MICROORGANISME IMPLICATE N BIOTEHNOLOGII: PROCARIOTE Grupa cocilor. Fam. Miicrococaceae: gen Staphylococccus, gen Micrococcus. Fam. Streptoccaceae. Fam.

Neiseriaceae. Clasificarea pe baza proprietilor fiziologice, implicatiile reprezentanilor n procese biotehnologice, i cerinele biologice ale acestora.

GRUPA BACTERIILOR DE FORM ROTUND (GRUPA COCILOR) Familia MICROCOCCACEAE Genul Staphylococcus Stafilococii sunt bacterii patogene, de form rotund, dispui n grmezi neregulate cu aspect de ciorchine (staphylos), Gram pozitivi, cu tropism pentru esutul dermic, dar cu posibilitatea de a invada orice alt esut. Specia tip este Staphylococcus aureus (sin. S. pyogenes), descris de Rosenbach (1884). S. epidermidis i S. saprophyticus.
1

Stafilococii patogeni: -biotipuri: (A - uman, B - bovin, C - bovin/ovin, D - iepure, E - cine i F porumbel) Ecologia. - germeni foarte rspndii n mediul exterior (sol, aer, ap) - comensali ai pielii i mucoaselor Rezistena la factorii de mediu: -la temperatura camerei, rezist timp de 2-3 luni n sput i puroi uscat cteva sptmni -majoritatea celulelor bacteriene sunt distruse la 60oC n 30 minute -alcoolul de 70% inactiveaz stafilococii n 60 de minute

Specii i subspecii din genul Staphylococcus (dup Euzeby - 1991) Denumirea veche Staphylococcus aureus S. aureus, subsp. anaerobius S. epidermidis
2

Denumirea actual S. aureus, subsp. aureus

Importana patogenetic abcese, mamite, dermatite, artrite etc. boala abceselor la berbec n vestibulul nazal i pe

tegumentele omului si animalelor contaminnd S. hycus, subsp. hycus S. hycus, subsp. chromogenes S. schleiferi S. schleiferi, subsp. coagulans S. schleiferi, subsp. schleiferi S. capre S. gallinarum S. arlette S. lentus S. equorum S. muscae S. hycus (S. epidermitis) S. chromogenes frecvent alimentele epidermita exudativ a porcului mastit la vaci (patogenitate ndoielnic) otit extern la cini

izolat de la Musca domestica i Stomoxix calcitrans capturate n adposturile de bovine izolat de la peti i crevei izolat din alimente fermentate izolat de la oameni (vomismente, hemocultur, urin), din alimente de
3

S. piscifermentans S. carnosus S. pasteuri

origine vegetal, lapte de capr) Morfologia: -coci sferici cu diametrul de 0,8-l m, -nesporulai, neciliai, necapsulai -unele tulpini pot forma o capsul muco-polizaharidic, -se coloreaz obinit Gram pozitiv, celulele din culturi vechi i cele fagocitate se pot colora Gram negativ -se grupeaz sub forma unor grmezi caracteristice, cu aspect de ciorchine de strugure, care a inspirat numele genului. -n frotiurile mai groase de pe medii solide, germenii au aspectul unui desen alveolar -au fost puse n eviden i fimbrii aderarea cu uurin de tegumente i mucoasele cilor respiratorii. -prezint plasmide numeroase cu rol n rezistena fa de antibiotice. -exist tulpini de stafilococ sunt lizogene oi unele care produc bacteriocine (stafilococine). Cultivarea. -se dezvolt bine pe medii uzuale, -se utilizeaz medii selective ca mediul Chapman, mediul Bayrd-Parker, Incubarea se face la 37oC, dezvoltarea realizndu-se n 16-24 de ore. Proprieti biochimice. -fermenteaz fr producere de gaz, glucoza, lactoza, zaharoza, manitolu -activitatea enzimatic fa de manitol, indicator de patogenitate
4

-produc catalaz, permite diferenierea de ali coci patogeni, ca streptococul i pneumococul Sensibilitate la antibiotice. - sunt sensibile la o gam larg de antibiotice: penicilin i penicilinele semisintetice, eritromicina, neomicina, cloramfenicol, tetraciclin etc. -frecvent apar variante antibiorezistente. -se recomand efectuarea de antibiograme, mai ales cnd se fac tratamente n mas sau ndelungate. Structura antigenic. -au putut fi individualizate cel puin 30 de determinani antigenici. Proteina A se ntlnete la peste 30 % din tulpinile de stafilococ patogen (importan practic n testele de rozetare ES). -are aciune anticomplementar, antifagocitar, lezeaz trombocitele i induce o stare de alergie -vaccinurile din asemenea tulpini au o imunogenitate mai puternic. Elemente de patogenitate. - Hialuronidaza -enzim ce acioneaz prin descompunerea acidului hialuronic, n glucosamin, acid gluconic i acid acetic, -favorizeaz ptrunderea i extinderea stafilococilor n esuturi - Coagulaza -enzim extracelular, ntlnit la majoritatea tulpinilor de stafilococ, -determin coagularea plasmei sangvine -este ntlnit preponderent la tulpinile patogene de S. Aureus
5

-blocheaz accesul n exudatul inflamator a factorilor bactericizi -Stafilochinaza (fibrinolizina) -enzim proteolitic, -acioneaz prin lizarea reelei de fibrin, permind progresia stafilococilor n esutul sntos. - Lipazele -active asupra lipidelor plasmatice i a grsimilor de pe suprafaa tegumentelor. - Hemolizinele -toxine cu o structur proteic, -aciune hemolitic, dermonecrotic i letal (de tip , , i ) -S. aureus de origine animal prezint frecvent, asociaia -- - Leucocidina -rolul de a proteja celula stafilococului de aciunea neutrofilelor organismului gazd. - Enterotoxinele -exotoxine difuzibile cu tropism pentru mucoasa intestinal. -s-au identificat 6 variante antigenice, notate cu literele A, B, C, C1, D i E, -implicate n sindromul de toxiinfecie alimentar - Toxina epidermolitic i exfoliant. -este capabil s determine distrugerea cementului intercelular, -la om determin "sindrom al pielii oprite stafilococice" ( Staphylococcal Scaled Skin Syndrom), -la animale determin epidermita exudativ a porcului
6

Infecia natural. -produc numeroase i variate infecii purulente la om i animale -infeciile cutanate sunt cele mai frecvente, deoarece stafilococii patogeni de pe tegumente gsesc uor acces la nivelul foliculului pilos i determin infecia acestuia sau foliculita. - La om: toxiinfecii alimentare, furunculoza, septicemii, abcese, flegmoane i inflamaii n diferite esuturi i organe (foliculite, piodermite, artrite, sinuzit, otit, meningit, cistit, endocardit etc.). - La animale: mamita gangrenoas a oilor i caprelor (rsfugul negru); epidermita exudativ a porcului, botriomicoza la cal, mamita stafilococic a vacilor. In aceste procese infecioase stafilococcii se gsesc deseori n asociere cu ali germeni. Conduita de diagnostic. - Testul de coagulare a plasmei - Infecii experimentale -inoculri pe iepuri i obolani tineri, la care cultura se administreaz i.v. - Examene biochimice -testul catalazei, fermentarea manitolului, evidenierea hemolizinelor. Imunoprofilaxie -n cazul mamitei gangrenoase, se poate face vaccinarea cu o anacultur, nc din perioada de gestaie. Terapia -n funcie de localizarea i severitatea procesului infecios.
7

