Bia G.

Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

Universitatea de tiine Agricole i MedicinVeterinar Cluj-Napoca

Facultatea de Medicin Veterinar coala Doctoral

BIA G. ROMULUS

REZUMAT al TEZEI DE DOCTORAT

Cercetri epidemiologice, anatomoclinice i curativoprofilactice n ectima contagioas a oilor i caprelor n judeul Bistria-Nsud

CONDUCTOR TIINIFIC Prof. univ. dr. GHEORGHE RPUNTEAN

CLUJ-NAPOCA 2010
___________________________________________________________________________ 251

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

REZUMAT
Ectima contagioas este o boala infecioas a oilor i caprelor cu evoluie acut, produs de un virus epiteliotrop, caracterizat clinic printr-o erupie veziculopustuloas cu localizri predominant peribucale i bucale, i mai rar podale, mamare, genitale i oculare. n literatur strin ectima contagioas mai este cunoscut sub denumirile: Orf, Sore Mouth i Contagious Pustular Dermatitis. Ectima contagioas produce pagube economice importante, fie prin mortalitate, mai ales la tineret, fie prin complicaiile care pot s apar datorit infeciilor secundare. Mortalitatea cea mai ridicat se ntlnete la miei i iezi cu forma acut care, din cauza leziunilor bucale i peribucale, refuz suptul i pot muri prin nfometare sau inaniie. La tineretul ovin i caprin cu leziuni bucale i peribucale au loc pierderi economice datorit consumului mai redus de furaje, urmate de scderi n greutate, n formele grave clinic chiar i prin mortalitate. n localizarea mamar oile mame refuz s alpteze miei din cauza durerii, acetia slbesc i pot muri, iar la oi pierderile economice sunt datorate att slbirii i scderii n greutate ct i scderii produciei de lapte. Din cauza faptului c de cele mai multe ori rata mortalitii este sczut, boala este uor trecut cu vederea de ctre cresctorii de animale, neglijnd faptul c virusul are o mare rezisten n mediul exterior, ceea ce face ca boala s se menin de la un an la altul, iar odat aprut ntr-o populaie descoperit imunologic, virusul se rspndete cu repeziciune, i poate provoca forme grave de boal cu producerea de pierderi economice nsemnate. Studiul epidemiologic s-a efectuat n perioada 2006-2009 fiind cercetate populaiile de ovine i caprine existente n arealul judeului Bistria Nsud, att din gospodriile populaiei, ct i din unele ferme de cretere intensiv a tineretului ovin, putndu-se concluziona c n arealul studiat ectima contagioas are o rspndire endemic, cu o inciden variabil de la o turm/ferm la alta. n ferma Livezile din judeul Bistria Nsud, n care se crete tineret ovin din rasa urcan pentru producia de carne, ectima contagioas a avut o morbiditatea care s-a ncadrat ntre 32% i 45%, n cei patru ani investigai. n privina rspndirii
___________________________________________________________________________ 252

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

temporale n ferma studiat, s-a putut constata un numr sporit de cazuri n anul 2006 (42,0%), urmat de o scdere n 2007 (32,0%), pentru a urma o evoluie ascendent n anii 2008 (37,0%) i 2009 (45,0%). Mortalitatea s-a nregistrat la un numr redus de cazuri, fiind cuprins ntre 4% pn la 8%. Curba mortalitilor urmrete ndeaproape curba morbiditii, fiind corelat cu dinamaica mbolnvirilor. n cazul gospodriilor populaiei boala a evoluat concomitent la oile i caprele adulte mulgtoare n toat perioada studiat, incidena i prevalena mbolnvirilor prezentnd variabilitate n funcie de specie (oi, capre), caprele dovedindu-se mai sensibile comparativ cu oile. Curba morbiditii la cele dou specii a avut o configuraie asemntoare la nivelul circumscripiilor, dar la ovine a fost n toate cazurile inferioar celei de la caprine. Mortalitatea a fost sczut nedepind 1%-2%, i s-a nregistrat numai n dou-trei turme de caprine, n cele n care morbiditatea a fost ridicat. n baza analizei valorii medii anuale a morbiditii (cumulat la cele dou specii) s-a constatat existena unei variabiliti de la un an la altul a acestui indicator de frecven, fiind nregistrate urmtoarele valori: 2006 (29,55%), 2007 (20,90%), 2008 (30,33%), 2009 (26,33%). Acest mod de evoluie s-a produs mai mult prin sporirea numrului de cazuri n cadrul turmelor (intensivitate) i nu att prin sporirea numrului de focare (extensivitate). n privina rspndirii spaiale a bolii la fermele particulare, s-a constatat c din cele 56 CSV existente pe raza judeului Bistria Nsud, s-au nregistrat focare de ectim n mai multe circumscripii, dup cum urmeaz: n anul 2006 n 17 (30,35%), n anul 2007 n 11 (19,64%), n anul 2008 n 15 (26,78%), n anul 2009 n 14 (25,0), rezultnd o morbiditate medie de 25,44%. Analiznd distribuia spaial a focarelor s-a constatat o zonare a circumscripiilor cu focare de boal, ceea ce nseamn c ntre acestea exist relaii comerciale mai strnse ntre efectivele de ovine i caprine din aceste circumscripii, fie prin cumprri, schimburi de animale (mai ales masculi de reproducie), care favorizeaz transmiterea virusului. Se precizeaz c n arealul judeului Bistria Nsud boala se ntlnete n turmele din mai multe circumscripii, n care are tendin de permanentizare ca urmare a persistenei surselor de infecie de la un an la altul, aspect favorizat de rezistena ridicat a virusului timp de mai muli ani n mediul exterior. Acest aspect este observat mai ales pentru turmele care nu schimb
___________________________________________________________________________ 253

