Fitochimicalele din plantele crucifere

protejeaza impotriva cancerului prin

modularea metabolismului
cancerigen1,2,3

Mai multe studii epidemiologice sugerează că consumul de legume crucifere poate fi deosebit de
eficient (în comparație cu consumul total de fructe și legume) în reducerea riscului de cancer în mai
multe locuri de organe. Cruciferele care sunt consumate pe scară largă sunt deosebit de bogate în
glucosinolates, care sunt convertite prin myrosinase de plante și microflora gastro-intestinală în
izotiocianați. Un număr de izotiocianați și un număr limitat de glucosinolate care au fost examinați
blochează în mod eficient carcinogeneza chimică la modelele animale. Mulți izotiocianați sunt, de
asemenea, inductori puternici ai proteinelor de fază 2. Dovezi substanțiale susțin opinia că inducerea
enzimelor de fază 2 este o strategie extrem de eficientă pentru reducerea susceptibilității la agenți
cancerigeni. Această concluzie a primit recent un sprijin molecular puternic din partea experimentelor
pe șoareci în care factorul specific de transcriere, nrf2, care este esențial pentru inducerea proteinelor
de fază 2, a fost eliminat. La acești șoareci knock-out, nivelurile bazale ale enzimelor de fază 2 sunt
foarte scăzute și nu inductibile. În consecință, acești șoareci sunt mult mai susceptibili decât omologii lor
de tip sălbatic la carcinogeneza benzo[a]piren forestomach și nu sunt protejați de inductori de fază 2.
Aceste experimente oferă dovezi foarte puternice pentru un rol major al enzimelor de fază 2 în controlul
riscului de expunere la agenți cancerigeni. Un număr tot mai mare de proteine de fază 2 care exercită o
varietate de mecanisme de protecție sunt identificate. Astfel, pe lângă electrofilii detoxifianți, aceste
proteine exercită o protecție antioxidantă versatilă, de lungă durată și catalitică. J. Nutr. 131: 3027S-
3033S, 2001.

Diagnosticarea anterioară, îmbunătățirea tratamentului și reducerea fumatului sunt probabil

responsabile pentru scăderile constante, deși modeste, ale mortalității prin cancer ajustate în funcție de
vârstă în Statele Unite în ultimii 10 ani. Cu toate acestea, este unanim de acord că numărul de noi cazuri
de cancer este în creștere la nivel mondial, iar prognosticul pentru pacienții afectați de tumorile solide
majore (sân, plămân, colorectal, prostată) în lumea occidentală, din păcate, rămâne sumbru (1).
Îmbătrânirea populațiilor și succesele dramatice în tratamentul bolilor cardiovasculare ne îndreaptă
povara bolii terminale spre malignitate. Dacă tendințele actuale continuă, incidența anuală estimată a
cazurilor noi de cancer se va dubla în 30 y (2). Prin urmare, este inevitabil ca gestionarea pe termen lung
a cancerului să necesite eforturi concertate pentru a reduce riscul de cancer, continuând în același timp
căutarea intensivă a unor tratamente mai eficiente. Reducerea riscurilor cuprinde următoarele două
strategii: 1) prevenirea, adică reducerea expunerii la agenți cancerigeni (cum ar fi fumatul sau radiațiile);
și 2) protecția, și anume intervenția deliberată pentru a spori în cea mai mare parte mecanismele
endogene care reduc riscul care decurge din expunerea la agenți cancerigeni. Principalii agenți
cancerigeni sunt electrofilii exogeni sau generați metabolic și speciile reactive de oxigen care rezultă din
procesele oxidative normale și din mediul înconjurător. Deși necesitatea eliminării sau cel puțin a
reducerii expunerii la agenți cancerigeni este axiomatică, provocările protejării ADN-ului împotriva
deteriorării de către agenți cancerigeni în populațiile sănătoase sau chiar cu risc ridicat sunt formidabile.
Este necesară o protecție pe termen lung sau chiar pe tot parcursul vieții, iar acest lucru ar putea fi
realizat cel mai ușor și mai sigur prin identificarea și administrarea agenților chemoprotectori de
toxicitate scăzută care sunt deja prezenți în dieta umană. În această revizuire, rezumăm dovezile că
legumele crucifere joacă un rol major, poate unic în efectele protectoare recunoscute pe scară largă ale
legumelor împotriva riscului de cancer. Dezvoltăm sprijin pentru a considera că consumul regulat de
legume crucifere duce la un aport ridicat de fitochimicale neobișnuite cunoscute sub numele de
glucosinolate și, în consecință, expunerea celulelor la izotiocianați, produsele hidrolizei glucosinolatului.
Izotiocianații sunt protectori bine-cunoscuți împotriva carcinogenezei și modulatoarelor activităților
enzimelor implicate în metabolismul agenților cancerigeni, în special prin inducerea enzimelor de
detoxicare de fază 2. Prezentăm dovezi moleculare recente pentru rolul central al enzimelor de fază 2 în
determinarea susceptibilității la agenți cancerigeni și că inducția lor reduce această susceptibilitate.

