ULTRASTRUCTURA

BACTERIILOR.
ELEMENTELE
PERMANENTE I
NEPERMANENTE DE
STRUCTUR

ELEMENTELE DE STRUCTUR
ALE CELULEI BACTERIENE

Elementele constante (permanente, obligatorii)

Peretele celular
Membrana citoplasmatic
Citoplasma
Nucleoidul
Ribosomii
Mezosomii
Elementele inconstante (nepermanente,
neobligatorii)
Capsula
Sporul
Flagelii
Pilii/fimbriile
Plasmidele
Incluziunile celulare

PERETELE CELULAR (PC)

Reprezint un nveli rigid ce
nconjoar protoplastul bacterian.
Lipsete la micoplasme.
Se disting 2 mari grupe de bacterii
n funcie de structura PC:
1. Bacterii gram-negative (G-)
2. Bacterii gram-pozitive (G+)
(1884, savantul danez Christian
GRAM).
Elementul comun al ambelor grupe
peptidoglicanul (PG).

PEPTIDOGLICANUL (PG)
PG

structur particular rigid a PC bacterian.

Structura PG:
Heteropolimer macromolecular reticulat, constituit
dintr-un component glicanic i unul peptidic.
Partea glicanic (polizaharidic) este constituit
din catene liniare paralele n care alterneaz Nacetyl-glucozamina cu acidul N-acetyl-muramic.
Partea peptidic este reprezentat de uniti
tetrapeptidice (izomeri L i D de AA), fixate de
acidul muramic, care pot fi legate intre ele direct
(structur bidimensional, la bacterii G-) sau prin
puni interpeptidice (structur tridimensional, la
bacterii G+).

 Acidul

diaminopimelic, izomerii D ai AA i
acidul muramic se ntlnesc doar la celulele
procariote.
Fragmente solubile de murein pot stimula
secreia excesiv a citokinelor de ctre
macrofage, prin legarea de receptorii toll-like
sau CD14, inducnd astfel simptome de oc
septic
PG reprezint inta de atac a unor substane:
1. Lizozimul, care taie legturile dintre N-AGA i
acidul N-AM (catena glicanic)
2. Unele antibiotice (beta-lactamine,
glicopeptide, fosfomicina), care perturb
procesul de transpeptidare.

 Peretele

celular al bacteriilor gram-

pozitive
- Uniform, cu pori mici
- Grosimea 20-80 nm (pn la 300 nm)
- Componentul major (40-80%) reprezint PG
(structur reticulat tridimensional)
- Componente minore:
1. Acizii teichoici (polimeri de glicerol sau ribitol
fosfat), fixai de N-AGA. Traverseaz PG i
creaz sarcin electric negativ la suprafaa
bacteriei, asigur transferul de ioni i fixarea
unor proteine, funcie antigenic. Pot activa
complementul pe cale alternativ i stimula
secreia citokinelor de ctre macrofage.

2. Acizii lipoteichoici: se fixeaz de MCP i

depesc stratul de PG.

Funcii: identic cu acizii teichoici, intervin n
adeziunea la celule i au un efect toxic slab.
3. Proteine asociate peretelui celular: proteina
A, coagulaza legat (clumping factor) i
proteina fixatoare de fibronectin la
Staphylococcus aureus, proteina M la
Streptococcus pyogenes (rol n adeziune la
substrate, protecie de fagocitoz)
4. La unele bacterii G+ (de exemplu:
Mycobacterium, Nocardia) peretele conine
o cantitate important de lipide sau ceruri,
la altele (ex.: streptococi) peretele conine
multe glucide.


1.

2.

Peretele celular al bacteriilor gramnegative

Grosimea 10-12 nm
Neomogen, format din straturi distincte:
PG, stratul intern, constituie 1-10% din
masa uscat a peretelui celular. Acizii
teichoici lipsesc. Nu exista p uni
interpeptidice (structur
bidimensional).
Membrana extern (ME) dublu strat
lipidic cu proteine nserate (proteine
majore 70%, minore 30%).

