaz cu soluia de permanganat de potasiu
la cald pn la apariia unei coloraii roz palid care trebuie s persiste minimum un
minut. n paralel se face i o prob martor. Tot ntr-o eprubet de centrifug, se introduc
2 ml acid sulfuric 1 N, se nclzete pe o baie de ap la 70C i se titreaz cu soluia de
permanganat de potasiu la cald pn la apariia unei coloraii roz palid care trebuie s
persiste minimum un minut.
Calcul:
1 ml soluie KMnO
4
0,01 N conine 0,01 miliechivaleni de KMnO
4.
Stoichiometric 0,01 miliechivaleni de KMnO
4
vor reaciona cu 0,01 miliechivaleni de
Ca ceea ce reprezint 0,2 mg de calciu.
x = (a-b) F
KMnO4
0,20 (mg Ca /1ml ser)
x100 = mg Ca /100 ml ser sau
(a-b) F
KMnO4
5 (mmol Ca /l)
n care: a = numr de ml soluie KMnO
4
0,01 N utilizai la titrarea probei de analizat iar
b = numr de ml soluie KMnO
4
0,01 N utilizai la titrarea martorului.
Valori normale: ser 9-11 mg / 100 ml la aduli sau
91
2,2-2,8 mmol / l
7-14 mg / 100 ml la copii sau
1,8-3,5mol / l
Valori sczute: - hipofuncie paratiroidian
- avitaminoz sau hipovitaminoz D
- uremie
La valori de sub 1,7 mmol / l (6,8 mg%) apar fenomene de tetanie.
Valori crescute: - hiperfuncie paratiroidian
- neoplazii osoase (osteosarcom, mielom multiplu, unele
leucemii)
- hipervitaminoz D
- deshidratare
Dozarea calciului prin metoda complexonometric
Eliminarea calciului n urin este n funcie de coninutul de calciu din alimente
i de rata de absorbie digestiv.
Principiu:
Ionii de calciu din urin n mediu puternic alcalin se vor titra cu EDTANa
2
,
adic complexon III (sarea de sodiu a acidului etilendiaminotetraacetic) n prezena
murexidului (purpurat de amoniu) ca indicator. Indicatorul va fixa ionii de calciu
(culoarea soluiei va fi roz) care prin titrare vor fi apoi complexai cu EDTA. Indicatorul
eliberat va colora soluia n violet. Murexidul, indicator metalocromic (pentru calciu i
ali cationi) are gradul de ionizare n funcie de pH-ul mediului. Reaciile prin care ionii
Ca
2+
sunt complexai de indicator i de complexon sunt:
Ca
2+
+ Ind
3-
CaInd
-
roz
Ca
2+
+ Y
4-
CaY
2-
complexonul
deprotonat
Reacia titrimetric care produce virajul indicatorului este:
CaInd
-
+ Y
4-
CaY
2-
+ Ind
3-
violet
92
Reactivi: - soluie complexon III 0,001 N .
- soluie de NaOH 9 N
- soluie indicator murexid 0,1%
Modul de lucru:
Se folosete urin proaspt, fr conservani. Se pregtesc dou pahare
Erlenmeyer de cte 100 ml i se pipeteaz n fiecare urmtoarele:
Exprimarea
cantitilor
Proba Martor
Urin ml 2 -
Ap bidistilat ml 50 52
Soluie de NaOH 9 N ml 0,2 0,2
Indicator murexid pic. 1 1
Culoare roz roz-violaceu
Se titreaz cu EDTA 0,01N pn la violet A ml B ml
Se execut o prob i un martor, martorul se titreaz dac este necesar pn la
culoarea violet stabil, pentru a se lua n calcul i urmele de calciu din reactivi.
Calcul:
n calcularea rezultatelor se are n vedere c complexul din 1 ml soluie
complexeaz 0,2 mg Ca
2+
:
1ml EDTA 0,01N-----------------------------------------------0,2 mg Ca
(A-B)F
EDTA
------------------------------------------------------x
x= (A-B) F
EDTA
0,2 mg Ca / 2ml
Considernd c urina de 24 ore are volumul de 1500 ml:
g Ca n urina de 24 de ore = (A-B) F
EDTA
0,2 1500 / 2 1000
g Ca n urina de 24 de ore = (A-B) F
EDTA
0,15
93
Valori normale:
- sugari 0,01 - 0,14 g/24 ore - copii i aduli 0,1 - 0,2 g/24 ore
sau 0,25 - 3,5 mmol/24 ore sau 2,5 - 5,0 mmol/24 ore
Valori crescute apar n boala Recklinghausen, osteoporoze, dup fracturi,
intoxicaii cu vitamina D, hipercalciurie ideopatic.