-localizri superficiale, evacuarea puroiului prin incizie i aplicarea de pansamente antiseptice locale -n formele severe, se instituie un tratament antiinfecios, pe cale general, n funcie de rezultatul unei antibiograme, -se poate asocia o imunoterapie, prin administrarea de anatoxin stafilococic + stokvaccin sau autovaccin, Genul Micrococcus (Cohn 1872) Cuprinde coci cu dimensiuni de 0,3-3,5 m, caracterizai prin capacitatea de a aprea n frotiuri sub forma unor grupri caracteristice n tetrad sau sarcina, uneori asemntor stafilococilor. -germeni aerobi, catalazo-pozitivi, -au o larg rspndire n natur (sol, aer, ap, pielea omului i animalelor) -se cultiv pe medii uzuale de cultur, agar cu snge -pe mediile solide formeaz colonii de dimensiuni variabile, netede, rotunde, lucioase, opace, cel mai adesea pigmentate n gri-galben, pn la galben crem sau roz. -micrococii au urmtorul comportament: coagulaz negativ, catalaz i oxidaz pozitiv, testul O-F (glucoz) de tip oxidativ, hemoliz variabil, sensibilitate la bacitracin i rezisten la furazolidon Speciile mai importante Micrococcus luteus (sin. Sarcina lutea) (ap, aer, alimente, probe patologice) M. lizodeikticus (sensibil la aciunea lizozimului). Rolul patogen nesemnificativ, dar trebuie cunoscui pentru a evita confuziile cu stafilococii
8

Familia STREPTOCOCCACEAE (Deibel i Seeley Jr. 1974) Familia Streptococcaceae grupeaz germeni de form sferic sau ovoidal, dispui cel mai adesea n lanuri de lungimi variabile, Gram pozitivi, imobili, nesporulai. -rspndii numai n anumite nie ecologice -pe sol i n ap ajung numai accidental. Pe baza proprietilor fiziologice i a habitatului se clasific n 7 genuri: Genul Leuconostoc Coci nepatogeni pentru om se izoleaz din fructe, vegetale, produse lactate, zahr. Specia tip este L.mesentericus. Reprezentanii genului au forma sferic sau lenticular aezate n perechi sau lanuri imobile, asporogene, n general capsulate, gram pozitive, facultativ anaerobe, catalaz negative, , avnd nevoie pentru dezvoltare de acizii nicotinic i pantotenic, de tiamin i biotin. Dezvoltarea este condiionat de prezena n medii a hidrocarbonailor fermentabili. Pe mediile solide formeaz colonii mici (<1 mm), netede rotunde, alb-gri. Sunt heterofermentativi. Prin fermentarea glucozei produce D-acid lactic, etanol i dioxid de carbon. Unele tulpini au un mecanism oxidativ i formeaz acid aceric n loc de etanol iar altele produc din zaharoz o substan mucilaginoas caracteristic. Nu hidroloizeaz arginina, formeaz manitol din fructoz. Numai rareori acidific coaguleaz laptele i anume numai n prezena i hidrocarbonailor i

extractul de drojdii. Nu sunt proteolitici i nu formeaz indol, nu reduc

9

nitriii i nu elaboreaz hemolizine. Se dezvolt bine la temperaturi cuprinse ntre 20-30 0C, niciodat la 45 0C. Nu sunt patogene pentru om i animale dar contamineaz des produsele acide i zaharoase cu defecte i produc fermentaia malolactic a vinurilor. Unele specii L.cremonis, se folosesc n maialele mixte pentru unele brnzeturi (Olanda, Trapist, camembert). La brnzeturile albastre (bleus) se folosesc pentru a uura formarea crpturilor. Reprezentanii acestui gen sunt: - L.mesenteroides, L. dextranicum, L.paramesenteroides, L. lacris, L.cremoris), foarte nrudite, greu de difereniat una de alta i care ncep multiplicarea n medii cu pH 5,5 6,5. Ele se gsesc n soluiile mucilaginoase de zahr, n legume n fermentare i n produsele lactate. - L.oenos ntlnit n unele vinuri i care se dezvolt n medii cu pH 4,84,2 i chiar mai mic. - L. citrovorus i paracitrovorus - se folosesc n combinaie cu alte specii de bacterii lactice la prepararea smntnei fermentate, a untului i a unor sortimente de brnzeturi, pentru aroma specific obtinut prin fermentarea lactozei i a acidului citric. - L. pleofructi i L.mezenteroidis - care altereaz conservele de piersici i ananas; a. Deosebirea speciilor de Leuconostoc de lactobacilii care formeaz gaze se face uneori greu. Toi leuconostocii formeaz D-acid lactic i nici unul nu hidrolizeaz arginina, n timp ce lactobacilii gazogeni formeaz DL-acid lactic i hidrolizeaz arginina.
10

Genul Pediococcus Cuprinde bacterii cu forma de coci aezai n perechi sau n tetrade ca urmare a diviziunii alternative pe dou planuri, sunt imobile, asporogene, Gram pozitive, cu metabolism fermentativ, facultativ anaerobe sau microaerofile, i au nevoie pentru nmulire de diferii factori de cretere. Au fermentaie hemolactic producnd acid lactic racemic (DL). Ele sunt saprofite i se gsesc n diferite materiale fermentate (bere), mai rar n lapte i produse lactate contaminnd des produsele vegetale i reprezint agenii frecveni ai degradrii berii. Specia tip este P. cerevisiae alturi de P.acidilacticii, P.halophilus i P.urinae-equi Genul Aerococcus -prezint nrudiri cu ali coci -se gsesc n aer, carne conservat, n vegetale proaspete i prelucrate Specia tip este A. viridans Genul Gemella -cocii comensali, ntlnii la mamifere Specia tip este G. hemolysans. Genul Vagococcus -coci alungii, aero-anaerobi, cu dispunere izolat, n perechi sau n lanuri, Speciile mai importante sun: Genul Enterococcus -include 13 specii, Specii mai cunoscute: E. fecalis, E. faecium, E. durans, E. avium
11

V. fluvialis i V. salmoniarum

-unele specii au importan patogenetic. E. seriolicida este patogen pentru seriole i anghile, la care produce streptococcoza Genul Streptococcus (Rosenbach 1884) -specii patogene pentru om i animale i numeroase specii condiionat patogene sau saprofite -gruparea caracteristic n lanuri (strepto) -catalazo-negativi Specia tip este S. pyogenes. Istoric i taxonomia Lister (1873) izoleaz n cultur pur specia S. lactis Lancefield (1930) ntreprinde studii asupra structurii antigenice, mprind streptococii n grupe serologice -specii importante: grupa A (S. pyogenes); grupa B (S. agalactiae); grupa C (S. equi, S. zoo- epidemicus, S. dysgalactiae); grupa D (S. bovis, S. avium); grupa E (S. uberis i S. parauberis); grupa S (S. suis); grupa N (S. cremoris, S.thermophilus, S. acido-minimus). Clasificrile recente: S. equisimilis transfotmat n S. dysgalactiae subsp. Equisimilis S. lactis a primit denumirea de Lactobacillus lactis
12

 Dup capacitatea hemolitic - Streptococi -hemolitici (hemoliz complet) - majoritatea speciilor patogene pentru om i animale -Streptococi -hemolitici sau viridans -produc zone de hemoliz incomplet, cu nverzirea mediului (transformarea hemoglobinei n methemoglobin sub aciunea peroxidului de hidrogen). - Streptococi - hemolitici -nu au capacitate hemolitic Dup habitat i semnificaia patogenetic: - Streptococi lactici -se folosesc n industria fermentativ a laptelui ca "germeni de iniiere" a fermentaiei lactice - Streptococii fecali -au ca habitat intestinul subire al animalelor cu snge cald -germeni condiionat patogeni - Streptococii orali -flora normal a mucoasei bucale i a plcilor dentare -sunt condiionat patogeni, pot ptrunde n torentul circulator i s provoace endocardit subacut. - Streptococii piogeni -speciile obinuit patogene pentru om,i animale -au habitat tractusul respirator ( i hemolitici)
13

