Diagnostic de laborator n infecii

determinate de genul Salmonella 1.

Diagnostic direct
Salmonelozele sunt boli infectioase comune omului si
animalelor produse de germeni ai genului Salmonella
-OIE mentioneaza 2 specii in cadrul genului Salmonella:
Salmonella enterica si Salmonella bongori

Specia Salmonella enterica cuprinde 6 subspecii:

1. Salmonella enterica (subsp. I) Subspecia enterica este la rndul ei divizata n

2. Salmonella salamae (subsp. II) serovaruri:
3. Salmonella arizonae (subsp. IIIa) 1.Salmonella serovar Typhimurium
4. Salmonella diarizonae (subsp. IIIb) 2.Salmonella serovar Enteritidis
5. Salmonella houtenae (subsp. IV) 3.Salmonella serovar Typhi,
6. Salmonella indica (subsp. VI) 4.Salmonella serovar Paratyphi
5. Salmonella serovar Cholerae suis etc.
Salmonella este prezenta n tubul digestiv al animalelor
Adaptate la gazda:

mamifere Om S. Typhi
Bovine S. Dublin
Suine S. Choleraesuis
etiologie
Pasari S. Pullorum/ Gallinarum
psri
Neadaptate la gazd
S. Typhimurium, S. Enteritidis

reptile Receptivitate: mamifere, pasari, om

epidemiologie
insecte
! Produse alimentare
animale sau vegetale
- Toxiinfectii alimentare
Surse de infectie: animale bolnave,
purtatori (boala de portaj),
alimente contaminate
Evolutie enzootica, boala stationara
de grajd, trenanta, iar la ovine si ecvine
(avort salmonelic) evolutie sporadica
Aspecte clinice (specie, varsta, forma de evolutie):
- forme septicemice
- n general sindrom digestiv
- n formele cronice, semne respiratorii +/- localizare articulara
- la ovine i cabaline, form abortigen
-La pasari: paratifoze + tifopuloroza

-!!!! Stare de purtator

 Aspecte lezionale (dependente de forma
clinica, specie, tip de infectie)

Pneumonie interstiial

Ulcere acoperite de fibrin la nivelul colonului

Enterita fibrinonecrotica
 Leziuni de tip ulcerativ si
necrotic la nivel intestinal

Enterita hemoragica, limfonodurile

mezenterice reactionate si hemoragice
 Salm mobile

Paratifoze Salm imobile: S. gallinarum/ S. pullorum

!!!!! zoonotice Tifopuloroza
Impact economic
major

Noduli pulorici la
Ovarita atrofica si salpingita, niv. cord (focare
pseudoconcremente, de necroza)
Ficat bronzat peritonita vitelina
 Conduita diagnosticului microbiologic
Probe de la animale in via: fecale, lichid articular, snge, scurgeri
vaginale
Probe de la cadavre: - ficat, vezica biliara, splina, pulmon, rinichi, ovar, os lung
nedeschis ( f. septicemica), ganglioni limfatici
- avortoni
Alimente - toxiinfecii alimentare

Dg. direct: examene microbiologice

Dg. indirect = retrospectiv (detectare si
cuantificare Ac specifici antisalmonelici)
Dg. direct: examene microbiologice

Examen bacterioscopic:
-Bacil sau cocobacil, 2-4/ 0,6-0,7 m
-G-
-Necapsulat, nesporulat
-Mobil (cili peritrich)

! Exceptie: S. Pulorum/Gallinarum

? Valoare de dg pt exam bacterioscopic

cocobacil Gram -
Dg. direct: examene microbiologice
-germen nepretenios - crete pe medii uzuale
Examen bacteriologic: -se dezvolt la 37C, 18-24h
-enterobacterie aerob, facultativ anaerob

Bulion: turbiditate uniforma, moderata pana la

intensa, mai slaba decat E. coli
Agar: colonii mijlocii, 1,5-3mm, tip S

? Valoare de dg pt exam bacteriologic

 colonii nehemolitice

Colonii Salmonella choleraesuis subsp. arizonae pe agar cu snge

 Schema de identificare:

Medii de imbogatire: mediu cu selenit de

Medii de preimbogatire: apa peptonata
sodiu, Rappaport Vassiliadis, Kauffmann-Muller

Medii selective: Wilson-Blair, Istrati-Meitert, MacConkey, XLD

coloniile lactozo -
Medii de diferentiere: medii politrope (TSI, Simmons citrat, MIU, MILF)
proprietati biochimice
sau testare API20E
Medii selective: Wilson-Blair, Istrati-Meitert, agar Hektoen enteric, S.S, Drigalsky,
MacConkey, XLD

Agar MacConkey

colonii lactozo pozitive colonii lactozo negative

E. coli Salmonella spp.
Medii selective: Wilson-Blair, Istrati-Meitert, agar Hektoen enteric, S.S, Drigalsky,
MacConkey, XLD

Mediu XLD insamantat Mediu S.S insamantat

Productia de H2S
Culoare neagra colonii
Medii selective: Wilson-Blair, Istrati-Meitert, agar Hektoen enteric, S.S, Drigalsky,
MacConkey, XLD

Salmonella Typhimurium
agar Hektoen enteric (HE)
Lact-si H2S +

Coloniile lact - suspecte vor fi transferate pe medii

politrope (Simmons citrate, TSI, MIU, MILF) sau Salmonella Typhimurium
identificate prin sisteme microtest (API20E)- agar XLD
Identificare biochimica Lact-si H2S +
Medii de diferentiere: evidentiere proprietati biochimice prin intermediul mediilor
politrope (TSI, Simmons citrat, MIU, MILF) sau testare API20E

Simmons citrat agar

citrat de amoniu sau sodiu cristalizat,
solid, culoare verde nchis, se toarn
nclinat i se nsmneaz prin haurare
cu ansa.