Protecția împotriva riscului de cancer prin diete bogate

în plante.
Consensul s-a clădit pe mai mult de un sfert dintr-un secol că dietele bogate în fructe și legume sunt asociate
cu riscuri mai mici de a dezvolta diferite tipuri de tumori maligne. Acest consens este susținut de un număr
tot mai mare de studii epidemiologice sofisticate. Principalele recenzii ale acestui domeniu includ două
rapoarte de la Academia Națională de Științe a Statele Unite ale Americii, adică dieta, nutriție, și cancer în
1982 (3) și Dieta și sănătatea. Implicații pentru reducerea riscului de boli cronice în 1989 (4), precum și
compendiul enciclopedic recent produs de Fondul Mondial de Cercetare a Cancerului și de American
Institutul de Cercetare a Cancerului în 1997, Alimentație, Nutriție, și Prevenirea cancerului: o perspectivă
globală (5). Clasicul hârtie de Doll și Peto (6) a furnizat estimări cantitative ale riscurile evitabile de cancer în
Statele Unite ale Americii. Deși Doll și Peto s-au concentrat în mare măsură pe cauzele cancerului uman, ei au
atras atenția asupra naturii extrem de prevenibile a boala și, prin urmare, a emis un apel clarion la acțiune.
Alte revizuiri cuprinzătoare ale relației dintre dieta și cancer au a fost furnizat de Ziegler (7), Block și colegii
(8), și de către Steinmetz și Potter (9-11). Din .200 de studii de caz și de cohortă, aproape 80% au a raportat
relații inverse semnificative între consumul de alimentele vegetale și riscul de a dezvolta majoritatea tipurilor
de cancer (5). Deși concluzii cu privire la măsura globală până la care dieta contribuie la incidenta cancerului,
sau de a fi mai mult explicit, gradul în care modificarea dietei ar putea fi de așteptat să reducă riscul de
cancer, variază considerabil, un rezonabil estimarea este de 30-40% (5).
Rolul central al plantelor crucifere în protecția
împotriva cancerului
Mai multe mecanisme sunt, fără îndoială, implicate în efectele protectoare ale dietelor bogate în fructe și
legume (5,9-11). Acestea depind nu numai de schimbările calitative și cantitative ale componentelor
alimentare majore ale nutrienților și nenutrienților, cum ar fi reducerea aportului de carne și grăsimi și
creșterea corespunzătoare a consumului de fibre, ci și de modificările aportului de nutrienți esențiali. Mult
mai puțin bine înțelese sunt efectele consumului cronic de cantități substanțiale de componente vegetale
nenutriente, inclusiv o multitudine de fitochimicale unice pe care plantele le acumulează, uneori la niveluri
substanțiale, pentru propriile nevoi (12). Prin urmare, este foarte dificil să se identifice contribuțiile relative
ale diferitelor componente ale unei diete pe bază de plante la reducerea generală a riscului de cancer.
Problema este complicată și mai mult de demonstrația recentă a sinergizismului în rândul protectorilor
(13,14). Acest fenomen nu este neașteptat și este analog sinergismelor bine recunoscute și importante din
punct de vedere clinic în rândul agenților chimioterapeutici și observațiilor efectelor mai mult decât aditive în
rândul agenților cancerigeni multipli (de exemplu, azbest, fumat și alcool pentru cancerul pulmonar;
aflatoxină și hepatită virală pentru cancerul hepatic). În încercarea de a identifica importanța relativă a
diferitelor mecanisme, un indiciu potențial important poate fi dovada tot mai mare că, printre legume,
plantele crucifere sunt deosebit de eficiente ca protectori (15). Cruciferele (cunoscute și sub numele de
Brassicaceae) sunt familia de plante care includ diferiți membri familiari ai speciei Brassica oleracea (de
exemplu, broccoli, varză, conopidă, kale, varză de Bruxelles), precum și multe alte plante care sunt
consumate pe scară largă în diferite părți ale lumii, dar nu și în Statele Unite, cum ar fi varza orientală, rucola,
năsturel, ridiche, daikon, wasabi și diverse muștaruri. Modelele regionale de consum crucifer variază
substanțial în diferite părți ale lumii; un exemplu elocvent este consumul uriaș de daikon (Raphanus sativus;
20 kg/y sau 55 g/d) în Japonia, unde este cea mai populară legumă.

