Exemplar:

PROCEDURA DE ÎNCERCARE Pagina x din y (nr de pagini la

DENUMIRE care ne aflăm din câte pagini
are procedura noastră, max
Determinarea conținutului în clorofilă 10, 12)
COD PI- 02 Revizia: 0
Editia: 1

Elaborat Verificat Aprobat

Nume: Conf. Dr. Ing. Conf. Dr. Ing.
Asist. Dr. Ing.
Pandrea Erdei Nicoleta
Pop Andrei
Simona
Funcţia: Executant Șef laborator Manager
Data : 09 aprilie 2019 12 aprilie 2019 15 aprilie 2019
Semnătura:

EXEMPLAR CONTROLAT
EXEMPLAR NECONTROLAT
 PROCEDURA DE ÎNCERCARE Ediţia: 1
LISA DENUMIRE Revizia: 0
Determinarea conținutului în clorofilă Pagina: 2
COD PI- 02 Exemplar nr.

CUPRINS

0 Evidenţa aprobărilor şi reviziilor

1 Scop

2 Domeniu de aplicare

3 Documente de referinţă

4 Terminologie, Abrevieri

5 Măsuri prealabile

6 Descriere procedură

7 Responsabilităţi

8 Înregistrări

9 Anexe2
 Exemplar nr.
PROCEDURA DE ÎNCERCARE
DENUMIRE Pagina: 3
LISA
Determinarea conținutului în clorofilă Ediţia: 1
COD PI- 02 Revizia: 0

EVIDENŢA APROBĂRILOR ŞI REVIZIILOR

Nr. Nr. Nr. Nr. Nr. Nr.

pagină revizie pagină revizie pagină revizie
1 0 6 0 0
2 0 7 0 0
3 0 8 0 0
4 0 0 0
5 0 0 0

Activitatea / Nume, prenume, data şi semnătura

procesul evidenţiat
Revizia /
(Numărul ediţiei
Ediţia Elaborat Verificat Aprobat
sau capitolul /
paginile revizuite)
1. SCOP

1.1 Procedura de încercare stabilește regulile și responsabilitățile. Obiectivul

acestei metode este de a descrie procedura de determinare a
concentrației de clorofilă din țesutul fotosintetic al plantelor. Această
analiză împreună cu măsurarea fluorescenței clorofilei vor fi folosite pentru
a evalua impactul contaminanților asupra plantelor. Concentrația clorofilei
va furniza informații despre potențialul fotosintetic al plantei.

2. DOMENIU DE APLICARE

2.1 Procedura se aplică în LISA Oradea pentru determinarea conținutului în

clorofilă din pătrunjel (STAS 3679/74). Metoda va fi utilizată în timpul
sezonului de creștere al plantelor sau în orice moment pe parcursul anului
în aplicații de laborator.

3. DOCUMENTE DE REFERINȚĂ

3.1 SR EN ISO/CEI 17025:2018- Cerințe generale pentru competența

laboratoarelor de încercări și etalonări.
3.2 SR EN ISO/CEI 9000:2001- Sisteme de management al calității. Principii
fundamentale și vocabular.
3.3 Ghid ISO/CEI – 2:1996- Controlul calității produselor vegetale- îndrumător
de lucrări practice Andruța Mureșan, Sevastița Muste, Cluj- Napoca, 2018.
3.4 ISO 10519:1997(E) – Determinarea conținutului în clorofilă
3.5 Norme generale de protecția muncii, Ministerul muncii și Solidarității
Sociale, Ministerul Sănătății și Familiei București, 2002
3.6 Norme departamentale de Protecția Muncii, M.I.Ch, 1987.

4. TERMINOLOGIE ȘI ABREVIERI

4.1 Terminologie
4.1.1 Prelevare- acțiune ce presupune luarea unei probe reprezentative
cu scopul examinării diferitelor caracterisitici definite.
4.1.2 Eșantion- parte (conținut) prelevată dintr-o masă definită, pentru
examinarea diferitelor caracterisitci.
4.1.3 Încercare- operație tehnică de determinare a unei sau a mai multor
caracteristici ale unui produs/ proces, conform cu o procedură specficată.
4.1.4 Probă martor- este folosită pentru a aduce instrumentul de
măsurare la 0 după fiecare resetare a lungimii de undă.
4.1.5 Diluare- micșorare (atenuare) a concentrației unei soluții.
4.1.6 Fluorescență- proprietatea pe care o au unele substanțe de a emite
lumina cât timp sunt iradiate cu radiații luminoase sau UV.
4.1.7 Clorofilă- pigment din părțile verzi ale plantelor, cu rol fundamental
în fotosinteză.
4.1.8 Spectrofotometru- instrument optic care servește la obținerea
spectrelor de emisie sau de absorbție ale substanțelor, cu ajutorul căreia
se determină atât lungimile de undă ale liniilor spectrale, cât și intensitățile
acestor linii prin comparare cu liniile unui spectru cunoscut.
 4.1.9 Sticlă borosilicată- este un tip de sticlă confecționată din: trioxid de
bor și siliciu, care permite un coeficient foarte mic de expansiune termică
(nu crapă sub schimbări extreme de temperatură).
4.2.0 Acetonă- lichid incolor, volatil și inflamabil folosit ca solvent.

