Celula

unitatea vie fundamental a oricrui organism ca ntregul organism celula exprim caracteristicile de baz ale vieii
folosete nutrienii din mediu pt a obine energie poate crete; se poate reproduce rspunde la stimulii din mediu
lumin cldur/frig substane chimice

poate suferi mutaii genetice

supravieuire apariie de noi specii etc.

Celula procariot Organisme Bacterii., Alge albastre

Celula eucariot Fungi, alge verzi, protozoare, plante, animale superioare Rigid: chitin (fungi), celuloz (alge verzi, plante superioare), absent (celule animale) Tipic, cu nucleol Prezent > 1, nr. constant pentru specie

Celula
prima form de via de pe Pmnt
celula primitiv asemntoare cu cele mai simple bacterii de azi celula fr sistemul complex de membrane procariot celula cu membran nuclear i reticul endoplasmic eucariot virusurile evoluie regresiv
cteva gene protejate de un nveli proteic fr/puine enzime proprii depind de metabolismul energetic al celulei gazd

Perete celular

Rigid: mucocomplex

Nucleu Membrana nuclear Cromozom

Primitiv, netipic (nucleoid) Absent Unic, molecul circular ADN, haploid Direct (amitoz) Rar i de tip particular Abseni Absent; mezozomi Absente Facultative (cili) Absent

Diviziune nmulire sexuat Cureni citoplasmatici Reticul endoplasmic Mitocondrii Organe de locomoie Micare amoeboid

Indirect (mitoz sau cariokinez) Frecvent Prezeni Prezent, organizare caracteristic Prezente Facultative (cili sau flageli) Perete rigid absent; Fr perete rigid prezent

Celula
n medicin
important cunoaterea structurii i nelegerea diferenelor de structur i metabolism a
diferitelor tipuri de celule diferitelor categorii de microorganisme
celulare

microorganisme

acelulare

viroizi PROCARIOTE EUCARIOTE prioni virusuri

explicarea fenomenelor patologice explicarea efectelor terapiei medicamentoase chemoterapia distruge microorganismele chemoterapia nu distruge celula uman sntoas

archaea bacteria cyanobacteria

algae protozoa fungi

EUCARIOTE PROCARIOTE

STRUCTURA I MORFOLOGIA FUNGILOR I PROTOZOARELOR

EUCARIOTE
EU adevrat CARYO nucleu
ADN-ul celular este nconjurat de membran nuclear

Cross-section through a yeast cell, showing the nucleus (N) with nuclear pores (P), mitochondrion (M), and vacuole (V). The cytoplasm is surrounded by the cell membrane. The thick outer portion is the cell wall. (Lechavalier HA, Pramer D: The Microbes. Philadelphia, JB Lippincott, 1970.)

EUCARIOTE membrana celulara

membrana celular=membrana plasmatic=membran citoplasmic

Dimensiuni
10-30 m de 10 ori mai mari dect celula procariot

mozaic format din proteine i fosfolipide structur i funcie similar tuturor membranelor prezente n celulele eucariote Rol
separ componentele celulei de mediul extern regleaz schimburile dintre celul i mediul extern (permeabilitate selectiv)

A typical eucaryotic animal cell. ( BJ, Wood DL: Memmlers The Human Body in Health and Disease, 9th ed. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, 2000.)

EUCARIOTE - nucleul
comanda central a celulei
unific, controleaz i integreaz funciile celulei

EUCARIOTE - nucleul
cromozomi suspendai n nucleoplasm molecule liniare de ADN i proteine genele localizate de-a lungul moleculei de ADN (genom=genotip) codific proteine rARN sintetizat n nucleol intr n compoziia ribozomilor tARN caracteristice pt fiecare specie: numrul i compoziia cromozomilor numrul genelor de pe fiecare cromozom

are 3 componente:
membran nuclear strbtut de pori prin care pot trece molecule relativ mari nucleoplasm matrice gelatinoas, tip de protoplasm

EUCARIOTE citoplasma (citosol)

semifluid, gelatinoas conine:
granule de stocare reticul endoplasmic ribozomi complex Golgi mitocondrii lizozomi, etc.

EUCARIOTE reticul endoplasmic

sistem de membrane interconectate i aranjate s formeze un sistem de transport alctuit din:
tubuli saci plai

ME:
reticul endoplasmic rugos ribozomi ataai de partea extern a membranelor reticul endoplasmic neted nu are ribozomi ataai

aici au loc majoritatea reaciilor metabolice

EUCARIOTE - ribozomi
18-22 nm alctuii din ARN ribozomal i proteine rol n sinteza proteinelor eseniale aglomerri de ribozomi poliribozomi (polisomi) legai printr-o molecul de mARN. fiecare ribozom alctuit din:
subunitate mare 60S subunitate mic 40S
unii ribozomi de 80S

EUCARIOTE - ribozomi
majoritatea proteinelor eliberate de reticolul endoplasmatic nu sunt mature trec n complexul Golgi maturare exercitarea funciei caracteristice.
S unitate Svedberg 40S, 60S, 80S
coeficieni de sedimentare

produi n nucleol transportai n citoplasm legai prin mARN iniiaz sinteza de proteine
Dr. Usanee Anukool, CMB-AMS, CMU

EUCARIOTE complex Golgi

comunic cu reticolul endoplasmic completeaz transformarea proteinelor nou formate n proteine mature, funcionale i mpachetarea lor n vezicule:
depozitate n celul excretate din celul exocitoz/secreie

EUCARIOTE lizozomi si peroxizomi

lizozomi:
vezicule mici derivate din complexul Golgi 1 m conin lizozim i enzime digestive
descompun materialul strin ptruns n celul fagocitoz intervin i n distrugerea celulelor deteriorate autoliz

peroxizomi
vezicule ncojurate de mebran unde se produce i se descompune H2O2 n H2O i O2. conin catalaz prezeni n aproape toate celulele eucariote predomin n hepatocitul mamiferelor

EUCARIOTE - mitocondria
fabrica de energie 0,5 1 m; lungime 7 m aici are loc respiraia celular sinteza moleculelor de ATP nr. mitocondrii / celul variaz
! Mitocondria i cloroplastul provin din bacterii care au convieuit cu celule eucariote

EUCARIOTE - plastid
la celulele plantelor organit n care se produce energie structuri inconjurate de membran conin pigmeni fotosintetici sediul fotosintezei conversia energiei luminoase n energie chimic
CO2 i H2O
energie luminoas

carbohidrai i oxigen
energie stocat n leg.chimice

EUCARIOTE - plastid
cloroplast
un tip de plastid conine pigment fotosintetic verde clorofil prezent n:
celulele plantelor algelor

EUCARIOTE - citoschelet
sistem de fibre alctuit din:
microtubuli
concavi, subiri, formi din subuniti proteice = tubulin

microfilamente de actin filamente intermediare

rol:
structural: rigiditate, form diviziune celular contractilitate motilitate etc.