Dovezi epidemiologice pentru relația dintre consumul

de crucifer și riscul de cancer.
Dovezi epidemiologice referitoare la reducerea riscului de cancer la consumul de anumite tipuri de fructe și
legume și la crucifere, în special, au fost disponibile pentru .20 y. În 1978, Graham și colegii săi (16 ani) au
concluzionat: "o relație doză-răspuns a fost întâlnită și în analizele fiecăreia dintre următoarele pentru
cancerul de colon: varză murată, coleslaw, varză de Bruxelles, broccoli". Deoarece aceste recenzii au fost
publicate, alte studii continuă să raporteze o asociere inversă între consumul de crucifer și cancer. Jain et al.
(18) și Kolonel et al. (19) au observat o reducere semnificativă a riscului de cancer cu creșterea aportului de
cruciferi în cohortele care au dezvoltat cancer de prostată. Recent, Terry et al. (20) a raportat reducerea
riscului de cancer de sân legate de consumul de crucifer, și Zhang et al. (21) observat crucifer-asociate
reducere a limfomului non-Hodgkin la femei. Alte două studii recente au încercat să analizeze rolul protector
specific al cruciferelor. Michaud și colegii săi (22) au analizat 252 de cazuri de cancer de vezică urinară care s-
au dezvoltat în 47.909 cadre medicale într-o perioadă de 10 ani. Nu s-au constatat asocieri semnificative între
riscul de cancer al vezicii urinare și consumul total de fructe și legume, numai fructe, numai legume, legume
galbene sau legume cu frunze verzi. Cu toate acestea, raportul de reducere a riscurilor multivariate (RR)
pentru legumele crucifere a fost foarte semnificativ (RR 5 0,49, P 5 0,008) (tabelul 1). În mod similar, Cohen et
al. (23 de ani) a examinat relația dintre consumul de fructe și legume și incidența cancerului de prostată la
bărbați (65 de ani). Consumul ridicat de fructe nu a afectat incidența cancerului de prostată. Deși consumul
global ridicat de legume a fost asociat cu un risc redus, legumele crucifere au fost în mod clar protectoare
atunci când riscul a fost ajustat pentru consumul total de legume și alte variabile. Aceste rezultate
evidențiază importanța deosebită a obținerii unor informații cantitative fiabile privind consumul de plante
individuale sau grupuri de plante și compoziția lor fitochimică, de preferință prin măsurători chimice directe,
și corelarea acestora cu riscul de cancer, precum și determinarea genotipurilor și fenotipurilor populațiilor
țintă (24,25). Un exemplu de legătură reușită a unui indice chimic al consumului de crucifer la riscul de cancer
pulmonar este descris mai jos (26). Metodele fiabile disponibile în prezent pentru cuantificarea consumului
de crucifere prin analiza urinei trebuie aplicate pe scară mai largă în studiile epidemiologice (27-29).