Valori sczute apar n spasmofilie, tetanie infantil, osteomalacie, rahitism,
hipopara-tiroidism.
Dozarea magneziului prin metoda Mann i Yoe
Un adult de 70 kg conine aproximativ 24 g de magneziu, care este distribuit
inegal n organism, avnd o concentraie mai mare n esuturile cu activitate metabolic
mai intens, cum ar fi creierul, inima, ficatul, rinichii, tiroida. Totui scheletul conine
60% din magneziu. Muchii scheletici i miocardul conine 35%, iar 1% se gsete n
compartimentul extra-celular, din acesta aproximativ dou treimi fiind sub form
ionizat, restul fiind legat de albumine. Principalele organe implicate n metabolismul
Mg sunt intestinul i rinichii.
Magneziul are un rol cheie n numeroase funcii mediate enzimatic, fiind
implicat n formarea de substrate enzimatice (ATP Mg, GTP Mg) precum i n activarea
direct a enzimelor. Funciile membranare care sunt influenate de magneziu includ
conducerea impulsului nervos i modularea activitii canalelor de calciu.
Principiu:
Colorantul Mann i Joe (1- azo - 2 hidroxi 3- (2,4 dimetil carboxamilido)
naftalin 1 (2 - hidroxibenzen) 4 sulfonat de sodiu) este albastru. n mediu
alcoolic, la pH 9-10, acesta formeaz cu Mg
2+
(n cantiti de ordinul microgramelor) un
complex de culoare roie, iar intensitatea coloraiei este proporional cu concentraia
cationului.
Materiale necesare: - spectrofotometru
- micropipete de 20l (0,02ml)
94
Reactivi: - Reactivul Mann i Yoe: se dizolv 8 mg colorant n 75 ml
alcool absolut (eventual prin fierbere cu reflux) i dup dizolvare
se aduce la 100 ml cu alcool absolut.
- Soluie tampon (pH 9-10): 20 g tetraborat de sodiu cristalizat cu
10 molecule de ap, se dizolv la cald n 500 ml ap bidistilat,
apoi se completeaz cu ap bidistilat la 1000 ml.
- Soluie standard de Mg
2+
2 mg/ 100ml: se dizolv 203 mg
MgSO
4
cristalizat cu 7 molecule de ap n 500 ml ap bidistilat,
se adaug 1 ml cloroform (conservant), apoi se completeaz la
1000 ml cu ap bidistilat
- Soluie acid percloric 0,33 N: se dizolv 2,85 ml HClO
4
70% n
100 ml ap distilat
Modul de lucru:
Se pregtesc n trei eprubete urmtoarele mixturi:
Prob Blanc Standard
Soluie tampon (ml) 1,0 1,0 1,0
Ser (ml) 0,02 - -
Standard de Mg
2+
(ml) - - 0,02
Ap bidistilat (ml) - 0,02 -
Se amestec bine
Reactiv Mann i Yoe (ml) 1,0 1,0 1,0
Se agit bine mixturile i dup 15-30 de minute se citete exticia probei i a
standardului fa de blanc n cuva de 1cm la = 505 nm.
Calcul:
Ep/Es x 2 = mg Mg% Ep/Es x 1,64 = mEq/l
Valori normale
nou nscui: 1,6 - 2,3 mg% sau 1,32 -1,90 mEq/l sau 0,66-0,95 mmol/l
aduli: 1,6 - 2,4 mg% sau 1,56-2,38 mEq/l sau 0,8-1,2 mmol/l
Modificri patologice
n practica medical deficitul de magneziu este ntlnit relativ frecvent, dar el nu
este ntotdeauna identificat deoarece are expresie medical mai puin specific
95
comparativ cu carena altor elemente (exemplu ferul) i apare ntr-un context complex
n asociere cu alte afeciuni care pot domina tabloul.