EUCARIOTE perete celular

structur simpl
celuloz n alge, plante pectin lignin chitin fungi, exoschelet crabi, exoschelet crbu sruri minerale n alge

EUCARIOTE flageli
organite de locomoie celula eucariot
imobil mobil
spermatozoid protozoare flagelate

rol:
rigiditate form protecie

1 sau mai muli / celul imprim micare de rsucire

EUCARIOTE cili
organite de locomoie n raport cu flagelii sunt mai:
muli scuri subiri

Structura i morfologia celulei bacteriene

celula eucariot mobil prin cili

celule ale organismului uman: celula ciliat tract respirator protozoare ciliate

imprim micare coordonat, ritmic

PROCARIOTE
de 10 ori mai mic fa de celula eucariot structur simpl
citoplasma
1 cromozom ribozomi alte particule nu are sistem de mebrane interne

PROCARIOTE
elemente obligatorii
membrana citoplasmatic citoplasma material nuclear perete

membrana citoplasmatic perete celular capsul, flageli, pili, spor

elemente facultative

PROCARIOTE
elemente obligatorii
perete membrana citoplasmatic citoplasma material nuclear

PROCARIOTE perete bacterian

Grosime 15 35 nm; alctuit din proteine, lipide, hidrai de carbon

Format din:

elemente facultative
capsul flageli pili spor

- strat bazal
= mucopeptid = mucocomplex = peptidoglican = murein

* reea - macromolecule lungi, polizaharidice paralele

Acid N-acetilmuramic N-acetilglucozamina (! Lizozim)

- legate prin puni transversale polipeptidice

Tetrapeptid D i L-aminoacizi ataat la acidul N-acetilmuramic Pentapeptid puni ntre tetrapeptide (!penicilina)

STRUCTURA PEPTIDOGLICANULUI

PROCARIOTE perete bacterian

- stratul structurilor speciale: bacterii Gram-pozitive
(20%) polizaharide, acizi teichoici, MPZ

bacterii Gram-negative
(80%) lipopolizaharide = endotoxine + lipoproteine (complex glucido-lipido-polipeptidic)

bacterii acido-alcoolo-rezistente
acid micolic, ceruri, proteine GM mic

PROCARIOTE perete bacterian

rolul peretelui bacterian susine mecanic celula bacterian menine forma bacteriei asigur protecia celulei bacteriene intervine n procesele de osmoz i difuziune este sediul unor antigene somatice receptorilor specifici pentru bacteriofagi particip la diviziunea bacteriei imprim caracterele de tinctorialitate ale celulei bacteriene

Bacterial cell walls. (A) A portion of the Gram-positive bacterium, Bacillus fastidious; note the cell walls thick peptidoglycan layer, beneath which can be seen the cell membrane. (B) The Gram-negative bacterium, Enterobacter aerogenes; both the cell membrane and the outer membrane are visible along some sections of the cell wall. (A: Volk WA, et al.: Essentials of Medical Microbiology, 5th ed. Philadelphia, Lippincott-Raven, 1996.)

COLORAIA GRAM

PROCARIOTE membrana citoplasmatica

structur similar cu cea a eucariotelor flexibil, foarte subire, vizibil la ME alctuit dup modelul mozaicului fluid: dou straturi de molecule fosfolipidice cu extremitile hidrofobe spre interior i cu cele hidrofile spre exterior ntre moleculele de fosfolipide se gsesc proteine Invaginare - mezozomi: sistem membranos intracelular cu rol n respiraie, diviziune etc.

PROCARIOTE membrana citoplasmatica

Rolul membranei citoplasmatice: regleaz presiunea osmotic controleaz procesele de difuzie pasiv controleaz procesele de difuzie catalizate enzimatic conine enzime ale metabolismului respirator intervine n creterea i diviziunea bacteriei este locul de sintez al endotoxinelor

PROCARIOTE citoplasma
sistem coloidal complex: proteine, glucide, lipide, ap, minerale structur granular: ribozomi 15 nm; izolai sau ca reticul endoplasmatic; rol esenial n biosinteza proteinelor celulare granulaii de volutin (corpusculi Babe-Ernst, granulaii metacromatice) polimetafosfai granulaii (incluzii) de glicogen, amidon, lipide etc. vacuole conin diferite substane n soluii nvelite de membran lipoproteic = tonoplast conine mari cantiti de ARN citoplasma intens bazofil

PROCARIOTE material nuclear

nu este delimitat de o membran difereniat nu are nucleosol alctuit dintr-un unic cromozom haploid format dintr-o unic molecul de ADN dublu helicat, nchis circular coordoneaz toat activitatea celulei capabil de autoreplicare diviziunea nucleului precede diviziunea citoplasmei i a peretelui - bacterii cu 2-4 nuclei ce apar ca gheme (sculuri) de forme diferite ocupnd cam 1/10 din volumul bacteriei = bacterii pe cale de diviziune