Unele proteine majore (porine), unindu-se

n triplete, particip la formarea porilor,
altele (nonporine) au funcie de
receptor pentru bacteriofagi i pili sau
asigur adeziunea la receptorii celulelorgazde.
Proteinele minore sunt enzime implicate in
captarea unor substane i transportul
specific transmembranar.
ME este permeabil pentru ioni i mici
molecule hidrofile i impermeabil pentru
molecule hidrofobe sau amfipatice

3. Lipoproteinele asigur legtura dintre ME i PG

4. Lipopolizaharidul (LPZ) stratul extern al
peretelui gram-negativ. Este format din:
Lipidul A (endotoxin), glicolipid ancorat n ME.
Stimuleaz formarea i secreia citokinelor.
Determin efectul toxic al bacteriilor Gmanifestat n urma lizei celulare.
Polizaharide complexe, fixate pe lipidul A.
Particip n procese de penetrare i transport a
unor substane, confer specificitate de gen
(antigenul R)
La exterior, subuniti oligozaharidice liniare
sau ramificate. Creaz sarcin negativ la
suprafaa bacteriei (mpiedic fagocitoza,
accesul moleculelor toxice), confer specificitate
de specie sau tip (antigenul O)

Spaiul periplasmic este regiunea dintre

ME i MCP. Conine PG i proteine-enzime
implicate n transport, digestia
nutrienilor, protecia contra substanelor
toxice (ex.: beta-lactamazele, care
distrug antibioticele beta-lactamice).
La bacteriile G+ aceste enzime sunt
secretate n mediul extern.
Evidenierea peretelui celular : microscopia
electronic, metode speciale de colorare,
plasmoliz (n mediu hipertonic),
plasmoptiz (n mediu hipotonic).

Determinarea tipului peretelui celular

COLORAIA GRAM (condiionat de structura i
compoziia chimic a peretelui celular)
1. Colorarea frotiului fixat cu violet de genian
(citoplasma bacteriilor se coloreaz n violet)
2. Splarea cu ap apoi tratarea cu soluie Lugol
(I2 +KI) fixeaz colorantul n celule prin
formarea complexului insolubil violet-iodin
3. Decolorarea cu alcool 95%. Bacteriile G+
pstreaz colorantul, cele G- se decoloreaz.
4. Recolorarea bacteriilor G- cu fucsin apoas
Rezultat: bacteriile G+ apar colorate n violet,
cele G- n rou.

Mecanismul: Peretele G- este subire,

conine multe lipide (20%), care sunt
dizolvate de alcool, porii au diametrul mare,
pH citoplasmei este slab acid (se
decoloreaz
cu alcool);
Peretele G+ este gros, nu conine lipide sau
foarte puine, alcoolul deshidrateaz
peretele i reduce diametrul porilor, pH acid
(colorantul nu este splat din citoplasm)
Utilizarea practic a coloraiei Gram:
1. Diagnostic
2. Sensibilitate diferit la antibiotice

 Acidorezistena

bacteriilor
Unele bacterii G+ (Mycobacterium,
Nocardia) conin n componena peretelui
multe lipide, acizi grai i ceruri (70% din
greutatea peretelui). Aceasta le confer
rezisten marcat n mediul extern i
sensibilitate distinct la antibiotice.
Coloraia Ziehl-Neelsen permite
diferenierea acestor bacterii dup
proprietatea lor de acido-alcoolorezisten

Metoda de colorare Ziehl-Neelsen

Principiul: bacteriile acido-rezistente
colorate cu fucsin fenicat nclzit nu
pot fi decolorate de acizi sau alcool.
1. Frotiul se coloreaz cu fucsin fenicat,
nclzind lama pn la apariia vaporilor
2. Se cltete cu ap, apoi se trateaz cu
soluie de acid sulfuric de 5%.
3. Dup splare frotiul se recoloreaz cu
albastru de metilen
Rezultatul: bacteriile acido-rezistente
rmn colorate n rou, cele acidonerezistente se decoloreaz, apoi se
recoloreaz n albastru


1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

9.

