Notiuni introductive de chimie analitic

Chimia analitic este ramura chimiei care se ocupa cu

studiul metodelor de:
separare,
identificare i
determinare a compozitiei i structurii substantelor.
Chimia analitic calitativ se ocup cu identificarea
constituenilor (elementelor, ionilor, gruprilor) din
substana de studiat;
Chimia analitic cantitativ se ocup cu determinarea
compozitiei cantitative a substantelor de analizat, adica
stabilete raportul cantitativ dintre componenii si.

Clasificarea metodelor analitice

1. Metode chimice de analiz;
2. Metode fizico-chimice de analiz (metode
instrumentale).
Metodele chimice de analiz folosesc pentru
determinarea calitativ i cantitativ a analitului
unele proprietati chimice caracteristice i
utilizeaz sticlria uzual n laborator.
Metodele fizico-chimice de analiz folosesc
pentru determinarea calitativ i cantitativ a
analitului, aparate speciale cu care evalueaz
mrimi fizice ca: absoria luminii, conductibilitatea
electric a soluiilor, indicele de refracie etc.

Metode fizico chimice de analiz

componentului de analizat se determin indirect, prin evaluarea

unor mrimi fizico-chimice:
absorbia luminii,
intensitatea culorii,
conductibilitatea eletric,
indicele de refracie,
diferena de potenial, etc.

Sunt necesare aparate speciale => metode instrumentale

Clasificarea metodelor fizico-chimice de analiz
Metode optice
Metode electrochimice
Metode de separare

Metode optice de analiz

Spectroscopia

Se bazeaz pe studiul absorbiei i emisiei de radiaii de ctre

materie.
Domenii spectrale
Lumina sau radiaia electromagnetic prezint un caracter dual: de
und i de particul.
Lumina este reprezentat de particule (fotoni) de mas m care se
deplaseaz cu viteza c (3 .108 m/s) i posed o und asociat, de
lungime de und i frecven .
E = h = mc2 (relaia lui Planck)
h = constanta lui Planck = 6,63.10-27erg.s

n funcie de lungimea de und, radiaiile electromagnetice au fost

mprite n domenii spectrale.

Spectroscopia de absorbie molecular n ultraviolet i

vizibil (fotometria)
Absorbia molecular n ultraviolet i vizibil

Absorbia unei cuante determin trecerea moleculei ntr-o stare

excitat caracterizat de un nivel energetic crescut:
M + h M*
Moleculele excitate (M*) au o stabilitate sczut, n medie 10-8 s, i
revin la starea fundamental M prin emisie de energie neradiant.
M* M + energie neradiant

Gruprile funcionale care absorb radiaii din domeniul

spectral se numesc cromofori.

Legea Lambert-Beer
Dac o radiaie strbate un sistem absorbant, o cuv de grosime d, o parte din
intensitatea radiaiei incidente (I0) este absorbit (Ia), iar cealalt parte va trece prin
sistem fiind transmis (It) .

I0 =Ia + It
Ia ~ d
Ia ~ c

Aceste dou legi pot fi exprimate prin relaia:

It = Io . 10- c d
n care, = coeficientul molar de absorbie
Raportul It/I0 definete mrimea numit transmisie (T):

Absorbana (A) reprezint logaritmul mrimii reciproce a transmisiei:

=> A = . c . d (Lambert-Beer)
d = constant
=> A = kc
unde, k constant de proporionalitate.
Dac determinrile se efectueaz n domeniul vizibil absorbana se
noteaz cu E i poart numele de extincie, iar pentru determinrile
efectuate n ultraviolet se noteaz cu DO i se numete densitate
optic.

Legea Lamber-Beer este valabil numai pentru o radiaie

monocromatic, n soluii diluate (<10-2mol/l). Creterea
concentraiei particulelor absorbante peste o anumit limit conduce
la abateri de la legea de direct proporionalitate

Concentraie (c)

Aplicaiile spectroscopiei moleculare n ultraviolet i vizibil

Analiza calitativ se bazeaz pe dependena precis care exist ntre
gruparea funcional sau molecul i lungimi de und specifice la
care speciile menionate absorb o radiaie electromagnetic.
Parametrii monitorizai:
prezentarea unor maxime (peak-uri) i minime;
intensitatea reletiv a benzilor;
lungimile de und corespunztoare maximelor.

Pentru analiza calitativ pot fi folosite cataloage cu spectre etalon.

Analiza cantitativ sau spectrometria

Principii
fiecare substan prezint o band de absorbie caracteristic, iar
determinarea absorbiei se va face la lungime de und max care
corespunde absorbiei maxime .
absorbia variaz direct proporional cu concentraia substanei ntrun anumit interval.

Procedeul curbei etalon: const n constituirea curbei de etalonare a

dependenei absorbanei n funcie de concentraie.

Procedeul cu o soluie etalon = compararea absorbanei soluiei

etalon cu absorbana probei de analizat;
Calculul concentraiei din relaia lui Beer:
c = A/d

 Aparatur
Pentru determinarea absorbanei se
utilieaz aparate numite spectrofotometre.
Cuv

Surs
de
radiaii

Monocromator

Radiaie de
referin

referin
I0

Radiaie de
msurat

It
Cuv
prob

Sursa de radiaii
VIS lamp cu filament de wolfram
UV lamp cu descrcare n hidrogen sau deuteriu; lamp cu
vapori de mercur.
Monocromatorul - are rolul de a separa radiaia policromatic n
radiaii monocromatice i de a selecta radiaia monocromatic
adecvat prisme de cuar (UV i VIS) sau sticl (VIS).
Detectorul celule fotoelectrice (VIS) sau fotomultiplicatoare (UV):

Spectroscopia de absorbie atomic (AAS)

Este o metod de determinare a concentraiei unui element chimic, prin

msurarea absorbanei unei radiaii luminoase caracteristice, de ctre
atomii elementului adui n stare gazoas.
Atomii absorb o cuant de lumin i trec n stare excitat:
A + h A*
Absorbia radiaiei respect legea Beer:
A=kNd
unde,
N numrul de atomi din unitatea de volum;
d grosimea stratului de substan.
k constant de proporionalitate.
n ASS se analizeaz Absorbana radiaiei, care este proporional cu
concentraia.

