Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 1/10 Revizia: 0 Editia: 1

LABORATOR ISIH

Elaborat Nume: Funcia: Data : Semntura: Toth Alexandra executant 04.04.2012

Verificat ef laborator

Aprobat

Rector

EXEMPLAR CONTROLAT

EXEMPLAR NECONTROLAT

Acest document este proprietatea laboratorului ISIH. Copierea, difuzarea sau utilizarea lui, chiar parial, n exteriorul laboratorului ISIH este interzis, dac nu exist acordul conducerii.

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 2/10 Revizia: 0 Editia: 1

CUPRINS

0 Evidena aprobrilor i reviziilor ........................................................................................3 1. Scop .......................................................................................................................................4 2. Domeniu de aplicare ..........................................................................................................4 3. Documente de referin .....................................................................................................4 4. Terminologie, Abrevieri ....................................................................................4 4.1. Terminologie ..........................................................................................................4 4.2. Abrevieri .................................................................................................................5 5. Aciuni i / sau Msuri preventive .........................................................................................6 6. Descriere procedur ...........................................................................................................6 7. Responsabiliti ...............................................................................................................8 8. nregistrari .......................................................................................................................10

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 3/10 Revizia: 0 Editia: 1

0. EVIDENA APROBRILOR I REVIZIILOR

Nr. pagin 1 2 3 4 5

Nr. revizie 0 0 0 0 0

Nr. pagin 6 7 8 9 10

Nr. revizie 0 0 0 0 0

Nr. pagin 11 12 13 14 15

Nr. revizie 0 0 0 0 0

Activitatea / Revizia / Ediia procesul evideniat (Numrul ediiei sau capitolul / paginile revizuite) Procedur de R 0/ ED 1 ncercare

Nume, prenume, data i semntura

Elaborat

Verificat

Aprobat

Toth Alexandra 04.05.2012

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 4/10 Revizia: 0 Editia: 1

1. SCOP
Prezenta procedur stabilete modul n care se efectueaz determinarea coninutul de nitrozamine din carne, n laboratorul ISIH.

2. DOMENIUL DE APLICARE
Procedura de ncercare se aplic pentru matricea de tip carne pentru a determina coninutului de nitrozamine prin metoda HPLC Shimatzu n laboratorul ISIH

. 3. DOCUMENTE DE REFERINTA 1. SR EN 17025 : 2005 Cerine generale pentru competena laboratoarelor de ncercri i etalonri; 2. SR EN ISO 9001 : 2008, Sisteme de management al calitii. Cerine; 3. Directiva 95/2/CE a Parlamentului European i a Consiliului din 20 februarie 1995 privind aditivii alimentari, alii dect coloranii i ndulcitorii; 4..

4. TERMINOLOGIE, ABREVIERI

4.1. TERMINOLOGIE Contaminant orice substan care nu se adaug n mod intenionat n alimente, prezena n acestea, ca rezultat al produciei (inclusiv activiti privind exploataiile agricole, zootehnice i medicamente veterinare), fabricrii, procesrii, preparrii, tratamentelor, mpachetrii, ambalrii, transportului sau depozitrii sau ca rezultat al contaminrii mediului.

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 5/10 Revizia: 0 Editia: 1 Materiile strine, cum ar fi fragmente de insecte, pr de animale, etc. nu sunt incluse n aceast definiie. Ediie totalitatea exemplarelor unei opere tiprite prin folosirea aceluiai za tipografic. Procedur descrierea operaiilor care trebuie efectuate, a precauiilor, care trebuie luate i a msurilor care sunt direct sau indirect legate de efectuare a unor anumite activiti. Revizie form de control (ntreprins de obicei de organe speciale de control) care const n revederea sau reverificarea documentelor de eviden privitoare la operaii (contabile) care au avut loc anterior. Prob parte ideal reprezentativ, prelevat dintr-o mas definit, intermitent sau continuu, pentru a examina diverse caracteristici. ncercare operaie tehnica de determinare a uneia sau a mai multor caracteristici ale unui produs, proces sau serviciu dat, n conformitate cu o procedura specificat. Repetabilitate diferena ntre rezultatele a dou determinri efectuate n paralel din aceeai prob, de acelai operator, n cadrul aceluiai laborator. Reproductibilitate - diferena dintre rezultatele a dou determinri efectuate de analiti diferii, pe probe provenite din acelai eantion, n laboratoare diferite, cu acelai tip de aparatur.

