MINISTERUL EDUCAȚIEI NAȚIONALE

UNIVERSITATEA “OVIDIUS” CONSTANȚA

FACULTATEA DE ȘTIINȚE APLICATE ȘI INGINERIE
CHIMIE ȘI MANAGEMENTUL CALITĂȚII PRODUSELOR DE
CONSUM ÎN RELAȚIE CU MEDIUL
ANUL I

PROIECT LA DISCIPLINA
ELEMENTE DE CHIMIE
BIOANORGANICĂ

MASTERAND:
MUSTAFA INDIRA

CONSTANȚA
2022-2023
 MINISTERUL EDUCAȚIEI NAȚIONALE
UNIVERSITATEA “OVIDIUS” CONSTANȚA
FACULTATEA DE ȘTIINȚE APLICATE ȘI INGINERIE
CHIMIE ȘI MANAGEMENTUL CALITĂȚII PRODUSELOR DE
CONSUM ÎN RELAȚIE CU MEDIUL
ANUL I

MOLIBDENUL

MASTERAND:
MUSTAFA INDIRA

CONSTANȚA
2022-2023
 CUPRINS

1. Scurt istoric.....................................................................................................................4

2. Caracteristici generale.....................................................................................................4

3. Element esențial..............................................................................................................9

3.1. Surse........................................................................................................................9

3.2. Importanța metalului pentru organismele vii............................................................10

3.3. Toxicocinetica...........................................................................................................11

3.3.1 Mecanismul toxicității.........................................................................................12

3.3.2 Management clinic...............................................................................................13

4. Metaloenzime...................................................................................................................13

4.1 Studiul molibdenului..................................................................................................13

4.2 Enzime........................................................................................................................14

4.2.1.Familia Xantin Oxidazelor...................................................................................17

4.2.2.Familia Sulfit Oxidaze.........................................................................................28

4.2.3.Familia dimetilsulfoxid reductazei......................................................................32

4.3.Nitrogenaza Fixarea....................................................................................................36

4.2.1.Structura situsului activ al Nitrogenazei..............................................................37

4.2.2.Analogi structurali ai nitrogenazei.......................................................................38

4.2.3.Reducerea N2........................................................................................................38

BIBLIOGRAFIE..................................................................................................................39
 1. Scurt istoric
Mineralele de molibden sunt cunoscute de mult timp, dar elementul a fost
identificat ca un material specific în 1778 de către farmacistul german Carl Wilhelm
Scheele care a descompus molibdenitul încălzindu-l în aer pentru a produce o pulbere de
oxid alb.
Ulterior, a fost izolat în 1781 de chimistul suedez Peter Hjelm, când a stabilit că
molibdenul nu era nici grafit, nici plumb, prin reducerea oxidului cu carbon și ulei de in
pentru a obține o pulbere metalică închisă pe care a numit-o molibden.
Termenul molibden provine din latină Molybdaenum sau din greaca Μόλυβδος,
adică asemănător plumbului, deoarece minereurile sale erau ușor confundate cu
minereurile de plumb. Molibdenul nu apare ca metal liber, ci mai degrabă în diferite stări
de oxidare în minerale precum wulfenitul (PbMoO) 4), powellite (CaMoO4), și molibdenită
(MoS2), ceea ce face dificilă izolarea și utilizarea comercială.
În 1906, William Coolidge, un fizician la General Electric, a dezvoltat o metodă de
utilizare a molibdenului în cuptoare și becuri. Curând după aceea, a fost dezvoltat un
proces de recuperare mai eficientă a molibdenului din minereuri, creând scena pentru
utilizarea comercială sporită ca aliaj pentru întărirea oțelului.

2. Caracteristici generale
Molibdenul este un metal tranzițional de culoare gri metalic din grupa a VI-a B
între crom și wolfram, din tabelul periodic.
Tabel 2.1 Caracteristicile generale ale Molibdenului.
Simbol Mo
Număr atomic 42
Categoria elementului Metal tranzițional
Stare Solidă
Culoare Gri metalic
Grupa 6
Perioada 5

Atomii de molibden prezintă 42 de electroni iar structura învelișului electronic este

[2, 8, 18, 13, 1].

4
 Tabel 2.2. Caracteristicile molibdenului și proprietățile orbitalilor
Număr atomic 42
Numărul de electroni 42
Numărul de protoni 42
Numărul de neutroni 54
Masa atomică 95,94
Structura învelișului electronic [2, 8, 18, 13, 1]
Configurația electronică 1s 2s p 3s2p6d10 4s2p6d5 5s1
2 2 6

Electroni de valență 4d5 5s1

Valența 6
Posibile stări de oxidare +6, +5, +4, +3, +2, +1, -1, -2, -4

În figura 2.1 este reprezentată structura învelișului electronic, iar în figura 2.2 este
reprezentată schematic configurația electronică a molibenului.

Figura 2.1 Învelișul electronic al Molibdenului

5
 Figura 2.2 Configurația electronică

Molibdenul prezintă o structură cubică cu volum centrat (figura 2.3), având o rază
atomică de 190 pm și o rază covalentă de 145 pm. În tabelul 1.3 sunt reprezentate
caracteristicile structurii.

Figura 2.3 Cub cu volum centrat

Tabel 2.3 Caracteristici ale structurii

Raza atomică 190 pm (1,9 Å)
Volumul atomic [cm3] 9,3326848249
Raza covalentă 145 pm (1,45 Å)
Raza Van der Waals 245 pm (2,45 Å)
Raza legăturii simple 138 (1,38 Å)
Raza legăturii duble 121 (1,21 Å)

6
 Raza legăturii multiple 113 (1,13 Å)
În figura 2.4 este sunt reprezentate spectrele atomice

Figura 2.4 Spectrele de absorbție și emisie

Tabelul 2.4 redă informații despre tipurile de coordonare ce le prezintă molibdenul

în funcție de numărul de ioni prezenți
Tabel 2.4 Tipurile de coordonare ale molibdenului
Ion Tipul de coordonare Raza (pm)
Mo(V) Coordinare-4, tetraedric 60
Mo(VI) Coordinare-4, tetraedric 55
Mo(III) Coordinare-6, octaedric 83
Mo(IV) Coordinare-6, octaedric 79
Mo(V) Coordinare-6, octaedric 75
Mo(VI) Coordinare-6, octaedric 73

Figura 2.5 Exemple de structură tetraedrică și octaedrică

Molibdenul prezintă izotopi 83Mo-115Mo, dintre care doar 7 din ei prezintă stabilitate
(92Mo, 94Mo, 95Mo, 96Mo, 97Mo, 98Mo, 100Mo) și sunt prezentați în figura 2.6.

7
 Figura 2.6 Izotopi stabili

Izotopul 95Mo este utilizat pentru producerea radioizotopului medical Ru-97. 96Mo
este utilizat pentru producerea radioizotopilor Tc-96 și Tc-95m, ambii având o aplicații
medicale. Majoritatea izotopilor Mo sunt utilizați și în studiile de nutriție. 95Mo epuizat a
fost sugerat pentru utilizare în elementele de combustibil UMo pentru reactoarele de testare
a materialelor (flux mare).

Proprietățile fizice ale molibdenului sunt rreprezentate în tabelul 2.5.

Tabel 2.5 Proprietăți fizice ale molibdenului
Densitate [ g/cm3] 10,22
Punct de topire [℃ ] 2623
Punct de fierbere [℃ ] 4639
Căldura specifică [ J / g ∙ K ] 0,25
Conductivitate termică [W /m∙ K ] 138
Conductivitate electrică [ S/m ] 1,73∙107
Rezistența electrică 5,7
Duritate (Scara Mohs) 5,5

8
3. Element esențial
3.1. Surse
Molibdenul poate fi extras ca minereu principal și este, de asemenea, recuperat ca
produs secundar al exploatării cuprului și wolframului.
Alți compuși ai molibdenului întâlniți în mod obișnuit includ trioxidul de molibden,
molibdatul de sodiu, Na2MoO4∙2H2O și di- și heptamolibdat de amoniu (NH 4)2Mo2O7, și
(NH4)6Mo7O24∙4H2O. În soluție apoasă, molibdenul este prezent ca molibdat simplu
[MoO4]2- ion care este similar cu sulfatul sau cu un ion polimeric polimolibdat. Starea de
oxidare inferioară se găsește în cel mai comun minereu de molibden, disulfura, MoS2.
Principala sursă de molibden este ingerarea cu apă sau alimente. Conținutul de
molibden variază foarte mult între clasele de alimente care compun dieta umană, în special
în raport cu tipul de sol din care sunt derivate. Molibdenul se găsește în legume cu frunze
verzi, leguminoase (fasole, linte), cereale, semințe de floarea soarelui, carne (organe) și
lapte. Fructele, fructele de pădure, majoritatea leguminoaselor rădăcinoase, carnea
(mușchi) și zahărul sunt surse sărace în molibden, totuși, s-au găsit concentrații mari în
crustacee și pești, care conțin aproximativ 1 mg/kg, și plante, care conțin 0,03–5 mg/kg.
Nivelurile de molibden din apa potabilă variază de la 0 la 68mg/l, dar de obicei nu
depășesc 10 mg/l. Bioconcentrația la majoritatea peștilor pare să fie dependentă de
concentrația de expunere, deoarece s-a demonstrat că la concentrații scăzute din mediu,
molibdenul este concentrat, în timp ce la concentrații mari de mediu nu este concentrat.
Nivelurile de molibden sunt crescute în flora terestră în apropierea surselor
antropomorfe, cum ar fi minerit, uzinele de combustibili fosili și siturile de deșeuri
industriale. În aceste zone, concentrațiile de molibden în pești, animale sălbatice și
nevertebrate au fost scăzute în comparație cu cele din plantele terestre; prin urmare, poate
exista o anumită bioconcentrare în floră.
În plus, flora și fauna acvatică par a fi relativ rezistente la sărurile de molibden și
aceste dovezi indică în continuare o lipsă de bioacumulare la pești. Molibdenul se găsește
în mod natural în soluri la concentrații de fond variind între 0,2 și 6 mg/kg, în timp ce
solurile bogate în metale pot conține 10–100 mg/kg.
Arderea cărbunelui este cea mai mare sursă atmosferică de molibden. În apă,
molibdenul există în principal ca ion molibdat sau diferiți compuși polimerici în funcție de
pH. În soluri, molibdatul este absorbit în principal cu conținut ridicat de calciu și clorură, și
au retenție mai mică în solurile cu conținut scăzut de sulfat.

