APARATUL GOLGI

Aspecte introductive
Aparatul Golgi, denumit i complexul Golgi este un organit celular delimitat
de endomembrane, structurat sub forma unei stive de cisterne recurbate
prezentnd polaritate morfologic i biochimic, cu rol cheie n precesele de
biogenez a membranelor, n maturarea, sortarea i distribuirea de molecule
i/sau macromolecule att ctre locurile celulare crora le sunt destinate ct i n
calea secretorie. Face parte din sistemul de organite implicat n traficul
intracelular al membranelor, care ncepe cu reticulul endoplasmic i se termin la
membrana celular sau la componentele sistemului endosomal.
Organitul a fost pentru prima dat evideniat n 1898 de ctre Camilo Golgi,
n celulele Purkinje, prin impreganare argentic. Structura intracelular s-a
dezvluit ca o dantelrie esut sub form de co, n jurul nucleului. Golgi a
denumit-o, pe baza morfologiei, aparat reticular endocelular, sau aparat reticular
intern. n scurt timp, a primit denumirea de aparat Golgi, aa cum se numete i
n momentul de fa. Microscopia optic, prin varianta ei microscopia de
fluorescen, permite n momentul de fa att evidenierea, ct i studiul
complexului Golgi, n celulele vii, prin procesele de trafic membranar n care el
este semnificativ implicat.
Ultrastructura aparatului Golgi
Complexul Golgi este structurat, aa cum am mai spus deja, ca o stiv de
cisterne recurbate. Numrul cisternelor este variabil, diferind de la un tip de
celul la altul, fiind de regul ntre 5 i 8. Din cele amintite n comentariile
anterioare se desprinde ideea c aparatul Golgi este o structur caracterizat
ultrastructural prin polaritate morfologic, dar i prin polaritate biochimic.
Vom defini astfel, din punct de vedere morphologic, urmtoarele caracteristici
ultrastructurale:
(i) o fa convex, numit i fa cis, orientat ctre cisterne ale
reticulului endoplasmic din care nmuguresc vezicule (reticul endoplasmic
tranziional);
(ii) o fa concav, numit i fa trans, orientat ctre un sistem de
vezicule i/sau vacuole, tubuli nreelai i fragmente de cisterne, sistem numit:
(iii) reea trans-Golgi.
(iv) ntre Reticulul Endoplasmatic (RE) tranziional i faa cis-golgian au fost
evideniate microvezicule cu diametrul mediu de 50 nm, care, n momentul de
fa, sunt dovedite a conflua (fr a prezenta o real independen) ntr-un
sistem veziculo-tubular (compartiment veziculo-tubular), considerat un
compartiment intermediar ntre RE i Golgi. Acest compartiment este numit
prescurtat fie VTC (de la Vesicular Tubular Cluster), fie ERGIC (de la
Endoplasmic Reticulum-Golgi Intermediate Compartment). Prezena unui
asemenea compartiment face s se vorbeasc, de regul i de o reea cis-Golgi.
n ceea ce privete stiva de cisterne, se opereaz cu noiunile: cisterne
cis, cisterne mediene i cisterne trans, dup cum acestea sunt orientate
ctre faa cis-Golgi,. ctre faa trans-Golgi, sau sunt aezate n zona din mijloc a
stivei.

Morfologic, polaritatea se poate evidenia att ntre cisterne i nu numai

datorit recurbrii (cisternele cis au lumenul mai subire, cele trans mai gros),
ct i n cadrul cisternelor (mai efilate n zonele centrale i mai ngroate n
zonele limitrofe). Pentru a ne completa imaginea n spaiu a morfologiei
complexului Golgi, este bine s specificm faptul c cisternele trebuie vzute ca
mbracnd un sector de sfer, ca i cum ar forma un cu. Dei corespondena
dintre polaritatea morfologic i cea biochimic a fost dovedit ntre cisterne, nu
acelai lucru s-a ntmplat n ceea ce privete polaritatea din cadrul aceleiai
cisterne. Nu exist, n momentul de fa, dovezi cum c ntre zonele mediene ale
cisternelor i zonele lor limitrofe ar exista diferene de molecularitate. Dimpotriv,
prin metode de refacere a fluorescenei dup foto-stingere (FRAP), coroborate cu
rezultate obinute prin tehnici de pierdere a fluorescenei prin foto-stringere
(FLIP, de la Fluorescence Loss In Photo-bleaching) s-a evideniat c moleculele
i/sau macromoleculele din cisternele golgiene difuzeaz fr restricii n planul
membranelor fiecrei cisterne. Metodele FLIP presupun stingerea repetat a
fluorescenei n aceeai zon micronic a unei structuri celulare i observarea
efectului asupra fluorescenei la nivelul ntregii structuri. Dac moleculele
difuzeaz fr restricii n membrana structurii, este de ateptat ca fluorescena
la nivelul acesteia s dispar complet dup stringeri repetate. Acest lucru a fost
observat la nivelul cisternelor golgiene.
Funciile aparatului Golgi
Problema izolrii i purificrii cisternelor golgiene n vederea studierii
funciilor, rmne nc o provocare pentru cercettori. Au existat ncercri dintre
cele mai ingenioase, ns marea problem o reprezint eficiena. ntruct
complexul golgian reprezint o fraciune membranar slab reprezentat n
structura celulelor, toate metodele presupun consum de fore i mijloace, care nu
se justific sub aspectul randametelor. O metod cu mare grad de specificitate a
fost dezvoltat de colectivul lui G.E. Palade la sfritul deceniului nou al
secolului trecut, folosindu-se izolarea pe suporturi de polizaharide (utilizate i n
tehnicile cromatografice) conjugate cu anticorpi la proteine rezidente n
membranele golgiene. Legarea afin a permis depunerea prin centrifugare a
cisternelor adsorbite pe bile de Sepharose (sefaroz, un polimer de galactoz).
Metoda nu a avut ns impact n lumea cercettorilor, din motivele amintite mai
sus: consum mare de efort i resurse, care nu erau recompensate de rezultate.
De aceea, au fost gsite alternative de studiu, pentru a surmonta aceste
dezavantaje.
Ceea ce cunoatem n momentul de fa asupra funciilor complexului Golgi
provine, n general, din studii de citochimie ultrastructural i din folosirea de
diverse ci de inhibare a proceselor celulare care antreneaz acest organit.
S ncepem cu o enumerare a funciilor mai bine cunoscute ale acestui
organit:
1. prelucrarea sfingolipidelor (biosinteza sfingomielinelor i glicolipidelor prin
modificarea ceramidelor produse n RE);
2. glicozilarea proteinelor (prelucrarea structurilor N-glicozidice continuarea
tunderii i efectuarea glicozilrii terminale; formarea n ntregime a structurilor Oglicozidice inserate pe serin sau treonin);

