Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
METODE DE INTENTIFICARE A
STAFILOCOCULUI AURIU IN
CAVITATEA BUCALA SI NASO-
FARINGIANA
CONSTANȚA
2019
1
Cuprins
1. Genul Staphylococcus. Generalități.............................................................................................3
1.1 Particularități microscopice...............................................................................................4
1.2 Caractere de cultură...............................................................................................................7
1.3 Habitat și implicații în patologia infecțioasă a cavității buco-nazale...................................10
2. Rezistența la antibiotice.............................................................................................................15
2.1 Mecanisme de instalare a rezistenței la modul general........................................................15
2.2 Evoluția rezistenței la antibiotice in Europa........................................................................17
3. Modalități de instalare a rezistenței germenilor genului Staphylococcus.................................21
1. Material și metodă..................................................................................................................30
1.1 Recoltarea exudatului faringian......................................................................................30
1.2 Recoltarea exudatului nazal............................................................................................30
1.3 Recoltarea de prod din cavitatea bucală..........................................................................31
1.4 Examenul microscopic....................................................................................................32
1.5 Însămânțarea pe medii de cultură....................................................................................33
1.6 Identificarea meticilinorezistenței...................................................................................37
2. Rezultate obținute...................................................................................................................38
2.1. Prezentarea lotului de studiu...............................................................................................38
2.2. Sensibilitatea la AB.............................................................................................................38
2.3. Rezistența la meticilină.......................................................................................................38
3. Concluzii................................................................................................................................38
2
1. Genul Staphylococcus. Generalități
Bacteriile din Genul Staphylococcus sunt germeni de forma rotundă, gram-pozitivi
dispuși în grămezi neregulate cu aspect de ciorchine [gr. staphylos], cu variații în dimensiuni
[0,5-1,5 µm] cu tropism marcat pentru țesutul dermic și anexele pielii, dar cu posibilitatea de a
invada orice alt țesut, cu o largă răspândire în mediul extern, imobili și nesporulați. Cele mai
multe specii sunt catalazo-pozitive și facultativ anaerobe, dar cresc mai bine aerob; S.
Patru ani mai târziu, Anton J. Rosenbach (1842-1923) introduce termenul de stafilococ.
În 1884, chirurgul german a izolat două tulpinile de stafilococi, pe care le-a denumit pentru
aspectul pigmentat al coloniilor lor: Staphylococcus aureus, din aurum latin pentru aur, și
Staphylococcus albus. (1, 2, 3, 4)
Studii mai recente au stabilit criterii și mai exacte de diferențiere care se bazează pe compoziția
chimică a peretelui celular, pe existența citocromilor, pe felul și proporția acizilor grași, pe
hibridarea ADN, ARN. Studiile foarte amănunțite realizate pe tulpinile de stafilococi de origine
animală au fost inteprinse de Marsalec si Hajek. (2, 3, 4)
Există cinci specii de stafilococi asociate frecvent cu infecții clinice: Staphylococcus aureus, S.
epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis și S. saprophyticus.
Staphylococcus aureus este cea mai patogenă specie și este implicată într-o varietate de infecții.
Este, cu frecvență, descoperită ca floră umană normală în narele anterioare (nările). Se poate găsi
3
și în gât, axilă, în zonele inghinale și perineale. Aproximativ 30% dintre adulți și cei mai mulți
copii sunt purtători periodici sănătoși nazofaringieni ai S. aureus. Aproximativ 15% dintre adulții
sănătoși sunt purtători nazofaringieni persistenți. Ratele de colonizare în rândul lucrătorilor din
domeniul sănătății, al pacienților aflați în dializă și al persoanelor cu diabet sunt mai mari decât
în populația generală.
Celulele S. aureus sunt gram-pozitive și apar în formă sferică. Acestea sunt adesea în
grupuri care seamănă cu ciorchine de struguri atunci când se observă sub microscop de lumină
după colorarea Gram. Numele "Staphylococcus" a fost derivat din greacă, adică ciorchine de
struguri (staphyl) și boabe (kokkos). Observarea microscopică electronică prin scanare relevă
celule cu formă sferică aproximativă cu suprafață netedă. Diametrul celulelor variază de la 0,5 la
1,0 μM. Microscopia cu transmisie electronică a celulelor prezintă pereți de celule groase,
membrană citoplasmică distinctivă și citoplasmă amorfă.
Fig. 1 A și B). S. aureus sunt cocci gram pozitivi, care apar adesea în clustere neregulate
Pe frotiul colorat cu albastru de metilen sau Gram, realizat din culturi pe mediu solid,
stafilococii apar de formă perfect rotundă, dispuși în grămezi neregulate, asemănându-se
chircinilor de struguri. Pe cele efectuate pe culturi in mediul lichid pot apărea izolați, în pereche,
tetrade sau lanțuri scurte de 3-4 celule.
4
Stafilococii sunt, de regulă, gram-pozitivi, dar in condiții de stress metabolic (pH, temperatură,
factori antimicrobieni, presiune osmotică, etc.) se pot schimba in gram-variabili, adică în aceeași
grămadă, alături de coci gram-pozitivi apar și coci-negativi, mai mulți sau mai puțini. Odată cu
modificarile tinctoriale apar și modificări morfologice: forme ușor alungite, marginile
imprefecte.
Fig. 2: Staphylococcus aureus văzut sub microscop după colorația lui Gram
Prevalence of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Dairy Farms of Pokhara, Nepal - Scientific Figure on
ResearchGate
5
punțile de pentaglicină din S. aureus, hidrolizing astfel peretele celular și lizând bacteriile (32).
Datorită specificității sale unice, lizostafina ar putea avea un potențial ridicat în tratamentul
infecțiilor stafilococice rezistente la antibiotice. De exemplu, lizostafina, administrată singură
sau în combinație cu vancomicina, sa dovedit a fi mai eficientă în tratamentul endocarditei
aortice a valvei aortice experimentale cu meticilină decât în cazul vancomicinei în monoterapie
(34). Lizostafina a fost de asemenea raportată ca fiind eficace în tratamentul infecțiilor oculare
cauzate de S. aureus (33).
