SC LISA Pagina 1/2
INTRUCŢIUNI DE UTILIZARE A SPECTROFOTOMETRULUI UV/VIS
Cod PI- 02
Denumire EMI / Ap SPECTROFOTOMETRU UV/VIS
Tip PharmaSpec UV- 1700 UV- VISIBLE
SPECTROPHOTOMETER
Producător SHIMADZU
Seria A11024334649
Nr. inventar 7766
Descriere mod de utilizare:
Spectrofotometrul este un instrument capabil să măsoare cu precizie cantitatea de fotoni
(intensitatea luminii) absorbită de trecerea lor printr-o probă (soluție). Astfel se poate determina
indirect și cantitatea de substanță (concentrația). În funcție de spectrul lungimilor de undă pe care
le emite sursa de lumină, spectrofotometria are 2 variante: UV/VIS folosește lungimi de undă între
185- 400 nm (UV) și 400- 750 nm (VIS). IR folosește lungimi de undă cuprinse între 750 nm –
1000 μm. Pentru determinarea cantitativă spectrofotometria UV/VIS este cel mai frecvent folosită,
mai ales în chimia analitică.
Principiul spectrofotometriei UV/VIS se bazează pe legea Lambert- Beer. Această lege prevede
că, cantitatea de lumină absorbită de o soluție este expresia unei funcții exponențiale a
concentrației și a lungimii de undă în raport cu acea soluție.
Calibrarea metodei pentru o anumită substanță implică 2 etape distincte:
1. Se determină maximul de absorbție al substanței respective făcând un scanning a
lungimilor de undă în concordanță cu culoarea acesteia. Dacă substanța este incoloră, se
identifică o reacție de culoare specifică acesteia și se analizează produsul colorat.
2. Se determină relația dintre concentrația substanței luate în analiză și a absorbției. Această
determinare se face la lungimea de undă ce corespunde maximului de absorbție determinat
la etapa 1.
Părțile componente ale spectrofotometrului de absorbție UV- VIS
1. Sursa
emite semnalul (radiația);
semnalul emis trebuie să fie o radiație continuă în domeniul ales;
semnalul trebuie să fie constant.
2. Monocromatorul
scop: separarea radiației policromatice într-una monocormatică;
dispozitiv de tip optic (prisme).
3. Cuvele pentru probă (materiale transparente în domeniul lungimii de undă
utilizate)
pentru UV- se folosesc cuve din cuarț;
pentru domeniul vizibil – se folosesc cuve din sticlă moale sau Pyrex.
4. Detectorii
fotomultiplicatoare, emulsii fotografice termocuple, celule fotoconductive, celule pneumatice
și celule fotoelectrice în funcție de domeniul spectrului;
în domeniul UV- vizibil: fotocelule, celule fotomultiplicatoare, filme fotografice.
SC LISA Pagina 2/2
Mod de lucru:
se pornește aparatul;
se selectează lungimea de undă de la butonul F1- AUTO WL;
pentru confirmare se apasă butonul ENTER;
se introduc cele 2 cuve cu proba martor;
se face AutoZero;
se scoate proba din față și se introduce proba de analizat;
se închide aparatul;
se citește absorbanța după apăsarea butonului START;
Executant Iaborator Șef laborator
Asist. Dr. Ing. Pop Andrei Conf. Dr. Ing. Pandrea Simona
Data: 09.01.2020