FIG 1

Fitochimia neobișnuită a cruciferelor: glucosinolate și

izotiocianați.
O proprietate chimică izbitoare și caracteristică a plantelor crucifere este conținutul lor ridicat de
glucosinolate, care se apropie adesea de 1% sau mai mult din greutatea lor uscată (30). Glucosinolates și
produsele lor de hidroliză izotiocianat sunt bine-cunoscute de protecție împotriva carcinogenezei, după
cum se va discuta mai jos. Consumul relativ mare de glucosinolates de multe persoane, în comparație cu
alte plante în prezent în curs de studiu ca surse potențiale de activitate chemoprotectoare, adaugă o
semnificație specială la acești compuși. Glucosinolates sunt b-tioglucoside N-hydroxysulfates (Fig. 1) și
sunt precursorii izotiocianaților (uleiuri de muștar) (31). Glucosinolates joacă roluri de protecție și
evolutiv important în plante. Acestea includ alelopatie (suprimarea creșterii plantelor vecine), indicii
specifice de hrănire pozitive și negative pentru unele insecte și proprietăți antibiotice largi, inclusiv
activități nematocide, antimicrobiene, antifungice, antiprotozoare și insecticide. Glucosinolates sunt
invariabil însoțite în celulele plantelor de enzima myrosinase (un b-tioglucosidase), care este în mod
normal fizic separat de substraturile sale glucosinolat, dar este eliberat și hidrolizează glucosinolates la
izotiocianați și alte produse atunci când plantele sunt rănite de prădători sau atunci când produsele
alimentare sunt preparate sau mestecate (Fig. 1). Această reacție este responsabilă pentru dezvoltarea
gustului ascuțit de hrean, muștar și wasabi. În absența myrosinasei, de exemplu, atunci când plantele sunt
gătite și myrosinase este inactivată termic, oamenii pot converti eficient glucosinolates în izotiocianați
prin acțiunea microflorei tractului gastro-intestinal (28,29). Cel puțin 120 de glucosinolati deosebiți
chimic au fost identificați în plante (31). Deși majoritatea au fost izolate de crucifere, se știe că alte 15
familii de plante conțin glucosinolates. Celelalte familii includ multe specii comestibile și, deși este puțin
probabil să contribuie semnificativ la aportul de glucosinolat uman în lumea occidentală, semnificația lor
pentru chimioprotecție în alte părți ale lumii nu este încă determinată. Deși s-au făcut doar câteva
încercări de evaluare a consumului de glucosinolat uman, unele estimări sunt de până la 300 mg/d (;660
mmol/d) (32).

