Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Celula bacteriană :
I. protoplastul bacterian
II. peretele bacterian
III. glicocalixul procariot
IV. organitele de locomoţie
V. pilii bacterieni
VI. endosporii bacterieni
Citoplasma
- conţine într-un sistem coloidal proteine, carbohidraţi, lipide,
metaboliţi cu greutate mică
- se află permanent în stare de gel şi menţine poziţia structurilor
interne în absenţa membranelor intracelulare
- în microscopia optică, pe preparatele colorate uzual vedem numai
citoplasma şi uneori incluziuni citoplasmatice
- cuprinde – nucleoplasma
- ribosomi
- incluziuni
Nucleoplasma
- echivalent al nucleului celulei eucariote
- nu prezintă membrană nucleară şi nucleol
- formată dintr-un cromozom unic, o moleculă de ADN circulară, dublu
catenară, cu lungimea de 1000-2000 µm
- în microscopia optică este observată numai după hidroliza ARN-ului, ca un
corpuscul oval, alungit în halteră sau V, în funcţie de stadiul diviziunii.
Electronomicrografii ale secţiunilor ultrafine - apare ca un ghem sau scul de fibre cu
diametrul de 2-6 nm.
In situ cromozomul bacterian este helicat şi suprahelicat în jurul unui miez ARN care îl
menţine în forma compactă
Electronegativitatea ADN neutralizată prin proteine (asemănătoare histonelor), ioni Mg2+,
poliamine
Ribosomii bacterieni
- prezenţi în toată citoplasma cu excepţia nucleoplasmei
- constanta de sedimentare 70s
- pot disocia în 2 subunităţi: 30s ( ARN16s+21 molecule proteice)
- 50s (ARN 23s şi 5s+34 molecule proteice)
- ARN ribosomal are o mare stabilitate fiind bine conservat în cursul evoluţiei poate fi
utilizat drept criteriu de clasificare filogenetică
- pe electronomicrografii apar dispuşi ca polisomi (şir de ribosomi) în lungul moleculei
de ARNm pe care îl citesc şi traduc rapid
Incluziunile citoplasmatice
- au caracter de specie
- sunt caractere taxonomice primare
- sunt formate din: - polimetafosfat (Corynebacterium diphtheriae )
- amidon (Clostridium, Neisseria)
- lipide (Pseudomonas)
Membrana citoplasmatică
- lipsită de steroli (bacteriile nu-i sintetizează); excepţie molicutele, încorporează
colesterolul preformat de celulele eucariote.
- excretă enzime hidrolitice necesare digestiei extracelulare.
- are funcţii de biosinteză.
Mezozomii - invaginaţii anfractuoase ale membranei citoplasmatice care îi măresc
suprafaţa funcţională. În mezozomii laterali îşi au sediul enzimele implicate în
autoreplicarea nucleoplasmei, iar în mezozomii septali enzimele implicate în sinteza
peretelui.
asigură transportul transmembranar prin fosfotransferaza membranară
unicul sediu al citocromilor, enzimelor, componentelor lanţului respirator implicate în
transportul de electroni şi fosforilarea oxidativă; analog funcţional al mitocondriei din
celula eucariotă. Mitocondriile sunt descendenţi ai bacteriilor endosimbionte.
- creşterea bacteriilor este posibilă numai când cel puţin 50% din membrana
citoplasmatică este semifluidă
poartă receptori pentru semnale ale mediului extern atractanţi, repelenţi, feromoni
(sistem molecular de integrare a acestor informaţii)
II. Peretele bacterian
- înveleşte protoplastul
- este format dintr-o structură de bază + structuri speciale care diferenţiază grupe mari
de bacterii
Peptidoglicanul structura de bază a eubacteriilor, grup mare de bacterii din care fac
parte şi bacteriile patogene. LIPSEŞTE din peretele:
1. Arheobacteriilor – bacterii adaptate la condiţii de viaţă extreme (temperatură, salinitate)
şi care nu sunt niciodată prezente în corpul uman (nepatogene). Similitudini genomice
şi de sinteză proteică atestă filiaţia organismelor eucariote din arheobacterii
2. Molicutelor şi al oricărei celule eucariote
- este un heteropolimer de dizaharide aminate - N-acetilglucozamina
- N-acetilmuramic aşezate
alternativ în lanţuri liniare de galactan şi solidarizate între ele prin subunităţi şi punţi
peptidice.