PROCARIOTE material nuclear

cromozomul bacterian are 850 6500 gene codificante pt:
enzime proteine rARN tARN

PROCARIOTE material nuclear extracromosomal

plastid plasmide
molecule mici de ADN dc, circular libere n citoplasm / integrate n cromozom conin 10 sute de gene prezente n
celula fungic celula bacterian
1 plasmid multiple copii ale aceluiai plasmid mai multe tipuri de plasmide

atenie!!
organit citoplasmatic prezent n unele celule eucariote
alge, plante

sediul fotosintezei

plasmid
mic molecul de ADN extracromozomal prezente n majoritatea bacteriilor

PROCARIOTE capsula
capsul
substan gelatinoas, mucoid la exteriorul celulei bacteriene, bine delimitat, vizibil la microscop

PROCARIOTE capsula
se formeaz
n organismul gazd pe medii n condiii optime colonii M lucioase, mucoase, confluente

microcapsul (slime layer; glycocalix)

substan gelatinoas, mucoid la exteriorul celulei bacteriene, n strat subire, evideniabil doar prin metode chimice

compoziie n funcie de specie

n general polizaharide polipeptide Bacillus anthracis

substane capsulare diferite chimic la aceeai specie tulpini diferite difereniere serologic

PROCARIOTE capsula
ROL:
asociat cu patogenitatea tulpinii - factor al virulenei protector fa de factori nocivi (fagocitoza, desicaia) de adezin (permite aderarea unor bacterii) barier protectoare fa de bacteriofagi conine substane cu specificitate antigenic de specie sau de tip (ag. K)

PROCARIOTE capsula
EVIDENIERE:
coloraie negativ cu tu de China, colargol coloraii speciale (Hiss) reacia de umflare a capsulei (Neufeld) cu seruri polivalente i monovalente anti-capsulare

Coloraia MANEVAL pentru capsul corpul bacterian n rou, materialul capsular clar (necolorat) (necolorat)

Capsula bacterian coloraie negativ

Capsule stain. The capsule stain is an example of a negative staining technique. The bacterial cells and the background stain, but the capsules do not. The capsules are seen as unstained halos around the bacterial cells.

Klebsiella pneumoniae (x 1000)

Streptococcus pneumoniae (x 1000)

Streptococcus pneumoniae

PROCARIOTE flageli
organe de locomoie subiri, fine, alungite, neramificate, flexibile, sinuoase alctuii din flagelin protein complex similar cu miozina muscular reprezint antigenul flagelar H pornesc din citoplasma bacteriei, din corpusculul bazal

PROCARIOTE flageli
1.

Corpuscul bazal
situat n citoplasm imediat sub membrana citoplasmatic alctuit din
2 discuri M i P la bacterii Gram-pozitive 4 discuri M, S, P, L la bacterii Gram-negative

2. Crlig 3. Filament flagelar

PROCARIOTE flageli
peritrich amphitrich

PROCARIOTE flageli

monotrich lophotrich

PROCARIOTE flageli

PROCARIOTE pili (fimbrii)

formaiuni filamentoase, rigide, pericelular prezente la unele bacterii Gram-negative excepional la bacterii Gram-pozitive (Streptococcus mutans) mai scurte i mai subiri dect flagelii nu au rol n mobilitate originea n membrana citoplasmatic alctuite din subuniti proteice - pilin

PROCARIOTE pili (fimbrii)

pili de sex (de conjugare)
0-4 buci / celul; codificai de plasmide

PROCARIOTE pili (fimbrii)

fimbrii de adeziune
10-30 buci / celul; codificate de gene de pe cromozom

fimbrii comune
50-400 buci / celul
Proteus vulgaris cell, possessing numerous short, straight pili and several longer, curved flagella; the cell is undergoing binary fission. (Volk WA, et al.: Essentials of Medical Microbiology, 5th ed. Philadelphia, Lippincott-Raven, 1996.)

PROCARIOTE spor (endospor)

format n unele bacterii form de rezisten / supravieuire
sporulare

PROCARIOTE spor (endospor)

rezisteni la
cldur frig uscciune substane chimice

celul vegetativ
germinare

endospor

sporulare
copia cromozomului + cantitate mic de citoplasm nconjurate de un nveli proteic gros

supravieuiesc ani de zile n praf, pe sol rezist la fierbere, la aciunea dezinfectantelor se evideniaz cu coloraii speciale sau la ME

10

PROCARIOTE spor (endospor)

Spor central, sferic, mai mic dect corpul bacterian Spor central, ovalar, mai mare dect corpul bacterian Spor subterminal, ovalar, mai mare dect corpul bacterian Spor terminal, sferic, mai mare dect corpul bacterian

Bacillus anthracis coloraie pentru spori (x 1000)

Viroizi Prioni Virusuri

Viroizi
Caractere morfostructurale
ME: formaiuni liniare sau bastonae lungime < 50 nm; diametru 2,5 nm sunt molecule unice de acid nucleic:
ARN, m.c., nchis covalent, circular 240 375 nucleotide

Viroizi
Localizare
nucleoli / nucleoplasm cloroplaste

Replicare
probabil n nucleu dependent de enzimele celulei gazd n absena unui virus helper (dif. de v. defective) ARN-ul viroizilor nu are capaciti codificante (absena aparent a sintezelor) ARN-ul viroizilor funcioneaz i ca enzim - ribozima

nu au capsid

11

Viroizi
boli ale plantelor superioare
boala tuberculilor fuziformi ai cartofului boli ale citricelor nanismul i marmorarea crizantemelor boli ale palmierului de cocos, ale roiilor etc.