Deficitul de magneziu apare n urmtoarele cazuri:
Aport deficitar, alimentaie parenteral, cure drastice de slbire, alcoolismul
cronic, vrsturi datorate alimentaiei dezechilibrate, hipersudoraie, eliminarea crescut
a magneziului prin urin (etanolul antreneaz diureza osmotic). Afeciunile care
evolueaz cu malabsorbie, rezeciile intestinale, enteropatiile acute sau cronice, diarea,
steatoreea, terapia cu diuretice, provoac de asemenea depleia de magneziu. n practica
pediatric, deficitul poate aprea din urmtoarele cauze: disgravidia - srcire a
organismului matern cu repercusiuni asupra capitalului de magneziu al nou nscutului,
creterea rapid a copilului n primele luni, lapte matern srac n magneziu, tulburri
gastrointestinale la aceast vrst. Terapia cu calciu i vitamina D n doze mari
favorizeaz pierderile urinare de magneziu. n diabetul zaharat apare hipomagnezemia
datorit pierderilor urinare de magneziu antrenate de diureza osmotic. Stresul fizic i
psihic favorizeaz depleia de magneziu.
Manifestri clinice ale deficitului de magneziu (hipomagnezemie) sunt
polimorfe i nespecifice. Ele pot fi: insomnie, anxietate, depresie , cefalee, slbiciune
muscular, crampe, parestezii, hiperreflexe, dificulti de nghiire, senzaie de
constricie toracic, tulburri de adaptare a vederii.
Suprancrcare de magneziu se constat la nou nscuii ai cror mame au fost
tratate cu sulfat de magneziu n contextul eclampsiei de sarcin. n insuficiena renal,
n special concomitent cu medicaia pe baz de Mg
2+
(antacizi, laxative), se produce
hipermagnezemie. Simptomele hipermagnezemiei sunt: hipotensiune, greuri, vrsturi,
bradicardie, hiporeflex osteotendinos, hipotonie muscular.
96
Dozarea ionului de clor din ser prin
metoda Schales
Principiu:
Ionul Cl
-
, principal anion al plasmei sanguine, n mediu acid se titreaz cu
Hg(NO
3
)
2
formnd HgCl
2
, molecul nedisociat. Se folosete ca indicator
difenilcarbazona care formeaz un compus de culoare violet cu ionii Hg
2+
n exces. Nu
este necesar deproteinizarea, cu excepia serurilor puternic icterice.
Reactivi: - Soluie de azotat mercuric 0,01 N
- Soluie indicator de difenilcarbazon 0,01 M
- Soluie H
2
SO
4
2/3 N
- Soluie standard de clorur de potasiu 0,1 N
Modul de lucru:
n dou flacoane Erlenmeyer de 25 ml se pipeteaz:
Prob Standard
Ap distilat ml 1,0 1,0
Ser ml 0,1 -
Standard KCl ml - 0,1
H
2
SO
4
2/3 N 1 pic. 1 pic.
Indicator difenilcarbazon 2 pic. 2 pic.
Ambele probe se titreaz pn la aceiai culoare violet cu Hg(NO
3
)
2
0,01 N. Se noteaz
volumul n ml folosit la titrarea probei (v
1
) i cel folosit la titrarea standardului (v
2
).
Calcul:
1 ml Hg(NO
3
)
2
0,01 N corespunde la______________________________0,355 mg Cl
-
v
1
/ v
2
________________________________________________________ x
x = mg Cl
-
/0,1 ml ser = v
1
/ v
2
0,355
mg Cl
-
/ 100 ml ser = v
1
/ v
2
355
mEq Cl
-
/ l = v
1
/ v
2
100
97
Observaii: n cazul serurilor puternic icterice se efectueaz deproteinizarea.
Dup deproteinizare, culoarea indicatorului la viraj tinde spre albastru, pe cnd la ser
neproteinizat spre violet.
Valori normale pentru aduli:
340 390 mg clor/100 ml ser
96 110 mEq clor/ litru de ser
Valori sczute pn la 250 mg/100 ml ser se ntlnesc n insuficien corticosuprarenal
(boala Addison), n diaree sau vrsturi prelungite, cnd organismul pierde pe lng ap
i o cantitate apreciabil de NaCl.