 Dup structura antigenic -se clasific n 19 grupe serologice, notate cu literele alfabetului (A-H i KT). Ecologia -comensali ai mucoaselor la animale i om -mai frecvent n cavitatea buco-faringian, n amigdale, pe mucoasa cilor genitale, a cilor galactofore, n intestin, -unii streptococi sunt saprofii (sol, ap, aer) Morfologia -germeni de form sferic sau oval, Gram pozitivi, diametrul de 0,6-1 m, -nesporulai, neciliai, unele tulpini sunt capsulate (acid hialuronic) -grupai sub form de lanuri de lungimi variabile -streptococii de grup A prezint fimbrii. Cultivarea -se dezvolt n condiii optime pe medii cu snge -aerob, microaerofil sau anaerob aerotolerant, -temperatura de multiplicarea variaz ntre 10oC i 45oC. -unii streptococi sunt halofili, Proprieti biochimice -activitate hemolitic, -este important s se stabileasc sensibilitatea fa de bil (testul bil esculin), -activitate glucido-litic,
14

Rezistena la factorii de mediu -sunt puin rezisteni la factorii de mediu -distrui la 60oC, -sunt sensibili la bacteriofagi, -inactivai de fenol 2-5 %, apa oxigenat, tinctura de iod, bicromat de K -sensibili la antibioticele de tip penicilinic (penicilina, eritromicina, ampicilina, tetraciclina) Structura antigenic -prezint o structur deosebit de complex - poliglucidul C (substana C) -determin specificitatea de grup -este omologabil cu acidul teicoic -are proprieti imunogene puternice - proteina M -este format din dou molecule, biologic distincte, unele cu activitate precipitinogen, iar altele cu activitate antifagocitar -originea proteinei M sunt fimbriile -reprezint cel mai important factor de virulen -rezist la cldur i pH acid, (extracie n tehnica Lancefield) -este inactivat de tripsin i enzime proteolitice proprii -unele componente ale proteinei M sunt rspunztoare de relaiile imunologice cu esuturile gazdei (antigen cross-reactiv) - proteina T -include mai multe proteine, imunologic distincte
15

-este distrus la cldur i pH acid, dar rezist la aciunea tripsinei -nu are rol n virulena tulpinilor; - proteina A -are proprieti alergizante -este responsabil de fenomenele de hipersensibilitate ntrziat de tip IV. Elemente de patogenitate -elaboreaz o serie de secreii cu rol agresinic sau toxic -Streptococii capsulai i asigur virulena prin rolul antifagociar al capsulei, - Streptolizinele (hemolizinele) - aciune hemolitic i efect letal pentru animalele de laborator -joac un rol important n iniierea leziunilor tisulare. Exist dou tipuri de streptolizine: Streptolizina O (SLO) -este o hemolizin oxigen-labil, sintetizat de streptococii din grupele A, C i G. - se ataeaz de membrana eritrocitelor de mamifere, avnd efect citolitic -are aciune leucotoxic -este puternic antigenic, determinnd apariia anticorpilor antistreptolizin O -identificarea se face prin cunoscuta reacie ASLO Streptolizina S (SLS) -este o hemolizin oxigen-stabil, provoac hemoliza de tip
16

atac membranele celulare -efect citopatic asupra celulelor cardiace, renale i fibroblatilor din plmnul de oarece -joac un rol toxic n leziunile iniiale sau n puseurile recurente ale bolii reumatismale -nu este antigenic. - Toxina eritrogen (toxina scarlatinoas, toxina Dick). -protein termostabil, -responsabil de erupia cutanat din scarlatin -acioneaz selectiv asupra pereilor capilari -este antigenic, (3 tipuri de toxin A, B, C) -la animale are efect letal - Hialuronidaza -enzim care mrete permeabilitatea esuturilor -este cu proprieti antigenice Alte enzime sau factori toxici,: -streptokinaza, dezoxiribonucleaza, proteinaza, factorul sensibilizant al celulelor etc. Infecia natural -se ntlnesc la numeroase specii de animale i om -unele specii sunt monopatogene (exemplu: S. equi), altele au un spectru larg (exemplu: S. zooepidemicus) -rareori streptococii patogeni pentru animale sunt patogeni pentru om Entitti patologice distincte:
17

-mamita streptococic a vacilor (S. agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis); -streptococia porcului (S. suis) -gurma sau buba mnzului (S. equi) -loca european (S. pluton) care provoac mbolnvirea puietului necpcit al albinelor -poliartrita streptococic a mieilor (S. zooepidemicus) -streptococia psrilor (S. zooepidemicus) Infecii localizate cum ar fi: -limfa-denite, endometrite, otite, orhite, artrite, conjunctivite, salpingite, peritonite, dermatite, pneumonii etc. Boli cu mecanism imun: febra reumatismal sau reumatismul articular acut Conduita de diagnostic Examen serologic -reacii de precipitare n tub capilar, -contraimunelectroforez, -dubla difuzie n gel de agar -test Mancini (imunodifuzia radial simpl) Latexaglutinarea. -este un test de aglutinare rapid i sensibil a streptococilor -hemolitici aparinnd principalelor grupe Lancefield. -se folosesc suspensii de latex cu specificitate pentru grupele A, B, C, D, F i G

18

-reacia depinde i de imunoglobulinele purificate adsorbite pe particulele latex. Alte teste. - testul sensibilitii la bacitracin (sensibili streptococii de grup A) - testul CAMP (pozitiv pentru streptococii de grup B, dar i pentru alte grupe E, P, U i V) - producerea de pigment - pe geloz Columbia (streptococii de grup B formeaz colonii roii crmizii) - testul SXT - microcomprimate cu sulfametoxazol i trimetoprim (grupele A i B sunt rezistente, iar grupele C i G sunt sensibile) - testul sensibilitii la bil (difereniaz streptococii care sunt rezisteni, de diplococi care sunt sensibili) - testul bil-aesculin (difereniaz streptococii de grup B de grupul D) - testul hipuratului de Na (pozitiv - culoare bleumarin intens, pentru streptococii de grup B). Mijloace de imunoprofilaxie i terapie. -anticorpii elaborai n organism, anticorpii anti-proteina M sunt singurii capabili s protejeze organismul de o nou infecie streptococic, dar numai fa de grupul A. -se explic astfel recidivele n infeciile streptococice La animale se pot efectua vaccinri: -n gurm, mamitele vacilor i streptococia porcului Streptococcus pneumoniae (Klein Chester, 1901) Numit i Diplococcus pneumoniae sau pneumococul
19

-izolat de Pasteur (1881) din saliv Morfologia -se prezint sub form de coci pereche, de 0,5-1,25 m -cu aspect lanceolat sau de flam (flacr de lumnare) -Gram pozitivi, aezare n grupri diplo, cu partea ascuit fa n fa -imobili, nesporulai, capsulai (comun pentru dou celule). Cultivarea -n condiiile de cultur cu diferite lichide organice (ser, snge, lichid ascitic). -atmosfer mbogit cu 5 % CO2. - n mediile lichide -pneumococii viruleni (capsulai) se dezvolt omogen -pneumococii aviruleni (necapsulai), se dezvolt la fundul tubului, - Pe mediile solide -tulpinile virulente formeaz colonii rotunde mucoase de tip S -tulpinile avirulente, formeaz colonii de tip R Proprieti biochimice -produc hidroliza zaharurilor -fermenteaz inulina, criteriu de difereniere fa de streptococii viridans. nu produc catalaz i nici peroxidaz -unele tulpini produc hialuronidaz Rezistena la factorii de mediu -pot supravieui luni de zile n sputa uscat i la ntuneric
20

-sunt foarte sensibili la optochin (ethilhidrocuprein) Structura antigenic -conine 3 antigene somatice i 83 antigene capsulare -capsula pneumococilor este format dintr-un polizaharid -reacioneaz cu serul antispecific de tip, provocnd fenomenul de umflare (gonflare) -polizaharidul capsular reprezint unul din factorii de virulen Elemente de patogenitate -patogenitatea pneumococilor se datorete virulenei (capacitatea de adaptare i multiplicare n esuturi), favorizat de prezena capsulei. -numai tulpinile capsulate sunt patogene pentru om i animale -ali factori de patogenitate sunt: hialuronidaza i hemolizina Infecia natural -produce mbolnviri la nivelul tractusului respirator, att la om ct i la animale, (pneumonie lobar, bronho- pneumonie, pleurit), -la nivelul meningelui (meningita pneumococic), -la nivelul urechii medii (otit) -localizri mai puin frecvente sunt: sinuzit, artrite, pericardit, infecii oculare, cutanate, abcese -mai frecvent la viei sau la animale de laborator (cobai) Conduita de diagnostic Probele patologice sunt reprezentate de snge, pulmoni, limfonoduli mediastinali, diverse lichide

21

Examen

bacterioscopic.