Prioni - generaliti
ageni infecioi de natur proteic (PrPsc) proteine anormale, infecioase proteinaceous infectious particle Henry Prusiner (1982) - 1997 premiul Nobel structuri proteice, transmisibile i infecioase se multiplic!! anuleaz dogma central a biologiei moleculare induc boli ale SNC la om i animale
encefalopatii spongiforme transmisibile (EST)

vizualizare
hibridizare in situ scanare cu laser ME de baleiaj

Prioni - multiplicare
proteine capabile de autoreplicare, n absena acidului nucleic fac parte din grupul autofoldaze sau chaperone

Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc din scrapie sau PrPcj din BCJ)
este produsul de clivaj al proteinei precursor (PrPc)
protein normal de 33 35 kDa glicoprotein secretat la suprafaa membranei plasmatice a tuturor celulelor din organism cantitate mare pe suprafaa neuronilor

Prioni - Compoziie chimic, structur

rolul proteinei precursor (PrPc)
interacioneaz cu receptorii de acetilcolin n memorie
codific i conserv informaia

Prioni - Compoziie chimic, structur

proteina precursor (PrPc) normal
compus din 254 aa devine funcional dup
modificri chimice modificri conformaionale

n reglarea somnului protecie n stress-ul oxidativ trofic pentru celulele Purkinje

12

Prioni - Compoziie chimic, structur

proteina precursor (PrPc) normal

Prioni - Compoziie chimic, structur

proteina precursor (PrPc) normal

modificri chimice (7 modificri)

1. clivarea peptidului semnal N-terminal (cu 22 aa) 2. modificarea reziduului de arginin la nivelul codonului 25 3. . 4. . Glicozilarea oligozaharidelor linkate de asparagin la nivelul codonilor 181 i 198

modificri chimice (7 modificri)

5. . 6. . Formarea unui inel cu o legtur disulfidic prin care se unesc dou reziduuri de cistein de la nivelul codonilor 179 i 214 7. ndeprtarea peptidului hidrofob C-terminal (cu 20 aa) i fixarea, n schimb, a unui glicozilfosfatidilinozitol

Prioni - Compoziie chimic, structur Prioni - Compoziie chimic, structur

proteina precursor (PrPc) normal
modificri conformaionale
replierea proteinei configuraie secundar -helix
surs de energie (rol de enzim) chiar PrPc care catalizeaz propria mpturire: rol de autofoldaz=protein chaperone

proteina precursor (PrPc) normal

(Anca-Michaela Israil-Biologie molecular,prezent i perspective)

Prioni - Compoziie chimic, structur Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc) - anormal
protein anormal greutate molecular 21 30 kDa izolat din plcile amiloide cerebrale morfologic structuri filamentoase
scrapie associated filaments SAF

Prion-proteina (PrPsc) - anormal

compus tot din 254 aa codificat de acelai ORF (open reading frame) are acelai semnal peptidic format din 22 aa diferite modificrile posttranslaionale chimice i conformaionale

13

Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc) - anormal

Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc) - anormal

modificri chimice (8 modificri)

1. clivarea peptidului semnal N-terminal (cu 22 aa) (identic) 2. modificarea reziduului de arginin la nivelul codonului 25 (identic) 3. . 4. .
Glicozilarea oligozaharidelor linkate de asparagin la nivelul codonilor 181 i 198 rezult 400 forme diferite de proteine prionice ? difer ologozaharidele linkate n cele 2 proteine??

modificri chimice (8 modificri)

5. . 6. . Formarea unui inel cu o legtur disulfidic prin care se unesc dou reziduuri de cistein de la nivelul codonilor 179 i 214 - n interiorul inelului , la nivelul codonului 189 se evideniaz o substituire de aminoacid
? rol n modificarea timpului de incubaie n scrapie??

Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc) - anormal

Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc) anormal

modificri chimice (8 modificri)

7. ndeprtarea peptidului hidrofob C-terminal (cu 20 aa) i fixarea, n schimb, a unui glicozilfosfatidilinozitol 8. Modificri la nivelul reziduului de arginin corespunztor codonului 37
Determin alte diferene posttranslaionale i de metabolism diferite fenotipuri de boli prionice

modificri chimice (8 modificri)

Prioni - aspecte genetice

sinteza proteinei prionice codificat genetic
expresia PrPc umane
codificat de gena PRNP
situat pe braul scurt al cromozomului 20 cadru deschis de citire (ORF) 253 codoni (759 nucleotide)

Prioni - Compoziie chimic, structur

Prion-proteina (PrPsc) - anormal
modificri conformaionale
replierea proteinei configuraie secundar -plisat (-sheets) izoform proteic cu structur i funcionalitate anormal

mutaii punctiforme i inserii n codonii PRNP susceptibilitate la encefalopatii spongiforme:

codonii 200, 210, 232 BCJ codonii 117, 198, 217 BGSS codonii 129, 178 IFF

14

Prioni - aciunea agenilor fizici i chimici

Prioni - Compoziie chimic, structur
PrPsc rezistent fa de: PrPsc = prion proteina anormal din scrapie PrPc = prion proteina normal celular
alctuite din 250 aa cele 2 proteine sunt izoforme
structura primar asemntoare structura secundar difer:
PrPc tip -helix PrPsc tip -plisat

proteaze nucleaze
DN-aze RN-aze

ageni inactivatori ai acizilor nucleici

radiaii ionizante UV cu lungimi de und 254-280 nm

ageni chimici
aldehide hidroxilamina etc.

Prioni - aciunea agenilor fizici i chimici

Prioni - aciunea agenilor fizici i chimici

rezistena PrPsc:
expresia alterrilor sale conformaionale deficiene de transport la suprafaa celulei i de catabolizare acumulare anormal n substana cerebral, formare de agregate fibrilare, dezorganizarea substanei cerebrale

PrPsc parial inactivat de:

cldur 1000C fenol clor hidroxid de Na

Prioni - aciunea agenilor fizici i chimici

Prioni boli prionice

LA OM:
kuru boala Creutzfeld-Jacob (BCJ) boala Gerstmann-Strussler-Scheincker (BGSS) varianta Creutzfeld-Jacob (v. BCJ) insomnia fatal familial (IFF)
(Anca-Michaela Israil-Biologie molecular,prezent i perspective)

15

Prioni boli prionice

LA ANIMALE:
scrapie encefalita transmisibil a curcilor encefalita spongiform bovin (boala vacilor nebune) encefalita degenerativ a felinelor (pisici domestice) boala cronic caectizant a cervideelor encefalopatia ugulatelor exotice: nyala, antilopa african n captivitate

Prioni Caracterele bolilor prionice

Clinic
perioada de incubaie lung: 2 luni-30 ani simptomatologie neurologic evoluie lent, progresiv: luni-ani fatal

Prioni Caracterele bolilor prionice

Histopatologic
leziuni cerebrale degenerative
vacuolizare progresiv a

Prioni Caracterele bolilor prionice

Exist sub forme interconvertibile de bastoane, complexe proteice cu lipid-detergent i lipozomi

corpilor neuronali dendritelor axonilor

proliferare astrocitar excesiv status spongious al materiei cenuii

detectare de structuri tubo-veziculare n prelungirile sinaptice

(Anca-Michaela IsrailBiologie molecular,prezent i perspective)

Prioni Caracterele bolilor prionice

Rspuns imun
ABSENT!! gazda este imunocompetent fa de alte antigene!!