FIG.3 C) S. aureus vizualizat microscopic alături de E. coli, un bacil gram-negativ D) vizualizarea stângă a lui S. aureus arătând
forma lor sferică și formarea clusterizării
6
Recent, microscopia forței atomice (AFM) (35) a oferit noi oportunități pentru studierea pereților
celulelor microbiene la niveluri unice și monomoleculare. Tehnica este deosebit de potrivită
pentru vizualizarea suprafețelor celulelor vii unice în timp ce cresc, oferind informații despre
asamblarea peretelui celular și despre dinamica care nu poate fi obținută cu ajutorul
microscopiilor tradiționale. De exemplu, Touhami și colab. au fost capabili să monitorizeze
creșterea celulelor și evenimentele de divizare în S. aureus utilizând AFM combinată cu
microscopia cu transmisie electronică cu secțiune subțire. Au fost observate gauri în ganglionare
în jurul inelului septal la începutul divizării și au fost atribuite structurilor peretelui celular care
au o activitate autolitice ridicată. După separarea celulară, se observă inele concentrice pe
suprafața noului perete celular și se sugerau să reflecte peptidoglicanul nou format. AFM poate
fi, de asemenea, utilizat pentru a studia efectul medicamentelor asupra pereților celulelor
microbiene. Într-un astfel de studiu, micobacteriile au fost observate înainte și după incubare cu
izoniazid, etionamidă, etambutol sau streptomicină. După tratamentul medicamentos, s-au
observat modificări structurale majore sub formă de structuri stratificate, striatii și morfologii
poroase, sugerând că acestea reflectă inhibarea sintezei a trei constituenți principali ai pereților
celulari, adică acizii micoli, arabinani și proteine.
Temperatura optimă de creștere a stafilococilor este de 37 ℃, iar pH-ul optim este de 7.5, dar
poate tolera variații mari.
7
netedă, lucioasă și bombată. În cazul mediilor lichide, sunt tulburate omogen, cu depozit moderat
la fundul tubului însămânțat.
Tulpinile de stafilococi cu diverse deficiențe ale peretelui celular pot da naștere unor
colonii de tip lucios (G – glossy) pitice sau de tip rugos (G-R – rough), mici, granulate, fără
hemoliză și cu margini imperfecte.
8
care devine completă, asemenea celei produse de α-hemolizina, după expunerea la 4℃ a tulpinii,
timp de câteva ore.
Fig.5: Staphylococcus aureus pe agar de sânge Columbia. Rețineți pigmentul galben auriu și hemoliza beta în jurul
coloniilor. Cultivare 48 ore, 37 ° C. (CC BY-SA 3.0 by HansN.)
9
Fig. 6 - Cultura de S. aureus, maită pozitiv (stânga) și S. epidermidis s.s., manită negativ (dreapta), pe mediul hiperclorurat solid
cu manitol și roșu fenol după 24ore.
Pigmentarea coloniilor pe medii nutritive simple sau cu sânge defibrinat adăugat poate să nu
apară imediat ci după 24-48 de ore în cazul tulpinilor de Staphylococcus aureus supuse unui
tratament nefavorabil pentru dezvoltarea lor. Mediile ce conțin suplimente organice sunt
favorabile procesului de pigmentogeneză.
Aspectul coloniilor de stafilococi este influențat și de vârsta culturii; unele caracteristici precum
diametrul, pigmentul, hemoliza, sunt clar definite după 72-120 ore de creștere.
Fig. 7 S. saprophyticus pe agar Mueller-Hinton care prezintă rezistență la caracteristica de novobiocină pentru identificarea
speciilor
10
1.3 Habitat și implicații în patologia infecțioasă a cavității buco-nazale
tegumentul. Prop orția purtătorilor sănătoși variază între 10-40% în colectivitatea generală și între
’
40-70% în mediul de spital. În 1996, Bilbie și 1986, Kloos afirmau că speciile umane de
stafilococi coagulază-negativi co lonizează narile și tegumentul. Înafară de St aphylococcus
’ ’
Poarta de intrare este de obicei pielea. S. aureus produce leziuni inflamatorii pline de puroi,
cunoscute sub numele de abcese. În funcție de localizarea și amploarea implicării țesuturilor,
abcesul poate fi numit:
Impetigo;
Aceasta boala cu eruptii contagioase se poate dezvolta la orice varsta (dar estefoarte intalnita mai
ales la copiii mici si sugari). Tipurile de impetigo cauzate de stafilococi aucaracteristice prezenta
unor vezicule mari care pot contine lichid si care formeaza o crustacolorata, maronie. Aceste
leziuni de cele mai multe ori sunt localizate in jurul nasului si gurii;
Celulita stafilococica;
Este o infectie subcutanata care determina inrosirea si inflamareapielii, ducand la crearea unor
adancituri similare cu coaja de portocala.Celulitase dezvolta, decele mai multe ori, in partea
superioara a membrelor inferioare, la persoanele adulte sau la celein varsta;
Pustulă;
11
Un pustule este un folicul de păr infectat, în care baza foliculului de păr apare roșie și este
crescută cu o acumulare de puroi chiar sub epidermă. Foliculii de păr infectați sunt de asemenea
menționați ca foliculită.
Furuncul;
Furunclele apar ca noduli mari, crescuți, plini de puroi, dureroși, având o acumulare de țesut
mort, necrotic la bază. Bacteriile s-au răspândit de la foliculul de păr la țesutul subcutanat
adiacent. Este cel mai frecvent tip de infectie stafilococica. Sunt afectate zonele din profunzimea
foliculului pilos sau a glandei sebacee. Pielea care acopera zona infectata, devinerosie si este
inflamata, de obicei. Dacafuruncululse sparge, poate fi colectat puroi, sange sauun lichid de
culoarea chihlimbarului. Acesta apare cel mai adesea in zona axilei, in jurulorganelor genitale
sau pe fese;
Furuncul antracoid;
Furunculul antracoid apare atunci când furunculi se coagulează și se răspândesc în țesutul
conjunctiv subcutanat și mai profund. Pielea superficială perforează, îndepărtează și eliberează
puroi. (28)
12
- prostatita bacteriana; febra, dureri severe inghinale, testiculare, ale abdomenului inferior
simuschilor. Uneori este semnalata prezenta sangelui in sperma.In anumite cazuri, infectiile
stafilococice pot pune in pericol viata unei persoane. Iata care suntsimptomele asociate cu
diverse tipuri de boli cauzate de infectiile staficolocice care ar puteaameninta viata unui individ:
- pneumonia stafilococica; simptomele bolii sunt similare cu cele ale pneumoniei
obisnuite:febra ridicata, frisoane, cresterea ritmului cardiac,tusesi dificultati respiratorii;
- endocardita stafilococica; paloare,oboseala,febra,dureri de articulatii,eruptii sub formaunor
puncte mici, rosiatice pe piele, care apar in mod special in jurul degetelor;
- meningita stafilococica; oboseala, dureri de cap, extenuare, febra moderata si
confuziegeneralizata;
- septicemie (sepsis) stafilococica; febra,hipotermie,cresterea ritmului cardiac,hiperventilatie,
slabiciune,diaree,varsaturi, diminuarea cantitatii de urina eliminata si dificultatide respiratie. In
unele cazuri au fost observate si aparitia tulburarilor de coagulare a sangelui;
- fasceita necrozanta (infectie bacteriana a tesuturilor moi); papule rosii care se evolueazain
pustule care contin puroi inchis la culoare. Alte simptome sunt asemanatoare cu cele
alesepticemieistafilococice;
- sindromul de soc toxic; aceasta afectiune, care ar putea fi fatala, a fost asociata cuutilizarea
anumitor tipuri de tampoane (produse pentru igiena intima a femeilor), in rare cazuri,
S. aureus exprimă câteva proteine extracelulare care sunt virulente pentru gazdă. Pentru
majoritatea bolilor cauzate de acest organism, patogeneza este multifactorială. Multe dintre
infecțiile cu S. aureus au caracterul unor izbucniri nosocomiale cu diverse localizări: plagă
chirurgicală, infecții de șunt ventricular, peritonită la pacienți cu dializă peritoneală continuă, etc.