4.2. ABREVIERI PI procedura de ncercare ISIH integrarea sistemului ISO cu HACCP STAS / SR / SR ISO / SR EN - Standarde naionale ED Ediie R- Raport de ncercri
RI-Registru intrari RPM-Responsabil Protecia Muncii

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 6/10 Revizia: 0 Editia: 1 R Revizie PSI-Protectia muncii Nc- Neconformitate PVRec- Proces Verbal de recoltare a probelor L-Sef laborator ISO Organizaia Internaional de Standardizare ISO/EN - Standarde internaionale, europene sau din diferite ri ISIH-Integrarea sistemului ISO 17025 cu HACCP USAMV-Universitatea de Stiinte agricole si Medicina Veterinara

5. ACIUNI I / SAU MSURI PREVENTIVE

Nu este cazul.

6. DESCRIERE PROCEDUR
Determinarea nitrozaminelor se realizeaz n mai multe etape: separarea nitrozaminelor din probe, trasarea curbelor de calibrare, determinarea nitrozaminelor. Separarea nitrozaminelor Cte 10 g din fiecare prob mrunit a fost tratat cu 50 ml de tampon fosfat-citrat de pH=6,5 i 0,175 g acid ascorbic i omogenizat la blender. Amestecul s-a adus cantitativ n pahar Erlenmeyer, s-a adaugat 150 ml tampon fosfat-citrat i 0,700 g acid ascorbic, s-a omogenizat timp de dou ore , apoi s-a filtrat pe hrtie de filtru cantitativ. Purificarea extractelor s-a realizat prin filtrare prin coloane de Celite 545. Eluatele au fost extrase cu 300 ml diclormetan i anhidrizate pe sulfat de sodiu anhidru. Faza organic s-a evaporat la sec la rotavapor i a servit la determinarea prin cromatografie de lichide de nalt performan a nitrozodimetilaminei i a nitrozodietilaminei. Condiii de cromatografiere Instrument: sistem HPLC Shimadzu

Coloana: Grace 25 4,6 mm, 5 m, ODS Faza mobil: acetonitril - acid acetic 1% (20:80, v/v) Debit: 0,8ml / minut Volum injectare: 20 l Temperatura coloanei: 25C Detecia : UV (230 nm) Timp de retenie NDMA: 4,56 min. Timp de retenie NDEA: 9,11 min. Timp de analiz / prob : 10 minute. n condiiile de cromatografiere stabilite, nitrozodimetilamina (NDMA) i nitrozodietilamina (NDEA) au picuri distincte. Standardele de calibrare au fost preparate prin diluarea unor volume din soluiile de lucru ale NDMA, respectiv NDEA, la un anumit volum. Trasarea curbelor de calibrare pentru NDMA i NDEA Pentru trasarea curbelor de calibrare s-a lucrat pe concentraii de NDMA i respectiv, NDEA cuprinse ntre 0 i 25 g. Determinarea nitrozaminelor Reziduul obinut n urma evaporrii extractului purificat s-a reluat cu 1 ml de faz mobil, acetonitril-acid acetic 1% (20:80, v/v). Un volum de 20 l a fost injectat n lichid cromatograf. c) Determinarea concentraiilor de NDMA i NDEA Cromatogramele au fost procesate utiliznd programul informatic LC Solution Software. Concentraiile nitrozodimetilaminei i ale nitrozodietilaminei au fost calculate automat de programul informatic pe baza datelor analitice utiliznd aria picului i metoda standardului extern. Curba de calibrare a fost obinut prin fitarea datelor utiliznd regresia liniar. Ecuaia curbei de calibrare: y = b + ax, unde: x concentraia analitului (g / ml); y aria picului; a, b coeficienii curbei de calibrare standard.

