17.

Clonarea animalelor: principiu, metode i rezultate

Prin clonare se produc animale identice din punct de vedere genetic. Scopul clonrii animalelor
este multiplicarea unor exemplare valoroase, recordiste.
Clonarea animalelor se poate realiza prin:
a) Secionarea unui embrion tnr la care celulele nu sunt nc difereniate (n celule
epiteliale, epatice, musculare, nervoase etc.). !a vac, dup secionarea em"rionului n
stadiul de #$% celule, fiecare fragment em"rionar transplantat ntr$o mam adoptiv a dat
na&tere unui viel, toi produ&ii rezultai fiind identici din punct de vedere genetic (clone).
Procedeul se practic cu succes la vac dar se o"in foarte puini descendeni identici ('$().
") Transferul nucleului unei celule somatice de adult sau de embrion ntro o!ocit
enucleat, cunoscute ca &i metode de clonare prin transfer nuclear. Prin aceast metod se
pot o"ine teoretic un numr nelimitat de clone, deoarece pot fi extra&i un numr foarte mare
de nuclei din celule somatice de la acela&i individ iar clonele pot fi clonate la r)ndul lor, etc.
*ceast tenologie (transferul nuclear) a st)rnit cele mai multe controverse dup ce n +,,-
a fost o"inut oaia .oll/ (0ilmut &i cola"., +,,1) prin transferul nucleului unei celule
somatice de adult.
Clonarea prin transfer nuclear
a" Clonarea embrionar
presupune transferul unor nuclei diplozi ('n) prele!ai din celule embrionare (n stadiul de
%, +-, (' sau -# celule) i transferul n o!ocite enucleate.
2n +,3# 4o"ert 0. 5riggs &i 6omas 7ing au reu&it o"inerea de "roa&te adulte, iar n +,%8
tenica a fost utilizat pentru clonare la vac &i la oaie prin transferul nucleului provenit din celulele
unui em"rion t)nr n ovocite enucleate. 2n +,,3, 9an 0ilmut &i 7eit Camp"ell de la 9nstitutul 4oslin
(:din"urg) o"in primii miei vii (;egan &i ;organ) pornind de la nucleii celulelor derivate din
em"rion, cultivate mai multe sptm)ni n la"orator.
#tape de lucru:
Clona se o"ine pornind de la un singur em"rion
.in aceste celule se extrage nucleul<
n paralel se utilizeaz ovocite enucleate receptoare (n), prelevate din ovare de la a"ator.
=ucleul diploid ('n) al celulei em"rionare este transferat n ovocita enucleat &i apoi fuziunea
se face cu stimuli electrici.
=oul ou (zigot) cu 'n cromozomi se divide &i poate fi transferat n uterul unei femele
receptoare.
4andamentul clonrii em"rionare la mamiferele domestice este nc foarte sla": circa 3> la
"ovine sau iepure deoarece aproximativ (8$#8> din ?oule reconstituite@ se dezvolt p)n la stadiul
de c)teva celule dup care apare moartea n diferite stadii ale dezvoltarii ontogenetice. *u fost
clonate prin aceast metod prima dat oaia, !aca, porcul, iepuroaica, pastr!ul$ n prezent
aproape toate speciile de mamifere au fost clonate prin aceast metod.
b" Clonarea unui indi!id adult
Clonarea unui individ adult presupune transferul unor nuclei diploizi prele!ai din celulele
somatice de indi!id adult, n o!ocite enucleate nefecundate.
2n celulele adulte doar o mic parte din gene se exprim, restul fiind inactive. *cest impediment
s$a dep&it prin crearea condiiilor de stopare a ciclului celular al celulelor somatice donoare n
faza %o, prin nfometarea celulelor (reducerea serului fetal de viel n mediul de cultur). 2n faza Ao
celulele se afl n starea de repaus naintea pregtirii unei noi diviziuni mitotice.
Clonarea oii &oll' (Ian Wilmut i colab., 1997)- etape
Celulele donoare de nuclei:
au fost recoltate celule din epiteliu (landei mamare al unei oi din rasa )inn
&orset (cu capul al") aflat n ultimul trimestru de gestaie, c)nd celulele prezint un
grad maxim de difereniere &i se multipic activ<
celulele au fost culti!ate n laborator cinci zile pe un mediu complet, dup care
au fost trecute pe un mediu srac pentru nfometare i intrarea lor n faza
ciclului celular %o. *ceste celule au numrul de cromozomi 'n.
de la aceste celule sau recoltat nucleii cu ntrea(a zestre ereditar &i o parte
din coninutul citoplasmatic.
Celulele receptoare:
o!ocitele au fost recoltate c*irur(ical din o!are. *ceste celule sexuale au
numrul de cromozomi redus la Bumtate. +ucleul lor i (lobulul polar adiacent s
au e,tras cu pipeta rezultnd un carioplas care a fost supus iradierii pentru
inactivarea genomului mitocondrial.
Cuziunea nucleului cu ovocita enucleat:
nucleii celulelor (landei mamare au fost transferai n o!ocita enucleat$
celulele ou astfel manipulate au fost stimulate electric pentru a permite
fuziunea nucleului ('n) cu citoplasma celulei receptoare<
n urma electrofuziunii celula ou a nceput s se divid pentru a produce un
em"rion<
embrionul a fost transferat ntro oaie receptoare cu cap ne(ru -rasa
Scotis* .lac/face" &i astfel s$a nscut prima oaie clonat din celule somatice
de adult $ oaia .oll/. Daia .oll/ este copia fidel a oii din rasa Cinn .orset
(cap al") de la care s$a prelevat nucleul cu ntreaga zestre genetic.
Te*nica clonrii unui indi!id adult este foarte (reoaie, procentul de reuite fiind e,trem de
redus.
Clonarea prin transferul nucleului unei celule somatice &i$a gsit aplicaii n cercetarea cu
celulele S6:; umane. Scopul acestui procedeu este s produc celule stem em"rionare umane
(pluripotente) care sunt identice din punct de vedere genetic cu donorul. Celulele stem em"rionare
umane sunt utilizate n cercetarea unor "oli incura"ile (cancer) &i n medicina regenerativ (atacul
de cord, leziuni ale sistemului nervos etc). Ei n medicina veterinar se utilizeaz tratamentul
regenerativ cu celule stem F n fracturi la ca"aline).