9
 Molibdenul nu pare a fi absorbit pe cale dermică. Pulberile și fumurile de molibden,
care pot fi generate de minerit sau prelucrarea metalelor, pot fi inhalate. Concentrațiile de
molibden din aerul ambiant sunt în mod normal scăzute în comparație cu alte
oligoelemente; în zonele urbane, molibdenul a variat între 0,01 și 0,03 mg/m -3, iar în
zonele nonurbane a variat între 0,001 și 0,0032 mg/m-3.

În tabelul de mai jos este reprezentată cantitatea de molibden din diverse medii.
Tabel 3.1 Cantitatea de molibden în mediu
Localizare ppb/greutate ppb/atomi
Univers 5 0,1
Soare 9 0,1
Meteoriți 1200 250
Scoarța terestră 1100 230
Mări și Oceane 10 0,64
Râuri 0,8 0,008
Corpul uman 100 7
ppb=10-7%

3.2. Importanța metalului pentru organismele vii

Molibdenul este un oligoelement esențial atât pentru animale, cât și pentru plante;
prin urmare, urmele de molibden sunt benefice și poate esențiale pentru creșterea și
dezvoltarea normală a plantelor și animalelor.
La mamifere, molibdenul este o componentă a anumitor metaloflavoproteine,
inclusiv xantin oxidaza, sulfit oxidaza și aldehid oxidaza, și protejează împotriva otrăvirii
cu cupru, mercur și alte metale și poate avea proprietăți anticancerigene.
La plante, este necesar pentru fixarea azotului atmosferic de către bacterii la
începutul sintezei proteinelor.
Pentru toate organismele, interpretarea reziduurilor de molibden depinde de
cunoașterea nu numai a molibdenului, ci și a concentrațiilor de cupru și sulfat anorganic
din dietă și din țesuturi. Nivelurile recomandate de aport de molibden sigur și adecvat
pentru:
sugari: 0,015-0,04/zi
copiii cu vârsta cuprinsă între 1-10 ani: 0,025–0,15 mg/zi
toți indivizii cu vârsta mai mare de 10 ani: 0,075-0,25 mg/zi
Absorbția gastrointestinală reprezintă o parte semnificativă a cantității ingerate și
depinde de solubilitatea în apă a compusului implicat. Ingerarea molibdenului solubil în
10
apă poate crește absorbția, iar toxicitatea poate fi mai mare decât cea a compușilor
nesolubili în apă.
Corpul uman conține aproximativ 0,07 mg de molibden pe kilogram, cu
concentrații mai mari în ficat și rinichi și în concentrații mai mici la vertebre. Aportul
mediu zilnic de molibden variază între 0,12 și 0,24 mg, dar depinde de conținutul de
molibden al alimentelor. Carnea de porc, mielul și ficatul de vită au fiecare aproximativ 1,5
părți per milion de molibden. Alte surse alimentare importante includ fasolea verde, ouăle,
semințele de floarea soarelui, făina de grâu, lintea, castraveții și cerealele.
Sunt disponibile puține date despre toxicitatea umană a molibdenului; cu toate
acestea, în 1961, un sindrom asemănător gutei a fost asociat cu expunerea excesivă (10-15
mg pe zi-1) la molibden. Boala a apărut la armenii care trăiau în zone bogate în molibden,
care a produs hiperuricemie, artralgii, eritem, edem și deformări ale genunchilor, mâinilor
și picioarelor. Deși cauza exactă a acestei boli rămâne de stabilit, este de intrigant faptul că
solul are concentrații neobișnuit de mari de molibden.

3.3. Toxicocinetica
Compușii de molibden solubili în apă sunt absorbiți cu ușurință prin plămâni și
tractul gastrointestinal. Rata de absorbție gastrointestinală a molibdenului este influențată
de forma sa chimică și de specia animală; de exemplu, molibdenul hexavalent este ușor
absorbit, în timp ce molibdenul tetravalent nu este absorbit ușor după administrarea orală.
Molibdații, tiomolibdații și oxotiomolibdații solubili în apă și molibdenul din ierburi și
legumele verzi sunt absorbite în proporție de 75-97% de animalele de laborator și
rumegătoare. La animale, absorbția variază între 75- 97%, în timp ce la om, absorbția
molibdenului se face prin tractul digestiv, 28–77%. Nu se știe dacă molibdenul din apa de
băut este absorbit mai rapid decât cel conținut în alimente.
După absorbție, molibdenul apare rapid în sânge, unde se leagă α 2-
macroglobulinele sub formă de molibdat și sunt distribuite în întregul corp, cele mai
ridicate niveluri se găsesc în general în ficat, rinichi, splină și oase. La rozătoare,
molibdenul este distribuit în principal în ficat, transformat în molibdat printre care un
procent de 36-90% din doza totală este excretată în urină, mai puțin de 1% în bilă și o
cantitate minimă în fecale. La iepuri și cobai, molibdenul se depune în țesuturi în decurs de
4 ore de la nivelurile inițiale ridicate din sânge și bile și este eliminat în 72 de ore prin
rinichi. Nu există o bioacumulare aparentă de molibden în țesuturile umane.

11
 Timpul de înjumătățire biologic al molibdenului este estimat a fi de până la câteva
săptămâni la oameni, în timp ce timpul de jumătate biologic variază de la câteva ore la
câteva zile la animalele mici de laborator. Datele sugerează că 25-50% dintr-o doză orală
este excretată prin urină, cu cantități mici eliminate în bilă. Mai mult de 50% din molibden
este excretat în principal prin rinichi, cu aproximativ 6% excretat prin bilă atunci când este
prezent un exces de molibden.
La rozătoare, compușii de molibden sunt excretați în mare parte prin urină și doar
într-o mică măsură în fecale. Timpul biologic de înjumătățire poate varia de la câteva ore la
animalele de laborator până la câteva săptămâni la om. Marea majoritate a molibdenului
găsit în ficat este concentrat în membrana exterioară a mitocondriilor, unde este disponibil
ca cofactor în reacțiile enzimatice. Aportul și excreția de molibden sunt echilibrate la
majoritatea speciilor nerumegătoare, inclusiv la oameni. Molibdenul este excretat rapid în
primul rând, prin urină, ca molibdat.
Metabolismul molibdenului este legat de metabolismul cuprului și sulfului. La
animale, molibdenul interacționează într-un mod complex cu cuprul și sulfatul printr-un
mecanism care nu este bine înțeles. Animalele care urmează diete cu deficit de cupru sunt,
în general, mai susceptibile la toxicitatea molibdenului decât cele cu diete adecvate cu
cupru. Timpul biologic de înjumătățire variază de la câteva ore la câteva zile la animalele
mici de laborator și este legat de metabolismul cuprului și sulfului. Molibdenul este prezent
la om, cu un conținut mediu total pentru adulți de 9 mg, cu niveluri sanguine în medie de
aproximativ 5 ng/ml.

3.3.1 Mecanismul toxicității

În mod normal, enzimele care conțin molibden catalizează reacțiile metabolice de
bază în ciclurile carbonului, sulfului și azotului. La plante, molibdenul acționează ca un
activator enzimatic pentru metabolismul azotului prin reacții cu nitrogenază, o nitrat
reductază. În consecință, deficitul de molibden în leguminoase produce efecte similare cu
deficitul de azot. La mamifere, tipurile de reacții care implică enzime care conțin molibden
includ transferul atomilor de oxigen la sau de la perechea de electroni a unui substrat și
hidroxilarea oxidativă a aldehidei și a compușilor aromatici.
Molibdenul este un constituent esențial al aldehid-oxidazei, xantin-oxidazei/
dehidrogenazei și sulfit-oxidazei, toate care catalizează reacțiile de oxidare-reducere.
Molibdopterina menține atomul de molibden la locul activ al proteinei în reacții a ciclurilor

12
sulfului și carbonului. Un deficit de molibdopterina a fost asociat cu atrofie cerebrală
severă.
Molibdenoza sau lacrima este o formă de toxicitate a molibdenului care produce o
boală la rumegătoare similară cu deficitul de cupru, în care tritiomolibdatul modifică în
cele din urmă distribuția și eliminarea cuprului. Semnele de toxicitate pentru molibden la
animale includ anemie, anorexie, diaree profundă, anomalii articulare, osteoporoză,
decolorarea părului, activitate sexuală redusă și moarte.
Există puține date disponibile cu privire la toxicitatea molibdenului pentru oameni.
Un sindrom asemănător gutei și pneumoconioza au fost asociate cu concentrații excesive
de molibden, dar designul inadecvat al studiilor împiedică o determinare adecvată a
etiologiei acestor efecte.

3.3.2 Management clinic

Nu există un antidot pentru toxicitatea molibdenului; cu toate acestea, tratamentul
constă în sprijinirea funcțiilor respiratorii și cardiovasculare și iritația pielii, ochilor și
respiratorii sunt tratate simptomatic. Măsurile obișnuite pentru decontaminarea tractului
gastrointestinal (lavaj, vomă și cărbune activat) pot fi utilizate în primele 1-2 ore după
ingestie. În majoritatea circumstanțelor, toxicitatea acută minimă a molibdenului limitează
necesitatea măsurilor de decontaminare în urma ingerării unor doze de 100 mg.
Asocierea toxicității crescute a molibdenului cu deficiențele de cupru și sulfat
sugerează că dietele bogate în aceste substanțe pot îmbunătăți recuperarea după ingestia
cronică de molibden, dar nu sunt disponibile date care să evalueze eficacitatea acestor
suplimente.