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 8/10 Revizia: 0 Editia: 1

7. RESPONSABILITI

Rector Analizeaz i aprob Adresele de nsoire a R. ef de laborator Rspunde de asigurarea dotrii corespunztoare a laboratorului cu materiale, echipamente i reactivi; Verific pstrarea n condiii corespunztoare i manipularea corect a echipamentelor folosite; Verific calculele aferente ncercrilor i caietele i registrele care conin nregistrri / date privind ncercrile; Repartizeaz probele pe executani; Verific calculele aferente ncercrilor n Caietele de lucru / registrul ; ntocmete R sau desemneaz persoane competente, verific i aprob / valideaz RI; Informeaz clientul intern privind obinerea de rezultate necorespunzto are nainte de emiterea R; Efectueaz opiniile i interpretrile la RI lund n considerare standardele de calitate; ntocmete i avizeaz Adresa de nsoire a RI; Instruiete personalul executant privind normele PM i PSI; Decide oprirea ncercrilor n cazul identificrii Nc, inclusiv n cazul unor condiii de mediu necorespunztoare i reluarea ncercrilor dup stingerea Nc. Indic n registru, numrul RI; Transmite clientului exemplarul 1 din RI i Adresa de nsoire; Indic modul de transmitere ctre client a RI i a Adresei de nsoire;

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 9/10 Revizia: 0 Editia: 1

Pstreaz comanda, PVRec i exemplarul 2 al RI n dosar sau n dosarul contractului, dup caz. Decide modul de asigurare a calitii rezultatelor, frecvena, desemneaz executanii i verific rezultatele. Responsabilul Calitii Verific, cu ocazia Auditurilor Interne, nregistrrile specifice acestui tip de ncercri n Caietele de lucru i n registru.

Executant i nsuesc prezenta procedur i IU i le respect ntocmai; Primesc probele i, dup verificarea aspectului i conformitii acestora, execut ncercrile; Efectueaz calculele pentru exprimarea rezultatului ncercrii i notific rezultatele msurrilor cu toate amnuntele specifice n Caietul de lucru i n registru; Efectueaz ncercrile de asigurare a calitii rezultatelor conform PG-20 cu frecvena stabilit de L i face nregistrrile aferente; Informeaz L asupra problemelor ivite n timpul determinrii; ntocmesc R dac sunt desemnai de L i-l nregistreaz n registrul; Depoziteaz corespunztor probele dup terminarea ncercrii, le nregistreaz n registru. Responsabil metrolog asigura buna functionare a echipamentelor, mentenanta lor si revizia spatamanala ale acesora instruirea executantilor cu privire la utilizarea echipamentelor

Exemplar: 1 PROCEDURA DE NCERCARE Determinarea coninutului de nitrozamine din carne PI -16 Pagina 10/10 Revizia: 0 Editia: 1

Primitor probe Primete PVRec i probele i le depoziteaz corespunztor n vederea caracterizrii ulterioare; nregistreaz probele n registrul aferent, noteaz ora cnd a fost predat n ISIH mpreun cu probele, condiiile n care au fost transportate: lad frigorific, etc., verific concordana cu documentele nsoitoare, existena sigiliului i a etichetei; Pred PVRec i probele n laborator pentru analiz.

8. NREGISTRRI

Formulare eticheta de prelevare probe; Proces Verbal de recoltare a probelor de produse de origine animal pentru examen de laborator; Raport de Neconformitate; Raport de ncercare; Amendament la Raportul de ncercare.

Dosare / caiete Coresponden comenzi / oferte ncercri; Coresponden comenzi / oferte de contracte; Caiet de lucru; Estimare incertitudine. Evidena ncercrilor din ISIH; Eviden eliminare probe / deeuri (infecte).

Registre -