SC LISA Pagina 1/2

INTRUCŢIUNI DE UTILIZARE A SPECTROFOTOMETRULUI UV/VIS

Cod PI- 02

Denumire EMI / Ap SPECTROFOTOMETRU UV/VIS

Tip PharmaSpec UV- 1700 UV- VISIBLE
SPECTROPHOTOMETER
Producător SHIMADZU
Seria A11024334649
Nr. inventar 7766

Descriere mod de utilizare:

Spectrofotometrul este un instrument capabil să măsoare cu precizie cantitatea de fotoni

(intensitatea luminii) absorbită de trecerea lor printr-o probă (soluție). Astfel se poate determina
indirect și cantitatea de substanță (concentrația). În funcție de spectrul lungimilor de undă pe care
le emite sursa de lumină, spectrofotometria are 2 variante: UV/VIS folosește lungimi de undă între
185- 400 nm (UV) și 400- 750 nm (VIS). IR folosește lungimi de undă cuprinse între 750 nm –
1000 μm. Pentru determinarea cantitativă spectrofotometria UV/VIS este cel mai frecvent folosită,
mai ales în chimia analitică.

Principiul spectrofotometriei UV/VIS se bazează pe legea Lambert- Beer. Această lege prevede
că, cantitatea de lumină absorbită de o soluție este expresia unei funcții exponențiale a
concentrației și a lungimii de undă în raport cu acea soluție.
Calibrarea metodei pentru o anumită substanță implică 2 etape distincte:
1. Se determină maximul de absorbție al substanței respective făcând un scanning a
lungimilor de undă în concordanță cu culoarea acesteia. Dacă substanța este incoloră, se
identifică o reacție de culoare specifică acesteia și se analizează produsul colorat.
2. Se determină relația dintre concentrația substanței luate în analiză și a absorbției. Această
determinare se face la lungimea de undă ce corespunde maximului de absorbție determinat
la etapa 1.

Părțile componente ale spectrofotometrului de absorbție UV- VIS

1. Sursa
 emite semnalul (radiația);
 semnalul emis trebuie să fie o radiație continuă în domeniul ales;
 semnalul trebuie să fie constant.

2. Monocromatorul
 scop: separarea radiației policromatice într-una monocormatică;
 dispozitiv de tip optic (prisme).

3. Cuvele pentru probă (materiale transparente în domeniul lungimii de undă

utilizate)
 pentru UV- se folosesc cuve din cuarț;
 pentru domeniul vizibil – se folosesc cuve din sticlă moale sau Pyrex.

4. Detectorii
 fotomultiplicatoare, emulsii fotografice termocuple, celule fotoconductive, celule pneumatice
și celule fotoelectrice în funcție de domeniul spectrului;
 în domeniul UV- vizibil: fotocelule, celule fotomultiplicatoare, filme fotografice.
SC LISA Pagina 2/2

Mod de lucru:
 se pornește aparatul;
 se selectează lungimea de undă de la butonul F1- AUTO WL;
 pentru confirmare se apasă butonul ENTER;
 se introduc cele 2 cuve cu proba martor;
 se face AutoZero;
 se scoate proba din față și se introduce proba de analizat;
 se închide aparatul;
 se citește absorbanța după apăsarea butonului START;

Executant Iaborator Șef laborator

Asist. Dr. Ing. Pop Andrei Conf. Dr. Ing. Pandrea Simona

Data: 09.01.2020