4. Metaloenzime
4.1 Studiul molibdenului
Începând cu anul 1930 molibdenul a început să fie folosit în creșterea tuturor
plantelor mai puțin a unor alge albastre-verzi. Esențialitatea sa pentru oameni și animale a
fost descoperită câțiva ani mai târziu.
Inițial molibdenul a fost caracterizat ca un element toxic datorită apariției unei
maladii ce apărea la bovine, datorită concentrației mari de molibden din soluri. Această
boală se manifesta prin diaree până cand ajungea la slăbirea animalului și decolorarea
blănii sale. Asemănarea acestui sindrom cu deficiența de cupru și tratarea animalelor cu

13
cupru pentru a controla aceasta maladie a dus la ideea că metabolismul cuprului este
influențat de ingestia în cantități mari a molibdenului.
În 1949, Westerfeld și Richert au stabilit că este nevoie de factori alimentari pentru a
menține buna activitate a enzimei xantin oxidazei (XO) din ficatul și intestilele șobolanilor
înțărcați. Acești factori erau proteinele, fiboflavinele și înca un factor necunoscut numit
“factor de reziduu”, care mai târziu a fost numit factor XO. Acest factor a fost izolat și
identificat ca sare de molibdat. A fost prima demonstrație a molibdatului în a avea un rol în
nutriția animalelor și prima asociere a sa cu o enzimă.
Mai târziu, în anii următori, s-a demonstrat că molibdenul poate fi un componet
necesar și altor enzime: aldehid oxidaza (AO) și sulfit oxidaza (SO).

4.2 Enzime
În ultimii câțiva ani, numărul de enzime despre care se știe că posedă centri
mononucleari de molibden în situsurile lor active a crescut semnificativ și au fost
identificate peste 50 de astfel de enzime care catalizează o varietate de hidroxilare, transfer
de atomi de oxigen și alte oxidări. -reacţii de reducere.
Molibdenul este un element metalic esențial pentru marea majoritate a organismelor,
de la arhee și bacterii până la plante și mamifere superioare, fiind găsit în situsul activ al
enzimelor care catalizează (în mare parte) reacții de oxido-reducere care implică transferul
unui atom de oxigen, sulf sau hidrogen la/de la un atom de carbon, azot sau sulf al
metaboliților.
În afară a câtorva excepții, unde „proteina portocalie” sau nitrogenaza cu cofactorul
heteronuclear unic molibden/fier, toate molibdoenzimele adăpostesc un ion de molibden
coordonat de cis-ditiolenă (-S-C=C-S-) grup de una sau două molecule de cofactor de
piranopterină (Figura 4.1).

Figura 4.1 Cofactorul Piranopterină

Molecula cofactorului piranopterină este formată din pirano (verde)-pterin(albastru)-
ditiolen (roșu)-metilfosfat(negru) fragmente. Ditiolena (dSdC]CdSd) gruparea formează un

14
inel chelat ene-1,2-ditiolat cu cinci membri cu ionul de molibden. La eucariote, cofactorul
se găsește în cea mai simplă formă monofosfat (R este un atom de hidrogen), în timp ce la
procariote se găsește cel mai adesea esterificat cu mai multe nucleotide (R poate fi un
monofosfat de citidină, monofosfat de guanozină sau monofosfat de adenozină).
Sfera de coordonare a ionului de molibden este completată de atomi de oxigen și/sau
sulf și/sau seleniu, într-o diversitate de aranjamente, care stă la baza clasificării
molibdoenzimelor mononucleare în trei mari familii, denumite după o enzimă de referință:
familia xantin oxidazei (Figura 4.2), familia sulfit oxidazei (Figura 4.3) și familia
dimetilsulfoxid-reductazei (Figura 4.4).

Figura 4.2 Familia xantin oxidaza

X = S, Se, O, S-Cu-S(Cys)
Hidroxilazele de molibden, o familie mare și larg dispersă de enzime care posedă o
unitate MoOS și catalizează hidroxilarea unei game largi de aldehide și heterocicluri
aromatice.

Figura 4.3 Familia sulfit oxidaza

Oxotransferazele eucariote, o familie care include în prezent doar sulfit oxidaza și
nitrat reductaze asimilatoare, enzime care posedă un MoO 2 unitate în situsurile lor active și
care catalizează transferul atomului de oxigen către sau de la un substrat.

15
 Figura 4.4 Familia sulfit oxidaza
X,Y = O, S, Se, Asp, Ser,Cys, SeCys
Enzime procariote care catalizează fie transferul de oxo atom, fie alte reacții de
oxidare-reducere. Enzimele acestui ultim grup au o structură centrală comună a
molibdenului în care metalul este coordonat de o pereche de liganzi ditiolen contribuiți de
un cofactor pterin neobișnuit.
În timp ce primele două familii posedă doar un singur echivalent legat de metal, în
membrii celei de-a treia familii există doi echivalenți ai coordonatei cofactorului cu
metalul. Trebuie subliniat faptul că acest grup final este structurat mai divers decât primele
două și poate fi subdivizat în enzime care posedă un Mo-O(Ser), Mo-S(Cys) sau Mo-
Se(Se-Cys) grupul contribuit de polipeptidă; în plus, unele dintre aceste enzime par să
posede un Mo=S, mai degrabă decât cel mai frecvent întâlnit Mo=O.
În prezent, sunt cunoscute peste 50 de molibdoenzime, iar numărul acestor
metaloenzime crește în fiecare an, urmând a fi identificate mai multe în viitorul apropiat,
pe baza analizelor genomice. Marea majoritate a molibdoenzimelor sunt procariote,
eucariotele deținând doar un număr limitat de molibdoenzime (mamiferele, de exemplu, au
doar patru).
În ultimii ani, studiile structurale, spectroscopice, cinetice și teoretice au oferit o
imagine detaliată a enzimelor mononucleare care conțin molibden. În prezent, mai multe
molibdoenzime pot fi descrise cu detalii atomice și electronice cu privire la centrii lor
activi de molibden, ceilalți centri redox-activi prezenți și structura generală.
De asemenea, mecanismele lor de reacție pot fi descrise cu detalii atomice și
electronice pentru fiecare intermediar catalitic și au fost stabilite relații cheie structură-
activitate. Acest articol oferă o privire de ansamblu asupra celor trei familii de enzime care
conțin mononuclearmolibden, concentrându-se pe aspectele structurale (secțiunile „Mașini
enzimatice”) și mecanice (secțiunile „Strategii mecanice”) ale membrilor cel mai bine
caracterizați.
Multe dintre aceste enzime au fost izolate fie din anaerobi obligați, fie din anaerobi
facultativi cultivați în condiții anaerobe sau microaerobe și sunt implicate într-o varietate
de căi metabolice anabolice, catabolice și de conservare a energiei. Acolo sunt acum mai
multe enzime cu structură cristalină cunoscută, iar această nouă informație structurală a
oferit

16
baza pentru o înțelegere din ce în ce mai detaliată a mecanismelor de acțiune a acestor
enzime.
Mo se găsește fie ca parte a unui grup multinuclear cu fier (cluster M) în
nitrogenaze, fie ca centru mononuclear în toate celelalte enzime.

În ultimii ani, numărul de enzime cunoscute care posedă Mo în situsul lor activ a
crescut remarcabil și noile informații structurale au oferit o mai bună înțelegere a
mecanismelor de reacție a enzimelor Mo.
Având în vedere tipul de reacții catalizate, enzimele Mo pe bază de pterina pot fi
împărțite în două grupe, adică enzimele aparținând familiei xantinoxidazei, care catalizează
hidroxilarea oxidativă a aldehidelor și compușilor heteroaromatici și enzimele aparținând
familiilor DMSO reductază și sulfit oxidazelor, care catalizează transferul atomului de
oxigen către sau de la o pereche de electroni a unui substrat.
Ciclul dintre stările de oxidare ale Mo (Mo (IV) și (VI) în stările reduse și,
respectiv, oxidat) este comun tuturor reacțiilor și ciclul general de reacție constă dintr-o
pereche de semireacții oxidative și reductive. O stare de oxidare intermediară a Mo
(Mo(V)) este generată în timpul transferului de electroni.

4.2.1.Familia Xantin Oxidazelor

Enzimele din familia xantinoxidazei sunt prezente atât în eucariote, cât și în
procariote. Enzimele eucariote din familia xantin oxidazei includ xantin oxidaza (XO),
xantin dehidrogenaza (XDH) și aldehidooxidaza, care în general sunt homodimeri α2.
XO și XDH de mamifere sunt produse ale aceleiași gene, interconversia post-
translațională având loc așa cum este descris în detaliu mai jos. Aceste proteine conțin trei
domenii de legare a cofactorilor pe o singură polipeptidă: un domeniu N-terminal, care
leagă două grupuri [2Fe2S] FeSI și FeSII, un domeniu central, care leagă FAD și un
domeniu C-terminal, care leagă Moco în forma de Mo-MPT așa cum a fost prezis din
analizele secvenței primare de aminoacizi Fiecare domeniu este conectat printr-o regiune
linker flexibilă. În bacterii și arhee, enzimele din familia xantinoxidazei sunt mai diverse și
includ CO dehidrogenaze, precum și enzime care metabolizează compuși înrudiți cu
chinolinei și derivați ai acidului nicotinic Rhodobacter capsulatus xantin dehidrogenaza,
Desul-fovibrio oxidoreductase, Pseudomonas putida chinolin-2-oxidoreductaza,
Eubacterium barkeri nicotinat dehidrogenaza, Oligotro-pha carboxidovorans CO
dehidrogenaza și Thaurea aromatica 4-hidroxi-benzoil-CoA reductaza sunt printre cele mai