-se

urmrete

evidenierea

aspectului

morfologic caracteristic i prezena capsulei (evideniere negativ). Examen bacteriologic.-se examineaz tipul de hemoliz i aspectele culturale, Examen serologic.-evidenierea poli-zaharizilor capsulari, direct n prelevatele patologice (LCR, sput, urin, snge sau alte materiale) Infecia experimental. -oarecii foarte sensibili la infecia pneumococic -se urmrete evidenierea capsulei, mai ales din snge i pulmoni. Mijloace de imunoprofilaxie i terapie. -Penicilina G reprezint medicamentul de elecie pentru toate manifestrile infeciei pneumococice. Cefalosporinele sunt de asemenea eficace, -aminoglicozidele contraindicate. -anticorpii specifici de tip, au un rol important n procesul de vindecare prin creterea eficienei fagocitozei i prin limitarea diseminrii germenilor. Streptococii lactici Bacteriile lactice homofermentative, acidific puternic laptele de aceea are importan n industria laptelui i a produselor lactate fiind utilizate n diferite procese tehnologice de prelucrare a laptelui i de obtinere a produselor lactate acide (lapte acru, iaurt, lapte acidofil, kumis, smntna fermentat, brnzeturi).
22

(gentamicin,

kanamicin,

streptomicin)

sunt

Genul Streptococcus, cuprinde bacterii cu o puternic aciune fermentativ asupra lactozei producnd o mare cantitate de acid lactic. Sunt foarte pretenioi fa de sursa de hran azotat i vitaminic. Pentru a se dezvolta, substratul nutritiv proteic trebuie s conin i unele substane implificate cum sunt peptidele i unii aminoacizi.. de asemenea au nevoie de vitamine din complexul B. Au activitate proteolitic nensemnat. Prin aciunea asupra lactozei sau a altor hidrocarbonate, n special dizaharidezaharoza, maltoza, produc acid lactic, acidific substratul i pregtesc terenul pentru multiplicarea lactobacililor. Toate speciile de streptococi lactici sunt homofermentative, n urma aciunii lor asupra lactozei rezultnd 85-95% acid lactic i cantiti foarte mici de dioxid de carbon i acid acetic. Principalele specii lactice sunt: - Str. termofilus, specie termofil, are temeratura optima de dezvoltare 37450C i face parte din grupa bacteriilor lactice termofile. Nu este ncadrat serologic deoarece la aceast bacterie nu s-a evideniat nici un antigen cu specificitate de grup. Reacia final a bulionului glucozat n care se dezvolt este acid (Ph 4,0-4,5). n urma fermentrii dizaharidelor (zaharoza, lactoza) coboar mai mult pH-ul mediului. Pentru dezvoltarea pe medii sintetice are nevoie de 6 vitamine din complexul B. Purinele i pirimidinele nu sunt necesare. Se poate dezvolta la 500C dar nu i la 200C sau la 520C. Are o termorezisten mare (30 minute la 650C). Se deosebete de alte specii prin urmtoarele caractere: temperatura maxim de dezvoltare, termorezistena, incapacitatea de
23

afermenta maltoza i de a se ezvolta pe medii ce conin mai mult de 2% NaCl. Se poate izola din laptele crud i din unele brnzeturi. Unele tulpini selecionate ale acestei specii se folosesc la fabricarea iaurtului, mpreun cu Lactobacillus bulgaricus , a brnzei Cheddar i Emmental. Celelalte specii de streptococi lactici au temperatura optim de dezvoltare de 28-300C i nu se dezvolt la temperaturi mai mari de 40 0C, fiind cuprinse n grupa bacteriilor lactice mezofile - Str. lactis, este specie mezofil, se dezvolta n bulionul glucozat coborndu-i pH-ul la 4,0-4,5 n medii cu 4% NaCl, dar nu cu 6,5 NaCl i nici cu pH de 9,6 sau n lapte cu 0,3% albastru de metilen. Unele tulpini pot metaboliza leucina producnd 3-metil butanol care d mirosul de mal la produsele lactate. Are nevoi nutritive complexe. Produce amoniac din arginin. n mediile sintetice are nevoie de 4-5 vitamine din complexul B, de 10-13 aminoacizi, acetat, oleat sau lipoat. Nu are nevoie de purine sau pirimidine, dar ele i stimuleaz dezvoltarea. Se multiplic la 10 0C dar nu i la 450C, cu optim de 20-320C, cnd coaguleaz laptele dup 12 ore prin acidifiere; Se poate izola din lapte i produse lactate. Tulpini selecionate din aceast specie se folosesc pentru prepararea diferitelor produse lactate: lapte btut, sana, smntn fermentat, brnza Feta, Akawi, Cheddar, Camembert, Emmental. - S.lactis ssp. diacetylactis este o variant a S.lactis , productoare de diacetil, proprietate bazat pe capacitatea ei de a fermenta citratul n prezena unei substane hidrocarbonate fermentabile, din care rezult
24

dioxid de carbon, aceoin i diacetil. Se foloseste pentru prepararea diferitelor produse lactate pentru a le conferi arom plcut. Dintre bacteriile lactice aceast subspecie, mpreun cu S.lactis, este folosit cel mai mult n industria laptelui. - Str. cremoris, specie mezofil, cu temperatura optima de 30-38 0C, se prezint sub form de lanuri lungi, are dimensiuni ceva mai mari dect S.lactis. n urma dezvoltrii n bulion glucozat reducepH-ul la 4,0-4,5. n prezena unui zahr fermentabil, unele tulpini degradeaz citratul i produc dioxid de carbon, acid acetic i diacetil. Are aceleai nevoi nutrilive ca S.lactis. Produce coagularea laptelui prin aciditatea mare, dar coagulul este fin, crete vscozitatea laptelui Se poate izola din lapte i produse lactate. Se folosete pentru fabricarea multor produse lactate, lapte btut, sana, smntn fermentat, unt, brnz proaspt de vaci, brnza Olanda, Trapist, Camembert, Tismana .a. S.cremoris se deosebete de S.lactis prin faptul c nu produce amoniac din arginin, nu fermenteaz maltoya, nu se deyvolt n medii cu 4% NaCl.
Familia NEISSERIACEAE (Prvot - 1933)

Genul Neisseria (Trevisan - 1885) Speciile mai importante -la om: N. gonorrhoea (gonococul) i N. meningitidis (meningococul), patogene, N. flavescens, N. subflava, N. sicca, , flora normal
25

- la animale: N. caviae, N. animalis, N. canis, N. ovis, N. Cuniculi Ecologia. -se ntlnesc pe mucoasele omului i animalelor ca saprofite i patogene Morfologia. -coci Gram negativi, dispui de obicei n perechi, fa n fa -dimensiuni de 0,6-l m. -N. elongata se prezint sub form de bacili -cele patogene posed o capsul vizibil -nesporulai i imobili, unele tulpini posed pili Cultivarea. -cele saprofite se dezvolt pe medii simple, -cele patogene necesit factori de cretere i ageni chelatori pentru detoxifiere (exemplu: amidon solubil, ser, sau crbune). -dezvoltarea la o temperatur cuprins ntre 32-37oC i o atmosfer mbogit n CO2 de 4-8 % - n mediile lichide -turbiditate de intensitate variabil, cu depozit uor omogenizabil - Pe mediile solide -colonii de dimeniuni variabile, n funcie de specie, -unele pot fi pigmentate n galben-citrin; Proprieti biochimice - consum zaharurile coninute n mediile de cultur, pe cale oxidativ, producnd acid lactic
26