- cuprinde protoplastul bacterian ca o plasă rigidă şi rezistentă
- sinteza este controlată de enzime situate pe suprafaţa externă a membranei
citoplasmatice - transglicozilaze, leagă între ele 2 aminozaharuri
- transpeptidaze, catalizează formarea subunităţilor şi punţilor
peptidice (esenţial dipeptidul D-alanină-D-alanină)
- Proteine de legare a penicilinelor (PLP,PBP) denumire generică a enzimelor care
controlează sinteza.
RIGIDITATEA peretelui bacterian este condiţionată de configuraţia sterică şi mărimea
ochiurilor reţelei de peptidoglican
Cu EXCEPŢIA spirochetelor care au perete flexibil, restul bacteriilor au perete rigid care
le conferă anumite forme: sferice, bastonaş, filamentoase şi ramificate (actinomicete).
Morfologia bacteriilor mai este caracterizată prin aşezarea lor care este condiţionată de
modul de înmulţire (înmugurire, diviziune, fragmentare)
Poziţia planurilor succesive de diviziune, numărul de generaţii după care se separă
celulele surori.
REZISTENŢA peptidoglicanului protejează protoplastul prin echilibrarea presiunii
osmotice foarte mari (5-20atm) din citoplasma bacteriană.
Sub acţiunea agenţilor muralitici (lizozim, penicilină etc.) apar defecte ale peretelui care
duc la hernieri ale protoplastului sau la explodarea acestuia.
Acţiunea agentului muralitic în mediu osmotic protector (soluţie 20% zaharoză, urină) face
ca protoplastul să rămână integru, dar ia o formă sferică indiferent de forma avută
anterior, devine sferoplast dacă mai păstrează urme de perete sau protoplast complet
nud.
Dacă agentul muralitic dispare din mediu, sferoplaştii revin la forma iniţială a bacteriei, dar
protoplaştii nu. Este demonstrată autodeclanşarea sintezei şi asamblării
peptidoglicanului de către resturile de perete.
Bacteriile cu perete defectiv apărute în medii osmotic protectoare sunt numite forme L
(1935, Emmy Klineberger Nobel le-a descris la Institutul Lister din Londra)
În cursul terapiei cu peniciline în focarul de infecţie pot să apară forme L -infecţia se
cronicizează.
Peretele bacterian trebuie să se adapteze permanent protoplastului în creştere
- la bacteriile gram–negative enzimele autolitice rup limitat reţeaua de peptidoglican şi
permit inserţia de noi molecule în puncte răspândite aleatoriu pe suprafaţa bacteriei
- la bacteriile gram-pozitive inserţia se face predominant în vecinătatea septului de
diviziune.
Interes medical
- sensibilitatea la lizozim
- interferarea sintezei de către peniciline
- antigenitatea
- proprietatea de adjuvant imunologic
În stare deshidratată supravieţuiesc ani. Condiţiile favorabile (apa, nutienţi) semnal care
declanşează germinarea: activarea unei autolizine a cortexului. Apa şi nutrienţii
difuzează spre protoplast care creşte în volum, rupe învelişurile sporale
Sunt uşor observaţi în microscopia optică.
Importante caractere taxonomice primare.
În coloraţia Gram rămân incolori. În coloraţia Ziehl – Neelsen în roşu, bacteria în albastru.
virusuri = particule infecţioase cu dimensiuni foarte mici (20-300 nm),
alcătuite dintr-un singur acid nucleic ARNsau ADN protejat de un
înveliş.
