Manipularea materialului genetic

Nucleul reprezint compartimentul celular care ncorporeaz genomul nuclear, deci el conine aproape
ntreaga informaie genetic.
El are rol n:
-Pstrarea n condiii de securitate a ADN-ului;
-Transmiterea nealterat a informaiei sticate ctre descendeni;
-Reglarea i controlul activitii celulare.
Prin informaie genetic se nelege informaia codificat n materialul genetic cu care este nzestrat orice
organism viu, (unicelular sau pluricelular) de pe planeta noastr. Totalitatea informaiei genetice dintr-un
organism se numete genotip.
Informaia genetic este stocat n structura macromolecular complex a acidului dezoxiribonucleic
(ADN), care este prezent att n nucleul fiecrei celule (ADN nuclear care are rolul principal n stocarea
informaiei genetice) dar i n afara acestuia (ADN extranuclear).
ntreaga cantitate de material genetic dintr-un organism se numete genom. Exist un genom nuclear i
un genom celular. Genomul nuclear este reprezentat de una (la procariote) sau mai multe (la eucariote)
macromolecule de ADN bicatenar denumite cromozomi. Numrul acestora este o caracteristic de specie,
fiind acelai pentru toi indivizii unei specii i pentru toate celulele somatice ale unui organism.
ADN-ul reprezint motenirea biologic a unui organism i controleaz dezvoltarea, reproducerea i auto-
repararea acestuia. Pentru realizarea acestor procese este necesar transmiterea informaiei genetice ce se
realizeaz prin copierea ADN-lui n proteine i alte produse. Copierea se face n dou etape, transcripie i
translaie (la eucariote exist o etap intermediar de eliminare a intronilor):
transcripia const n preluarea informaiei genetice a unor poriuni din ADN de ctre o molecul a aa
numitului ARN mesager - ARNm; translaia const n traducerea pe baza unui cod, numit cod genetic, a
secvenei de baze azotate (ce reprezint informaia genetic preluat prin transcripie) ntr-o secven de
aminoacizi ( molecula de ARNm este citit de ctre nite organite celulare numite ribozomi, alctuite din
ARN ribozomal ARNr - i alte biomolecule, i, pe baza informaiei coninute, este sintetizat din aminoacizi
individuali catene polipeptidice ce includ i proteinele).
Codul genetic este universal, fiind acelai pentru toate organismele vii, n sensul c el face ca fiecrei
secvene de trei baze azotate (denumite codon) s-i corespund un anumit aminoacid. Ultimele cercetri au
pus totui n eviden cteva excepii de la universalitatea codului genetic.
Pe macromolecula de ADN, care conine un numr extrem de mare de nucleotide, exist ntre cteva mii
i cteva sute de mii de secvene polinucleotidice, numite segmente, care codific sinteza unor proteine sau
a altor biomolecule. Aceste segmente (ce sunt subdiviziuni ale cromozomilor) se numesc gene structurale.
n afar de acestea mai exist i alte tipuri de gene (gene operatoare, gene reglatoare, promotor) cu rol de
reglare a activitii genelor structurale (reglaj genetic).
Absena unui mecanism care s poat inversa direcia acestui proces de la proteine ctre ADN st la baza
faptului c experiena pe care un organism o ctig n timpul vieii nu poate fi motenit de fiinele
biologice.
Alterrile aprute n transmiterea informaiei genetice ntre generaii duc la mutaii genetice i acestea la
selecia natural.
Ansamblul nsuirilor morfologice, fiziologice i biochimice ale unui individ, rezultate din interaciunea
genotipului cu mediul se numete fenotip. Diferitele caractere individuale sunt rezultatul interaciunii
informaiei genetice din moleculele de ADN nuclear i extranuclear cu condiiile de mediu. Cercetrile
recente au scos n eviden faptul c aceste interaciuni nu sunt suficiente pentru a explica toate caracterele
individuale, deci mai trebuie s existe undeva un stoc de informaie. Unii cercettori ncearc s identifice
noi structuri informaionale biomoleculare, n timp ce alii sunt de prere c aceast informaie ar putea
avea un suport de o alt natur (de natur spiritual). Deocamdat nici una din aceste versiuni nu a fost
demonstrat, dar cercetrile continu.
Genele sunt uniti purttoare ale ereditii n organismele vii. Ele sunt constituite din ADN (sau ARN,
pentru unele virusuri) i asigur bazele dezvoltrii i funciilor celulelor, organelor i indivizilor, fiind de
asemenea responsabile pentru numeroase din formele de comportament nnscut. n timpul reproducerii
materialul genetic este transmis de la printe/prini la copii. Materialul genetic poate fi transmis i la
indivizi nenrudii (de exemplu prin transfecii, sau la virusuri). Genele codeaz toat informaia necesar
pentru construcia substanelor chimice, precum proteinele, necesare funcionrii organismului.
Cuvntul "gen", inventat n 1909 de botanistul Danez Wilhelm Johannsen, vine din limba greac, genos,
romn: origine, i este folosit de mai multe discipline, inclusiv genetica clasic, genetica molecular,
biologia evoluionist i genetica populaiilor. Deoarece fiecare disciplin modeleaz biologia vieii n mod
diferit, i modul de utilizare a cuvntului "gen" variaz. Astfel, el se poate referi att la partea material,
ct i la cea conceptual.
