Sunteți pe pagina 1din 87

STRATEGII, PROGRAME I METODE DE

AMELIORARE A ARBORILOR

STRATEGIA DE AMELIORARE
Stabilete direciile i obiectivele principale de ameliorare a caracterelor i
nsuirilor cantitative i calitative ale unei specii, precum i performanele
generale dorite
Prin strategia de ameliorare antamat se are n vedere eficientizarea i optimizarea
procesului de ameliorare. Cercettorii stabilesc i utilizeaz n acest sens mijloace i inte de
ameliorare eficiente n cadrul programelor de ameliorare stabilite. A optimiza n acest caz nseamn
a adapta strategia i programul de ameliorare n funcie de:
- caracteristicile speciei, uneori a unui grup de populaii ale acesteia;
- structura i tipul variaiei genetice;
- modul de motenire a caracterelor importante,
pentru a obine cel mai mare beneficiu per unitatea de timp.
-

Optimizarea strategiei de ameliorare trebuie asigurat la o serie de niveluri:


nmulirea materialului (aplicarea unei intensiti potrivite de nmulire, structura i
mrimea potrivit a populaiei de ameliorare, derularea unui plan pentru meninerea unui
nivel adecvat al diversitii genetice);
metodele de ameliorare (metode adecvate de mperechere, metode de testare i selecie,
durata i mrimea populaiei de testare etc.);
derularea metodelor producere a materialului genetic ameliorat (exemplu: infiinarea de
livezi semincere, clonarea materialului de reproducere etc.)

Strategia de ameliorare trebuie s stabileasc cuantumul ctigului genetic ntr-un anumit


interval de timp (de exemplu ntr-un an), precum i costurile i componentele implicate.
Pentru molid pare a fi favorabil o strategie de ameliorare prin clonarea familiilor full sib,
urmat de selecia pe baza performanelor clonale, n timp ce pentru pinul silvestru pare a fi mai
potrivit o strategie de ameliorare n doi timpi: mai nti o preselecie fenotipic, apoi selecie n
cultur de testare a descendenilor.

G. Namkoong ( genetician forestier american) a propus o modalitate nou de derulare a


strategiei de ameliorare a unei specii = constituirea unui sistem de ameliorare prin populaie
multipl ( Multiple Population Breeding System MPBS) : s nu se lucreze cu o singur
populaie de ameliorare a unei specii, ci cu mai multe subpopulaii mici amplasate ntr-o
gam variat de condiii de mediu din arealul natural sau de cultur al speciei respective.

Obiectivele de ameliorare pot fi aceleai pentru toate subpopulaiile sau pot fi diferite pentru
unele dintre ele.
Motivaia unei astfel de strategii de ameliorare:
La arbori, pe parcursul ciclului lung de derulare a programelor de ameliorare pot surveni
modificri:
- mediogene, care influeneaz ctigul genetic preconizat iniial;
- privitoare la tehnologiile silvice;
- privitoare la obiectivele i prioritile de ameliorare a speciei respective
In felul acesta, MPBS permite:
- s se obin valori specifice fiecrei subpopulaii pentru ctigul genetic de ameliorare,
n funcie de condiiile staionale implicate n locul de derulare a experimentului;
- s se poat reorienta n timp programul de ameliorare pentru unele subpopulaii, ceea
ce presupune, totodat, cheltuieli mai mici, deoarece subpopulaiile de ameliorare sunt
alctuite dintr-un numr mai mic de exemplare dect n cazul unei populaii unice de
ameliorare;
- practicarea seleciei disruptive
Exemplu de aplicare a acestui concept:

In Suedia, pentru molid, pin silvestru, mesteacn etc., s-a stabilit ca


subpopulaiile de ameliorare s fie distribuite n funcie de temperatur i
fotoperiodism conform schemei:

Fiecare subpopulaie = 50 arbori


Numrul = prea mic ? Se consider suficient deoarece:
- o populaie de ameliorare poate fi alctuit din 20 subpopulaii 1000 arbori;
- consangvinizarea care se poate produce la nivelul unei subpopulaii cu N= 50 :
F= 1/ 2N = 1/100 = 0,01 (1%)

Exemplu de strategie de ameliorare via MPBS pentru Pinus radiata, n Noua Zeeland:
= bazat pe constituirea a 7 subpopulaii de ameliorare;
Obiective de ameliorare urmrite:
1. Obinerea de creteri active i trunchiuri cu form bun (ameliorat)
2. Lemn cu rezisten mecanic mare, cherestea cu noduri mici i ramuri dispuse n unghi
mic fa de axul trunchiului
3. Internoduri moderate la lungi, creteri active
4. Creteri active, vtmri reduse provocate de Dothistroma, lemn dens

Strategii pentru populaii avansate de ameliorare:


cadrul general, mrimea populaiei de ameliorare, structura i
managementul strategiei
1. Cadrul general
n multe programe de ameliorare derulate n prezent s-a ajuns la al doilea sau al treilea
ciclu de ameliorare. Ctigul genetic pentru aceste generaii avansate de ameliorare se
prezumeaz a fi mai mare dect cel obinut n prima generaie.

n astfel de situaii, se impune elaborarea unei strategii complete de ameliorare, care


este un plan detaliat care trebuie s cuprind:
Designul (schema strategiei de ameliorare);
Derularea temporal a activitilor;
Logistica necesar pentru activitile planificate
De maxim importan n derularea unei strategii pentru populaii avansate de ameliorare
sunt primele dou aspecte: schema de derulare a strategiei de ameliorare i derularea
temporal a activitilor, presupunnd clarificri privind:
selecia materialului iniial sau din fiecare ciclu de ameliorare;
testarea acestuia;
nmulirea materialului utilizat;
constituirea populaiilor de propagare;
comercializarea varietilor ameliorate genetic;
infuzia de material nou;
stabilirea msurilor necesare pentru conservarea diversitii genetice
conform schemei urmtoare:

Obiectivele unei strategii i ale programului de ameliorare sunt de o mare diversitate, dar
acestea trebuie s asigure, n general:
un ctig genetic pe termen lung pentru cteva trsturi (caractere) de interes silvicultural,
comercial, tehnologic, adaptativ etc.;
meninerea unui nivel optim de diversitate genetic n populaia de ameliorare;
conservarea diversitii genetice a speciei respective;
suficient flexibilitate n schema programului de ameliorare pentru a face posibile
eventualele reorientri determinate de necesitatea incorporrii de noi tehnologii (de
exemplu, s permit folosirea la un moment dat a unor noi biotehnologii);
desfurarea cu eficien economic a tuturor activitilor din strategia de ameliorare astfel
nct s fie posibil recuperarea cheltuielilor n timp (prin comercializarea materialului de
reproducere ori prin asigurarea unui beneficiu echivalent n plan social).
Spre deosebire de ameliorarea multor plante de interes agricol, n cazul speciilor lemnoase
forestiere, ca urmare a derulrii adeseori a unui ciclu de ameliorare pe parcursul a ctorva
ani sau chiar decade, programele de ameliorare sunt mai greu de derulat iar costurile
acestora sunt mult mai mari.

Organizarea i prezentarea strategiei de ameliorare

Pentru a organiza i prezenta o strategie pentru generaii avansate de ameliorare trebuie


conceput i detaliat un plan specific. White et al. (2007) recomand ca acest plan s conin:
justificarea programului de ameliorare;
prezentarea setului general de obiective de ameliorare;
prezentarea stadiului actual al cunotinelor n domeniul respectiv;
explicitarea tuturor aspectelor privind derularea strategiei;
prezentarea detaliat a strategiei pentru un ntreg ciclu de ameliorare;
argumentarea derulrii strategiei pe termen lung pentru un anumit numr de cicluri de
ameliorare;
discutarea planului pentru conservarea resurselor genetice ale speciei;
stabilirea prioritilor de cercetare prin identificarea problemelor aferente acestui aspect

Iat un plan succint de formulare a unei strategii de ameliorare, pe


seciuni (problematici):
Seciunea IIntroducere (date despre instituia ca propune strategia):
(a) Obiectivele generale ale instituiei care propune strategia: produse realizate, piaa
de desfacere existent, specii pentru care s-au realizat strategii de ameliorare n trecut etc.;
(b) Obiectivele de ameliorare rezolvate de n trecut instituia care propune strategia;
(c) Prezentarea unei liste cu lucrrile publicate n domeniu i cu privire la
principalele puncte din strategia de ameliorare care urmeaz a fi derulat
Seciunea a II-aStadiul actual al cunotinelor despre silvicultura, biologia i
genetica speciei n cauz :
(a) Importana speciei i comportarea ei n arealul natural i n afara acestuia n raport cu
condiiile edafice i climatice;
(b) Producia, productivitatea i situaia plantaiilor la nivelul rii;
(c) Situaia regenerrilor, a silviculturii i exploatrii speciei n diferite ri;
(d)Elementele cheie privind biologia speciei: sistematica (taxonomia i hibrizii realizai
cu specii nrudite), biologia reproducerii (nflorirea i biologia polenizrii, sistemul
de mperechere, uurina polenizrii controlate, vrsta maturitii sexuale i producia
de semine), biologia propagrii (capacitatea de lstrire i drajonare, capacitatea de
nmulire prin culturi in vitro), germinaia seminelor i dezvoltarea puieilor;
(e) Cunotinele curente referitoare la genetica speciei, incluznd provenienele i
variaia geografic, estimri ale parametrilor genetici (e.g. heritabiliti, corelaii
genotip x mediu, corelaii age-age);
(f) Prezentarea resurselor genetice descrise n arealul general al speciei, n ri sau de
organisme care au derulat programe genetice, nclusiv materalul genetic ameliorat
produs prin aceste programe.
Seciunea a III-aIpoteze, premise i constrngeri:
(a) Regiunile edafoclimatice majore n care specia va fi plantat (soluri, clima, suprafaa
anual prezumat de a fi rempdurit pentru fiecare regiune);
(b) Date silviculturale pentru fiecare regiune edafoclimatic (pregtirea terenului,
tratamente majore, durata rotaiei);
(c) Biologia nfloririi (vrsta la care se produce nflorirea i cantitatea de flori util
pentru nmulire, dificultatea i costul extragerii polenului, dificultile de realizare a
polenizrii controlate, estimarea numrului de polenizri controlate ce pot fi realizate
ntr-un an i costurile implicate, producia de semine estimat din polenizri
controlate etc.);
(d) Tehnologia propagrii pentru toate tipurile posibile de populaii de producere a
materialului genetic ameliorat (elaborarea planului logistic de nfiinare i gestionare
a livezii semincere i producia de altoaie ori butai estimat);
(e) Obiectivele de ameliorare, inclusiv trsturile int, n ordinea importanei lor,
criteriile de selecie etc.;
(f) Protocoalele pentru testrile genetice, inclusiv tehnicile de msurare, etapele de
selecie a populaiilor de referin pentru a fi folosite ca martor, planificarea
msurtorilor n aceste populaii de referin etc.;
(g) Posibilitatea utilizrii hibrizilor i sursele de infuzie de noi materiale de ameliorare
ncluznd germoplasm nenrudit cu materialele iniiale;
(h) Alte consideraii (orice constrngeri sau implicaii cu impact asupra programului de
ameliorare).
Seciunea a IV-aResurse genetice actuale i programe de ameliorare anterioare
Se vor descrie i caracteriza toate resursele genetice forestiere care vor fi utilizate n
derularea programului de ameliorare.
De asemenea, se vor detalia rezultatele anterioare privind selecii, culturi
comparative existente, activiti de ameliorare, existena i situaia livezilor semincere, a
hibrizilor etc.

Seciunea a V-a- Prezentarea strategiei propriu-zise de ameliorare


Reprezint punctul central al planului de amelioare i prezint detaliile pentru un
ciclu complet de ameliorare, cu justificri pentru fiecare activitate planificat:
(a) Prezentarea populaiei de baz (conturarea complet a fiecrei uniti de ameliorare
care va fi utilizat, a arborilor, clonelor sau alte materiale utile pentru selecie n cadrul
fiecrei uniti de ameliorare);
(b) Selectarea populaiilor ( cte populaii,metodologia de selectare i sursele pentru
orice material utilizat);
(c) Prezentarea populaiei de ameliorare i a testelor, inclusiv marimea i structura
acestora, modalitatea de nmulire, design-ul testelor (numrul de parcele unitare,
mrimea acestora, blocurile, repetiiile), programul de efectuare a msurtorilor;
(d) Prezentarea populaiei de producere a materialului genetic ameliorat i a planului de
desfurare pentru varietile proiectate (de exemplu, livada semincer sau plantaia
mam de butai), cu structura genetic i de teren detaliat;
(e) Planul de infuzie de noi materiale pentru derularea generaiilor avansate de
ameliorare n vederea meninerii unei baze genetice adecvate.
Seciunea a VI-a- Termene (cronologia) de implementare a strategiei de
ameliorare
Prezint detaliat etapele programului de ameliorare, pe ani i n cadrul fiecrui an,
pentru fiecare activitate, pentru ntregul ciclu de ameliorare. Aceast planificare este
util nu numai pentru o ealonare corect a activitilor, ci i pentru cuantificarea
resurselor necesare.
Seciunea a VII-a- Prezentarea aciunilor viitoare (dup primul ciclu de
ameliorare)
Este imperios a se prezenta strategia pe termen lung, i nu doar pentru primul ciclu
de ameliorare, din perspectiva:
(a) Care va fi impactul unor noi biotehnologii previzibile i cum vor fi acestea
incorporate n strategia de ameliorare;
(b) Este strategia suficient de flexibil la schimbri posibile fa de datele prezentate
n seciunea a II-a?
(c) Este aplicabil i n viitor planul discutat anterior privind conservarea genelor i a
resurselor genetice pentru specia respectiv ?
Seciunea a VIII-a Cerine pentru cercetri viitoare
Aceast seciune are menirea de a identifica i propune prioriti pentru proiecte de
cercetare care ar trebui s contribuie la amplificarea ctigului genetic posibil n
momentul formulrii strategiei de ameliorare i pentru eficientizarea programului de
ameliorare. Se va evalua fiecare proiect de cercetare propus n legtur cu:
(a) Probabilitatea de a fi propus i acceptat un astfel de proiect;
(b) Impactul asupra strategiei de ameliorare;
(c) Timpul necesar de implementare a noilor biotehnologii sau aplicaii ale acestor
proiecte;
(d) Costul proiectelor de cercetare propuse
n concluzie, ctigul genetic pe termen lung se bazeaz pe utilizarea seleciei recurente n
programe bazate n special pe determinarea CGC. Aceasta deoarece doar efectele genetice
aditive se transmit la nmulirea sexuat. n cazurile de nmulire prin clonare, descendenii
motenesc att efectele genelor determinate prin aditivitate, ct i prin neaditivitate.