Infecțiile cu S. aureus MRSA, ce prezintă rezistență multiplă la antibiotice, sunt greu de stăpânit,
mai ales când evoluează în mediul de spital. S. aureus este inclus în cele 6 specii pentru care este
supravegheată rezistența față de antibiotice la nivel internațional, a tulpinilor izolate din infecții
invazive.
Amintim de asemenea, manifestările de tip toxiinfecții în care este implicat S. aureus:
toxiinfecțiile alimentare, „sindromul stafilococic al pielii opărite”, sindormul de șoc toxic
stafilococic.
13
Fig. 8 Cartarea speciilor de stafilococi coagulazo-negativi pe tegumentul uman
Unii stafilococi coagulază negativi și-au dovedit capacitatea patogenă condiționată. Acest
nou aspect al ecologiei stafilococilor s-a conturat în special în ultimile trei decenii în relație
directă cu utilizarea pe scară largă a procedurilor medicale invazive și a inserțiilor protetice.
Dintre acești stafilococi coagulază-negativi, S.epidermidis sensu stricto detine cel mai înalt
potențial patogen. Este agentul cauzal major al infecțiilor nosocomiale în secții de nou născuți si
oncologie, fiind prima cauză a bacteriemiilor în acest tip de unități. Poate cauza infecții în secții
de chirurgie cardio-vasculară, infecții de pace-maker, infecții de grefă vasculară, endocardită
14
asocitată cu valve protetice etc. Poate fi patogen primar în infecțiile asociate cu șunturile
lichidului cefalorahidian, protezele articulare, dispozitivele ortopedice. A fost semnalat ca agennt
prima al peritonitei asociata cu dializă peritoneală ambulatorie continuă și este frecvent izolat din
infecții ale tractusului urinar cum sunt cistita, uretrita si pielonefrita.
Staphylococcus haemolyticus a fost întâlnit în endocardită, chiar in absenta valvelor protetice,
septicemie, peritonită, infecții ale tractului urirnar, plăgilor chirurgicale, ale osului și
articulațiilor.
Dintre speciile descrise recent, S. lugdunensis și S. schleiferi par a fi patogeni oportuniști
semnificativi. Pot coloniza cateterele, drenurile, alte dispozitive introduse în organism și pot
cauza endocardite pe valve protettice sau native, septicemii, abcese cerebrale, infecții profunde,
osteite, osteoartrite cronice, infecții ale protezelor vasculare, infecții cutanate și ale plăgilor,
infecții ale lichidului peritoneal.
Staphylococcus saprophyticus constituie un agent etiologic frecvent implicat în infecțiile
tractului urinar la femeile tinere, cauzează unele uretrite negonococice și prostatite, infecții ale
plăgilor și septicemii. (carte)
Pentru a iniția o infecție, bacteria trebuie să aibă acces la gazdă și să se atașeze celulelor
sau țesuturilor gazdă. S. aureus are numeroase proteine de suprafață care promovează atașarea la
proteinele gazdă, cum ar fi laminina și fibronectina care fac parte din matricea extracelulară.
Fibronectina este prezentă și pe suprafețele epiteliale și endoteliale și este, de asemenea, o parte a
cheagurilor de sânge. Bacteriile au o fibrinogen / fibrină legată de proteine care îi ajută să se
atașeze la cheagurile de sânge și țesutul traumatizat. Acesta este motivul pentru care S. aureus
este capabil să producă infecții la răni și infecții post-chirurgicale.
S. aureus poate provoca daune grave gazdei. Ea face mai multe tipuri de toxine proteice
care sunt probabil responsabile pentru simptome în timpul infecțiilor. Aceste toxine afectează
membrana celulelor roșii și duc la defalcarea lor. De asemenea, ele produc leucocidină care
provoacă leucocitelor leziuni membranare. Relația dintre fiecare gazdă și tulpina lor de
colonizare este extrem de personalizată. Durata colonizării printre purtătorii nazali a fost
măsurată de la 70 de zile la 8 ani. Pare mai lungă în cazul transportatorilor persistenți, deși
metodele folosite pentru a dovedi izolarea rămân aceleași, au fost suboptimale în comparație cu
tehnicile contemporane.
15
Se pare că colonizarea nazală rezultă dintr-un singur organism fondator care se înmulțește în
timp cu evoluția variațiilor genetice minore limitate. Persoanele transportatoare persistente pot
dobândi secvențial o nouă tulpină care le înlocuiește organismul inițial de colonizare. Inocularea
experimentală a persistente și non-purtătoare stabilite cu tulpini multiple a determinat ca
majoritatea voluntarilor să se întoarcă la starea inițială de purtătoare "naturală" și, uneori, chiar
să se întoarcă la tulpina inițială de colonizare. Staphylococcus aureus prezent permanent în nasul
a aproximativ 20% din populație, reprezi ntă un factor de risc semnific ativ pentru infecții. Partea
’ ’
anterioară a cavității nazale (vestibulum nasi) este căptușită cu epiteliu stratificat, keratinizat,
scuamos. Mai mult de 60% din S. aureus din vestibulul nazal se găsește aici. S-a arătat, de
asemenea, că S. aureus se poate lega de celulele epiteliale nazale ciliate din partea interioară a
cavității nazale (nare interne) cu epiteliu cilindric cristalizat pseudostratat. Pielea din vestibulum
nasi este formată din două straturi principale: epiderma și dermul. Staphylococcus aureus aderă
la celulele epiteliale scuamoase găsite în nas iar proteinele exprim ate pe suprafața acestuia,
’
inclusiv facto rul de aglomerare B (ClfB), sunt responsabile pentru această interacțiune. S-a
’
dovedit anterior, în alte studii, că ClfB promo vează colonizarea cu Staphylococcus aureus.
’
Această cerc etare identifică acum mecanismul prin care ClfB facilit ează colonizarea.
’ ’
Interacțiunea dintre ClfB și loricrin s-a dovedit a fi crucială pentru colonizarea cu succes a
nasului la testele reali zate pe soareci. Un șoarece care nu are loricrin in cel ulele pielii sale a
’ ’
dezvoltat mai puține celule bacteriene decât un șoar ece obișnuit. Cand au fost utilizate tulpini de
’
Staphyloc occus aureus care nu aveau ClfB, colonizarea nazală nu a avut loc. (7, 8)
’
Cu toate astea, factorii gazdă care determină colonizarea nazală sunt incomplet înțeleși.