17
bine caracterizate enzime bacteriene din fiecare structură și enzime bacteriene din această
familie. În general, centrii redox-activi ai membrilor bacterieni și arheali din familia
xantinoxidazei se găsesc în subunități separate și au fost identificate excepții de la
compoziția generală a cofactorilor (Figura 6.2). Dintre xantino-oxidoreductazele bacteriene
sunt reprezentative enzimele caracterizate din R. capsulatus, Comamonas acidovorans si
Veillonella atypica. Aceste enzime sunt organizate fie ca heterodimeri (αβ)2 și conțin Mo-
MPT ca cofactor (R. capsulatus, C. acidovorans), fie ca heterotrimeri αβγ care conțin
cofactorul MCD (V. atypica).
În enzimele din R. capsulatus și C. acidovorans, domeniile care conțin cofactor
pentru cele două grupuri [2Fe–2S] și FAD se găsesc într-o subunitate, în timp ce cofactorul
Mo-MPT se găsește într-o secundă. În enzima din V. atypica, cei doi cofactori [2Fe–2S],
cofactorul FAD și cofactorul MCD se găsesc fiecare în subunități separate. În mod
surprinzător, o dimerizare prin domeniul/subunitatea care conține Moco nu a fost raportată
pentru enzima din V. atypica.
Alte enzime din familia xantinoxidazei de origine bacteriană includ aldehid
oxidoreductaze și chinolină/chinaldin oxidaze. Prima structură cu raze X a unei enzime din
familia xantinoxidazei a fost obținută din aldehid oxidoreductaza (MOP) din Desulfovibrio
gigas. Această enzimă nu are domeniul cofactor FAD și este sintetizată ca un dimer α2 cu
cele două grupuri [2Fe2S] și cofactorul MCD într-un singur lanț polipeptidic. În plus,
enzima este până acum singura excepție a enzimelor din această familie, deoarece nu
conține ligand sulfido ecuatorial la locul activ (discutat mai detaliat mai jos). O altă enzimă
pentru care structura cristalină a fost rezolvată este chinolin-2-oxidor-ductaza din
Pseudomonas putida. Această enzimă este un heterotrimer (αβγ)2, cu cei doi centri [2Fe–
2S], cofactorul FAD și MCD. cofactorul fiind situat pe un lanţ polipeptidic separat fiecare.
O compoziție similară a cofactorilor și organizarea subunității a fost identificată pentru
quinaldin-4-oxidoreduct-taza de la Arthrobacter sp. Rü61a, și chinolin-4-carboxilat-2-
oxidoreductaza58 sau acid chinaldic-4-oxidoreductaza din Pseudomonas sp. Enzimele
izochinolin-1-oxidoreductaza din Brevundimonas diminuta și acid-4-oxidoreductaza
chinaldic din Serratia in marcescens, contrast, sunt abeterodimeri.
Un alt grup de enzime din familia xantinoxidazei conține caracteristici speciale fie
la locul activ al molibdenului, fie în compoziția cofactorului/subunității. Aceste enzime
includ CO dehidrogenaza din O. carbox-idovorans, nicotinat dehidrogenaza din E. barkeri
și 4-hidroxi-benzoil-CoA reductaza din Thaurea aromatica. CO dehidrogenaza este unică
prin faptul că conține un situs activ binuclear cu un cupru. atomul coordonat cu atomul de

18
molibden printr-o punte µ-sulfido, formând un centru binuclear Mo–S–Cu-(S-Cys388).
Moco este prezent ca un cofactor MCD, iar enzima formează un heterotrimer (αβγ)2 . În
schimb, la locul activ al nicotinatului dehidrogenazei care conține MCD, ligandul sulfido
este înlocuit cu un ligand sel-enido.50 Această enzimă este, de asemenea, unică prin faptul
că este un heterotetramer (αβγδ)2, cu porțiunea de legare a molibdenului a proteina fiind
divizată în două polipeptide separate. 4-hidroxibenzoil-CoA-reductaza din T. aromat-ica
este un heterotrimer αβγ și, de asemenea, nu se dimerizează prin subunitatea Moco care
conține MCD. Aici, un grup suplimentar [4Fe–4S] a fost identificat în Subunitate care
conține FAD care se presupune că este implicată în transferul de electroni de la ferredoxină
pentru reducerea 4-hidroxibenzoil-CoA la situsul activ MCD.
Familia de enzime xantin oxidaze constă din enzimele bine studiate xantin
oxidoreductază (XOR) și aldehidă oxidază (AOX) de la eucariote, precum și mai multe
omologi procariote, inclusiv xantin dehidrogenaza, CO dehidrogenază și nicotinat
dehidrogenaza. Aceste enzime au fost printre primele care au fost investigate într-o formă
purificată.
Xantin oxidoreductaza bovină este membrul prototip al acestei familii de enzime și
a fost descrisă pentru prima dată ca enzimă oxidantă aldehidă (formaldehidă) (AOX) în
prezență de albastru de metilen în laptele de vacă în 1902 4 ca „enzima Schardinger”. Pe de
altă parte, enzima care a transformat hipoxantină în xantină și xantină în acid uric atât în
condiții aerobe cât și anaerobe (cu albastru de metilen) a fost găsită în laptele de vacă și, de
asemenea, în diferite organe ale șobolanului și boului. Totuși, a fost demonstrat în 1926,
acel lapte de vacă XO era identic cu AOX numit anterior, care fusese descris prin studii de
cinetică cu enzima parțial purificată. Astfel, laptele conține o enzimă numită mai târziu
XO.
Enzima XO purificată a fost obținută în 1936 și s-a dovedit a fi o proteină fier-sulf
care conține flavină din spectrul de absorbție. Ulterior s-a descoperit că enzima conține
molibden, care s-a dovedit a fi esențial pentru activitate. Studiile asupra XOR din laptele
de vacă au fost astfel efectuate de peste 110 ani de la descoperirea sa în 1902 , iar enzima
este una dintre cel mai bine studiate ce conține flavoproteine.
Enzimele din familia xantinoxidazei catalizează, în general, hidroxilările la centrele
de carbon aromatice sau alifatice și sunt, în general, enzime foarte complexe care sunt
inhibate de CN și posedă invariabil situsuri redox-active suplimentare pentru transferul de
electroni din molibden. centru cofactor (Moco): minim o pereche de clustere [2Fe2S]
asemănătoare spanac-ferredoxină și, de obicei, FAD. Cu toate acestea, apar excepții. Cei

19
mai des utilizați acceptori de electroni sunt O 2 sau NAD+, care reacționează la locul FAD,
în timp ce substratul reacţionează la centrul de molibden. Ca rezultat, transferul de
electroni intramoleculari între Moco și FAD prin cei doi centri fier-sulf are loc în timpul
turnover-ului. Cei doi centri fier-sulf nu numai că oferă o cale pentru transferul de
electroni, dar acționează și ca un absorbant de electroni pentru a face reacția cea mai
eficientă, așa cum arată studiile asupra xantin oxidazei: doi electroni primiți de la substrat
la atomul de molibden sunt transferat la cele două centre FeS, astfel încât Moco oxidat să
poată reacționa ușor cu o altă moleculă de substrat, în timp ce cei doi electroni din centrii
fier-sulf reduc centrul FAD, care poate reacționa apoi cu substraturile acceptoare de
electroni (NAD+ sau O2) . Fără un absorbant de electroni între două situsuri active de
substrat (Moco și FAD), reacția ar fi ineficientă eliberarea produsului la locația Moco, așa
cum s-a demonstrat pentru ficatul de pui XDH și XOR bovin.
Ca și celelalte molibdoenzime din familiile sulfit oxidazei și DMSO reductazei ,
hidroxilazele care conțin moco din familia xantinoxidazei folosesc apa ca sursă finală a
atomului de oxigen încorporat în produs și generează echivalenți reducători în cursul
hidroxilării substratului. Acceptorii fiziologici de electroni pot fi oxigen molecular, NAD+,
NADP+ sau qui-none; totuși, în mai multe enzime acceptorul de electroni rămâne
necunoscut.
Trăsătura tipică a enzimelor din familia xantinoxidazei este prezența unui atom
esențial de sulf prezent sub formă de sulfură în poziția ecuatorială a ionului de molibden.
Observația inițială a inhibării de către cianura a fost ulterior urmărită cu observația că
atomul de sulfură esențial pentru activitatea catalitică a laptelui de bovină XO a fost
eliberat prin tratamentul cu CN− ca SCN−, rezultând formarea unei forme inactive desulfo
a enzimei care apare în mod natural în cantități semnificative, cel puțin la eucariote.
Ulterior, s-a demonstrat că sulful cianolizabil este un ligand al Mo, identificat ca fiind
prezent ca un grup Mo=S prin studiile EPR. XOR din lapte de bovină complet activ poate
fi izolat reproducabil utilizând o procedură de cromatografie de afinitate cu folat cuplată cu
alopurinol, și enzimele izolate de la alte organisme (în special puiul în condiții speciale și
bacteria Rhodobacter capsulatus) au de obicei activitate completă. Liganzii rămași ai
ionului de molibden sunt cei doi sulfuri de ditiolen din porțiunea molibdopterină (MPT),
un ligand oxo și un ligand hidroxo. Mo-MPT, precum și forma molibdopterină citozină
dinucleotidă (MCD) a cofactorului molibden au fost identificate în enzimele bacteriene din
această familie.

20
 Multe dintre enzimele din această familie sunt implicate în reacții ale ciclului
biogeochimic al carbonului și în roluri „legate de carbon” în organismele superioare. De
fapt, ciclul primitiv al carbonului ar fi fost dependent de molibden, deoarece metalul (și
tungstenul) ar fi fost esențial pentru ca cele mai timpurii organisme, strict anaerobe, să
manipuleze aldehidele și acizii carboxilici, catalizând interconversia acestora (aldehid
oxidoreductaze). În organismele superioare, aldehid oxidaza este responsabilă pentru
oxidarea plantelor a aldehidei abscisice în acid abscisic (un hormon vegetal implicat în
procesele de dezvoltare și într-o varietate de răspunsuri la stres abiotic și biotic), biosinteza
acidului indol-3-acetic (un fitohormon auxin), sau formarea la mamifere a acidului retinoic
(un metabolit al retinolului (vitamina A) care este implicat în creștere și dezvoltare).
Această familie este, de asemenea, responsabilă pentru catabolismul purinelor
(hidroxilarea hipoxantinei și xantinei la urat de către XO) în aproape toate formele de
viață. (doar un număr mic de organisme (de exemplu, unele drojdii) folosesc alte
mecanisme pentru a oxida xantina). De remarcat, XO și aldehidooxidaza sunt, de
asemenea, implicate în metabolismul mamiferelor a compușilor xenobiotici, unde
catalizează hidroxilarea centrilor de carbon ai compușilor aromatici heterociclici și
oxidarea grupărilor aldehidice; s-a sugerat, de asemenea, că ambele enzime sunt implicate
în căile de semnalizare și bolile mediate de specii reactive de oxigen și azot.

