PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:

Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

DETERMINAREA SUBSTANŢELOR PROTEICE TOTALE

COD: PSL - 04

Documente de referinţă:
 Standard de stat - STAS 6514-75
 Standard de stat - STAS 3104-80
 IS - 5960 (Part 1) 1996 / ISO 937-1978 Meat and Meat Products - determination
of Nitrogen Content
 A.O.A.C 17th edition, 2000, Official Method 928.08 Nitrogen in Meat
(Alternative II)
 SR EN ISO 17025:2005 si SR EN ISO 9001:2001
Descriere revizie:-
Elaborat Avizat Aprobat
Nume: Elpida Paltenea – Şef Nume: Marilena Talpeş –
Nume: Neculai Patriche - Director
Laborator Secretar ştiinţific
Semnătura Semnătura Semnătura

1
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

INDICATORUL REVIZIILOR ŞI APROBĂRILOR

Nr. Ediţia/ Data Capitolul Nume, prenume, semnătură

Crt. Revizia aplicării Subcapitolul
Elaborat Verificat Aprobat
Pagina
(modificat, adăugat)
1. 1/0 Şef Secretar Director
Laborator ştiinţific

INDICATORUL RETRAGERILOR

Nr. Compartiment Persoana Data şi Data şi Obs.

copie primitor semnătura semnătura
de primire de retragere

2
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

CUPRINS

Nr. Capitolul Pagina

Crt.
Pagina de gardă
Indicatorul aprobărilor şi reviziilor
Indicatorul retragerilor
Cuprins
Cap.1
1.1. Scop
1.2. Domeniul de aplicare
Cap.2
2.1. Documente de referinţă
2.2. Definiţii şi abrevieri
2.2.1. Definiţii
2.2.2. Abrevieri
Cap.3
3.1. Descrierea procedurii
3.2. Materiale necesare
3.2.1. Aparatură
3.2.2. Reactivi
3.2.3. Sticlărie
3.2.4. Alte materiale
3.3. Analiza cererii
3.4. Verificarea şi înregistrarea probelor
3.5. Protecţia personalului
3.5.1. Protecţia mijloacelor de încercare şi/sau măsurare
3.6. Verificarea, înregistrarea şi pregătirea probelor pentru lucru
3.7. Modul de lucru
3.8. Calcul
3.9. Eliminarea deşeurilor
Cap.4
4.1. Responsabilităţi
4.2. Limite de autoritate
Cap.5 Înregistrări
Cap.6 Anexe

3
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

CAPITOLUL 1

1.1.Scop

De a determina conţinutul de substanţe proteice totale din peşte, produse de peşte şi icre
prin determinarea azotului total după metoda Kjeldahl.

1.2.Domeniul de aplicare

Se aplică pentru determinarea substanţelor proteice totale din peşte, produse de peşte şi
icre, în Laboratorul de încercări pentru calitatea şi siguranţa produselor din acvacultură şi
pescuit, din cadrul I.C.D.E.A.P.A.Galaţi

CAPITOLUL 2

2.1.Documente de referinţă

Manualul calităţii MC-L-01, Ed.1/07.07.2007, Rev.0/07.07.2007;

Standard de stat - STAS 6514-75
Standard de stat - STAS 3104-80
IS - 5960 (Part 1) 1996 / ISO 937-1978 Meat and Meat Products - determination of Nitrogen
Content
A.O.A.C 17th edition, 2000, Official Method 928.08 Nitrogen in Meat (Alternative II)
SR EN ISO/CEI 17025:2005 - Cerinţe generale pentru competenţa laboratoarelor de încercări şi
etalonări;
PGL - 02 - Procedură generală, analiza cererilor de ofertă, comenzilor şi contractelor;
PGL - 02 - Procedură generală de lucru, analiza cererilor, comenzilor şi contractelor;
PGL – 03 - Aprovizionare
PO – 01 - Procedura operaţională. Mentenanţa echipamentelor
PO – 02 – Procedură operaţională. Controlul DMM – urilor
PO – 03 - Procedură operaţională. Competenţă, conştientizare, instruire
MCL – 01 subcapitolul 3.3. Condiţii de acomodare şi mediu
MCL – 01 subcapitolul 3.4. Metode de încercare
MCL – 01 subcapitolul 3.6. Trasabilitatea măsurării
MCL – 01 subcapitolul 3.8. Manipularea obiectelor de încercat
MCL – 01 subcapitolul 3.9. Asigurarea calităţii rezultatelor
MCL – 01 subcapitolul 3.10. Raportarea rezultatelor
PGL – 14 – Estimarea incertitudinii de măsurare
PGL – 15 – Managementul probelor