3. producerea glicozaminoglicanilor cu asamblri ale proteoglicanilor membranari,

sau ai matricei extracelulare;
4. sulfatarea unor glucide (att din glicozaminoglicani, ct i din unele
glicoproteine); substratul de pe care sulfo-transferazele transfer sulfatul este
3-fosfoadenozin-5-fosfosulfatul;
5. marcarea enzimelor lizosomale prin eticheta manozo-6-fosfat (M6P) i
biogeneza lizosomilor;
6. maturarea proteinelor (proces ce implic att modificri enumerate la punctele
2 5, ct i prelucrri proteolitice);
7. sortarea i transportul moleculelor i macromoleculelor la destinaia final n
celul, sau pentru secretarea (exocitarea) lor;
8. biogeneza i traficul intracelular al membranelor (proces care nu poate fi
separat de toate celelalte enumerate, dar care necesit un comentariu mai
detaliat).
Dintre cele opt funcii enumerate, vom detalia doar o parte, astfel nct s
nelegem mai bine importana prezen]ei aparatului Golgi pentru economia
celulei.
De menionat c toate aceste procese se petrec ntr-o succesiune ordonat
de etape
bine controlate i reglate, pe msur ce substanele primite de la RE avanseaz
prin aparatul Golgi dinspre faa cis, ctre faa trans. Acest lucru este posibil prin
meninerea polarizrii biochimice a organitului, despre care am punctat mai sus
unele detalii i pe care le putem mbogi cu date referitoare la polaritatea
enzimelor implicate n prelucrarea i definitivarea structurii chimice a lanurilor Nglicozidice ale glicoproteinelor. Fenomenele legate de formarea structurilor Nglicozidice din glicoproteine au fost unele dintre primele studiate i sunt printre
cele mai bine cunoscute procese ce se petrec n aparatul Golgi.
Enzimele implicate n prelucrarea, n diverse direcii, a structurilor Nglicozidice prezint urmtoarea distribuie ntre cisterne:
(i) n reeaua cis-Golgi este prezent enzima care produce precursorul
etichetei M6P a enzimelor lizosomale (o N-acetil-glucozaminil-fosfotransferaz);
(ii) n cisternele cis-Golgi este localizat manozidaza I, care tunde anumite
manoze din oligozaharidul inserat pe asparagin n RE;
(iii) n cisternele mediene se afl manozidaza II, dar i N-acetil
glucozaminiltransferaza care ncepe glicozilarea terminal;
(iv) n cisternele trans se gsete galactozil-transferaza ce continu
glicozilarea terminal a structurilor N-glicozidice;
(v) n sfrit, n reeaua trans-Golgi sunt ntlnite sialil-transferazele care
definitiveaz glicozilarea terminal prin adugarea de acizi sialici.
Distribuia glicozil-transferazelor, prezentat mai sus, justific i prezena
nucleoziddifosfatazelor a nivelul cisternelor mediene i trans. Explicaia o
constituie faptul c
glucidele sunt transferate pe lanul oligozaharidic n cretere de pe nucleoziddifosfoglucide.
Dup transfer, rmn n lumenul cisternelor nucleozid-difosfai. Acetia nu au
transportori n membrane care s-i transfere n citosol pentru refolosire.
Nucleozidmonofosfat ii i fosfatul au ns transportorii corespunztori, astfel nct

este necesar
moleculelor.