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

punea de la un an la altul. Trebuie subliniat faptul c focarele i-au meninut n mare parte rspndirea teritorial, fiind amplasate n partea de Nord i Nord-Est a judeului (zone cu dealuri i premontane, cu multe puni), ceea ce nseamn o permanentizare a surselor de infecie, ct i meninerea schimburile comerciale att ntre fermele din arealele respective, ct i cu judeele nvecinate zonelor respective. Din punct de vedere anatomo-clinic, trebuie artat c s-au constatat aspecte diferite, care s-au corelat cu factorii intrinseci (vrsta, rezistena individual, statusul imun, starea fiziologic) i cu factorii extrinseci (sistemul de exploatare, condiiile de ntreinere, condiiile de igien i starea punilor etc.). La tineretul ovin din fermele de ngrare la cele mai multe cazuri s-au constatat leziuni localizate peribucal, constatndu-se formarea de cruste aprute mai frecvent la comisurile buzelor, cu extindere pe conturul buzelor, aripile nasului i n cavitatea bucal. Crustele formate erau de grosimi diferite n funcie de vechimea bolii, erau aderente de esuturile subiacente, iar la desprindere sngerau foarte uor. Cu toate c densitatea n adposturi era ridicat nu s-au nregistrat alte localizri, dei unii dintre miei prezentau chiopturi ca urmare a unor leziuni localizate interdigital sau coronar, ns acestea au fost considerate ca aspecte ale necrobacilozei, mai ales c aceti subieci nu prezentau leziuni peribucale sau bucale. n cazul oilor i caprelor mature mulgtoare, aparintoare proprietarilor particulari, leziunile de la nivelul mamelei, respectiv al mameloanelor, au fost net dominante i n mare msur exclusive. Caprele s-au dovedit mai sensibile, la acestea leziunile au fost mai extinse i mai grave, comparativ cu oile. n urma nregistrrii leziunilor la un numr de 21 capre i oi cu leziuni s-au putut sintetiza urmtoarele aspecte: 28,57% au avut afectate ambele mameloane (gradul de afectare nu era acelai pe ambele mameloane); 71,42% au avut afectat un singur mamelon; au fost rare cazurile surprinse n faza de macul (9,52%), respectiv vezico-pustul (57,14%) i cele mai multe cazuri se gseau n faza de crustizare, respectiv (90,47%); prinderea ntregului mamelon s-a ntlnit la 38,09%, prezena a 2-3 leziuni aflate n faze diferite de erupie s-a constatat la 53,38% i cazuri la care s-a constatat o leziune singular pe un mamelon la 33,33%.
___________________________________________________________________________ 254