2.2.Definiţii şi abrevieri
2.2.1 Definiţii

4
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

Conţinutul de proteine: conţinutul de azot, aşa cum a fost determinat prin metoda specificată,
şi apoi înmulţit cu 6,25 şi exprimat ca procent raportat la masă.
2.2.2.Abrevieri
MCL - Manualul calităţii laboratorului
PGL - Procedură generală de lucru
PSL - Procedura specifică a laboratorului
PO - Procedură operaţională
BA - Buletin de analiză

CAPITOLUL 3

3.1.Descrierea procedurii

Azotul total din produsul de analizat este transformat în ioni de amoniu, sub acţiunea catalitică a
sulfatului de cupru în mediu de acid sulfuric şi sulfat de potasiu. După alcalinizare, amoniacul
este antrenat cu vapori de apă şi captat într-o soluţie de acid boric din care este dozat prin titrare
cu acid clorhidric

3.2. Materiale necesare

3.2.1. Aparatură
- Aparat de distilare Parnas Wagner, cu capacitate de 500cm3, sau alt aparat de distilare
echivalent (Vapodest – Gerhardt).
- Baterie de mineralizare
- Baloane Kjeldahl de 200...250 cm3

3.2.2. Reactivi
- Sulfat de cupru (CuSO4 x 5H2O).
- Sulfat de potasiu anhidru.
- Acid sulfuric cu densitatea d=1,84
- Hidroxid de sodiu soluţie 33%
- Acid boric, soluţie: 40g acid boric se dizolvă la cald şi se diluează cu apă pînă la
1000 cm3
- Acid clorhidric 0,1n
- Soluţie indicator Tashiro preparată astfel:
Soluţia A – 0,1g roşu de metil se dizolvă la cald pe baie de apă în 100cm3 alcool etilic
95% vol.
Soluţia B – 4cm3 soluţie apoasă de albastru de metil 1% se aduc la 100cm3 cu alcool etilic
95% vol.
-Indicatorul se prepară amestecînd volume egale din soluţia A şi B ; punctul de viraje este
la pH 5,5.
OBSERVAŢIE: - Culoarea soluţiei indicator la punctul de viraj trebuie să fie cenuşie. Aceasta se
verifică astfel: în 30cm3 apă în care sau adăugat în prealabil 6...8 picături de
amestec indicator se adaugă picătură cu picătură acid clorhidric 0,001n
(preparat în momentul folosirii). Virajul de la verde la cenuşiu trebuie să fie
brusc la adausul a 1sau 2 picături de acid clorhidric, 1 picătură în plus

5
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

colorînd soluţia din cenuşiu în violet liliachiu. În caz contrar, soluţia se

ajustează prin mărirea fie a cantităţii de albastru de metilen fie a celei de roşu
de metil.
3.2.3. Alte materiale
- Hîrtia pergaminată ( 9 x 6 cm).

3.3. Analiza cererii

Modul de analiză, acceptare şi înregistrare a cererilor de încercare se face conform PGL – 02

Analiza cererilor, comenzilor şi contractelor şi MCL – 01 subcapitolul 2.4.
Comanda se înregistrează în Registrul de primire – predare probe, cod Rg 1 – MCL – 01.

