anul 1926 prin izolarea unor bacili de dimensiuni mici numiţi Bacterium monocytogenes (numele de Listeria monocytogenes a fost admis oficial în anul 1940). Izolarea s-a făcut de la iepuri şi cobai, animale care prezintă mononucleoză sanguină. Listeria monocytogenes • În anul 1981 s-a evidenţiat faptul că această bacterie se poate transmite şi prin intermediul alimentelor. Începând cu această dată au fost întreprinse numeroase studii în diferite domenii: taxonomice, metode de identificare, ecologia bacteriei Listeria în produsele alimentare, determinarea factorilor de virulenţă, epidemiologia listeriozelor, etc. Filogenia şi taxonomia genului Listeria L. innoccua • Datorită caracterelor morfologice, Listeria a fost inclusă mult timp în fam. Corynebacteriaceae. Diferitele lucrări de taxonomie numerică au arătat că bacteriile din acest gen aparţin branşei filogenetice a bacteriilor din genul L. monocytogenes Clostridium, vecin cu genurile Brochothrix, Lactobacillus, Staphylococcus, Streptococcus. L. ivanovii
• Cercetări din ce în ce mai frecvente legate de g. Listeria
în nişe ecologice (în esenţă din mediul înconjurător şi purtători sănătoşi) au condus la izolarea suşelor atipice. L. murrayi • La ora actuală sunt recunoscute următoarele specii: L. Filogenia celor opt specii Listeria. Arborele monocytogenes, L. innoccua, L. ivanovii subsp. ivanovi descris în linii continue se bazează pe şi subsp. len doniensis, L. grayi şi L.murrayi, L. seeligeri variația nucleotidelor la 100 de gene nucleare, conform den Bakker et al. Cele şi L. welshimeri. trei linii mari ale L. monocytogenes sunt indicate cu cifre romane. Liniile punctate • Singurele specii patogene sunt Listeria monocytogenes indică faptul că ordinea de ramificare și (pentru om şi animale) şi L. ivanovii (pentru animale). distanța care duce la L. rocourtiae și L. grayi, cele două specii cele mai îndepărtate, sunt în prezent nedefinite pe baza acestui set de date (generat de S. Brisse). Caractere generale • Bacteriile din genul Listeria sunt bacterii foarte rezistente. Sunt bacili de dimensiuni mici, cu diametrul de 0,4 – 0,5μm şi lungimea de 0,5 – 2μm. Gram – pozitivi, nesporulaţi, nu sunt acido-alcool rezistenţi, nu prezintă granulaţii meta-cromatice, nu capsulează, sunt mobili la 20°C datorită flagelilor peritichi şi foarte puţin mobili la 37°C. • Se pot multiplica în soluţii concentrate de sare (> 10% NaCl) sau în prezenţa bilei. L. monocytogenes • Prin transiluminare directă, coloniile sunt de culoare bleu-gri şi prin transiluminare oblică sunt bleu-verzi. • Pot creşte într-un mediu cu pH = 5 – 9,6 cu un optim spre neutru sau uşor alcalin. Se dezvoltă la temperatura de 1 ... 44°C, cu un optim între 30 şi 37°C. • L. monocytogenes poate să crească la temperaturi de refrigerare, lucru care creează mari probleme la conservarea alimentelor la temperaturi de 4 ... 