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

Complicaiile cu mamit s-au constatat la un numr de 11 cazuri (53,38%), iar alte complicaii s-au ntlnit tot la 11 cazuri (53,38%) ce au constat din: hemoragii consecutive desprinderii crustelor; erupii n faza de macul pe pielea mamelei n apropierea bazei mameloanelor; cianoza pielii mamare pe zone mai mult sau mai puin extinse n cazul complicrii cu mamite; complicaii purulente cu prezena puroiului sub cruste, evideniat mai ales la ridicarea acestora; mai rar s-au constatat leziuni cu aspect de ulcere cu tendin de necrozare. La unele animale cu mamit s-a constatat i hipertrofia limfonodulilor retromamari i tulburri generale, manifestate prin apatie, febr, inapeten, sensibilitate mamar i modificri ale secreiei lactate. La mieii din gospodriile particulare leziunile de ectim s-au ntnit mai rar, evolund cu forme peribucale i bucale foarte grave, favorizate i de lipsa de ngrijire ceea ce a dus la agravarea leziunilor prin compliciile secundare; la acetia s-au constatat i leziuni perianale i la faa intern a cozii. Rspndirea bolii n populaia de oi i capre lactante a fost favorizat de mieii care prezentau forme bucale, dar i de ctre mulgtori cu ocazia efecturii mulsului. Pentru confirmarea diagnosticului s-au efectuat examene de laborator: examen histopatologic pentru evidenierea leziunilor care sunt caracteristice; examen imunologic pentru evidenierea anticorpilor prin tehnici de imunodifuzie n gel de agar i examen bacteriologic pentru evidenierea florei bacteriene care intervine n producerea complicaiilor de suprainfecie. n seciunile histologice efectuate din probe de esuturi recoltate de la miei cu forme de ectim peribucal i de la oi/capre cu leziuni ale mameloanelor, s-au constatat modificri patologice la nivelul epidermului, care au relevat evoluia unui proces inflamator de tip eruptiv, caracteristic la modul general, virusurilor din familia Poxviridae. S-au evideniat leziuni de dermatit supurat cu necroza epidermului i un infiltrat predominant neutrofilic n dermul profund i n epiderm cu hiperkeratoz, fiind afectate straturile spinos, granular, lucidum i cornos, cu un bogat infiltrat inflamator limfohistiocitar i neutrofilic. Au fost constatate aspecte n care apare o reacie proliferativ a epidermului, ce a nceput cu degenerare hidropic i picnoza nuclear a keratinocitelor, cu numeroase mitoze n stratul bazal, iar papilele dermice apareau semnificativ alungite. S-a mai evideniat vacuolizarea keratinocitelor din
___________________________________________________________________________ 255

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

stratul spinos, proliferare epidermal acantoz, apariia de microabcese intraepidermale i constituirea crustelor la suprafa, degenerescen vacuolar a celulelor din stratul spinos i granular, cu apariia de incluzii acidofile intracitoplasmatice cu dimensiuni de 4-8 m, leziuni cu mare semnificaie pentru diagnostic. Pentru efectuarea testelor imunologice s-a procedat la prepararea unui antigen dup un procedeu propriu, folosind cruste recoltate de la mieii cu leziuni peribucale, care au fost supuse triturrii mecanice (mojararea), i unor cicluri de nghe-dezghe i ultrasonicare, urmare de centrifugare. Supernatantul obinut s-a folosit n reaciile de imunodifuzie (tehnica Ouchterlony i tehnica Mancini). Prin testul de imunodifuzie n gel de agar s-au testat un numr de 25 probe de ser provenite de la tineret ovin care se afla n faza de evoluie a bolii cu prezena de cruste peribucale i bucale, sau aflai n faza de tratament, ct i 30 probe (15 oi i 15 capre) care prezentau leziuni mamelonare. S-au examinat i un numr de 25 probe ser prelevate de la tineret ovin dintr-o turm din judeul Cluj, n care nu a evoluat ectim contagioas (probe martor negative). La toate cele 25 de probe provenite de la tineretul ovin din ferma Livezile care prezentau leziuni de ectim, s-au nregistrat reacii pozitive. S-a evideniat o singur linie de precipitare la 21 (84,0%), la 4 (16,0%) s-au evideniat dou linii de precipitare, prezentnd comunitate ntre godeurile adiacente. Reaciile s-au citit zilnic, ncadrarea definitiv s-a fcut la 72 de ore, plcile fiind meninute n microcamere umede. n privina amplasrii liniilor de precipitare se poate arta c din cele 25 probe examinate, la 15 (60,0%) linia a fost plasat la jumtatea distanei dintre godelul cu antigen i godeurile cu serurile de examinat, la 4 (16,0%) linia de preciptare era plasat spre godeul cu antigen, iar la 6 (24,0%) linia de preciptare a fost plasat spre godeurile cu ser. Toate probele provenite de la tineret din judeul Cluj, au fost negative ceea ce demonstreaz c antigenul preparat are o bun sensibilitate i specificitate. Probele provenite de la capre au prezentat reacie pozitiv un numr de 11 (73,3%), reacia fiind intens i bine exprimat la 24 de ore, iar din probele de la oi au fost pozitive 12 (80,0%), reacia fiind mai slab exprimat, de aspect lax i interpretabil la 36 de ore.
___________________________________________________________________________ 256