scindarea

Prelucrarea
glicozidice

nucleozid-difosfailor,

definitivarea

pentru

asigurarea

structurilor

reciclrii

glucidice

N-

Analiznd aceast polaritate enzimatic putem deduce n ce const

activitatea complexului Golgi asupra structurilor N-glicozidice. Cunoatem c
producerea acestora este iniiat n RE sub forma unei structuri complexe
oligozaharidice, triantenare format (considernd dinspre asparagin spre
captul liber) din 2 N-acetil-glucozamine, 9 manoze i 3 glucoze. Cunoatem
deasemnea c, dup inserarea pe asparagina aflat ntr-o secven consens,
structura ncepe s fie tuns chiar n RE (mai nti de glucoze, apoi de o manoz);
i mai cunoatem semnificaia funcional a tunderii de primele dou glucoze. Ei
bine, dup ajungerea n Golgi, celula este n msur s decid asupra destinului
acestor glicoproteine. Cele care vor fi enzime lizosomale, sunt marcate la cel
puin una dintre manozele cu care ajunge aici. Cele care au alte destinaii vor fi
prelucrate, prin continuarea tunderii manozelor i, de regul, prin glicozilri
terminale, pentru a deveni structuri nalt manozilate, structuri hibride, sau
structuri complexe
Structurile nalt manozilate sunt slab reprezentate nafara enzimelor
lizosomale
(unde sunt modificate prin fosforilare). Structurile hibride conin nc un numr de
cel puin cinci manoze, dar i glicozilare terminal, de regul nedefinitivat pn
la acizi sialici. n sfrit, structurile complexe conin un miez trimanozidic (cu
manoza legat de
N-acetilglucozamina predecesoare, ca punct de ramificare) i, pe fiecare ramur
iniiat de
o manoz, cel puin cte un lan de glicozilare terminal definitivat. Aceste
structuri se numesc biantenare. Structurile N-glicozidice complexe pot fi ns i
triantenare, sau, mai rar, tetra-antenare cnd ambele manoze distale ale miezului
trimanozidic conin cte dou lanuri de glicozilare terminal. Glicozilrile
terminale implic aadar tunderea de manoze i adugarea pas cu pas (pe
msura naintrii prin cisternele golgiene) de N-acetilglucozamin, apoi de
galactoz i, la sfrit, de acid sialic. Structurile complexe pot conine i fucoz
legat pe cea mai profound Nacetilglucozamin. Corespunztor tipurilor de
structuri glucidice numite mai sus definim i tipuri de glicoproteine: glicoproteine
nalt manozilate, glicoproteine hibride, sau glicoproteine complexe.

Biosinteza structurilor O-glicozidice

Structurile O-glicozidice se produc n ntregime la nivelul cisternelor
golgiene. Dei nu exist date referitoare la distribuia glicoziltransferazelor
implicate n aceste glicozilri i dei lanurile oligozaharidice sunt mai puin
elaborate, este probabil ca aceste enzime s respecte tot o aranjare polarizat
ntre cisterne

Modele referitoare la dinamica structurilor golgiane

Explicarea meninerii polarizrii biochimice a cisternelor golgiene, n pofida

micrii anterograde a materialului prelucrat, a reprezentat i reprezint o
provocare pentru cercettorii din domeniu. Pentru nelegerea acestor mecanisme
au fost elaborate dou modele:
1. modelul transportului vesicular (model tip suveic), stipuleaz c
transportul anterograd este fcut prin microvezicule (diametru de ~50 nm) i
presupune segregarea moleculelor a cror prelucrare este terminat n
microdomenii ale membranei cisternelor donoare, desprinderea lor sub forma
unor vezicule de transport, migrarea ctre cisterna urmtoare (acceptoare),
fuzionarea cu membrana acesteia i predarea moleculelor /macromoleculelor
transportate n vederea prelucrrii corespunztoare bagajului enzimatic al noii
cisterne. Moleculele implicate n aceste procese de transport selectiv, ca si cele
care scap accidental n veziculele de transport sunt apoi returnate printr-un
transport vezicular retrograd, la cisterna donoare.
2. modelul maturrii cisternelor, presupune c transportul anterograd
se face prin
naintarea ntregii cisterne dinspre faa cis ctre faa trans, pe msur ce
procesele biochimice avanseaz. Din cisternele maturate, n fiecare etap,
proteinele rezidente sunt
returnate la cisternele anterioare printr-un transport vezicular.
Aadar, ambele modele presupun un transport vezicular retrograd, iar
prezena unor
vezicule accesorii organitului ce conin molecule rezidente n cisternele golgiene
este singura realitate dovedit fr echivoc, n momentul de fa. n rest,
controversa rmne actual, dei fiecare model are dovezile, dar i contraargumentele sale. Astfel, au fost evideniate vezicule de transport (ce conin
molecule ce sunt tansportate i prelucrate la nivelul organitului) n toat
adncimea complexului Golgi, ceea ce reprezint un argument n favoarea
modelului tip suveic. Totodat, prin Golgi sunt transportate i agregate
moleculare ce depesc diametrul unor asemenea vezicule de transport, ceea ce
favorizeaz modelul maturrii cisternelor. Totui, modelul maturrii cisternelor nu
poate justifica observaia c molecule ce i ncep aventura golgian n acelai
moment, parcurg cisternele cu viteze diferite, ajungnd n reeaua trans-golgian
defazat. Fr ndoial c eforturile care se fac pentru studierea transportului
membranar intracelular, transport care implic aparatul Golgi ntr-un mod
semnificativ, vor avea ca rezultat i soluionarea disputei pe marginea celor dou
modele: modelul tip suveic, respectiv modelul maturrii cisternelor. De
menionat c dei modelul maturrii cisternelor a fost elaborat nc din 1957, el
nu a putut fi validat nici pn n ziua de astzi.