13°C . Răspândire - Sursa de agent patogen • Listeriile sunt germeni foarte răspândiţi, care au fost izolaţi din diverse nişe ecologice: sol, plante, furaje, silozuri, apă de rivieră, lacuri, apă de băut, nutreţuri, carne proaspătă şi congelată, lapte crud, brânzeturi, deşeurile abatoarelor. • Principalul rezervor îl reprezintă mediul înconjurător, unde bacteriile pot supravieţui un timp îndelungat. • Listeriile au fost izolate de la 42 de specii de L. Monocytogenes este prezentă în laptele de vacă. În mamifere şi 22 specii de păsări. La animale (oi, lapte, bacteriile nu sunt libere, ci înglobate intracelular capre, bovine) au fost izolate în special iarna şi în macrofage, ceea ce le conferă o rezistenţă sporită la primăvara datorită utilizării furajelor contaminate. pasteurizare. • Listeriozele se manifestă sub formă de septicemii, Sursele pot elimina listerii prin materii fecale, sânge (în infecţii ale sistemului nervos central, atacă bacteriemi), urină, secreţii uterine, vaginale, ciclu organele genitale producând avorturi la animale. menstrual, spermă, mucus nazal, secreţii oculare, lapte, bilă, produs de avort. • Purtătorii sănătoşi sunt omul şi animalele. Moduri şi căi de transmitere • Transmiterea L. monocytogenes se poate realiza atât prin modul direct (ca urmare a contactului strâns între om şi animal), cât şi indirect, fiind un agent patogen cu rezistenţă crescută în mediu şi poate folosi toate căile de transmitere: aer, apă, sol, alimente, mâini, obiecte, artropode contaminate. • Listerioza la animale apare ca urmare a contactului cu cele bolnave sau purtătoare de agent patogen. • Contaminarea are loc pe cale digestivă, prin ingerarea de apă, cereale sau alimente contaminate cu urina rozătoarelor, prin contactul cu diferite produse patologice: produs de avort, placentă, diverse secreţii, etc. Se raportează şi transmiterea Listeriei pe cale respiratorie, prin inhalare de praf contaminat. Moduri şi căi de transmitere • Intervenţia vectorilor hematofagi acarieni • Din 1980, au evoluat 7 epidemii şi este importantă, mai ales în menţinerea numeroase izbucniri de listerioză circulaţiei listeriilor la animale. umană în Europa Occidentală şi • Transmiterea listeriozei de la animale la America de Nord, în care alimentele au om poate avea loc pe cale: digestivă, fost implicate în transmitere. respiratorie, cutanată, conjunctivală. • Aceste alimente includ: salată de varză • Alimentele contaminate constituie cea mai importantă cale de transmitere a fertilizată cu îngrăşăminte naturale Listeriei la om. (Canada, 1981), lapte contaminat şi • Astfel, laptele neprelucrat termic, provenit după pasteurizare (Boston, SUA, 1983), de la vaci cu mamită listeriană sau brânză mexicană (Los Angeles, SUA, contaminat cu urina rozătoarelor, 1985), brânză (Elveţia, 1987), paté brânzeturile, ouăle, carnea contaminată şi (Marea Britanie, 1987-1989), limbă de insuficient prelucrată termic sunt căi de porc în aspic (Franţa, 1991), carne de transmitere a Listeriei la om. porc tocată şi prăjită (Franţa, 1991). Moduri şi căi de transmitere • Listeria se întâlneşte frecvent în cursul proceselor de fabricare a produselor alimentare. L. monocytogenes este un microorganism care formează cu uşurinţă colonii pe suprafeţele reci, umede şi murdare. Din această cauză trebuie să se acorde o importanţă deosebită igienei materiilor prime şi materialelor, operaţiunilor tehnologice, eficienţei curăţirii şi dezinfecţiei, igienei personalului şi modalităţii de manipulare a produselor alimentare. Aplicarea sistemelor de tip HACCP permit o supraveghere eficientă a proceselor de fabricaţie. • Produsele alimentare sensibile trebuie conservate şi transportate la un regim corespunzător de temperatură până ajung la consumator. • În anul 1988, după studii de termorezistenţă