Prioni Caracterele bolilor prionice

Rspuns imun n boala natural
absena sintezei anticorpilor specifici absena rspunsului celular specific absena oricror modificri calitative, cantitative sau funcionale ale limfocitelor T i B absena oricror modificri ale interleukinelor

sistemul imun nu se mobilizeaz fa de prioni!! tratamentul cu imunomodulatoare sau imunosupresoare nu modific evoluia bolii!!

16

Prioni
izolare de creierul pacienilor i animalelor bolnave transmitere intraspecie sau interspecii, cu material infecios cerebral PrPsc din

Prioni cultivare - boala experimental

animale
cimpanzei maimue oareci hamsteri nurci pisici oi bividee etc.

inoculare
i.cerebral i.peritoneal subcutan digestiv

necesar
specificitate de specie a proteinelor prionice adaptarea agentului prin pasaje repetate
reprodus boala dup laten de 1 an

suspensii de creier de la bolnavii de kuru filtrate acelulare de la bolnavi cu BCJ

Prioni cultivare substraturi celulare

culturi de explanturi de creier inoculare cu ageni kuru i BCJ infective 70 25 zile lichidele de cultur inoculate la cimpanzei - boal

Prioni patogeneza aspecte clinice

poarta de intrare
oral
canibalism ritual hrana bovinelor
fin de carne de oi, capre insuficient prelucrat termic

parenteral
injecii cu preparate contaminate transfuzii intervenii chirurgicale transplant de organe etc.

Prioni patogeneza aspecte clinice

cale de diseminare nu este cert
replicare n ggl regionali ci limfatice ci sanguine (trombocite infectate?) esut reticulo-endotelial centripet pe cale nervoas la roztoare

Prioni patogeneza aspecte clinice

cale de eliminare nu este cert

prioni la om
n snge i urin n creier i cornee

17

Prioni patogeneza aspecte clinice

Prioni patogeneza aspecte clinice

caracteristicile comune ale encefalopatiei spongiforme:
caracter heredo-familial
transmitere vertical predispoziie genetic
debut

Boala Creuzfeld Jacob

supravieuire 6 -12 luni evoluie fatal diagnostic EEG caracteristic Western-blot PrPsc ex. histopatologic creier degenerri neuronale vacuolizri acumulare de amiloid la 65 ani oboseal, anxietate, confuzie perioada de stare mioclonii, ataxie cerebeloas simptome piramidale simptome extrapiramidale demen progresiv

tablou clinic neurologic cu demen: dezorientare, scderea memoriei, tulburri ale intelectului i judecii

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Creuzfeld Jacob

cunoscut din sec. 18; frecven 1/1.000.000/an n lume debut la 60 ani Simptome:
pierderea treptat a strii de echilibru pierderea treptat a capacitii de deplasare pierderea memoriei stare de confuzie dezorientare demen sfrit letal

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Creuzfeld Jacob

3 mecanisme de producere aBCJ
infecie lent infecie sporadic alterare genetic

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Creuzfeld Jacob

3 mecanisme de producere a BCJ
infecie lent
1. infecii conjugale transmitere orizontal?? 2. infecii n raport cu profesiunea:
mcelari: familie cu 9 membrii 3 mcelari toi cu BCJ transmitere prin soluie de continuitate?? (sngele este infecios nainte de apar.simpt) fermieri: 3 cazuri de fermieri proprietari de animale cu ESB personal medical: oftalmologi, ORL-iti, neurochirurgi, ortopezi, anatomo-patologi

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Creuzfeld Jacob

3 mecanisme de producere a BCJ
infecie lent
contaminare iatrogen
80 cazuri pn n prezent transplant de cornee, de timpan implantare de electrozi intracerebrali insuficient sterilizai instrumentar chirurgical sterilizat prin metode clasice administrare de hormon pituitar de cretere preparat din esut hipofizar recoltat de la cadavru 1973-1985, Frana- 100.000 hipofize prelevate 41 cazuri Anglia 17 cazuri SUA - 15 cazuri transfuzie de snge Australia femei cu tratament cu hormoni gonadotropi n antecedente ulterior donatoare de snge vaccinare cu vaccin antirabic preparat din esut cerebral de animal infectat

18

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Creuzfeld Jacob

3 mecanisme de producere aBCJ
infecie sporadic
mecanism necunoscut
1994 Anglia 53 cazuri vrste peste 75 ani 1994 Germania 115 cazuri vrsta medie 66 ani 1996 Anglia 10 cazuri noi variant BCJ 19-41 ani

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Creuzfeld Jacob

3 mecanisme de producere aBCJ
alterare genetic
10-15% din cazuri pn n 1996 100 familii cu asemenea cazuri legtur ntre unele mutaii de pe cromozomul 20 i boal

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala Gerstmann-Strussler-Scheincker Gerstmann-Strusslerdebut

la 45 50 ani mai frecvent n Japonia are caracter ereditar familial (form genetic a bolii) variant a BCJ simptomatologie similar cu BCJ domin
ataxia spino-cerebeloas demena

Prioni patogeneza aspecte clinice Insomnia fatal familial

descris n 1992 (Medori R.) 1994: 14 cazuri n Italia, Frana, Anglia, SUA debut
la 35-60 ani;

evoluie
7-12 luni

caracter familial-ereditar:
29 cazuri ntr-o familie pe 5 generaii

Prioni patogeneza aspecte clinice Insomnia fatal familial

simptome:
tulburri de ritm circadian; pierderea total a somnului; tulburri vegetative:
HTA, tahicardie, hipertermie etc.

