Bioprocese

1. Introducere
Natura este i va fi surs de inspiraie pentru om n dezvoltarea i proiectarea de noi
tehnologii. n natur se petrec procese complexe de sintez, fizic i chimic, ce evolueaz de
la sine, n condiii naturale, care de multe ori sunt de neneles pentru om. Un exemplu de
proces inspirat din natur este obinerea brnzeturilor i a produselor din lapte. De mii de ani
omul produce iaurturi i diverse tipuri de brnz, fr s fi cunoscut foarte exact mecanismele
prin care laptele este transformat n iaurt, de exemplu. n zilele noastre, iaurturile i
brnzeturile sunt produse la scar industrial astfel nct s fie acoperite cerinele pieei de
consum, cu indici de calitate ridicai. Necesitile crescnde ale omenirii i dorina omului de
a nelege i a reproduce procesele naturale au condus la apariia unui domeniu nou biotehnologia - care s se ocupe de nelegerea i reproducerea la scar industrial a
proceselor de interes ntlnite n natur. Biotehnologia cuprinde, ntr-un sens larg, procese
lansate la scar industrial n care sunt implicate organisme vii.
n zilele noastre, biotehnologiile sunt asociate n special cu obinerea pe cale
industrial a alimentelor i buturilor, mai ales pentru c omul aplic procedeele de obinere a
acestora din timpuri strvechi, fr s fi cunoscut mecanismele fizico-chimice care conduc la
sintetizarea alimentelor i buturilor, atribuind aceste realizri forei impresionante care este
natura. Din acest moment oamenii de tiin devin contieni de fora pe care o prezint
microorganismele i faptul c aceste creaturi minuscule joac un rol foarte important n viaa
de zi cu zi.
Toate aceste miracole nu au avut o explicaie tiinific pn n anul 1960, cnd
olandezul Van Leeuwenhoek descoper, folosind microscoape simple, lumea
microoorganismelor, introducnd lumii animalele minuscule n form se sfere, bastonae sau
spiral din apa de ru sau din decocturile de fn, i globulele ce se micau n mustul folosit
la obinerea berii [Chirvase i Caramihai, 2002]. De atunci i pn n zilele noastre domeniul
biotehnologiei a cunoscut o dezvoltare deosebit, prin prisma interesului crescnd acordat
acestui domeniul vast de ctre oamenii de tiin i datorit dezvoltrii sistemelor de msur i
a tehnicii de calcul ce permite implementarea unor structuri de conducere avansate.
Concepiile despre biotenologie i definiiile date acestui domeniu pun n eviden
strnsa legtur dintre biotehnologie i problemele de maxim interes ale dezvoltrii umane:
vindecarea bolilor, asigurarea unei alimentaii echilibrate i ieftine, disponibilitatea i costul
energiei, diminuarea polurii mediului, creterea calitii vieii n general. Rezultatele
raportate n literatura de specialitate confirm faptul c biotehnologiile dezvoltate i lansate n
practic sunt strns legate de soluionarea problemelor importante cu care se confrunt lumea
de astzi n medicin, agricultur, industriile chimic i alimentar, n procese de conservare,
epurare sau detoxifiere a mediului, precum i industria energetic, prin producerea pe cale
artificial a produilor utili pentru aceste domenii n medii controlate. Astzi, metoda de
obinere pe cale artificial a produilor utili este cunoscut cu numele generic de bioproces,
ns termenul are i un neles mai larg, ce nglobeaz orice proces n care sunt implicate
celule vii.
Bioprocesele implic manipularea organismelor vii (celule animale sau vegetale sau
microorganisme) astfel nct prin dirijarea dezvoltrii acestora n medii de cultur controlate
s se obin produi de interes economic. Creterea dirijat a microorganismelor implic
proiectarea i realizarea incintelor n care se va efectua cultivarea lor (bioreactoarele), precum
i soluionarea problemelor legate de asigurarea condiiilor optime de dezvoltare, astfel nct
n urma lansrii unui bioproces productivitatea s fie maxim, iar costurile de producie s fie
minime. Oferirea de soluii viabile n controlul bioproceselor este ngreunat de faptul c n
prezent nu sunt suficiente informaii legate de transformrile ce au loc la nivelul celulelor,
despre mecanismele ce determin aceste celule s se dezvolte i despre modalitatea n care

dezvoltarea celulelor sau a microorganismelor este afectat de variaii ale condiiilor din
mediul n care ele sunt cultivate. n prezent modelarea i conducerea bioproceselor reprezint
un subiect de mare actualitate n lumea tiinific. nelegerea fenomenelor complexe ce se
produc la nivelul organismelor vii vor continua s prezinte interes pentru cercettori, pentru a
putea avansa tehnologii prin care procesele viului s poat fi reproduse la scar industrial, cu
costuri minime i profit maxim. n acest context, controlul bioproceselor este un domeniu
important care poate ajuta la atingerea acestor obiective.