Polimorfismele în genele care codifică receptorul glucocorticoid, proteinele C reactive,
proteinele interleukinei-4 și inhibitorul de complement au fost asociate cu colonizarea cailor
nazale cu Staphylococcus aureus. Flora normală poate, de asemenea, influența capacitatea S.
aureus de a coloniza. (8)
16
2. Rezistența la antibiotice
Antibioticele, reprezinta descoperirea revolu ţionară a secolului XX și sunt în continuare
’
principalul instrument în lupta îm potriva infecţiilor bacteriene. Din păcate, utilizarea lor a fost
’
însoţită de apariţia rapidă a tulpinilor bacteriene reziste nte, astfel a devenit o importantă
’ ’
problemă de sănătate publică pe plan global. În anii 1930, la începutul erei antibioticelor, sunt
descoperite primele substanţe cu efect ant ibacterian – sulfonamidele şi penicilina. În perioada
’ ’
1940-1960 sunt descoperite cele mai multe dintre antibio ticele utilizate în prezent. Urmează apoi
’
pe rioada anilor 1980-1990, perioadă în care au fost realizate studii genetice pentru cunoa şterea
’ ’
genomului bacterian, precum şi a mec anismelor de acţiune a antibi oticelor. Sunt caracterizate
’ ’
cele mai importante clase de antibiotice şi mecanismele lor de acţiune. Imediat după
descoperirea primelor antibiotice, este recunoscut fenomenul de rezistenţă la antibiotice, una
’
dintre primele trei cele mai impo rtante amenințări ale secolului XX la adresa sănătăţii publice.
’
Apariţia şi izolarea tot mai frecventă a aşa-ziselor superbacterii, cu un nivel ridicat de rezistenţă
’
la majoritatea clas elor de antibiotice, pun probleme serioase de terapie a infecţiilor bacteriene.
’
Cunoaşterea mecanismelor şi bazelor geneti ce ale rezistenţei la princ ipalele clase de antibiotice
’ ’
ne poate da informaţii privind lu area de măsuri pentru prevenirea şi încetinirea răspân dirii
’ ’
rezistenţei. (6, 9)
17
modificarea unor proteine ale peretelui celular, ceea ce duce la scăderea permeabilității
bacteriene și modificarea țintei antibioticului astfel încât acesta să nu se mai poată lega de
structurile bacteriene.
Aceste proprietăți conferă rezistență la toate antibioticele care au în structura lor beta-
lactamine (peniciline și cefalosporine). Testarea tulpinilor rezistente se face prin testarea
sensibilității la meticilină; dacă tulpinile sunt rezistente la meticilină înseamnă că sunt rezistente
la toate antibioticele beta-lactaminice. Acești stafilococi se numesc stafilococi meticilino-
rezistenti (Engleză: MRSA – Methicilin resistent Staphylococcus aureus). Antibioticele de
elecție pentru aceste tulpini sunt Vancomicina, Linezolid, Fosfomicina, care sunt rezistente la
acțiunea beta-lactamazelor secretate de către stafilococi. ‚Pentru tulpinile sensibile, antibioticul
de elecție rămâne Oxacilina. Infecțiile grave care necesită doze mari sau infecțiile asociate cu
bacteriemie se vor trata cu antibiotice pe cale paren terală (injectabilă),asociind doua sau mai
’
multe antibiotice din clase diferite, în timp ce infecțiile pielii, ale țesut urilor moi sau ale căilor
’
respiratorii se pot trata prin admin istrare orală. Durata tratamentului și calea de administrare
’
diferă în funcție de localizare, severitate, imunitatea gazdei și răsp unsul la tratament; bacteri emia
’ ’
necesită 2-4 săptămâni de tratament cu antibiotic parent eral, osteomielita acută și endocardita
’
acută 4-6 săptămâni, în timp ce osteo mielita cronică necesită până la 6-8 săpt ămâni de tratament
’ ’
parenteral. (6)
Inhibarea creşterii bacteriene de către un antib iotic are loc când antibioticul
. .
interacţionează eficient cu ţinta sa. Această intera cţiune depinde de două elemente relevante,
.
cum ar fi antibioticul trebuie să recunoască ţinta şi puterea trebuie să fie suficientă pentru o
inhibare eficientă a activităţii agentului microbian. De aceea, mecanismele de rezistenţă se
bazează pe modificarea ţintei sau diminuarea concentraţiei de antibiotic. Aceste mec anisme pot
,
fi considerate „mecanisme active de rezistenţă“. Pe de altă parte, sunt descrise mecani sme care
’
lucrări recente au arătat că mai multe elem ente, implicate în procesele de bază ale
’
18
Astfel, bacte riile au devenit rezistente la antibiotice prin diverse mecanisme, cum ar fi:
’
acţiunea antibioticului.
Modificarea ţintelor specifice antibioticelor – bacteriile rezistente pot modifica ţintele,
astfel încât antibi oticul să nu le recunoască şi să nu se poată lega la acestea, permiţând
’
bacteriilor să supravieţuiască.
Organizaţia Mondială a Sănătăţii a afirmat că rezistenţa la antibiotice este una dintre cele
mai importante trei ameninţări la adresa sănătăţii publice ale secolului XX. Amenințare care,
după cum se vede, este indusă în mare parte chiar de om.
19
oamenilor şi asupra economiei, nu numai în Europa, ci şi în întreaga lume”. Creşterea
rezistenţei la medicamentele antimicrobiene este cauza a aproximativ 25000 de decese anual în
UE. (10,12).
Astfel, circulaţia crescută a antibioticelor, atât la oameni, cât şi la animale, a determinat apariţia
unor mutaţii la nivelul genomului bacterian, mutaţii care au dus la câştigarea rezistenţei la
antibiotice, pentru aceasta fiind responsabilă o gamă largă de mecanisme biochimice şi
fiziologice.
În 1940, câţiva ani înainte de introducerea penicilinei ca agent terapeutic, doi membri ai
echipei de descoperire a penicilinei au identificat o penicilinază bacteriană (14). Odată cu
utilizarea pe scară largă a penicilinei, tulpinile bacteriene rezistente, capabile să inactiveze
.
medicamentul, au devenit prevalente. S-au efectuat studii pentru a modifica chimic penicilina în
scopul prevenirii scindării de către penicilinaze (β-lactamaze).
Încă din anii 1960, s-a observat creşterea rezistenţei la antibiotice. Astfel, au fost realizate
cercetări farmacologice şi biochimice ale antibioticelor pentru cunoaşterea mecanismelor de
acţiune, dar şi a mecanismelor de rezistenţă ale acestora, în scopul îmbunătăţirii utilizării
antibioticelor prin dozare şi administrare.