2. Managementul diversitii genetice i al consangvinizrii


Pentru a ilustra impactul ciclurilor multiple de ameliorare asupra diversitii genetice, s
considerm c n fiecare generaie de ameliorare cu familii full-sib este posibil reducerea
cu 50 % a numrului de familii nenrudite. Dac programul ncepe cu 400 uniti selectate
(populaia de baz), numrul maxim de familii full-sib nenrudite care pot fi create este de
200 (cazul n care doi prini sunt folosii pentru a crea o familie). Dup 5 cicluri de selecie,
numrul maxim de familii nenrudite se modific astfel:
4002001005025
Dac unele familii sunt eliminate prin selecie n fiecare generaie, atunci numrul maxim de
familii nenrudite se reduce i mai rapid.
Acest exemplu ilustreaz faptul c, n selecia recurent se poate ajunge la o anumit
acumulare de exemplare care dein un oarecare grad de nrudire. Reducerea diversitii
genetice ca urmare a creterii gradului de nrudire este cuantificat ca o reducere a
efectivului (Ne) populaiei de ameliorare. Ca atare, chiar dac o populaie este meninut la
un efectiv N = 400 n fiecare ciclu de ameliorare, Ne se reduce treptat n fiecare ciclu.
In concluzie, managementul consangvinizrii este problema cheie n dezvoltarea i
implementarea orcrui program de ameliorare n generaii avansate (cicluri de ameliorare).
De aceea se impune:
(a) Demararea programului cu populaii de ameliorare mari;
(b) Structurarea populaiei de ameliorare n subpopulaii (e.g. subpopulaie elit,
populaie principal (subelit) de conservare a genofondului speciei), care sunt
ameliorate cu rate diferite);
(c) Utilizarea de indici de selecie restrictivi care s limiteze numrul de selecii fcute
pentru o familie
Totodat, efectele negative ale utilizrii de descendeni afectai de consangvinizare pot fi
evitate n dou moduri:
(a) Dac ntregul pedigree (i nu doar o parte a acestuia) este meninut din toate
ncrucirile n populaia de ameliorare, ceea ce asigur o baz larg de lucru pentru
a se evita pe ct posibil, pe termen lung, folosirea de materiale nrudite;
(b) Prin sibdividerea populaiei de ameliorare n sublinii (subpopulaii) distincte. n acest
caz, consanvinizarea se manifest n interiorul fiecrei sublinii, dar ncrucirile
pentru plantaiile operaionale sunt restricionate ntre prini aparinnd la sublinii
diferite, care fiind nenrudite genereaz descendeni neconsangvini.
De asemenea, se discut n prezent se fie utilizate chiar i programe de ameliorare
care se se bazeze pe generarea consangvinizrii la nivelul subliniilor populaiei de
ameliorare, urmnd ca materialul operaional de plantare s rezulte n totalitate din
mperecheri ntre genitori din sublinii diferite. O astfel de metod presupune anumite
riscuri, ca de exemplu:
(a) Pierderea vigorii i a fecunditii la nivelul subliniilor, ceea ce ar genera
dificulti n continuarea programului de ameliorare;
(b) Se pot fixa alele cu efecte nefavorabile, respectiv pierzndu-se alele dezirabile.

3. Mrimea i structura populaiei de ameliorare


Determinarea mrimii i structurii populaiei de ameliorare este o problem crucial n
derularea unui astfel de program, nfluennd decisiv ctigul genetic (valoarea de ameliorare). Din
pcate determinarea acestor parametri ai populaiei de ameliorare este afectat uneori i de
subiectivism care decurge din:

(a) Inexistena posibil a unor studii anterioare care s cuantifice parametri implicai n
luarea deciziei, cum este eritabilitatea;
(b) Dificulti determinate de arealul i structura populaiilor de baz de plecare n primul
ciclu de ameliorare (a cror nivel de variabilitate este de multe ori necunoscut sau doar
aproximat);

Mrimea populaiei de ameliorare:


Notaii:
N = numrul total recenzat de exemplare selectate, reinute n populaia de ameliorare
ntr-o generaie de ameliorare;
Ne = mrimea efectiv a populaiei, reprezentnd numrul teoretic de exemplare ce ar
trebui selectate la un anumit nivel de nrudire considerat. Similar, n ultimul timp s-a
introdus parametrul Ns, denumit starea numeric, fiind definit ca Ns = 0.5/f, n care f
reprezint media gradului de nrudire a prinilor n populaia de ameliorare.
Starea numeric Ns este similar mrimi efective a populaiei Ne n ceea ce
privete cuantificarea pierderii de diversitate genetic ce se produce inevitabil n
derularea programelor de ameliorare prin utilizarea de populaii nchise (= fr infuzii
corespunztoare de germoplasm), deoarece Ns i Ne au valori mai mici dect N
Ne i Ns pot fi interpretate ca ca efectivul unei populaii neconsangvinizate n care
toate exemplarele selecionate sunt nenrudite. Astfel, dac N = 300 i Ns = 150, efectivul
relativ este Ns/N = 0.5, rezultnd c dup analiza gradului de nrudire rmne o populaie
de ameliorare cu efectivul redus la jumtate fa de efectivul total recenzat iniial.
Recomandri privind efectivul populaiei de ameliorare
pe baza studiilor teoretice n domeniu
Recomandrile discutate pornesc de la urmtoarele ipoteze privind derularea
programului de ameliorare:
1. Caractere ameliorate controlate de gene aditive (deci, fr dominan sau efecte
epistatice);
2. Selecie fenotipic n mas (deci, nu cazuri de selie de famili ori cu index de
selecie);
3. Un locus influeneaz un caracter sau mai multe nelincate;
4. Sistem de imperechere balansat (prin funcionarea panmixiei = imperechere
liber ntre toi arbori recenzai);
5. Populaie inchis (fr infuzie de material nou dup o generaie de ameliorare);
6. Model identic de mperechere i aceleai criterii de selecie pentru toate
generaiile);
7. Selecie pentru un singur caracter
Exemplu:
-

Kang (1979): Cadrul de pornire:


selece n mas pentru 100 loci nelincai, aditivi, cu h2 = 0,2;
mrimea iniial a populaiei de ameliorare s asigure probabilitatea de 95% de fixare
a alelelor dezirabile dup un numr infinit de generaii de ameliorare i selecie.
Rezult:
(a) cele mai mari efective ale populaiilor n cazurile n care trebuie s fie fixate alele rare
utiliznd indici de selecie de valori mici;

(b) valori mici ale efectivelor populaiilor de ameliorare n cazurile alelelor comune
(frecvente) sau chiar pentru cele cu frecven intermediar
De exemplu:
dac q = 0.5 Ne = 6 la 18);
dac q = 0.25 la 0.5 Ne = 10 la 40;
dac q = 0.01 (alel rar) Ne = 300 la 1000

Propuneri pentru valor ale lui N (efectivul iniial de arbori recenzai n populaia de
ameliorare (pentru populaia de baz a unui program cu generaii avansate de
ameliorare) dup White et al., 2007
Sursa bibliografic
Specia
Programul
de
N
ameliorare
Eucalyptus globulus
CELBI Portugalia
300 Cotterill et al., 1989
Eucalyptus globulus
APM Australia
300 Cameron et al., 1989
Eucalyptus nitens
Eucalyptus regnans
Euclyptus grandis
ARACRUZ Brazilia
400 Camphinos i Ikemori, 1989
Eucalyptus urophylla
Picea abies
Suedia
1000 Rosvall et al., 1998
Picea glauca
Canda
450 Fowler, 1986
Picea mariana
Canada
400 Fowler, 1987
Pinus banksiana
SUA
400 Kang,1979
Canada
200 Klein, 1987
Pinis caribea
Australia
250 Kanowski i Nikles, 1989
Pinus elliottii
CFGRP SUA
900 White et al., 1993
CFGRP SUA
360 White et al., 2003
WGFTIP- SUA
800 Lowe i van Buijtenen, 1986
Pinus radiata
STBA- Australia
300 White et al., 1999
FRI- Noua Zeeland
350 Shelbourne et al., 1986
Pinus taeda
NCSU- SUA
160 McKeand i Bridgwater,
WGFTIP- SUA
800 1998
Lowe i van Buijtenen, 1986
Populus tremuloides
Canada
150 Li, 1995
Pseudotsuga menziesii
BC- Canada
350 Heanan, 1986
Salix spp.
SLU- Suedia
200 Gullberg, 1993
Tsuga heterophylla
SUA i Canada
150 King i Cartwright, 1995
Concluzie: Dei n unele situaii Ne pare a fi suficient la valori de 20 40, nu se
recomand astfel de valori ca urmare a faptului c n generaii succesive de ameliorare se
ajunge la consangvinizare ridicat. De aceea, n general, mrimea populaiei pare a fi
asiguratoare la valori de 300 400. Pentru alele rare sunt necesare efective mai mari ale
populaiei de ameliorare, de circa 1000 exemplare

Structura populaiei de ameliorare:


Muli autori recomand subdividerea populaiei de ameliorare n dou grupuri:
1. Nucleul elit al populaiei: s cuprind exemplarele cu cele mai valoroase caractere (s
reprezinte circa 10 % din efectiv ( dac N=300 efectivul de 30 al nucleului elit);
2. Populaia principal = restul populaiei (90 %) din efectivul total

Diferite modele de structur a populaiei de ameliorare sunt sugerate n figura


urmtoare:
a. Exemplare elit i populaie principal

b. Program de ameliorare cu populaii multiple (de exemplu, trei subpopulaii MP1, MP2 i MP3 - de mrimi diferite)

n exemplul anterior, cele trei subpopulaii conin i exemplare comune

c. Grupuri de ameliorare - GA (sublinii) de mrime egal

Subliniile, caracterizate prin genofonduri proprii, au utilitate n evitarea consangvinizrii la


descendenii ameliorai genetic.
Un numr mare de sublinii sunt necesare n programele de ameliorare care implic
polenizare liber prin vnt. De exemplu, n cele mai multe cazuri de livezi semincere se utilizeaz
ntre 10 i 30 de sublinii (grupuri de ameliorare), fiecare sublinie avnd ntre 20 i 40 exemplare.

PROGRAME DE AMELIORARE
Programul de ameliorare stabilete modul concret de obinerere a materialului genetic
ameliorat, presupunnd:
-

stabilirea metodei sau a complexului de metode de ameliorare de aplicat;


stabilirea etapelor de lucru i a materialului experimental necesar, respectiv de produs

Ca atare, programul de ameliorare include activitile i operaiile concrete, n derularea lor


logic, pentru obinerea varietilor ameliorate genetic, care urmeaz a fi utilizate pentru lucrri
de mpduriri i rempduriri n scopul creterii valorii economice, adaptative i/sau sociale a
pdurilor.
n acest context, programul de ameliorare red tehnologiile genetice care vor fi utilizate
pentru producerea varietii/varietilor ameliorate, fiind componenta de baz a derulrii
strategiei de ameliorare.
Pornind de la vasta variabilitate deinut de obicei de speciile lemnoase forestiere, un
program de ameliorare urmrete schimbarea frecvenei genelor la varietile ameliorate n
favoarea celor dezirabile.

Scopul i structura programelor de ameliorare


Ameliorarea arborilor se bazeaz pe aplicarea principiilor genetice n beneficiul produciei
de mas lemnoas (cantitativ i calitativ), sntii pdurilor i al sustenabilitii plantaiilor
forestiere.
Orice program de ameliorare intete s obin varieti ameliorate ntr-o manier
profitabil, prin maximizarea ctigului genetic pe unitatea de timp, cu costuri ct mai
mici posibile.
Programe genetice la scar mai mare au nceput s se deruleze din anii 1950, la diferite
specii. In cele mai multe cazuri, aceste activiti se desfoar n cadrul unor departamente
speciale, de ctre geneticieni i personal calificat. Un program de ameliorare poate fi elaborat
de:
- o instituie specializat de stat sau privat;
- o agenie guvernamental;
- o cooperativ (cu participare public i privat) (astfel de cooperative funcioneaz, de
exemplu, n Australia, Noua Zeeland, SUA etc.)

Prima decizie care trebuie luat este de a alege specia sau speciile de utilizat n crearea
plantaiilor, n funcie de condiiile de mediu din arealul respectiv. Abia apoi se trece la
elaborarea programului de ameliorare.

Trsturile eseniale ale unui program de ameliorare


1. Proiectarea clar a obiectivelor, capabilitilor ( = resurselor disponibile) i a cerinelor
de materiale forestiere de reproducere
2. Cunoaterea n detaliu a silviculturii, biologiei i geneticii speciei int. De exemplu:
a. Pentru silvicultura speciei, gama de condiii staionale i de tipuri de pdure din
zonele unde trebuie efectuate plantaii i diferitele tratamente culturale aplicabile;
b. Pentru biologia speciei, cunoaterea particularitilor de reproducere i a
posibilitilor de butire, altoire, de polenizare controlat etc.;
c. Pentru genetica speciei, estimarea principalilor parametri genetici de importan n
ameliorare: eritabiliti, corelaii genetice, interaciunea genotip x mediu etc.
3. O strategie de ameliorare serioas trebuie s prevad implementarea pe termen scurt (5
ani) i termen lung (15 ani) a programului de ameliorare.
4. Programul trebuie s fie bine coordonat de o persoan competent, cu o echip adecvat
lucrrilor de efectuat, iar bugetul programului s fie stabil i acoperitor. Un buget prea
mare ntr-un an, dar prea mic n alt an nu asigur o derulare corespunztoare a
activitilor planificate.
5. S fie asigurat propagarea eficient i la o calitate ridicat a materialului de
reproducere ameliorat, pentru a nu fi erodat ctigul genetic obinut anterior. n funcie
de specificul biologic al speciei, propagarea n mas se poate produce prin puiei, butai
nrdcinai sau puiei produi prin culturi in vitro.
6. Meninerea unei baze genetice largi este o problem esenial n programele de
ameliorare. n viitor pot aprea produse noi, modificri climatice sau chiar n sol,
duntori, tehnologii etc. care reclam varieti diferite pentru ctiguri genetice mari.
Flexibilitatea pentru toate aceste provocri-modificri viitoare depinde de mrimea bazei
genetice disponibile. Acest aspect trebuie rezolvat n programul de ameliorare prin msuri
specifice de conservare a genelor.
7. Dac este necesar, programul de ameliorare trebuie s fie susinut prin proiecte de
cercetare. Prioritile de cercetare difer de la program la program i trebuie s includ
att cercetare fundamental ct i aplicativ, asociate cu ameliorarea arborilor.

Ciclurile de nmulire n programele de ameliorare


Selecia, mperecherea i alte activiti ale celor mai multe programe de ameliorare pot fi sumarizate
n modelul conceptual denumit ciclu de nmulire, ca parte a ciclului de ameliorare, conform
schemei urmtoare:

Activitile centrale ale unui ciclu de inmulire sunt: selecia i imperecherea. Ciclul este
recurent, n sensul c urmtorul ciclu ncepe dup ce cel anterior a fost finalizat.
Numrul de ani ntre etapele de selcie din dou cicluri succesive poart denumirea de ciclu
sau intervalul dintre generaiile de ameliorare.
Selecia asupra descendenilor din prima generaie de ameliorare este denumit selecia
generaiei secunde.

Populaia de baz
Populaia de baz a unui anumit ciclu de ameliorare conine toi arborii utili care ar putea fi
selectai. Populaiile de baz mari pot conine chiar cteva mii de arbori cu genotip distinct. La
iniierea unui program de ameliorare, populaia de baz conine arbori selectai din arborete
naturale sau, posibil, din plantaii din zona de mperechere.
Zona de mperechere include setul de ecosisteme din arealul pentru care se va produce
varietatea ameliorat genetic.
Populaia de baz a primului ciclu de ameliorare pentru specii exotice presupune adeseori
selecie n:
1. Arealul natural al speciei;
2. Rasele locale constituite n plantaii existente n ara n care se deruleaz programul de
ameliorare;
3. Culturile comparative din ara n care se deruleaz programul sau din alte ri

Populaia selectat
Fiecare ciclu al ciclului de mperechere ncepe cu selecia exemplarelor din populaia de
baz. n cele mai multe cazuri, din populaia de baz vor fi selectai, rezultnd populaia selectat,
ntre 100 i 1000 de arbori din zona de mperechere.

n primul ciclu de ameliorare, arborii sunt selectai din populaia de baz numai dup
caracterele lor fenotipice superioare aparente = selecie n mas.
Generaiile avansate de populaii de baz se constituie pe baz de pedigree, prin selecia
progeniturilor - candidat cu nsuiri superioare.
n fiecare ciclu, populaia selectat conine adesea cteva sute de exemplare, ceea ce
conduce la modificarea frecvenei alelelor fa de populaia de baz.