2. Modelarea bioproceselor
Cinetica
proceselor
biotehnologice
este
determinat
de
proprietile
microorganismelor, de particularitile i de modul de construcie al bioreactorului i nu n
ultimul rnd de condiiile i de mediul n care se face cultivarea. Influena acestor factori
conduc la dinamici de cretere complexe ce fac dificil reproducerea procesului i asigurarea
productivitii i a calitii constante a produsului de interes. Procesele biotehnologice sunt n
esena lor complexe, fiind sisteme multivariabile, neliniare, cu puternice legturi ntre
variabilele interne. n aceste condiii, modelele matematice nu pot s descrie aceste sisteme
dect ntr-o manier simplificat, datorit faptului c structura complicat a metabolismului
celulelor i microorganismelor, precum i mecanismele de autoreglare a acestuia nu sunt nc
complet cunoscute. Dinamicile diverselor faze prezente n sistemele biotehnice au influen
asupra condiiilor de operare din bioreactor. Legtura dintre variaiile condiiilor de operare i
fazele sistemului nu este cunoscut, motiv pentru care nglobarea acesteia n modelele
matematice ataate bioproceselor este tratat ntr-o form simplificat.
Conform clasificrii generale a modelelor utilizate pentru descrierea cineticilor
bioproceselor dat de Moser [Moser, 1988], acestea se mpart n modele deterministice i
modele probabilistice. La rndul lor, modelele deterministice pot fi:
- nestructurate, ce consider celulele ca fiind sisteme de tip black box, avnd
importan doar cantitatea de celule, influenat doar de mediul nconjurtor;
- structurate, ca modele ce in cont de structura celular, fie la nivelul
componentelor chimice, fie la nivelul morfologiei celulare, cu introducerea
efectelor legate de form, vrst sau dimensiune.
O alt clasificare a modelelor ce descriu biosistemele este fcut n funcie de
recunoaterea sau neglijarea faptului c o populaie celular este alctuit dintr-un numr
mare de indivizi (celule), care pot avea caracteristici (proprieti) diferite. Din acest punct de
vedere, modelele pot fi:
- nesegregate, adic nu iau n considerare existena celulelor individuale;
- segregate, ce expliciteaz prin model existena celulelor individuale cu proprieti
distincte.
n biotehnologie, cele mai utilizate modele pentru descrierea bioproceselor sunt
modelele simple, de tip nestructurat, nesegregat. Motivele ce au condus la utilizarea unor
astfel de modele simplificate sunt legate de cunotinele reduse pe care specialitii le au la
dispoziie despre mecanismele interne ce determin dezvoltarea celulelor sau
microorganismelor, precum i de dificultatea de a determina legturile dintre variabilele
interne ale bioproceselor i influena pe care o au condiiile de cultivare i variaiile acestora
asupra metabolismului microorganismelor. n general, modelele matematice ataate
bioproceselor sunt derivate din ecuaii de bilan masic i rezult sub forma unor ecuaii
difereniale ce ncearc s prezinte ct mai corect variaiile principalelor variabile din
bioproces.
Mrimile specifice ce intervin n evoluia bioproceselor sunt:
- concentraia de biomas X (populaia de microorganisme);

- concentraia de substrat S (nutrienii);

- concentraia de produi finali P.
Pentru ca celulele s se dezvolte, ele au nevoie ca anumite condiii de mediu s fie
ndeplinite. Aceste condiii variaz de la bioproces la bioproces, n funcie de specificitatea
celulei sau microorganismului cultivat. Din acest punct de vedere, principalii parametri de
cultivare sau condiiile fizico-chimice ce trebuie meninute la valorile optime pe parcursul
evoluiei unui bioproces sunt:
- temperatura (T);
- pH-ul;
- presiunea (p);
- agitarea (n) i aerarea (O2);
- potenialul redox (rH);
- nivelul oxigenului dizolvat (pO2);
- cantitatea de cldur consumat/eliminat n unitatea de timp;
- nivelul spumei.
n evoluia unui bioproces se ncearc meninerea parametrilor fizico chimici
caracteristici bioprocesului respectiv la valori de optim sau ntre anumite limite bine
determinate astfel nct s se asigure condiiile de mediu cerute de microorganismul sau celula
cultivat pentru dezvoltarea sa.
innd cont de multitudinea de factori ce influeneaz dezvoltarea celulelor sau
microorganismelor cultivate n bioprocese, este evident c stabilirea unui set de ecuaii
difereniale de tipul:
X f X , S , P, T , n, pH , O2 ,, t