- producerea de citrocrom c. oxidaz - catalazo- i oxidazo-pozitivi - unele specii reduc nitraii i sunt negative la indol, ureaz i gelatinaz ( Infecia natural - La om. N. gonorrhoea (gonococul) determin gonoreea (gonossmn i rhoia-scurgere) o boal transimisibil pe cale venerian, N. meningitidis (meningococul), determin meningit la copii i adolesceni, rareori la aduli - La animale -la puine s-a putut stabili o relaie de patogenitate cu unele esuturi. -la ovine N. ovis poate fi incriminat ca agent etiologic al unei cheratoconjunctivite Conduita de diagnostic -se va ine seama de aspectul morfologic caracteristic i faptul c sunt coci Gram negativi, -trebuie fcut diferenierea de micrococi i stafilococi. GRUPA BACILILOR GRAM POZITIVI NESPORULAI: Genurile Listeria, Erisypelothrix, Corynebacterium, Lactobacillus , Clasificarea pe baza proprietilor fiziologice, utilizarea reprezentanilor n procese biotehnologice, i cerinele biologice ale acestora

27

GRUPA BACTERIILOR DE FORM ALUNGIT DREAPT GRAM POZITIVE NESPORULATE Genuri nencadrate n familii Genul Listeria (Pirie-1940) Format din 5 specii: L. monocytogenes, L. ivanovii, L. innocua L. seeligeri L. welshimeri, la care se adaug speciile L. gray i L. murrayi. Listeria monocytogenes (Murray i col.(1926) ; Pirie, 1940) Prima descriere a aprut n literatura de specialitate n anul 1891, Caracterizarea complet a bacteriei a fost fcut de ctre Murray i col. (1926), -a descris infecia la cobai i iepuri, semnalnd prezena monocitozei i producerea de leziuni hepatice (Bacterium monocytogenes). Ecologia. -germen larg rspndit n natur (ubicvitar) -frecvent ca germen comensal la om i animale sntoase
28

-roztoarele constituie rezervoare naturale -se ntlnesc n diferite medii naturale, ca sol, ap, plante, gunoi de grajd, furaje -specie bacterian mezofil i psichrofil adaptat la animale cu snge cald Morfologia. -bacili scuri sau cocobacili, de 1-2/0,3-0,5 m -dispunere destul de caracteristic, grupri diplo, n form de V, -n culturi vechi se remarc un polimorfism accentuat -necapsulat i nesporulat -n condiiile cultivrii la 37oC este imobil, -la 20-25oC germenul i formeaz cili. Se coloreaz Gram + (labil) Cultivarea -se multiplic ntre limite largi de temperatur, cuprinse ntre 3-45oC, -temperatura optim fiind de 30-37oC, aerob sau micro- aerofil -creterea are loc pe medii uzuale, n limite largi de pH (5,5-9,6 - n mediile lichide -turbiditate slab sau moderat -depozit dens, aderent la fundul tubului, sub forma unui tirbuon - Pe mediile solide -se formeaz colonii micide tip S, -examinate n lumin oblic prezint nite irizaii albstrui -pe agar cu snge produce hemoliz, Proprieti biochimice
29

-oxidaz, indol i H2S negative -catalaz, rou metil i VP pozitive Sensibilitatea la factorii de mediu. -germen foarte rezistent la condiiile mediului -n produse alimentare n furaje chiar nsilozate, n ape rezistcteva sptmni, luni sau chiar ani de zile, putndu-se chiar multiplica. -la 55oC rezist 40 de minute, la 60oC timp de 12 minute, -n laptele de vac, germenul poate fi izolat chiar dup 1 an -pasteurizarea la 73oC timp de 15 secunde s-a dovedit ineficient, n cazul probelor foarte contaminate -este sensibil la majoritatea antibioticelor, mai sensibil la ampicilin, eritromicin, tetraciclin -prezint rezisten la streptomicin, polimixin i acid nalidixic -la numeroase tulpini s-a evideniat capacitatea producerii de bacteriocine (monocine) active fa de tulpini din cadrul speciei, i fa de tulpini aparinnd genurilor Staphylococcus i Bacillus. -s-au identificat i fagi specifici pentru listeria Structura antigenic -s-au identificat att antigene somatice (5 tipuri notate cu cifre romane,IV), -i antigene flagelare (4 tipuri, A, B, C, D) Patogenitatea -determinat n primul rnd de virulen i numai ntr-o mic msur de toxicitate -se poate uor multiplica intracelular
30

-sintetizeaz i elimin n exterior i o exotoxin, termolabil, cu aciune edemohemoragic, necrotic, letal Stadiile ptrunderii, multiplicrii i trecerii L. monocytogenes de la o celul la alta, ar fi urmtoarele: -internalizarea, -liza vacuolei, -ncapsularea n fibre de actin -multiplicarea, -reorganizarea actinei sub forma unei cozi -migrarea intracitoplasmatic -asocierea intracitoplasmatic cu membrana celular sub forma unui pseudopod, -internalizarea bacteriei n celula vecin nconjurat de o dubl membran, -solubilizarea celor dou membrane i reluarea ciclului de multiplicare. -listeriolizina O (hemolizina listeric) este necesar pentru supravieuirea intracelular a bacteriei Infecia natural -are un larg spectru de patogenitate, afectnd numeroase specii, inclusiv omul. -boala natural este denumit listerioz, poate evolua cu forme septicemice, forme de meningo-encefalit i avorturi -tropismul pentru esuturile neuromeningiale i aparatul genital femel
31

-ovinele i caprinele sunt cel mai des afectate (caracter endemic) -omul se infecteaz de obicei n urma contactului cu animale bolnave, sau prin consumul de alimente contaminate. Transmiterea L. monocytogenes prin alimente implic mai nti ptrunderea ei prin intestin. Multiplicarea intracelular poate avea loc n diferite tipuri de celule- fagocitele neimune, celulele din plcile Player, eritrocite dup ajungerea lor la vacuole. Listeriile ies din vacuole n citoplasm unde i intensific multiplicarea datorit condiiilor de cretere mai favorabile. Capacitatea de arupe membrana vacuolelor se consider a fi un factor important pentru virulena lor. Sensibilitatea omului fa de infecia cu L.monocytogenes depinde n primul rnd de imunitatea lui celular, majoritatea cazurilor aprnd la persoane cu imunitate celular slbit, aa cum se ntmpl la persoanele cu boli preexistente ca SIDA, aflate sub diferite medicaii sau n stri fiziologice speciale cum este graviditatea. Datorit activitii patogene menionate Listeria produce la om o boal invaziv la aduli, femeile gravide sau nou nscui, cu semne grave de meningit, meningoencefalit, septicemie, nsoite de moarte, avorturi sau forme neinvazive de boal cu cu evoluie uoar. La animale predomin manifestrile determinate de afectarea sistemului nervos central i a mduvei spinrii, ca i avorturile. Conduita de diagnostic Izolarea listeriei din probele clinice recoltate aseptic se face n timp scurt (24 ore) prin nsmntri pe medii nutritive simple sau cu adaos de
32

snge. Din alimente sau din probe clinice care conin microflor de asociaie este dificil i necesit mbogirea selectiv a probelor nainte de cultivarea pe mediile de izolare ceea ceface ca izolarea s se realizeze n cca 48-72 ore. n ultimii ani s-au pus la punct metode mai rapide de detecie a Listeria monocytogenes i anume sonde ADN marcate cu acridium ester sau fluorescein, reacia polimerazic n lant (PCR metod calitativ) sau mai nou Real Time PCR (metod cantitativ), tehnici imunoenzimatice (tip ELISA) cu folosirea anticorpilor monoclonali Imunoprofilaxia -confer o rezisten specific, nsoit de hipersensibilitate ntrziat, -se instaleaz deci o imunitate de tip celular -se pot face vaccinri, utiliznd un vaccin preparat din tulpini atenuate Genul Erysipelothrix (Rosenbach 1909) Robert Koch (1876) izoleaz germenul de la oareci Genul cuprinde o singur specie, E. insidiosa sau E. Rhusiopathiae (bacilul rujetului). Ecologia - germen larg rspndit, fiind prezent n corpul a numeroase specii de mamifere, psri, peti, crustacee, insecte - cel mai adesea asociat cu porcii (rinofarinxul i mai ales zona amigdalelor)
33