Tot mai frecvent este utilizat termenul „superbugs“ („superbacterii“), care se referă la
agenţii microbieni care cauzează, ca urmare a mutaţiilor multiple, morbiditate şi mortalitate
crescute şi determină un nivel ridicat de rezistenţă la clasele de antibiotice recomandate în mod
21
special pentru tratamentul acestora. Opţiunile terapeutice pentru aceşti microbi sunt reduse, cu
perioade lungi de îngrijire în spital şi foarte costisitoare. În unele cazuri, tulpinile superrezistente
au obţinut, de asemenea, o virulenţă crescută şi o transmisibilitate sporită, ceea ce poate permite
ca rezistenţa la antibiotice să fie considerată chiar un factor de virulenţă.
Fig. 10 Consumul comunitar de antibiotic pentru uz sistemic in 30 de țări UE, 2016 (DDD/1000 locuitori/zi)
22
Rezistența florii nazale prezintă o provocare la fel de formidabilă pentru S. aureus.
Studiile privind purtătorii de S. aureus și non-purtătorii au arătat că prezența anumitor bacterii,
cum ar fi corynebacterium, S.epidermidis sau S. pneumoniae, ar putea împiedica transportul S.
aureus (14). Introducerea vaccinului S. pneumoniae, de exemplu, a fost demonstrată în unele
studii (15), dar nu și în altele (16), pentru a conduce la o creștere semnificativă a colonizării S.
aureus, determinând unii să speculeze că S. pneumoniae și S. aureus ar putea concura pentru
aceeași nișă. Mecanismul general al concurenței de nișă se propune a fi o competiție bacteriană
pentru aderarea la același receptor gazdă. În plus, anumiți concurenți, cum ar fi S. pneumoniae,
secretă peroxid de hidrogen care, la o concentrație ridicată, suprimă creșterea S. aureus (17). S.
aureus ar putea contracara secreția de catalază și probabil alți antioxidanți care neutralizează
peroxidul de hidrogen (18).
După stabilirea colonizării, S. aureus este poziționat în imediata apropiere a gâtului, urechilor,
gurii și sinusului; totuși, în mod surprinzător, transportul nazal duce rareori la infectarea acestor
locuri. Studiile privind reglementarea S. aureus sugerează că în timpul colonizării, multe gene de
virulență S. aureus pot fi reglate în jos (19). Dintre genele care controlează colonizarea și
virulența S. aureus, cea mai cunoscută regulatoare globală este reglajul gena adjuvant, care a fost
descris în detaliu în multe recenzii excelente (19). Pe scurt, agr este un loc de sesizare a
cvorumului, care controlează direct expresia unui număr de factori de virulență și colonizare.
Downregularea agr este asociată cu colonizarea și activarea agr cu invazia gazdei. O întrebare
critică este aceea care declanșează activarea genelor de virulență S. aureus pentru inițierea
infecției.
23
meticilină sa răspândit rapid în ultimii ani (16), iar primele izolate cu rezistență totală la
vancomicină au apărut recent. (17 18 19).
Proprietățile biofilmelor care duc la rezistența la antibiotice pot include creșterea lentă,
eterogenitatea fenotipică, prezența celulelor persiste, inactivarea antibioticelor în matricea de
exopolizaharidă din biofilm și limitările privind penetrarea antibioticilor impuse de matricea de
biofilm (22). Contribuțiile relative ale acestor proprietăți la rezistență nu sunt bine înțelese. În
special, un rol pentru matricea de exopolizaharidă stafilococică, compus în principal dintr-un
polimer de N-acetilglucozamină (PNAG) legat la β-1-6 în S. aureus și Staphylococcus
epidermidis, ca o barieră de difuzie, nu a fost stabilit definitiv. (23) Cele mai multe studii
publicate de difuzie în biofilme se concentrează asupra unui efect după câteva ore și nu reușesc
să abordeze rata cu care sunt transportate antibioticele. Rata de transport este importantă
deoarece amestecarea unui antibiotic într-o suspensie de bacterii planctonice expune rapid toate
celulele la doza completă de antibiotic. Dacă totuși, viteza de penetrare a antibioticului prin
intermediul unui biofilm este scăzută în raport cu viteza de transport printr-un lichid, cum ar fi
mediul sau sângele, atunci bacteriile pot fi expuse la o doză crescătoare treptată de antibiotic și
pot avea timp să montați un răspuns defensiv la compus. În sprijinul acestei idei, s-a demonstrat
că bacteriile cresc transcripția genelor asociate stresului, cum ar fi omologii proteinei de șoc
termic și genele de sinteză a peretelui celular într-o oră de la expunerea la doze mici de
antibiotice active pe peretele celular. (24). O problemă suplimentară cu multe studii anterioare
este că ele demonstrează că antibioticele se deplasează dintr-o parte a unui biofilm intact la
celălalt, dar nu dovedește că ating efectiv țintă celulară (22). Astfel, antibioticele pot traversa
biofilmul prin matricea exopolimerică și canalele de apă, astfel încât bacteriile nu sunt expuse
efectiv la o doză inhibitoare.
24
Glicopeptida vancomicina își exercită activitatea bactericidă prin legarea la resturile
terminale d-Ala-d-Ala din peretele peptidoglican, blocând astfel transpeptidarea (25).
Vancomicina este un important medicament antistafilococic, dar eficacitatea sa împotriva
biofilmelor este deosebit de săracă (26). Am profitat de disponibilitatea unui derivat de
vancomicină marcat cu fluorescență activă biologic, pentru a analiza legarea antibioticului la
țintă în peretele celular bacterian în cadrul unui biofilm viabil (27). Rezultatele noastre
demonstrează că vancomicina se leagă rapid la bacteriile planctonice și se leagă rapid la
suprafața biofilmului, dar că legarea la celulele din straturile cele mai profunde necesită mai mult
de o oră de expunere la antibiotic. Constatarile noastre sugereaza ca aceasta reprezinta o rata
scazuta de penetrare a vancomicinei in biofilm, mai degraba decat o incapacitate de droguri sa se
lege de bacterii. De asemenea, demonstrăm că acest efect nu depinde de elaborarea componentei
exopolizaharidice din matricea biofilmului, PNAG.
Introducerea methicilinei marchează debutul celui de-al doilea val de rezistență. Primele
rapoarte ale unei tulpini S. aureus care a fost rezistentă la meticilină au fost publicate în 1961.