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

Prin tehnica Mancini s-au examinat un numr de 10 probe pozitive la testul de imunodifuzie simpl. Toate serurile testate au dat reacie pozitiv, zonele circulare de precipitare au avut un diametru cuprins ntre 8-12 mm la 3 zile (media 10 mm) i ntre 10-14 zile la 5 zile (media 12 mm). Se demonstreaz capacitatea de difuzare a antigenului i producerea zonelor circulare de precipitare n condiii de echivalen dintre antigen i anticorpii ncorporai n gelul de agar. Privitor la tipul anticorpilor care s-au sintetizat n urma infeciei cu virusul ectimei contagioase, se poate considera c acetia aparin clasei IgG, n baza faptului c s-au identificat prin reacii de precipitare (precipitine), ct i a faptului c s-au produs ntr-o faz mai trzie de evoluie a bolii. Se poate preciza c testele imunologice de difuziune n geluri de agar sunt teste simple, uor de efectuat n orice laborator i care permit prelucrarea rapid a unui numr mare de probe, mai ales prin testul de dubl imunodifuziune; n plus apreciem c aceste teste au i o bun sensibilitate i pot fi utilizate pentru confirmarea diagnosticului mai ales n focarele n care boala apare pentru prima dat i trebuie fcut diferenierea de alte boli eruptive sau care evolueaz cu leziuni difteroide i necrotice. Examenele bacteriologice efectuate din probe recoltate de la miei i tineret ovin cu leziuni peribucale i bucale de ectim, ca i de la oi/capre cu leziuni ale mameloanelor, au permis evidenierea n toate probele examinate a unor bacterii att Gram pozitive, ct i Gram negative, care alctuiau flora microbian de suprainfecie care complic leziunile produse de virusul ectimei. Caracterizarea bacteriilor evideniate prin examenul bacterioscopic sau izolate pe mediile de cultur, s-a fcut n baza aprecierii caracterelor morfologice, a caracterelor culturale, a unor particulariti structurale, a afinitii tinctoriale, i comportarea la KOH 3%, scopul fiind stabilirea apartenenei la un gen i nu de identificare a speciei. Examenul bacteriologic a permis izolarea de tulpini bacteriene care, n baza caracterelor culturale i morfologice (frotiuri din culturi), au aparinut urmtoarelor genuri: Bacillus, Staphylococcus, Arcanobacterium, Streptococcus, Diplococcus, Micrococcus, Neisseria, Fusobacterium i Clostridium. S-au identificat i tulpini de bacterii Gram negative care, n baza caracterelor morfologice, aspectul coloniilor i gelifierea suspensiei n
___________________________________________________________________________ 257

Bia G. Romulus _______________________________________________ Tez de doctorat

soluia de KOH 3%, au corespuns n general celor din familia Enterobacteriaceae; prezena lor a fost ns mai redus comparativ cu a cea bacteriilor Gram pozitive, care au fost dominante. Un numr de 5 tulpini aparinnd genurilor Bacillus, Staphylococcus, Arcanobacterium, Micrococcus i Escherichia, au fost testate prin antibiogram fa de un numr de 9 microcomprimate cu antibiotice, n scopul recomandrii celui mai eficace antibiotic pentru a fi utilizat n efectuarea tratamentelor n scopul combaterii infeciilor bacteriene secundare. Cele nou antibiotice testate au manifestat efect antibacterian n urmtoarea ordine n funcie de numrul tulpinilor i a zonelor de inhibiie: oxitetraciclina (20-30 mm); enroxilul (20-24 mm); amoxiclilina* (18-30 mm), spectinomicina* (16-20 mm); florfenicol* (26-30 mm); flumequin* (12-26 mm), colistin (10-16 mm), sinulox* (14-30 mm) i ceftiofur* (12-20 mm). * 1-2 tulpini au manifestat rezisten la antibioticul respectiv. n efectuarea tratamentelor s-a recomandat includerea n formulele terapeutice a oxitetraciclinei, antibiotic care s-a dovedit eficace fa de toate tipurile de tulpini testate. La tineretul ovin din ferma de cretere pentru carne care prezentau forme peribucale i bucale, au fost fcute tratamente locale timp de 3-5 zile (dup ndepratrea crustelor) folosind produse condiionate n flacoane spray: Terramycin (Pfizer), Alamycin (Norbrook) i Donarom (Romvac). Eficacitatea produselor utilizate a dus la ameliorarea treptat a leziunilor dup 3 zile de tratament i la vindecarea a peste 90,0% din cazurile tratate dup 5 zile. La femelele cu forme mamare de boal tratamentele s-au fcut prin aplicaii locale zilnic, timp de 3-5 zile, cu o medicaie constituit dintr-o substan antiseptic (albastru de metilen), un antibiotic cu spectru larg (oxitetraciclin) i o substan emolient (osmatin, vaselin, miere de albine, untur de porc). n urma tratamentelor efectuate s-a constatat o ameliorare a leziunilor dup 3 zile i vindecarea dup 5 zile la mai mult de 90,0% din animalele tratate. Pentru prevenirea rspndirii bolii s-a recomandat un set de msuri bazate pe respectarea msurilor de profilaxie general, viznd ndeosebi controlul circulaiei animalelor i a produselor, achiziionarea de tineret pentru populare numai din ferme indemne, efectuarea regimului de dezinfecii i dezinsecii pentru a reduce presiunea de contaminare i modalitile de difuzare a virusului.
___________________________________________________________________________ 258