Populaia de nmulire
De regul, nu sunt inclui n imperecheai toi arborii din populaia selectat. Cei care sunt
utilizai efectiv pentru a fi mperecheai formeaz populaia de nmulire. Aceast regul poate fi
neleas din urmtoarea perspectiv: din mperecherea ntre doi genitori rezult i descendeni mai
puin valoroi, care nu justific a fi folosii n continuare la mperecheri n vederea obinerii
varietilor ameliorate.
Dac toi arborii populaiei selectate s-ar folosi ca genitori pentru a crea descendenii pentru
urmtoarea populaie de baz (ciclul urmtor), atunci populaia de nmulire viitoare ar fi identic cu
precedenta, ceea ce nu ar asigura progresul genetic.

Populaia de propagare
Este populaia care asigur multiplicarea varietii genetice ameliorate create n cadrul
ciclului de ameliorare. Mai este denumit populaie de difuzare.
Un exemplu de populaie de propagare este o livad semincer

Infuzia n programul de ameliorare de material din populaii externe


Are rolul de a majora variabilitatea n populaiile de baz avansate ale programului de
ameliorare sau de a include n program arbori cu trsturi particulare.
Exemple:
1. Efectuarea de noi selecii n populaii naturale i/sau n plantaii, pentru a lrgi baza de
selecie ( exemplu: pentru ameliorarea speciei Pinus taeda, n sud-estul SUA s-au
selectat i introdus n programul de ameliorare n derulare nc 3300 de arbori);
2. Efectuarea de noi selecii pentru a crete frecvena genelor favorabile pentru un caracter
specific (exemplu: pentru Pinus elliottii, n sud-estul SUA au fost infuzai aproape 500
arbori neafectai de rugina veziculoas Cronartium quecuum f.sp. fusiformae, pentru a
crete frecvena alelei rezistente n populaia de mperechere);
3. Utilizarea de materiale selecionate din alte zone de mperechere ale speciei respective
(exemplu: selecia pentru Pinus taeda de material din Carolina de Nord pentru a fi
utilizat n programul de ameliorare derulat n Arkansas, de la circa 2000 Km distan);
4. Obinerea de hibrizi intra- sau interspecifici i infuzia acestora n populaia de
mperechere pentru a crete diversitatea genetic (exemplu: programul de ameliorare din
Africa de Sud pentru Eucalyptus grandis);
5. Obinerea de materiale de infuzie de la alte organisme (instituii) care deruleaz
programe de ameliorare la specia respectiv (exemplu: schumburile de materiale de
Eucalyptus grandis efectuate ntre diverse ri care lucreaz cu aceast specie).

Testarea genetic
Testele se fac adeseori n locaii n diferite condiii staionale n pdure, dar se pot
efectua testri i n pepiniere, sere, camere de cretere etc.
Testrile urmresc:
a. Evaluarea calitii genetice a materialului obinut dup un ciclu de ameliorare;

b. Estimarea parametrilor genetici (eritabiliti, corelaii genetice, corelaii ntre


caractere, interaciunea genotip x mediu);
c. Obinerea unei noi populaii de baz din genotipuri superioare pentru a constitui un
nou ciclu de ameliorare;
d. Cuantificarea ctigului genetic obinut prin programul de ameliorare, pe cicluri ale
programului

Ctigul genetic i valoarea economic obinut prin


programul de ameliorare
Efectul programului de ameliorare este denumit ctig genetic sau progres genetic i se
noteaz cu G:

(1)
-

n care:

GC = ctigul genetic la nmulirea prin clonare;


H2 = eritabilitatea n sens larg (dependent de variana genetic total;
S = p : difereniala de selecie (diferena dintre media n populaia selectat - i media
n populaia de baz parental - p;
i = intensitatea de selecie: i = S/ P;
P = deviaia (abaterea) fenotipic standard (rdcina ptrat din variana fenotipic
msurat pentru caracterul respectiv)
(2)

GC = H2 S = i H2 P ,

GA = h2 S = i h2 P ,

n care:

GA = ctigul genetic la nmulirea sexuat;


h2 = eritabilitatea n sens restrns (dependent de variana genetic de aditivitate)

Ctigul genetic se evalueaz n mod obinuit pentru:


-

diferite stadii (cicluri ) ale programului de ameliorare;


diferite populaii ( de baz BP, selectate SP, respectiv de propagare - PP

Exist trei metode de estimare a ctigului genetic:


1. Ctigul preconizat, calculat cu formulele anterioare;
2. Ctigul realizat, obinut prin compararea efectiv a valorii medii a caracterului n
cauz la varietatea ameliorat cu media caracterului n populaia de baz;
3. Ctigul simulat, obinut prin simularea valorilor varietilor ameliorate sau
neameliorate, ori cu grade diferite de ameliorare, pe modele rulate pe calculator.

Modaliti de mperechere pentru


generaiile avansate de ameliorare
O problem esenial a programelor de ameliorare este aceea a reducerii ciclului de
ameliorare. Se pot utiliza n acest sens dou procedee:
1. Practicarea seleciei timpurii (la vrste mici), n culturi comparative efectuate n pdure
sau n condiii artificiale de mediu (sere, camere de cretere etc.);
2. Inmulirea accelerat:
a. n arboretumuri n teren descoperit, prin stimularea formrii rapide a coroanelor i
accelerarea creterilor, astfel nct arborii s fructifice la vrste mici (tehnica include
spaiu mare exemplu 5 x 5 m ori i mai mult, fertilizare, irigare, mobilizarea solului);
b. n arboretumuri n sere, cu efect de inflorire timpurie;
c. Aplicarea de tratamente hormonale i cu alte chimicale specifice pentru stimularea
nfloririi
d. Tratamente de stresare (secet, temperaturi ridicate fr a determina afectarea grav
a exemplarelor)
e. Altoire (punerea n valoare a fenomenelor de ciclofizis, topofizis i perifizis)
Modaliti de mperechere pentru crearea generaiei viitoare:
a. Unele programe de ameliorare utilizeaz metoda de mperechere prin polenizare
liber (open pollinated designs);

b. Alte programe se bazeaz pe generarea de familii full sib i variante


complementare de mperechere pentru gestionarea populaiei de ameliorare
Metoda de mperechere prin polenizare liber pentru gestionarea populaiei de
ameliorare
1. Familiile rezultate din polenizare liber sunt plntate n culturi comparative pentru
a forma populaia de baz a generaiei k;
2. n cultura comparativ se fac noi selecii pentru a selecta cei mai buni arbori din
cele mai bune familii;
3. Seminele produse de arborii astfel selectai, prin polenizare liber, sunt recoltate,
din ele rezultnd populaia de baz a generaiei k+1;
4. Dup aceste selecii, unul sau mai multe din testele din generaia k pot fi
convertite n livezi semincere
Exemplu: Ameliorarea speciei Eucalyptus grandis bazat pe polenizare liber

Metoda familiilor full sib i a variantelor complementare de mperechere


pentru gestionarea populaiei de ameliorare

1.
2.
3.
4.

Ciclul presupune:
Selecie n populaia generaiei k i mperecheri controlate rezultnd familii full-sib;
Aceste familii sunt plantate n culturi comparative care vor forma populaia de baz a
generaiei k+1;
Selecia arborilor superiori din familiile valoroase, rezultnd populaia de mperechere a
generaiei k+1;
Din aceste mperecheri va rezulta populaia de baz a generaiei k+2
Familiile full-sib sunt mai valoroase dect polenizarea liber deoarece:
a. Se poate realiza un control total de pedigree;
b. Se obine ctig genetic mai mare per ciclu de ameliorare;
c. Se pot identifica familiile care au capacitate specific de combinare (CSC) pozitiv;
d. Se pot capta, de asemenea, efectele genetice aditive asociate cu CGC

Metode complementare de design de mperechere:


a. mperechere n sistem balansat: arborii din populaia de ameliorare sunt n acelai numr
tot timpul, rezultnd progenituri n numr egal
b. mperechere n sistem nebalansat: arborii din populaia de ameliorare se mperecheaz n
numr diferit, n diferite etape ale programului (de-a lungul ciclurilor succesive)
Clonarea populaiilor de baz
Reprezint o alt metod de nmulire, prin care se conserv genotipurile existente

Concluzii generale privind analiza economic a programului de


ameliorare:
1. Un cost redus al cheltuielilor de capital (uneori denumit rata de discount) adeseori mrete
eficiena programului de ameliorare. Ameliorarea arborilor este o investiie pe termen lung,
iar beneficiile acesteia nu se obin dect dup muli ani.
2. Rata real pozitiv a inflaiei pentru lemnul comercializat sau pentru alte bunuri i servicii
mrete valoarea economic a programului de ameliorare.
3. Programele de nfiinare a plantaiilor cu o rat mare de rempdurire (multe hectare plantate
anual) sunt benefice pentru derularea programelor de ameliorare.
4. Creterea ctigului genetic sau descreterea costurilor programului de ameliorare contribuie
mpreun la eficientizarea acestor programe.
5. Ameliorarea arborilor este cea mai favorabil investiie pentru creterea produciei de mas
lemnoas.
6. Ctigul din ameliorarea arborilor este cumulativ de-a lungul generaiior, ceea ce aduce o
mai mare rentabilitate dect dac s-ar reduce perioada de rotaie (ciclu de producie mai
mic).
7. Intr-un ciclu de ameliorare, orice aciune care se soldeaz cu ctig genetic la costuri reduse
poate avea un efect economic uria

Exemple de programe de ameliorare:


A. Primul ciclu al programului de ameliorare pentru Pinus taeda n sudestul SUA
1. Scopul i domeniul de aplicare este de a obine varieti ameliorate pentru companiile
forestiere i proprietarii de pdure din 9 state din estul rului Mississippi, n sud-estul
SUA. Acest mare program, care a demarat n anul 1950, este derulat de o cooperativ
format din 20 companii private i agenii ale statelor implicate, sub coordonarea North
Carolina State University. Suprafaa anual de plantat n zona de ameliorare este de circa
350 ha
2. Populaia de baz a primului ciclu este constituit din arborete naturale de P. taeda
divizate n peste 30 de zone locale de mperechere. Fiecare din aceste zone include unul
sau mai muli membrii ai cooperativei.
3. Populaia selectat a primului ciclu conine un numr variabil de arbori secionai n
zonele de mperechere. Selecia n mas s-a fcut pentru exemplare cu fenotip superior
care au manifestat: creteri active, tulpini drepte, stare de sntate bun i caractere
valoroase pentru ramuri i coroane. n fiecare zon de mperechere s-au selectat 25 la 35
arbori valoroi. n total s-au selectat 1050 arbori.
4. Populaia de propagare a primului ciclu include dou categorii n fiecare zon de
mperechere:
a. Livad semincer de clone instalat n anul 1960 prin altoire: fiecare participant n
cooperativ a introdus n livada semincer 25 la 35 variante selectate;
b. Livad semincer clonal generaia 1,5 instalat n anul 1970 cu clone top selectate n livada
generaia 1. Seminele recoltate din aceste livezi semincere sunt produsul primului ciclu de
ameliorare i sunt utilizate pentru a produce puiei pentru rempduriri.
5. Imperecherea i testarea n primul ciclu au preupus: polenizare controlat n model
factorial incomplet (sistem tester), n care fiecare cooperator a mprit cei circa 30
arbori selecionai n dou grupuri cu circa 5 arbori din care s-a recoltat polen, cu care au
fost fecundai 25 arbori folosii ca genitori femeli. Au rezultat astfel 125 de familii per
cooperator, care au fost introduse n 6 culturi comparative multistaionale (cte dou

culturi comparative create la intervale de cte trei ani). n aceste culturi comparative s-au
efectuat msurtori la vrsta de 4, 8 i 12 ani, vrste care reprezint 17%, 33% i
respectiv 50% din rotaia stabilit = 24 ani).
6. Generaia avansat de ameliorare este acum la al treilea ciclu.
7. Infuzia de noi materiale: s-au introdus peste 3000 de noi arbori selectai n populaii
neameliorate

B.

Figura 149 - Program de ameliorare a arborilor n SUA (Carolina de Nord) bazat pe producerea de
varieti sintetice, cu practicarea seleciei recurente i constituirea de generaii
avansate de livezi semincere

C.

Fig.143 - Strategia i etapele programului de ameliorare n vederea crerii de varieti sintetice: S semine pentru mpduriri i rempaduriri; B - butai, - var.mul. - varietti multiclonale; A- arbori plus;
Liv.sem.s.prov. - livad semincer din semine de proveniene; A surse sem. - arborete surse de semine

(dup

N a n s o n, 1986 - din Lucu Dnil et Lucu - Dnil, 1998)

D.

METODE DE AMELIORARE A ARBORILOR


1.METODE CLASICE
1.1
-

SELECIA
fenotipic
genotipic
individual
n mas
de proveniene, de familii full-sib sau half-sib, de clone etc.

Varieti create prin selecie:


- populaionale
- sintetice
- clonale
1.2. MUTAGENEZA provocarea de mutaii i selecia
mutantelor valoroase
1.3 HIBRIDAREA crearea de varieti hibride
1.4. CONSANGVINIZAREA crearea de varieti linii pure fixate genetic ( foarte utile n
domeniul ameliorrii rezistenei fa de duntori biotici)
2. METODE MODERNE I ALE INGINERIEI GENETICE
2.1 Micropropagarea somatic in vitro selecia
variaiilor somaclonale
2.2 Androgeneza i ginogeneza experimental
2.3 Hibridarea parasexuat fuzionarea de protoplati
2.4 Crearea de organisme transgenice transferul interspecific al genelor
2. 5 Embriogeneza somatic
ALEGEREA METODEI DE AMELIORARE = n funcie de:
-

nsuirile biologice ale speciei: mod de reproducere, vrsta maturitii sexuale,


vechimea speciei ( nivelul de homeostazie genetic), forma i mrimea arealului,
plasticitatea adaptativ etc.
obiectivele de ameliorare urmrite
resursele materiale i umane existente

Nr. de caractere urmrite (de ameliorat) simultan?

OBIECTIVELE AMELIORRII ARBORILOR:


- cantitative (n legtur cu producia de mas lemnoas);
- calitative;
- creterea rezistenei fa de factori biotici vtmtori;
- creterea rezistenei fa de factori abiotici vtmtori;
- obiective speciale ( de exemplu: ameliorarea produciei de fructe, obinerea de cantiti mai
mari de substane tanante, vitamine etc.)

AMELIORAREA PRIN SELECIE

Selecia fenotipic:
selecia arborilor superiori la aplicarea operaiunilor culturale i a tratamentelor
arbori i arborete surse identificate pentru recoltarea seminelor
rezervaii de semine netestate
livezi semincere netestate
selecia varietilor hibride i clonale netestate

SELECIA FENOTIPIC N MAS


Concepte generale i aplicabilitate
Selecia fenotipic n mas se deruleaz dup definirea populaiei de baz pentru o
anumit unitate de ameliorare; deci n populaia de baz: toi arborii din populaia de baz sunt
candidai poteniali pentru selecie, n vederea includerii n programul de ameliorare pentru a
constitui populaia de mperechere.
Unii dintre arborii populaiei selectate, sau toi, vor fi ulterior folosii n dou scopuri
distincte:
(1)
Includerea n populaia de propagare pentru a produce material utilizabil direct n
lucrri de rempduriri (= surse identificate, conf. legii 161/2004);
(2)

Includerea n populaia de mperechere a programului de ameliorare


Scopul ambelor utilizri este de a determina obinerea de ctig genetic.
Problemele care apar (se cer lmurite) n procesul de selecie sunt de genul:
(1) Care sunt i cte caractere vor sta la baza seleciei n mas ?
(2) Ce accent se va pune pe fiecare caracter urmrit ? ... rezult necesitatea ordonrii lor ca
importan;
(3) Care este vrsta potrivit la care s se fac selecia pentru caracterele int ?
(4) Ci arbori vor fi nclui n populaia selectat ?
(5) Care este metoda cea mai bun de selectare ? ... deci cum se cuantific arborii dup
fiecare caracter urmrit;
(6) Care este mrimea ctigului genetic ateptat pentru fiecare caracter ?
Principiu de baz de avut n vedere: selecia nu creaz noi gene, ci modific frecvena lor
n favoarea celor dezirabile, reinnd n populaia selectat exemplare care dein
combinaii superioare de alele.