NU au- enzime producătoare de energie
- capacitate de biosinteză
- nu cresc
- nu se divid- nu se înmulţesc sunt replicate de o celulă gazdă pe
care o parazitează
AU doar flux informaţional
observarea şi/sau aprecierea dimensiunii particulei virale prin
• microscopie elecronică
• ultrafiltrare
• ultracentrifugare
Parazitul
Definiţie
Organism care trăieşte în asociere cu alt organism, din altă specie, numit „gazdă”
Se hrăneşte pe seama acestuia (gazda oferă hrană şi adăpost)
Este patogen pentru acesta.
Clasificare:
Protozoare (orgs unicelulare, eucariote)
Metazoare (orgs pluricelulare; au țesuturi și organe)
Helminţi (viermi paraziti)
• Plathelmintes (viermi plați)
Trematoda – foliacei
Cestoda - pangliciformi
• Nemathelmintes (viermi cilindrici)
Artropode (articulate)
TAXONOMIA MICROORGANISMELOR
Clasificare
Filogenetica
Taxon biologic= indivizi posesori ai unei informatii genetice comune
Specia = taxon de baza al lumii vii
Gen
Familii
Ordine
Clase
Diviziuni
Regnuri
Particularitatea la procariote
- Numar redus de caractere morfologice
- Putine amprente fosile
- Studiul vizeaza populatia bacteriana= tulpina
- Aparitia de clone
- Inmultire vegetativa
Specia bacteriana = grup tulpini cu multe caractere in comun ce difera semnificativ de
alte tulpini (alese de taxonomist)
Tehnici:
- Continut G+C
- Omologia secventelor nucleotidice ale ADN
- Studiul ARN ribozomal
- Structura izoenzimelor sau a citocromului c
- Studiul imunologic al proteinelor bacteriene omoloage
Numire
Sistem binominal Linné
Staphylococcus aureus
Gen – um, -us, -as, a
Corynebacterium, Pseudomonas, Neisseria
Familie – aceae – Enterobacteriaceae
Ordin – ales , Spirochetales
Clase – es, Mollicutes
Identificare
- Utilizarea in practica a schemei de clasificare
Chei dihotomice
Taxonomia numerica (computerizata) – matricea de frecventa
↓ ↓ ↓ ↓
Proteine polizaharide lipide acizi nucleici
Genomul bacterian
Variabilitatea bacteriilor
- variaţia fenotipică
- variaţia genotipică
Semnificaţiile biologice ale variaţiei genetice a bacteriilor
Genetica virusurilor
- variaţia genetică
- mutaţii
- interacţiuni genetice
Genetica bacteriană
Genomul bacterian este format din: cromosom, plasmide, episomi + genomul profagilor la
bacteriile lizogene
Variabilitatea bacteriilor
- Fenotipică – indusă de interacţiunea genomului cu factori de mediu
- reversibilă
- nu se transmite ereditar
- adaptează o populaţie bacteriană cu acelaşi genotip la condiţii modificate
de mediu
Exemple:
- represia genelor vegetative în cursul sporulării
- inducţia unor beta - lactamaze de antibiotice beta – lactamice
- în prezenţa lactozei este indusă sinteza enzimelor prin care Escherichia coli
degradează dizaharidul (galactozid – permeaza, beta – galactozidaza, thiogalactozid –
transcetilaza).
- represia sintezei de triptofan de către E. coli în prezenţa lui în mediu
Genotipică - modificare bruscă, transmisă ereditar, ce interesează unul sau mai multe
caractere
- generată de mutaţii şi
- transferul de ADN urmat sau nu de recombinare genetică
Mutaţiile
- Mutaţia = modificare în secvenţa nucleotidică a unei gene, o eroare de autoreplicare a
ADN
Mutaţia eveniment rar
- Rata mutaţiei= probabilitatea apariţiei unei mutaţii, măsurată per celulă şi per generaţie,
pentru un singur caracter variază între 10-6- 10-9.