Prioni patogeneza aspecte clinice Insomnia fatal familial

evoluie
13 luni

diagnostic
histopatologic
atrofia selectiv a talamusului, n lipsa plcilor amiloide
nucleu anterior talamic nucleu talamic medio-dorsal

alterarea progresiv a ateniei; disfagie; tulburri de echilibru; mioclonii; confuzie; halucinaii; crize epileptiforme.

19

Prioni patogeneza aspecte clinice Varianta nou a BCJ

descris n 1996 diferene:
debut la 29 ani evoluie - 1 an predomin simptome psihiatrice, demen final fr modificri EEG caracteristice cauze posibile:
transmitere de la bovine consum de carne de vit infectat cu prioni (140 cazuri confirmate n Anglia)
infectate prin consum de pulbere de concentrate de carne din oi cu scrapie

Prioni patogeneza aspecte clinice Boala kuru

1957 Gajdusek - la triburile din Papua-Noua Guinee canibalism ritual
femeile i copiii - consum de creier de la rudele decedate

clinic
ataxie cerebeloas (kuru = tremurturi) rigiditate caexie progresiv

evoluie letal

Prioni dg. laborator Prioni dg. laborator

pp:
biopsii de esut cerebral (!! risc mare) ganglioni spinali nervi periferici snge l.c.r.

evidenierea plcilor amiloide

biopsie cerebral + ex. histopatologic
! risc de rezultat fals negativ (zon neafectat)

ex. imuno-histo-chimic cu Ac. monoclonali

ggl. spinali, ggl. mezenterici, nervi periferici

Western-blot
LCR, snge, derivate din plasm, material bioptic

evidenierea PrPsc doar la conc. de 106 particule /gr. esut cerebral

!! deja infecia a depit faza asimptomatic

PET-blot
preparate fixate cu formol detecteaz conc. mici de PrPsc, n faze incipiente

PCR, hibridizri, ELISA

Prioni dg. laborator

Dg. de certitudine
postmortem evidenierea leziunilor histopatologice cerebrale

Prioni epidemiologie
incidena bolii subevaluat
nu are raportare obligatorie dg. de certitudine nu se practic ntotdeauna

incidena anual
1 -2 cazuri la 1 milion

rata medie a mortalitii

0,09 31 cazuri la 1 milion raport brbai / femei 1,05 / 1

20

Prioni epidemiologie
rezervor de infecie pt cazurile umane:
omul animale??? (insuficient cunoscut)

Prioni epidemiologie
transmitere pt. BCJ
caracter profesional
contact cu esut sau snge contaminat

transmitere pt. BCJ

iatrogen
cu hormon pituitar de cretere (hipofiza cadavru infectat) transplant de cornee sau dura mater implantare de electrozi insuficient sterilizai transfuzii de snge de la femei tratate anterior cu hormon gonadotrop vaccinare cu vaccin antirabic din esut cerebral infectat

mcelari personal medical neurochirurgi oftalmologi anatomopatologi

Prioni epidemiologie
transmitere pt. BCJ
oral
boala kuru
canibalism

Prioni profilaxie
reducerea transmiterii encefalopatiilor spongiforme transmisibile:
exclus de la donare
persoana cu antecedente familiale de boli prionice persoana cu antecedente de tratament cu hormon hipofizar

produse alimentare de la animale infectate???

manipulare atent a esuturilor i organelor

creier snge lcr

Prioni profilaxie
reducerea transmiterii encefalopatiilor spongiforme transmisibile:
sterilizarea instrumentarului
cldur: autoclavare de 2 ori la
134C cte 1h; 138C cte 18 min;

Prioni profilaxie
reducerea transmiterii encefalopatiilor spongiforme transmisibile:
interzis consum carne animal bolnav interzis fina de oase carne n hrana animalelor arderea animalelor bolnave

ageni chimici
hipoclorit de Na 5 - 25% - 1h; NaOH (1N 2N) 1h urmat de autoclavare la 121C 30 min.

incinerare esuturi, organe contaminate piese histopatologice

tratare cu formol apoi cu acid formic 96% - 1h (nu inactiveaz complet agentul prionic!!)

21

Prioni
pentru viitor
elucidarea naturii prionilor aprofundarea
aspectelor genetice patogenezei inter-relaiilor cu encefalopatia spongiform a animalelor

Virusuri - definiie
Virion = virus = corpuscul elementar = corpuscul viral
unitatea viral, morfofuncional, complet, intact, infecioas, cu diametrul cuprins ntre 18-400 nm, capabil s infecteze bacterii, plante, animale, omul

identificarea aspectelor epidemiologice care contribuie la apariia encefalopatiei spongiforme i ntreruperea acestora

Se gsesc extracelular:
nainte de a infecta celula gazd dup ce s-au asamblat i au fost eliberai din celula n care s-au multiplicat

Virusuri - dimensiune
Extrem de mici
18 30 nm (Parvoviridae, Picornaviridae)
V. hepatitei A, v. poliomielitei

Caractere generale ale virusurilor

Dimensiuni extrem de mici
Nu pot fi vzute la microscopul optic Se evideniaz la microscopul electronic Sunt filtrabile prin filtre bacteriologice

40 80 nm
rotavirus, v. rubeolos, v. hepatitei B, v. hepatitei C

90 200 nm
V. herpetic, v. rujeolos, v. respirator sinciial, v. rabic

Au un singur tip de acid nucleic

ARN (ribovirusuri) sau ADN (dezoxiribovirusuri)

300 - 450 nm (Poxviridae)

V. variolic

Au structur extrem de simpl

peste 900 nm lungime, diametru 80 nm (Filoviridae)

Caractere generale ale virusurilor

Parazitism avansat
Nu au enzime proprii Dependen cvasitotal de enzimele i mainria replicativ a gazdei Se multiplic doar n interiorul unei celule vii

VIRUS VEGETATIV particula viral aflat n celul, deficitar n unele aspecte ale replicrii PROVIRUS genom viral integrat n cromozomul celulei gazd, multiplicndu-se sincron cu acesta

22

Morfologia virusurilor
sferic
v.gripal, v.herpetic, adenovirus, v. polio

cilindric, bastona
v. mozaicului tutunului, fagi

paralelipiped
v. variolic, v. vaccinia

cartu
v. rabic

filamentos
v. Ebola

sferic cu coad
bacteriofag

Structura virusurilor
I. genom viral II. capsida III. nveli viral

GENOMUL VIRAL
este alctuit dintr-o molecul de acid nucleic viral
FIE ARN FIE ADN RIBOVIRUSURI DEZOXIRIBOVIRUSURI

poart informaia genetic necesar replicrii determin capacitatea infectiv a virusului.