Efectele chemoprotectoare ale izotiocianaților și

glucosinolatelor.
De la începutul anilor 1960, atât izotiocianații naturali, cât și cei sintetici au atras o atenție considerabilă
și din ce în ce mai mare ca protectori importanți și eficienți împotriva carcinogenezei chimice într-o serie
de modele animale (33-36). Deși au fost examinați doar câțiva glucosinolati, în mare parte pentru că
cantități adecvate din acești compuși nu au fost disponibile, unele sunt foarte eficiente în inhibarea
carcinogenezei (37-39). Interesul pentru utilizarea izotiocianaților ca chimioprotectori a apărut din mai
multe direcții în mare parte independente, dar acum convergente. Istoria acestor evoluții poate fi urmărită
din revizuirea cuprinzătoare de către Hecht (35), care rezumă, de asemenea, mecanismele potențiale care
stau la baza efectelor protectoare ale acestor compuși. Multe diferite ($ 25) izotiocianați bloca efectele
cancerigene de mai mult de o duzină de chimic diferite tipuri de agenți cancerigeni într-un cel puțin 10
site-uri țintă diferite în trei specii de rozătoare. Primele experimente care datează din anii 1960 au
implicat utilizarea izotiocianaților aand b-naphthyl ca inhibitori ai carcinogenezei. Cea mai amplă lucrare
a fost făcută de Hecht și colegii săi cu privire la substanța cancerigenă de nitrozamină specifică tutunului
4-(metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanone (NNK), care este probabil cel mai proeminent cancerigen
derivat din țigări (35). Mai mulți izotiocianați inhibă acțiunea acestui cancerigen prin inhibarea
metabolismului său. Având în vedere consumul substanțial de crucifere de către mulți oameni, după cum
sa menționat mai sus, este tentant să atribuim dovezile tot mai mari că cruciferele joacă un rol special în
protecția împotriva cancerului chimiei lor unice, în special nivelurilor lor foarte ridicate de glucosinolate,
care sunt convertite eficient în izotiocianați. Odată cu dezvoltarea recentă în laboratorul nostru a unei
metode spectroscopice simple (28,29,40,41) pentru determinarea cantitativă a izotiocianaților,
glucosinolatilor (după hidroliza myrosinase) și a metaboliților lor urinari majori (ditiocarbamați) prin
ciclocondensare cu 1,2-benzen-ditiol, a devenit fezabilă evaluarea consumului de crucifer, utilizarea
acestuia ca instrument epidemiologic și raportarea acestuia la riscul de cancer. Londra și colegii săi (26 de
ani) au găsit o asociere semnificativă între prezența ditiocarbamaților (care sunt metaboliți glucosinolat și
izotiocianat) în urina unei cohorte mari de bărbați din Shanghai și riscul lor ulterior de a dezvolta cancer
pulmonar. Contrar titlului acestei lucrări, analiții măsurați în urină sunt metaboliți ditiocarbamat, deoarece
nivelurile de izotiocianați în urină sunt neglijabile (28,29,42). Cei care au excretat ditiocarbamați, un
indice al consumului de glucosinolat și izotiocianat, au avut un risc mai mic. Acest efect protector a
devenit mai proeminent la persoanele cu deleții homozigote în anumite transferuri de glutation (M1 și
T1). Deoarece aceste enzime sunt implicate în conversia izotiocianaților în ditiocarbamați și facilitează
probabil excreția izotiocianaților, constatările sugerează că activitățile acestor enzime scad nivelurile
tisulare eficiente de izotiocianați. Aceste constatări oferă un sprijin suplimentar pentru rolul esențial al
glucosinolatilor și izotiocianaților derivați din crucifere în chemoprotecția împotriva cancerului.

Rolul enzimelor de fază 2 în chimioprotecția

metabolismului cancerigen prin enzimele de fază 1 și
faza 2.
Două tipuri de agenți dăunători ai ADN-ului pot evoca transformări
neoplazice, adică electrofili, în mare parte de origine exogenă,
FIGURA 1 Conversia glucosinolaților în izotiocianați prin mirinază vegetală

Fig 1

Două tipuri de agenți dăunători ai ADN-ului pot evoca transformări neoplazice, adică electrofili, în mare
parte de origine exogenă, specii reactive de oxigen, provenind parțial din surse exogene, dar care provin, de
asemenea, în cantități substanțiale din oxidări celulare normale. După cum se arată în figura 2, majoritatea
electrofililor necesită activare metabolică, de obicei prin enzime de fază 1 (citocromii P450); ei convertesc
procarcinogenii, în general inofensivi, în agenți cancerigeni electrofili foarte reactivi, care pot deteriora
centrele sensibile ale bazelor ADN și pot iniția carcinogeneza. ADN-ul și alte macromolecule sunt protejate în
principal împotriva deteriorării de către electrofili și specii reactive de oxigen de către o familie de enzime de
fază 2. Printr-o varietate de mecanisme (discutate mai jos), inclusiv conjugarea cu liganzi endogeni (de
exemplu, glutation, acid glucuronic), enzimele de fază 2 inactivează acești agenți și promovează excreția lor.
În plus, glutationul, principalul și cel mai abundent antioxidant celular cu molecule mici, care este reglat în
mod similar de enzimele de fază 2, joacă un rol major în protecția împotriva electrofililor și a speciilor reactive
de oxigen. Astfel, dacă malignitatea va apărea atunci când o celulă este expusă la un potențial cancerigen este
determinată în mare măsură de echilibrul activităților enzimelor de fază 1 care activează agenții cancerigeni și
enzimele de fază 2 care aproape întotdeauna detoxifică agenții cancerigeni reactivi. Prin urmare, este de o
importanță considerabilă faptul că ambele familii de enzime sunt foarte inductibile în multe țesuturi și că
activitățile lor pot fi reglementate de o mare varietate de agenți chimici aparținând a nouă clase chimice (43-
46), printre care fitochimicalele dietetice sunt deosebit de importante. În plus, deși unii inductori ridică atât
enzimele de fază 1, cât și cele de fază 2 (inductori bifuncționali), alții induc selectiv numai enzime de fază 2
(inductori monofuncționali) (47).