Rata mutaţiei creşte sub acţiunea agenţilor mutageni
- fizici – radiaţii ultraviolete, ionizante
- chimici – ex. acid nitros
Factori favorizanţi ai prezenţei şi manifestării mutaţiilor
- mărimea populaţiilor bacteriene – in vitro la sfârşitul fazei exponenţiale, populaţia unei
bacterii poate ajunge la 1010- 1012 celule/ml
- caracterul haploid al bacteriilor – expresia mutaţiei bacteriene este imediată
Mutaţiile sunt spontane şi imprevizibile
- identificăm mutanta într-o populaţie bacteriană numai în măsura în care utilizăm o
presiune selectivă prin care omorâm sau oprim creşterea populaţiei parentale şi
favorizăm înmulţirea mutantei care va genera o clonă cu caracter mutant – “sită
selectivă”
Mutaţiile sunt discontinui
- nu există forme de trecere între tipul sălbatic şi tipul mutant
Ex. variaţia S→R a pneumococilor, brusc prin mutaţia genei ce codifică polizaharidul
capsular
Mutaţiile sunt specifice şi independente
Rata mutaţiei pentru rezistenţa la rifampicină este de 10-8, pentru izoniazidă
de 10-5, pentru dublă rezistenţă 10-13. O cavernă tuberculoasă evolutivă conţine 108
bacili. În monoterapie selecţia poate începe de la 1 mutantă rezistentă la rifampicină şi
103 mutante rezistente la izoniazidă. Asocierea drogurilor previne selecţia oricărei
mutante rezistente.
Mutantele sunt stabile
- caracterul mutant se transmite indefinit la descendenţi chiar în absenţa presiunii
selective asupra culturilor. Tipul sălbatic poate fi restaurat numai dacă apar mutaţii
reverse cu aceeaşi rată.
Mecanismele de reparare a ADN
- prin excizie controlată de 4 enzime: endonucleaze (“pipăie”) clivează de o parte şi de
alte a erorii; 3`exonucleaza excizează situsul erorii; ADN-polimeraza transcrie de pe
catena parenterală situsul excizat; ADN ligaza reface continuitatea catenei. Timp până
la metilarea nucleotidelor.
- răspunsul S.O.S. – dacă eroarea este extinsă furca de replicare a ADN-ului este
blocată la nivelul erorii, clivare, excizie. Proteina recA se fixează pe catena parentală
în dreptul exciziei şi acţionează : iniţiază recombinări genetice; inactivează represori ai
enzimelor sistemului de reparare a ADN
3. Transferuri genetice mediate de bacteriofagi
Transducţia -generalizată – fagul transductor conţine numai ADN -oricare parte
– obţinut de la donator
-specifică – gene fagice+ gene bacteriene vecine
Transductorii – fagi temperaţi – preferaţi ca transductori –
lizogenizează bacteria
- mutante ale fagilor virulenţi
Conversia lizogenică – toxigeneza unor bacterii
Semnificaţii biologice ale variaţiei genetice a bacteriilor
Selectează indivizi cu caractere noi
Selecţie relativă – pozitivă
- negativă
Selecţie absolută
Relaţii simbiotice:
Forezia - relaţie întâmplătoare, nesistematizată
- Musca domestica
Comensalismul – adăpost şi hrană oferite de gazdă unui organism mai mic. Gazda
rămâne indiferentă.
Mutualismul – beneficiul reciproc al consorţilor
Parazitismul – beneficiul unilateral
Oportunismul – comensal sau mutualist devine parazit
Dinamica relaţiilor microorganism – gazdă. Afectarea gazdei.
Patogene – microorganismele patogene
Nepatogene - comensale şi mutualiste
Condiţionat patogene – oportuniste
Microorganismele patogene
Atacă eficient gazda normoreactivă
După apariţia imunităţii:
- distrugerea microorganismului cu vindecare
- trecerea la mutualism – gazda se vindecă, dar microorganismul este găzduit
persistent în focare profunde care nu comunică cu exteriorul. Imunitatea este
întreţinută de această convieţuire (infecţie latentă). Echilibrul poate fi rupt ocazional şi
gazda se reîmbolnăveşte.
- trecerea la comensalism – bolnavul se vindecă, dar continuă să găzduiască
microorganismul în cavităţi de unde îl elimină în mediu. Gazda devine purtător
sănătos de microorganism patogen, fără profit.