Spectroscopia de absorbie atomic implic existena a trei etape:

1. atomizarea probei;
2. absorbia unei radiaii specifice de la o surs de lumin construit
din elementul ce urmeaz a fi analizat, de ctre atomii afla i n stare
gazoas;
3. determinarea absorbanei i calcularea concentraiei analitului.
Aparatur

Hollow chatode lamp

Tehnici de atomizare n AAS

AAS cu flacr: proba este aspirat ntr-un arztor cu o flacr generat
de un gaz combustibil (acetilen) i un gaz oxidant (aer).
AAS cu cuptor de grafit: folosete un tub de grafit in care se pipeteaz
proba; tubul este nclzit la exteriror la temperaturi ridicate.
Lampa cu catod scobit

Catodul este constituit din elementul ce urmeaz a fi analizat

Anodul tungsten
Exist i lampi multielement!

Exemplu, lampa pentru elementul Al

Spectrofotometru AAS

Lmpi cu
catod
scobit

Avantajele utilizrii AAS

Permite determinarea a 68 de metale
Deceleaz metale aflate n concentrii de ppm
Precizia determinrilor n flacr este mai mic de 1%
Interferene sunt foarte mici i deja studiate
Proba se prepar foarte uor prin dizolvare n acid
Instrumentul este foarte usor de manipulat.

Spectroscopia de emisie atomic (AES)

Absorbia de energie termic de ctre un atom, determin trecerea atomului
din starea fundamental (A) ntr-o stare excitat (A*). Aceast trecere se
produce datorit tranziiilor electronice de pe straturi cu energie joas pe
straturi cu energie nalt. Atomii excitai revin la starea iniial prin emisia
unei cuante de lumin h.
A + energie termic A* A + h

Principii:

atomii fiecrui element sunt caracterizai prin linii spectrale specifice;

intensitatea fiecrei linii spectrale depinde de concentraie, fiind direct

proporional cu concentraia, i de temperatur.

Etape de realizare:

atomizarea probei i excitarea atomilor n vederea emisiei de radiaii;

separarea spectral a radiaiilor emise i determinarea intensitii lor;

compararea radiaiilor emise cu liniile caracteristiceale unor probe standard n care

elementele corespunztoare se gsesc n concentraii cunoscute.
1.
Emisia n flacr
Excitarea atomilor se realizeaz n flacr
COMBUSTIBIL

OXIDANT

Propan

Aer

Butan

Aer

TEMPERATUR

1900C

Acetilen

Aer

2300C

Acetilen

Oxid de azot

3000C

OBSERVAII

Temperatura sczut determin excitarea unor

atomi uor excitabili ca: Na, Li, K i Ca.
Temperatur medie corespunztoare majoritii
emisiilor; se pot excita i atomii de Mg, Mn
i Sr.
Temperatura
ridicat
determin
elementelor refractile ca P.

excitarea

Principala aplicaie a emisiei n flacr este determinarea cantitativ a

elementelor alcaline i alcalinopmntoase la concentraii avnd limita inferioar
la 0,1 g/ml.

Hollow chatode lamp

2.Emisia n plasm
Plasm cuplat inductiv (the inductively coupled plasma ICP) (AES ICP)
Plasm n curent direct (the direct current plasma DCP) (AES DCP)
Plasm indus de microunde (the microwave induced plasma MIP) )AESMIP).

Schema de
principiu pentru
ICP
A typical
inductively
coupled
plasma source called

a torch

Tehnica plasmei n curent direct

The Direct
Current Plasma
Technique

The direct current plasma

is created by the
Tehnica
este utilizat
pentruof
probe
electronic
release
the
lichide i solide.
two electrodes.
The de
Curentul
de plasm este realizat
doi samples
electrozi; are placed on an
n tehnica
lichid proba
electrode.
In theeste plasat
pe un
electrod; solid samples
technique
n tehnica solid proba este plasat
are placed near the
ntre electrozi.
discharge to encourage
the emission of the
sample by the converted
gas atoms.

Spectroscopia n infrarou (IR)

Radiaiile infraroii induc vibraii moleculare puternice la nivelul
legturilor covalente.

Legturile covalente pot vibra n diferite moduri: alungire, oscilare,

forfecare.
Cele mai utilizate benzi din IR corespund frecvenelor de alungire.

Cnd o prob este expus interaciunii cu o radiaie IR, o

parte din radiaie este absorbit, o parte este transmis,
iar o parte poate fi reflectat ctre surs.
IR
source

Chemical
sample

Transmitted light

Detector

Proba de analizat va absorbi numai frecvene specifice, iar

restul frecventelor vor fi transmise (lumina transmisa).
Detectorul detecteaz frecvenele transmise dar poate reda
i frecvenele absorbite.

Spectrul IR poate reprezenta:

a) Absorbana n funcie de lungimea de und (sau de frecventa
radiaiei)
b) Transmisia n funcie de lungimea de und (sau de frecventa
radiaiei)

Clasificarea benzilor de absorbie n IR

a)
Puternice
b)
Medii
c)
Slabe

Legturi active n IR
Nu toate legturile chimice produc benzi de absorbie n spectrul IR.
Legturile active n IR sunt cele polare.
Intensitatea benzii depinde de intensitatea momentului de dipol
asociat cu urmtorii factori:
- Legturile polare puterice (ex., C=O) produc benzi puternice;
- Legturile polare medii i asimetrice produc benzi medii;
- Legturile cu polaritate sczut i simetrice produc benzi medii sau
nu produc benzi observabile in IR.

Forma benzilor n IR

Cele mai comune benzi sunt:

a)
nguste subiri si punctate, ca un pumnal
b)
Late
Ex de band lat banda de absorbie a gruprii O H din alcooli i
gruparea carboxil.

Informaii oferite de spectrul IR

-

Prezena sau absena unor grupri funcionale

Constituie o amprent molecular pentru compararea probelor .
Dac dou probe pure dau acelai spectru rezult c reprezint
aceeai substan.
Spectrul IR nu ofer date referitoare la formula molecular sau
structural. Acesta ofer informaii referitoare la fragmente din
structura molecular, n special la grupri funcionale.