O anumit incertitudine determinat de practicarea seleciei n mas: nu putem ti dac


exemplarele selectate i datoreaz fenotipul superior unei/unor combinaii genotipice
aparte.
Procesul general al seleciei fenotipice trebuie s se deruleze dup urmtorul model:
(1) Definirea pentru nceput a caracterelor de evaluat: se recomand un numr
maxim de 3-5 caractere de mare prioritate n ameliorare, care ar fi bine s manifeste
eritabilitate ridicat;
(2) Msurarea caracterelor fenotipice la arbori din populaia de baz. n prima
generaie se se fac msurtori la arbori candidat n populaii naturale sau n plantaii;
n generaiile avansate aceste msurtori se fac n culturi comparative de clone, sau
n familii rezultate din polenizare liber, half-sib ori full-sib
(3) Analiza datelor. La selecia n mas, aceast analiz se face doar pe baza
msurtorilor fenotipice individuale ale arborilor selectai, n timp ce n generaiile
avansate, n afar de msurtorile fenotipice individuale se utilizeaz i date din
culturile comparative cu rol de testare.
Se utilizeaz o metod de lucru denumit BLUP (Best linear unbiased
prediction = cea mai bun predicie liniar imparial), pe baza creia se
prognozeaz valoarea genetic a fiecrui arbore candidat. De exemplu, dac se se
face selecia dup volum a arborilor: se msoar volumul a cte 10 arbori plus n 80
de arborete de vrste diferite = total 800 arbori. Volumul fiecrui arbore = i . Este
necesar o corectare a acestei valori cu influenele vrstei i staiunii (condiiilor de
mediu), rezultnd: i = f (vrst, index staiune = un ceficient de evaluare a
efectului staiunii), n care:
i = volumul preliminat al arborelui i n funcie de vrst i indexul staiunii
(valoarea atribuit efectelor staiunii).
O modalitate mai eficient de predicie a valorii genetice a fiecrui arbore candidat este dat
de relaia:

i = h2i (yi - ),
n care:
i este valoarea genetic prezumat pentru arborele i;
h2i reprezint eritabilitatea adecvat arborelui i (se poate modifica pentru arborii msurai n
staiuni diferite);
yi este valoarea msurat pentru caracterul analizat la arborele i;
este media valorii respective la arborii msurai n diferite condiii staionale
Toate aceste calcule sunt efectuate cu un pachet informatic specific.
(4) Calcularea indicelui de selecie (criteriului de selecie) pentru fiecare arbore.
Dac sunt 1000 de arbori candidai pentru selecie i la fiecare arbore se msoar dou
caractere fenotipice 2000 de valori genetice de prezumat.
Pentru cele dou caractere trebuie indicat importana fiecruia, prin atribuirea unei
valori relative w (de exemplu = w2 = 0.5 pentru fiecare, dac se consider c sunt la
fel de importante cele dou caractere). Rezult:
Ii = w1 i1 + w2 i2 n care:
Ii este indexul de selecie pentru arborele i;
w1 i w2 sunt ponderile atribuite caracterelor msurate la fiecare arbore;
i1 i i2 sunt valorile genetice prezumate pentru cele dou caractere

(5) Ordonarea i selectarea arborilor candidat


Arborii cu ceele mai mari valori genetice prezumate sunt identificai i vor forma
populaia selectat.
(6) Calcularea ctigului genetic ateptat pentru fiecare caracter
GC = H2 S = i H2 P ,
-

GC = ctigul genetic la nmulirea prin clonare;


H2 = eritabilitatea n sens larg (dependent de variana genetic total);
S = p : difereniala de selecie (diferena dintre media n populaia selectat - i media
n populaia de baz parental - p;
i = intensitatea de selecie: i = S/ P;
P = deviaia (abaterea) fenotipic standard (rdcina ptrat din variana fenotipic
msurat pentru caracterul respectiv)
GA = h2 S = i h2 P ,

n care:

n care:

GA = ctigul genetic la nmulirea sexuat;


h2 = eritabilitatea n sens restrns (dependent de variana genetic de aditivitate)
(7) Etichetarea i prezervarea tuturor arborilor selectai.
Localizarea exact a arborilor pe teren poate fi fcut i cu un GPS

Selecia n mas n prima generaie a programului de


ameliorare
Este denumit i selecie fenotipic. Zobel i Talbert (1984) au propus urmtorii termeni:
- Arbore candidat: oricare din arborii din populaia de baz;
- Arbore plus sau arbore selectat: cel care este inclus n populaia selectat, avnd trsturi
fenotipice superioare;
- Arbore elit: arborele plus pentru care s-a dovedit valoarea genetic superioar
Factori care influeneaz ctigul genetic la selecia n mas:
1.

Intensitaea seleciei
a.
b.

2.

Cu ct este mai mare, cu att ctigul genetic are valoare mai mare.
Cu ct crete numrul de caractere dup care se face selecia simultan, intensitatea
seleciei pentru fiecare caracter scade. De aceea, nu este eficient ameliorarea simultan
pentru mai mult de 3 la 5 caractere.
Eritabilitatea.

a.

Amelioratorii pot exercita influene mai mari asupra intensitii de selecie dect a
eritabilitii.
b. Ctigul genetic este direct proporional cu mrimea eritabilitii
3.
Deviaia (abaterea) standard.
Influeneaz, de asemenea, direct mrimea ctigului genetic. Selecia n populaii cu
variabilitate mare este mai profitabil dect n populaii care tind spre uniformitate.

SELECIA N MAS INDIRECT


Are loc atunci cnd exemplarele sunt selectate dup un anumit caracter (denumit caracter
msurat y ) ctigul genetic de ameliorare este proiectat pentru un alt caracter (denumit
caracter int). Calcularea ctigului genetic se face n acest caz prin luarea n considerare
a corelaiei(rG, ty) dintre caracterul msurat i caracterul int (t = de la engl. target
trait):
GC,t = iy rG, ty Hy Ht P,t
i
GA,t = iy rA, ty hy ht P,t

pentru selecia indirect la nmulire prin clonare


pentru selecia indirect la nmulire sexuat

Selecia simultan pentru mai multe caractere


Dac se are n vedere ameliorarea simultan pentru dou sau mai multe caractere, mai nti
trebuie definit parametrul cumulativ denumit obiectiv de ameliorare - Ti
Ti = w1A1i + w2A2i +..... wm A2i

n care:

w1, w2, ...wm reprezint ponderea economic (ori social) dat fiecrui caracter (ponderile
nsumate = 1);
A1i, A2i... A2i reprezint valoarea genetic pentru fiecare caracter

Variante de selecie simultan pentru mai multe caractere:


1. Selecia simultan prin sacrificare independent
(engl. independent culling)
Presupune selecia unui arborilor numai dac acetia depesc valoarea minim stabilit
pentru fiecare caracter urmrit n parte. n acest caz, un arbore excepional pentru un
anumit caracter nu va fi selectionat dac nu este valoros pentru alt/alte caractere.
Dificultatea metodei consist n stabilirea corect a valorii minime admisibile fiecrui
caracter. Se recomand s se fac o ierarhizare a caracterelor: pentru unele valorile
standard minime s fie mai mari n raport cu altele.

2. Selecie n tandem (= selecie caracter dup caracter)


n fiecare ciclu al programului de ameliorare se fac selecie pentru un anumit caracter,
n ciclul urmtor pentru alt caracter.
De exemplu, selecia n tandem practicabil la rinoase n vederea obinerii de biotipuri
cu cretere activ (primul ciclu) i numr redus de ramuri n verticil (ciclul urmtor)

3. Selecia n dou etape (two-stage selection)


Este asemntoare cu selecia n tandem (caracter dup caracter) n sensul c se aplic
mai nti pentru un caracter, apoi pentru altul, ns ambele caractere se slecteaz n
acelai ciclu de imperechere i testare, dup modelul:
1. Selecie timpurie (la vrste mici) pentru un caracter (de exemplu, dup
intensitatea de cretere) = primul stagiu de selecie;

2. Ulterior, selecie pentru un alt caracter (de exemplu, rezistena la un duntor


biotic ori densitatea lemnului etc.), efectuat asupra precedentului grup
selecionat = al doilea stagiu de selecie
Selecia simultan (concomitent) este posibil atunci cnd caracterele sunt corelate.
necesitatea stabilirii de indici de selecie separai, pentru fiecare caracter urmrit

SELECIA GENOTIPIC:
= selecia pe baza informaiilor din populaii de evaluare (testare)
Parametri genetici statistici care se determin n populaiile de evaluare:
- valorile medii ale caracterelor i nsuirilor; variana caracterelor i nsuirilor cantitative i
calitative;componentele varianei; abaterile standard;coeficienii de variaie;
- eritabilitatea caracterelor;
- corelaii ntre diverse caractere;
- interaciunea genotip x mediu;
- corelaii juvenil adult;
- clasamentul unitilor testate (populaii, clone, varieti hibride etc.)

*Selecia concomitent:
= posibil pentru caractere corelate (determinate de gene
linkate sau pleiotrope)
De exemplu, selecia n tandem practicabil la rinoase n
vederea obinerii de biotipuri cu numr redus de ramuri n
verticil i cretere activ
necesitatea stabilirii de indici de selecie separai, pentru
fiecare caracter urmrit

*Selecia genealogic ( gr. genea= generaie) selecie de-a


lungul generaiilor nrudite homozigotarea locilor genici
fixarea genelor

Selecia recurent:
Tipuri:
a. Simpl = selecia fenotipurilor valoroase i ncruciarea ori multiplicarea vegetativ a
acestora fr restricii

Modalitatea de desfurare a seleciei recurente : I obinerea de informaii; E evaluarea i selecia celor mai
bune genotipuri; P incruciarea celor mai bune genotipuri pentru generarea unui nou ciclu de selecie; Xn
media caracterului n populaia de evaluare n; Xn+1 media populaiei de evaluare n generaia n+1; diferena
ntre Xn i Xn+1 red ctigul genetic pentru ciclul respeciv de selecie ( dup

K r e m e r, 1986 din L u c u D n i l et L u c u D n i l , 1998 ).

Schem de aplicare a seleciei recurente la Eucalyptus

b. Selecia recurent bazat pe CGC (capacitatea general de combinare a genitorilor)


c. Selecia recurent bazat pe CSC (capacitatea specific de combinare a genitorilor)
d. Selecia recurent bazat pe CGC i CSC

Fiecare ciclu de derulare a seleciei recurente simple implic:


1.
Selecia n mas a exemplarelor din populaia de baz n generaia k pentru a obine
populaia selectat a generaiei respective
2.
mperecherea randomizat a arborilor cu fenotip superior (fr control de pedigree),
rezultnd descendenii care vor forma populaia de baz a generaiei k +1
Selecia recurent simpl se practic din ce n ce mai puin n prezent, deoarece asigur un
ctig genetic mai mic dect alte forme ale seleciei recurente.
-

La aplicarea seleciei recurente trebuie avut n vedere faptul c:


Ctigul genetic rezult din modificarea frecvenei genelor n populaia selectat fa de
populaia de baz;
Valoarea ctigului genetic depinde de variabilitatea genetic n populaia de baz;
De regul, n primele cicluri de selecie (aproximativ 10 cicluri) variabilitatea genetic a
caracterelor selectate se schimb puin fa de populaia de baz i ctigul genetic este
similar de-a lungul ciclurilor de selecie, dac intensitatea seleciei este constant;
Sunt necesare multe cicluri de selecie (peste 50) pentru a se ajunge la un platou la care
selecia devine ineficient ( ca urmare a fixrii alelelor sau altor cauze posibile);
Dac se ncepe programul de selecie cu o populaie de baz mare i se asigur apoi infuzia
de material nou nenrudit cu cel iniial, se mrete numrul de cicluri de selecie pn s se
ating platoul de la care selecia devine ineficient;
Marea majoritate a caracterelor populaiei asociate cu trsturi necorelate cu cele selectate
nu sunt afectate de programul de selecie recurent

Selecia recurent pentru CGC (engl. GCA- General Combining


Ability)
n cazul acestui tip de selecie se includ n viitorul ciclu de selecie numai genitorii
cu cele mai mari valori ale CGC sau descendenii acestora. Se asigur astfel un ctig genetic mai
mare dect n cazul anterior de practicare a seleciei n mas, mai ales pentru caracterele cu
eritabilitate mic.
Ca atare, selecia recurent pentru CGC se bazeaz pe analize de pedigree rezultate din
diverse scheme de nmulire:
- polenizare liber sau utilizarea de amestec de polen (caz n care n cultura
comparativ cu rol de testere se pot cuantifica numai nfluenele materne);
- sistem full-sib (se cuantific att influenele materne ct i cele paterne).
Testele genetice recomandate sunt cele multistaionale. Acestea prezint avantaje fa
de selecia n mas permis de selecia recurent simpl:
- Se determin parametri genetici specifici (h2, corelaia genotip x mediu, corelaii ntre
caractere etc.);
- Descendenii plantai n cultura cu rol de testare servesc adeseori pentru constituirea
generaiei de baz viitoare n programul de ameliorare, prin selecia celor mai bune
exemplare din cele mai bune familii pentru generaia viitoare.

Metoda seleciei recurente pentru ameliorarea hibrizilor


interspecifici
Se bazeaz pe urmtoarele aspecte:
- hibrizii pot combina caractere dezirabile de la dou sau mai multe specii prin aditivitate
(denumit complementaritate sau hibrizi combinatoriali);
hibridarea poate conduce la manifestarea fenomenului de heterozis ca efect al genelor cu
aciune neaditiv;

hibrizii pot manifesta o mare homeostazie (stabilitate fenotipic);


hibrizii pot dobndi o capacitate mai bun de adaptare la mediu sau adaptabilitate la condiii
noi de mediu, dincolo de siturile marginale parentale.
Se pot folosi dou tipuri de strategii:
1.
Populie de ameliorare multipl: fiecare specie implicat iniial n programul de
ameliorare este meninut ca o populaie de ameliorare simpl pe parcursul mai multor
cicluri de ameliorare, dar hibridiznd fiecare generaie pentru a produce hibrizi F1

2.

Populaie de ameliorare simpl: n care cele dou specii se hibrideaz de la nceput,


rezultnd o singur populaie hibrid, care este condus n continuare prin recuren, ca o
singur entitate.