a L. S-a constatat că, în vitro, L. monocytogenes este sensibilă la monocytogenes, s-a ajuns la concluzia că prin pasteurizare diferiţi dezinfectanţi: alcooli, săruri de amoniu cuaternare, germenii de Listeria sunt distruşi. peroxizi, etc. (Jacquet şi Reynauld, 1994). În ceea ce priveşte • Tot pentru distrugerea lor se pot utiliza şi alte metode, cum arinactivarea în prezenţa clorului, aceasta este influenţată de fi: radiaţiile ionizante şi UV (El-Shenawy ş.a., 1989; Garages concentraţia în clor activ, pH, temperatură, timpul de expunere, ş.a., 1990). Creşterea bacteriei poate fi frânată prin sistemul prezenţa substanţelor organice, tipul de suşe (Jacquet şi lactoperoxidază (Gaya ş.s., 1991; Zapico ş.a., 1993), prin adiţionare de conservanţi ca lizozima, peroxidul de hidrogen, Reynaud, 1994; Tuncan, 1993). Puterea de inactivare a acestor benzoatul de sodiu, acidul sorbic, acidul lactic, acetic şi formicdezinfectanţi a fost testată pe suprafeţele contaminate. (Ostling şi Lindgren, 1993). Rezultatele au arătat că eficienţa depinde de calitatea suprafeţelor şi de prezenţa altor microorganisme. Virulenţa şi puterea patogenă a listeriei • Virulenţa este dată de capacitatea de a penetra în celule, iar după multiplicare se propagă în ţesuturi, trecând de la o celulă la alta. Există un număr mare de factori care sunt implicaţi în diferite etape ale ciclului infecţios. • L. monocytogenes pătrunde în celule datorită unei proteine de suprafaţă, internalina. Listeriolisina O este factorul de virulenţă principal al listeriei, care îi permite să iasă din vacuola fagocitei. Mecanismul de invazie cu L. monocytogenes în celulele mamiferelor (intrare, multiplicare intracelulară, mişcare Bacteria liberă în citoplasma celulei intracelulară, pasaj între celule, fagocitoză) infectate se multiplică. Pentru a se deplasa în citoplasma celulei, bacteria polimerizează actina celulară. Receptivitatea
• Este generală, cu o frecvenţă şi gravitate mai crescută a infecţiei la nou-
născuţi, prematuri, distrofici, la persoanele tarate şi imunosupresate sau la vârstnici. • La persoanele cu rezistenţă normală, infecţia evoluează inaparent sau cu manifestări locale nespecifice. • Agentul patogen rămâne cantonat la poarta de intrare, determinând: rinite, angine, conjunctivite, uretrite, infecţii ale tractului genital feminin, afecţiuni cutanate. • Scăderea receptivităţii este asociată cu nivelul optim al barierei acide gastrice şi integritatea mucoasei. Factorii dinamizatori-favorizanţi • Sunt dependenţi de contactul frevent şi apropiat cu posibile surse animale. • Se remarcă o frecvenţă mai crescută a bolii la persoanele din mediul urban faţă de cei din rural şi apariţia cazurilor în lunile iulie-august. • Dintre factorii socioeconomici, se remarcă caracterul ocupaţional al bolii, întâlnită la crescătorii de animale, păsări, în industria de prelucrare a pieilor, blănurilor, veterinari, etc. • La om, îmbolnăvirile sunt sporadice, cu caracter ocupaţional sau de tip epidemic, după consum de alimente contaminate. • Manifestările epidemice sunt descrise ca focare de boală produsă de o tulpină unică sau asocierea unor tulpini multiple. Semne clinice de recunoaştere • Infecţia cu L. monocytogenes • Listerioza la gravide este dificil de evoluează variat, de la infecţii depistat, cu excepţia formelor rare