Dovezi că inducerea enzimelor de fază 2 duce la

chimioprotecție.
Multe linii de dovezi susțin importanța enzimelor de fază 2 în reglarea susceptibilității la agenți cancerigeni
(48-51). Descoperirile noastre timpurii că administrarea de antioxidanți fenolici BHA (hidroxianisol butilat) și
BHT (hidroxitoluen butilat) a dus la inducerea enzimelor de fază 2 prin transcriere îmbunătățită în multe
țesuturi de rozătoare a condus la sugestia că activitățile îmbunătățite ale acestor enzime de detoxicare au fost
responsabile pentru aceste acțiuni protectoare. Dovezile pentru această afirmație au crescut în ultimii 20 de ani
și au fost rezumate în altă parte (48-51). Printre considerațiile cele mai convingătoare este faptul că compușii
izolați din surse naturale numai pe baza activității lor inductoare s-au dovedit ulterior că protejează rozătoarele
împotriva carcinogenezei (de exemplu, sulforafanul, terpenele din boabele de cafea verde, resveratrol) și că s-a
prezis că alți compuși vor avea activitate chimioprotectoare pe baza proprietăților lor inductoare enzimatice de
fază 2 (de exemplu, oltipraz și alte 1,2-ditiole-3-tione și o serie de analogi sintetici ai sulforafanului). Într-
adevăr, o literatură voluminoasă susține acum opinia potrivit căreia inducerea enzimelor de fază 2 este un
mecanism important și suficient pentru obținerea protecției împotriva efectelor toxice și neoplazice ale multor
agenți cancerigeni (48-50,52). Aceste considerente au ghidat utilizarea oltiprazului (un inductor enzimatic de
fază 2) în reducerea riscului de expunere la aflatoxină într-o regiune din China în care populația este afectată
de o incidență foarte mare a cancerului hepatic. Oltipraz a promovat excreția aflatoxinei B1 în mare parte prin
inducerea enzimelor de fază 2 (53).

Distribuția inductorilor enzimatici de fază 2 între

plante: izolarea sulforafanului.
Recunoscând importanța potențială a determinărilor potenței inductorului enzimelor de fază 2 ca strategie de
identificare a anticarcinogenelor, Prochaska și Santamaria (54) au conceput un sistem simplu de măsurare a
activităților specifice chinone reductaza în celulele hepatomului murine cultivate în plăci de microtitrare cu 96
de puțuri. Chinon reductaza a fost selectat ca prototip pentru enzimele de fază 2 datorită distribuției sale pe
scară largă în sistemele de mamifere, amplitudinii mari a răspunsului inductorului și ușurinței de măsurare prin
cuplarea la reducerea colorantului tetrazoliu. Acest sistem oferă o metodă foarte cantitativă și reproductibilă
pentru determinarea potențele inductor de compuși puri, amestecuri sau extracte de plante (38,55) și chiar
metaboliți urinari (29).