Mecanismul enzimatic
Enzimele din familia XO se caracterizează prin a avea un situs activ în care (în
forma sa oxidată) ionul de molibden este coordonat, într-o geometrie pătrat-piramidală, de
o grupare oxo apicală (Mo=O), doi atomi de sulf ecuatorial de la o grupă cis-ditiolenă a
unei molecule de cofactor piranopterină, o grupă -OH ecuatorială labilă catalitic (în cele
mai multe cazuri) și o grupare sulfo terminală ecuatorială (Mo=S; în cele mai multe cazuri)
sau seleno (Mo=Se) sau oxo (Mo=O).
XO și aldehidooxidaza de mamifere, sau 4-hidroxibenzoil-CoA reductaza
procariotă, adăpostește centrul caracteristic al molibdenului, cu o grupare –OH labilă
catalitic și o grupare sulfo terminală esențială (Mo=S). Alte enzime, cum ar fi nicotinat
dehidrogenaza, au in schimb o grupare seleno terminala (Mo=Se), o grupare cu o
hidricitate mai mare decat gruparea sulfo, ceea ce ar trebui sa fie esential pentru activarea
nicotinatului. Oxidarea dependentă de molibden a dioxidului de carbon (monoxid
dehidrogenază de carbon), dimpotrivă, necesită cofactorul binuclear unic Mo/Cu, care este
coordonat cu lanțul polipeptidic de un rest de cisteină prin Mo–S–Cu–S(Cys) motivat.

21
 XO laptelui de bovine, enzima prototip al acestei familii, este una dintre cele mai
bine studiate enzime.
Pe lângă centrul de molibden, XO de mamifer posedă trei centri redox-activi
suplimentari: doi centri [2Fe–2S] și un FAD (Fig. 3). Din punct de vedere structural, XO
de mamifer este o enzimă homodimerică (A2) cu fiecare monomer pliat în trei domenii,
care pot fi considerate pseudo A0b0g0 subunități, fiecare deținând un tip de centru redox-
activ (domeniul N-terminal deține centrii Fe/S, domeniul central conține situsul FAD, iar
terminalul C găzduiește centrul de molibden). Cei patru centri redoxactivi sunt aliniați într-
un mod aproape liniar, ceea ce definește o cale de transfer intramolecular de electroni care
livrează electroni din centrul molibdenului către FAD, locurile în care hidroxilarea și
dioxigenul sau NAD+ reducerea are loc, respectiv (cu centrii Fe/S intermediar transferul de
electroni, așa cum se discută mai jos).
Celelalte enzime din familia XO au o omologie structurală ridicată cu XO de
mamifer. Aldehida oxidaza de mamifer deține un centru identic de molibden, precum și doi
centri Fe/S și un centru FAD, în același a2 structura.
Același aranjament structural se observă în monoxidul de carbon dehidrogenază,
dar în acest caz într-o (abg)2 structura, cu fiecare centru redox-activ (un molibden, două
Fe/S și un FAD) fiind găzduit de o subunitate distinctă (Figura 4.5). Aldehida
oxidoreductaza bacteriană din Desulfovibrio specie este un alt exemplu remarcabil. În
ciuda faptului că are doar doi centri Fe/S (fără centru FAD), această enzimă formează un
complex cu partenerul său fiziologic, o flavodoxină care conține flavină care poate fi privit
ca pseudo g0 subunitatea structurii XO (Figura 4.5). Alte amenajări structurale interesante
pot fi găsite în Escherichia colialdehid oxidoreductaza periplasmatică sau T. aromatica 4-
hidroxibenzoil-CoA reductază, două enzime care prezintă o omologie structurală
considerabilă cu XO, dar posedă un al cincilea centru redox-activ suplimentar, un centru
[4Fe–4S] (în subunitatea FAD), într-un (abg)2 structura (Figura 4.5).

22
 Figura 4.5 Structuri enzime familia XO

Vedere tridimensională a structurii și aranjarea cofactorilor redox-activi ai

membrilor selectați ai familiei XO. XO bovină,D. gigas aldehidă oxidoreductază plus
flavodoxină, O. carboxidovorans monoxid de carbon dehidrogenază și T. aromatica sunt
reprezentate hidroxibenzoil-CoA reductaza. Sus—Dispunerea cofactorilor redox-activi în
cadrul subunităților. De jos—Vizualizarea structurii tridimensionale a proteinelor în
aceeași orientare; culorile fiecărei subunități se potrivesc cu culorile casetelor din partea de
sus. O singură subunitate în XO și AOR (adicăA2) sau unul abg grup în celelalte două
enzime (adică(abg)2) este reprezentat. Structurile prezentate se bazează pe fișierele PDB
1FO4 (XO), 1VLB (aldehid oxidoreductază), 1FX1 (flavodoxină), 1N5W (monoxid
dehidrogenază de carbon) și 1RM6 (hidroxibenzoil-CoA reductază).
Xantin oxidoreductazele (XOR) există într-o mare varietate de organisme, de la
bacterii la plante superioare și oameni. Enzimele catalizează conversia metabolică a
hipoxantinei în xantină și a xantinei în urat, care sunt ultimele etape în metabolismul
purinelor. în oameni. Din punct de vedere mecanic, fiecare reacție este o hidroxilare
oxidativă și doi electroni sunt trecuți de la substrat la enzimă în fiecare pas (revizuit într-un
articol recent de Hille și colab.). În circumstanțe fiziologice normale, NAD+ este
acceptorul fiziologic de electroni și NADH. este format. La mamifere, totuși, în anumite
condiții, o schimbare conformațională a enzimei poate fi indusă și dehidrogenaza
23
transformată într-o oxidază (XO) care utilizează oxigen molecular ca acceptor de electroni.
Această așa-numită conversie D/O (dehidrogenază în oxidază) are loc reversibil prin
oxidarea tiolilor în disulfuri sau transformată ireversibil prin proteoliză ușoară. Deoarece
formele de oxidază și dehidrogenază sunt produse ale aceleiași gene, enzima este denumită
aici xantin oxidoreductază (XOR). Spre deosebire de enzima mamiferelor, enzimele din
alte surse (pui, Drosophila și bacterii) există ca o dehidrogenază stabilă și nu sunt
convertite în oxidază.
XOR de mamifer există ca homodimer de subunități de 150 kDa, cu structura
cristalină a enzimei bovine prezentată în Figura 4.6.

Figura 4.6 Cofactor xantin oxidaza bovină

Structura generală, aranjamentul cofactor al xantin oxidazei bovine. Structura

enzimei XOR bovine (1FIQ). Aranjamentul cofactorilor este evidențiat în partea dreaptă.
XOR bovin oxidează hipoxantină în xantină și xantină în acid uric la Moco și transferă
electroni în NAD+, formând NADH + H+(XDH) sau în O2, formând H2O2 și O2− (XO).
Fiecare dintre subunități este compusă din trei domenii. Cel mai mare domeniu
conține Moco, domeniul intermediar conține cofactorul FAD, iar domeniul mic conține
cele două grupuri [2Fe–2S], așa cum este prezis de comparațiile secvenței de aminoacizi
din diverse surse. Centrii fier-sulf sunt desemnați FeSI și FeSII, pe baza potențialelor lor de

24
reducere și a semnalelor EPR, FeSII având potențialul mai mare. Ordinea transferului de
electroni în enzimă este Moco → FeSI → FeSII → FAD așa cum este descris mai jos.
Aranjamentul redox. -centri activi este în concordanță cu rolul celor doi centri fier-sulf ca
absorbant de electroni, așa cum este descris mai sus.

Strategia/Procedeul Mecanică
Enzimele familiei XO catalizează de obicei hidroxilarea unei legături C-H în
compușii heterociclici aromatici și în aldehide. Astfel de hidroxilări oxidative sunt
observate în conversia catalizată de XO a xantinei în urat, precum și în reacțiile catalizate
de aldehid oxidază și aldehid oxidoreductază, nicotinat dehidrogenază , și chinolină 2-
oxidoreductază. Există, totuși, cel puțin două excepții importante: oxidarea catalizată de
monoxid de carbon dehidrogenază a monoxidului de carbon în dioxid de carbon, care nu
implică hidroliza unei legături C-H, și reacția hidroxibenzoil-CoA reductazei, care implică
dehidroxilarea ireversibilă a inelului fenol, o reacție de extracție/reducere a atomului de
oxigen.
Mecanismul de reacție al hidroxilării catalizate de XO este în prezent bine stabilit
(Fig. 4). Cataliza este inițiată cu activarea grupării hidroxil labile catalitic de molibden
(Mo–OH) de către un rest de glutamat deprotonat conservat învecinat, pentru a forma un
Mo6+– O- miez (cataliză asistată de bază). Oxigenul acum deprotonat efectuează un atac
nucleofil asupra atomului de carbon care urmează să fie hidroxilat, cu transferul simultan
de hidrură de la substrat la gruparea sulfo esențială (Mo=S->Mo-SH), rezultând formarea
unui intermediar covalent, Mo4+-O-C-R(-SH) (unde R reprezintă restul moleculei
substratului). Apa/hidroxidul înlocuiește apoi produsul hidroxilat din sfera de coordonare a
molibdenului pentru a produce un Mo4+-OH(2)(-SH) miez (semireacție reductivă a enzimei).
Cei doi electroni s-au transferat de la substrat la molibden în timpul semireacției reductive
(Mo6+-> Mo4+) sunt transferate rapid, prin centrele Fe/S, la FAD (Mo->Fe/S->FAD; unde
reducerea dioxigenului (sau NAD+, în cazul formei XD) are loc (semireacția oxidativă a
enzimei). În centrul de molibden acum oxidat (Mo 6+-> Mo4+), gruparea sulfo este
deprotonată și Mo inițial miezul Mo6+-OH(=S) este regenerat. Transferul intramolecular de
electroni în XO (Mo->Fe/S->FAD) este, prin urmare, un aspect integral al catalizarii XO.
În strategia de hidroxilare a familiei XO trebuie evidențiate două puncte:
(i) apa este sursa finală a atomului de oxigen încorporat în produsul hidroxilat
(grupa hidroxil labilă a molibdenului (Mo–OH) care ajunge în produsul

25
 reacției ( urat) este regenerat dintr-o moleculă de apă de solvent atunci când
ciclul catalitic este închis);
(ii) dioxigenul acționeazănumai ca substrat oxidant. Reacțiile de hidroxilare
catalizate de aceste molibdoenzime sunt, în acest fel, destul de diferite de
reacția catalizată de monooxigenaze, deoarece molibdoenzimele generează,
mai degrabă decât consumă, echivalenți reducători și folosesc dioxigenul ca
oxidant, mai degrabă decât ca sursă a atomului de oxigen încorporat în
produs. Mecanismul de reacție al hidroxibenzoil-CoA reductazei, implicând
dehidroxilarea ireversibilă a inelului fenolic, adică o reacție de reducere a
extracției atomului de oxigen se crede a fi inversul celui XO.