MRIMEA GENOMULUI VIRAL

apreciat n funcie de:
unitatea de mas molecular DALTON nr. de nucleotide sau perechi de nucleotide din structurile mono- sau bicatenare KILOBAZA Dalton unitate de msur egal cu 10.000 pe scara greutilor atomice?? Kilobaza unitate egal cu: 1.000 nucleotide pt str. monocatenare (kb) 1.000 perechi de nucleotide pt. str. bicatenare (kbp)

MRIMEA GENOMULUI VIRAL

diferit de la o familie la alta referitor la:
greutatea molecular
1,5 x 106 Da Parvovirus 15 x 106 Da Poxvirus

numrul de nucleotide
5-7 kb - Papovavirus 231 kbp - Herpesvirus

compoziia n baze

23

STRUCTURA GENOMULUI VIRAL

virusuri ARN

MRIMEA GENOMULUI VIRAL

nr. de gene cuprins n genom
9 structuri genice - HIV 12 structuri genice - v. gripal 240 structuri genice - v. vaccinia

1.

m.c. liniar:
pies unic picornavirus, VHA

VHA

2.

m.c. divizat
8 molec liniare inegale ARN v.gripal v.gripal

3.

m.c. cu 3 str. circulare

bunyavirus

nr. de proteine codificate dependent de mrimea genomului

250 proteine - v. vaccinia 200 proteine - v. herpetic 2 6 proteine - Parvoviridae 4 proteine - Picornavirus

4. d.c. cu 10-12 segm. separate

reovirus
5.

m.c. cu 2 segmente inegale

arenavirus

6. m.c. diploid:

2 molec. identice ARN legate necovalent retrovirusuri

reovirus

STRUCTURA GENOMULUI VIRAL

virusuri ADN
1. 2. 3.

m.c. liniar:
parvovirus

FUNCIILE GENOMULUI
conine ntreaga informaie genetic viral asigur infectivitatea viral este capabil de autoreplicare n absena celorlali constitueni virali
excepie: ARN viral izolat, m.c., sens negativ (virusuri cu genom divizat othomyxovirus)

m.c. circular
fag X 174

d.c. cu secvene terminale repetitive

adenovirus, herpesvirus

4. d.c. cu extremiti nchise covalent

v. vaccinia
5.

d.c. circular, nchise necovalent, cu extremiti m.c.

hepadnavirus

6. d.c. circular, nchise covalent i

suprarsucite
SV40, polyomavirus

CAPSIDA
complex de structuri proteice care mbrac acidul nucleic viral are arhitectur i compoziie specifice fiecrui tip viral

CAPSIDA
aspecte caracteristice ale morfogenezei capsidei virale:
nr. mic de gene din genomul viral nu permite sintez de polipeptide cu diversitate mare
!! uniti structurale similare, grupate repetitiv, dup modele geometrice similare, avantajoase capside cu structuri foarte complexe

24

CAPSIDA
aspecte caracteristice ale morfogenezei capsidei virale:
resurse limitate: cpii multiple sintetizate de o singur gen
ntre subunitile proteice capsidale interaciuni puternice realizeaz ansambluri stabile care
-

TIPURI DE SIMETRIE ALE ARHITECTURII CAPSIDALE

cubic icosaedric helicoidal binar, helicoidal-icosaedric

mbrac genomul viral asigur integritatea genomului viral

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

particula viral are form sferic sau contur hexagonal virusuri ARN sau ADN virusuri cu sau fr anvelop cea mai eficient aranjare - maxim de volum cu minim de material capsomerele nu sunt echivalente cu subunitile chimice de construcie
capsomere alctuite din 5, 6 subuniti chimice

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

capsomerele organizate n jurul unor axe perpendiculare caracteristice simetriei cubice icosaedru poliedru cu:
20 fee triunghiuri echilaterale 30 muchii 12 vrfuri (vertex), orientate dup axe de simetrie rotaional de tip 2/3/5

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC vertex

reunete 5 fee PENTON fiecare fa 5 subuniti proteice PENTAMERI

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

* numrul capsomerelor specific pt. fiecare virus * pentone ntotdeauna 12; variaz nr. de hexone virusuri ADN parvovirus 32 capsomere; herpesvirus 162 virusuri ARN picornavirus 32 capsomere; reovirus 92

muchii i fee
HEXONI alctuii din 6 subuniti proteice - HEXAMERI * numrul capsomerelor specific pt. fiecare virus * pentone ntotdeauna 12; variaz nr. de hexone
virusuri ADN parvovirus 32 capsomere; herpesvirus 162 virusuri ARN picornavirus 32 capsomere; reovirus 92

25

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

CAPSIDE CU SIMETRIE CUBIC ICOSAEDRIC

adenovirus herpesvirus

Herpes nucleocapsid showing pentons at the vertices of the icosahedron Zhou et al. Baylor College of Medicine Reference: Z. H. Zhou, B.V.V Prasad, J. Jakana, F.R. Rixon, W. Chiu Baylor College of Medicine, Journal of Molecular Biology poliovirus enterovirus

CAPSIDE CU SIMETRIE HELICOIDAL

particula viral are form tubular, flexibil sau rigid, de lungimi i diametre variabile virusuri ARN

CAPSIDE CU SIMETRIE HELICOIDAL

Nucleocapsida tubular cu gol axial

Disc de subuniti alturate

virusuri cu sau fr anvelop capsomerele

subuniti chimice identice aezate repetat pe spira acidului nucleic printr-o micare de rotaie n jurul unui ax + translaie paralel cu acelai ax
Cretere n spiral Structur viral cilindric