Domenii de absorbie n IR

Numrul de und se noteaz cu , se exprim n cm-1, i reprezint numrul de

unde dintr-un cm.
= 1/
(cm-1) = [1/ (m)] x 105

Regiunea amprentei
Pentru compararea moleculeleor se poate utiliza domeniul 600 1400
cm-1(regiunea fingerprint). Aceast regiune prezint un numr mare
de benzi, uneori suprapuse. Datorit complexitii aceast regiune
este eludat de ctre nceptori.
Focus your analysis on this region. This is where most stretching
frequencies appear.

Fingerprint region: complex and difficult to

interpret reliably.

Graphics source: Wade, Jr., L.G. Organic Chemistry, 6th ed. Pearson Prentice Hall Inc., 2006

Exemple de spectre IR pe funciuni organice

Alcani: benzi pentru vibraie de valen C H : 3000 cm-1

Benzi de deformare angular a legturii C H : 1300 1500 cm-1

Graphics source: Wade, Jr., L.G. Organic Chemistry, 5th ed. Pearson Education Inc., 2003

Alchene
Benzi datorate deformrilor de valen: C = C la 1600 1700 cm-1 i
=C H la 3080 cm-1
Deformare angular C H la 1300 1500 cm-1.

Graphics source: Wade, Jr., L.G. Organic Chemistry, 5th ed. Pearson Education Inc., 2003

Banda pentru = C H poate fi obscur dac legtura

dubl se afl n interiorul moleculei

Graphics source: Wade, Jr., L.G. Organic Chemistry, 6th ed. Pearson Prentice Hall Inc., 2006

 Alchine

Graphics source: Wade, Jr., L.G. Organic Chemistry, 6th ed. Pearson Prentice Hall Inc., 2006

Nitrili
C N: in jur de 2250

Alcooli
O H: 3000 3700 cm-1

Aldehide i cetone

Graphics source: Wade, Jr., L.G. Organic Chemistry, 6th ed. Pearson Prentice Hall Inc., 2006

Acizi carboxilici
O H: 2800 3500 cm-1
C = O: 1710 cm-1

Amine
N H: 3200 3600 cm-1

Amide
N H: 3100 3500 cm-1
C = O: 1710 cm-1

NIR, MIR i FIR

NIR (infrarou apropiat) este poriunea spectrului cuprins ntre 700 i 2500 nm
(13.000 4000 cm-1) este lumina dintre VIS i IR. Absorbia abservat n NIR
este reprezentat de spectre sau combinaii ale benzilor fundamentale de alungire
datorate uyual alungirii legturilor C H, N H sau O H.
MIR (infrarou mijlociu) NIR (infrarou apropiat) 2500 25000 nm (4000 400
cm-1).
FIR (infrarou ndeprtat) 400 100 cm-1. spectrul obinut este limitat i ofer
informaii referitoare la moleculele care conin atomi ai metalelor grele, vibraia
scheletului molecular, torsiuni moleculare i vibraia reelelor cristaline dintr-un
cristal.

Spectroscopia de mas (Mass spec sau

MS)
Spectrometria de mas este o tehnic analitic utilizat pentru:
Cuantificarea materialelor cunoscute dintr-o prob;
Identificarea componeneilor necunoscui dintr-o prob;
Elucidarea structurii i proprietilor chimice ale diferitelor molecule.
Spectrometria de mas utilizeaz electroni de energie nalt pentru a
rupe moleculele n fragmente.
Separarea si analiza fragmentelor ofer informaii referitoare la:
masa molecular
structura moleculelor dintr-o prob.

Dac o molecul de metan este bombardat cu un curent de electroni

de energie nalt, molecula va pierde un electron i se va
transforma ntr-un radical cation (o specie cu un electron
nemperecheat i cu sarcin pozitiv):
H
I
H C H + e
I
H

H
I
H C +H + e
I
H
Ion molecular (M+)
(m/Z) = 16

Produsul de reacie este un ion molecular sau radical cation cu masa

molecular (m)16 i sarcina (Z) 1.

Dac molecula este mai complex, numrul fragmentelor este mai mare. De
exemplu, n cazul etanului rezult:
H H
I
I
H C C H + e
I
I
H H

H H
I
I
H C C + H
I
I
H H
H H
I
I
HCC+
I
I
H H

H
I
HC+ +
I
m/Z = 15
H

+ H

m/Z = 30

m/Z = 29

H
I
C H
I
H m/Z = 0
(nedetectabil de MS)

=> n urma bombardrii cu electroni a unei molecule rezult:

Ionii moleculari sau ioni parentali (M+) au masa molecular egal cu
masa molecular a substanei din care provin, i au (n general cea mai
mare mas din spectru).
H H
H
I
I
I
H C C + H
H C +H
I
I
I
H H
H

Cationi au mase mai mici dect masa substanei din care provin.
H
I
HC+
I
H

Exemplu, spectrul de mas al etanolului (M = 46):

M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/1/09)

Cationii formai sunt separai prin deflexie cationic (deviaie cationic)

MS sunt detectai numai cationii; radicalii nu sunt

detectai.
Numrul de ioni deflexai n cmp magnetic este
dependent de raportul m/Z. Majoritatea ionilor au
sarcina +1, din acest motiv, factorul determinanat este
masa ionului.
Spectrul de mas este reprezentarea grafic a masei
n funcie de abundena ionilor;
Abundena peak-urilor este exprimat n procente
din peak-ul de baz (cel mai intens peak din
spectru).
Peak-ul de baz nu este ntotdeauna un peak
parental.

Exemplu, spectrul de mas al etanolului:

Peak-ul de baz

M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/1/09)

 MS permite recunoaterea rapid a elementelor

chimice.
Exemplu:din spectrul de mas al cianurii de metil se poate
deduce pek-ul elementului N:
+

M = 41

N+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)

 MS permite decelarea izotopilor unui element

Majoritatea elementelor se gsesc n natur sub
form de amestecuri de izotopi.
Prezena semnificativ a izotopilor cei mai grei
conduce la peak-uri mici cu mase mai mari
dect peak-ul ionului parental.
M+1 un peak care are masa mai mare cu o
unitate dect M+;
M+2 un peak care are masa mai mare cu 2
uniti dect M+;

Exemplu 1: spectrul de mas al 2-bromopropanului are peak-ul

parental (M+), corespunztor cationului cu izotopul 79Br i un peak
M+2, corespunztor cationului cu 81Br. Elementul brom n stare
natural este constituit din 79Br (50,5%) i 81Br(49,5%).

