2/3/2010

ELEMENTELE DE STRUCTUR
ALE CELULEI BACTERIENE

ULTRASTRUCTURA BACTERIILOR.
ELEMENTELE PERMANENTE I
NEPERMANENTE DE STRUCTUR

Elementele constante (permanente, obligatorii)

Peretele celular
Membrana citoplasmatic
Citoplasma
Nucleoidul
Ribosomii
Mezosomii
Elementele inconstante (nepermanente, neobligatorii)
Capsula
Sporul
Flagelii
Pilii/fimbriile
Plasmidele
Incluziunile celulare

PERETELE CELULAR (PC)

Reprezint un nveli rigid ce nconjoar

protoplastul bacterian. Lipsete la
micoplasme.

Se disting 2 mari grupe de bacterii n funcie

de structura PC:
1. Bacterii gram-negative (G-)
2. Bacterii gram-pozitive (G+)
(1884, savantul danez Christian GRAM).
Elementul comun al ambelor grupe
peptidoglicanul (PG).

2/3/2010

PEPTIDOGLICANUL (PG)
PG structur particular rigid a PC bacterian.
Structura PG:
Heteropolimer macromolecular reticulat, constituit dintr-un
component glicanic i unul peptidic.
Partea glicanic (polizaharidic) este constituit din catene
liniare paralele n care alterneaz N-acetyl-glucozamina
cu acidul N-acetyl-muramic.
Partea peptidic este reprezentat de uniti tetrapeptidice
(izomeri L i D de AA), fixate de acidul muramic, care pot
fi legate intre ele direct (formand o structur
bidimensional, la bacterii G-) sau prin puni
interpeptidice (structur tridimensional, la bacterii G+).

Acidul diaminopimelic, izomerii D ai AA i acidul

muramic se ntlnesc doar la celulele procariote.
Fragmente solubile de murein pot stimula secreia
excesiv a citokinelor de ctre macrofage, prin
legarea de receptorii toll-like sau CD14, inducnd
astfel simptome de oc septic
PG reprezint inta de atac a unor substane:
1. Lizozimul, care taie legturile dintre N-AGA i acidul NAM (catena glicanic)
2. Unele antibiotice (beta-lactamine, glicopeptide,
fosfomicina), care perturb procesul de
transpeptidare.

PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR GRAM-POZITIVE

Uniform, cu pori mici

Grosimea 20-80 nm (pn la 300 nm)
- Componentul major (40-80%) reprezint PG
(structur reticulat tridimensional)
- Componente minore:
1. Acizii teichoici (polimeri de glicerol sau ribitol fosfat),
fixai de N-AGA. Traverseaz PG i creaz sarcin
electric negativ la suprafaa bacteriei, asigur
transferul de ioni i fixarea unor proteine, funcie
antigenic. Pot activa complementul pe cale
alternativ i stimula secreia citokinelor de ctre
macrofage.
-

2. Acizii lipoteichoici: se fixeaz de

MCP i depesc
stratul de PG.
Funcii: identic cu acizii teichoici, intervin n
adeziunea la celule i au un efect toxic slab.
3. Proteine asociate peretelui celular: proteina A,
coagulaza legat (clumping factor) i proteina
fixatoare de fibronectin la Staphylococcus aureus,
proteina M la Streptococcus pyogenes (rol n
adeziune la substrate, protecie de fagocitoz)
4. La unele bacterii G+ (de exemplu: Mycobacterium,
Nocardia) peretele conine o cantitate important
de lipide sau ceruri, la altele (ex.: streptococi)
peretele conine multe glucide.

2/3/2010

PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR GRAM-NEGATIVE

1.

2.

Grosimea 10-12 nm
Neomogen, format din straturi distincte:
PG, stratul intern, constituie 1-10% din
masa uscat a peretelui celular. Acizii
teichoici lipsesc. Nu exista puni
interpeptidice (structur bidimensional).
Membrana extern (ME) dublu strat lipidic
cu proteine nserate (proteine majore
70%, minore 30%).