Biogeneza lizosomilor
Lizosomii reprezint organitul prin care celula i asigur moleculele
fundamentale att pe baza reciclrii acestora din componente intracelulare ct i
prin preluri din afara celulei. Funcia lor se bazeaz pe bogatul coninut n
hidrolaze acide, pe care celula i le produce i le direcioneaz corect printr-o
colaborare nalt specializat dintre RE i complexul Golgi. Acest proces poart
denumirea de biogenez lizosomal. El const n biosinteza proteinelor lizosomale
(enzime, proteine membranare lizosomale) care implic mai nti activitatea RE,

apoi pe cea a aparatului Golgi pentru maturarea, sortarea i direcionarea spre

lizosomi a bagajului molecular specific.
Dou sunt aspectele mai bine cunoscute asupra biogenezei lizosomilor i
prezentndu-le pe acestea ne vom face o imagine clar asupra realitii biologice
legate de acest proces: (i) marcarea enzimelor lizosomale i (ii) sortarea,
segregarea moleculelor i vezicularea lizosomilor primari. Ambele fenomene se
petrec la nivelul aparatului Golgi.
Marcarea enzimelor lizosomale presupune formarea unei etichete
(manozo-6-fosfat,
prescurtat M6P) i este un proces ce conine cel puin dou etape. n prima etap,
care are loc la nivelul reelei cis-Golgi, proteinele care sunt destinate a sfri ca
enzime lizosomale i care poart obligatoriu structuri oligozaharidice N-glicozidice
sunt complexate de enzima N-acetil-glucozaminil-fosfotransferaz. Aceasta
modific cel puin una dintre manoze la hidroxilul carbonului 6 prin transferarea
unei N-acetil-glucozamine mpreun cu un fosfat, de pe substratul N-acetilglucozaminil-difosfo-uridin. Se formeaz, n acest fel, un precursor al etichetei
finale M6P, care este cpcit cu molecula de Nacetil- glucozamin. Specificitatea
interaciunii dintre viitoarea enzim lizosomal i Nacetil- glucozaminilfosfotransferaz este asigurat de un semnal conformaional pe care l
structureaz toi precursorii de enzime lizosomale. Semnalul conformaional
reprezint o sum de segmente din secvena primar a unei proteine, care n
structurarea cuaternar a acesteia se dispun alturi, formnd domeniul de
interaciune cu partenerul. Aceste tipuri de semnale sunt afectate, pierzndu-i
funcia, atunci cnd structura cuaternar a proteinei este denaturant. Dup
transferul structurii fosfo-glucidice, complexul precursor de enzim lizosomal/ Nacetil-glucozaminil-fosfotransferaz se disociaz. Unde are loc etapa a doua a
formrii etichetei (eliminarea N-acetil glucozaminei), adic prelucrarea ulterioar a
etichetei la forma ei final, ca i prelucrrile pe care enzimele lizosomale le sufer
pentru a deveni funcionale sunt aspecte aflate deocamdat n studiu. Cert este
ns faptul c n reeaua trans-Golgi capacul de N-acetil-glucozamin nu mai
mascheaz eticheta M6P, care devine funcional i este folosit n procesele de
sortare, segregare i producere a lizosomilor primari. Dovedirea importanei M6P n
biogeneza lizosomilor s-a fcut prin folosirea culturilor de celule ce prezentau
boala incluziilor celulare (I-cell disease; I de la Inclusions). Aceste celule
prezentau un defect structural necunoscut,
prin care enzimele n loc s fie direcionate la lizosomi, ajungeau s fie exocitate.
S-a constatat c aceste celule, crescute n mediu suplimentat cu enzime
lizosomale din celule
normale, i recptau funcia lizosomal. Analizndu-se diferenele din structura
chimic a celor dou tipuri de enzime s-a constatat c singura diferen consta n
prezena de manoze fosforilate la hidroxilul 6 n enzimele celulelor normale.
Sortarea are la baz interaciunea M6P cu un receptor specific
transmembranar
(receptorul la M6P). Acesta din urm este, la rndul su, folosit pentru
segregarea i aglomerarea componentelor lizosomale la nivelul unor structuri cu
nveli de clatrin din reeaua trans-Golgi. Acestea evagineaz din structurile
trans-golgiene i se desprind, pierzndu-i instantaneu nveliul i devenind ceea
ce numim lizosomi primari.