Funciile peretelui celular

Confer forma bacteriilor
Barier osmotic i mecanic
Barier de permeabilitate selectiv
Funcie antigenic (Ag O i R)
Particip la procesele de cretere i diviziune
celular
Funcie de receptor
Responsabil de aderena specific la
substrate
Componente ale peretelui celular (lipidul A,
acizii lipoteichoici, fragmente de PG)
contribuie la producerea citokinelor i
activarea complementului pe cale alternativ
cu manifestarea ocului septic (endotoxinic)
Reprezint inta de atac a unor enzime i
antibiotice

 Sub

influena unor substane (lizozim,

antibiotice) PG poate fi deteriorat, iar bacteria
explodeaz din cauza presiunii osmotice
ridicate (5-20 atm). n mediu echilibrat osmotic
pot fi obinute forme particulare:
Protoplastul - reprezint o structur sferic
totalmente lipsit de perete celular. El este
obinut din bacterii G+
Sferoplastul - structur sferic sau neregulat
parial lipsit de perete celular. Este o bacterie
G- lipsit de peptidoglican i nconjurat de ME
i MCP
Bacteriile care prezint un deficit n PG sunt
numite forme L (descoperite la institutul
Lister). Ele se pot forma sub influena
antibioticelor betalactamice. Sunt instabile fa
de variaii osmotice i rezistente la
betalactamine. Pot fi reversibile sau ireversibile

MEMBRANA CITOPLASMATIC (MCP)

Prezint o structur membranar clasic: dublu strat
fosfolipidic n care sunt nserate proteine i
glicoproteine. Lipsesc sterolii.
La bacteriile gram-pozitive MCP formeaz invaginaii,
mezosomi (septali, laterali), n care se conin enzime,
citocromi i proteine ale sistemului transportor de
electroni.
Proteinele MCP:
1.
PFP (Proteine Fixatoare de Penicilin), enzime ce
catalizeaz legturile dintre catenele peptidice din PG
reacia de transpeptidare (sunt inactivate de
penicilin i antibiotice beta-lactamice)
2.
Componente ale sistemului de transport (permeaze)
3.
Proteine ale sistemelor de secreie (I V). Reprezint
cilindre proteice ce traverseaz nveliurile celulei
bacteriene. Asigur transportul proteinelor din
interiorul celulei bacteriene spre exterior
4.
Proteine receptori
5.
Enzime ale lanului respirator


1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Funciile membranei citoplasmatice

Barier osmotic i de permeabilitate selectiv
Asigur transportul activ prin intermediul
permeazelor
Excreia enzimelor hidrolitice, toxinelor, etc
Sediul metabolismului energetic (mezosomi)
Intervine n diviziunea celular (mezosomi)
Implicare n sinteza PG i a fosfolipidelor
Implicare n chemotaxie prin receptori specifici
Asigur transmiterea informaiei din mediul
nconjurtor spre interiorul celulei bacteriene

Evidenierea MCP
1. Microscopia electronic
2. Fenomene de plasmoliz (n
mediu hipertonic retracia
citoplasmei) sau plasmoptiz (n
mediu hipotonic liza celulei,
desprinderea MCP de peretele
celular)

CITOPLASMA
- Necompartimentat
- Lipsesc organitele celulare
- Format din ap (80%), conine nucleoidul,
ribosomi (apr. 20 000 per celul),
incluziuni, plasmide, ioni, enzime, deeuri,
etc.
- Consistena dens (stare de gel) asigur
permanena mediului intern
- pH acid
Funcii: sediul tuturor proceselor metabolice
Evidenierea: prin orice metod de colorare