Unele proteine majore - porine, unindu-se n

triplete, particip la formarea porilor, altele
(nonporine) au funcie de receptor pentru
bacteriofagi i pili sau asigur adeziunea la
receptorii celulelor-gazde.
Proteinele minore sunt enzime implicate in
captarea unor substane i transportul specific
transmembranar.
ME este permeabil pentru ioni i mici molecule
hidrofile i impermeabil pentru molecule
hidrofobe sau amfipatice

3. Lipoproteinele asigur legtura dintre ME i PG

4. Lipopolizaharidul (LPZ) stratul extern al peretelui
gram-negativ. Este format din:
Lipidul A (endotoxin), glicolipid ancorat n ME.
Stimuleaz formarea i secreia citokinelor.
Determin efectul toxic al bacteriilor G- manifestat
n urma lizei celulare.
Polizaharide complexe, fixate pe lipidul A. Particip
n procese de penetrare i transport a unor
substane, confer specificitate de gen (antigenul
R)
La exterior, subuniti oligozaharidice liniare sau
ramificate. Creaz sarcin negativ la suprafaa
bacteriei (mpiedic fagocitoza, accesul
moleculelor toxice), confer specificitate de specie
sau tip (antigenul O)

2/3/2010

Spaiul periplasmic este regiunea dintre ME i

MCP. Conine PG i proteine-enzime
implicate n transport, digestia nutrienilor,
protecia contra substanelor toxice (ex.:
beta-lactamazele, care distrug antibioticele
beta-lactamice).
La bacteriile G+ aceste enzime sunt secretate
n mediul extern.
Evidenierea peretelui celular: microscopia
electronic, metode speciale de colorare,
plasmoliz (n mediu hipertonic),
plasmoptiz (n mediu hipotonic).

2/3/2010

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

9.

FUNCIILE PERETELUI CELULAR

Confer forma bacteriilor
Barier osmotic i mecanic
Barier de permeabilitate selectiv
Funcie antigenic (Ag O i R)
Particip la procesele de cretere i diviziune
celular
Funcie de receptor
Responsabil de aderena specific la substrate
Componente ale peretelui celular (lipidul A, acizii
lipoteichoici, fragmente de PG) contribuie la
producerea citokinelor i activarea complementului
pe cale alternativ cu manifestarea ocului septic
(endotoxinic)
Reprezint inta de atac a unor enzime i
antibiotice

Mecanismul: Peretele G- este subire,

conine multe lipide (20%), care sunt
dizolvate de alcool, porii au diametrul mare,
pH citoplasmei este slab acid (se
decoloreaz cu alcool);
Peretele G+ este gros, nu conine lipide sau
foarte puine, alcoolul deshidrateaz
peretele i reduce diametrul porilor, pH acid
(colorantul nu este splat din citoplasm)

Utilizarea practic a coloraiei Gram:

1. Diagnostic
2. Orientare n tratament (sensibilitate diferit
la antibiotice)

Determinarea tipului peretelui celular

COLORAIA GRAM (condiionat de structura i
compoziia chimic a peretelui celular)
1.
Colorarea frotiului fixat cu violet de genian
(citoplasma bacteriilor se coloreaz n violet)
2.
Splarea cu ap apoi tratarea cu soluie Lugol (I 2
+KI) fixeaz colorantul n celule prin formarea
complexului insolubil violet-iodin
3.
Decolorarea cu alcool 95%. Bacteriile G+
pstreaz colorantul, cele G- se decoloreaz.
4.
Recolorarea bacteriilor G- cu fucsin apoas
Rezultat: bacteriile G+ apar colorate n violet,
bacteriile G- n rou.