asimptomatice la forme grave septicemice sau meningiene. (septicemii, meningoencefalite), cu • Manifestările cele mai frecvente sunt mortalitate crescută (40 – 50%). tulburările digestive, subfebrilitate • Perioada de incubaţie variază între 4 izolată şi pasageră de tip viral. zile şi 3 săptămâni, iar la nou-născuţi 3 – 5 zile. • Diagnosticul este sugerat de asocierea la episodul febril a avortului sau a • La adult şi copil predomină formele naşterilor premature, apirexia localizate, cele mai frecvente fiind cele instalându-se după expulzia meningiene, iar la nou-născut cele produsului de concepţie. sistemice. • L. monocytogenes are tropism marcat pentru sistemul nervos şi placentă. Prevenţia şi combaterea • Respectarea normelor igienice de prevenire a • Măsurile aplicate pentru prevenţia listeriozei sunt îmbolnăvirilor cu poartă de intrare digestivă; exclusiv generale, neexistând metode specifice şi speciale. • Decontaminări prevenţionale în unităţile de risc (ferme de animale şi păsări, unităţi alimentare, restaurante de • Măsuri generale: tip „fast-food”); - Supraveghere activă epizootologică a colectivelor • Controlul riguros pentru prevenirea contaminării de animale pentru depistarea cazurilor de boală şi alimentelor (producători, industria alimentară, aplicarea diferenţiată a măsurilor de combatere; comerţ); - Supraveghere epidemio-epizootologică şi • Măsuri de igienă alimentară: bacteriologică la animalele domestice şi sălbatice; - Reducerea riscului contaminării cu Listeria prin - Măsuri de protecţie a muncii în sectoarele evitarea consumului de lapte crud şi a derivatelor profesionale expuse riscului de infecţie, cu termice ale alimentelor crude de origine animală; supraveghere epidemiologică activă a personalului; - Spălarea legumelor şi a ierburilor aromatice; - Controlul gravidelor pentru identificarea şi tratarea - Păstrarea (depozitarea) alimentelor crude (carne. cât mai precoce a infecţiei în vederea eliminării legume) separat de alimentele preparate; riscului transmiterii la făt sau la nou-născut; - Spălarea mâinilor , curăţirea ustensilelor de bucătărie - Educaţia pentru sănătate a populaţiei privind după manipularea alimentelor neprelucrate termic; evitarea contactelor cu animalele bolnave; - Igienizarea frecventă şi decontaminarea cu cloramină a aparatelor de refrigerare. Salmoneloza - boli determinate de bacterii • Genul Salmonella prezintă o importanţă deosebită pentru industria alimentară, datorită pierderilor economice pe care le produce şi datorită toxiinfecţiilor alimentare. • Infecţiile cu Salmonella reprezintă în prezent cauza cea mai frecventă de diaree acută bacteriană de origine alimentară. • În ultimii ani, numărul cazurilor de toxiinfecţii produse de Salmonella au crescut considerabil datorită următoarelor cauze: Salmonella - creşterea intensivă a animalelor şi păsărilor; - prelucrarea şi prepararea neigienică a produselor alimentare; - stocarea alimentelor (produse congelate); - creşterea numărului de consumatori în unităţi colective (cantine, restaurante, etc.); - extinderea comerţului; - poluarea intensivă a apelor de suprafaţă şi a solului; - selectarea de tulpini multirezistente la antibiotice. Salmoneloza - boli determinate de bacterii • Genul Salmonella include peste 2500 de serotipuri capabile să infecteze o gamă largă de gazde.