Valori crescute se ntlnesc n stri de sete, n hiperfuncia corticosuprarenal i n
insuficiena renal.
Dozarea ferului seric (metoda Heilmeyer modificat)
Principiu:
Se trateaz serul sanguin cu acid clorhidric cnd se elibereaz Fe
3+
din legtura
sa cu proteinele (transferina). Se precipit proteinele serice cu acid tricloracetic, dup
filtrare Fe
3+
din filtrat este redus cu hidrochinon la Fe
2+
. Ionii de Fe
2+
formeaz cu
ortofenantrolina i, mai specific, cu o,o
i turnnd lichidul
pn la circa 2/3 din nlime.
- Cuva se va goli prin rsturnare brusc n poziia cu gura n jos i pstrnd aceast
poziie se va aeza pe o hrtie de filtru curat.
- Dup folosirea cuvelor se spal cu ap distilat i se aeaz cu gura n jos pe o hrtie
curat.
Spectrofotometrul de absorbie atomic
Principiu:
O parte din atomii speciei ce urmeaz a fi analizai sunt excitai n fllacr la un
nivel energetic superior emind apoi prin revenirea la nivelul iniial o radiaie
corespunztoare liniei de rezonan. Dar majoritatea atomilor rmn n starea
fundamental. n spectroscopia de absorbie atomic se trece prin flacr o radiaie
avnd frecvena liniei de rezonan. Atomii rmai n starea fundamental absorb
aceast radiaie (pe care ar emite-o dac ar fi excitai) i absorbia este proporional cu
concentraia atomilor n flacr i grosimea stratului strbtut de radiaia
monocromatic.
Spectrofotometrul de absorbie atomic
Spectrofotometrul de absorbie atomic se compune din:
1. Sursa de radiaie care emite linia de rezonan a elementului de determinat. Emisia
lmpii este modulat pentru ca detectorul s nregistreze doar lumina emis de lamp nu
i cea emis din flacr (de ctre atomii excitai). Se folosesc n general lmpi de,
descrcare cu catod tubular. Catodul trebuie s fie fcut din elementul pe care vrem s-l
181
determinm. Sunt i lmpi care au catozi fcui din aliaje astfel c pot fi folosite pentru
determinarea tuturor elementelor din care este fcut aliajul.
2. Atomizorul are rolul de a trece elementul de analizat sub form de atomi. Se folosesc
atomizoare de flacr sau cu cuptor de grafit.
a) Atomizoarele de flacr sunt alimentate cu amestecuri de gaze cum ar fi:
aer-acetilen; aer-hidrogen; aer-propan; N
2
O-acetilen etc. Proba de analizat este
introdus n atomizor prin aspirare i pulverizare.
b) Atomizorul cu cuptor de grafit este nclzit cu curent electric dup un
program reglabil. Pentru a feri cuptorul (tubul de grafit), de ardere se folosesc gaze de
protecie. n general, ca gaz de protecie se folosete argonul sau azotul. La aparatele
dotate cu atomizor cu cuptor de grafit se pot analiza probe lichide sau solide. Probele
lichide se introduc cu ajutorul unor seringi iar probele solide cu ajutorul unor pensete.
3. Monocromatorul izoleaz linia de rezonan i o focalizeaz asupra detectorului.
4. Fotomultiplicatorul detecteaz i amplific intensitatea luminii care cade asupra sa.
Practic, aparatul este ajustat la extincia zero cnd o soluie martor este
vaporizat n prob i lumina lmpii ajunge la fotomultiplicator. Cnd se introduc soluii
coninnd specii absorbante o parte din lumin este absorbit i rezult o diminuare a
intensitii luminii ce ajunge la fotomultiplicator. Se determin extinciile obinute cu
soluii standard ale elementului de analizat cu care se construiete o curb de etalonare a
aparatului. Se introduc apoi probele de analizat prelucrate n mod corespunztor iar din
compararea extinciilor probelor cu curba de etalonare se calculeaz concentraia
elementului de analizat.