Acidorezistena bacteriilor
Unele bacterii G+ (Mycobacterium, Nocardia)
conin n componena peretelui multe lipide,
acizi grai i ceruri (70% din greutatea
peretelui). Aceasta le confer rezisten
marcant n mediul extern i sensibilitate
distinct la antibiotice.
Coloraia Ziehl-Neelsen permite diferenierea
acestor bacterii dup proprietatea lor de acidoalcoolo-rezisten

2/3/2010

METODA DE COLORARE ZIEHL-NEELSEN

Principiul: bacteriile acido-rezistente colorate cu
fucsin fenicat nclzit nu pot fi decolorate
de acizi sau alcool.
1.
Frotiul se coloreaz cu fucsin fenicat,
nclzind lama pn la apariia vaporilor (2 - 3
ori)
2.
Se cltete cu ap, apoi se trateaz cu soluie
de acid sulfuric de 5%
3.
Dup splare frotiul se recoloreaz cu albastru
de metilen
Rezultatul: bacteriile acido-rezistente rmn
colorate n rou, cele acido-nerezistente se
decoloreaz, apoi se recoloreaz n albastru

Sub influena unor substane (lizozim, antibiotice)

PG poate fi deteriorat, iar bacteria explodeaz din
cauza presiunii osmotice ridicate (5-20 atm). n
mediu echilibrat osmotic pot fi obinute forme
particulare:
Protoplastul - reprezint o structur sferic
totalmente lipsit de perete celular. El este obinut
din bacterii G+
Sferoplastul - structur sferic sau neregulat parial
lipsit de perete celular. Este o bacterie G- lipsit de
peptidoglican i nconjurat de ME i MCP
Bacteriile care prezint un deficit n PG sunt numite
forme L (descoperite la institutul Lister). Ele se pot
forma sub influena antibioticelor betalactamice.
Sunt instabile fa de variaii osmotice i rezistente
la betalactamine. Pot fi reversibile sau ireversibile

MEMBRANA CITOPLASMATIC (MCP)

Prezint o structur membranar clasic:

dublu strat fosfolipidic n care sunt
nserate proteine i glicoproteine.
Lipsesc sterolii.
La bacteriile gram-pozitive MCP formeaz
invaginaii, mezosomi (septali, laterali),
n care se conin enzime, citocromi i
proteine ale sistemului transportor de
electroni.

2/3/2010

Proteinele MCP:
1.
PFP (Proteine Fixatoare de Penicilin), enzime ce
catalizeaz legturile dintre catenele peptidice din
PG reacia de transpeptidare (sunt inactivate de
penicilin i antibiotice beta-lactamice)
2.
Componente ale sistemului de transport
(permeaze)
3.
Proteine ale sistemelor de secreie (I V).
Reprezint cilindre proteice ce traverseaz
nveliurile celulei bacteriene. Asigur transportul
proteinelor din interiorul celulei bacteriene spre
exterior
4.
Proteine receptori
5.
Enzime ale lanului respirator

1.
2.

Evidenierea MCP
Microscopia electronic
Fenomene de plasmoliz (n mediu
hipertonic retracia citoplasmei) sau
plasmoptiz (n mediu hipotonic liza
celulei, desprinderea MCP de peretele
celular)

Funciile membranei citoplasmatice

Barier osmotic i de permeabilitate selectiv

Asigur transportul activ prin intermediul
permeazelor
Excreia enzimelor hidrolitice, toxinelor, etc
Sediul metabolismului energetic (mezosomi)
Intervine n diviziunea celular (mezosomi)
Implicare n sinteza PG i a fosfolipidelor
Implicare n chemotaxie prin receptori specifici
Asigur transmiterea informaiei din mediul
nconjurtor spre interiorul celulei bacteriene

1.
2.

3.
4.
5.
6.
7.
8.

CITOPLASMA
Necompartimentat
- Lipsesc organitele celulare
- Format din ap (80%), conine nucleoidul,
ribosomi (apr. 20 000 per celul), incluziuni,
plasmide, ioni, enzime, deeuri, etc.
- Consistena dens (stare de gel) asigur
permanena mediului intern
- pH acid
Funcii: sediul tuturor proceselor metabolice
Evidenierea: prin orice metod de colorare
-