Specificitatea activitii clatrinei la acest nivel, prin comparaie cu i pentru

difereniere de activitatea sa din procesele de endocitoz mediat de receptori,
este dat de tipul de proteine accesorii (adaptine) implicate: n endocitoza
mediat de receptori opereaz adaptinele AP1 (AP de la Adaptor Protein) i AP2,
pe cnd n biogeneza lizosomilor opereaz AP3.
n etapa urmtoare lizosomii primari fuzioneaz fie cu endosomi trzii,
producnd lizosomi secundari, fie cu lizosomi secundari preexisteni, pentru a le
spori bagajul de enzime cu componente proaspete. Biogeneza lizosomilor se
sfrete cu procesele de reciclare a componentelor membranare implicate n
sortare, segregare, veziculare i transport direcionat al lizosomilor primari.
Pentru a ncheia dizertaia referitoare la biogeneza lizosomilor, punctm,
odat n plus, faptul c, la nivelul reelei trans-Golgi, enzimele lizosomale se
prezint n stare funcional, gata maturate. Acesta este motivul pentru care aici
se poate evidenia o reacie citochimic pentru fosfataza acid (o enzim
lizosomal).
Cooperarea reticul endoplasmic Golgi n biogeneza i traficul
intracelular almembranelor
Din tot ce am discutat pn aici, rezult c n tot ceea ce face aparatul
Golgi este dependent de cooperarea cu RE. Dar aceast cooperare nu are
semnificaie funcional numai pentru complexul golgian, ci i pentru RE. Dac
aparatul Golgi nu ar avea ce face fr s primeasc molecule i macromolecule
spre prelucrare de la RE, nici RE nu i-ar vedea munca finalizat dac nu ar exista
n avalul su cisternele golgiene cu aspectele lor structurale i funcionale
caracteristice. Pentru a completa imaginea complexitii acestei cooperri RE
Golgi, vom aborda aici cteva aspecte legate de biogeneza i traficul intracelular
al membranelor. Aceste aspecte sunt cu att mai importante cu ct vizeaz
structuri fr de care celulele nu ar putea exista: biomembranele.
Biogeneza membranelor este un proces deosebit de complex, care implic
mai multe organite. Le amintim doar pe cele care particip pentru tipurile de
membrane ale organitelor neautonome: ribosomul, RE i complexul Golgi. Practic
biogeneza membranelor presupune:
(i) biosinteza componentelor moleculare ale membranelor;
(ii) asamblarea corect a acestora la nivelul structurii;
(iii) maturarea structurii la una funcional;
(iv) transportul direcionat al noilor membrane la destinaie.
ntruct nu este obligatoriu ca toate aceste procese s se ntmple n
succesiunea n care au fost enumerate, ci, de regul, ele se ntreptrund, este de
la sine neles c necesit un bine elaborat, controlat i reglat trafic de
membrane. Altfel spus, biogeneza i traficul intracelular al membranelor
formeaz un sistem integrat de procese eseniale pentru organizarea i
funcionarea celulei.
Referitor la biosinteza componentelor moleculare ale membranelor avem
deja informaii din ceea ce am abordat la RE ca i din ceea ce am prezentat pn
acum la aparatul Golgi. La fel stau lucrurile i legat de asamblarea corect a
(macro)moleculelor n cadrul structurilor nou-formate. Ct privete maturarea
structurii la una funcional ea presupune aducerea componentelor ei moleculare
n stare funcional prin maturare ca i prelucrarea sfingolipidelor i

(glico)proteinelor n complexul Golgi. Rmne s mai discutm traficul de

membrane, n decursul cruia i prin care toate celelalte sunt posibile. n aceast
privin, vom aborda mai nti traficul dintre RE i Golgi, dup care traficul dintre
reeaua trans-Golgi i locul destinaiei finale a noilor membrane.

Traficul RE Golgi
Acest trafic implic mai multe procese:
(i) Sortarea la nivelul elementelor tranziionale ale RE (cu participarea
proteinelor de nveli COP II i proteinei G monomerice Sar1, cu rol reglator);
(ii) Traficul ctre aparatul Golgi;
(iii) Sortarea la nivelul complexului Golgi (cu participarea proteinelor de
nveli COP I i proteinei G monomerice Arf1, pentru reglare);
(iv) Returul la RE (reciclarea unor componente).
Referitor la acest transport este dovedit n prezent, fr controverse, c
respect un mecanism de tip suveic. Dac transportul anterograd nu a fost pus
sub ndoial, existena transportului retrograd a fost subiect de disput pn n
1989. n acest an colectivul condus de Jennifer Lippincott-Schwartz, a raportat
observaia c, n celulele tratate cu brefeldin A (un metabolit fungic),
complexul Golgi se dezorganizeaz i dispare, iar enzimele sale se
regsesc n structuri ale RE, inclusiv n anvelopa nuclear. Prezena enzimelor
golgiene n anvelopa nuclear s-a constituit ntr-o dovad indubitabil c celelalte
structuri pozitive la reacia citochimic (reacia imunocitochimic pentru
manozidaza golgian) aparin tot RE. Rezultatele nu pot fi explicate dect
acceptnd c brefeldina A blocheaz specific transportul anterograd i c, drept
urmare, aparatul Golgi se vars n RE datorit unui transport retrograd, de la
Golgi ctre RE. Dei transportul RE Golgi n ambele direcii este acum
indiscutabil, mecanismele prin care acesta se face ntr-una sau cealalt direcie
sunt departe de a fi elucidate. Cert este c el implic structurile intermediare
ERGIC/VTC, proteine de nveli diferite i regulatori (proteine G monomerice)
specifici direciei. El implic sortri pe baz de motive de aminoacizi (grupe de doi
trei aminoacizi) i proteine motoare specifice microtubulilor (dezorganizarea
microtubulilor afecteaz traficul).
Traficul membranar discutat mai sus rezolv aspectele legate de biogeneza
membranelor golgiene i iniiaz aspectele legate de biogeneza celorlalte tipuri
de membrane destinate sistemului endosomal i membranei celulare.