NUCLEOIDUL BACTERIAN
- Constituit din ADN bicatenar circular, uneori
liniar, plasat liber n citoplasm. ADN este
repliat n bucle i stabilizat prin ARN i
proteine. Fiecare bucl este hiperspiralizat
sub aciunea ADN-girazei i topoizomerazei IV
(se ntlnesc doar la bacterii). Pe ADN sunt
fixate enzime de sintez (ADN - , ARN
polimeraze)
Funcii: dirijaz activitatea celulei (procesele
de sintez, creterea, multiplicarea,
diferenierea celulei, replicarea proprie, etc)
Evidenierea:
- Microscopia electronic
- Metode speciale de colorare (Feulgen)
Feulgen: HCl.aldehida.react. Shiff.culoare
rosie

Plasmidele
elemente genetice (ADN) extracromozomiale,
capabile de replicare autonom. Confer
bacteriei caractere suplimentare. Se transmit
celulelor-fiice la diviziunea bacteriei. Plasmidele
conjugative F se transmit prin conjugare.
Episom - plasmida integrat n cromosom
Tipuri de plasmide:
1. F factor de fertilitate, conjugative (sinteza pililor
F)
2. R rezisten la antibiotice
3. Ent producerea enterotoxinei
4. Hly producerea hemolizinei
5. Col producerea de bacteriocine
Utilizarea practic: n tehnologii de ADN-recombinant

SPORUL BACTERIAN
- reprezint o difereniere celular care
asigur supravieuirea bacteriei n
condiii nefavorabile ale mediului extern.
Bacterii sporogene Bacillus,
Clostridium. Aceste mi/o se prezint sau
sub form vegetativ, metabolic activ,
sau sub form inert metabolic sporul.
Procesul de formare a sporului este
numit sporogenez, sporulare. Este
declanat n special de carene nutritive.

 Stadiile

sporogenezei (durata 36-72 ore)

Stadiul I se formeaz filamentul axial, compus
din ADN
Stadiul II divizarea asimetric a citoplasmei
printr-un sept, formarea presporului, care
conine un filament de ADN. MCP nglobeaz
presporul.
Stadiul III nglobarea complet a presporului,
care este limitat de 2 membrane
Stadiul IV formarea cortexului de PG ntre cele 2
membrane
Stadiile V-VI formarea tunicii proteice la exterior
i maturarea sporului. Uneori se formeaz un
nveli extern suplimentar - exosporiu
Stadiul VII sporul matur este eliberat iar celulamam se dezintegreaz

 Proprietile

sporului
- Inactiv metabolic
- Coninut sczut de ap liber
- Coninut mare (pn la 10%) n dipicolinat de
calciu
- Rezistent la temperaturi i pH extreme,
desicare, radiaii, ageni chimici i fizici
n condiii favorabile sporul germineaz ,
dezvoltndu-se forma vegetativ.
Forma sporului (sferic, oval) i poziia n celul
(central, subterminal, terminal) sunt
caractere utile n identificarea bacteriilor.
Evidenierea sporilor: colorarea dup AUJESZKY

CAPSULA - nveliul extern al unor bacterii.

Reprezint polimeri organici sintetizai n mediul

natural de via al bacteriilor (exemplu: n
macroorganism).
Se disting:
- Capsula adevrat (peste 0,2m), vizibil la
microscopul optic
- Microcapsula, detectat la microscopul electronic
- Capsula flexibil (slime, glicocalix), o reea lax
de fibre polizaharidice, care difuzeaz n mediu.
Nu se evideniaz microscopic. Asigur formarea
biofilmelor bacteriene ansamblu structurat de
celule bacteriene nglobate ntro matrice de
polimeri de origine bacterian, care poate adera
la suprafee inerte (ex.: cateter, stimulator
cardiac, endoproteze, sonde de intubare, etc) sau
esuturi vii.