NUCLEOIDUL BACTERIAN
Constituit din ADN bicatenar circular, uneori liniar,
plasat liber n citoplasm. ADN este repliat n bucle
i stabilizat prin ARN i proteine. Fiecare bucl este
hiperspiralizat sub aciunea ADN-girazei i
topoizomerazei IV (se ntlnesc doar la bacterii). Pe
ADN sunt fixate enzime de sintez (ADN - , ARN
polimeraze)
Funcii: dirijaz activitatea celulei (procesele de
sintez, creterea, multiplicarea, diferenierea
celulei, replicarea proprie, etc)
Evidenierea:
- Microscopia electronic
- Metode speciale de colorare (Feulgen)
Feulgen: HCl.aldehida.react. Shiff.culoare rosie
-

2/3/2010

PLASMIDELE
Elemente genetice (ADN) extracromozomiale,
capabile de replicare autonom. Confer bacteriei
caractere suplimentare. Se transmit celulelor-fiice
la diviziunea bacteriei. Plasmidele conjugative F se
transmit prin conjugare.
Episom - plasmida integrat n cromosom
Tipuri de plasmide:
1.
F factor de fertilitate, conjugative (sinteza pililor
F)
2.
R rezisten la antibiotice
3.
Ent producerea enterotoxinei
4.
Hly producerea hemolizinei
5.
Col producerea de bacteriocine
Utilizarea practic: n tehnologii de ADN-recombinant

SPORUL BACTERIAN
Reprezint o difereniere celular care
asigur supravieuirea bacteriei n condiii
nefavorabile ale mediului extern.
Bacterii sporogene Bacillus, Clostridium. Aceste
mi/o se prezint sau sub form vegetativ, metabolic
activ, sau sub form inert metabolic sporul.
Procesul de formare a sporului este numit
sporogenez, sporulare. Este declanat n special de
carene nutritive sau condiii nefavorabile ale mediului
extern.
-

Stadiile sporogenezei (durata 36-72 ore)

Stadiul I se formeaz filamentul axial, compus din
ADN
Stadiul II divizarea asimetric a citoplasmei printr-un
sept, formarea presporului, care conine un filament
de ADN. MCP nglobeaz presporul.
Stadiul III nglobarea complet a presporului, care este
limitat de 2 membrane
Stadiul IV formarea cortexului de PG ntre cele 2
membrane
Stadiile V-VI formarea tunicii proteice la exterior i
maturarea sporului. Uneori se formeaz un nveli
extern suplimentar - exosporiu
Stadiul VII sporul matur este eliberat iar celula-mam
se dezintegreaz

2/3/2010

Proprietile sporului
Inactiv metabolic
- Coninut sczut de ap liber
- Coninut mare (pn la 10%) n dipicolinat de calciu
- Rezistent la temperaturi i pH extreme, desicare,
radiaii, ageni chimici i fizici
n condiii favorabile sporul germineaz, dezvoltnduse forma vegetativ.
Forma sporului (sferic, oval) i poziia n celul
(central, subterminal, terminal) sunt caractere
utile n identificarea bacteriilor.
Evidenierea sporilor: colorarea dup AUJESZKY (sporul
se coloreaz n rou, iar citoplasma n albastru)

2/3/2010

CAPSULA
- nveliul extern al unor bacterii.
Reprezint polimeri organici sintetizai n mediul
natural de via al bacteriilor (exemplu: n
macroorganism).
Se disting:
- Capsula adevrat (peste 0,2m), vizibil la
microscopul optic
- Microcapsula, detectat la microscopul electronic
- Capsula flexibil (slime, glicocalix), o reea lax de
fibre polizaharidice, care difuzeaz n mediu. Nu se
evideniaz microscopic. Asigur formarea
biofilmelor bacteriene ansamblu structurat de
celule bacteriene nglobate ntro matrice de polimeri
de origine bacterian, care poate adera la suprafee
inerte (ex.: cateter, stimulator cardiac, endoproteze,
sonde de intubare, etc) sau esuturi vii.