S g X , S , P, T , n, pH , O2 ,, t

P h X , S , P, T , n, pH , O2 ,, t
care s cuprind variaia n timp a mrimilor specifice ale bioproceselor n funcie de
multitudinea variabilelor fizico chimice caracteristice bioproceselor, precum i interaciunile
dintre acestea este aproape imposibil. De asemenea, avnd n vedere faptul diversitatea
bioproceselor i specificitatea fiecruia dintre ele, este dificil obinerea unui model global
care s descrie evoluia bioproceselor n general.
O variabil cheie n descrierea evoluiei unui bioproces este viteza specific de
cretere (), ce descrie creterea celular, consumul de substrat i formarea produilor de
interes. Viteza specific de cretere poate fi exprimat ca un produs de factori individuali sub
urmtoarea form:
t S * X * P * pH * T * pO2 * I .
n aceast reprezentare factorii individuali exprim influena pe care o au mrimile
specifice de bioproces, factorii inhibitori (I) ai creterii i parametrii fizico chimici asupra
evoluiei n timp a microorganismelor sau celulelor. Pentru a putea descrie influenele acestor
factori asupra vitezei specifice de cretere, cercettorii au analizat modul n care fiecare dintre
acetia determin variaii ale vitezei specifice de cretere separat sau pentru cel mult doi
factori. Din aceste analize au rezultat ecuaii ce pun n eviden evoluia vitezei specifice de
cretere n funcie de concentraia de substrat, de concentraia de produi utili, de pH sau
temperatur, precum i ecuaii ce evideniaz influena inhibitoare asupra creterii celulare pe
care o pot avea concentraiile ridicate de substrat sau produi finali. n ecuaiile difereniale ce
descriu variaia mrimilor specifice bioproceselor (concentraiile de substrat, de biomas i a
produilor finali) se va modela viteza specific de cretere cu acea lege care descrie cel mai
apropiat de realitate evoluia acesteia n funcie de parametrii bioprocesului.

Dintre rezultatele importante obinute de cercettori pentru punerea n eviden a

dependenei vitezei specifice de cretere n funcie de diveri parametrii ai bioproceselor,
amintim legea propus de Verhulst sau modelul logistic al creterii, ce pune n eviden
influena concentraiei celulare i a substratului limitator asupra vitezei specifice de cretere,
modelele Andrews i Aiba ce pun n eviden efectul inhibator pe care l are concentraia de
substrat asupra dezvoltrii celulare, modelul Holzberg ce descrie influena inhibitoare pe care
o are concentraia de produi asupra vitezei specifice de cretere, modelul polinomial
Andreyeva i Biriukov ce exprim efectul pH-ului asupra vitezei specifice de cretere i legea
Arrhenius ce modeleaz efectul pe care l are temperatura asupra dezvoltrii celulare
[Caramihai, 1997]. Cel mai cunoscut i cel mai utilizat model de cretere celular n funcie
de concentraia de substrat este modelul propus de Monod:
*S
S m ax
,
KS S
unde m ax reprezint viteza maxim specific de cretere, K S este constanta de saturaie, iar
S reprezint concentraia de substrat. Aceast lege de cretere ia n considerare i limitarea
creterii prin substrat la concentraii mici.
n ultimii ani, n modelarea bioproceselor, se remarc o tendin de extindere a
modelelor clasice utilizate n biotehnologie prin nglobarea informaiilor i observaiilor
oferite de experii umani n modelele matematice ce descriu bioprocesele cu ajutorul
sistemelor bazate pe logica fuzzy. Combinarea modelelor clasice cu modelele lingvistice
reprezentate prin reguli de tipul dac atunci este benefic pentru c permite n primul rnd
ntregirea modelului clasic cu informaii ce nu pot fi reprezentate sub form de ecuaii
matematice. O alt modalitate de obinere a unor modele matematice care s descrie ct mai
fidel evoluia unui bioproces este de a pune n eviden interaciunile intrare ieire utiliznd
reele neurale. Datele experimentale disponibile pot fi utilizate pentru antrenarea supervizat a
reelelor neurale, obinnd astfel un model matematic capabil s exprime coerent evoluia
bioprocesului, chiar dac condiiile de operare nu sunt identice cu cele din momentul
efecturii experimentelor de culegere a datelor. Att sistemele bazate pe logica fuzzy ct i
reelele neurale sunt instrumente eficiente ce pot fi utilizate cu succes n modelarea
bioproceselor. Sistemele fuzzy au i capacitatea de a reprezenta informaiile sub o form uor
interpretabil de ctre experi, oferind astfel posibilitatea de a nelege mai bine mecanismele
interne ale bioproceselor.
Dei modelele matematice utilizate n biotehnologie sunt incomplete i prezint un
anumit grad de imprecizie, ele sunt n continuare instrumente utile i eficiente n descrierea
fenomenelor ce prezint importan crescut pentru control i optimizare, i nu n ultimul rnd
pentru a ne ajuta s nelegem mai bine mecanismele proceselor biotehnice.