26

CAPSIDE CU SIMETRIE HELICOIDAL

CAPSIDE CU SIMETRIE HELICOIDAL

Virusuri cu anvelop: Virusuri fr anvelop
form flexibil aspect de bastona v.mozaicului tutunului ntreaga structur rigid form sferic structura tubular ncolcit n interiorul virionului
spir regulat v.gripal ghem neregulat v.paragripal

de cartu structura tubular orientat n spire strnse, paralele v.rabic

Orthomyxoviridae

Paramyxoviridae

Rhabdoviridae

Capside cu simetrie binar, icosaedrichelicoidal

influenzavirus

Bacteriofagi
Cap
simetrie icosaedric

Coada
parainfluenzavirus

simetrie helicoidal

v. rabic

Simetrie complex
nveli viral

Funciile capsidei virale

protejeaz genomul de aciunea factorilor externi, de nucleazele celulare; asigur forma virionului; fixeaz virionii nuzi de receptorii celulari specifici; subunitile structurale ale capsidei sunt antigene care induc formarea i reacioneaz cu anticorpii neutralizani.

nucleoid viral

ADN viral cu proteine asociate

-corpi laterali -membran extern acoperit de tubuli

27

nveliul viral
peplos, anvelop deriv din membranele celulei gazd:
din membrana plasmatic v. gripal, v. paragripal, retrovirusuri din membrana nuclear herpesvirus

Rolul nveliului viral

protejeaz nucleocapsida; intervine n iniierea ciclului infectant prin recunoaterea i ataarea v. de receptorii celulari; intervine n procesul de asamblare a noilor particule virale; intervine n activiti specific virale (hemaglutinare, hemadsorbie, hemoliz, fuziunea membranelor celulare);

Structura nveliului extern

structuri derivate din celula gazd: dublu strat lipidic constituit, n proporii diferite, de fosfolipide, colesterol, glicolipide

Structura nveliului extern

structuri proprii virale (codificate de v.:
Proteina M Spiculi
Hemaglutinine Neuraminidaze Profactori de fuziune

Proteina M (matrix)
prezent la toate v. nvelite (excepie bunyavirus) situat pe faa intern a nveliului viral Funcii:
menine integritatea nveliului viral; rol n asamblarea virionilor i eliberarea lor prin nmugurire; implicat n transportul ionilor de H

28

Spiculii de natur glicoproteic se afl pe suprafaa nveliului viral n structura lor au fost identificate 3 zone:
Zona de ancorare, situat pe faa intern a nveliului viral, de natur peptidic; Zona medie care strbate stratul bilipidic al nveliului extern, format din lanuri polipeptidice; Zona extern, situat deasupra nveliului extern, alctuit din glicolipide.

Spiculii Hemaglutininele
prezente la v. nvelite:
Orthomyxovirus Paramyxovirus Rhabdovirus etc.

bastonae prismatice cu baza triunghiular nr. spiculilor de HA variaz n funcie de virus funcii:
recunoatere receptori celulari, ataare i penetrare virus n celul; induc rspuns imun (antc. hemaglutinoinhibani) rol n hemaglutinarea hematiilor i n hemadsorbie.

Spiculii Neuraminidazele
prezente la orthomyxovirus, paramyxovirus Glicoproteine ancorate n dublul strat lipidic Funcii:
faciliteaz ptrunderea virusului n celula gazd prin scindarea acidului sialic din glicoproteinele suprafeei celulare intervin n procesul de ieire a noilor particule din celul

Spiculii Profactorul de fuziune

poate fi situat pe nveliul viral sau pe alte structuri ale nveliului prezent la herpes virus, VRS, paramyxovirus form inactiv Glicoprotein Funcii:
fuziunea nveliului viral cu membrana celular favoriznd penetrarea virusului n celula gazd; fuziunea membranelor celulare determinnd apariia de sinciii; diseminarea infeciei; producerea hemolizei.

Alte componente asociate virionului

Enzimele virale
Sinteza de proteine-enzime codificate de virus este restrns (nr. mic de gene din genomul v.) Sunt proteine
Structurale - n nveliul viral

Cele mai importante enzime virale

Transcriptaze virale/replicaze
ARN-polimeraze ARN dependente
la v. ARN m.c. de sens negativ paramyxovirus, rhabdovirus, orthomyxovirus

rol interrelaie cu celula gazd

Nestructurale - asociate nucleocapsidei

ARN-polimeraze virale ADN dependente

transcrierea ADN n ARNm poxvirus

rol replicarea genomului viral sinteza de proteine virale

ADN-polimeraze virale ADN dependente

herpesvirus

29

Cele mai importante enzime virale

Reverstranscriptaze
prezente la retrovirusuri, hepadnavirusuri ADN-polimeraz ARN dependent
transcrie genomul ARN n ADN

Cele mai importante enzime virale

Endonucleaze
cliveaz catenele acizilor nucleici prezente la: v. ARN: v. gripal; v. ADN: poxvirus integreaz genomul viral n ADN celular
la v. cu potenial oncogen SV40, adenovirusuri

ADN-polimeraz ADN dependent integraz

integreaz ADN proviral n ADN celular numai la retrovirusuri

Enzime
necesare transcrierii i modificrilor ARNm poliadenilat-polimeraze; metiltransferaze etc. prezente la: poxvirus; reovirus

Cele mai importante enzime virale

Proteinkinaze, Timidinkinaze, Dezoxicitindezaminaze
accelereaz transcrierea i replicarea genomului viral prezente la: herpesvirus

Cele mai importante enzime virale

Proteinaze
cliveaz precursorii polipeptidici n proteine funcionale i structurale prezente la: picornavirus, togavirus, coronavirus, flavivirus, calicivirus 4 clase:
serinproteinaze cisteinproteinaze aspartatproteinaze metaloproteinaze

Tirozinkinaze
codificate de oncogene ale v. sarcomului aviar (v. Rous) au ca int proteinele celulare implicate n reglarea ciclului celular

30