Flamfotometria
Fotometrul cu flacr (flamfotometrul)
Principiu:
Soluia de analizat este pulverizat automat ntr-un dispozitiv, numit
pulverizator i se introduce sub form de aerosoli in flacra unui arztor special
(Brenner). Soluia, sub form de aerosoli, ajuns n flacr sufer diferite transformri:
apa n care este dizolvat sarea se evapor, componentele dizolvate sunt excitate de
temperatura ridicat a flcrii, rentoarcerea electronilor din starea excitat pe un nivel
182
energetic inferior elibereaz energia absorbit sub form de lumin cu lungime de und
caracteristic elementelor chimice ai crui atomi sunt excitai.
Prin excitarea n flacr a acestui amestec complex iau natere diferite spectre de
emisie. Radiaia emis este focalizat pe o celul fotoelectric, dup ce au trecut prin
filtre optice de selecie. Ia natere astfel un fotocurent care se msoar cu ajutorul unui
galvanometru. n cazul determinrii unui anumit element (sodiu, potasiu, calciu etc.),
intensitatea fotocurentului este proporional cu concentraia elementului respectiv din
soluie.
Pulverizatorul pulverizeaz automat n picturi foarte fine soluia de analizat. El
este confecionat din sticl, cuar sau material plastic. Pulverizarea se realizeaz n felul
urmtor: gazul purttor comprimat, care iese cu vitez mare n apropierea tubului cu
soluie, antreneaz soluia de analizat i o pulverizeaz n particule foarte fine. Soluia
pulverizat ajunge in flacra arztorului, unde se vaporizeaz iar ionii absorbii se
excit. Pentru ca analiza s se desfoare n condiii optime este necesar meninerea
unei presiuni constante att pentru aer ct i pentru gazul de ardere. Reglarea presiunii
se realizeaz cu ajutorul unor reductoare de presiune i se msoar cu manometrul.
Gazul purttor poate fi aerul sau oxigenul.
n figura de mai sus apar principalele componente ale unui flamfotometru.
Arztorul este dispozitivul cu flacr n care substana de analizat se vaporizeaz
i se excit, emannd radialii luminoase. Pentru ntreinerea flcrii, care se aprinde
automat, se utilizeaz diferite amestecuri de gaze n funcie de temperatura necesar
pentru excitarea substanei de analizat.
183
Amestec de gaze Temperatura flcrii msurat n C
Gaz de iluminat aer 1700 1840
Propan aer 1925
Hidrogen aer 2000 2045
Acetilen aer 2125 2397
Hidrogen oxigen 2550 2660
Propan oxigen 2850 (calculat)
Acetilen oxigen 3100 3137
n tabelul de mai sus sunt redate cteva amestecuri de gaze folosite n
flamfotometrie precum i temperaura flcrii acestora. n funcie de potenialul de
ionizare al elementului care urmeaz a fi determinat se alege i temperatura dorit i
deci gazul combustibil capabil s o realizeze. Pentru a fi activai, sodiul i potasiul
necesit o temperatur relativ joas cum ar fi cea a amestecului: propan-aer (1925C),
iar calciul i magneziul o temperatur mult mai ridicat (flacr de acetilen-oxigen).
Determinarea cantitativ a elementelor din soluia de analizat se face dup mai
multe metode: metoda curbei de calibrare, metoda soluiilor limitative, metoda
adaosurilor, etc.
Soluiile de analizat i standardele respective (soluiile etalon) trebuie s posede,
pe ct posibil, aceleai proprieti fizice, n aa fel nct condiiile de pulverizare sa fie
identice.
Poteniometria cu electrozi cu electroni ioni - selectivi
Msurarea pH-ului cu electrodul de sticl
Metoda necesit un pH-metru i doi electrozi: unul selectiv pentru ionii de
hidroniu - electrodul de sticl i unul de referin. Acesta din urm este un electrod
metalic de spea a II-a n contact cu o soluie saturat a anionului srii metalice,
Ag/AgCl/KCl
sat.
sau, n cazul celui de calomel, Hg/Hg
2
Cl
2
/KCl
sat
.