Figura 4.7 Ciclu catalitic a xantin-oxidazei.

Relevanța Medicală a XO
Xantinuria, niveluri crescute de xantină în sânge, este o boală la om care implică
anomalii ale XDH. Se prezintă sub formă de trei subtipuri: xantinuria clasică de tip I, care
este cauzată numai de deficitul de XDH; xan-tiniria clasică de tip II, care reprezintă atât
deficiențe de XDH, cât și de aldehidooxidază; și deficiență de Moco, ducând la pierderea
concomitentă a funcției tuturor molibdoenzimelor. Se știe că în xantinuria II enzima
responsabilă pentru atașarea ligandului terminal de sulf la centrul molibden al celor două
enzime a fost mutată. În contrast, în xantinuria clasică de tip I defectul se află în gena
structurală pentru XDH și astfel numai activitatea XDH este absentă. Xantinuria I și II duc
ambele la eșecul de a converti hipoxan-tina și xantina în urat. Xantinuria clasică este
adesea benignă și poate să nu fie diagnosticată, deși unii pacienți dezvoltă disfuncție
renală, cu fatalitate în cazuri extreme. Cele două tipuri de xantinurie clasică pot fi distinse
prin capacitatea subiecților de tip I, dar nu și de tip II de a transforma alopurinolul în
oxipurinol și 1-metilnicotinamidă în 2- și 4-piridone, acesta din urmă fiind un substrat

26
exclusiv pentru AO. Deoarece alopurinolul inhibă activitatea XDH, dar nu și activitatea
AO, alopurinolul (4-OH-pirazolo-pirimidină) a fost utilizat pe scară largă pentru controlul
clinic al producției de acid uric în condiții de hiperuricemie (Figura 6.6). Deoarece XOR
este sursa majoră de urat, iar nivelurile crescute de urat din sânge pot duce la gută și
funcția renală compromisă, enzima este ținta principală pentru intervenția terapeutică.
Inhibitorii XOR sunt medicamente eficiente și în general bine tolerate pentru
tratamentul gutei. Unii inhibitori inhibă enzima formând un intermediar stabil de reacție
sau un analog al acestui intermediar cu molibdenul redus. Alopurinolul, care a fost utilizat
ca medicament antigută de peste 40 de ani, este un izomer al hipoxantinei în care atomul
de carbon din pozițiile 8 este înlocuit cu atomul de azot adiacent cu pozițiile 7. Inițial sa
crezut că funcționează ca un inhibitor competitiv simplu care se leagă de centrul
molibdenului în mod competitiv față de xantină, dar ulterior s-a constatat că inhibă într-un
mod mai complicat; inhibiția progresează în funcție de timp, ducând în cele din urmă la
formarea unui complex de inhibitor strâns legat cu enzima redusă. Alopurinolul însuși este
de fapt un substrat al XO și este transformat în oxipurinol (aloxantină; 4,6-
dihidroxipirazolopirim-idină), care formează un complex strâns cu centrul redus al
molibdenului.144 În structurile cristaline ale formei inhibite de alopurinol cu R .capsula-
tus XDH la o rezoluție de 3 Å și forma legată de oxipurinol a XO bovină redus, oxigenul
ecuatorial al Mo(iv) este înlocuit cu atomul de azot în poziția 2 (corespunzând poziției 8 a
bazei purinice). ) de oxipurinol. Formarea acestui complex strâns oxipurinol-molibden este
baza efectului inhibitor puternic al alopurinolului, deși oxipurinolul se disociază în cele din
urmă la reoxidarea enzimei în aer (t1/2 = 300 min la 25 °C). Până de curând, alopurinolul a
fost cel mai eficient inhibitor pentru tratarea hiperuricemiei clinic.
Cu toate acestea, un nou inhibitor al XOR bazat pe structură și foarte eficient cu
denumirea generică de febuxostat a fost aprobat pentru tratamentul gutei în țările UE (în
2008), SUA ( 2009) și, ulterior, în diverse alte țări, inclusiv Japonia (2011) (Figura
6.6).149 Febuxostat are un efect mai puternic și mai durabil asupra scăderii nivelului de
urat din sânge decât alopurinolul la speciile de mamifere.141 Eficacitatea clinică și
toleranța la febuxostat au fost confirmate. , iar medicamentul este disponibil ca Adenuric
(UE), Uloric (SUA) sau Feburic (Japonia) pentru tratamentul cronic al hiperuricemiei la
pacienții cu gută.149 Febuxostat este o moleculă mai mare decât alopurinolul, iar
mecanismul de legare la XOR este destul de diferit. Febuxostat umple cea mai mare parte a
cavității canalului de acces la solvenți și a buzunarelor de legare a substratului XOR,
acționând ca un inhibitor bazat pe structură prin interacțiuni multiple, inclusiv legarea

27
ionică a grupării sale carboxil cu Arg880, legătura de hidrogen a atomului de azot al
tiazolului. cu Glu802 și intercalarea inelului tiazol între Phe914 și Phe1009 în bXOR.

Figura 4.8 Exemple de inhibitori ai xantin-oxidazelor

4.2.2.Familia Sulfit Oxidaze

Familia de enzime sulfit oxidaza (SO) este una dintre cele trei familii propuse
inițial de enzime de molibden mononucleare și își ia numele de la reprezentanții cel mai
bine studiati ai acestei familii de enzime, SO de vertebrate. În timp ce inițial se credea că
enzimele acestei familii se găsesc exclusiv în organismele eucariote, s-a recunoscut în
ultimii 15 ani că există, de asemenea, un grup abundent de enzime care provin din bacterii
care aparțin acestei familii de enzime și multe dintre aceste enzime bacteriene sunt în
prezent necaracterizate. reductazele și oxidazele/dehidrogenazele au fost identificate în
familia SO și până acum toate aceste enzime convertesc substraturi care conțin sulf sau
azot. Caracteristica cheie a acestor enzime este legarea unui cofactor de molibden de tip
molibdopterină (Moco), care este legat covalent printr-un rest de cisteină foarte conservat
la enzimă.
În prezent, cei mai bine caracterizați reprezentanți ai familiei SO sunt sulfit
oxidazele de vertebrate și plante, nitrat reductazele din plante și mai multe tipuri de sulfit
dehidrogenaze bacteriene, alături de un număr mare de enzime bacteriene și arheale mai
puțin bine caracterizate, dintre care unele sunt considerat a fi reductaze. Recent descoperite
aldoximină reductaze de mamifere (mARC) s-au propus, de asemenea, să fie membri ai
familiei de enzime sulfit oxidaze, dar sunt probabil reprezentanți ai unei noi familii de
enzime Mo.

28
 În ciuda disparității aparente a reacțiilor catalizate de enzimele familiei SO, există
câteva trăsături comune împărtășite de toți reprezentanții caracterizați ai acestei familii de
enzime. Acestea includ un domeniu proteic central, care leagă cofactorul de molibden, care
prezintă așa-numitul pliu „SUOX” (SUOX pentru sulfit oxidază, prima enzimă
caracterizată structural a familiei), prezența unui singur echivalent al cofactorului
piranopterină (prezent ca formă de mononucleotidă) coordonată cu metalul și o cisteină ca
ligand direct de aminoacid la centrul catalitic Mo. Următoarele secțiuni vor analiza apariția
și funcția enzimelor familiei sulfit oxidazei în organismele pro și eucariote și vor oferi, de
asemenea, o privire de ansamblu asupra proprietăților catalitice și spectroscopice cheie ale
acestor enzime.

Mecanismul enzimatic
Centrul de molibden al enzimelor din familia SO este strâns legat de cel al familiei
XO, dar cu trăsătura distinctivă de a avea lanțul polipeptidic, printr-un rest de cisteină,
coordonat direct cu molibdenul. În aceste enzime, centrul molibdenului prezintă (în forma
sa oxidată) aceeași geometrie pătrat-piramidală, cu grupa oxo apicală (Mo]O), dar cu
planul ecuatorial format din doi atomi de sulf ai cofactorului piranopterină, o grupă oxo.
(Mo]O) și ligandul tiolat de cisteină (ModS(Cys)).