* Selecia clonal

AMELIORAREA PRIN SELECIE I


CREAREA VARIETILOR
POPULAIONALE
Programele de ameliorare propriu-zise necesit civa ani pn la producerea
seminelor sau a altor materiale de reproducere utilizabile (de exemplu, butai). De asemenea, n
prezent materialul genetic ameliorat este uneori insuficient fa de necesarul n terenurile de
mpdurire i rempdurire.
n astfel de situaii se recomand recoltarea seminelor din populaii i respectiv din
arbori ai acestora selectai dup criterii fenotipice. Materialul de reproducere astfel obinut
genereaz n zona de utilizare o combinaie specific de caractere denumit varietate
populaional. Dac plantaiile astfel nfiinate ocup suprafee semnificative, n zona implicat
se obine o ras local.
ntr-un astfel de arboret selectat, iniial netestat, arborii superiori sunt meninui iar cei
cu fenotip inferior sunt eliminai, pentru a nu participa la mperechere. Cu toate acestea,
contaminarea genetic se poate produce din arboretele nvecinate neparcurse cu lucrri de
selecie fenotipic. Ideal ar fi ca i n aceste arborete s se fac astfel de lucrri selective.
Totodat, selecia fenotipic duce la rrirea arboretului, condiii n care afluxul sporit de lumin
stimuleaz nflorirea i fructificaia.
Aceast metod de selecie n mas este destul de utilizat n prezent att pentru specii
autohtone, ct mai ales pentru cele exotice, conducnd la formarea unor rase locale.
Arboretele valoroase sunt convertite la surse de semine prin selecie fenotipic.

Arboretele selectate trebuie s ndeplineasc anumite caracteristici:


(1) S se gseasc ntr-o zon apropiat de locul de utilizare a seminelor n culturile
forestiere;
(2) S aib o suprafa suficient (de minimum 3 hectare), pentru a permite panmixia i o
bun polenizare, n care s rmn ntre 50 la 150 arbori cu fenotip superior la hectar,
dup nlturarea arborilor cu fenotip inferior;
(3) Coroanele s fie bine dezvoltate, pentru a produce semine n cantitate mare;

(4) Arboretele s fie uor accesibile;


(5) S fie situate la distan mare de arborete contaminatoare, dovedite a fi inferioare ca
adaptare sau capacitate de bioacumulare;
(6) S aib o compoziie adecvat, pure sau cu pondere foarte mare a speciei urmrite
Tierile cu rol de selecie efectuate urmresc n principal dou scopuri:
a. Acumularea de ctig genetic;
b. Stimularea dezvoltrii coroanelor spre a produce semine n cantitate mare
Ctigul genetic obinut prin crearea varietilor populaionale este mic, mai ales pentru caracterele
cu eritabilitate mic.

AMELIORAREA ARBORILOR PRIN CREAREA


VARIETILOR SINTETICE: LIVEZI SEMINCERE
Definiie: Livezile semincere sunt colecii de clone sau familii cu material selectat ori
genetic ameliorat, nstalate n anumite condiii staionale i conduse intensiv, n scopul producerii
de semine cu nsuiri genetice superioare, n cantiti mari, uor recoltabile.
Prin ntlnirea la fecundare n aceeai cultur a unor genitori superiori din diferite
populaii (proveniene), seminele rezultate nglobeaz combinaii particulare de gene, genernd
varietatea sintetic.
Livezile semincere constituie n prezent modalitatea comun de ameliorare i
propagare a seminelor genetic ameliorate. n cele mai multe cazuri, polenizarea este liber,
anemocor sau zoocor. n livezile semincere se pot efectua ns i polenizri controlate, pentru
generaii avansate de livezi semincere sau n alte programe de ameliorare.
Sunt dou tipuri majore de livezi semincere:
Livezi semincere clonale, obinute prin propagare vegetativ (butire, altoire sau
chiar prin culturi de esuturi i celule);
b.
Livezi semincere de descendene sexuate, obinute din material rezultat prin
polenizare liber sau controlat (full-sib) a arborilor selectai.
a.

n anul 1960 a fost demarat o larg dezbatere privind avantajele i dezavantajele


fiecrui tip de livad semincer. Astfel:
Livezile clonale:
Avantaj: ca urmare a multiplicrii vegetative preponderent prin altoire, fructific de la vrste
mici (altoaiele au vrst stadial mare, determinnd nflorirea dup civa ani de la instalare).
Dezavantaj: apare uneori fenomenul de dioicizare n primii ani de la declanarea fenomenului
de nflorire.
Livezile de descendene sexuate:
Avantaj: dac livada este de familii full sib, se poate face selecia plantelor valoroase dup
CGC i CSC
Dezavantaj: fructificaiile se declanaz la vrste mari, n concordan cu specificul biologic al
speciei respective
Pe lng funcia primar de a produce semine cu nsuiri genetice superioare, livezile
semincere asigur conservarea ex situ a resurselor genetice forestiere.

LIVEZILE SEMINCERE CLONALE (LSC)


Reprezint cea mai frecvent modalitate de producere a seminelor genetic ameliorate, n
multe ri (ca de exemplu n SUA, unde sunt circa 2000 ha instalate pentru Pinus taeda i P. elliottii

numai pentru zona de sud-est a SUA; aceste livezi produc semine care asigur instalarea anual a
700 ha plantaii = 90 % din suprafaa anual de rempdurire din zona respectiv).
Avantajele LSC fa de LSDS constau n:
1.
Materialul vegetal din arborii selecionai este uor de obinut i de propagat prin
altoire, butire sau culturi de esuturi;
2.
Se grbete procesul de nflorire i fructificaie;
3.
Livada se folosete numai pentru producerea de semine genetic ameliorate, fr a
funciona i ca test, ca in cazul celor obinute pe cale sexuat
Arborii selectai n teren poart denumirea de ortei; descendenii vegetativi ai acestora se
numesc ramei. mpreun formeaz o clon. In mod obinuit, o livad semincer cuprinde
ntre 20 i 60 de clone.
Valoarea fenotipic a arborilor n livada semincer nu prezint importan, deoarece
evaluarea acestora se face n culturi comparative.
Design-ul genetic al livezilor semincere clonale:
Trebuie s asigure ctig genetic maxim, dar i meninerea unui nivel ridicat de
diversitate genetic.
Prima generaie de livad semincer trebuie s porneasc de la un numr mare de clone
(s zicem 60), ca urmare a lipsei de date din teste de evaluare. Prin selecia celor mai bune
clone (realizat n culturile cu rol de testare), n generaiile avansate de LSC numrul
clonelor scade.
Livezile semincere rezultate din clone evaluate n prima generaie de culturi
comparative sunt denumite livezi testate sau livezi generaia 1,5 ( generaia 1,5 este prima
generaie de ameliorare, respectiv generaia 2,5 este cea rezultat dac livada rezult prin
testarea generaiei secunde de selecie anterior instalrii livezii).
n generaiile avansate de livezi semincere se pot utiliza clone din diferite generaii
(prini din generaia anterioar mpreun cu descendeni ai acestora).
-

Etapele tipice de constituire a LSC:


Selecia arborilor valoroi n populaia de baz (pentru generaii avansate de LSC selecia se
face n culturile de testare, n care se identific clonele candidat) ;
Obinerea materialului de nmulire vegetativ (recoltarea altoaielor, a butailor etc.);
Propagarea materialului vegetativ (altoirea, butirea etc.);
Infiinarea LSC cu plantele propagate vegetativ, dup design-ul stabilit anterior (o anumit
schem de plantare randomizat, la o distan corespunztoare pe rnd i ntre rnduri, ntre
20 60 clone, respectiv ntre 50 i 100 ramei pe clon);

Conducerea intensiv a livezii (lucrri specifice), recoltarea i difuzarea seminelor genetic


ameliorate;
Datele din culturile comparative instalate i urmrite n paralel sunt utilizate pentru predicia
valorii de ameliorare i pentru selecia clonelor valoroase, n vederea constituirii generaiilor
avansate de LSC

LIVEZI SEMINCERE DE DESCENDENE SEXUATE (LSDS)


Se instaleaz fie cu puiei rezultai din smn produs prin polenizare liber (open
pollinated), fie din smn rezultat din polenizare controlat (full-sib).
LSDS sunt preferate fa de LSC atunci cnd:
1.
Specia n cauz atinge maturitatea sexual la vrste mici i/sau propagarea vegetativ
este dificil (cazul duglasului verde);
2.
Materialul vegetativ recoltat pentru clonare este neutilizabil (de exemplu, la o specie
exotic este mai uor de obinut plante pentru a nfiina o livad semincer prin import de
semine, dect prin procurare de altoaie, care se conserv mai greu);
3.
Cnd livada semincer combin obiectivul producerii de semine genetic ameliorate cu
cel de cultur comparativ cu rol de testare) (de exemplu, cazul Eucalyptus grandis n
programul de ameliorare derulat n Florida).
-

Etapele succesive de constituire i conducere a LSDS:


Selecia arborilor n populaia de baz (la fel ca n cazul LSC);
Se recoltez din aceti arbori seminele rezultate din polenizare liber sau din polenizare
controlat. Rezult familii. Se recomand utilizarea ntre 50 i 300 familii, cu 15-50 puiei /
familie;
Dei LSDS pot funciona i ca teste pn la primele fructificaii, se recomand totui
instalarea de culturi comparative multistaionale, care permit evaluarea interaciunii familii x
mediu. In aceste culturi comparative se evalueaz parametri genetici i se stabilesc

performanele familiilor, date care servesc la derularea ciclurilor succesive de ameliorare i


selecie. Aceste culturi comparative multistaionale pot fi convertite ulterior n livezi
semincere.
Schema de plantare n culturile comparative cu rol de testare este iniial ca n plantaiile
operaionale (de producie);
La un moment dat, unul sau mai multe teste sunt convertite n LSDS, prin selecia familiilor
i a exemplarelor valoroase, extrgndu-se cele cu performane inferioare

Contaminarea cu polen strin a livezilor semincere


Contaminarea cu polen a livezii semincere = influxul de polen din afara livezii, reducnd ctigul
genetic ca urmare a participrii la fecundare a unor prini neameliorai.
Evaluarea gradului de contaminare se poate face prin mai multe metode. Cea mai bun
evaluare se face prin analize de markeri genetici: analize de paternitate care compar genotipul
seminelor produse n livad, determinnd fracia celor care nu au fost fertilizate de arbori din
livad. Aceast informaie, alturi de determinarea frecvenei alelelor n populaia din jurul livezii,
permite estimarea procentului de polen migrat n livad m.
Dac m = 50 %, se reduce ctigul genetic n livada semincer cu 25 % (cnd populaia
din afara livezii este neameliorat).
Msuri de prevenire a contaminrii cu polen strin:
- n trecut s-a recomandat ca n jurul livezii s se constituie o zon de diluie de aproximativ
150 m n care s nu fie exemplare din specia / speciile din livad;
- n prezent se consider insuficient o astfel de izolare, recomandndu-se la conifere o band
de izolare de 500 la 1000 m.
- Mrimea benzii de izolare depinde de specie i de agentul care asigur polenizarea. De
exemplu, la speciile polenizate de albine, distana de zbor a acestora este n medie de pn la
3 km

O soluie recomandat n ultimul timp = plantarea n arboretele din vecintatea livezii a


puieilor rezultai din smn produs n livad, tehnologie cunoscut sub denumirea de zon cu
polen mbogit.

SELECIA ASISTAT DE MARKERI GENETICI


(MAS = Marker Assested Selection)
Trasturile de mare interes in ameliorare sunt n principal:
- creterea n volum;
- ameliorarea proprietilor lemnului;
- ameliorarea rezistenei la boli i duntori biotici sau abiotici.
Selecia indirect pe baza QTL
Un tip de astfel de markeri, cu aplicabilitate la selecia indirect, sunt cei denumii QTL
(engl. Quantitative Trait Loci). Procedeul const n analiza pedigree ului pentru a identifica
asocierea (linkage-ul) ntre markeri moleculari i QTL. n acest mod, selecia arborilor
dup aceti markeri moleculari conduce la creterea frecvenei alelelor implicate n QTL

EXEMPLE:

Modul de stabilire a legturii dintre o gen marker cu dou alele (M1 i M2) i un locus
genic responsabil pentru o caracteristic cantitativ, momentul formrii mugurilor, cu
cele dou alele QTL1 i QTL2. Primul genitor parental prezint nmugurire timpurie i este homozigot
pentru alelele M1 i respectiv QTL1, iar al doilea genitor parental manifest nmugurire trzie i este homozigot
pentru alelele M2 i respectiv QTL2. Descendena dintre acetia este dublu heterozigot (QTL1/QTL2,
respectiv M1/M2). n acest exemplu se presupune c momentul formrii mugurilor este o caracteristic
cantitativ (dup E r i k s s o n et E k b e r g, 2001)

Selecia asistat de markeri genetici pe baza QTL este o form de selcie indirect, deoarece
caracterul cantitativ urmrit spre a fi ameliorat (denumit carcter int) se identific la arbori
valoroi prin intermediul analizelor genetice moleculare.
n figura urmtoare se poate observa modalitatea de aplicare a seleciei indirecte cu
markeri n linkage cu QTL, prin utilizare de SNP-uri (SNP = single nucleotide polymorphisms).
n exemplul dat se observ c alelele marker A1 i B1 la arborele 2 nu conduc la un fenotip cu
dimensiuni mari.

Selecia direct pe baza genelor codificatoare de caractere int


O alt modalitate de ameliorare prin aplicarea MAS const n selecia direct pentru
gene codificatoare de caractere valoroase. n astfel de cazuri, prin markerii genetici se identific
cauzele directe ale polimorfismului genetic care afecteaz trsturile int.
De exemplu:
1. existena unei combinaii valoroase de nucleotide = QTN - Quantitative Trait Nucleotide;
2. mutaii valoroase determinate de inserii, deleii etc.)
MAS prezint o eficient aplicabilitate pentru selecia n dou etape (two - stage
selection). Astfel, intr-o prim etap exemplarele valoroase sunt identificate la vrste mici prin
analiza de markeri genetici asociai cu caractere cantitative. n a doua etap se selecteaz
exemplarele valoroase la vrste mari, pe baza comportrii lor n culturi comparative.
Un exemplu de selecie direct prin identificarea genelor valoroase 2 i 3 este redat n figura
urmtoare:

AMELIORAREA ARBORILOR PRIN


MUTAGENEZ
Inducerea mutaiilor prin folosirea unor ageni mutageni fizici sau chimici, urmat de selecia
mutantelor valoroase = o metod de ameliorare
Mutaiile - definiie: modificri n structura i funciile materialului genetic care nu sunt
determinate prin recombinri genetice
Clasificare:
-genice, cromozomale (restructurri
cromozomale) sau genomice;
- nucleare sau citoplasmatice;
- germinale sau somatice;
- morfologice anatomice i fiziologice
metabolice;
- duntoare (uneori chiar letale), utile sau neutre
din punct de vedere selectiv

CERCETRI N ZONA CATASTROFEI DELA


CERNOBL anormaliti de cretere la puieii
obinui din smn produs de arbori de
mesteacn, stejar pedunculat i pin silvestru din
zona afectat, precum i ale lemnului i canalelor
rezinifere (la pinul silvestru), ca i modificri la
nivel cariotipic i n desfurarea diviziunii
mitotice

Gy = gray = 1 J/Kg
Programele de ameliorare a arborilor prin
mutagenez = bazate preponderent pe provocarea

mutaiilor genomice, mai rar a celor genice sau cromozomale


Exemplu de utilizare a agenilor mutageni fizici:
In ara noastr, la duglasul verde (C o r n e a n u et. al., 1996) = prin iradierea cu diferite
doze de raze X a seminelor provenind din 14 populaii originare de pe litoralul Pacific al
Americii de Nord :
- mutante (radiomorfoze?) caracterizate prin ritm nalt de cretere, cu distane mari
ntre verticile fa de probele martor(neiradiate) - puiei de tip laxa (cu macroblaste);
- distane foarte mici ntre verticile - puiei de tip densa = creteri mici;
- apariia unor forme cu ace foarte lungi sau cu modificri clorofiliene