Electrodul de sticl
este confecionat din sticl special care se comport ca o membran permeabil pentru
ionii de hidroniu. Acest electrod n form de balona sferic este umplut cu o soluie
tampon cu pH dat care nu-i schimb compoziia (pH-ul) n timpul msurtorilor. El se
cufund n soluia prob cu pH necunoscut. Diferena de potenial dintre aceste soluii
este dat de relaia lui Nernst. Rescris n termeni de pH aceast relaie devine:
RT
AE =
( pH
electrod
pH
prob
)
2,303 F
184
Aceast diferen de potenial este, cum se vede, ntr-o relaie linear cu pH-ul soluiei
probei, deoarece pH
electrod
= constant. Ea se poate msura cu pH-metrul. Acesta este un
milivoltmetru cu impedan de intrare mare, datorit rezistenei electrice mari a
electrodului de sticl, cu scal de pH, numit pH-metru. Pentru msurarea pH-ului unei
soluii necunoscute este necesar n prealabil calibrarea pH-metrului cu ajutorul a dou
soluii tampon cu pH cunoscut.
Avantajele pe care le prezint metoda poteniometric fa de cea colorimetric
sunt:
- exactitate mare, 0,01 n cazul pH-metrelor obinuite ca de exemplu
cel de tip MV-84, sau chiar 0,001 n cazul pH-metrelor
performante ca de exemplu cel de tip Radiometer-Copenhagen.
- pot fi analizate soluii colorate, vscoase, cu proprieti redox
- timp de msurare foarte scurt (1-2 minute)
Schema de principiu al unui pH metru
185
Valori patologice de laborator care amenin viaa
Na seric sub 120 mmol/l peste 160 mmol/l
K seric sub 3 mmol/l peste 8 mmol/l
Ca seric sub 1 mmol/l peste 4 mmol/l
Cl seric sub 80 mmol/l peste 120 mmol/l
HCO
3
-
seric sub 10 mmol/l peste 40 mmol/l
pH sub 7,00 peste 7,7
P
CO2
sub 20 mmHg peste 80 mmHg
P
O2
sub 40 mmHg peste 400 mmHg
Glicemie sub 2,5 mmol/l peste 56 mmol/l
Hematocrit sub 20% (pierdere acut)
Indice de protrombin sub 20%
Limitele valorilor normale
St snge total U - urin
Pl plasm SG suc gastric
Se ser FBG - fibrinogen
L LCR GC greutate corporal
Acid uric Se Brbai 4,3 8 mg/100 ml (256 476 mol/ l)
Femei 2,3 6 mg/100 ml (137 357 mol/ l)
2 - 8 mg/100 ml (119 476 mol/ l)
U 400 1000 mg/ 24 ore (2,4 6 mmol/24 h)
L 0,5 2,6 mg/100 m (29 155 mol/ l )
Aminoacizi Se 35 55 mg N /l (3,5 5,5 mg N/100 ml)
U 0,5 g/24 ore
186
Amoniac Se 50 80 g/100 ml (29 47 mol/l)
U 0,3 1,2 g/24 ore (17,6 71 mmol/24 ore)
Bilirubina Se total cca. 1mg/100ml (17mol/l);
direct cca. 0,25 mg/100ml (4,3mol/l)
Calciu (total) Se Copii 7 14 mg/100ml (1,8 - 3,5 mmol/l; 3,57 mEq/l)
Aduli 9 11 mg/100ml (2,2 - 2,8 mmol/l; 4,5-5,5 mEq/l)
U Sugari 0,01 - 0,14 g/24 ore (0,25 - 3,5 mmol/24 ore)
Copii 0,10 - 0,14 g/24 ore (2,5 - 3,5 mmol/24 ore)
Aduli 0,10 - 0,40 g/24 ore (2,5 - 10,0 mmol/24 ore)
L 4 6 mg/100ml (1 - 1,5 mmol/l)