FIGURA 2 Rolul metabolismului în

carcinogeneza chimică. Susceptibilitatea la daune cancerigene este controlată de echilibrul dintre activarea
fazei 1 și enzimele de detoxicare de fază 2. GST, glutation S-transferases; g-GCS, sintetazei g-glutamilcisteinei;
HO-1, hem oxygenase 1; MnSOD, superoxid dismutaza de mangan; QR, chinonă reductază (NQO1); ROS,
specie reactivă de oxigen; UGT, UDP-glucuronosyl transferases; AFAR, aflatoxina B1 aldehidă reductaza

Rezultatele obținute cu acest sistem au prezis în mod fiabil comportamentul inductorilor la animale. Atunci
când extractele organice din diferite plante comestibile aparținând mai multor familii de plante au fost
examinate pentru activități inductoare de fază 2, s-au observat diferențe izbitoare (55). Astfel, Cruciferae, și în
special brassicas, au fost deosebit de bogate în activități inductoare, în timp ce multe alte familii de plante au
fost, în general, surse mult mai sărace. Am testat un număr mare de articole dintr-o dietă echilibrată specială
concepută pentru studii clinice în care a fost important să se minimizeze aportul de inductori. Extractele de
solvenți organici din numeroasele componente ale acestei diete, inclusiv carne, fructe, legume necrucifere,
cereale și o varietate de produse lactate, conțineau mult mai puțin de 1% din activitatea inductorului pe gram
decât greutatea echivalentă a unui cap mediu de broccoli (35.000 U/g) atunci când sunt măsurate prin testul
nostru standard. Importanța dezvoltării glucosinolatilor și izotiocianaților ca chimioprotectori a primit un
impuls considerabil din descoperirea complet independentă și neașteptată ghidată de bioteste că principalul
inductor al enzimelor de detoxicare de fază 2 din broccoli și, în special, în germenii de broccoli vechi de 3 d, a
fost un izotiocianat neobișnuit, adică sulforafanul [1-izotiocianato-(4R)-metilsulfinil)-butan;
CH3S(CH2)4NCS] care a blocat formarea tumorii mamare la șobolanii tratați cu dimetilbenz[a]antracen
(DMBA) (38,40,56). Sulforafanul este un inductor extrem de puternic al enzimelor de fază 2, poate cel mai
puternic inductor natural descris până în prezent. Un sprijin suplimentar pentru activitatea anticarcinogenă a
izotiocianaților a fost oferit de sinteza unui număr mare de analogi izotiocianați pe baza potențelor lor ca
inductori enzimatici de fază 2 și de constatarea că acești compuși au inhibat, de asemenea, formarea tumorii
mamare la șobolanii evocați de DMBA (57).

Dovezi moleculare pentru importanța critică a

enzimelor de fază 2 în reglarea carcinogenezei: dovezi
obținute din perturbarea genei nrf2.
Dovezi suplimentare și mai complete pentru importanța enzimelor de fază 2 în reglarea susceptibilității la
agenți cancerigeni și mediarea chemoprotecției au fost obținute acum prin deleția genetică specifică. Multi
mono inductori funcționali (54), care ridică selectiv enzimele de fază 2 fără a induce enzime de fază 1, par să
facă acest lucru prin activarea elementelor de răspuns antioxidant (ARE) situate în regiunea 59-amonte a
multora dintre aceste enzime (44,45,52,58,59). Yamamoto și colegii săi (60,61) au descris recent un mecanism
important de reglementare a elementului ARE de către inductori care implică participarea Nrf2, un membru al
familiei de bază cu fermoar de leucidă a factorilor de transcriere. Legarea Nrf2 de ARE semnalează
transcrierea genelor care codifică enzimele de fază 2. În condiții bazale, Nrf2 este ancorat în citosolul celular în
primul rând prin legarea de chaperone Keap1, care este ea însăși legată de fibrele de actină. În prezența
inductorilor de fază 2, această combinație este întreruptă și Nrf2 migrează la nucleu, unde, în combinație
dimerică cu alți factori de transcriere, cum ar fi Mafs mici, se leagă de ARE și activează transcrierea genelor de
fază 2, ducând la creșterea sintezei enzimelor cognate. Experimentele recente (60-63) au arătat că șoarecii la
care a fost eliminată gena nrf2 au avut niveluri mai scăzute de glutation, chinonă reductază și alte enzime de
fază 2, precum și enzime de sintetizare a glutationului deprimat într-o serie de țesuturi; așa cum era de așteptat,
aceste enzime nu au fost, în esență, inductibile de o varietate de inductori de fază 2. Când șoarecii eliminatori
ai genei nrf2 au primit benzo[a]piren prin gavaj, ei au dezvoltat cu 50% mai multe tumori decât controalele lor
de tip sălbatic. Administrarea oltiprazului (un inductor) a redus multiplicitatea tumorală la șoarecii de tip
sălbatic cu .50%, în timp ce acest compus a fost complet ineficient la șoarecii mutanți ai genei nrf2. (64).
Aceste diferențe au fost semnificative (tabelul 2). Aceste experimente nu numai că oferă dovezi mult așteptate,
bazate pe genetica moleculară, că enzimele de fază 2 joacă un rol esențial în determinarea susceptibilității la
agenți cancerigeni și că inducerea lor duce la scăderea susceptibilității, dar sugerează, de asemenea, că
inducerea enzimelor de fază 2 este o strategie majoră de apărare, cel puțin în modelul examinat. În special,
incidența tumorii la șoarecii de tip sălbatic protejați (4,6 tumori/șoarece) este mai mică de o treime față de
șoarecii cu deficit de genă nrf2 (14,1 tumori/șoarece).