2-bromopropan

M+ ~ M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of Advanced Industrial

Science and Technology, 11/1/09)

Exemplu 2: Elementul Cl are 2 izotopi: 35Cl i 37Cl, n raport atomic 3:1;

n spectru de mas al clorobenzenului apare un peak corespunztor
M+ i un peak corespunztor M+2, cu nlimea 1/3 din nlimea
peak-ului M+.

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)

 MS permite determinarea structurii substanelor

Principii:
- Curentul de electroni de energie nalt rupe molecula
n fragmente, cel mai adese ntr-un cation i un
radical.
- Ruperea legturilor se face n aa fel nct s se
genereze cel mai stabil cation.
- Stabilitatea radicalului nu este important.

ALCANI
Fragmentarea alcanilor conduce, n general, la
urmtorii cationi:
- Metil M+ = 15;
- Etil M+ = 29
- Propil M+ = 43
- Butil M+ = 57
Alcanii fragmentai tind s formeze cel mai stabil
carbocationi.

Exemplu 1. Spectrul de mas al 2-metilpentanului

ALCHENE
Fragmentarea specific conduce la carbocationi alilici cu
formule de rezonan stabile

Spectroscopia de fluorescen (FS)

Este o combinaie ntre procesele de absorbie i emisie a luminii.
Procesul de fluorescen const n absorbia unei radiaii luminoase de
ctre o specie molecular aflat n stare fundamental (M),
trecerea ntr-o stare excitat (M*) i revenirea speciei moleculare la
starea fundamental. Revenirea (relaxarea) la starea fundamental
se face rapid (10-6 10-8 s) prin emisia unei radiaii de lungime de
und mai mare (energie mai mic). Procesul de relaxare are loc
dup cedarea energiei de coliziune moleculelor solventului sau altor
molecule din mediu de reacie.

M + h M* M + h1 ( < 1)

66

 Lumina emis prezint urmtoarele caracteristici

1. Are o lungime de und mai mare (energie mai mic) dect lumina de
excitare, deoarece o parte din energie asociat cu starea M* este
pierdut ca energie termic.
2.Lumina emis este compus din radiaii cu mai multe lungimi de und
care genereaz spectrul de fluorescen.
Intensitatea fluorescenei este exprimat n cantitate de lumin emis
(quantum yield), Q. Q reprezint raportul dintre numrul de fotoni emii
i numrul de fotoni absorbii
Unele molecule sunt intrinsec flourescente (fluorofori endogeni), sunt ele
nsele fluorescente:
aminoacizii aromatici (Phe, Tir, Trp) i proteinele care conin aceti
aminoacizi;
Bazele azotate purinice si pirimidinice
Coenzimele NAD+ i FAD;
Lipidele
Fluorescena acestor molecule este utilizat pentru a studia
modificrile conformaionale ale proteinelor, situsurile active i
coenzimele enzimelor.

Fluoroflorii endogeni sunt excitai cu radiaii luminoase cu lungimi de

und cuprinse ntre 250 -450 nm i emit radiaii cu lungimi de und
cuprinse ntre 280 700 nm.

IV. Biological Fluorophores

Fluoroflorii endogeni sunt excitai

cuEndogenous
radiaii luminoase
cu lungimi de
Fluorophores
und cuprinse ntre 250 -450 nm i
emit radiaii
lungimi de und
aminocu
acids
cuprinse ntre 280 700 nm.

structural proteins

enzymes and co-enzymes

vitamins
lipids
porphyrins

Exogenous Fluorophores
Cyanine dyes
Photosensitizers
Molecular markers GFP, etc.

 Substanele extrinsec fluorescente (fluorofori exogeni) sunt

molecule fluorescente care se adaug n sistemele biologice pentru
a crea fluorescen.
Aceste substane sunt utilizate pentru a studia legarea acizilor grai de
diferite molecule, legarea moleculelor mici de ADN etc.

Exemple de substane extrinsec fluorescente:

71

Fluorofor
1,8 ANS
Clorura de dansil
Fluorescein
AMC
Bromur de etidiu
Acridine orange ADN + ARN

Absorbie (nm)
336
372
490, 494
345
510, 523
440-480

Emisie (nm)
490
518
520, 525
445
595, 605
520-650

 ANS, clorura de dansyl i fluoresceina - proteine;

Etidium, proflavina i acridinele - acizi nucleici,
Bromura de etidiu intensific fluorescena atunci cnd se
leg de ADN dublucatenar, dar nu o intensific atunci
cnd se lega de o singur caten ADN.

Aparatul utilizat se numete spectrofluorimetru.

Acesta conine:
- Surs de lumin lamp de Xe (emite in UV, VIS i NIR)
- 2 monocromatoare
- Cuv pentru prob (cuar sau sticl)
- Detector
Detectorul se afl poziionat la un unghi de 900, fa de sursa de
lumin.
Dup excitare fluorescena este emis n toate direciile i este
detectat de fotocelul n unghi drept fa de fascicolul de excitare.
n FS se analizeaz lumina emis dup excitare!

75

FS se utilizeaz pentru determinarea contaminrii cu

fecale a apei i alimentelor, pentru determinarea
prezenei n alimente a unor molecule rezultate din
metabolizarea unor medicamente administrate la
animale, pentru monitorizarea pesticidelor si erbicidelor
din alimente etc.

Spectroscopia prin chemiluminiscen (CS)

Chemiluminiscena este emisia de lumin, ca rezultat al unei reacii
chimice.
Exemplu:
CH3 S CH3 + F2

Produi + h

CS - se bazez pe determinarea radiaiei emise de ctre speciile

atomice sau moleculare excitate, printr-o reacie chimic, pentru a
determina concentraia analitului.
Cea mai utilizat substan chimic folosit n chemiluminiscena n
faz lichid este luminolul. Acesta formeaz n mediu alcalin un
dianion care poate fi oxidat rapid la specii moleculare bogate n
energie numite emitori de luminiscen.