Clor St 280 320 mg/100ml (79 90 mmol/l)
Se 340 390 mg/100ml (96 110mmol/l)
L 410 460 mg/100ml (115 130mmol/l)
U 600 900 mg/100ml (169 254mmol/l)
SG 300 530 mg/100ml (85 149mmol/l)
Colesterol Se total 150 250 mg/100ml (3,9 - 6,5 mmol/l)
esterificat 60 80% din colesterolul total sau
colesterol esterificat / colesterol total = 0,6 - 0,8
Creatinin Se Brbai 0,8 - 1,8 mg/100ml (71 159 mol/l)
Femei 0,6 - 0,9 mg/100ml (53 80 mol/l)
0,6 1,8 mg/100 ml (53 - 159 mol/l)
U Brbai 26 mg/kg GC (230 mol/kg GC)
Femei 22 mg/kg GC (190 mol/kg GC)
Fer Se Brbai 90 160 g/ 100ml (16,1 28,6 mol/l)
Femei 80 130 g/ 100ml (14,3 23,3 mol/l)
Fosfataz alcalin Se Sugari 3 10 UB/100 ml (25 83 UI/l)
Copii 2 8 UB/100 ml (16,6 66,4 UI/l)
Aduli 2 4 UB/100 ml (16,6 33,2 UI/l)
Fosfataz acid
total
prostatic
Se
4,5 13,5 UI/l
0,05 3,6 UI/l
187
Glucoz St Iodo-
metric
80 120 mg/100ml (4,4- 6,6 mmol/l)
o-tolu-
idin
70 100 mg/100ml (3,9- 5,5 mmol/l)
Se
Pl
Glocoz-
oxidaz
70 104 mg/100ml (3,9 - 5,8 mmol/l)
L 50 - 70 mg/100ml (2,8 3,9 mmol/l)
U <30 mg/100ml (<1,7 mmol/l)
GOT Se aduli 2 - 20 UI/l
copii sub
3 luni
40 UI/l
GPT Se Aduli 2 16,5 UI/l
Copii sun
5 ani
10,2 13 UI/ l
Hemoglobin St Brbai 15 20 g/100ml (9,3 - 12,4 (Hb/4) mmol/l)
Femei 14,0 17,0 g/100ml (8,7 - 10,5 (Hb/4) mmol/l
Potasiu Se 13 21mg/100ml (3,3 -5,4 mmol/l)
L 8 11 mg/100ml (2,0 -2,8 mmol/l)
U 1,9 3,9 mg/100ml (0,5 1,0 mmol/l)
Lipide Se totale 400 700 mg/100ml
fosfolipide 150 250 mg/100ml
trigliceride 80 200 mg/100ml
Magneziu St 3,7- 4,7 mg/100ml(1,5-1,9 mmol/l; 3,0-3,9 mEq/l)
Se Nou
nscui
1,6-2,3mg/100ml(0,66-0,95mmol/l; 1,3-1,9mEq/l)
Aduli 1,9-2,9 mg/100ml (0,8-1,2 mmol/l; 1,6-2,4 mEq/l)
L 2,5 mg/100ml (1,0 mmol/l; 2,0 mEq/l)
Azot neproteic Se 20 40 mg/100ml (14,3 - 28,6 mmol/l)
L 15 18 mg/100ml (11 - 13 mmol/l)
Sodiu Se 315-350mg/100ml(137-152mmol/l)
L 300-340mg/100ml(130-148mmol/l)
U 4 6 g/24 ore (174 261 mmol/24 ore)
188
Fosfor anorganic St 30 50 mg/100ml (9,7 16,1 mmol/l)
Se Copii 4 6 mg/100ml (1,3 1,9 mmol/l)
Aduli 2,5 4,5 mg/100ml (0,8 1,15 mmol/l)
L 1 1,8 mg/100ml (0,3 0,6 mmol/l)
Proteine totale Se 6,5 - 8,2 g/100ml
Pl Copii 5 7,5 g/100ml
Aduli 6,5 - 8,5 g/100ml
L 10 30 mg/100ml
Fraciuni proteice Se Alb. 3,50-4,20 g/100ml
o
1
0,25-0,40 g/100ml
o
2
0,50-0,65 g/100ml
|
1
+ |
2
0,80-1,02 g/100ml
1,10-1,40 g/100ml
FBG 0,2 0,4 100 g/100 ml
Uree Se 21 54 mg/100ml (3,5 9 mmol/l)
U 20 30 g/24 ore (0,33 - 0,50 mol/24 ore)
L 20 60 mg/l (0,33 - 1,00 mmol/l)
Sistemul internaional de uniti
Cantitatea fizic Unitatea de msur Simbol
lungime metru m
mas kilogram kg
timp secund s
intensitatea c. electric amper A
intensitate luminoas candel cd
cantitate de subst. mol mol
temp. termodinamic Kelvin K
189