4.2 Abrevieri
4.2.1 LISA- Laboratorul de Încercări pentru Siguranța Alimentelor

5. ACȚIUNI ȘI/ SAU MĂSURI PREVENTIVE

Nu este cazul.

6. DESCRIERE PROCEDURĂ

6.1 Determinarea conținutului în clorofilă din pătrunjel

6.1.1 Principiul metodei

Obiectivul acestei metode este de a descrie procedura de determinare a
concentrației de clorofilă din țesutul fotosintetic al plantelor. Această analiză
împreună cu măsurarea fluorescenței clorofilei vor fi folosite pentru a evalua
impactul contaminanților asupra plantelor. Concentrația clorofilei va furniza
informații despre potențialul fotosintetic al plantei. Metoda va fi utilizată în
timpul sezonului de creștere al plantelor sau în orice moment pe parcursul
anului în aplicații de laborator.

6.1.2 Prelevarea probelor/ pregătirea probei

Probele vor fi ambalate în folie de aluminiu imediat după recoltare. Eșantionul
învelit în folie va fi apoi plasat într-o pungă de plastic resigilabilă și ținută în
întuneric. Probele trebuie congelate pentru a preveni degradarea clorofilei.
Probele congelate nu pot fi ținute mai mult de 7 zile până sunt supuse
analizei. Întunericul trebuie menținut în timpul perioadei de depozitare și
analizele trebuie efectuate în lumină slabă pentru a evita degradarea clorofilei.
De asemenea, pentru a evita degradarea, procedurile analitice trebuie
efectuate cu recipiente opace sau recipiente acoperite cu folie de aluminiu
atunci când este posibil. Dacă este necesar, extractele nediluate pot fi ținute la
-4oC sau mai puțin, timp de 7 zile în întuneric total în tuburile de centrifugă din
sticlă borosilicată cu dop din cauciuc, înfășurate cu parafilm pentru a menține
etanșarea extractelor.

6.1.3 Specificitate/ Interferențe

Metoda se pretează pentru determinarea conținutului în clorofilă pentru
pătrunjel.

6.1.4 Aparatură și material

Echipamente de laborator în special: foarfece/ cuțit, folie de aluminiu, pungi de
plastic resigilabile, omogenizator (mojar cu pistil), centrifugă de masă, tuburi
de centrifugă din sticlă borosilicată, pipete de 10 mL, spatule, cilindri gradați
de 10 mL, pipete Pasteur, spectrofotometru, cuve.
 6.1.5 Reactivi
- Soluție de hidroxid de amoniu (NH 4OH); se dizolvă 0,35 g NH4OH în 100
mL apă distilată pentru a forma o soluție de NH 4OH 0,1 N;
- Acetonă de 80%, soluție apoasă, se amestecă apă distilată și acetonă în
proporție de 2:8 (v:v) (apă distilată: acetonă);
- Apă distilată;
Se amestecă soluția de NH4OH 0,1 N cu acetonă într-un raport de 1:9 (v:v),
(NH4OH: acetonă)

6.1.6 Mod de lucru

O suprafață de cel puțin 1000 de milimetri pătrați (mm 2) va fi tăiată din fiecare
probă de țesut utilizând un șablon. Se taie în bucăți mici folosind foarfece și se
plasează în tubul de omogenizare peste care se adaugă 2 mL de soluție de
extracție utilizând o pipetă de 5 mL. Materialul va fi măcinat cu grijă cu un ultra
turax sau în mojar. După macinare timp de aproximativ 30 de secunde, soluția
de extracție va fi utilizată pentru spălarea oricărui material de probă aderent la
omogenizator. Tubul este apoi plasat pe gheață sau în frigider, în întuneric
timp de 2 ore pentru a se extrage clorofila. Extractul va fi apoi turnat cu grijă
într-un tub de centrifugare sau este filtrat. Atunci când un omogenizator de
țesut nu este disponibil, probele pot fi măcinate manual, fie prin adăugarea de
nisip de cuarț spălat cu acid sau mecanic, folosind un mixer de mare viteză. În
ambele cazuri trebuie să se asigure că, clorofila este extrasă complet din
țesut. Extractele, acum în tuburile de centrifugare, sunt centrifugate timp de 20
de minute la mare viteză. Soluția supernatant este decantată într-un cilindru
gradat de 10 mL și volumul este adus la 10 mL cu acetonă apoasă 80%. În
acest moment, supernatantul poate fi păstrat la -10 oC dacă este necesar la
întuneric și în frigider.
Diluare și spectrofotometrie
Diluarea este necesară dacă citirea inițială este în afara intervalului liniar de
detectare a instrumentului. Supernatantul se diluează prin adăugarea de
acetonă apoasă 80%, după cum este necesar, pentru a da o citire în intervalul
de la 0,2 la 0,8 unități de absorbție la lungimi de undă de 645 nm și 663 nm.
Proba martor este de acetonă 80% și este folosită pentru a aduce
instrumentul de măsurare la zero după fiecare resetare a lungimii de undă.
Toate probele analizate se vor citi la lungimea de undă de 645 nm, apoi se
citesc din nou după resetarea lungimii de undă la 663 nm. Diluțiile trebuie să
fie realizate și înregistrate cu precizie pentru a calcula concentrația clorofilei
din întreg țesutul supus analizei. Calculele pentru concentrațiile de clorofilă se
fac după ce absorbanțele sunt citite la ambele lungimi de undă.