Dup descoperirea ADN-ului ca material genetic, i odat cu dezvoltarea biotehnologiei i o dat cu
proiectul decodrii genomului uman, cuvntului "gen" a nceput s se refere mai ales la nelesul su din
biologia molecular, adic la segmentele de ADN pe care celulele le transcriu n ARN i le traduc (cel puin n
parte) n proteine.
n vorbirea obinuit, "gen" se refer mai ales la cauzele ereditare ale trsturilor i bolilor unei fiine vii
-- de exemplu se presupune c exist o gen a obezitii. Mai exact, un biolog se poate referi la o alel sau o
mutaie care este implicat sau asociat cu obezitatea. Aceasta deoarece biologii cunosc muli ali factori n
afar de cel genetic care decid dac o persoan va fi sau nu obez, de exemplu modul de alimentaie,
micarea, mediul prenatal, creterea, cultura i disponibilitatea hranei.
De asemenea, este foarte puin probabil ca variaii n cadrul unei singure gene sau al unui singur locus
genetic s determine n mod complet predispoziia genetic pentru obezitate. Aceste aspecte ale ereditii -
- efectul combinat ntre gene i mediu, influena mai multor gene, par s fie ceva obinuit la multe i
probabil chiar majoritatea trsturilor complexe. Termenul "fenotip" se refer la caracteristicile care rezult
din acest efect combinat.
Un genotip este compoziia genetic (n ansamblu sau parial) a unei celule, organism sau individ; de
obicei ea e determinat n raport cu un anumit caracter, sau o anumit trstur). Cu alte cuvinte, genotipul
e compoziia n alele, relevant pentru trstura de referin.
Este general acceptat ideea c genotipul motenit, factori ambientali neereditari, precum i combinaia
acestor dou elemente, contribuie la fenotipul unui individ.
Ingineria genic poate fi definit drept ansamblu de metode i tehnici prin care este posibil manipularea
materialului genetic la nivel celular i molecular pentru a obine pe ci netradiionale produi utili omului i
genotipuri noi, avnd la baz tehnologia moleculelor recombinate (hibride) de ADN.
Ingineria genic se profileaz ca direcie tiinific i tehnologic n anii '70. Apariia ei a fost determinat,
n primul rnd, de aprofundarea cunotinelor de genetic la nivel celular i molecular, de dezvoltarea
cunotinelor privind materialul genetic al organismelor vii.
Datorit cercetrilor de genetic molecular, a fost posibil cunoaterea structurii de profunzime a unor
gene i genomuri, fapt ce a condus la elaborarea tehnologiei ADN-ului recombinat i la transferul de gene
peste barierele de specie.
Tehnica recombinrii genetice n vitro include trei etape principale:
-extragerea sau sinteza chimic a ADN-ului din diferite specii;
-construirea unei molecule hibride (recombinate) de ADN;
-reintroducerea moleculei recombinate de ADN ntr-o celul vie pentru reproducerea i expresia ei.
Datorit cercetrilor n tehnologia ADN-ului recombinat, au fost elaborate metode de transfer de gene n
celulele procariote, care pot sintetiza multe proteine utile. Astfel, a devenit posibil producerea i chiar
comercializarea pe scar larg a unor hormoni (insulina, somatostatina, somatotropina), a interferonului, a
preparatelor de diagnosticare etc.
Din 60 de milioane de diabetici, circa 4 milioane necesit un tratament cu insulin.
Interferonii sunt produi de celule specializate pentru lupta mpotriva infeciilor virale. Ei au fost
descoperii n 1957 de F.Isaacs i I.Lindenmann la Institutul Naional de Cercetri Medicale de lng Londra.
Interferonii reprezint nite substane proteice (din 146-166 de aminoacizi) i sunt produi n cantiti
infime de celula animal sau uman, cnd un virus ptrunde n organism.
Exist mai multe tipuri de interferoni: interferonul leucocitar (), interferonul fibroblastelor () i
interferonul limfocitelor T sau interferonul imun ().
Ei pot fi obinui prin tehnici clasice (din celulele sanguine i din fibroblaste) i prin tehnici de recombinare
genic.
Pentru a obine interferon din celulele sanguine sau din fibroblastele cultivate, acestea sunt infectate cu
un virus, iar dup 24 de ore prin centrifugare i purificare se izoleaz din mediul de cultur.
Dintr-un litru de snge se poate extrage pn la 1 mg (10-3 grame) de interferon.
n 1980, savanii americani W.Gilbert i C.Weissmann i japonezul T.Taniguki au produs interferonul uman
cu ajutorul unor colibacili cu genomul modificat.
Celulele de E. coli nu pot transforma predecesorul interferonului n interferon activ, de aceea, iniial,
complexul de ADN, format dintr-o regiune nucleotidic reglatoare i o regiune ce determin structura
interferonului, este supus aciunii enzimelor de restricie, care taie molecula de ADN aproximativ la
frontiera acestor dou catene (genei interferonului nu-i ajunge un triplet ATG). Codonul omis (ATG) este
anexat prin sintez chimic.
Gena interferonului se ncadreaz n continuare ntr-un plasmid, care se transfer n E. coli. Astfel,
colibacilii sintetizeaz interferonul uman. Dintr-un litru de suspensie de E. coli (circa 1011 celule) se pot
extrage pn la 5 mg de interferon (adic de 5000 de ori mai mult dect din 1 litru de snge).
Tehnicile de inginerie genic permit obinerea preparatelor hibride de interferon cu un spectru larg de
aciune.
Tehnicile de recombinare genetic permit transferul genelor importante n celulele de plante i animale,
iar n rezultat se obin plante i animale transgenice. Pentru transferul de gene la plante sunt utilizate
bacteriile Agrobacterium tumerfaciens (descoperite n 1907 de E.Smith i C.Townsend), care provoac
formarea unor tumori cancerogene (crown gall) pe tulpinile unor plante (la speciile din 93 de familii de
dicotiledonate).
Tehnicile de ameliorare genetic permit transferul importante n celulele de plante i animale, iar ca rezultat
se obin plante i animale transgenice.
Pentru realizarea transferului de gene n celula vegetal este utilizat metoda culturilor de celule i
esuturi in vitro.