Salmonele adaptate Salmonele comensale Slamonele care nu s-au
gazdelor umane, sau patogene pentru adaptat unei gazde S. Typhi şi S. Paratyphi animale, specifice, ce cauzează A, ce produc febrele S. Dublin şi S. infecţiile salmonelozice enterice Choleraesuis non-tifoidice Agentul etiologic • Genul Salmonella aparţine fam. Enterobacteriaceae, datorită unor • Sunt bacili Gram negativi, aerobi şi caractere care o definesc. facultativ anaerobi, mobili, • Majoritatea suşelor de Salmonella nesporulaţi şi necapsulaţi. izolate în patologia umană sau • Cresc uşor pe medii de cultură animală cu sânge cald aparţin simple. subspeciei S. enterica. • Pe medii selective cu lactoză dezvoltă • Exemple: S. Typhi, S. Paratyphi sunt colonii lactozo-negative. adaptate la gazde umane, S. Abortus • Fermentează glucoza cu producere de ovis la ovine, S. Gallinarum/Pullorum gaz, nu fermentează lactoza, produc la păsări, S. Typhisuis la porcine. H2S, nu formează indol, nu produc urează, cresc pe medii cu citrat. Agentul etiologic • Rezistenţa salmonelelor în mediul • Temperatura de 60°C reduce cu 90% extern este mare, supravieţuind numărul germenilor viabili în 30-40 perioade variabile de timp pe minute. diverse suporturi materiale. • Decontaminantele uzuale (fenol, • Exp: pe solul contaminat, S. Typhi formol, glutaraldehidă) distruge S. supravieţuieşte ~ 10 săptămâni, pe Typhi în 30 minute până la 2 ore, zarzavaturi şi fructe câteva zile, pe decontaminanţii pe bază de clor sunt rufărie 14 zile. activi la concentraţii de 150 – 250 ppm clor activ, iodoforii au acţiune • 30 zile în apa de profunzime, 8 – 10 bactericidă şi mai marcată, la zile în apele de canal, 2 – 3 luni în concentraţii de 25 – 50 ppm iod. gheaţă. • S-a remarcat o creştere a numărului • În lapte, unt, brânzeturi rezistă 1-3 de tulpini rezistente la antibiotice. săptămâni. Virulenţa • Mecanismul principal de agresiune al salmonelelor constă în capacitatea de aderare la enterocit prin intermediul fimbriilor, adezinelor de suprafaţă sau a hemaglutininelor; de internalizare controlată cromozomial şi de multiplicare în celula-gazdă. • Plasmidele de virulenţă stimulează multiplicarea excesivă şi rapidă a salmonelelor. • Factorul principal de virulenţă al S. Typhi şi S. Paratyphi este antigenul „Vi”. • Toxigeneza salmonelelor este asigurată de enterotoxina şi citotoxina, care blochează Mecanismul principal de agresiune al salmonelelor mecanismele energetice şi inhibă sinteza proteică. Sursele de agenţi patogeni • Bolnavii cu febră tifoidă – sursă de germeni în toate stadiile bolii. • Excreţia de bacil tific se face mai ales prin materiile fecale. • Purtătorii de germeni: - purtătorii preinfecţioşi – elimină în perioada de incubaţie a febrei tifoide; - purtătorii foşti bolnavi – temporari sau cronici uneori intermitent, ani de zile, chiar toată viaţa; - purtătorii sănătoşi – purtători de contact, persoane din anturajul bolnavilor, care nu fac boala. Moduri şi căi de transmitere • Mod direct – prin contactul cu produsele patologice ale bolnavilor (γ în familii aglomerate şi în colectivităţi de asistenţă medico-socială, închisori, lagăre pentru refugiaţi). • Mod indirect – când intervin: apa, alimentele, solul, obiectele contaminate, mâinile, muştele domestice contaminate. Cel mai frecvent sunt contaminate bazinele naturale, fără a fi exclusă posibilitatea de contaminare a apei de adâncime sau chiar a apei de distribuţie centrală. Moduri şi căi de transmitere • Rolul alimentelor de origine animală (lapte, brânzeturi, carnea de pasăre şi porc, ouăle şi praful de ouă, moluştele) contaminate pe tot parcursul procesului de producţie de către om, rozătoare, muşte, sol, apă, obiecte, este deseori semnalat. • Mâncărurile insuficient tratate termic sau care se consumă în stare naturală (maioneza, cremele, îngheţata) pot vehicula S. Typhi sau Obiectele, îndeosebi vesela şi tacâmurile alte salmonele. contaminate, sunt mai rar semnalate în • Produse de cofetărie – medii hiperzaharate. transmiterea complexă, • Legumele, zarzavaturile, fructele, consumate „în ştafetă”, a salmonelelor. crude, sub formă de salate. Receptivitatea Factorii favorizanţi 1. economico-sociali: lipsa sau • Este generală. neglijarea deprinderilor igienice, • Există unii factori individuali de aglomeraţiile, deplasările de populaţie, salubrizare deficitară, lipsa apărare care induc o stare de apei potabile; rezistenţă a organismului: aciditatea şi motilitatea gastrică şi flora 2. naturali: ploi torenţiale, dezgheţ intestinală normală. brusc, inundaţii. • Anomaliile acestor mecanisme cresc Factorii naturali favorizează sezonalitatea nu numai riscul de infecţie, dar şi de vară-toamnă a bolii pentru zonele severitatea bolii. temperate, în paralel cu înmulţirea muştelor, consumul de zarzavaturi şi fructe crude şi temperaturile ridicate, care afectează calitatea alimentelor perisabile. Semne clinice • Incubaţia are o durată de 7 – 21 zile, cu o medie de 14 zile, invazia durează 7 zile, debutul este insidios, cu febră treptat ascendentă, însoţită de oboseală progresivă, cefalee, inapetenţă, insomnii sau somnolenţă, scaune moi cu aspect verzui, splenomegalie. • Perioada de stare, cu o durată de 12 – 14 zile, febră, scaune diareice, abdomen sensibil şi meteoric, splenomegalie. • Convalescenţa – în funcţie de severitatea bolii durează de la 7 – 14 zile la mai multe săptămâni. • Manifestările clinice ale infecţiilor cauzate de salmonelele majore şi minore pot fi clasificate în patru mari sindroame: 1. gastroenterite, 2. febrele enterice, 3. bacteriemie cu sau fără metastaze, 4. stare de purtător. Prevenţia şi combaterea • Lupta contra salmonelelor presupune aplicarea unor măsuri complexe, de constrângere, începând cu stadiul de producere a alimentelor până la consumator. Aceste măsuri trebuie aplicate riguros şi constant, lucru destul de dificil de realizat. • Intervenţiile trebuie luate la diferite niveluri: - eradicarea salmonelelor la animalele producătoare de alimente. Este acţiunea primordială a producătorilor de animale. Puii pot să se nască contaminaţi datorită prezenţei S. Enteritidis în ouăle incubate. Contaminarea ouălor poate să intervină la nivelul foliculelor ovariene sau în oviduct (gălbenuş şi albuş). Menţinerea ouălor purtătoare de salmonele la temperaturi favorabile poate duce la o creştere de aproximativ 1011 S. Enteritidis. - utilizarea antibiopreventivelor, vaccinarea, aplicarea conceptului „Nurmi” (administrarea de floră cecală adulţilor sau puilor tineri) sunt câteva măsuri care trebuie luate. Prevenţia şi combaterea • În cadrul directivelor C.E. din 15.03.1993 se impune, în Europa, aplicarea unei politici de prevenire contra zoonozelor şi se acordă o importanţă deosebită luptei contra salmonelelor, în special la păsări; - decontaminarea produselor alimentare crude şi supravegherea lanţurilor de producţie în industria agroalimentară. Spălarea carcaselor de carne cu diferite produse, în special utilizând acizi organici sau PO4Na3, reprezintă o măsură obligatorie şi eficientă (Dicksen şi Anderson, 1992). Ionizarea reprezintă o măsură de mare interes (Deev, 1993). Aplicarea sistematică a tehnicilor de calitate, în particular a sistemului HACCP reprezintă o altă măsură; - prepararea şi conservarea alimentelor. De cele mai multe ori la prepararea pe cale industrială sau familială a produselor alimentare apar probleme de igienă care conduc la toxiinfecţii alimentare. Formarea personalului care lucrează în industria alimentară, şi a consumatorilor, în sensul respectării regulilor simple de igienă reprezintă una dintre condiţiile de bază pentru evitarea TIA (O.M.S. - 1989). • Igiena personală, respectarea lanţului frigorific, respectarea baremurilor de fierbere, menţinerea temperaturilor în afara zonelor de multiplicare, curăţirea şi dezinfecţia sunt măsuri absolut necesare şi trebuie respectate. • Ansamblul acestor măsuri de prevenire constituie evident un program foarte vast, care necesită importante mijloace şi care presupune că nici una din verigile lanţului alimentar nu trebuie să fie deficitară.