Traficul reea trans-Golgi locaie final

1. Traficul trans-Golgi lizosom, ne este deja familiar. Amintim c el
presupune sortri prin M6P, segregri prin receptorii la M6P, AP3 i clatrin i
transport direcionat prin proteine transmembranare.
2. Traficul trans-Golgi membran celular implic o discuie mai
nuanat. Vom aborda mai nti traficul trans-Golgi membran celular n celulele
polarizate, cu cele dou componente ale sale:
(i) Traficul trans-Golgi membran apical se caracterizeaz prin
urmtoarele aspecte:

Mecanismele sortrii nu sunt pe deplin elucidate, dar exist rapoarte care

propun fenomene ce implic ectodomeniile proteinelor i chiar interaciuni de tip
lectinic, ce presupun participarea structurilor glucidice ale glicoproteinelor, sau
glicolipidelor. Pe de alt parte, este propus participarea structurilor de tip plut
lipidic (lipid raft), care sunt descrise preferenial pentru domeniile apicale ale
membranei.
Transportul elementelor rezultate prin sortare implic un mecanism
cooperativ, care
folosete iniial ruta microtubulilor, apoi ruta filamentelor de actin. Asemenea
mecanisme au fost dovedite n 1993. Mecanismele au fost descrise pentru
enterocite (celule intestinale absorbante) i ele exploateaz organizarea specific
a citoscheletului n aceste celule. n enterocite microtubulii ce trec pe lng
cisternele golgiene sunt orientai cu capul (-) ctre membrana apical, strbtnd
parial estura de filamente de actin ce formeaz trama terminal i
terminndu-se n proximitatea filamentelor de actin ce structureaz axul
citoscheletal al microvililor. Folosind aceast structurare i orientare,
microveziculele ce transport componente nou sintetizate ale membranei apicale
folosesc iniial proteine motoare din familia dyneinelor, pentru a se deplasa
ctre capul (-) al microtubulilor. Cnd ajung la filamentele de actin ce strbat
axul microvililor, trec la folosirea unei alte proteine motor, miozina I, cu ajutorul
careia se deplaseaz de-a lungul acestor filamente. Ajungnd la nivelul
membranei apicale de la baza microvililor, membrana veziculelor fuzioneaz cu
membrana celular, mrindu-i suprafaa. Mecanismul descris concord cu
rezultate experimentale raportate de alte colective, n care celule epiteliale
intestinale au fost incubate cu nocodazol, sau colchicin, substane care
depolimerizeaz tubulina dezorganiznd microtubulii. Dup acest tratament,
eficiena transportului ctre membrane apical se reduce cu ~50%, iar veziculele
care pot ajunge aleatoriu la filamentele de actin ale tramei terminale, sunt
direcionate la membrana lateral, ctre care aceste filamente sunt orientate,
conducnd la apariia de microvili la acest nivel.
(ii)Traficul trans-Golgi membran latero-bazal presupune sortri
prin motive de
aminoacizi din endodomeniile proteinelor transmembranare. Transportul se face
tot pe calea microtubulilor, ns ctre capul (+), prin folosirea kinezinelor (alte
proteine motor specifice pentru microtubuli). Este astfel folosit orientarea
diferit a microtubulilor, cu capul (+) ctre membrana latero-bazal.
O meniune care trebuie fcut este referitoare la reglarea acestui trafic. Ei
bine, reglarea mecanismelor de selecie, sortare i veziculare n sisteme diferite
de transport se face prin proteine G monomerice. Diversitatea acestora (probabil
c nc nu cunoatem toate speciile moleculare din aceast super-familie de
proteine) asigur o bun reglare a situaiilor pe care celula le are de rezolvat. Fr
ndoial, controlul i reglarea acestor mecanisme de sortare i transport se vor
dovedi mult mai complexe, pe masur ce cunoaterea noastr asupra
fenomenelor se va detalia.

Direcionarea transportului intermembranar

Specificitatea de direcionare a traficului membranar este asigurat de
diversitatea proteinelor din familia denumit prescurtat SNARE. Pentru fiecare