Chemiluminiscena este utilizat, de exemplu, pentru evidenierea

peroxidului de hidrogen.
Peroxidul de hidrogen n prezena unui catalizator (fier, cianur
feric, hemoglobin, enzime, polifenoli), se descompune conform
ecuaiei:
H2O2

H 2O + O 2
n mediu alcalin, luminolul formeaz luminol dianion, care, n
prezena oxigenului generat de peroxidul de hidrogen, se
transform ntr-un peroxid organic extrem de instabil care se
descompune n acid 3-aminoftalic excitat care revine la o stare
energetic inferioar (stabil) prin emisia unei cuante de lumin de
culoare albastr h

 Refractometria

Ca i punctul de topire, indicele de refracie poate fi utilizat pentru a

confirma identitatea unui compus, sau pentru a aprecia puritatea
prin compararea valorilor obinute cu valorile din literatura de
specialitate.
Fenomenul de refracie are loc la trecerea unei raze de lumin dintrun mediu omogen i transparent n alt mediu omogen i
transparent.

Aparatur. Aparatele utilizate pentru determinarea indicelui de

refracie se numesc refractometre.

Prin creterea valorii unghiului de inciden, unghiul de refracie tinde

ctre 900.
Valoarea unghiului de inciden pentru care unghiul de refracie este
900 (nu mai exist refracie) se numete unghi critic.
La refractometru se citete unghiul critic (1). Cunoscnd unghiul critic
i indicele de refracie al prismei (prism = k) se calculeaz indicele
de refracie al materialului analizat (x ).
x = k 1
De exemplu, apa pur are indicele de refracie la 200C 1,33. adugarea
de sare, zahr etc modific indicele de refracie, cu o valoare
dependent de concentraia acestor compui.

 Refractometria este utilizat n controlul

calitii alimentelor pentru:
determinarea coninutului n zahr, sare,
grsimi al produselor alimentare;
depistarea produselor alimentare
falsificate.

Polarimetria este o metod de analiz care se bazeaz pe

msurarea unghiului de rotaie a planului luminii polarizate.
La trecerea luminii naturale printr-o prism Nicol are loc polarizarea
luminii, vectorul E va oscila ntr-un singur plan.

n funcie de comportarea lor fa de lumina polarizat, substanele

i soluiile pot fi mprite n dou categorii:
substane optic active rotesc planul luminii polarizate;
substane optic inactive nu rotesc planul luminii polarizate.

La trecerea luminii polarizate prin soluia unei substane optic active,

planul de polarizare al razei imergente este rotit cu un anumit unghi,
numit unghiul de rotaie al planului de polarizare.
Aparatur. Aparatul utilizat n polarimetrie se numete polarimetru.

 Determinrile se efectueaz la 200C, cu

lumina galben a sodiului corespunztoare
liniei D din spectru i se utilizeaz relaia:
[]D20 = 100/(L c)
L grosimea stratului de substan; c
concentraia procentual.
Polarimetrele sunt utilizate pentru
determinarea coninutului n zahr al
produselor alimentare.

Analiza poteniometric
(poteniometria)

Oxidarea = cedare de electroni; substana care cedeaz electroni

este numit reductor i se noteaz cu red.
O reacie de oxidare se scrie astfel:
p red1 m p e p ox1
Reducerea = acceptare de electroni; substana care accept
electroni este numit oxidant i se noteaz cu ox.
Un proces de reducere se scrie n general astfel:
m ox2 + m p e m red2
Oxidarea i reducerea sunt procese care decurg simultan,
alctuind un cuplu de reacii denumit reacie de oxido-reducere sau
reacie redox.
Expresia general a unei reacii de oxidoreducere este:
p red1 + m ox2 p ox1 + m red2

Celule electrochimice
Celule electroliticesub aciunea curentului
electric extern se produc reacii chimice care nu
au loc n mod spontan
Celulele electrochimice (pile electrice sau
elemente galvanice) genereaz energie
electric n urma unor reacii chimce care au loc
n mod spontan.

Celul electrolitic

Ag(s) Ag e
Cu 2 2e Cu(s)
2Ag(s) Cu 2 2Ag Cu(s)

Celul electrochimic

Ag e Ag(s)
Cu(s) Cu 2 2e
2Ag Cu(s) 2Ag(s) Cu 2

Anozi i catozi
Anod au loc reacii de oxidare
Cu(s) Cu 2 2e
2Cl - Cl 2 (g) 2e
Fe 2 Fe3 e

Catod au loc reacii de reducere

Ag e Ag(s)
Fe3 e Fe 2
NO 3- 10H 8e NH 4 3H 2 O

Reprezentarea unei celule electrolitice

Cu(s) 2Ag Cu 2 2Ag(s)
Cu Cu 2 (0.0200 M) Ag (0.0200 M) Ag
Reaciile care au loc n cele dou
semicelule sunt:
Semicelula cuprului - oxidare
Cu(s) Cu2+(aq) + 2e
Semicelula argintului reducere Ag+
(aq) + e Ag(s)

Potenial de electrod
Reprezint diferena de potenial dintre conductorul
electronic i cel ionic.
Potenialul de electrod este considerat tensiunea necesar unei
semireacii de oxidare sau reducere, scris convenional ca o
reacie de reducere:
Cu2+ + 2e Cu
Ag+ + e Ag

Potenialul de celul (voltajul)

Reprezint fora care mpinge electronii n

circuitul extern al unei celule
electrochimice. Aceast for se mai
numete i tensiune electromotoare.