Deși gena specifică, mecA, determinantul de rezistență la meticilină care codifică proteina de
legare la penicilină cu afinitate scăzută, PBP2a (denumit și PBP 2 '), nu a fost identificat mai
mult de 20 de ani mai târziu, a fost apreciat de timpuriu că mecanismul de rezistență a fost diferit
de rezistența mediată de penicilinază, deoarece nu a existat inactivarea medicamentului. Spre
deosebire de rezistența mediată de penicilinază, care este îngustă în spectrul său, rezistența la
meticilină este rezistentă la antibiotice beta-lactamice la peniciline, cefalosporine și
25
carbapenemuri. Printre cele mai timpurii dintre izolatele clinice ale MRSA se numără tulpina
arhetipală COL, un membru al clonei "arhaice" a MRSA și probabil cea mai studiată tulpină
MRSA, izolată de la un pacient din Colindale, Marea Britanie în 1960. COL este o membru al
celor mai de succes dintre toate linii MRSA, care include atât spitale, cât și tulpini asociate
comunității.
Aceste clone arhaice ale tulpinilor MRSA au circulat în spitalele din întreaga Europă
până în anii 1970. Au existat rapoarte izolate de MRSA din spitalele din Statele Unite44, 45, dar
restul lumii a fost în mare parte cruțată și aceste MRSA nu au obținut niciodată comunitate. Până
în anii 1980, din motive neclare, tulpinile arhaice ale MRSA au dispărut în mare parte din
spitalele europene, marcând sfârșitul celui de-al doilea și începutul celui de-al treilea val de
antibiotice. Au apărut descendenții clonei arhaice MRSA (de exemplu clonele Iberiene și
Roma46) și alte linii de succes MRSA, constituind al treilea val de rezistență la antibiotice.
Focarele de infecții cauzate de tulpinile de MRSA au fost raportate în spitalele din Statele Unite
la sfârșitul anilor 1970 și până la mijlocul anilor 1980 au fost endemice. Aceste tulpini au
măturat globul care a dus la pandemia mondială a MRSA în spitale, care continuă până în
prezent. Deși la nivel mondial în distribuție și impact, SAMR a fost încă limitat în principal la
spitale și alte instituții medicale instituționale, cum ar fi facilități de îngrijire pe termen lung.
Povara tot mai mare a infecțiilor cu SAMR în spitale a dus la o mai mare utilizare a
vancomicinei, ultimul antibiotic rămas la care tulpinile MRSA au fost susceptibile de fiabilitate
și sub această presiune selectivă intensivă de vancomicină S. aureus intermediar (VISA, care nu
este inhibată in vitro la vancomicină concentrații sub 4 până la 8 μg / ml) și S. aureus rezistente
la vancomicină (VRSA, inhibat numai la concentrații de 16 μg / ml sau mai mult) au apărut 53 de
tulpini de MRSA.
26
bine documentate de infecție cu MRSA care au fost cu adevărat asociate cu comunitatea au avut
loc la copii sănătoși în 1997-99. Acești copii nu aveau factori de risc pentru MRSA și toți au
murit cu infecție copleșitoare, sugerând că aceste tulpini comunitare de MRSA au fost deosebit
de virulente. La fel ca omologii lor australieni, aceste izolate CA-MRSA nu au legătură cu
clonele spitalicești și au fost susceptibile la cele mai multe antibiotice. Epidemia CA-MRSA din
SUA poate fi urmărită la începutul anilor 1990, pe baza datelor retrospective din 1993-1995, care
arată o creștere dramatică a Infecțiile cu MRSA la Chicago în rândul copiilor care nu au factori
de risc pentru expunerea asociată cu MRSA asociată spitalelor. CA-MRSA a fost raportată de
atunci în numeroase populații, inclusiv indienii americani și nativii din Alaska; Pacific Islanders;
sportivi; deținuții; bărbații care fac sex cu bărbații; contactele pacienților cu infecție CA-MRSA;
personalul militar; adulți la pacienții de urgență; și copiii din centrele de îngrijire de zi. Clonele
CA-MRSA au dobândit, de asemenea, un punct de sprijin în spitale și sunt din ce în ce mai
identificate ca o cauză a infecțiilor asociate spitalizării și heathcare-ului.
27
Focarele și epidemiile CA-MRSA se produc în prezent la nivel mondial și cu o epidemiologie
similară, deși clonele specifice care au apărut variază în funcție de localizarea geografică. CA-
MRSA tulpinile nu sunt doar evadari din facilitatile de asistenta medicala; genotipurile acestora
indică faptul că acestea nu sunt strâns legate de clonele spitalicești endemice și că aceste tulpini
comunitare sunt susceptibile la numeroase antibiotice la care tulpinile spitalelor sunt rezistentă în
mod obișnuit. Doi markeri moleculari care nu se găsesc în MRSA spitalicesc tipic sunt puternic
asociate cu apariția CA-MRSA indiferent de originea geografică: un element specific de casetă
care codifică mecA și genele care codifică leucocidina Panton-Valentine (PVL).
Infecțiile cutanate și ale țesuturilor moi sunt cel mai frecvent tip de infecție CA-MRSA,
reprezentând aproximativ 90% din cazuri, dintre care 90% sunt abcese și / sau celulită cu drenaj
purulent. Tulpinile CA-MRSA par să fie, de asemenea, în special virulente cu capacitatea de a
provoca infecții fulminante și copleșitoare, cum ar fi fasciita necrotizantă, pneumonia
necrotizantă, infecțiile osoase și articulare însoțite de boala tromboembolică septică, purpura
fulminan cu sau fără sindromul Waterhouse-Friderichsen, celulita orbitală și endoftalmită,
infecții ale sistemului nervos central și bacteremie și endocardită. (36)
28
Aspectul
Specia Aspectul Diametrul Pigment coloniilor pe
coloniilor pe agar coloniilor mediul solid
sange hiperclorurat
Fara Colonii
pigment/ nepigmentate,
S. epidermidis Opac 2.5-6mm rar gri- mediul ramane roz
galbui
Gălbui/ Colonii
portocaliu/ nepigmentate,
S. lugadunesis Neted, lucios, usor 4-7mm Fara mediul rămâne roz
convex pigment
29
Tabel 1. Caractere de cultivare pe agar sânge și pe mediul hiperclorurat solid cu manitol și roșu fenol ale speciilor de
stafilococi cu importanță clinică (3 zile de incubare la 37℃ + 2 zile la temperatura camerei)
30
31
1.Material și metodă
Recoltarea se face cu tamponul faringian steril. Timpul optim de recoltare este fie
dimineaţa pe nemâncate, înainte de toaleta cavităţii bucale, pentru a nu diminua flora bacteriană
prin acţiunea de curăţire mecanică a mucoaselor prin toaleta cavităţii bucale sau în timpul
alimentaţiei, fie la 3-4 ore după toaleta cavităţii bucale, gargarisme cu antiseptice sau ingestia de
alimente.