Morfologia -bastona fin de 1-2,5/0,2-0,4 m, - cel mai fin bacil din grupa bacteriilor clasice - frecvent grupri diplo, cu aezare n linie dreapt sau sub diferite unghiuri, amintind litera V -n citoplasma celulelor Kuppfer se pot observa numeroi bacili fagocitai, care au aspectul unor perinie cu ace. -necapsulat, nesporulat, neciliat, Gram pozitiv (se decoloreaz uor) Cultivarea - facultativ aerob, microaerofil - se dezvolt pe medii obinuite, bulion i agar cu adaus de glucoza, ser sangvin, triptofan, riboflavin i acid oleic - n mediile lichide -turbiditate discret, -la agitare se percep valuri fine -prin nvechire se formeaz la fundul tubului un depozit mic, lenticular, aderent. - Pe mediile solide -colonii mici, punctiforme, transparente, uneori abia vizibile -de tip S pot disocia n variante R, -nu produce hemoliz pe medii cu snge Caractere biochimice -slab activitate fermentativ -nu produce indol, nu reduce nitraii,
34

-testul catalazei, oxidazei i ureazei sunt negative -produc H2S fermenteaz glucoza, lactoza, fructoza, galactoza, Rezistena la factorii de mediu -deosebit de rezistent pentru un germen nesporulat -rezist la operaiunile de srare, afumare, acidifiere, ca i la putrefacie -Formolul 2 %, NaOH 1 %, creolina 3,5 %, fenolul 5 %, omoar germenul n 5-15 minute -este relativ rezistent la alcool i ap oxigenat Sensibilitatea la antibiotice -cele mai active antibiotice sunt penicilina, eritromicina, streptomicina, aureomicina, cloramfenicolul, tetraciclina -prezint sensibilitate fa de bacteriofagi Structura antigenic -conin antigene poliglucidice, cu caracter de haptene -s-au descris dou tipuri principale: A i B, -tulpinile de tip A sunt mai virulente i se izoleaz de regul din infecii acute, iar cele de tip B din infecii cronice -numai tulpinile de tip B se ultilizeaz la prepararea vaccinurilor Patogenitatea -este asigurat n primul rnd de virulen, sprijinit de unele substane cu nsuiri toxice i agresinice -majoritatea tulpinilor sunt productoare de hialuronidaz

35

-modificrile de la nivelul cartilagiilor articulare se datoresc rspunsului imunologic cauzat de persistena unor structuri antigenice n fluidul sinovial Infecia natural -poart denumirea de rujet i cel mai frecvent se ntlnete la porc -poate evolua sporadic sau enzootic, cu forme septicemice (supraacute, acute, subacute) sau cronice cu diferite localizri (endocardit, artrite, dermatit) -se mai semnaleaz la psri (curci, fazani, gte, puni, potrnichi, gini) -la miei (poliartrite) -la om dei o boal rar poate evolua deosebit de grav, fie ca o infecie local, benign, numit i erizipeloidul lui Rosenbach, rareori sub form de endocardit sau artrite, motiv pentru care se cere toat atenia pentru prevenirea ei: evitarea introducerii la tiere a porcilor bolnavi, diagnosticarea rapid a carcaselor provenite de la animalele bolnave. Imunoprofilaxia -din germeni atenuai sau inactivai -n ar se utilizeaz un vaccin viu, preparat din tulpina VR 2, atenuat de Stamatin i Braoveanu, prin treceri pe medii de cultur -serul antirujetic se utilizeaz cu bune rezultate, att n scop profilactic, ct i curativ Genul Corynebacterium (Lehman i Neumann 1896)
36

-bacterii mici pleomorfe, Gram pozitive -bacili fini, forme cocoide sau chiar filamente, n care se pot observa granule metacromatice -dispunerea n grupri caracteristice de palisadsau grupri diplo n V, L sau litere chinezeti. -se mpart n 3 grupe: - corinebacterii patogene pentru om i animale; - corinebacterii patogene pentru plante; - corinebacterii nepatogene cu capacitate mare de sintez a aminoacizilor -speciile mai importante: - Corynebacterium diphteriae : produce difteria copiilor; - Corynebacterium pyogenes : produce piobaciloza la animale; - Corynebacterium pseudotuberculosis (C. ovis) : produce limfadenita cazeoas a oilor i caprelor; - Corynebacterium equi : produce bronhopneumonia enzootic a mnjilor; - Corynebacterium renale : produce pielonefrita taurinelor. - Corynebacterium glutamicus: producerea de aminoacizi -mai cuprinde numeroase specii nepatogene, comensale ale pielii i mucoaselor Actinomyces pyogenes
37

(Corynebacterium pyogenes) (Eberson 1918) Ecologia -germen epifit al mucoaselor la om i animale, fiind mai frecvent ntlnit la suine i taurine -manifest Morfologia -bastona fin, cu dimensiuni de 0,2/0,3-2 m, uneori are aspect cocoid - nesporulat, necapsulat, neciliat, Gram pozitiv -grupri caracteristice n palisad. Cultivarea -facultativ aerob, serofil. - n bulion cu ser -turbiditate slab -depozit fin, granular la fundul i pe pereii tubului. - Pe agar cu ser -colonii mici, fine, transparente, asemntoare cu cele de streptococ Proprieti biochimice -fermenteaz glucoza i maltoza -are capacitate proteolitic i hemolitic, producnd o hemolizin asemntoare cu cea a streptococilor . -reacii negative la indol, H2S, ureaz, catalaz i reducere nitrai -coaguleaz i acidifiaz laptele turnesolat
38

capacitatea

patogen

condiiile

scderii

rezistenei

organismului

Rezistena la factorii de mediu -rezistn moderat n mediul exterior -la 60oC se distruge n 15-20 de minute Sensibilitatea la antibiotice -mai active penicilina i streptomicina. Infecia natural -determin mbolnviri sporadice, cu formarea de abcese n diferite esuturi (muscular, adipos, osos, etc.) - entiti clinice: - piobaciloza porcului - mamita piobacilar a vacilor -se mai pot constata metrite, artrite, avorturi. Conduita de diagnostic -se expediaz laboratoarelor veterinare organe cu leziuni, articulaii nedeschise. -se practic examen bacterioscopic i bacteriologic, identificarea germenului fcndu-se pe baza caracterelor morfologice i culturale. Imunoprofilaxia -nu se practic -germenul este inclus n vaccinul polibacterian utilizat n prevenirea mamitelor la vaci. Corynebacterium pseudotuberculosis (C.ovis) (Eberson 1918)