3.4.Verificarea, înregistrarea probelor

Probele şi documentele însoţitoare se verifică de Şeful de laborator sau locţiitorul acestuia,

urmărind starea probelor primite şi conformitatea acestora cu documentele însoţitoare;
Recepţia şi verificarea probelor se face conform MCL – 01 subcapitolul 3.8 şi PGL – 15 -
Managementul probelor.

3.5.Protecţia personalului

Măsurile impuse pe timpul programului de lucru în laborator sunt conforme cu Normele de

protecţie a muncii specifice, prezentate periodic de către Responsabilul Compartimentului de
Protecţie a Muncii cu ocazia instruirilor planificate prin Programul Anual de instruiri.
Purtarea halatului de protecţie (alb din bumbac) este obligatorie în laborator.
Verificarea aplicării Normelor de protecţie a muncii se face de către Şeful laboratorului şi
de către Responsabilul cu protecţia muncii pe laborator.

3.5.1.Protecţia mijloacelor de încercare şi/sau măsurare

Mijloacele de măsurare nu se vor utiliza dacă:
- perioada de valabilitate metrologică este depăşită;
- nu funcţionează la parametrii corespunzători;
- nu se încadrează în clasa de precizie impusă de standardul de lucru.

3.6. Verificarea, înregistrarea şi pregătirea probelor pentru lucru

Probele şi documentele însoţitoare sunt preluate de responsabilul de încercare, sau de

personalul executant de încercare sub supravegherea Şefului de laborator, urmărind starea
probelor primite şi conformitatea acestora cu documentele însoţitoare.
Masa probei necesară pentru analiză este de cel puţin 500 g.

Pregătirea probelor pentru analiză se face conform STAS 3104-80 : Pregătirea probelor.
Proba de semiconserve, preparate culinare industriale şi conserve de peşte pentru analiză
se formează din conţinutul tuturor ambalajelor care constituie proba de laborator.
Părţile componente lichide ale produsului (sos, ulei maioneză etc.) se separă printr-o
deschidere făcută în capacul ambalajului şi se culeg în mojarul de porţelan după o prealabilă
încălzire pe baia de apă pînă la lichefierea gelurilor.

6
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

Dacă se cere şi determinarea conţinutului de legume şi condimente, acestea se separă

verificînd prin cîntăriri proporţiile. Apoi se trec prin maşina de tocat.
În caz contrar legumele, condimentele şi conţinutul se trec direct în maşina de tocat.
Peştele se mărunţeşte şi se omogenizează prin trecerea de două ori prin maşina de tocat cu
sita cu latura ochiului de 2 mm.
Se amestecă bine cu partea lichidă tot ce s-a trecut prin maşina de tocat (peşte, legume şi
condimente).
Din aceasta se ia cantitatea de 250...300g, care se introduce într-un recipient bine închis şi
se ţine la temperatura de maximum 8ºC pînă la efectuarea analizelor, dar nu mai mult de 4 ore.
Pregătirea probelor de icre (icrele moi de sturioni, precum şi orice fel de icre de peşte de
apă dulce sau oceanic) se triturează în mojar pînă la obţinerea unei mase omogene.
Icrele conservate în ovare se trec întîi de două ori prin maşina de tocat pentru distrugerea
membranelor şi apoi se triturează în mojar pînă la obţinerea unei mase omogene .
Icrele tescuite nu se mărunţesc; proba pentru analiză se ia din diferite locuri ale probei de
laborator.