Poliploidia poate fi indus prin folosirea unor ageni mutageni chimici, cum sunt colchicina
(alcaloid extras din Colchicum autumnale) i pedofilina (obinut din Podophyllum peltatum)
La arbori, primii poliploizi artificiali (triploizi) au fost obinui la pinul silvestru, n anul 1939,
prin metoda colchicinizrii

Metode de inducere a poliploidiei:


- nmuierea seminelor nainte de germinaie n soluie de colchicin n concentraie de 0,1
- 0,4 %, maximum pn la 1,25 - 1,5 %;
- tratarea seminelor cu colchicin n perioada de germinaie;
- aplicarea unei picturi de colchicin - agar ntre cotiledoanele plantulei n primele
zile de la rsrire (agarul reprezint doar suportul ce se va mbiba cu colchicin, permind
astfel contactul ntre alcaloid i plantul).
Timpul de tratament este n funcie de:
- specie;
- de gradul de poliploidie dorit a se obine
Evidenierea strii poliploide:
- prin analize cariotipice;
- dup fenotip (mrimea i forma frunzelor, mrimea stomatelor, a grunciorilor de
polen, lungimea internodurilor etc) = metod empiric; nu poate oferi informaii
despre gradul de poliploidie realizat

Rsinoasele reacioneaz, n general, mai greu dect foioasele la poliploidie:


- revin adeseori la starea diploid ( =genom mai stabil);
- cazuri frecvente de nanism ( se cunosc i excepii; exemplu: ovul normal de Larix
decidua (n cromozomi) fecundat de ctre un gamet diploid (2n cromozomi) de Larix
occidentalis triploid cu creteri active)

Exemple de ameliorare a performanelor de cretere la foioase:prin popliploidizare


*Triploid de Populus tremula (2n= 57), testat n cultur alturi de exemplare normale,
diploide (2n=38). La vrsta de 9 ani, media triploizilor a fost superioar fa de a
diploizilor cu 14 % pt. creterea n nlime i cu 60% pt. creterea n volum. Dup ultima
rritur, triploizi manifestau suprioritate cu 24% pentru creterea n inlime i cu 86%
pentru creterea n volum

*Tetraplozi de Populus tremula (2n=4x=76) x (2n=2x=38) triploizi (2n=3x=57) diploizi


de Populus tremuloides descendeni rezisteni la atacul de Valsa nivea (sensibilitate la
atac manifest Populus tremuloides)
La angiosperme, s-a constatat c ncruciarea de producere a triploizilor reuete mai bine
cnd raportul cromozomic endosperm - embrion este de 4/3, ceea ce corespunde mperecherii
ntre un genitor femel diploid cu un genitor mascul tetraploid (dac printele femel ar fi
tetraploid i cel mascul diploid, raportul cromozomic endosperm - embrion ar fi de 5/3).

n Croaia testare n cultur comparativ pentru :

Salix x sitchensis = S. alba x S. fragilis x S.caprea (triploid);


S. alba x S. x sitchensis ( clon triploid);
S. alba ( clon tetraploid)

rata cea mai mare de cretere n diametru pentru tetraploidul Salix alba, recomandat
petru crearea de culturi cu ciclu scurt de producie( 5-6 ani)
In zona rivier a Donului au fost identificate exemplare mixoploide de Populus x canescens =
P. alba var. nivea x P. tremula, cu celulele n marea lor majoritate triploide, cu toleran mare
fa de solurile srace

AMELIORAREA ARBORILOR PRIN HIBRIDARE


CADRUL GENERAL I PROBLEMATICA
CRERII VARIETILOR HIBRIDE
Hibridarea constituie o metod tradiional de ameliorare a arborilor
De interes deosebit n programele de ameliorare a arborilor sunt hibridrile provocate
(artificiale)
SE URMRETE ameliorarea unor nsuiri ale arborilor: productologice, calitative (inclusiv
de reproducere) sau adaptative
Metodele de hibridare sunt accesibile aplicabilitate
n schimb, practicarea metodei de ameliorare prin hibridare presupune cunotine de
amnunt legate de biologia speciei (speciilor) implicate, ntre care:
- vrsta maturitii sexuale;
- tipul de sexualizare;
- morfologia mugurilor floriferi;

Muguri floriferi la Ulmus sp.

- structura florilor;

Flori la specia Ulmus thomasii (areal n Am. de Nord)


-fenologia nfloririi, inclusiv derularea fenofazelor antezei;
Exemplu din lucrarea: Genetic, morphological, ecological and phenological
differentiation between Quercus petraea and Q. robur in a mixd stand of northwest of France (R.
Bacilieri, A. Ducousso and A. Kremer)

- caracterele fructelor i semintelor, fazele de dezvoltare, ciclul de maturaie etc;


- duntorii biotici i abiotici care afecteaz florile, fructele i seminele, inclusiv
msurile de combatere a acestora;
- cunoaterea hibridrilor interspecifice posibile .a.

EFECTELE GENETICE ALE HIBRIDRII:


-

realizarea de noi combinaii de gene la hibriziheterozis;

- captarea unor gene valoroase de la unul din prini


( uneori, acest lucru se poate solda cu ctig genetic semnificativ doar dac se fac
ncruciri repetate ale hibrizilor din F1 cu printele de la care se urmrete captarea
caracterului dorit, metod cunoscut sub denumirile back-cross, retroncruciare,
introgresiune sau hibridare regresiv).

FACTORI/ CAUZE CARE LIMITEAZ UTILIZAREA PE


SCAR LARG A HIBRIDRII CA MET. DE
AMELIORARE:
1.La arbori, adeseori florile sunt greu accesibile
2.Intervalul de timp disponibil pentru realizarea polenizrilor controlate este destul de mic
Ori, n medie, se consider c un operator ar putea:
- s instaleze circa 100 saci de polenizare / zi;
- s polenizeze circa 150 saci / zi;
- s degajeze i s eticheteze circa 100 de ramuri/zi
3. Consumul apreciabil de manoper, care ridic destul de mult preul de cost al
materialului de mpdurire sau rempdurire astfel produs
4. Necunoaterea spectrului de reacie al hibrizilornecesitatea testrii descendenilor
hibrizi, care poate presupune timp de pn la chiar zeci de ani
5. La hibrizii interspecifici adeseori sterilitate sau semisterilitate n F1...
6. Pericolul bastardizrii populaiilor naturale

METODE I TEHNICI DE HIBRIDARE A ARBORILOR


Ameliorarea arborilor prin hibridare presupune parcurgerea mai multor ETAPE :
1. Selecia genitorilor n funcie de obiectivele de ameliorare i variabilitatea existent
pentru caracterele urmrite;
2. Hibridarea (mperecherea) propriu zis;
3. Instalarea culturilor comparative de hibrizi (testul de pepinier i apoi cultura
comparativ propriu - zis)

4. Selecia hibrizilor valoroi i constituirea populaiei de producere pe scar larg a


varietilor hibride;

Metodele de hibridare:
A. Dup gradul de nrudire al genitorilor:
- hibridare apropiat, care include hibridrile intraspecifice ntre rase, forme, varieti
sau biotipuri;
- hibridare ndeprtat, care se realizeaz la nivel interspecific (mai nti trebuie
determinat compatibilitatea de interfecundare ntre speciile implicate; se poate face: i. prin
testarea efectiv a compatbilitii de mperechere; ii. prin antecedente de hibridare realizate
n alte programe de ameliorare; iii. prin observaii privind existena/absena hibridrilor
spontane )

B. Dup modul de polenizare a plantelor mam:


- hibridarea liber;
- hibridarea semiliber (se realizeaz prin izolarea florilor genitorului femel i imprtierea
polenului n sacul sau cortul de izolare);
- hibridarea forat ( = izolarea florilor femele+ folosirea de perii/pensule de polenizare)

C. Dup numrul i natura genitorilor, precum i n funcie de


schema de ncruciare adoptat:

Hibridare simpl( A x B)

Hibridare dubl: (A x B) x (C x D)

. Hibridarea repetat (retroncruciare sau back-cross). n acest caz, hibridul F1 se


mperecheaz cu unul din prini, denumit genitor recurent
A x B = AB; AB x A = (AB) A; (AB) A x A = (AB)A' .a.m.d.

* Hibridarea reciproc. Const n utilizarea a doi genitori ca forme materne i paterne,


situaie posibil la arborii bisexuai i la cei unisexuai - monoici:
A x B = AB i B x A = BA
* Hibridarea ciclic (top-cross). Const din ncruciarea unui genitor (denumit tester sau
analizator) cu alte organisme parentale:

A x B; A x C; A x D; A x E
* Hibridarea dilael

Sistemul dialel complet (8 x 8) utilizat de Prnuta (2001) la


ncrucisarea a 4 arbori de molid cu coroana normala (N...) cu 4
arbori de molid pendula (P...)
Genitori

Genitori
P1 P7 P66 P67 N39 N40 N41 N42

P1
- x x x x x x x
P7
x - x x x x x x
P66
x x - x x x x x
P67
x x x - x x x x
N39
x x x x x x x
N40
x x x x x x x
N41
x x x x x x x
N42
x x x x x x x x - ncrucisari efectuate
Numarul combinatiilor posibile n cazul unui test dialel complet fara autofecundare este dat de
relatia n(n-1), n care n este numarul genitorilor. Pentru exemplu de mai sus rezulta 8 x 7 = 56
combinatii.

Hibridarea n mas (poly-cross)

TEHNICA DE HIBRIDARE CONTROLAT (SEMILIBER


SAU FORAT) LA ARBORI:
a) Izolarea florilor femele (se face inainte cu 1-2 sptmni de perioada de fecundare
preconizat)
CUM SE FACE?De obicei se folosesc pungi (saci) de izolare

b) Castrarea florilor mascule

Program american de hibridare la Castanea dentata ntre exemplare rezistente i sensibile la


endotioz
c) Recoltarea polenului (se face nainte cu cteva zile de perioada de utilizare;
curire de impuriti, zvntare, pstrare la 2-4 grade, 25-50% umiditate, n flacoane
astupate cu vat)

Pollen was harvested from this American chestnut graft in Joe Schibig's orchard in Sumner
County, TN and was used to pollinate a TACF mother tree at Meadowview VA

d) Polenizarea: de regul 3 reprize: prima cu 1-2 zile nainte de perioada de


receptivitate preconizat, a 2-a n ziua considerat de maxim receptivitate, a 3-a dup
1-2 zile

e) Scoaterea sau ruperea pungilor de izolare

EXEMPLE DE AMELIORARE A ARBORILOR PRIN


HIBRIDARE:
Preocuprile privind ameliorarea arborior forestieri prin hibridare au cunoscut pe plan mondial o
amploare deosebit. ncepnd nc din anii 1909 i 1910, Helge Ness, la Staiunea experimental din Texas
(SUA), a obinut hibrizi de Quercus virginiana x Quercus lyrata (W r i g h t, 1965), iar n anul 1920, la
Placerville California (SUA), n cadrul Institutului de Genetic Forestier, au fost obinui primii hibrizi de
pini.
n afar de SUA, numeroase programe de ameliorare prin hibridare la diverse specii au fost puse n lucru
n Australia, Noua Zeeland, Africa de Sud, Canada, Coreea de Sud, Japonia, Suedia, Olanda, Rusia,
Germania, Austria, Danemarca, Croaia, Iugoslavia, Ucraina, Italia, Romnia .a. Hibridrile efectuate au
urmrit ameliorarea unui numr mare de specii, ndeosebi din genurile Pinus, Picea, Quercus, Abies,
Araucaria, Populus, Salix, Castanea, Eucalyptus, Betula .a.

Hybrid between Pinus elliottii and Pinus palustris in a test plantation at Olustee, Florida.
The tree was photographed at the beginning of the ninth growing season, its height being 7
meters, and the d.b.h. 13.5 centimeters. - Courtesy, U.S. Forest Service
Fr ndoial ns, c cele mai multe hibridri s-au realizat pn n prezent ntre speciile genului Pinus.
Astfel, conform estimrilor fcute de Critchfield (1975), n ultimii 75 de ani au fost obinui 95 hibrizi
interspecifici, totaliznd circa 4 500 combinaii realizate ntre 95-100 de specii din totalul de 105 existente n
flora actual (M a n, 1996).
Obiectivele generale urmrite prin programele de hibridare, la pini, au constat n obinerea efectului de
heterozis sau captarea unor gene valoroase.
Lucrrile de hibridare la pini au debutat n ara noastr n anul 1954. Pn n anul 1956 au fost obinute
26 combinaii hibridogene ntre P. sylvestris (component matern) i P. nigra, P. contorta, P. murrayana,
P. banksiana, P. ponderosa i P. jeffreyi (componente paterne). n general, rezultatele hibridrilor din
aceast perioad nu au fost suficient de concludene.
Ulterior, s-au ntreprins noi experimentri, demne de consemnat fiind cele din programul instituit n anul
1978 i condus de I. Blada, n cadrul Institutului de Cercetri i Amenajri Silvice I.C.A.S., avnd ca
obiectiv ameliorarea rezistenei la Cronartium ribicola. Pe lng faptul c prin acest program s-au obinut
rezultate bune n privina ameliorrii rezistenei pinilor cu 5 ace fa de duntorul amintit, s-au realizat i
combinaii hibridogene cu heterozis somatic i, totodat, s-au produs, n premier, hibridri ntre P. cembra
i P. griffithii, respectiv P. cembra i P. monticola.
Polenizrile controlate efectuate la pini n ultimele 5 decenii, n ara noastr, s-au soldat cu obinerea a 27
hibrizi interspecifici i a 6 hibrizi intraspecifici, cu un total de 58 combinaii (tabelul 80).
La genul Picea, capacitatea de hibridare interspecific a fost testat n experimente realizate n SUA,
Suedia, Germania, n rile din fosta URSS i fosta Iugoslavie .a. Din aceste experimente s-a tras concluzia
c posibilitile de hibridare depind de gradul de nrudire morfologic i proximitatea ariilor naturale. Din
cele circa 70 de ncruciri interspecifice ncercate, numai 16 au prezentat o reuit net, 42 au euat, iar 12
au dat rezultate nesigure.