3. Conducerea a bioproceselor
Dificultile conducerii i optimizrii bioproceselor provin din faptul c, fiind vorba de
organisme vii, cu mecanisme metabolice proprii, condiiile de optim variaz continuu, fiind
axate pe ciclurile existeniale ale celulelor.
Bioprocesele lansate la scar industrial au cunoscut un progres important n ultimele
decenii, mai ales posibilitilor crescute de implementare a structurilor de conducere avansate
datorate progresului tehnicii de calcul, i nu n ultimul rnd datorit dezvoltrii de noi sisteme
de monitorizare i msur a variabilelor principale din bioprocese. Problemele ce apar la
implementarea structurilor de control pentru bioprocese nu sunt n esen cu mult diferite fa
de problemele ce apar la implementarea structurilor de control pentru alte tipuri de procese.
Specificitatea bioproceselor, ce implic creterea controlat a organismelor vii, conduce ns

la un progres mai lent al controlului proceselor biotehnologice, n special datorit a dou

motive principale: cunotinele reduse despre dinamica intern a bioproceselor, pe de o parte,
i lipsa aparaturii, n cele mai multe cazuri, de msur i monitorizare a bioproceselor.
n prezent, dinamicile interne ce guverneaz creterea celular sunt puin cunoscute i
multe dintre problemele din tehnologiile de modelare a bioproceselor nu i-au gsit rezolvare.
Dezvoltarea de modele matematice pentru bioprocese este dificil, dac inem seama de
numeroii factori ce pot influena viteza specific de cretere a celulelor i microorganismelor.
Efortul de modelare este de multe ori dificil i necesit efectuarea unui numr mare de
experimente nainte de a obine un model matematic coerent i conform cu realitatea
[Schugerl, 2000]. Reproductibilitatea experimentelor este n multe cazuri incert, n principal
datorit dificultilor de obinere a acelorai condiii de mediu la fiecare experiment efectuat.
Mai mult, caracteristic bioproceselor este c implic manipularea organismelor vii, a cror
dinamic de cretere este puternic neliniar i nestaionar. Parametrii modelului matematic
nu pot rmne constani pe perioade lungi de timp, ei variind n timp datorit modificrilor
generate de metabolismul organismelor n concentraia de biomas sau datorit unor
modificri genetice sau fiziologice ale organismelor, modificri ce nu pot fi observate. De
asemenea, lipsa acurateei msurtorilor experimentale conduce la probleme legate de
identificabilitatea modelului matematic asociat bioporcesului.
O alt problem n controlul bioproceselor este reprezentat de lipsa, n multe cazuri, a
instrumentelor sigure i ieftine de msur i monitorizare n timp real. n prezent, piaa de
specialitate ofer destul de puini senzori capabili s ofere msurtori on line sigure pentru
parametrii biologici i biochimici necesari la implementarea structurilor de control automat
performante. Principalele variabile de bioproces (concentraia de biomas, concentraia de
substrat i concentraia produsului de sintez) necesit, n general, determinri realizate off
line, prin analize de laborator. Costul i durata analizelor de laborator conduc la limitarea
frecvenei cu care se fac aceste msurtori [Schugerl, 2000]. Cercettorii continu s dezvolte
sisteme de msur i control capabile s ofere n timp real informaiile necesare pentru
controlul bioproceselor. Astfel, pe circuite situate n afara bioreactoarelor, cu ajutorul unor
senzori enzimatici specifici (senzori pentru glucoz, senzori pentru metanol sau etanol, etc.),
s-a reuit determinarea continu sau intermitent a concentraiei unor substraturi, n special
surse de carbon. Concentraia masei celulare, o mrime de maxim importan pentru
determinarea vitezei de cretere a culturii, poate fi determinat continuu n bioreactor, dar
indirect, cu ajutorul senzorilor de turbiditate sau de flourescen, prin corelarea acestei
concentraii cu fenomene electrice sau cu evoluia unor proprieti ale luminii .
n general, structurile de control proiectate pentru conducerea bioproceselor au ca
obiective principale maximizarea ratei de productivitate i a ratei de conversie, iar din punct
de vedere economic se urmrete maximizarea profitului. Un alt scop important urmrit la
proiectarea de biotehnologii n general este acela de a se asigura reproductibilitatea
bioproceselor, cu obinerea de performane ridicate.
Sistemele de control i monitorizare a bioproceselor sunt, n mod uzual, sisteme
ierehizate pe trei nivele. Primul nivel este reprezentat de canalele intrare ieire, ce sunt
grupate n bucle de reglare, cum ar fi buclele de reglare a parametrilor fizici importani pentru
asigurarea dezvoltrii celulare (temperatur, presiune, pH, etc.). La acest nivel, reglarea se
realizeaz de cele mai multe ori pe baza buclelor de control dezvoltate n jurul algoritmilor
clasici de tip PID. n unele cazuri, pentru controlul temperaturii se utilizeaz algoritmi de
reglate de tip bipoziional sau tripoziional.
Urmtorul nivel al structurii de monitorizare i control a bioproceselor este alctuit din
uniti de procesare autonome capabile s efectueze un set de operaii [Beyeler et al, 2000].
Unitile de procesare pot fi reprezentate de bioreactoare, evi de legtur, reactoare cu mediu,
echipamente de evacuare, sau pot fi uniti logice abstracte, cum ar fi planificatoarele de