 Compoziia

chimic: ap i
substane organice (polizaharide,
mucopolizaharide, peptide)
Bacillus anthracis acid glutamic
Neisseria meningitidis, Streptococcus
pneumoniae polizaharide
Streptococcus pyogenes acid
hialuronic

 Funciile
-

capsulei:
Impiedic desicarea bacteriei
Barier de permeabilitate pentru substane
toxice (antibiotice, ioni metalici)
Barier protectoare faa de factori
antiinfecioi (complement, fagocite),
bacteriofagi, protozoare
Rezerv nutritiv
Asigur aderarea bacteriei la substrate
esuturi sau suporturi inerte (placa dentar,
biofilm pe catetere, proteze, instrumente, etc)
Specificitate antigenic de specie sau tip (Ag
K)

 Evidenierea

capsulei
Coloraia Burri-Hinss (metod negativ)
- Pe lam se amestec suspensia bacterian
cu tu de China, se etaleaz, se usuc
- Frotiul se fixeaz cu alcool
- Se coloreaz frotiul cu fucsin apoas
Rezultatul: capsula apare ca un halou
incolor pe fondul negru. Citoplasma
bacteriilor se coloreaz n rou.
Coloraia Romanovski Giemsa (capsula se
coloreaz n roz) coloraie pozitiv a
capsulei

GRANULAIILE DE VOLUTIN
Reprezint polimeri anorganici de
polimetafosfat. Servesc n calitate de rezerv
de fosfai i pot interveni n metabolismul
energetic.
Interesul medical: la agentul difteriei,
Corynebacterium diphtheriae, granulele de
volutin se localizeaz la extremitile celulei,
iar la corynebacterii nepatogene sunt
repartizate neuniform n citoplasm.
La tratarea cu unii colorani bazici granulele de
volutin se coloreaz n alt culoare, de ex. n
rou-violet la colorarea cu albastru de metilen
fenomenul metacromaziei.
Evidenierea: metoda Loeffler, metoda Neisser

FLAGELII
structuri filamentoase proteice, ntlnite la
bacterii, bacili, spirili i spirochete.
Funcii: intervin n mobilitatea bacterian,
reprezint Ag H al bacteriilor.
Structura flagelului:
- Filamentul, structur helicoidal constituit din
fibrile proteice (flagelin) rsucite
- Crligul de articulaie
- Corpul bazal, constituit dintr-un ax rigid i mai
multe inele ce servesc la fixarea flagelului (la
MCP i PC).
Mobilitatea bacteriei este asigurat de rotaia
flagelului (30 70 micrometri/s).

Tipurile de bacterii dup dispoziia

flagelilor
Bacterii monotriche
Bacterii lofotriche (un mnunchi de flageli
la o extremitate)
Bacterii amfitriche (cte un flagel sau un
mnunchi de flageli la fiecare extremitate)
Bacterii peritriche (flageli pe toat
suprafaa celulei)
La spirochete flagelii se plaseaz n spaiul
periplasmic flageli interni,
periplasmatici.

 Evidenierea

flagelilor
I - metode directe
- Microscopia electronic

Coloraia special Loeffler (mordansarea cu

tanin, sruri de aluminiu, fer, apoi colorarea cu
fucsin sau albastru de metilen)

II metode indirecte (studierea mobilitii

bacteriilor)
- Studierea preparatelor native pictur
suspendat sau ntre lam i lamel
(microscopia cu contrast de faz sau pe
fond negru)
- nsmnarea culturii
bacteriene n medii semisolide
(se observ turbiditate)
- Creterea culturii n vl
pe suprafaa mediului solid

 Pilii

comuni (fimbriile) elemente

proteice fine, rigide, scurte
repartizate pe suprafaa celulei
bacteriene G - n special. Sunt
formate din subuniti proteice
identice (pilina), implantate n ME.
Numrul fimbriilor per celul: 1 sute
Funcii: asigur adeziunea bacteriilor
la suprafee inerte, la celule sau alte
bacterii, reprezint antigenul F

 Pilii

conjugativi structuri capiliforme

de natur proteic, prezeni n numr
de 1-10 per celul (numai la
bacteriile ce gzduiesc plasmide
conjugative F).
Funcii: transferul de ADN prin
conjugare, receptori pentru unii
bacteriofagi
Evidenierea pililor: microscopia
electronic