Salm

E coli

Proprietate biochimica: abilitatea de a utiliza citratul ca sursa de carbon

Citire: virarea mediului in albastru
Salmonelele sunt citrat pozitive.
Medii de diferentiere: evidentiere proprietati biochimice prin
intermediul mediilor politrope (TSI, Simmons citrat, MIU, MILF)
sau testare API20E
TSI (Triple Sugar Iron agar)
(gluc, lact, sucroza, sulfat feros, se solidific n poziie nclinat, astfel
nct s aib o poriune inferioar, vertical i una superioar, nclinat.
Poriunea vertical se nsmneaz prin nepare, iar cea nclinat prin
haurare. Mediul nensmnat are culoarea rou nchis.)

Proprietati biochimice: abilitatea de a metaboliza glucoza, lactoza si

productia de hidrogen sulfurat
Citire: virarea mediului in galben (gluc, lact) si aparitia culorii negre (H2S)
Salmonelele sunt glucozo +, lactozo -, H2S +
Medii de diferentiere: evidentiere proprietati biochimice prin intermediul mediilor
politrope (TSI, Simmons citrat, MIU, MILF) sau testare API20E
Mediul MILF (mobilitate, indol, lizindecarboxilaz, fenilalanin- dezaminaz)
(glucoz, aminoacizi: L-lizin, DL-triptofan, DL-fenilalanin i bromcrezolpurpur indicator de pH, mediu
solid, coloan si nsmnare prin nepare, culoare mov-cenuie.
Mobilitate - turbiditate n toat masa mediului. Bacteriile imobile cresc doar pe traiectul nepturii.
Producia de indol - benda pentru indol sau reactiv Ehrlich Kovacs, impregnat cu para-dimetil-amino-
benzaldehid, de culoare galben. Indol+ banda se nroete.
Producia de fenilalanindezaminaz - la suprafaa mediului se adaug cteva picturi de soluie de clorur
feric 10%. Reacia + culoarea galben a reactivului vireaz n verde.
Testul lizindecarboxilazei: n prezena lizindecarboxilazei, lizina din compoziia mediului se metabolizeaz
n cadaverin, care duce la colorarea mediului n violet, prin pierderea gruprii carboxilice (alcalinizare).
Dac reacia este negativ (absena lizindecarboxilazei), culoarea mediului vireaz n galben, acidul
carbonic rezultat din metabolizarea glucozei din mediu produce o acidifiere care nu este tamponat de
cadaverin.
Mediul MIU (mobilitate, indol, ureaz)
(uree, glucoz i rou fenol indicator de pH, galben maroniu transparent, coloan i se nsmneaz prin
nepare)
Producia de ureaz: prin descompunerea ureei se elibereaza amoniac si culoarea mediului vireaz n rou.
Dac bacteria nu produce ureaz, culoarea mediului vireaz n galben.

Salmonelele, cu excepia S. pullorum-gallinarum sunt mobile

Salmonelele sunt indol -
Salmonelele sunt fenialanin-dezaminaz -
Salmonelele sunt lizindecarboxilaza +
Salmonelele nu hidrolizeaz ureea -
 Mobilitate +
Indol
Fenilalanin dezaminaza
Lizin decarboxilaza +

+ -
Neinsam =
mov cenusiu
API 20E 24h 37C
 Medii de imbogatire
Medii selective Tulpina suspecta Salmonella ?
Medii de diferentiere

TIPIZARE SALMONELLA
tipizare moleculara (PCR),
tipizare fagica,
tipizare antibioticorezistenta

SEROTIPIZARE = identificarea salmonelelor izolate, stabilirea apartenentei la

serogrup si a serotipului pe baza structurii antigenice (schemei Kauffmann-Mller)
Antigene somatice O (termostabile, alcoolorezistente, complexul lipopoliglucidic din
membrana extern a peretelui celular, aglutinare cu aspect granular).
Antigene de suprafa Vi (termolabile, dar insensibile la alcool i formol, prezente doar la
trei serotipuri S.Typhi, S. Paratyphi i S. Dublin. Fiind situat la exteriorul antigenului somatic,
l mascheaz i mpiedic aglutinarea cu seruri anti O).
Antigene flagelare H (de natur proteic, termolabile, alcoolo-sensibile).

Ag somatic (O) serogrupe A - Z ser anti Salmonella polivalent de grup

Ag Vi ser anti Vi
Ag flagelar (H) a z ser anti H
Principiu: tulpinile de Salmonella sunt confirmate la aglutinarea dintre Ag bacterian si Ac
specifici continuti de serul cunoscut
Tehnica de lucru: pe lama bine degresat se face o suspensie bogat (dar fr grunji) din
cultura bacterian pe agar. Se adaug o pictur de ser antisalmonelic polivalent, se
amestec cele dou picturi i se urmrete apariia reaciei de aglutinare n decurs de 1-3
minute (RAR, reactia de aglutinare rapida pe lama).
Dac bacteria respectiv este o salmonel, vor apare treptat grunji de culoare albicioas,
cu limpezirea consecutiv a amestecului. Pentru a evita erorile provocate de eventuala
aglutinare spontan a culturii n ser fiziologic, se efectueaz n paralel o suspensie n ser
fiziologic fr a aduga ser aglutinant.
Dac reacia este negativ i totui datele epidemiologice, clinice si anatomo-patologice
indic salmoneloza, se efectueaz i aglutinarea cu serul anti Vi.
Prin aceeai tehnic se determin apartenena la serogrup, folosind serurile anti B, C, D,
etc., iar apoi specia, cu utilizarea serurilor anti H.

+ -