servicii. Unitile acestui nevel pot efectua acelai tip de operaii i cu alt set de parametrii.
Prin selectarea setului corect de parametrii, operaiile pot fi adaptate unui produs specific.
Operaiile nu pot starta dect n cadrul unor condiii predefinite, iar mecanismele de
stopare/blocare sunt corelate cu starea unitii de procesare, fiind necesar implementarea
unor rutine care s trateze excepiile pentru a evita situaiile nedorite. La acest nivel, cerinele
legate de comportarea n timp sunt mai puin stricte dect n cazul buclelor de reglare aflate pe
primul nivel.
n cazurile bioproceselor de complexitate medie, cum ar fi procesele operate n modul
de cultivare batch, combinarea acestor dou nivele ale structurii de monitorizare i control a
bioproceselor este suficient pentru a asigura controlul automat. n cazul cultivrilor continue,
operatorul de proces trebuie s controleze un numr mare de operai secveniale, de la
startarea fiecrei operai pn la finalizarea ei. Aceast metod de conducere a bioprocesului
este mare consumatoare de timp, procedurile manuale de conducere nefiind recomandate n
controlul bioproceselor cu complexitate ridicat.
Cel de-al treilea nivel al sistemului de monitorizare i control al bioproceselor are rolul
de a planifica startarea operaiilor, conform unui scenariu stabilit anterior. Formal, acest
planificator poate fi reprezentat cu ajutorul unui graf n care fiecare nod corespunde unei
operaii ce ateapt s fie startat dup terminarea uneia sau mai multor operaii aflate n
derulare. Dac execuia unei operaii eueaz, unitatea de procesare ce efectua acea operaie
nu va atinge starea final ateptat de planificator. O strategie simpl de tratare a unei astfel
de excepii este de a se restarta manual operaia ce a euat n execuie. De ndat ce unitatea
de procesare va atinge starea final corect, planificatorul i va continua funcionarea prin
lansarea n execuie a urmtoarei operaii [Beyeler et al., 2000].
Din scurta prezentare a nivelelor ce compun sistemele de monitorizare i control ale
bioproceselor se remarc multitudinea de operaii pe care aceste sisteme trebuie s le
ndeplineasc, n condiiile n care multe dintre operaii sunt complexe.
Aspectele legate de controlul i monitorizarea bioproceselor prezentate pun n
eviden necesitatea de a se dezvolta sisteme de msur i monitorizare sigure i capabile s
ofere informaii n timp real. n condiiile n care calitatea i cantitatea de informaii vor
crete, atunci se vor putea proiecta sisteme de control avansate care s asigure rate de
producie i productivitate ridicate, cu costuri de producie minime. Progresele nregistrate n
domeniul tehnologiei informaiei asigur suportul necesar implementrii sistemelor de control
avansate, bazate pe tehnici ale inteligenei artificiale.
4. Studiu de caz: Modelarea i conducerea unui bioproces de producie enzimatic
n cadrul acestui proiect atenia a fost concentrat asupra modelrii, identificrii i
conducerii unui bioproces de producie a alcooloxidazei. Datele experimentale utilizate la
modelarea i identificarea bioprocesului de producie a alcooloxidazei au fost obinute n
urma efecturii a trei experimente, n care a fost cultivat drojdia Hansenula polymorpha CBS
4732 ntr-un reactor de tip air lift cu circulaie normal [Chirvase, 1998]. Mediul de cultur
conine (NH4)2SO4, KH2PO4, MgSO47H2O, CaCl2, extract de drojdie i microelemente (Fe,
B, Cu, I, Mn, Zn, Mo). Principalii parametrii de bioproces, reglai pe bucle independente,
sunt:
temperatura, meninut constant ntre 37 38C ;
nivelul minim de oxigen (10% din concentraia de saturaie);
pH, meninut ntre limitele 4.5 5.
Bioprocesul a fost lansat n modul de operare fed-batch, n care singura surs de
carbon, metanolul, a fost introdus discontinuu n raport cu viteza de consum, pentru a
elimina posibilitatea inhibiiei prin substrat.