Figura 4.9 Structuri enzime familia SO

29
 „Neuniformitatea” enzimelor sulfitooxidante continuă cu omologii procariote
(sulfit dehidrogenaze): acestea sunt de obicei enzime periplasmatice care prezintă diferite
organizații structurale și compoziții de cofactori redox și al căror acceptor fiziologic de
electroni este cel mai adesea un citocrom. În timp ce majoritatea sulfit dehidrogenazelor
par să conţină doar centrul de molibden într-o organizare homodimerică sau monomerică,
există și enzime semnificativ diferite. Sulfit dehidrogenaza dinNovela Starkeya este
heterodimeric (ab) enzimă, care conține a c-tip heme (în sa b subunitatea) pe lângă centrul
de molibden (în A subunitate). Cu toate acestea, spre deosebire de structura cristalină a
puiului SO, cei doi cofactori redox-activi sunt în acest caz foarte aproape unul de celălalt
(16 Å). Mai mult, în timp ce structura de bază a domeniului molibden este menținută,
domeniile de molibden și hem care trebuie să se deplaseze relativ unul față de celălalt în
timpul ciclului catalitic. Interesant este căS. novela chem se găsește într-o poziție similară
cu cea modelată pentru b hemul enzimei de pui, sugerând astfel că există o ideal Mod de
interacțiune molibden/hem care se reproduce în diferite forme de viață, cu diferite tipuri de
hem și în contexte fiziologice diferite.
Enzime eucariote asimilatoare reducătoare de nitrați, care catalizează reducerea
nitraților la nitriți cu oxidarea simultană a NAD(P)H, aparțin și familiei SO.48. Aceste
NaR sunt enzime homodimerice citoplasmatice (A2), conţinând, pe lângă centrul
caracteristic de molibden (responsabil de reducerea nitraţilor), un b-tip hem (implicat în
transferul de electroni) și un centru FAD (responsabil pentru oxidarea NAD(P)H) (Fig. 5).
În conformitate cu clasificarea lor ca membri ai familiei SO, domeniul molibdenului NaR
este izbitor de similar cu unul al puiului și al plantei SO. S-a sugerat că domeniul FAD
contribuie la poziționarea corectă a domeniului hem pentru transferul intramolecular de
electroni. Interesant (având în vedere asemănarea cu enzimele de oxidare a sulfiților),
fosforilarea unui reziduu de serină în regiunea linker dintre domeniile molibden și
hem,188.189 urmată de legarea unei proteine de reglare specifice, inhibă eficient enzima
prin inhibarea transferului de electroni intramoleculari.
Un alt membru al familiei SO este a patra molibdoenzimă de mamifer descrisă
recent, mARC (după XO, AO și SO). Funcția fiziologică a mARC nu este încă cunoscută,
dar, deoarece poate cataliza reducerea N- și S-compuși hidroxilați, mARC este probabil
implicat în detoxifierea hidroxil-aminelor aromatice mutagene și toxice, cum ar fi N-
derivați de bază ADN hidroxilați, printre alte roluri posibile. mARC este un mitocondrial
monomer enzimă (delimitată de membrana exterioară, cu fața către citoplasmă) și conține
doar centrul de molibden (fără centri redoxactivi suplimentari). Cu toate acestea, mARC

30
funcționează împreună cu citocromul b5 și un citocrom dependent de NADH b5 reductaza,
care sunt implicate în transferul de electroni de la moleculele NADH la mARC (Fig. 5),
formând astfel un lanț de transfer de electroni cu trei proteine care seamănă cu
aranjamentul cofactorilor redox-activi observați în enzimele NaR eucariote: compușii
hidroxilați NAD(P) H!FAD!hem!Mo!.

Strategia mecanica

Figura 4.10 Exemple de cicluri catalitice ale sulfit oxidazei

Deficiența de SO
Primul pacient lipsit de activitate SO a fost identificat în 1967 la Institutul Național
de Sănătate (Bethesda, MA, SUA) de către Mudd și colegii de muncă, care au raportat
despre un sugar cu o tulburare metabolică severă de origine necunoscută. Acumularea de
sulfit, tiosulfat și S-sulfocisteina în urină și lipsa excreției de sulfat anorganic au indicat un
defect în SO. În următoarele decenii, cca. 50 de cazuri de deficit de SO au fost raportate în
literatură, dintre care unele au fost ulterior recunoscute ca pacienți cu deficiență de Moco,
cărora le lipsesc toate activitățile enzimei molibdenului. Mutații care cauzează boli au fost
raportate în multe dintre cazurile publicate.
Studii biochimice în special de către laboratoarele lui John Enemark și K.V.
Rajagopalan au dezvăluit mecanismul care stau la baza bolii a diferitelor mutații care

31
provoacă deficit de SO. Mutații care afectează legarea Moco, cataliză, inclusiv legarea și
eliberarea substratului deoarece au fost identificate transferul de electroni intramoleculari.
Recent, am participat la diagnosticarea unui pacient SO cu o mutație care a afectat legarea
Moco în timpul procesului de maturare a SO mitocondrială, ducând la acumularea de SO
în citosol (Schwarz și colab., rezultate nepublicate). Au fost raportate foarte puține cazuri
cu forme ușoare de deficit de SO, dintre care unul a arătat un răspuns foarte pozitiv la
restricția alimentară. În plus reducerea metioninei în dietă, tratamentul anticonvulsiv este
singura opțiune de terapie, având ca rezultat un prognostic foarte prost și moartea timpurie
a copilăriei. Un posibil tratament ar putea fi terapia de substituție enzimatică, dar
direcționarea SO către mitocondrii nu este posibilă. Prin urmare, reactivitatea recent
identificată la oxigen a SO de șoarece și uman oferă o oportunitate de a trata pacienții la
periferie prin administrarea unui domeniu de molibden SO imunumbrit, folosind PEGilarea
pentru a reduce antigenitatea proteinei administrate.

4.2.3.Familia dimetilsulfoxid reductazei

Familia dimetilsulfoxid reductază (DMSOR) este probabil cea mai diversă dintre
cele trei familii, cuprinzând enzime procariote cu activități remarcabil diferite, inclusiv
reducerea DMSO, oxidarea arsenitului și reducerea arseniatului , reducerea nitratului, și
oxidarea nitriților, oxidarea formiatului și reducerea dioxidului de carbon, reducerea
polisulfurei, transferul de hidroxil în pirogalol/floroglucinol și chiar hidratarea acetilenei,
printre multe alte reacții. Ca atare, enzimele familiei DMSOR participă la multe cicluri
biogeochimice. În ciclul carbonului, de exemplu, acetogenii folosesc formiat
dehidrogenaze (FDH) pentru a fixa dioxidul de carbon (reducerea acestuia) în formiat și în
cele din urmă a forma acetat, în timp ce alte organisme folosesc aceleași enzime pentru a
cataliza reacția inversă pentru a obține energie și a îndeplini alte roluri metabolice. Acesta
este cazulE coli, care exprimă trei FDH: (i) o enzimă citoplasmatică, denumită formiat
dehidrogenază H (FDH-H), care face parte din sistemul formiat-hidrogen liază și este
implicată în oxidarea formiatului și generarea de hidrogen molecular sub fermentație
(anaerobă) conditii de crestere; (ii) un FDH periplasmatic legat de membrană, denumit
formiat dehidrogenază N (FDH-N), care face parte din calea „respiratorie” anaerobă
azotat-formiat (catalizată de un sistem supermolecular formiat:nitrat oxidoreductază format
cu un NaR „respirator” ) implicate în generarea unei forțe motrice de proton; și (iii) un al
doilea FDH cu fața periplasmă legat de membrană, denumit formiat dehidrogenază O
(FDH-O), care funcționează în condiții aerobe pe o altă cale „respiratorie” azotat-formiat.

32
 Enzimele din familia DMSOR sunt, de asemenea, implicate în ciclul biogeochimic
al azotului, fiind responsabile de reducerea procariotă asimilatoare și disimilatoare a
nitratului în nitriți pentru oxidarea disimilatorie a nitriților la nitrat. Această familie
cuprinde trei tipuri diferite de enzime NaR: (i) enzime disimilatorii „respiratorii” cu fața
citoplasmatică legate de membrană implicate în generarea unei forțe motrice de protoni în
membrana citoplasmatică, (ii) enzime periplasmatice disimilatorii care se sugerează a fi
asociate cu eliminarea excesului de echivalenți reducători și ( iii) enzime citoplasmatice
asimilatoare responsabile de asimilarea azotului (enzime distincte de cele eucariote, care,
după cum este descris mai sus, aparțin familiei SO). Familia DMSOR include și nitrit
oxidoreductazele din nitrificatori. Aceste proteine legate de membrană, îndreptate spre
periplasmă sau citoplasma, în funcție de organism, au fost slab studiate, dar există dovezi
că trebuie să împărtășească mai multe caracteristici structurale cu NaR-urile „respiratorii”.

Utilaje enzimatice
Enzimele din această familie se caracterizează prin faptul că au ionul de molibden
coordonat de patru atomi de sulf ai două molecule de cofactor piranopterină (Fig. 2).
Acești centri de molibden prezintă o geometrie prismatică trigonală, care este completată
de atomi de oxigen și/sau sulf și/sau seleniu într-o diversitate de aranjamente, ionul de
molibden fiind adesea găsit direct coordonat de lanțul polipeptidic prin aspartat, serină,
cisteină sau lanțurile laterale ale reziduului de selenocisteină (în zona oxidată stat).
În urma diversității reacțiilor catalizate, familia DMSOR este și cea mai diversă
dintre cele trei familii în ceea ce privește compoziția subunității și conținutul de cofactori
redox-activi (centri Fe/S, hemi și flavine). Pentru a restricționa informațiile prezentate la o
dimensiune gestionabilă, aici va fi analizat doar un număr limitat de enzime, și anume
enzimele DMSOR, NaR și FDH.
The Rhodobacter sphaeroides DMSOR, enzima de referință a acestei familii este o
proteină monomerică periplasmatică, care conține doar centrul molibdenului ca grup
redox-activ, cu ionul de molibden coordonat (în forma sa oxidată) de cele două molecule
caracteristice de piranopterină plus o grupă oxo labilă catalitic ( Mo]O) și un atom de
oxigen al lanțului lateral de serină (ModO(Ser)). Spre deosebire de enzima „simplu” din
Rhodobacter, DMSOR „respirator” din E coli este un heterotrimeric cu periplasmă legat de
membrană (abg) enzimă, care este compusă din (nu există încă o structură cristalină): (i) o
subunitate periplasmatică reducătoare de DMSO care deține centrul de molibden și un
centru [4Fe–4S]; secvența de reziduuri de aminoacizi a domeniului de legare la molibden