3.7. Modul de lucru

Pe o bucată de hârtie pergaminată se cîntăresc cu precizie de 0,001g, circa 2g în cazul

probelor care au umiditatea de min. 30% sau circa 1g – în cazul probelor care au umiditatea
maxim 30% - şi se introduc în balonul Kjeldhal împreună cu hârtia. Se adaugă 15g sulfat de
potasiu, 0,5...1g sulfat de cupru şi 25 cm3 acid sulfuric.
Adăugarea acidului sulfuric se face în cantităţi mici, spălând gâtul balonului pentru a
antrena eventualele urme de probă sau de catalizator.
În cazul probelor cu conţinut ridicat de grăsime se adaugă în plus 10...15 cm 3 acid sulfuric.
De asemenea dacă s-a cântărit o cantitate mai mare de 2g probă, pentru fiecare gram în plus, se
adaugă cîte 10cm3 acid sulfuric.
Se acoperă balonul Kjeldahl cu o pâlnie (eventual tip pară) şi se aşează în poziţie înclinată
(la un unghi de aproximativ 40ºC) în bateria de mineralizare sau la flacăra unui bec de gaz într-o
nişă.
La început balonul se încălzeşte uşor şi se agită periodic pînă la terminarea spumării şi
dezintegrării conţinutului, apoi se încălzeşte puternic şi se fierbe pînă când lichidul devine
complet limpede (fără particule negre) şi de culoare uşor verde fără nuanţă brună. Din acest
moment se continuă firberea 90 minute, fără a se depăşi acest timp.
Se vor evita pierderile de acid sulfuric datorită supraîncălzirii, avînd grijă ca vaporii de
condensare să nu depăşească gîtul balonului, deoarece prin aceasta se produc pierderi de azot.
Se lasă balonul să se răcească şi se spală cantitativ pâlnia de acoperire şi gâtul balonului cu
circa 50cm3 apă. Conţinutul balonului se agită prin rotire până la omogenizare, soluţia obţinută
trecându-se cantitativ într-un balon cotat de 250 cm3 prin spălări repetate cu apă.
După răcire la temperatura camerei se aduce la semn cu apă distilată.
Din soluţia din balonul cotat se măsoară cu pipeta 25cm 3 şi se introduc în aparatul de
distilare.
Se măsoară cu un cilindru gradat 25cm3 soluţie de acid boric, se introduc într-un vas
Erlenmayer de 300cm3, în care se mai adaugă 4...5 picături de indicator Tashiro. Se cufundă
alonja refrigerentului 3...4 mm în soluţia din vasul Erlenmayer.
Se spală pâlnia aparatului cu o cantitate mică de apă şi se adaugă 40 cm 3 soluţie de hidroxid
de sodiu. Este necesar ca în timpul adăugării soluţiei de hidroxid de sodiu să se păstreze în pâlnie

7
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

un strat continuu de lichid, pentru a preântâmpina pierderile de amoniac. La sfârşit pâlnia se

clăteşte cu puţină apă, iar după închiderea robinetului pâlniei se mai lasă în pâlnie o cantitate
mică de apă.
Se începe distilarea barbotându-se vapori de apă prin lichidul din balonul de distilare până
când în vasul Erlenmayer se colectează circa 200cm3 distilat (distilatul se obţine în circa 30
minute de la începerea distilării)
La sfârşitul distilării se scoate capătul refrigerentului din lichid şi se continuă distilarea încă
5 minute pentru spălarea interioară a acestuia.
Se opreşte distilarea şi se spală pereţii vasului Erlenmayer şi capătul refrigerentului cu
circa 15...20 cm3 apă care se colectează în vasul Erlenmayer.
Sfârşitul distilării se verifică cu o hârtie roşie de turnesol, a cărei culoare nu trebuie să se
modifice în contact cu o picătură de distilat. În caz contrar se repetă distilarea cu o nouă cantitate
de soluţie, colectîndu-se o cantitate mai mare de distilat şi respectîdu-se condiţiile de mai sus.
Distilatul colectat se titrează cu acid clorhidric pînă la virajul culorii indicatorului de la
verde deschis la cenuşiu cu o nuanţă albăstruie.
Se efectuează în paralel două determinări din aceeaşi probă pentru analiză.
Se efectuează şi o determinare martor, în aceleaşi condiţii, folosind reactivii respectivi
inclusiv hîrtia pergaminată.
Determinarea martor este necesară în special atunci cînd se schimbă reactivii folosiţi.