Tehnica de recoltare: pacientul este aşezat cu gâtul în uşoară extensie, cavitatea bucală deschisă
la maximum, faringele bine expus prin iluminare, baza limbii (faţa dorsală) deprimată cu o
spatulă (apăsător de limbă) sterilă. Bolnavul este invitat să pronunţe tare vocala A. Tamponul se
introduce fără a atinge limba şi palatul (pentru a nu contamina proba cu flora bucală) şi mai ales
lueta (pentru a nu declanşa reflexul de vomă). Se tamponează ferm, printr-o mişcare circulară şi
se şterge suprafaţa amigdalelor, peretele posterior al faringelui precum şi orice zonă inflamată,
ulcerată sau cu depozite purulente. Tamponul este scos cu precauţie, se reintroduce în tubul
protector şi se trimite imediat la laborator sau se introduce în mediu de transport până la
prelucrare.
Prin examenul bacteriologic al exsudatului nazal se pot identifica si alti germeni: meningococ-
cu o rata de portaj de 5 – 30 %, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, serotipul B,
Corynebacterium diphtheriae si chiar enterobacterii.
Astfel, pentru cercetarea starii de portaj se introduce tamponul de uz general umectat cu solutie
salina izotonica, in fosele nazale atat cat este posibil si se roteste usor pentru a face posibila
desprinderea secretiei.
32
Atunci cand se constata leziuni la nivelul vestibulului nazal se procedeaza la ridicarea lobului
nazal cu policele unei maini, restul palmei fiind asezat in fruntea bolnavului. In acest fel se
descopera vestibulele nazale, se indreapta fasciculul de lumina in dreptul leziunii si se rcolteaza
cu tamponul.
33
canalele. După recoltare, conurile/meșele vor fi introduse în
eprubete cu bulion glucozat 2ml unde se agită pentru împrăștierea
florei microbiene după care se însămânțează 2-3 picături pe
geloză-sânge.
2. Controlul sterilității canalelor radiculare se face respectând
aceleași reguli de asepsie și antisepsie locală; se îndepartează
obturația provizorie, se spală abundent canalul cu 10ml ser
fiziologic steril. După spălare, canalul este uscat cu meșe sterile pe
ace Miller. Pentru recoltare se introduc din nou in canal meșe sau
conuri unde se mențin 2-3 minute și sunt însămânțate ulterior pe
medii de cultură adecvate.
d) Recoltarea produsului din granulomul dentar
Recoltarea din granuloamele dentare se poate face la dinții extrași sau „în situ” la dinții
de pe arcadă.
In primul caz, după extracția dintelui cu dranulom apical, se dezinseră steril granulomul cu
ajutorul foarfecelui și se introduce într-o cutie Petri. După termocauterizarea peretelui
granulomului, se pătrunde cu vârful unei pipete Pasteur sterile și se aspiră conținutul, făcându-se
apoi însămânțarea în condiții propice.
În cazul în care dinții sunt păstrați, puncția granulomului se va face în timpul rezecției apicale.
34
3) microscopul cu contrast de fază - se foloseşte la examinarea preparatelor native în care
microorganismele şi celulele au aspect tridimensional,
4) microscopul cu lumină UV se utilizează pentru examinarea preparatelor colorate cu
substanţe fluorescente.
35
Însămânțarea prelevatelor patologice, în funcție de natura lor, o facem direct sau după o
prealabilă prelucrare: concentrare, decontaminare, omogenizare, inactivarea unor substanțe
animicrobiene.
Prelevatele omogene, fluide, sau emulsionabile, le putem insămânța direct.
Concentrăm prin centrifugare probele fluide sau omogenizate (spută).
Decontaminarea prin spălare în soluție salină izotonă este utilă pentru sputa mucopurulentă,
pentru porțiunile muco-sanguinolente din scaun. Tratarea cu hidroxid de sodiu decontamineaza
probele pentru izolarea microbacteriilor; concomitent fluidifica și omogenizează sputa.
Omogenizarea sputei pentru izolarea bacteriilor neacido-rezistente o facem cu N-acelit-cisteină,
iar a țesuturilor prin mojarare în tub Griffith.
A. Epuizarea inoculului cu ansa pe plăci cu mediu agarizat și obținerea culturilor pure
necesare identificării.
Inițial evaporăm condensul de pe suprafața mediului prin menținearea plăcilor cca. 30 minute la
37℃ cu capacul întredeschis: „uscarea plăcilor”.
Pe plăcile cu medii agarizare neselective, uzuală este izolarea prin epuizare semicantitativă a
inoculului în 4 cadrane conform schemei figurii X, cu arderea ansei când schimbăm direcția
striurilor de epuizare. Metoda permite aproximarea relativă a creșterii.
36
Pentru izolări pe medii selective, cantitatea de inoculum trebuie sa fie mai mare, iar epuizarea
mai puțin drastică. Inițial, conform schemei din figura 13, etalăm în aria A una sau mai multe
anse cu onocul ori inocul prelevat pe tampon. Epuizăm apoi inoculul, fără sterilizări intermediare
ale ansei, prin 3 serii de striuri: B, C și D. Cantitatea de fluid prelevată în ansă diferă cu poziția
de scufundare și retragere a ansei: cantitate minimă și constantă la scufundarea și retragerea
verticală, cantiate maximă la scufundare cât mai oblică și retragerea ansei prin „smulgere” din
fluid.
Pură poate fi considerată acea cultură formată din
descendenții unei singure colonii rezultate după o epuizare
a materialului microbian, care duce la creșterea sub formă
de colonii bine izolate pe mediu de cultură neselectiv. Ideal
ar fi ca asemenea creștere să pornească de la indivizi izolați.
Practic ea pornește de la unități formatoare de colonii.
În microbiologia clinică, o singură epuizare optimă pe un
mediu neselectiv poate fi suficientă, dar o reepuizare este de
dorit. Când cultura primară rezultă după epuizare pe un
mediu selectiv, reepuizarea pe un mediu diferential este
obligatorie. Coloniile microorganismului urmărit pe mediul
selectiv pot conține un număr de contaminanți inhibați, care
la repicarea directă în mediul de identificare își reiau
activitatea. Bacteriile inhibate rămân în profunzimea
coloniilor, în apropierea suprafeței însămânțate. De aceea, la purificarea izolatelor de pe mediile
selective, pentru repicarea prin reepuizarea acestor colonii prelevăm inoculul numai prin
atingerea suprafeței coloniei; niciodată nu trebuie să sectionăm colonia cu ansa.
Izolarea bacteriilor din prelevate contaminate cu Proteus este posibilă pe medii care inhibă
caracterul invaziv al acetor specii: agar cu săruri biliare, agar cu eritrocite de cal și cărbune activ,
agar-sânge cu alcool feniletilic, un agar deficient în electroliți.
B. Însămânțarea în medii lichide o facem direct cu seringa de prelevare (hemoculturi), cu
pipeta (sedimentul LCR), cu ansa încărcată cu prelevat patologic monomicrobian ori
cultură pură (fig. 14)
37
(A) Înclinăm tubul și descărcăm ansa pe peretele tubului precum în imagine. (B) Readucem tubul
in poziție verticală, inoculul ajunge submers și difuzează în mediu.