Reprezentare convenional
Cu(s) 2Ag Cu 2 2Ag(s)
Cu Cu 2 (0.0200 M) Ag (0.0200 M) Ag
Oxid
Anod

Red
Catod

0.412 V

Voltmetru
2Ag(s) Cu 2 2Ag Cu(s)
Ag Ag (0.0200 M) Cu 2 (0.0200 M) Cu
Oxid
Anod

Red
Catode

- 0.412 V
Voltmetru

Semicelul = reacia semicelulei

Cu(s) 2Ag Cu 2 2Ag(s)
Cu Cu 2 (0.0200 M) Ag (0.0200 M) Ag

Ecell Eright Eleft

Ecell Ecathode Eanode
Ecathode

Ag e Ag(s)
Ag (0.0200 M) Ag

Eanode

Cu 2 2e Cu(s)
Cu 2 (0.0200 M) Cu

Prin convenie, reaciile semicelulelor sunt scrise ca semireacii de

reducere

Sensul curentului electric i

modificarea concentraiilor

Potenialul iniial

Concentraiile se modific pn la atingerea

echilibrului

Electrodul standard de hidrogen

2H (aq) 2 e H 2 (g)
H ([H ] x M) H 2 (p 1.00 atm), Pt

ESHE
0.00 volts

Potenialul standard de celul

H 2 (g) 2Ag 2H 2Ag(s)

Pt, H 2 1.0 atm H (a 1.00) Ag (a 1.00) Ag

SHE Ag (a 1.00) Ag

Ecell Ecathode Eanode 0.799V

Tabelul potenialelor standard de electrod

Clasificarea metodelor
electrochimice de analiz
Metode de volum se bazeaz pe fenomenele electrice
care au loc ntr-o soluie.
Metode conductometrice
Metode interfaciale semnalul electric depinde de
fenomenele care au loc la interfaa electrod soluie.
determinarea pH-lui soluiilor cu electrodul de pH

Metode electrochimice interfaciale

1.Metode statice curentul nu circul prin celul (ex.,
poteniometria)
2.Metode dinamice curentul circul n celula electrochimic
- metode cu curent constant (coulometria)
- metode cu potenial controlat (voltametria)

Controlarea i msurarea curentului i

potenialului
O celul electrochimic este constituit din:
- 2 sau mai muli electrozi, electrolit, sistem electronic de
monitorizare;
- Electrod indicator potenialul este sensibil la
concentraia analitului;
- Electrod de referin completeaz circuitul electri i
posed un potenial de referin cu care se compar
potenialul electrodului indicator. Potenialul acestui
electrod rmne constant.
Celulele electrochimice constituite dintr-un sistem cu 3
elctrozi sunt constituite din: electrod indicator,
electrod de referin i electrod auxiliar.

Potenialul jonciunii lichidului (Ejl)

- Se dezvolt la interfaa a dou soluii ionice care difer
prin compoziie, datorit diferenei de mobilitate a ionilor.
- Potenialul de jonciune a lichidelor este datorat
diferenelor de mobilitate ntre ionii + i ionii -.
- Jonciune lichidelor o reprezint interfaa dintre dou
soluii ionice de electrolii diferii sau dintre dou soluii
ale aceluiai electrolit de concentraii diferite.
- Amplitudinea ptonialului jonciunii depinde de
concentraia ionilor celor dou soluii la nivelul celor dou
fee ale interfaei i poate fi mai mare de 30-40 mV.
- De exemplu, potenialul jonciunii intre o soluie de HCl
0,1M i o soluie de NaCl 0,1M este de 33,09 mV.

Exemplu
O soluie de HCl 0,1M separat printr-o memebran
poroas de o soluie de HCl 0,01M.
- Are loc difuzia ionilor H+ i Cl- din soluia mai concentrat
ctre soluia mai diluat;
- Mobilitatea H+ > Cl-;
- Soluia mai concentrat va dezvolta un potenial -, iar
soluia mai diluat un potenial +;
- Diferena de potenial dezvoltat de-a lungul membranei
se numete potenialul jonciunii lichidului.
- Magnitudinea potenialului este dependent de
concentraiile soluiilor.

Exemplu
Soluia de NaCl n contact cu apa distilat:
Mobilitatea Cl- > Na+

Electrozi de referin
Electrodul de referin reprezint o semicelul cu potenial
cunoscut; celalt semicelul va indica concentraia
analitului.
Prin convenie, electrodul de referin este anodul; astfel,
cea mai simpl notaie pentru o celul poteniometric
electrochimic este:
Ecelul = EInd Eref + Ejl
Electrodul de referin ideal are potenialul stabil i deci,
orice modificare pentru Ecelul este atribuit electrodului
indicator, i impicit, modificrii concentraiei analitului.

Exemple de electrozi de referin

Electrodul standard de hidrogen (ESH)
- Este utilizat pentru satbilirea potenialului standard
pentru alte semicelule;
- Cele dou semicelule se conecteaz printr-o punte de
sare;
- Reprezentarea schematic a ESH este:

Pt(s), H2 (g, 1 atm) I H+ (aq, a = 1.00)

Ecuaia reaciei din semicelula ESH:

2H+(aq) + 2e

H2(g);

Eo = 0,0 V

Reprezentare
a schematic
a ESH

Electrodul de calomel
Hg2Cl2(s) +2e 2Hg(l) + 2Cl- (aq)
Electrodul saturat de calomel (ESC) are un potenial de 0,2444V la
220C.
Potenialul electrodului Hg/Hg2Cl2 este determinat de concentraia CI
utilizat la preparare.

E = Eo Hg2Cl2/Hg - (0.05916/2) log [Cl-]2

Electrodul tipic ESC este format din dou tuburi concentrice de sticl.
Tubul inferior conie: fir de Pt, past de Hg-Hg2Cl2 i soluie saturat
de KCl, fibre de azbest (puntea de sare).
Tubul inferior conie soluie saturat de KCl i un dop ceramic care
permite umplerea tubului cu KCl.

Schema electrodului saturat de calomel

Reprezentarea schematic a
semicelulei este:
Hg(l) | Hg2Cl2, KCl (aq, saturated) | |

Electrozii Ag/AgCl
Reprezentarea schematizat a semicelulei este:
Ag(s) | AgCl (satd, KCl (xM) ||
Reacia din semicelul este:
AgCl(s) + e- Ag(s) + Cl(aq)
Potenialul electrodului Ag/AgCI este determinat de concentraia
CI utilizat la preparare.