3.8. Calcul

Conţinutul de substanţe proteice totale se exprimă în procente şi se calculează cu formula:

% Substanţe proteice totale = x100

în care:
0,0014 – cantitatea de azot în g, corespunzătoare la 1cm3 acid clorhidric 0,1n.
6,25 - cantitatea de substanţe proteice, în g, corespunzătoare la 1g azot.
V1 - volumul de acid clorhidric 0,1n folosit pentru titrarea distilatului, în cm3.
V2 - volumul de acid clorhidric 0,1n folosit pentru titrare, la determinarea martor, în
3
cm ,
V - volumul total al soluţiei obţinute după aducerea probei mineralizate la balon cotat,
3
în cm ,
V0 - volumul de soluţie luat pentru distilare, în cm3.
m - masa probei luată pentru determinare, în g.

Ca rezultat se ia media aritmetică a celor două determinări efectuate în paralel, dacă sunt
îndeplinite condiţiile de repetabilitate
Diferenţa rezultatelor a două determinări paralele efectuate de acelaşi operator în cadrul
aceluiaşi laborator, cu acelaşi aparat, nu trebuie să depăşească 0,2 g substanţe proteice pentru
100g probă.

3.9. Eliminarea deşeurilor

8
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

Resturile de probe rezultate după expirarea perioadei de păstrare în laborator şi

materialele consumabile uzate sunt colectate în saci impermeabili. Reziduurile chimice rezultate
în urma efectuării analizelor sunt colectate în recipienţi de sticlă. Acestea, împreună cu deşeurile
solide sunt predate responsabilului cu activitatea de mediu din ICDEAPA conform
subsubcapitolului 3.3.2 pct. f) din MCL – 01. În acest scop se efectuează şi se păstrează
înregistrări în Fişa de eliminare a deşeurilor laboratorului - formular Cod FED – MCL – 01.

CAPITOLUL 4

4.1.Responsabilităţi
Directorul aprobă BA
Secretarul Ştiinţific vizează datele prezentate în B.A
• Şeful de Laborator:
– acceptă comanda
- nominalizează responsabilul de analiză
- validează şi semnează buletinul de analiză
• Responsabilul de încercare/analiză
– înregistrează proba în registrul de primire – predare probe
- supervizează execuţia încercării
- răspunde de corectitudinea execuţiei încercării
- verifică funcţionarea mijloacelor de măsurare şi/sau încercare
- pune la dispoziţia executanţilor procedura specifică
- validează execuţia încercării
- confirmă rezultatul prin semnătură.
• Executantul de încercare:
- înregistrează proba în fişa de lucru
- condiţionează şi verifică starea sticlăriei utilizate în încercare;
- execută sub supravegherea specialistului operaţia de pregătire a probei conform
procedurii specifice
- comunică responsabilului de încercare orice problemă apărută în timpul operaţiilor
efectuate.

4.2.Limitele de autoritate

Pentru executarea în bune condiţii a PS - 04 sunt prezentate limitele de autoritate:

- Director
- Secretar Ştiinţific
- Şef Laborator
- Responsabil analiză/încercare
- Executant
CAPITOLUL 5

Înregistrări
Înregistrarea datelor se face în:
- Registrul de primire – predare probe
- Registrul de analize probe

9
 PROCEDURĂ SPECIFICĂ DE LABORATOR Exemplar:
Ediţia: 01
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR Revizia: 0
PROTEICE TOTALE Data: 07.07.2007
COD: PSL - 04
Laborator de încercări pentru
calitatea şi siguranţa produselor
din acvacultură şi pescuit

- Buletinul de analiză
- Fişa de eliminare a deşeurilor din laborator
- Fişa de înregistrare a temperaturii mediului ambiant/frigider/congelator
- Fişă de lucru
- Caiet de evidenţă reagenţi
CAPITOLUL 6
Anexe
Anexa 1. Fişă de lucru Cod: FL 01– PSL 04
Anexa 2. Caiet de evidenţă reagenţi Cod: C - 01

10