Funciile capsulei:
Impiedic desicarea bacteriei
Barier de permeabilitate pentru substane toxice
(antibiotice, ioni metalici)
Barier protectoare faa de factori antiinfecioi
(complement, fagocite), bacteriofagi, protozoare
Rezerv nutritiv
Asigur aderarea bacteriei la substrate esuturi sau
suporturi inerte (placa dentar, biofilm pe catetere,
proteze, instrumente, etc)
Specificitate antigenic de specie sau tip (Ag K)

Compoziia chimic a capsulei: ap i

substane organice (polizaharide,
mucopolizaharide, peptide)
Bacillus anthracis acid glutamic
Neisseria meningitidis, Streptococcus
pneumoniae polizaharide
Streptococcus pyogenes acid hialuronic

Evidenierea capsulei
Coloraia Burri-Hins (metod negativ)
- Pe lam se amestec suspensia bacterian cu tu
de China, se etaleaz, se usuc
Frotiul se fixeaz cu alcool
- Se coloreaz frotiul cu fucsin apoas
Rezultatul: capsula apare ca un halou incolor pe
fondul negru. Citoplasma bacteriilor se coloreaz n
rou.
Coloraia Romanovski Giemsa (capsula se
coloreaz n roz) coloraie pozitiv a capsulei

10

2/3/2010

GRANULAIILE DE VOLUTIN
Reprezint polimeri anorganici de polimetafosfat.
Servesc n calitate de rezerv de fosfai i pot
interveni n metabolismul energetic.
Interesul medical: la agentul difteriei,
Corynebacterium diphtheriae, granulele de volutin
se localizeaz la extremitile celulei, iar la
corynebacterii nepatogene sunt repartizate
neuniform n citoplasm.
La tratarea cu unii colorani bazici granulele de
volutin se coloreaz n alt culoare, de ex. n rouviolet la colorarea cu albastru de metilen
fenomenul metacromaziei.
Evidenierea: metoda Loeffler, metoda Neisser

11

2/3/2010

FLAGELII
structuri filamentoase proteice, ntlnite la
bacterii, bacili, spirili i spirochete.
Funcii: intervin n mobilitatea bacterian,
reprezint Ag H al bacteriilor.
Structura flagelului:
- Filamentul, structur helicoidal constituit din
fibrile proteice (flagelin) rsucite
- Crligul de articulaie
- Corpul bazal, constituit dintr-un ax rigid i mai
multe inele ce servesc la fixarea flagelului (la
MCP i PC).
Mobilitatea bacteriei este asigurat de rotaia
flagelului (30 70 micrometri/s).

Tipurile de bacterii dup dispoziia flagelilor

Bacterii monotriche
Bacterii lofotriche (un mnunchi de flageli la
o extremitate)
Bacterii amfitriche (cte un flagel sau un
mnunchi de flageli la fiecare extremitate)
Bacterii peritriche (flageli pe toat suprafaa
celulei)
La spirochete flagelii se plaseaz n spaiul
periplasmic flageli interni, periplasmatici.

12

2/3/2010

Evidenierea flagelilor
I - metode directe
- Microscopia electronic

Coloraia special Loeffler (mordansarea cu tanin, sruri

de aluminiu, Fe, apoi colorarea cu fucsin sau albastru de metilen)

II metode indirecte (studierea mobilitii bacteriilor)

- Studierea preparatelor native pictur suspendat
sau ntre lam i lamel (microscopia cu contrast de
faz sau pe fond negru)
- nsmnarea culturii
bacteriene n medii semisolide
(se observ turbiditate)
- Creterea culturii n vl
pe suprafaa mediului solid

13

2/3/2010

Pilii comuni (fimbriile) elemente proteice

fine, rigide, scurte repartizate pe suprafaa
celulei bacteriene G - n special. Sunt formate
din subuniti proteice identice (pilina),
implantate n ME.
Numrul fimbriilor per celul: 1 sute
Funcii: asigur adeziunea bacteriilor la
suprafee inerte, la celule sau alte bacterii,
reprezint antigenul F

Pilii conjugativi structuri capiliforme de

natur proteic, prezeni n numr de 1-10
per celul (numai la bacteriile ce gzduiesc
plasmide conjugative F).
Funcii: transferul de ADN prin conjugare,
receptori pentru unii bacteriofagi
Evidenierea pililor: microscopia electronic

14