Ameliorarea pinilor cu cinci ace pentru inducerea rezistenei


la Cronarium ribicola
Hibrizi de pini obinui i testai n Romnia
(dup M a n, 1996)
Nr.
Denumirea
Nr. total de combinaii
crt.
Seria de culturi
1969 1970 1975 1990
Hibrizi interspecifici
1 P. monticola x P. strobus
3
1
2 P. griffithii x P. strobus
3
3 P. strobus x P. griffithii
2
1
1
4 P. strobus x P. flexilis
1
5 P. strobus x P. peuce
1
6 P. sylvestris x P. banksiana
1
7 P. sylvestris x P. contorta
1
8 P. sylvestris x P. contorta
1
var.latifolia
9 P. sylvestris x P. mugo var.
1
uncinata
10 P. sylvestris x P. nigra var.
1
austriaca
11 P. nigra var. austriaca x P.
3
1
sylvestris
12 P. nigra var. austriaca x P.
2
1
mugo var. uncinata
13 P. nigra var. austriaca x P.
1
resinosa
14 P. nigra var. austriaca x P.
1
densiflora
15 P. nigra var. banatica x P.
4
densiflora
16 P. contorta x P. sylvestris
2
17 P. contorta x P. banksiana
1
18 P. contorta var. latifolia x P.
1
sylvestris
19 P. contorta var. latifolia x P.
1
1
banksiana
20 P. mugo var. uncinata x P.
1
sylvestris
21 P. densiflora x P. sylvestris
1
var. hamata
22 P. jeffreyi x P. nigra var.
1
austriaca
23 P. nigra var. austriaca x P.
1
jeffreyi
24 P. resinosa x P. taeda
1
25 P. rigida x P. ponderosa
3
26 P. ponderosa x P. rigida
2

27
28
29
30
31
32
33

P. ponderosa var.
scopulorum x P. rigida
Hibrizi intraspecifici
P. griffithii x P. griffithii
P. sylvestris x P. sylvestris
P. nigra var. austriaca x P.
nigra var. austriaca
P. densiflora x P. densiflora
P. contorta x P. contorta
var. latifolia
P. jeffreyi x P. jeffreyi

2
1
2
4
1
1
1

Ameliorarea plopilor:
P. x canadensis cv. Serotina (P. nigra x P. deltoides) - hibrid de sex mascul, P. x c. cv. Robusta
(P. nigra var. plantierensis x P. angulata) - de sex mascul, P. x c. cv. Regenerata (P. Serotina x
P. nigra) - de sex femel, P. x c. cv. Eugenei (P. n. cv. Italica x P. Regenerata) - de sex mascul.
Principalele cultivare admise n prezent n cultur, n ara noastr, sunt: cv. Serotina (clonele
R1, R3, R4), cv. Robusta (clonele R13, R18, R20, Oltenia, i, ndeosebi, clona R16), cv. Sacrau
(clonele 59 i 79), cv. Italia (clonele I214, I45/51, I45/55, I69/55), cv. Deltoides 227, cv.
Regenerata, cv. Cetate, cv. Arge, cv. Marilandica, cv. Jacometti (clonele 107, 307), cv.
Toropogriki, .a.

Populus x interamericana (P. deltoides x P. trichocarpa)


- Plopi hibrizi interamericani Aflai la noi n ar nc n faza de testare, plopii interamericani se arat promitori sub aspect
productologic i de adaptabilitate fa de condiiile de inundabilitate din Lunca i Delta Dunrii.
Astfel, n cultura comparativ de la Turcoaia (Ocolul Silvic Mcin) clonele interamericane Rap i
Donk au realizat, la 20 de ani, creteri medii de 25,4 respectiv 22,0 m3/an/ha, comparabile cu cele
ale cultivarului Sacrau 79 (aproximativ 23 m3/an/ha)

Ameliorarea slciilor:
Hibrizi de Salix fragilis x S. matsudana .a.

Ameliorarea molizilor:
Hibridri interspecifice, la molid, n ara noastr, au fost fcute ncepnd din anul 1966 (B e n e
a et al, 1975), obinndu-se 9 combinaii cu 6 specii, ns, hibrizii rezultai nu au dovedit n testul
de pepinier superioritate fa de prini, n privina creterilor. n cadrul acestui experiment, spre

exemplu, s-au obinut hibrizi ntre: P. abies x P. obovata, P. abies x P. sitchensis, P. abies x P.
koyamai, P. abies x P. omorika, P. abies x P. orientalis .a.
La molid s-au ntreprins i hibridri intraspecifice, ntre rase, proveniene sau varieti. Astfel,
fenomenul de heterozis a fost dovedit la hibrizii rezultai din ncruciarea ntre rasa nordic i cea
sudic.
n ara noastr, n ultimul timp s-au fcut polenizri controlate de ctre Gh. Prnu, ntre
ideotipul de molid cu coroan ngust (Picea abies var. columnaris) i tipul comun (Picea abies var.
pyramidalis), experiment din care ar putea s fie deduse n viitor unele concluzii utile n domeniile
cunoaterii i gospodririi arboretelor de molid.

AMELIORAREA ARBORILOR PRIN CLONARE


(MICROPROPAGARE) SOMATIC IN VITRO
Totipotena celulelor vegetale = la baza derulrii protocoalelor de multiplicare in vitro
Micropropagarea somatic in vitro = modalitate de nmulire prin clonare a plantelor +
metod de ameliorare, ntruct:
- se pot selecta i apoi multiplica pe cale somatic arbori deintori de genotipuri
valoroase, fie existeni n arborete naturale sau artificiale, fie rezultai din alte programe de
ameliorare (selecie, hibridare, mutagenez etc.);
- n condiii de cultur in vitro pot s apar variaii somaclonale, ceea ce face ulterior
posibil selecia exemplarelor valoroase obinute din multiplicarea aceluiai genotip;
- prin protocoale de lucru adecvate se poate realizarea rejuvenilizarea (rentinerirea)
arborilor deintori ai unor combinaii de gene valoroase.

Fig. 3 Somatic embryos of F. excelsior and their germination.

Fig. 4 Micropropagated ash from a mature selected tree in field tests.

Fig. 5 : Genetic improvement of ash: vegetative propagation.

**Poate

contribui la rezolvarea problemei producerii de puiei pentru mpduriri i


rempduriri la speciile care se confrunt cu deficiene majore de fructificaie, cum sunt
foarte multe dintre cvercineele indigene. Protocolul general de lucru recomandat n acest sens
(Grigorescu et al.,1990) presupune parcurgerea urmtoarelor etape:
- obinerea materialului biologic (explant din puiei sau din esuturi tinere recoltate de
la arbori selecionai);
- pregtirea pentru inoculare (sterilizarea);
- prelevarea explantelor i inocularea (apexuri i segmente nodale);
- cultura pe medii nutritive;
- realizarea de subculturi periodice (14-20 zile) i obinerea de lstari in vitro;
- alungirea i nrdcinarea lstarilor;
- adaptarea puieilor obinui in vitro la condiii septice, n laborator;
- adaptarea la condiii de ser i cmp.
ETAPE ALE PROGRAMULUI DE AMELIORARE PRIN MICROPROPAGARE
SOMATIC IN VITRO I SELECIA VARIAIILOR SOMACLONALE:

1.

Selecia arborilor cu genotip superior. In acest sens este indicat s fie clonai
arbori elit sau superelit obinui prin selecie recurent, testai n culturi
comparative, precum i hibrizi intra sau interspecifici care se dovedesc
purttori de heterozis somatic, adaptiv i/sau reproductiv

2.

Pretratamentul arborelui mam. Este necesar atunci cnd acesta, ca urmare a


vrstei naintate, trebuie reactivat s produc pri vegetative tinere care s
fie folosite pentru recoltarea explantelor ce vor fi utilizate la cultura in vitro
(prin tieri n coroan, provocarea drajonrii, recepare, rnire pentru
determinarea formrii de calus etc.)

Vrsta plantei donatoare are un rol foarte important n reuita multiplicrii in vitro.
EXEMPLU: LA DUGLAS = proces facil de multiplicare in vitro a explantelor recoltate de la
puiei de pn la 5 ani, respectiv din ce n ce mai dificil dup 10 ani
3.
Sterilizarea explantelor i a mediului de cultur.
Explantele i mediul de cultur prezint o compoziie chimic ce devine favorabil instalrii
florei bacteriene i fungice, motiv pentru care operaia de izolare i sterilizare este obligatorie,
pentru reuita culturii in vitro.
4. Izolarea i inocularea explantelor Explantele trebuie s fie de dimensiuni adecvate
procedeului de multiplicare in vitro utilizat. Totodat, s-a constatat c celulele "traumatizate"
prin secionare reacioneaz ulterior pozitiv, declannd diviziunile cu rol de cretere a
explantului
5.

Iniierea diviziunilor. Aceasta este stimulat de compoziia mediului de cultur.

6.

Elongaia, diferenierea celulelor n vederea formrii organelor i transferul n cmp


de cultur. Nu ntotdeauna i pentru toate speciile, mediul de iniiere a
diviziunilor asigur elongaia (continuarea diviziunilor) i
citodiferenierea..

7.

Selecia clonelor i a variaiilor somaclonale valoroase. Aceast operaie se face n


funcie de obiectivele de ameliorare stabilite i urmrete obinerea unui
ctig genetic de ameliorare.

n funcie de modalitile de multiplicare in vitro se difereniaz urmtoarele situaii:


nmulire in vitro prin formarea de micropropagule, constnd din formarea de mugurai
adventivi ("branching") pe suprafaa explantului;

nmulire prin lstrire adventiv pe suprafaa explantului


( vezi dup calusul din stnga jos)

nmulire prin neformare (regenerare prin organogenez) din calus.

Figura151 - Diferite metode de cultur in vitro (dup C o r n u, 1986 - din


L u c u D n i l , 1998)

L u c u D n i l et

Fazele evolutive ale multiplicrii in vitro :


- inducerea diviziunii celulare, n care intervine ca stimulator de diviziune un mediu de
cultur cu o anumit compoziie chimic, dar un aport n acest proces l pot avea chiar
anumite pretratamente fizice ale explantului, cum este rnirea cu scop de inducere a calusrii.
Astfel, la nivelul zonelor traumatizate (mai ales prin tiere) se produc diviziuni cu rol de
cicatrizare. Folosirea ca explante a unor organe sau pri ale acestora crora le-a fost aplicat
pretratamentul de inducere a calusrii reprezint o bun oportunitate pentru reuita creterii
prin diviziune a explantului;
- diviziunea celular activ sau faza de proliferare, care const din diviziuni care asigur
creterea somatic activ a explantului, soldndu-se cu formarea de calus pe explant
(aglomerare de celule nedifereniate) sau neoformarea de muguri i lstari;
- faza staionar, n care nu mai predomin proliferarea celulelor, ci citodiferenierea
acestora.

Fig. 3. Sequential stages in the complete in vitro regeneratio


of lakoocha (Artocarpus lakoocha) plantlets. A. Nodal expl
B. Elongation of axillary bud in nodal explant. C. Shoot tip
producing callus and numerous shoot bud primordia. D.
Elongated shoots initiate rooting in the induction medium,
arrow points to a root. E. Complete plantlet developed with
well defined shoot and root at the end of

Mediile de cultur in vitro trebuie, n primul rnd, s asigure supravieuirea explantului (deci
s nu fie toxice) i, n al doilea rnd, s fac posibil inducerea diviziunilor, proliferarea i
citodiferenierea celular.
In compoziia mediilor de cultur intr trei categorii de componente: -nutritive;
- reglatoare de cretere;
- stabilizatoare.
Componentele nutritive sunt reprezentate de:
- ELEMENTE MINERALE (macroelemente i microelemente) - ELEMENTE ORGANICE
(surse organice de carbon i de azot, vitamine, aminoacizi etc.).
Componentele reglatoare de cretere sunt reprezentate de: - fitohormoni (auxine,
ciotochinine, gibereline);
- diverse substane reglatoare (etilen .a.).
Componentele stabilizatoare. Mediul de dispersie pentru componentele necesare
mediului de cultur in vitro este apa. Stabilizatorii necesari sunt reprezentai de:
- substane antioxidante;
- substane absorbante (obinuit se folosete crbune activ);
- stabilizatori osmotici i de pH etc.
Mediile de cultur pot fi solide (pe suport de agar) sau lichide. Acestea din urm sunt utilizate
pe scar larg n prezent
n funcie de concentraia molar total se difereniaz medii de cultur:
- concentrate (36-50 mM);
- mediu concentrate (26-35 mM);
- diluate (7-25 mM).
Literatura de specialitate recent recomand utilizarea mediilor de cultur mai diluate,
dei la arbori au dat rezultate mulumitoare i mediile concentrate.

IMPEDIMENTE ALE METODEI:


**PROCEDURALE:
Brunificarea i nnegrirea mediului de cultur n jurul explantului, fenomen destul de
frecvent ntlnit la multiplicarea somatic in vitro la cvercinee, fag, castan comestibil,
carpen .a. Acest fenomen nedorit este, de fapt, un proces de oxidare a mediului,
determinat mai ales de fenolii coninui de explant.

Ca msuri de prevenire i combatere se recomand:


- splarea fenolilor;
- absoia acestora cu crbune activ;
- folosirea de antioxidani (cum sunt, de exemplu, unii ageni chelatici).
Vitrificarea ("malformaie hiperhidric"). Aceasta const n supraacumularea de ap n
celulele neoformate, ndeosebi n cele din esuturile conductoare i asimilatoare, asociat
cu creteri anormale ale acestora adaptare foarte slab la transplantarea n cmp
neutilizarea acestora.

Anergia, fenomen care const n proliferarea cvasicontinu, necontrolat, a explantului,


fr a mai reaciona la substanele reglatoare de cretere, chiar dac se nlocuiete mediul
de cultur. In acest caz organogeneza nu mai este posibil.

** IMPLICAII ALE
SOMATIC IN VITRO:

METODEI

DE

AMELIORARE

PRIN

MULTIPLICARE

Costurile determinate de tehnologia implicat i cheltuielile materiale sunt mari, fiind de 310 ori mai ridicate dect cele presupuse de obinerea variatilor sintetice n livezi
semincere;

Adaptarea vitroplantelor la condiiile de cultur forestier este grevat adeseori de o serie de


tare morfologice - fiziologice ale acestora, cum sunt: calitatea slab a sistemului radicelar,
intensitatea relativ redus a creterilor i creterea plagiotrop n faza juvenil,
sensibilitatea ridicat la boli .a.;

A se observa vitroplante
plagiotrope

Plante in faza de aclimatizare

Ingustarea diversitii genetice a culturilor astfel create, care sunt mult mai vulnerabile fa
de aciunile diverilor factori restrictivi de natur biotic sau abiotic.

In a recent paper von Arnold and her colleagues


Somatic embryogenesis is used for
discovered that the genetic instability often
vegetative propagation of trees. From
associated with vegetative propagation in vitro
www.biology.gatech.edu
might reflect the ability to adapt to stress. Stability
of four variable nuclear microsatellite loci in
embryogenic cultures and zygotic embryos was
highle variable in Pinus sylvestris, and low genetic stability was associated with higher
embryogenic potential. This indicate that genetic instability might give the plants some kind
of plasticity, which help widely distributed plants like pine to adapt to stress.

HAPLOIDIA PRIN ANDROGENEZ I GINOGENEZ


Plantele haploide se pot obine prin culturi in vitro de polen sau de ovule i ovare nefecundate
Procesul de regenerare de plante haploide in vitro este posibil ca urmare a totipotenei ce
caracterizeaz celulele vegetale
Plantele haploide obinute in vitro sunt sterile. Prin diploidizare ele devin fertile, iar din punct de
vedere genetic sunt total homozigote. De aceea, mai sunt numite linii izogene sau linii total
homozigote
Utilitatea plantelor haploide i a liniilor izogene:
-

toate genele se manifest fenotipic posibilitatea seleciei genotipurilor valoroase dup


caractere fenotipice;
prin mperechere ntre linii izogene heterozis;
liniile izogene se obin ntr-o singur generaie, fa de 7-8 generaii prin metoda clasic a
consangvinizrii repetate
haploizii rezultai in vitro din celule prelevate de acelai exemplar nu sunt identici ( ca
urmare a recombinrilor din meioz, sau chiar datorit apariiei de vitrovariaii)

Androgeneza poate fi realizat prin trei metode:


- cultur de antere;
- cultur de inflorescene;
- cultur de polen.

Cultura de antere este cel mai frecvent procedeu de androgenez (figura 152). Recoltarea anterelor
se face, de obicei, n momentul n care microsporii sunt uninucleai sau n timpul primei mitoze
polinice

Reprezentarea schematic a androgenezei directe i indirecte (dup B a d e a et R a i c u,


1984)
Androgeneza direct se poate produce n mai multe moduri :
- prin diviziuni repetate ale nucleului vegetativ, n timp ce nucleul spermatic
avorteaz;
- prin diviziuni repetate ale nucleului spermatic, n timp ce nucleul vegetativ
avorteaz;
- prin diviziuni simetrice ale nucleului microsporului, ceea ce face ca n loc de doi
nuclei diferii (generativ i vegetativ) s apar doi nuclei identici, deci dou celule identice,
sau este posibil ca cei doi nuclei s fuzioneze, rezultnd astfel embrioni i plante diploide.