Microorganismele condiţionat şi accidental patogene
Comensale, mutualiste ale gazdei sau saprofite ale mediului extern
(saprophagein – care se nutreşte cu materie în descompunere) şi care ajung
forţat în ţesuturi prin depăşirea barierelor antimicrobiene. Atacă gazda numai în
anumite condiţii:
- prezenţa disfuncţiilor în sistemul barierelor antiinfecţioase
- variaţia genetică le conferă capacităţi patogene suplimentare.
Prin vindecarea bolii revin la relaţia anterioară.
Astăzi – microorganisme cunoscute a fi nepatogene pot îmbolnăvi gazda
imunocompromisă. Nu atât din cauza microorganismului, cât din cauza diversificării
şi agravării deficitelor în apărarea antimicrobiană (terapia imunosupresivă,
imunodepresie, infecţia cu HIV). Aceste microorganisme se numesc accidental
patogene.
Disbiozele
Colonizări anormale, tranzitorii sau de durată, clinic mute sau manifestate ca boli
ecologice, pot altera microbiota unor suprafeţe anterior colonizate sau extind
colonizarea la suprafeţe normal necolonizate - pot creşte receptivitatea la boli
infecţioase.
Pot fi cauzate de:
Alterarea unor bariere antimicrobiene: aclorhidria duce la colonizări ale stomacului
şi duodenului care deschid calea spre infecţia căilor biliare;
Alterări ale transportului mucociliar duc la colonizarea traheo-bronşică crescând riscul
infecţiilor respiratorii joase.
Modificări ale condiţiilor de găzduire
Deficit enzimatic congenital sau dobândit prin infecţii virale ale enterocitelor de a digera
lactoza: favorizate bacteriile care fermentează lactoza în colon şi determină diaree.
Umiditatea crescută a tegumentului favorizează înmulţirea excesivă a unei levuri lipofile
Malassezia furfur care determină pitiriazis versicolor. Cheilita -umidifierea comisurilor
bucale prin scurgerea de salivă duce la înmulţirea excesivă a Streptococcus pyogenes
şi a levurilor.
Lipsa igienei bucale+consum crescut de dulciuri – placa dentară →patogeneza cariei.
Modificarea receptorilor epiteliali
Pierderea în condiţii de stress sau la vârstnici a fibronectinei, receptorul pentru
streptococi orali, principala barieră a gurii şi a orofaringelui - deschide calea colonizării
cu bacili gram-negativi.
Medicaţia antibacteriană cu spectru larg administrată per os
Boli ecologice prin înmulţirea excesivă a microorganismelor rezidente: candidoze orale,
vaginale intestinale;enterocolita pseudomembranoasă.
A. Apărarea antiinfecţioasă nespecifică
Celule NK
- produc perforine care formează canale în membrana citoplasmatică, cu
moartea celulei prin liză osmotică
- distrug celulele infectate cu virus (independent de AC)
- activitatea lor este stimulată prin interferoni.
Jules Bordet
Complement seric
- complex de substanţe proteice sintetizate de macrofage
(C2 şi C4), ficat (C3, C şi C9), splină (C5şi C8) şi epiteliul
intestinal (C1)
- activare prin reacţii enzimatice în cascadă (proenzime
inactiveenzime active)
pe cale alternativă (LPS, compuşi endotoxină-like)
pe cale clasică (proteina C reactivă, anticorpi)
Calea lectinei
- funcţii:
• citoliza prin complexul C5, C6-C9
• opsonizare prin C3b
• stimularea inflamaţiei prin C3a şi C5a.
C3a C5a C5b67 Fc IgG, C3b C3e
Inflamaţie acuta
Interferoni
- glicoproteine cu gr.moleculară mică de tip
• alfa (sintetizaţi de leucocite),
• beta (sintetizaţi de fibroblaşti),
• gamma (sintetizaţi de limfocite T, ca limfokine)
- sinteza interferonului alfa şi beta este stimulată de virusuri
(în special ARN)
- funcţii:
• inhibă replicarea virusurilor prin blocarea sintezei proteinelor
virale
• efect antiproliferativ
• acţiune imunomodulatoare – activează funcţional macrofagele,
celulele NK şi limfocitele T citotoxice; favorizează exprimarea
MHC de clasă I.