38
1.6 Identificarea meticilinorezistenței
MRSA a fost detectat pentru prima dată în Marea Britanie în 1961 și este acum "destul de
comun" în spitale. MRSA este definită ca o tulpină de S. aureus care este rezistentă la un grup
mare de antibiotice numite β-lactame, care include peniciline și cefalosporine.
MRSA este un patogen major nosocomial la nivel mondial, care a apărut în ultimii 30 de
ani ca o cauză principală a infecțiilor nosocomiale și comunitare. Rezistența la meticilină este
cauzată de prezența genei mecA, care codifică 78 kDa, proteina de legare la penicilină (PBP) -2a
sau PBP2 'care are o afinitate scăzută pentru antibioticele β-lactamice. Într-o meta-analiză a 31
de studii, Cosgrove și colab. a raportat că bacteremia MRSA este asociată cu o mortalitate
crescută în comparație cu bacteriemia sensibilă la meticilină S. aureus (MSSA).
39
inhibare (MIC), teste de diluare a agarului etc. Toate aceste teste sunt metodele fenotipice
convenționale de identificare a SAMR. Metoda genotipică (moleculară) este metoda bazată pe
reacția în lanț a polimerazei (PCR) pentru detectarea genei mecA, care rămâne "standardul de
aur" pentru diagnosticarea MRSA
2.Rezultate obținute
16
14
12
10
8
6
4
2
0
35-40ani 41-45ani 46-50ani
40
B. repartiția pe sexe
Repartiția pe sexe
Bărbați
12; 40% Femei
18; 60%
În cadrul acestui studiu au fosts examinate produsele patologice după cum urmează:
41
D. tipuri de specii bacteriologice identificate
- din cele patru tipuri de produse patologice examinate au fost identificate specii bacteriologice
după cum urmează:
a) examen faringian:
examen faringian
7
6
6
4
4
2
2
0
Stafilococ auriur hemolitic Stafilococ coagulază negativ Streptococ betahemolitic grup A
42
Total probe Stafilococ auriur Stafilococ coagulază Streptococ
hemolitic negativ betahemolitic
30 6 24 0
% 20% 80% 0%
examen nazal
30
25 24
20
15
10
6
5
0
0
Stafilococ auriur hemolitic Stafilococ coagulază negativ Streptococ betahemolitic
43
Total A B C D E F G (puroi
probe steril)
55 10 6 5 10 4 3 17
d) abcese: din cele 5 probe patologice au fost identificate specii bacteriologice după cum
urmează:
** Menționez că în cele 5 probe a fost prezent stafilococul anaerob asociat cu celelalte 3 specii.
44
Total probe Stafilococ Eubacterium Fusobacterium Bacteroides
anaerob mortiferum
5 5 2 2 4
5
5
4
4
2 2
2
0
Stafilococ anaerob Eubacterium Fusobacterium mortiferum Bacteroides
3.Concluzii
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
Bibliografie:
1. Rosenbach, AJ. Mikro-Qrganismen bei den Wund-Infections-Krankheiten des Menschen.
Wiesbaden, J.F. Bergmann, 1884. p. 18
2. Codiță, Irina, Buiuc, D. [2008]. Identificarea cocilor Gram pozitivi aerobi și facultativ anaerobi,
în Tratat de Microbiologie Clinică, sub redacția Buiuc și Neguț ,Ed. a-II-a, Ed. Medicală,
București
3. Euzeby, J.P. [2011]. List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature Genus
Staphylococcus, http://www.bacterio.cict.fr/s/staphylococcus.ht ml ,
4. Răducănescu, H., Bica-Popii, V. [1986]. Bacteriologie veterinară, Ed. Ceres, București.
5. Ryan KJ, Ray CG, eds. (2004). Sherris Medical Microbiology (4th ed.). McGraw
Hill. ISBN 978-0-8385-8529-0.
6. Khan, M. F. (2017). Brief History of Staphylococcus aureus: A Focus to Antibiotic
Resistance. EC Microbiology, 5, 36-39.
7. Kluytmans J, van Belkum A, Verbrugh H (July 1997). "Nasal carriage ofStaphylococcus
aureus: epidemiology, underlying mechanisms, and associated risks" . Clinical Microbiology
Reviews. 10 (3): 505–20. doi:10.1128/CMR.10.3.505. PMC 172932. PMID 9227864.
8. Michelle E. Mulcahy, Joan A. Geoghegan, Rachel M. McLoughlin. “Nasal Colonisation by
Staphylococcus aureus Depends upon Clumping Factor B Binding to the Squamous Epithelial
Cell Envelope Protein Loricrin” https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1003092
9. Jevons MP (1961). "Celbenin-resistant staphylococci". BMJ. 1 (5219): 124–5.
doi:10.1136/bmj.1.5219.124-a. PMC 1952878.
10. World Health Organization. Antimicrobial resistance: global report on surveillance 2014.
Downloaded from: http://www.who.int/drugresistance/documents/surveillancereport/en/.
11. Vytenis A. Commissioner for Health and Food Safety, and Carlos Moedas, Commissioner for
Research, Science and Innovation – European Antibiotic Awareness Day 2017, Brussels, 15
November 2017.
12. Popa MI. Infecţiile nosocomiale din nou în actualitate. (editorial) Infecţio.ro. 2015;44(4):3.
13. McKenna M. Big Chicken: The Incredible Story of How Antibiotics Created Modern
Agriculture and Changed the Way the World Eats Hardcover. The Amazon Book Review,
September 12, 2017.
14. Schmidt ML, Spencer MD, Davidson LE. Patient, Provider, and Practice Characteristics
Associated with Inappropriate Antimicrobial Prescribing in Ambulatory Practices. Infect
Control Hosp Epidemiol. 2018;1-9.
15. Davies J. Vicious circles: looking back on resistance plasmids. Genetics. 1995;139:1465-1468.
16. Richet, H. M., M. Benbachir, D. E. Brown, H. Giamarellou, I. Gould, M. Gubina, P.
Heczko, S. Kalenic, M. Pana, D. Pittet, S. B. Redjeb, J. Schindler, C. Starling, M. J.
Struelens, W. R. Witte, and S. Jarvis. 2003. Are there regional variations in the diagnosis,
surveillance, and control of methicillin-resistant Staphylococcus aureus? Infect. Control Hosp.
Epidemiol. 24:334-341.
17. Bartley, J. 2002. First case of VRSA identified in Michigan. Infect. Control Hosp. Epidemiol.
18. Centers for Disease Control and Prevention. 2002. Vancomycin-resistant Staphylococcus
aureus—Pennsylvania, 2002. Morb. Mortal. Wkly. Rep. 51:902.
19. Centers for Disease and Prevention. 2004. Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus—New
York, 2004. Morb. Mortal. Wkly. Rep. 53:322-323.
55