Figura 153 - Comportri posibile ale polenului la cultura in vitro


(dup C a c h i C o s m a et P e t r e s c u, 1985)
Androgeneza indirect const n obinerea mai nti a unui calus, care prin difereniere
produce organe (rdcini i muguri). De aceea, aceast cale de androgenez mai este
denumit i organogenez. Poriuni din esutul difereniat care se formeaz pe calus se
transfer apoi pe un mediu de cultur, rezultnd plante haploide.
Ginogeneza, const n cultura de ovule nefecundate, izolate sau aflate n ovar,
obinndu-se i pe aceast cale plante haploide.
Un caz aparte de ginogenez este apogamia, care const din obinerea de plante haploide
prin cultura in vitro a sinergidelor sau antipodelor.
Haploidia prin androgenez i ginogenez, urmat de obinerea i selecia liniilor izogene, a
fost utilizat n special la plantele agricole. Experimentri au fost fcute ns i la arbori: la
Populus nigra, Populus simonii x P. nigra, Populus ussuriensis, Prunus avium, Ribes nigrum
etc.

FUZIONAREA DE PROTOPLATI I HIBRIDAREA


PARASEXUAT A ARBORILOR
Hibridarea parasexuat reprezint procesul de fuzionare, n
condiii de cultur in vitro, a unor celule care aparin la specii
diferite sau la rase (soiuri) intraspecifice

Importan aparte prezint hibridarea parasexuat


interspecific, deoarece se depesc barierele dintre specii care
nu sunt compatibile la mperechere
Hibridarea parasexuat se poate realiza att ntre celule
vegetale, ct i animale, sau chiar ntre celule vegetale i
animale. In ultimile dou situaii se pot obine doar clone de
celule hibride, n timp ce n primul caz, datorit totipotenei
celulelor vegetale, prin cultura in vitro a celulelor fuzionate
pot rezulta organisme
La plante, hibridarea parasexuat se realizeaz prin
fuzionarea de protoplati. Acetia sunt celule vegetale lipsite de
peretele celular pecto-celulozic = celule nude (protoplasma este
delimitat la exterior numai de membrana plasmatic fosfolipido-proteic, capabil s regenereze n culturi in vitro
peretele celular i s se divid)
Protoplatii permit o serie de manipulri genetice, ca de
exemplu:
- transferul de organite celulare, microorganisme sau
material genetic strin;
- formarea de celule somatice hibride i apoi de
organisme cu diverse caracteristici genetice, inexistente n
natur;
- ameliorarea plantelor prin selecia liniilor hibride
parasexuate cu performane somatice deosebite, inducerea
rezistenei la diferii ageni patogeni (produi toxici ai unelor
bacterii, ciuperci etc.) sau factori de stres abiotici (salinitate,
secet etc.).
Tehnologia de obinere a protoplatilor:
- metoda mecanic: const n microdisecia
plasmolizate = la microscop randament sczut

celulelor

Avantajul aceste metode const n faptul c nu se folosesc


substane chimice care s digere peretele celular, evitndu-se
astfel efecte neprevizibile i indezirabile ale acestora
- metoda enzimatic: peretele celular este degradat (digerat)
prin folosirea unor complexe enzimatice, cum sunt: celulaza,
maceraza, diferite pectinaze i hemicelulaze. Acestea trebuie,
de fapt, s determine dou efecte:
- disocierea celulei din esut prin dizolvarea lamelei
mijlocii care unete celulele;
- degradarea propriu-zis a peretelui celular pectocelulozic.
Enzimele folosite se extrag din bacterii, esuturi fungice sau
sucuri gastrice
Ca material vegetal surs de protoplati se pot utiliza: mezofil
de frunze, rdcini, nodoziti radiculare, esuturi din fructe,
inflorescene, endosperm, pri din embrion (epicotil,
hipocotil, cotiledoane), dar i material vegetal obinut prin
culturi in vitro de celule somatice (culturi celulare de calus,
suspensii celulare)

- Etapele procesului de izolare a protoplatilor


(dup C a c h i C o s m a et P e t r e s c u, 1985)

- Surse posibile de celule "competente" pentru obinerea de protoplati i plante in vitro (dup B r e z
e a n u et al., 1988- din L u c u D n i l et L u c u D n i l , 1998)

Obinerea de protoplati prin metoda enzimatic nu ridic


probleme de ordin procedural deosebite, insurmontabile. In
schimb, ulterior obinerii protoplatilor trebuie rezolvate o
serie de tehnologii care s asigure:

- stabilizarea acestora, ceea ce presupune meninerea


strii de protoplast suficient timp pentru a putea fi parcurs
etapa urmtoare, cea de fuzionare;
- inducerea fuzionrii n vederea formrii celulelor
hibride. n acest scop se folosesc adeseori ageni inductori de
fuzionare, cum este polietilglicolul;
- gsirea unor medii de cultur selective, care s
asigure selecia i diviziunea celulelor fuzionate, respectiv
eliminarea celor nefuzionate;
- inducerea diviziunilor i a citodiferenierii celulare,
pentru a fi posibil obinerea de plante in vitro

REALIZRI LA ARBORI:
Primii protoplati fuzionai ntre celule somatice prelevate de
la specii diferite de arbori au fost obinui ntre Paulownia
taiwaniana i Populus sp. De asemenea, s-a reuit regenerarea
de plante ntregi la specii din genul Citrus (V a r d i et al. 1982),
la Populus tremula, Populus alba x P. grandidentata i Populus
nigra Betulifolia x P. Trichocarpa
- la Pinus pinaster i Pseudotsuga menzienii s-au izolat
protoplati cu rezultate foarte bune utiliznd cotiledoane;
- s-au obinut culturi celulare i clone libere de viroze, dar
nu imune, la specii din genurile Juniperus, Populus,
Pinus, Malus .a.;
- regenerarea de calus din protoplati de Alnus incana
izolai din culturi de celule n suspensie;
- formarea de calus din protoplati izolai din celule de
mezofil, la Populus sp.;
- regenerarea de calus din protoplati de Sorbus aucuparia;
- la noi n ar, n cadrul ICAS s-au realizat experimentri
pentru obinerea i fuzionarea protoplatilor la ulmul de
Turkestan, ulmul de munte, salcm, stejar pedunculat etc

Randamentul extraodinar de mare al acestei metode de


nmulire in vitro (se pot obine circa 2 milioane de protoplati
dintr-un gram de mezofil foliar)

Figura 156 - Obinerea de protoplati prin metoda izolrii enzimatice i


regenerarea in vitro a plantelor

AMELIORAREA PRIN CREAREA DE ORGANISME


TRANSGENICE. REALIZARI SI PERSEPECTIVE
DE UTILIZARE A ACESTEI METODE LA ARBORI
Modificarea genetic a organismelor animale, vegetale sau a
microorganismelor prin transferul de material genetic de la
alte vieuitoare conduce la obinerea aa - numitelor
organisme transgenice

perspectiva inducerii unor caractere dorite fie prin


funcionarea propriu-zis a materialului genetic exogen, fie
prin determinarea unor interaciuni ntre informaia genetic
endogen i cea exogen.

La plante, organismele transformate genetic se obin, de


regul, prin introducerea n protoplati de organite
deintoare de informaie genetic sau de material genetic
exogen obinut prin metode specifice

Modaliti de obinere a plantelor transgenice prin ncorporare de material genetic exogen (dup
R o u, 1988 din L u c u- D n i l et L u c u- D n i l , 1998)

n prezent se folosesc mai mult metodele care vizeaz


utilizarea propriu-zis a materialului genetic, difereniindu-se
dou ci de aciune:
- transferul direct de gene;
- transferul indirect de gene (prin utilizarea de vectori).
TRANSFERUL DIRECT DE GENE
Tehnologia de transfer direct de gene se mai numete
transfecie i se poate realiza prin:

a) ncorporarea n protoplati de organite celulare


purttoare de informaie genetic. Aceast metod se poate
concretiza n :
- corectarea fotosintezei (n cazul transferului de
cloroplaste) sau a mecanismului oxidrii celulare (cnd se
transfer mitocondrii);
- transferul unor gene mutante valoroase ncorporate n
organitele supuse manipulrii genetice
b) Microinjecia de gene n nucleu, realizndu-se
experimentri att in vitro (la protoplati) ct i in vivo (de
exemplu, microinjectarea unor gene n gruncioare de polen
n curs de germinare)
c) Fuziunea de protoplati cu lipozomi. Lipozomii sunt
organite delimitate printr-o membran fosfolipidic
bistratificat. n interiorul lor se poate introduce materialul
genetic ce urmeaz a fi apoi ncorporat n protoplati
d) Electroporarea. Metoda const n producerea de pori n
membrana plasmatic a protoplatilor, ntr-un cmp electric
de mic intensitate, prin care poate ptrunde materialul
genetic exogen
e) Bombardarea protoplatilor cu microproiectile. Se folosesc
microproiectile de aur sau tungsten nvelite n materialul
genetic care trebuie ncorporat n protoplati
TRANSFERUL INDIRECT AL GENELOR.
TEHNICA ADN-ului RECOMBINAT IN VITRO
Este metoda care a dat rezultate mult mai bune dect
transferul direct, deoarece genele care urmeaz a fi
ncorporate n celulele int sunt incluse n vectori, ceea ce
mrete semnificativ probabilitatea de remanen i de
exprimare a materialului genetic exogen, care are astfel anse
mult mai mari dect la transferul direct de a nu fi distrus de
DN-azele celulare (enzime cu rol de degradare a materialului
genetic neinclus n cromozomi).

Vectorii au, de regul, material genetic format din molecule


circulare de ADN. Se folosesc n acest sens:
- virusuri (de obicei adenovirusuri): bacteriofagul ,
virusul SV 40, CaMV (virus ADN scurt - 8Kb - care determin
mozaicul conopidei) etc.;
- plasmide bacteriene. Cu rezultate bune, la plante, s-au
utilizat plasmidele Ti de la Agrobacterium tumefaciens i Ri
de la Agrobacterium rhizogenes .

ETAPE DE LUCRU:
a) Izolarea vectorului. Gena inclus n ADN-ul vectorului
va fi protejat de aciunea DN-azelor celulare digestive.

b) Izolarea sau sinteza de novo a genei de transferat n


celulele int.
Gena de transferat se poate obine prin urmtoarele
metode:
utilizarea enzimelor de restricie (endonucleaze de
restricie), care recunosc gena i fragmenteaz ADN-ul,
secionnd cele dou capete ale genei. Gena astfel detaat din
ADN urmeaz a fi identificat, captat i pregtit pentru
introducerea n vector
reverstranscripia (inverstranscripia) moleculelor de
ARNm.
utilizarea automatelor de sintetizat gene. Metoda
presupune sinteza de novo a genei, pe baza cunoaterii
succesiunii de nucleotide din alctuirea acesteia.

c) Deschiderea vectorului. Se realizeaz cu enzime de


restricie i trebuie astfel efectuat nct molecula circular de
ADN a vectorului s rmn funcional ndeosebi n privina
capacitii de autoreplicare, pentru a fi posibil multiplicarea
vectorilor recombinai.
d) Formarea de capete coezive la vector i gena de transferat
Pentru ca gena s fie inclus n vector este necesar ca
marginile ferestrei i capetele genei s prezinte nucleotide
complementare, care s poat fi apoi legate (sudate) de ctre
enzimele ADN-ligaze. Dac nu exist aceste nucleotide
complementare, ele trebuie adugate cu ajutorul unor enzime
denumite transferaze terminale. n zonele de sudare (legare)
vectorul trebuie s conin dA (dezoxiadenozin) iar gena de
inclus dT (dezoxitimidin), sau invers, ori dG respectiv dC,
sau invers.
e) Legarea genei la vector. Se face cu o ADN-ligaz

f) Transferul vectorului recombinat n celulele int


Trebuie create condiii pentru acceptarea ADN-ului
exogen, de exemplu prin: mediul de cultur folosit, faza
ciclului mitotic din momentul transferului, anumite condiii
fiziologice .a.
g) Clonarea celulelor transformate genetic, care se poate
realiza prin metode specifice de multiplicare in vitro.
h) Identificarea chimic a reuitei transformrii genetice
Aceasta se poate realiza pe dou ci:

prin identificarea ADN recombinat. O metod folosit n


acest scop este hibridizarea in situ, care const n
identificarea secvenei de ADN exogen ntr-un test de
hibridizare cu ADN sau ARN radioactiv complementar.
Existena pasajului de ADN exogen cuplat cu cel radioactiv
complementar se poate evidenia pe film radiosensibil;
prin identificarea produsului sintetizat de gena transferat,
care se face prin analiza chimic a mediului de cultur care
conine celulele transformate genetic.

Transferul de gene n celul vegetal cu ajutorul


plasmidului Ti
de la Agrobacterium tumefaciens (dup B a d e a et R a i c u, 1984 din

Figura 158

L u c u D n i l et L u c u D n i l , 1998)

LA ARBORI experimente de transfer indirect al genelor cu


ajutorul plasmidelor Ti i Ri
s-au obinut exemplare de Pinus strobus rezistente la
Cronartium ribicola (M i c h l e r, 1996);
- la Populus tremula i Pinus halepensis s-au transferat
genele care codific proteinele GUS i NPT II, cu rol n
dezvoltarea rdcinilor adventive (A l t m a n, 1996);
la Pinus taeda, s-a reuit transferal unei gene care
determin rezisten sporit la secet (N e w t o n, 1995);
- la Populus sp., s-a reuit izolarea genei care produce
enzima denumit lacaz, care intervine n depozitarea ligninei,
deci n creterea capacitii de bioacumulare. S-a ncercat
transferul acestei gene prin metoda bombardrii cu
microproiectile (E c h t, 1995);
la Pinus radiata, s-a reuit transformarea genetic a
embrionilor produi in vitro, prin bombardarea
cu
microproiectile (W a l t e r et al., 1994 citat de
Moroh
o s h i et al., 1995);
- la Populus sp. s-a reuit transferul unei gene care poate
produce proteine cu efecte antifungice, n scopul anihilrii sau
reducerii impactului ciupercilor duntoare;
- gena aro A transferat la plopi cu ajutorul vectorului
Agrobacterium tumefaciens, avnd ca efect inducerea de
rezisten fa de ierbicidul glifosat, aplicat n cantitate de 0,07
kg/ha;

- gena LEAFY (LFY) de la Arabidopsis thaliana, care


codific nflorire timpurie, transferat la hibridul Populus
tremula x P. tremuloides nflorire dup numai 7 luni (fa
de 8 20 ani!).
- gene care modific nivelul fitohormonilor
EXEMPLU: gena GA 20 oxidase izolat dela Arabidopsis,
transferat la hibrizi de Populus tremula creteri active,
frunze mai mari, fibre de xilem mai numeroase i mai lungi;
- gen care determin scderea cantitii de lignin la
plopi, n vederea reducerii costurilor de extragere a ligninei n
industria celulozei i hrtiei, diminundu-se totodat i
poluarea chimic n astfel de procese industriale;
- gena Bt care determin sinteza unei proteine inhibitoare
care se cupleaz cu glicoproteine epiteliale din intestinul
insectelor ( Lymantria dispar; Dendroctomus frontalis etc.)
care atac diferii arbori
EXEMPLU: la Picea glauca gena care produce o
proteinaz inhibitoare care are efecte mortale n proporie
de circa 90% asupra larvelor care rod mugurii (K i n l a v et
H a r r y, 1994);