Proteine de fază acută
- reprezentate de proteina C reactivă (CRP), alfa1-
antitripsina, alfa 2 macroglobulina, fibrinogen,
orozomucoid, amiloid A
- majoritatea sintetizate în ficat, după efectul stimulant al
citokinelor proinflamatorii (IL-1, IL-6, TNF-alfa)
- CRP, cel mai bine studiată, are efect opsonizant şi de
activare pe cale clasică a complementului
(PROCALCITONINA).
B. Apărarea antiinfecţioasă specifică
(imunitatea)
răspuns specific dirijat faţă de structuri recunoscute ca
non-self (Ag) de către sistemul imunocompetent
răspunsul primar (după un prim contact) necesită mai
multe zile pentru ca efectorii imuni să devină operanţi
răspunsul specific este intensificat prin expuneri repetate
(răspuns secundar)
răspunsul imun poate fi
- de tip umoral (sau seric), asigurat de Ac specifici produşi de
limfocite B
- de tip celular, fiind implicate limfocite T.
Clasificarea imunităţii după modul de obţinere
Imunitate activă
naturală – postinfecţie
artificială - după vaccinări.
Imunitate pasivă
naturală - Ac materni transmişi la nou-născut
- transplacentar (IgG)
- prin lapte (IgA)
artificială – seroterapie sau seroprofilaxie.
1. Răspunsul imun umoral
Patogenitatea – un microorganism este patogen când are sau poate dobândi structuri
şi funcţii prin care penetrează
se menţine
supravieţuieşte
se înmulţeşte
invadează ţesuturile
supravieţuieşte răspunsului imun
supravieţuieşte între 2 gazde succesive
determină leziuni
- este exprimată în doze letale minime sau doze letale 50% (DLM; DL50)
Lezarea directă
Proprietăţi comparative
exotoxine endotoxine
- în general termolabile - termostabile
- intens antigenice - slab antigenice
- pot fi transformate în anatoxine - nu pot fi transformate
- DLM ng/Kg corp - DLM µg/Kg corp
- acţiune specifică - acţiune nespecifică (febră,
leucopenie urmată de leucocitoză,CID,
şoc endotoxinic)
Clasificarea exotoxinelor
- citolitice
• atacă fosfolipide din membrana citoplasmatică (fosfolipaze);
• crează pori prin membrana celulară (hemolizine, leucocidine).
- constituite din două subunităţi
• subunitaea B permite legarea toxinei la un receptor celular
• subunitatea A, cu proprietăţi enzimatice, pătrunde în celulă acţionând asupra
unor ţinte moleculare
Antigenitate/toxicitate
- Doza toxica <doza imunogena
- Anatoxinele (toxoizi) – exotoxine detoxifiate cu imunogenitate conservata
- utilizate drept vaccinuri antitoxice
Efecte biologice ale endotoxinelor
Infestare
extinderea infecţiei
- pe cale limfatică
- pe cale sanguină (bacteriemie, septicemie )
- pe cale nervoasă
Reactii de sensibilizare
Importanţa:
pacienţii NU sunt rezervor de infecţie; ei devin rezervor de infecţie când infecţia
se reactivează
bacteriile dormante sunt REZISTENTE la antibiotice
bacteriile dormante NU pot fi depistate prin metode directe
bacteriile dormante întreţin imunitatea gazdei (imunitate de infecţie)
Principalele tipuri de boli infecţioase
Infecţie emergentă = infecţie apărută pe glob sau într-un teritoriu datorită unui
microorganism necunoscut până în urmă cu aprox. 20 ani sau cauzată de un
microorganism binecunoscut dar care prezintă un nou fenotip (ex infecţia HIV,
enterocolita hemoragică cu E.coli O157H7, infecţia holerică cu serotipul O139,
infecţia cu S.pneumoniae multirezistent la antibiotice etc).