n timpul funcionrii, au fost prelevate probe din bioreactor pentru analize de

laborator, n urma crora se determin concentraia de substrat din mediul de reacie i
cantitatea de substan uscat din proba respectiv. A mai fost determinat i densitatea
optic, de asemenea, ca msur a concentraiei de biomas din reactor i activitatea
enzimatic. Aceste msurtori nu sunt continue, ele oferind informaii despre evoluia
bioprocesului la momentele de timp la care au fost prelevate probele. De asemenea,
informaiile nu sunt obinute imediat, ci dup efectuarea analizelor de laborator specifice
pentru fiecare determinare.
Produsul de interes n cazul acestui bioproces este alcooloxidaza, o enzim ce se
acumuleaz n interiorul celulelor. Separarea ei se face dup stoparea bioprocesului printr-o
procedur complex de extracie. Rata de acumulare a produsului de interes poate fi
exprimat prin activitatea enzimatic raportat la un volum determinat de extract de mediu,
obinut dup ruperea peretelui celular conform analizei biochimice standard pentru
alcooloxidaz.
Modelarea unui bioproces de producie enzimatic
Modelarea bioprocesului de producie enzimatic a fost realizat innd cont de
urmtoarele ipoteze de lucru:
- pe domeniul de lucru, nu exist inhibiie sau limitare a creterii prin concentraia
de substrat;
- pentru simplificarea modelului, mentenana celulelor poate fi integrat n
randamentul de conversie a substratului;
- decesul celular poate fi incorporat n creterea celular.
Cu acest ipoteze, s-a scris ecuaiile de bilan pornind de la relaia de baz:
Intrare +Producie = Ieire + Consum + Acumulare.
rezultnd urmtoarele ecuaii de bilan pentru concentraia de substrat, pentru concentraia de
biomas i pentru variaia volumului mediului de cultur:
XV d ( S M V )
0 ES

YX / S
dt

d ( XV )
(1).
dt
E
E
dV
0 S M
S M dt
Dup prelucrarea acestor relaii rezult urmtorul set de ecuaii difereniale ce pun n
eviden variaiile principalelor mrimilor specifice ale acestui bioproces:
E
E
dV
S M
dt
S M

XV

E
dX
X E
X S M
dt
V S M

(2),

dS
X E S S S E S E M

dt
YX / S
V
V S M

unde E S i EM

reprezint evaporarea de substrat i respectiv mediu, S reprezint masa

volumic a substratului, M reprezint masa volumic a mediului de cultur, YX / S reprezint

randamentul de conversie a substratului n raport cu biomasa, reprezint viteza specific de
cretere, V reprezint volumul fazei lichide din bioreactor, iar X i S reprezint
concentraiile de biomas i respectiv de substrat.

Pentru c una din ipotezele de lucru specific faptul c nu exist limitare a creterii
datorat concentraiei de substrat pe domeniul de lucru, s-a optat pentru alegerea unei legi de
tip Monod pentru exprimarea evoluiei vitezei specifice de cretere n raport cu concentraia
de substrat. nlocuind viteza specific de cretere cu forma specific legii lui Monod i
exprimnd evaporrile de mediu i substrat n [L/h], modelul de mai sus capt urmtoarea
form:
dV
EM ES
dt
dX m axSX X
(3),