membran int exist o pereche specific v-SNARE/t-SNARE. Specificitatea

acestei perechi asigur transportul corect ctre membrana acceptoare.
mperecherea corect atrage declanarea mecanismelor de fuziune a
membranelor. Procesul implic o serie de proteine accesorii care structureaz o
mainrie de fuziune, ce este activat dup legarea v-SNARE la t-SNARE.
Se consider c specificitatea interaciunii dintre partenerii coreci ai
perechii
v-SNARE/t-SNARE mpiedic fuzionrile dintre vezicule i alte membrane la care
pot ajunge accidental. Acest punct de vedere pare totui a fi contrazis, cel puin
n cazul experimentelor amintite mai sus pentru transportul membranei apicale n
enterocite. Acolo se dovedete c mecanismul nu exceleaz n privina
specificitii; altfel nu s-ar putea forma microvili la nivelul membranei laterale.
Exist totui explicaii, dar validitatea lor trebuie dovedit experimental. O prim
explicaie o poate constitui faptul c afectarea transportului direcionat ctre
membrana apical, poate induce apariia de t-SNARE specifice membranei
apicale, n membrana latero-bazal. Nu putem ns exclude nici posibilitatea
existenei unor aspecte de detaliu ale mecanismului direcionrii, care
deocamdat ne scap i care este posibil s nuaneze situaiile.
Abordarea experimental a rolului complexului Golgi n traficul intracelular
al membranelor prin folosirea proteinelor himerice obinute prin cuplarea
proteinelor golgiene
rezidente cu protein fluorescent verde (GFP, de la Green Fluorescent
Protein) ar putea s aduc n viitor informaii detaliate asupra mecanismelor.
GFP a fost extras dintr-o meduz. Proteinele himerice se obin modificnd genele
corespunztoare celor dou proteine (proteina de studiat, respectiv GFP) prin
cuplarea lor, pentru a obine o nou gen corespunztoare unei proteine
himerice. Cuplarea se poate face pentru adugarea polipeptidei fluorescente fie
la captul amino-terminal al proteinei de interes, fie la cel carboxi-terminal, astfel
nct himera s pstreze funcia i distribuia intracelular ale proteinei studiate.
Exprimarea proteinei himerice n celule se face dup transfecie. Transfecia
este un procedeu prin care gena modificat, nglobat ntr-o plasmid, este
introdus n celula care se supune studiului. Adesea materialul genetic este
inserat n genom i se exprim, ducnd la obinerea de proteine cu funcie
cunoscut marcate fluorescent. Asemenea studii au fost deja realizate, pentru
studiul mobilitii proteinelor la nivelul membranelor cisternelor golgiene, ca si
pentru studiul structurilor implicate n transportul RE-Golgi, respectiv Golgimembran celular. O dezvoltare interesant o reprezint o reuit recent a
colectivului condus de J. Lippincott-Schwartz. Acesta a reuit s obin mutante
ale GFP, care devin fluorescente numai dup fotoactivare. Aceast reuit va
uura urmrirea proteinei himerice fluorescente, fr a mai fi pericolul ca celula
s se suprancarce cu fluorescen prin producerea continu a himerei i fr s
mai necesite inhibitori ai sintezei proteice. Viitorul n studiul aparatului Golgi
rmne interesant i pare a deveni mai de succes.
Ciclul secretor celular (calea secretorie celular)
Celulele organismului produc alturi de (macro)molecule necesare folosinei
interne i unele a cror destinaie este aceea de a fi secretate (exocitate).
Aceast proprietate se poate manifesta permanent, sau periodic i implic,
bineneles, un trafic membranar.

Ciclul secretor se definete ca o succesiune de fenomene prin care se realizeaz:

(i) biosinteza moleculelor/macromoleculor de secreie;
(ii) prelucrarea (maturarea), sortarea, vezicularea i condensarea
veziculelor/ vacuolelor de secreie;
(iii) secreia propriu-zis, care poate fi constitutiv, sau semnalizat
(stimulat).
Trebuie adugat c n multe cazuri maturarea presupune proteoliza unor
pro- sau pre-procomponente. De exemplu, n cazul insulinei, maturarea
presupune eliminare mai multor
fragmente din lanul polipeptidic iniial, unic. Pre-pro-insulina nseamn lanul ce
conine peptida semnal necesar translocrii prin membrane RE. Pro-insulina
reprezint lanul proteic fr peptida semnal, eliminat de semnal-peptidaz.
Aadar, pre-pro-insulina ar fi preursorul inserat n membrana RE (care, de regul,
nu exist ca atare, deoarece funcia semnal-peptidazei se manifest ca fenomen
co-traducere), iar pro-insulina (form cu existen real) este protein solubil,
liber n lumenul RE, respectiv n lumenele golgiene. Insulina matur se produce
n granula de secreie prin eliminarea proteolitic a unei secvene din centrul
lanului polipeptidic, astfel nct cele dou subuniti ale moleculei de insulin
rmn solidarizate, dar prin dou puni disulfurice.
Adesea, coninutul vacuolelor de secreie sufer un proces de condensare,
ce const n eliminarea apei din lumen ctre citosol.
Ceea ce este necesar s mai adugm, pentru o mai bun stpnire a
proceselor celulare legate de secreie, vizeaz etapa secreiei propriu-zise. Ct
privesc fenomenele de
direcionare a veziculelor/vacuolelor de secreie ctre membran se consider c
respect
principiile deja prezentate.
Calea de secreie constitutiv opereaz n toate tipurile de celule. Se
consider c ea se petrece concomitent cu traficul noilor suprafee de membran
necesare a nlocui componente devenite nefuncionale, sau a satisface nevoile de
cretere
a
suprafeei
de
membran
din
anumite
fenomene
de
organizare/reorganizare a esuturilor ce nsoesc situaii fiziologice sau patologice.
Aceste fenomene necesit i organizri/reorganizri ale spaiilor extracelulare,
astfel nct este necesar secreia de componente ale matricei extracelulare, cel
puin. Fenomenele par a se desfura de la sine prin transport i fuziuni
constitutive de membrane, dei n momentul de fa se acumuleaz date ce
indic faptul c n situaiile patologice, fenomenele care n situaii normale
corespund secreiei constitutive, necesit amplificri care par a fi rezultatul unor
fenomene de semnalizare n care capacitatea integrinelor de a semnaliza
bidirecional (dinspre exterior ctre celul , respectiv dinspre celul ctre
matricea extracelular) intervine activ.
Aadar, trebuie s fim circumspeci i s evitm tentaia de a ncerca
trasarea de granie ferme ntre cele dou ci de secreie.
Calea de secreie semnalizat este, de regul, specific celulelor
specializate (spre
exemplu celule galandulare). Ea presupune exocitarea componentelor acumulate
n
vezicule/vacuole de secreie, pe care celulele le stocheaz, pn la primirea unui
semnal