E E o - 0.05916 log[Cl- ]

Electrozi indicatori
ntr-o celul electrochimic poteniometric, potenialul
electrodului indicator este proporional cu concentraia
analitului.
Exist dou tipuri de electrozi indicatori:
1. Electrozi metalici
2. Electrozi cu memebran ion selectiv

Electrozi metalici
1.Electrozi de specia I
Sunt formai dintr-un fir metalic aflat cufundat ntr-o soluie de electrolit
care conine cationii si.
Ecuaia reaciei redox produs este:
Mn+ + ne M

Ecell = K- (0.059/n) log (1/[Mn+] ) = K +(0.059/n) log[Mn+]

K = o constant care include potenialul standard al cuplului redox
Mn+/M
Aceti electrozi se limiteaz pentru determinarea ionilor de Ag, Bi,
Cd, Cu, Hg, Pb, Sr, TI, and Zn.
Electrozii metalici nu pot fi utilizai n soluii acide deoarece se
oxideaz foarte uor.

Mn+

2.Electrozi de specia II
Electrodul metalic poate da un rspuns la concentraia unui anion dac
anionul formeaz un precipitat sau un complex stabil.
De exemplu, argintul formeaz un electrod de specia a IIa pentru
halogeni i anioni de halogen:
AgCl (s) Ag (s) + Cl
AgI (s) Ag (s) + I
Electrozii de specia II sunt construii dintr-un metal care vine n contact
cu o sare a sa greu solubil, care la rndul su este n contact cu o
soluie cu anion comun cu sarea greu solubil.

MXn

X
Sticl poroas

Electrozi cu memebran ion

selectiv (EMIS)
EMIS, cum este electrodul de sticl pentru pH, conin o membran care
reacioneaz selectiv cu un singur ion:
Ref (prob)
prob) || [A] prob | Membran | [A] intern || Ref intern
Ecell = E Ref (intern) E Ref (sample) + E membrane + Ejl
Potenialul jonciunii lichidului (Ejl) i potenialul electrodului de referin
sunt constante, astfel c orice modificare de potenial n celul este
atribuit potenialului de membran.
Curentul care traverseaz membrana apare datorit micrii fie a
analitului fie a altui ion prezent n matricea memebranei.

EMIS este construit din:

- Memebran care particip selectiv la schimbul de ioni cu soluia de
analizat, pe faa cu care vine n contact cu soluia:
A+soluie + M+membran

A+memebran + M+soluie

Selectivitatea schimbului ionic depinde de compoziia i structura

memebranei. Numai ionii cu un anumit volum i o anumit sarcin
electric pot participa la schimbul ionic. Schimbul ionic are loc i pe
faa care vine n contact cu soluia de referin intern. La echilibru
exist o concentraie supeficial de ioni pe cele dou fee ale
memebranei. O fa a memebranei va fi ncrcat pozitiv iar o fa
negativ. Potenialul memebranei (Em) depinde de concentraia ionilor
care au participat la schimbul ionic.

Electrod de referin
intern Ag/AgCl

Electrolit de referin
intern

A+

Membran ionselectiv

(-)

Em

(+)
C-, B+

A+

Soluie de analizat

Celula poteniometric cu electrozi memebran ion

selectiv

Electrod de referin
extern Hg/Hg2Cl2
Electrod de referin intern
Ag/AgCl

Celula poteniometric este format dintr-un electrod de referin

extern (calomel) i un electrod indicator (EMIS) scufundai n soluia
de analizat.
Pe feele memebranei EMIS are loc un schimb de ioni cu soluia de
analizat, respectiv soluia de referin intern. Se msoar diferena
de potenial dintre electrodul de referin intern i extern care
depinde de diferena de concentraie a ionilor pe cele dou fee ale
membranei.

Electrodul cu membran de sticl

Memebrana de sticl este

permeabil pentru ionii H+.
Construcie:
Balona de sticl n care se
afl o soluie de referin
intern de HCl 0,1M (pH = 0),
saturat cu AgCl;
Electrod de referin intern
Ag/AgCl, cufundat n soluia de
HCl 0,1M;

In funcie de pH, ionii de hidrogen migreaz spre electrod sau n afara

electrodului.

Determinarea pH-lui cu electrodul de stic

Electrodul de sticl i electrodul de referin se introduc n soluia de
analizat, realiznd o celul poteniometric de forma:

Diferena de potenial dintre cei doi electrozi este convertit n uniti

de pH.

Electrodul de sticl combinat

Acest electrod conine ntr-un
singur cilindru electrodul de
referin i electrodul cu
memebran de sticl

Electrozi ion selectivi cu membran cristalin

Electrodul este bazat pe

un cristal insolubil de Ag2S
sau un amestec de Ag2S i
o alt sare de argint sau o
alt sulfur metalic

Electrozi ion selectivi cu membran lichid

Conine o memebran hidrofobic
care conine un agent organic de
complexare lichid, selectiv.
Se utilizeaz trei tipuri de lichide
organice: schimbtori de cationi,
schimbtori de anioni, i ionofori
neutri.
De exemplu, pentru electrodul Ca
selectiv se utilizeaz o
memebran poroas saturat cu
di(n-decil fosfat).

Reprezentarea schematic a electrodului selectiv pentru Ca2+

Exemple de membrane lichide

Electrozi cu memebrane sensibile pentru gaze

Electrozi cu enzime imobilizate

Exemplu, biosenzorul pentru uree cu
ureaz imobilizat
Uree + ureaz NH4+
NH4+(aq) + H2O (l) H3O+(aq) + NH3 (aq)
Ecell = K - 0.05916 log [urea]

Exemple de biosenzori

Cromatografia
Cromatografia este o metod de analiz care se
bazeaz pe separarea n zone spaiale distincte a
componenilor unui amestec, la trecerea amestecului
printr-un mediu prin care componenii se deplaseaz cu
viteze diferite.
n cromatografie exist dou faze nemiscibile:
Faza staionar = materialul prin care circul proba i
care asigur separarea;
Faza mobil (eluentul) = amestecul lichid sau gazul
care transport proba prin faza staionar.

Clasificarea metodelor cromatografice

1. Dup starea de agregare a celor dou faze:

2. Dup mecanismul de separare metodele

cromatografice pot fi clasificate astfel:
cromatografie de adsorbie;
cromatografie de partiie;
cromatografie de schimb ionic;
cromatografie de excludere molecular;
cromatografie de afinitate.