39

-bacil fin, cu dimensiuni de 0,5-0,6/1-3 m, -necapsulat, nesporulat, neciliat, Gram pozitiv -are o slab activitate glucidolitic (fermenteaz glucoza i arginina), -hidrolizeaz ureea, produce catalaz, -produce o toxin cu efect hemolitic i dermonecrotoxic. -cultivarea se face pe medii obinuite. -virulena tulpinilor este atribuit unei toxine hemolitice, -germenul produce la ovine i caprine pseudotuberculoza sau limfadenita cazeoas, iar la cai limfangita ulceroas -s-a dovedit patogen n condiii experimentale pentru cobai, iepure i oarece. Rhodococcus equi (Corynebacterium equi) (Magnusson 1923) -se poate multiplica n solul mbogit cu fecale de cal i poate fi comensal n intestinul cailor -se caracterizeaz printr-un pronunat dimorfism, n funcie de mediul de cultur -apare de aspect oval sau cocoid, fr dispunere n grupri caracteristice -cultivarea se poate realiza n medii fr ser. -patogen pentru cabaline, singur sau asociat cu ali germeni, provocnd bronhopneumonia enzootic a mnjilor, mai frecvent la cei de 2-4 luni -la porci i vite provoac abcese i limfadenite cervicale -este lizat de fagi specifici.
40

Familia LACTOBACILLACEAE Genul Lactobacillus (Beijerinck 1901) Ecologia -au o larg rspndire n natur, -se gsesc ca germeni comensali la nivelul mucoaselor, cilor digestive sau genitale la om i animale -pot fi izolai ocazional din leziuni de la animale, mai ales de la cele cu snge rece, fr responsabilitate etiologic precis. Lactobacilii se gsesc n lapte, produse lactate, grune, preparate din carne, apa de canal, bere, vin , ructe, legume, saramur, mal, aluat fermentat, gura i intestunul omului i animalelor. Fiind larg rspndii n natur, contamineaz suprafeele de lucru i utilajele din industria alimentar, de unde ajung n produse cum sunt carnea i preparatele din carne, laptele i produsele lactate, petele i produsele din pete, etc. Morfologia Genul Lactobacillus cuprinde bacterii n form de bastonae drepte, lungi, izolate sau grupate n lanuri, gram pozitive, imobile, nesporulate, necapsulate, microaerofile sau anaerobe, termofile sau mezofile Cultivarea -pe medii cu un pH slab acid, se dezvolt optim n medii cu pH 5,5-5,8 dar i la un pH 5,0 dezvoltarea avnd loc ntre 2-6 zile. n mediile cu reacia

41

iniial alcalin sau neutr au o faz de mult prelungit sau dezvoltarea lor este oprit complet. Proprieti biochimice - au pronunate proprieti glucidolitice - fermenteaz glucoza, coaguleaz i acidific laptele turnesolat, sunt catalazo-negativi. Patogenitatea - sunt lipsii de patogenitate. - unele specii sunt utilizate n industria alimentar la prepararea diferitelor produse lactate, - unele tulpini se utilizeaz la prepararea de produse probiotice sau ca imunomodulatori (L. acidophylus). Genul cuprinde 27 de specii, -se difereniaz ntre ele n baza morfologiei i a posibilitilor de dezvoltare la anumite temperaturi (15oC, 45oC, 48oC), ct i pe baza proprietilor biochimice . Cele mai importante specii sunt: - Lb. lactis, bacterie mezofil, are optimul de dezvoltare la 36-45 0C, este prezent n lapte i brnzeturi; - Lb. helveticus, mezofil, 37-450C optim de dezvoltare, prezent n lapte si brnzeturi cu pasta tare; - Lb. bulgaricus, termofil, 45-620C optim de dezvoltare, prezent n lapte, iaurt;
42

- Lb. delbrueckii, termofil, 45-500C optim de dezvoltare, se gsete n furaje preparate prin nsilozare, de unde poate ajunge n lapte; - Lb. caucasius, mezofil, 37-450C optim de dezvoltarte, se afl n granulele de chefir si n brnzeturi; - Lb. acidofilus, mezofil, 37-450C optim de dezvoltare, are origine fecal i poate contamina laptele; - Lb. termofilus, termofil, 45-620C, optim de dezvoltare, se gsete n iaurt i alte produse lactate acidulate; - Lb. plantarum, streptobacil, mezofil 28-320C optim de dezvoltare, se gasete n lapte i brnzeturi; - Lb. casei, streptobacil, mezofil, 28-320C, optim de dezvoltare, se gasete n lapte i brnzeturi. Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis sunt microorganisme homofermentative termofile care produc numai acid lactic i cantiti minore de substane de arom i sunt utilizate n combinaie cu Streptococcus salivarius ssp. thermophillus drept culturi starter pentru brnzeturile Elveiene, Parmesan i Mozzarella. Lactobacillus helveticus i Lb. acidophillus sunt microorganisme homofermentative mezofile care prezint temperatura optim de 30-35 0C. n genul Lactobacillus exist i tulpini de lactobacili heterofermentativi mezofili care produc acid lactic, acid acetic, diacetil i CO 2: Lb. plantarum, Lb. casei i heterofermentativi termofili: Lb. brevis, Lb. fermenti, Lb. bifidum .a.
43

Premi .a., n 1972 au izolat tulpini i au gsit c -galactozidaza este enzima dominant n Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis i Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus. Lactobacillus casei nu posed activitate -galactozidazic. Acest tip de fermentaie influeneaz calitatea brnzeturilor. Culturile cu activitate galactozidazic utilizeaz jumtate din cantitatea de lactoz, reprezentat de glucoz i elibereaz galactoza n mediu. Un exces de galactoz n brnza Mozzarella poate cauza brunificarea brnzei pentru pizza, iar galactoza poate servi ca surs de energie pentru fermentaii nedorite produse de microorganismele rezidente din brnzeturi. Se recomand ca Lb. helveticus, care poate fermenta galactoza s fie utilizat mpreun cu Streptococcus salivarius ssp. thermophillus. O relaie de simbioz exist ntre Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus i Streptococcus salivarius ssp. thermophillus. ntr-o cultur n amestec, creterea asociat a bastonaelor i a cocilor duce la o producere mai mare de acid i o dezvoltare a aromei mai bun dect prin utilizarea culturilor singulare. S-a stabilit c numeroi aminoacizi eliberai de proteazele din Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus prin aciunea asupra cazeinei stimuleaz creterea lui Streptococcus salivarius ssp. thermophillus. n schimb Streptococcus salivarius ssp. thermophillus produce CO2 i acid formic care stimuleaz creterea lui Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus. n timpul primei pri a incubrii, Streptococcus salivarius ssp. thermophillus crete repede, ndeprteaz excesul de oxigen i produce
44

stimulenii amintii. Ulterior, creterea lui Streptococcus salivarius ssp. thermophillus ncetinete datorit acumulrii acidului lactic, iar creterea aciditii permite dezvoltarea lui Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, care este mult mai acidotolerant (fig. 1). n brnza Emmental densitatea maxim a streptococilor lactici 10 9 UFC/g la periferie i 108 ufc/g n mijloc este atins dup aproximativ 3 ore de presare. Acidul lactic i formic produs de streptococi stimuleaz stimuleaz creterea lactobacililor pn la atingerea densitii de aprox. 10 9 ufc/g dup 10-20 ore de presare. Populaia de lactobacili i streptococi scade apoi n timpul presrii i srrii. Pentru utilizarea unui inocul cu 1:1 raportul dintre coci i bastonae, cantitatea de inocul, timpul i temperatura de incubare trebuie controlate i tancul starter trebuie rcit rapid. Multe tulpini de Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus continu s produc acid la temperatur ridicat. Numeroi lactobacili au fost identificai n timpul maturrii brnzeturilor. Lactobacilii ocup o ni specific n maturarea brnzeturilor. Lactobacilii au fost izolai din brnzeturi i supui identificrii, iar cele mai rspndite sunt subspecii gsite au fost brevis. Lactobacillus casei, Lb. fermentum, Lb.