Răspunsul de fază 2: mecanisme prin care enzimele

de fază 2 protejează împotriva cancerului.
În 1967, Williams (65 de ani) a sugerat în mod oficial ca metabolismul xenobioticelor să fie considerat ca
implicând acțiunile în tandem a două familii de enzime, adică faza 1 și faza 2. Enzimele de fază 1 au făcut ca
compușii hidrofobi să funcționeze în mare parte prin oxidări și reduceri, în timp ce enzimele de fază 2 au
promovat conjugarea produselor de fază 1 cu liganzi endogeni, cum ar fi glutationul (prin glutation S-
transferases) și acidul glucuronic (prin UDP-glucuronosyltransferases), rezultând mai multe produse solubile
în apă care ar putea fi ușor excretate. Studii ample ale acestor enzime au arătat că enzimele conjugate sunt
induse de o mare varietate de agenți chimici sintetici și naturali care sunt coordonați cu un număr mare de alte
enzime.
Insert

(48-51). Deși modelele de inducție variază cantitativ în multe țesuturi, ele prezintă, de asemenea, multe
asemănări. Astfel, punctul de vedere restrâns al enzimelor de fază 2 ca promovarea reacțiile de conjugare au
evoluat într-o apreciere mult mai largă a domeniului lor de aplicare și a importanței lor funcționale. Vă
sugerăm ca aceste inducții să fie desemnate răspunsul de fază 2 și să fie definite de următoarele caracteristici:
1) inducția de coordonate prin mai mulți reprezentanți ai acelorași clase chimice de compuși care induc, de
asemenea, enzime clasice de fază 2 (glutation S-transferases și UDP-glucuronosyltransferases); 2)
reglementarea prin mecanisme similare și care pot implica comune promotorii și factorii de transcriere (de
exemplu, ARE și, respectiv, Nrf2); și 3) cataliza unei game largi de alte substanțe chimice reacții care
protejează celulele împotriva toxicului și neoplazic efectele electrofililor și ale speciilor reactive de oxigen
(50). Masă 3 oferă o listă parțială a enzimelor și a altor proteine care în prezent, sunt conforme cu aceste
definiții ale răspunsului din faza 2. Odată cu identificarea progresivă a mai multor participanți la faza 2
răspuns, punctul de vedere este în curs de dezvoltare că induse proteinele joacă un rol important și larg nu
numai în detoxicarea electrofililor (45), ci și ca un rol foarte important componenta apărării antioxidante a
celulelor (81). În combaterea stresului oxidativ, răspunsul de fază 2 diferă în moduri importante de activitățile
antioxidante ale moleculelor mici cum ar fi vitamina C și tocoferolii. Răspunsul fazei 2 este catalitic, are
acțiune prelungită (guvernată de timpul de înjumătățire al proteinele), este versatil din punct de vedere chimic
și este puțin probabil să producă efecte prooxidante. Prin urmare, răspunsul din faza 2 este în curs de
dezvoltare ca o componentă foarte importantă a apărării celulare împotriva oxidanților.
Insert


Insert