 Cromatografia de adsorbie - se bazeaz pe adsorbia

difereniat a componenilor unui amestec pe un suport
adsorbant solid (faza staionar). ntre suportul adsorbant i
substanele care se deplaseaz se stabilesc interaciuni
intermoleculare de tipul: dipol-dipol, van der Waals, legturi de
hidrogen.

Componenetul adsorbit puternic (A) se deplaseaz mai greu iar

componenetul adsorbit mai slab (B) se deplaseaz mai repede.

 Cromatografia de partiie - se bazeaz pe coeficienii

de partiie diferii ai componentelor unui amestec n dou
faze nemiscibile sau parial miscibile.

Componenetul cu solubilitate mare n faza staionar (A) se

deplaseaz mai greu iar componenetul cu solubilitate mare n
faza mobil (B) se deplaseaz mai repede.

 Cromatografia de schimb ionic - utilizeaz o

rin schimbtoare de ioni (faza staionar
solid) care conine grupri ionizabile legate
covalent.
Rinile schimbtoare de ioni (schimbtorii de
ioni) sunt substane care au proprietatea de a
schimba un ion propriu cu un alt ion din mediul
lichid cu care aceste substane se gsesc n
contact.
Clasificare:

1. cationii (schimbtori de cationi)

2.anionii (schimbtori de anioni).

Cationiii conin grupri funcionale cu caracter slab acid

sau puternic acid i au proprietatea de a schimba ionul
H+ cu un cation din mediul lichid cu care se afl n
contact.

Anioniii conin n structura lor grupri funcionale cu

caracter slab bazic sau puternic bazic i au proprietatea
de a schimba ionul HO- cu un anion din mediul lichid cu
care se afl n contact.

 Cromatografia de excludere molecular ,

numit i gel-filtrare, utilizeaz ca faz
staionar anumite substane polimerice
(dextran, poliacrilamid) care n contact cu apa
sau cu soluii saline se mbiba formnd geluri de
diferite poroziti.
Sub aciunea fazei mobile (eluentul) moleculele
cu dimensiuni mai mari dect cele ale porilor vor
fi excluse de structura gelului i se vor deplasa
concomitent cu eluentul. Moleculele cu
dimensiuni mici vor penetra gelul ptrunznd n
lichidul din interiorul porilor gelului i astfel
eluia lor prin coloan va fi ncetinit. n acest
mod, eluia componenilor se va face n ordinea
descrescnd a masei moleculare

Cromatografia de afinitate - reprezint o tehnic de

separare a proteinelor, acizilor nucleici, celulelor, pe
baza proprietilor lor de legare specific, prin fore
necovalente, de molecule complementare numite ligand.

Tehnici cromatografice
Cromatografia n faz gazoas
Analiii, aflai n stare de agregare gazoas sau adui n
stare gazoas prin vaporizare, trec printr-o coloan
cromatografic n care se afl faza staionar, sub
aciunea fazei mobile care este un gaz. Separarea
analiilor n timp i spaiu se realizeaz pe baza
adsorbiei sau partiiei diferite acestora n faza
staionar.
Cromatografia n faz gazoas se realizeaz cu un aparat
special numit gaz-cromatograf.

Schema de principiu a unui gaz-cromatograf

Gazul purttor = H2, He sau N2

 Analiza calitativ
Timpul de retenie (tR) reprezint o mrim
caracteristic pentru fiecare analit i este timpul scurs de
la injectarea analitului n injector pn la nregistrarea
vrfului peak-ului de eluie a acestuia.
Se compar timpii de retenie ai componenilor de
analizat cu timpii de retenie ai unor etaloane.
Analiza cantitativ
Se calculeaz aria fiecrui peak prin asimilarea fiecrui
peak cu un triunghi.
Cunoscnd suma ariilor, A, i aria fiecrui peak se
calculeaz compoziia procentual a fiecrui component:
%Cx = A100/Ax

Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)

Aparatur. Instrumentul utilizat se numete HPLC i este
alctuit din: rezervor pentru faza mobil, pomp, injector,
coloan cromatografic i detector.

 Electroforeza = metod fizico-chimic de analiz bazat

pe procesul migrrii particulelor coloidale ncrcate
electric, ntr-un mediu solid sau lichid, sub aciunea unui
cmp electric extern.
Bazele fizice ale electroforezei
La introducerea unei particule coloidale n cmp electric
particula coloidal se va deplasa spre electrodul de
semn contrar cu o for electrostatic F direct
proporional cu sarcina sa (e) i cu intensitatea
curentului electric (E).
F = eE

 Acestei fore de deplasare i se opune o for de

frecare intern (F) proporional cu viteza
particulei (v), vscozitatea mediului () i raza
particulei (r):
F = 6 r v
Egalnd cele dou fore se obine:
eE = 6 r v
=>viteza de migrare a particulei n cmp
electric:
v = eE / 6 r

Particul coloidal
cu sarcin de
suprafa
negativ

Sarcina net a moleculei

Stratul fix

POTENIAL ELECTROCHIMIC

(ioni adsorbii)
POTENIAL ZETTA

Stratul mobil

Suporturi electroforetice
Hrtia de filtru
Membranele de acetat de celuloz
Gelul de agar
Gelul de agaroz
Gelul de amidon
Poliacrilamida

 Analiza i interpretarea
electroforegramelor
Analiza calitativ
Numrul spoturilor obinute n urma
separrii electroforetice i poziia lor
confer informaii referitoare la numrul i
tipul componenilor din proba de analizat.

Exemplu, la electroforeza proteinelor serice

se obin 5 spoturi:
Albumine
+
1- globuline
2- globuline
- globuline
- globuline

Godeul de aplicare a probei

(punctul de start)

 Analiza cantitativ
Analiza cantitativ a electroforegramei se bazeaz pe
principiul legii Lambert Beer.
Se utilizeaz un aparat numit densitometru care
cuantific grafic poziia i concentraia componenilor
separai sub forma unor curbe gaussiene.
Gelurile se plaseaz n aparat i apoi acestea se
deplaseaz lent de-a lungul unui fascicul luminos.
Semnalul obinut de un detector fotoelectric este
nregistrat sub forma unor curbe gaussiene. Numrul
peak-urilor nregistrate corespunde cu numrul
componenilor separai, iar aria fiecrui peak este
proporional cu concentraia.