(stimul). Acest stimul ntiineaz c organismul are nevoie de substanele

stocate n vederea secreiei ulterioare. Molecula mesager se leag de un receptor
specific din membrana celulei secretoare i declanaz mecanisme de
semnalizare,
al
cror
efect
este
inducerea
fuziunii
membranei
veziculelor/vacuolelor de secreie cu membrana celular i exocitarea
coninutului. n multe cazuri, fuziunea semnalizat a membranelor se datoreaz
creterii concentraiei de Ca2+ n citosol.
De menionat c, n unele cazuri, completa maturare a moleculelor
secretate se petrece exact n momentul exocitozei. Acesta este, de exemplu,
cazul colagenului tip I a crui maturare final nseamn eliminarea, prin
proteoliz, a unor fragmente din capetele
pro-proteinei, eliminare care permite fibrilarea moleculei. Dac maturarea s-ar
produce n celul, colagenul ar forma fibre n structurile intracelulare, afectnd
funcionarea acesteia i inducnd situaii patologice.
n concluzie, ciclul secretor (numit mai frecvent cale secretorie) implic
cooperarea dintre RE (la nivelul cruia se sintetizeaz componentele moleculare
destinate exportului) i aparatul Golgi (rspunztor, de regul, de finalizarea
maturrii moleculelor de secretat, de sortarea, condensarea i formarea
vacuolelor de secreie), dar i traficul membranar aferent acestor procese.
O remarc merit fcut asupra termenului de ciclu secretor, sau cale
secretorie. Dac ar fi s considerm c noiunea de ciclu implic reciclri ale unor
componente, atunci mai corect ar fi, n momentul de fa, termenul de cale
secretorie. Aceasta deoarece nu exist doovezi asupra reciclrii unor componente
implicate n mecanismele celulare ce realizeaz procesul. Mai mult, pentru
secreia constitutiv exist dovezi c dinamica procesului implic ajungerea
veziculelor n imediata apropiere a membranei, unde, dup o ateptare de 15-30
secunde, fuzioneaz rapid, iar componentele membranei veziculare se mprtie
aproape instantaneu n planul membranei. (Asemenea dovezi experimentale au
fost obinute prin folosirea himerelor proteice fluorescente, despre care am
amintit mai sus.) Asta nseamn c dac ar fi vorba de fenomene de reciclare,
acestea ar trebui s se produc n alte circumstane, ca nsoind alte procese
celulare. Ct privete secreia semnalizat, nu avem, deocamdat, nici un fel de
date referitoare la ce se ntmpl cu membranele implicate n proces.

Consideraii finale
Putem rezuma n finalul prezentrii datelor eseniale cunoscute asupra
complexului Golgi c:
- este singurul organit care a captivat permanent comunitatea
cercettorilor; mai nti prin suspiciune, apoi prin complexitate structural
i funcional;
- se prezint ca o stiv de cisterne recurbate, cu polaritate morfologic, dar
i biochimic;

- primete materialul asupra cruia opereaz de la RE i funcioneaz ca o

plac turnant pentru maturarea, sortarea i direcionarea componentelor
lizosomale, membranare, sau de export ctre destinaie;
- n tot ceea ce face este implicat un trafic intracelular permanent de
membrane, pe care l controleaz i regleaz prin mecanisme care sunt
departe de a fi pe deplin elucidate;
- este un organit intens studiat n momentul de fa, pe celule vii, folosinduse proteine
himerice fluorescente, exprimate dup transfecii cu gene inserate n
plasmide.
Este de ateptat ca viitorul apropiat s aduc noi date legate de acest
organit cu implicaii semnificative asupra cunoaterii i nelegerii unor procese
celulare eseniale n descrierea celulei normale i n stabilirea limitelor de la care
se poate defini patologia celular. Se va putea astfel trece de la definirea
patologicului prin simptomatologie clinic, la definirea sa pe baza deviaiilor
subtile de la ceea ce reprezint normalul la nivel celular i molecular.

Bibliografie
Glick BS (2000) Organization of the Golgi apparatus. Curr Opin Cell Biol 12, 450456.
Lippincott-Schwartz J, Roberts TH, Hirschberg K (2000) Secretory protein
trafficking and
organelle dynamics in living cells. Annu Rev Cell Dev Biol 16, 557-589.
Bonifacio JS, Glick BS (2004) The mechanism of vesicle budding and fusion. Cell
116,
153-166.
Fath KR, Burgess DR (1993) Golgi-derived vesicles from developing epithelial cells
bind
actin filaments and possess myosin-I as a cytoplasmically oriented peripheral
membrane
protein. J Cell Biol 120, 117-127.
Allan VJ, Thompson HM, McNiven MA (2002) Motoring around the Golgi. Nature
Cell
Biol 4, E236-E242.