E M E S
dt
KS S V

S X
E
dS
S
m ax
S S E M E S
dt
K S S YX / S
V
V
unde m ax reprezint viteza maxim specific de cretere, K S este constanta de saturaie, iar
celelalte mrimi i parametri i pstreaz semnificaiile prezentate anterior.
Operarea bioprocesului de producie enzimatic a fost realizat n modul de cultivare
fed-batch, ceea ce nseamn c realimentarea mediului de cultur cu substrat sau cu cantiti
de mediu proaspt se face pe parcursul operrii fie intermitent (n porii), fie continuu, prin
adugarea substratului cu o vitez egal cu viteza sa de consum, astfel nct s se menin
concentraia de substrat la o valoare constant pe timpul cultivrii. Aceste intervenii asupra
bioprocesului determin modificri ale strii bioprocesului, respectiv vor determina
modificri ale volumului mediului de cultur, ale concentraiei de substrat sau ale
concentraiei de biomas. n modelara bioprocesului, va trebui s se in cont i de variaiile
principalelor mrimi de bioproces datorate modului n care s-a fcut cultivarea.
Setul de ecuaii (3) pune n eviden variaiile concentraiilor de substrat i biomas i
variaia volumului fazei lichide din reactor ntre momentele de discontinuitate. Prin momente
de discontinuitate se neleg acele momente de timp din evoluia bioprocesului n care se
preleveaz probe din mediul de reacie sau se adaug cantiti determinate de substrat sau
mediu proaspt. Fiecare astfel de moment de discontinuitate modific concentraiile de
substrat i biomas din reactor. Astfel, un adaos de substrat sau mediu va modifica
concentraia de substrat, respectiv concentraia de biomas din mediul de reacie i volumul
mediului de reacie. Dac se nlocuiete o cantitate de mediu, atunci se modific volumul
fazei lichide din reactor cu diferena dintre cantitatea adugat i cea scoas din reactor i
concentraia de biomas. La modelarea bioprocesului de producie enzimatic s-a inut cont de
aceste momente de discontinuitate. Acestea au fost modelate sub forma unor ecuaii de bilan
de tipul:
Cantitate nainte (k) + Adaos = Cantitate recoltat + Cantitate dup (k+1),
rezultnd urmtoarele ecuaii ce descriu momentele de discontinuitate pentru volum,
concentraia de substrat i concentraia de biomas:
Vk ASk AMk PMk Vk 1
S k M Vk ASk S PMk M S k S k 1 M Vk 1

(4),

X kVk PMk X k X k 1Vk 1

unde V, S i X reprezint volumul, respectiv concentraiile de substrat i biomas la
momentele de timp k i k+1, M i S sunt masele volumice ale mediului de cultur i a
substratului, iar cu A i P au fost notate cantitile de mediu (specificate de indicele M) sau de
substrat (specificate de indicele S) adugate, respectiv prelevate (nlocuite).
Cele dou seturi de ecuaii (3) i (4) reprezint modelul matematic al bioprocesului de
producie a alcooloxidazei. Ecuaiile (3) prezint variaiile volumului fazei lichide din

bioreactor i a concentraiilor de substrat i biomas, n timp ce ecuaiile (4) pun n eviden

modul n care se modific principalele mrimi de bioproces la momentele de discontinuitate.
mpreun, cele dou seturi de ecuaii prezint n form matematic variaiile i interaciunile
dintre principalele mrimi ale bioprocesului.
Identificarea parametrilor modelului matematic propus a fost realizat pe baza
msurtorilor experimentale astfel nct eroarea de urmrire s fie minimizat, inndu-se cont
i de modificrile intervenite n urma adaosurilor i prelevrilor de mediu sau substrat.
Procedura de identificare calculeaz valorile optime a urmtorilor parametrii ai bioprocesului
n discuie:
evaporarea de mediu EM [L/h];
evaporarea de substrat E S [L/h];
viteza maxim specific de cretere m ax [1/h];
constanta de saturaie K S [g/g];

randamentul de conversie YX / S [g materie uscat/g substrat];

concentraia iniial de substrat S 0 [g/L];

concentraia iniial de biomas X 0 [g/L].

Masele volumice ale substratului (metanol) i a mediului de cultur au urmtoarele
valori: S 800 [ g / L] , respectiv M 1000 [ g / L] . Parametrii acestui bioproces iau valori n
urmtoarele

intervale

aproximative:

EM 0.01,0.05 g / L ,

ES 0.003 ,0.008 g / L ,

max 0.2,0.3h , K S 0.0005 ,0.005 , YX / S 0.2,0.3 . Concentraiile iniiale de biomas

i substrat depind de cantitatea de mediu inoculat i cantitatea de substrat adugat n mediul
de reacie la lansarea bioprocesului.
Modelul matematic propus este un model neliniar, ce depinde de apte parametrii.
Influenele pe care cei apte parametrii ai bioprocesului le au asupra evoluiei volumului i a
concentraiilor de biomas i substrat nu sunt n totalitate cunoscute, motiv pentru care
procedura de identificare a acestor parametri a fost mprit n dou etape. n prima etap de
identificare se vor determina valorile optime pentru evaporrile de mediu i substrat. A doua
etap de identificare preia valorile optime calculate n prima etap pentru cele dou evaporri,
i cu aceste valori se va trece la determinarea valorilor optime a celorlali parametrii ai
bioprocesului.
Din ecuaia de variaie a volumului din modelul matematic (3) se remarc faptul c
variaiile de volum sunt datorate evaporrilor de mediu i de substrat ce au loc n timpul
funcionrii bioprocesului. Pe baza acestei ecuaii i a datelor experimentale, n urma rulrii
procedurii de identificare s-au obinut pentru evaporarea de mediu i pentru evaporarea de
substrat valorile prezentate n tabelul urmtor.
1

Tabelul 1. Valorile optime pentru EM i E S

Experimentul 1
Experimentul 2
Experimentul 3

EM
[g/L]
0.032
0.054
0.079

E S [g/L]

0.003
0.009
0.008

Se remarc faptul c valorile optime obinute n urma identificrii se situeaz n

intevalele aproximative de variaie stabilite pentru aceti doi parametrii sau au valori destul de

apropiate de limitele acestor intervale. n figura urmtoare sunt prezentate grafic variaiile
volumului mediului de cultur n raport cu datele experimentale.

Fig. 1 Variaia volumului ( model; x date reale)

Din figurile de mai sus se remarc faptul c urmrete datele experimentale. Aceasta
nseamn c ecuaia variaiei volumului n care s-au introdus valorile obinute prin identificare
pentru cele dou evaporri reflect fidel modul n care variaz volumul mediului de cultur,
pentru toate cele trei experimente.
Odat stabilite valorile optime pentru evaporrile de mediu i substrat, se poate trece
la etapa a doua de identificare. n acest caz, procedura de identificare va utiliza toate cele trei
ecuaii ale modelului matematic (3), n care au fost introduse valorile optime pentru cele dou
evaporri.
n urma rulrii procedurii de identificare au rezultat graficele prezentate n figura 2, ce
pun n eviden variaiile volumului i a concentraiilor de biomas i substrat n raport cu
datele experimentale pentru cele trei experimente efectuate.

a) Experimentul 1

Fig. 2 Variaiile V, S i X ( model; x date reale)

c) Experimentul 3

b) Experiment 2
Din cele trei grafice se remarc faptul c modelul matematic (3) urmrete destul
fidel datele experimentale. Cel mai bun rezultat este pentru evoluia volumului mediului
cultur. Variaiile concentraiei de substrat i a concentraiei de biomas sunt apropiate
realitate.
Parametrii optimi ai bioprocesului rezultai n urma celei de-a doua etape
identificare sunt prezentai n tabelul urmtor, pentru cele trei experimente.

de
de
de
de

Tabelul 2. Valorile optime pentru m ax , K S , YX / S , S 0 i X 0

m ax [1/h]
Experimentul 1
Experimentul 2
Experimentul 3

0.3
0.07
0.42

KS
[g/g]
0.0005
0.0006
00014

YX / S
[g/g]
0.3
0.26
0.22

S 0 [g/L]

X 0 [g/L]

0.000117 0.009
0.0046
2.98
0.00013 0.01

Comparnd valorile optime obinute n urma identificrii pentru parametrii

bioprocesului cu intervalele aproximative de variaie a acestora, se remarc faptul c
majoritatea valorilor identificate se nscriu n intervalele de variaie sau au valori apropiate de
limitele de variaie stabilite de aceste intervale. Cea mai mare diferen se remarc n cazul
concentraiei de biomas iniiale pentru experimentul 2. Aceast valoare mare a lui X 0 nu
este hazardat, pentru c n cazul acestui experiment a fost introdus n bioreactor o cantitate
mare de inocul la momentul lansrii n producie.
Rezultatele obinute n urma celei de-a dou etap de identificare au condus la
concluzia c modelul matematic (3) propus, cu valorile optime identificate ale parametrilor
si, este capabil s reproduc evoluiile principalelor mrimi de bioproces (volumul fazei
lichide din bioreactor, concentraia de substrat i concentraia de biomas) n conformitate cu
realitatea. Aa cum reiese din graficele din figura 2 forma curbelor de evoluie este conform
cu realitate, ceea ce nseamn c modelul poate fi utilizat n proiectarea i testarea structurii
de conducere.