33
al acestei subunități este similară cu partea corespunzătoare aRhodobacter enzimă, cu
domeniul mic care conține centrul Fe/S inserat într-un domeniu N-terminal al subunității;
(ii) o a doua subunitate periplasmatică, care conține patru centri [4Fe– 4S], despre care se
crede că este implicată în transferul intramolecular de electroni (de la menachinolul
membranei la centrul molibdenului reducător de DMSO); și (iii) o subunitate integrală a
membranei care nu are cofactori redox-activi și care, probabil, leagă menachinolul necesar
pentru reducerea enzimei. De remarcat, DMSOR „respirator”, care catalizează o reacție de
transfer de atom de oxigen, este remarcabil de similar cu polisulfura reductaza
„respiratorie”, o enzimă implicată în reducerea sulfului anorganic la sulfură, o reacție de
transfer de atom de sulf. TheThermus thermophilus polisulfură reductază este o enzimă cu
fața periplasmului legată de membrană, care deține o organizare a subunității și o
compoziție de cofactori similare cu cele ale E coliDMSOR „respirator”, dar organizat ca
un dimer de trimeri ((abg)2). Centrul de molibden al polisulfura reductazei este însă
coordonat de un reziduu de cisteină (Mo–S(Cys)) și probabil de o grupare hidroxil labilă
catalitic (Mo–OH).
De asemenea, enzimele NaR prezintă organizații de subunități „simple” și
„complexe” și compoziții de cofactori pentru a îndeplini diferite roluri biologice, în diferite
locații subcelulare. NaR „respirator” de laE coli (produs al narG, H, și eu gene și denumit
NaRGHI) este un dimer „complex” de heterotrimeri, (abg)2, alcătuit din: (i) o subunitate
NaRG citoplasmatică reducătoare de nitrați care deține centrul de molibden și un centru
[4Fe–4S]; (ii) o subunitate NaRH de transfer de electroni care deține un centre [3Fe–4S] și
trei [4Fe–4S], responsabil de transferul de electroni intramoleculari de la pool-ul de chinol
membranar la centrul de molibden care reduce nitrarea; și (iii) o subunitate NaRI oxidantă
de chinol legată de membrană care conține douăb-tip hemes. Pe de altă parte, NaR
periplasmatic dinDesulfovibrio desulfuricans (produs al napA gena) este o enzimă
monomerică „simplu” cu un singur centru [4Fe–4S] în plus față de centrul de molibden în
timp ce enzima din Cupriavidus necator (napA șinapB gene) este un dimer care
adăpostește doi hemi în plus față de centrul de molibden. Interesant, deși toate aceste NaR
procariote catalizează reducerea cu doi electroni a nitratului la nitriți, sfera lor de
coordonare a molibdenului este semnificativă.
diferențe (în afară de caracteristicile comune două molecule de cofactor de
piranopterină (Fig. 2)). În NaR „respirator” legat de membrană, ionul de molibden este
coordonat de un reziduu de aspartat într-un mod bidentat (se presupune că în forma sa
oxidată) sau de un atom de oxigen din reziduul de aspartat coordonat într-un mod

34
monodentat plus o grupare oxo terminală (în forma redusă). Cu toate acestea, în NaR
periplasmatic din D. desulfuricani sau C. necator, ionul de molibden este coordonat de un
atom de sulf de cisteină plus o grupare sulfo terminală, formând o legătură disulfurică
parțială unul în celălalt. The E coli și R. sphaeroidesNaR periplasmatic, la rândul lor,
completează coordonarea molibdenului cu atomul de sulf de cisteină plus o grupare
hidroxil terminală. NaR asimilator citoplasmatic nu a fost încă studiat amănunțit, dar ionul
său de molibden se crede că este coordonat de un reziduu de cisteină.
Ca și în cazul celorlalte enzime, și enzimele procariote FDH sunt implicate în
diverse căi biochimice și, astfel, prezintă compoziții diferite de subunități și compoziții de
cofactori redox-activi. The E coli FDH-H este o enzimă monomerică „simple”, care
adăpostește un singur centru [4Fe–4S] (responsabil de transferul intramolecular de
electroni către acceptorul fiziologic, probabil o proteină ferredoxină), în plus față de
centrul de molibden (Fig. 7). Ionul său de molibden este coordonat de cele două molecule
caracteristice de cofactor piranopterină plus un reziduu esențial de selenocisteină conservat
(ModSe(Cys)) și un atom terminal de sulf (Mo]S) The E coli FDH-N, dimpotrivă, este un
trimer „complex” de trimeri ((abg)3), cu opt cofactori redoxactivi într-o organizare
generală a abg unitate care este destul de similară cu cea observată în NaRGHI
„respirator”: (i) o subunitate periplasmatică de oxidare a formiatului care deține un centru
de molibden și un centru [4Fe–4S], cu domeniile implicate în legarea centrilor Fe/S și
molibden similare structural cu monomerul FDH-H; (ii) o subunitate periplasmatică de
transfer de electroni care găzduiește patru centri [4Fe–4S] și este responsabilă pentru
transferul intramolecular de electroni de la centrul molibdenului de oxidare a formiatului la
pool-ul de chinonă din membrană; și (iii) o subunitate chinoreducătoare legată de
membrană care are douăb-tip hemes. Trimerul deabg unități, (abg)3, este foarte strâns și o
moleculă de cardiolipină este menținută la interfața trimerului, sugerând astfel că acest
aranjament complex este semnificativ din punct de vedere fiziologic. Molibdenul FDH-N
este coordonat de selenocisteină și un atom de sulf terminal, așa cum se vede în omologul
său FDH-H. FDH-ul din D. desulfuricani este, de asemenea, o enzimă periplasmatică
„complexă”, cu structură heterotrimerică (abg), dar posedă doar doi centri [4Fe–4S] (în
fiecare A și b subunitate) cu patru c hemes (g subunitate); ionul său de molibden este de
către o selenocisteină și, probabil, un sulf terminal (nu este încă disponibilă nicio structură
cristalină). Enzimele din Ralstonia eutropha și Rhodobacter capsulatus sunt și mai
complexe, deținând șapte centre Fe/S plus un FMN per abg protomer, în plus față de

35
centrul de molibden, care, în aceste două enzime, este coordonat de un reziduu de cisteină
și un atom de sulf terminal (nu este încă disponibilă nicio structură cristalină).

Strategii

Figura 4.11 Exemple de cicluri catalitice ale dimetilsulfoxid reductazei

4.3.Nitrogenaza Fixarea
Mecanismul de fixare a azotului de către nitrogenază: următoarea etapă
Azotul este un element esențial conținut în multe biomolecule necesare pentru
susținerea vieții. Acest element este disponibil din abundență în atmosfera Pământului sub
formă de gaz dinazot (N2), totuși majoritatea organismelor nu sunt capabile să
metabolizeze N2 deoarece este relativ inert. În schimb, majoritatea organismelor trebuie să-
și obțină azotul din forme „fixe”, cum ar fi amoniacul (NH 3) sau nitratul (NO3−). sunt, de
asemenea, transformate continuu în N 2 prin procesele combinate de nitrificare și
denitrificare, viața poate fi susținută doar prin conversia N 2 în NH3. Acest ultim proces este

36
cunoscut sub numele de N2 fixarea și este o etapă critică în ciclul biogeochimic N 2. Fixarea
N2 are loc în trei moduri diferite: (i) prin procese geochimice precum fulgerul9, (ii)
biologic prin acțiunea enzimei, azotaza, găsit doar într-un grup select de microorganisme,
și (iii) industrial prin procesul Haber-Bosch. De la evoluția azotazei, acum aproximativ
două miliarde de ani16 până la utilizarea pe scară largă a Haber- Procesul Bosch în anii
1950, toată viața a derivat N din fixarea biologică a azotului, procesele geochimice
reprezentând un contributor minor la furnizarea de azot fix. De la creșterea utilizării
procesului Haber-Bosch, procesele biologice și industriale contribuie comparabil cu fixarea
N2.
Fixarea azotului are un impact agronomic, economic și ecologic profund datorită
faptului că disponibilitatea azotului fixat reprezintă factorul care limitează cel mai frecvent
producția agricolă în întreaga lume. Într-adevăr, aproape jumătate din populația umană
existentă nu ar putea exista fără aplicare. a procesului Haber-Bosch de producere a
îngrășămintelor cu azot. Având în vedere că peste jumătate din aportul fix de azot care
susține populația Pământului este furnizat biologic, a existat un interes intens pentru
înțelegerea modului în care enzima azotaza îndeplinește sarcina dificilă de fixare a N 2. la
temperatura și presiunea mediului ambiant. O înțelegere a fixării biologice a N 2 poate servi
în continuare ca fundație pentru atingerea a două obiective foarte dezirabile, deși până
acum nerealizate: dotarea genetică a plantelor superioare cu capacitatea de a-și fixa
propriul azot. și dezvoltarea de catalizatori sintetici îmbunătățiți pe baza mecanismului
biologic.

4.2.1.Structura situsului activ al Nitrogenazei

37
 Figura 4.12 Situsul activ al nitrogenazei

4.2.2.Analogi structurali ai nitrogenazei

Figura 4.13 Complexe model de nitrogenaze

4.2.3.Reducerea N2

Figura 4.14 Ciclul catalitic al reducerii azotului

38
 BIBLIOGRAFIE

[1]. Philip Waxler, Encyclopedia of Toxicology, ed. Elsevier, vol.3, 2014, pp.383-388
[2]. https://www.webelements.com/molybdenum/atoms.html
[3]. https://www.schoolmykids.com/learn/interactive-periodic-table
[4]. Vishwanath M Sardesai, Molybdenum: An Essential Trace Element, Nutritional in
Clinic Practice, vol.8, nr.6, 1993, pp. 277-281
[5]. Russ Hille , Jaeos Reetey, Ulrike Bartlewski-Hof, Mecanic aspects of molybdenum-
containing enzymes, FEMS Microbiology Reviews 22, 1999, pp. 489-501
[6]. F Ozde Utkur, Bruno Buhler, Molybdenum-Containing Enzymes and their
Applications, Nova Science Publishers, 2012, pp. 117-146
[7]. Luisa B Maia, Jose JG Moura, Mononuclear Molybdenum-Containing Enzymes,
Elsevier, 2018, pp.1-19
[8]. Russ Hille, Carola Schulzke, Martin L Kirk, Molybdenum and Tungsten Enzymes
Biochemistry, Royal Society of Chemistry, 2017, pp. 12-360
[9]. Silke Leimkuhler, The biosynthesis of the molybdenum cofactors in Escheichia coli,
Environmental Microbiology, 2020, pp.1-20
[10]. Donghyeon Kim, Jaeheon Lee, Molybdenum-Containing Metalloenzymes and
Synthetic Catalysts for Conversion of Small Molecules, MDPI Catalysts Journal, 2021,
pp.2-34

39
40