6.1.7 Exprimarea rezultatelor

Se calculează concentrația conținutului de clorofilă din proba exprimată în
mg/mL atât pentru clorofila a, clorofila b cât și pentru clorofila totală.
Clorofila a (mg/mL)= 12,7 A663- 2,69 A645
Clorofila b (mg/mL)= 22,9 A645- 4,68 A663
Clorofila c (mg/mL)= clorofila a + clorofila b
Unde:
A645= absorbanța probei la lungimea de undă de 645 nm
A663= absorbanța probei la lungimea de undă de 663 nm
 Clorofila totală (mg) din proba analizată= clorofila totală (mg/mL) x volumul
final (mL)
Clorofila a (mg) din proba analizată= clorofila a (mg/mL) x volumul final (mL)
Clorofila b (mg) din proba analizată= clorofila b (mg/mL) x volumul final (mL)

Pentru a exprima cantitatea de clorofilă pe baza suprafeței, se împarte

cantitatea de clorofilă la aria (mm2) țesutului analizat.
Aria discului= 3,1416 r2
Se calculează media a 2 determinări, rezultatul se exprimă cu 2 zecimale.

6.1.8 Repetabilitate
Diferența dintre rezultatele a 2 determinări paralele, efectuate de același
analist, pe probe provenite din același eșantion, în aceleași condiții de lucru,
nu trebuie să fie mai mare de 0,25% (m/m).

7. RESPONSABILITĂȚI

7.1 Manager
7.1.1 Coordonarea eficientă a tuturor activităților laboratorului;
7.1.2 Asigurarea comunicării cu partenerii și respectarea obligațiilor
contractuale;
7.1.3 Administrarea bugetului;
7.1.4 Valorificarea și dezvoltarea oportunităților de dezvoltare ale firmei.

7.2 Șef de laborator

7.2.1 Răspunde de asigurarea dotării corespunzătoare a laboratorului cu
materiale, echipamente și reactivi;
7.2.2 Asigură instruirea personalului executant privind prezenta procedură
cod PI-02;
7.2.3 Verifică păstrarea în condiții corespunzătoare și manipularea
corectă a echipamentelor folosite;
7.2.4 Verifică calculele aferente încercărilor, caietele și registrele care
conțin înregistrări/ date privind încercările;
7.2.5 Repartizează probele pe executanți;
7.2.6 Verifică calculele aferente încercărilor în Caietele de lucru/ registru;
7.2.7 Informează clientul intern privind obținerea de rezultate
necorespunzătoare înainte de emiterea Raportului de Încercări.
7.3 Executant
7.3.1 Își însușesc prezenta procedură și instrucțiunile de utilizare și le
respectă întocmai;
7.3.2 Pregătesc cele necesare determinării conținutului în clorofilă din
pătrunjel;
7.3.3 Primesc probele, le verifică și execută încercările;
7.3.4 Verifică dacă efectuează încercările corect;
7.3.5 Execută încercările conform;
7.3.6 Efectuează calculele pentru exprimarea rezultatului încercării și
notează rezultatele măsurătorilor în Caietul de lucru și în registru;
7.3.7 Efectuează încercările de asigurare a calității rezultatelor;
 7.3.8 Informează asupra problemelor ivite în timpul determinării
conținutului în clorofilă din pătrunjel.

8. ÎNREGISTRĂRI

8.1 Formulare
- Eticheta de prelevare probe;
- Proces Verbal de recoltare a probelor pentru examenul de laborator;
- Raport de Neconformitate;
- Raport de Încercare;
- Amendament la Raportul de Încercare;

8.2 Dosare/ caiete

- Corespondență comenzi/ oferte încercări;
- Corespondență comenzi/ oferte de contracte;
- Caiet de lucru;
- Estimare incertitudine.

8.3 Registre
- Evidența Încercărilor din LISA;
- Evidență eliminare probe/ deșeuri (infecte).

9. ANEXE
Nu e cazul.