45

Caracteristicile lactobacililor % Bacterii acid lact ic n lapt e Lactobacillus delbrueckii 1,8 ssp. bulgaricus 1,8 Lactobacillus delbrueckii 3,0 ssp. lactis 0,8 Lactobacillus helveticus Lactobacillus casei ssp. casei Lactobacillus casei ssp. pseudoplantarum Lactobacillus casei ssp. rhamnosus Lactobacillus platarum Lactobacillus curvatus Lactobacillus fermentumA Lactobacillus brevisA Lactobacillus buchneriA Lactobacillus bifermentnasA, B Izom Cretere er al acidu 15o 45oC 50o lui C C lactic D D DL L DL L DL DL DL DL DL DL + + + + + C + + + + + + + + + + + + + + Glu Gal Lac NH3 din arginin Bac teri o cine

+ + + + + + + + + + + +

+ + + + + + + +/+/+/-

+ + + +/+ + + +/+ +/+/-

+/+ + + -

+ + + + + +

a necunoscut /crete n mediu cu sare/4 zile la 35oC; + crete; - nu crete; A produce gaz n brnzeturi;
46

B fermentaie lactic n brnzeturi cu producere de CO 2, etanol i acid acetic; C poate crete n brnzeturi la 15oC.

47

Grupa bacililor Gram pozitivi sporulai aerobi. Genul Bacillus, Clasificarea pe baza proprietilor fiziologice, utilizarea reprezentanilor n procese biotehnologice, i cerinele biologice ale acestora

GRUPA BACTERIILOR DE FORM ALUNGIT, DREAPT, GRAM POZITIVE, SPORULATE, AEROBE

Familia BACILLACEAE (F i s c h e r - 1895) Grupeaz bacterii Gram pozitive formatoare de spori, rspndite n sol, de unde i denumirea de bacterii telurice. Au o mare rezisten n mediul exterior, supravieuind ani de zile, la uscciune i la adpost de lumina solar. Familia cuprinde dou genuri: -Bacillus -Clostridium Genul Bacillus
48

(Cohn 1872) Cuprinde peste 50 de specii, foarte heterogene metabolic, biochimic i antigenic, larg rspndite n natur. -bacili drepi, de dimensiuni mari, Gram pozitivi, aezai adesea n lanuri, cu spor central sau subterminal -majoritatea sunt saprofii ai mediului extern i ai colonului, -un numr redus de specii sunt patogene pentru mamifere i insecte -cresc bine pe medii simple, sunt aerobi sau facultativ anaerobi -cteva specii produc substane cu aciune antibiotic Bacillus anthracis (Cohn 1872) Istoric Denumiri: -bacilul antraxului (crbunelui) -bacteridia crbunoas. -singura specie patogen, care produce mbolnviri grave la animale i la om. -naintea epocii pasteuriene, erau cunoscute aa numitele "cmpii blestemate" -Pasteur a pus bazele etiologiei microbiene a bolilor contagioase, -n 1876 R. Koch a obinut culturi pure de bacteridie crbunoas, a observat sporularea i a reprodus experimental boala. -L. Pasteur a preparat vaccinul anticrbunos (la 31 mai 1881, experien public de la Pouilly-le- Fort, s-au vaccinat 24 de oi, 1 capr i 6 vaci) Ecologia.
49

-se gsete sub form sporulat n sol -este n relaie direct cu urmtorii factori de mediu: reacia alcalin sau neutr, temperatura de 21-37oC, umiditatea de 60 %. -incidena antraxului scade progresiv cu creterea latitudinii -n sol sporii se conserv peste 30 de ani Morfologia. -bacil mare i drept, cu capetele retezate, cu dimensiuni de 4-6/1-1,25 m, -dispus de obicei n lanuri -imobil, capsulat i sporulat, Gram pozitiv -Capsula -se formeaz n organismele infectate, n cca 10 minute dup producerea infeciei -chimic, capsula este o polipeptid (un polimer al acidului glutamic dextrogir) -este groas (0,4-1,0 m) rigid i imper- meabil pentru particulele de tu de China -se evideniaz prin tehnici speciale cum ar fi coloraiile Giemsa, Antony sau evideniere indirect cu tu de China, rou metil, albastru de metilen nvechit, -are un rol important n mecanismul patogenetic, sprijinind virulena. -Sporul -are dimensiuni de 0,5-1m, de form rotund sau ovoidal i un diametru mai mic dect al formei vegetative

50

-sporularea se produce numai n prezena oxigenului i n limitele de temperatur de 12-42,5oC -se pot evidenia prin colorarea cu verde de malachit sau indirect cu albastru de metilen, cnd apar sub forma unor vacuole Proprieti biochimice -activitile glucidolitice i proteolitice sunt reduse -produc catalaz, -sunt indol, H2S i ureaz negativi -fermenteaz fr producere de gaz glucoza, zaharoza, maltoza, trehaloza, fructoza. -produc colagenaz, proteaz, lecitinaz i transaminaz Rezistena la factorii de mediu. -rezistena formelor vegetative este similar cu cea a bacteriilor nesporogene (distruse la o temperatur de 55 oC n 40 de minute, iar la 60 oC n 30 de minute) -sporii prezint o rezisten marcant fa de diveri factori ai mediului ambiant (la 1000C distrui n 10 minute, iar prin autoclavare la 120 oC instantaneu) -suport mai bine temperatura uscat, fiind distrui doar dup 3 ore la temperatura de 140oC i n 2 ore la 160oC -n frotiurile fixate i colorate nu-i pierd viabilitatea -se constat germinarea sporilor pstrai la ntuneric la temperatura camerei pe fire de mtase, dup 71 de ani

51

-n cadavrele nedeschise, bacilii se distrug n 5-7 zile, ca urmare a proceselor de putrefacie -substanele dezinfectante n concentraiile uzuale distrug repede formele vegetative, n schimb sporii prezint o rezisten marcant -permanganatul de potasiu 4 %, clorura de var 5 %, soda caustic 5 %, formolul 5-10 %, distrug sporii n 10-15 minute -srarea pieilor, uneori nici chiar tbcirea nu distrug sporii Sensibilitatea la antibiotice. -formele vegetative sunt sensibile la diferite antibiotice, cum sunt penicilina, eritromicina, tetraciclina, cloramfenicolul, -fa de streptomicin, majoritatea tulpinilor dau mutante rezistente. Structura antigenic. -are o structur antigenic destul de complex: -antigene capsulare de natur polipeptidic, -antigene somatice de natur polizaharidic, care intervin sub form de precipitinogen n reacia Ascoli; -antigene exogene de natur proteic i polizaharidic, n numr de 69, Patogenitatea. Antraxul este o infecie prin excelen septicemic, germenii multiplicndu-se n snge, prin care sunt vehiculai n toate organele. Elementele de patogenitate: -virulena, este susinut ndeosebi de prezena capsulei, (aciunea antifagocitar), favorizeaz multiplicarea rapid a germenilor
52

-virulena mai este sprijinit de lecitinaz, proteaze i colagenaz. -capacitatea patogenetic a germenilor este susinut i de ctre agresine evideniate n lichidul de edem i n exudatele animalelor -toxina crbunoas (exoantigene extracelulare) este o substan complex, specific, cu aciune imunogen, letal i edematogen. Alctuit din 3 fraciuni: - fraciunea I care conine fosfor, compui proteici i glucidici, cu aciune edematogen; - fraciunea II care este de natur proteic, cu proprieti antigenice; - fraciunea III tot de natur proteic, cu efect letal. Fiecare fraciune luat separat este lipsit de proprieti toxice. Efectul toxic se exercit numai de toxina complet. Efectul imunogen este determinat de fraciunea II singur, de combinaiile I+II, II+III, I+III i optimal de aciunea sinergic a celor 3 fraciuni. -toxina atac sistemul nervos central, cu modificri ECG evidente, urmate de tulburri de respiraie, anoxie, hipoglicemie, alcaloz i anoxemie miocardic. Infecia natural.Poart denumirea de antrax (dalac sau crbune). Boala evolueaz sub forme septicemice la ierbivore, ndeosebi la oi, capre, bovine, cabaline i sub forme edematoase localizate la porci, carnivore i obolani. -evoluia localizat la aceste specii se explic prin prezena unei enzime, numit glutamilaza, capabil s degradeze capsula.
53

-la om boala poate evolua sub dou forme principale: -crbunele extern sau cutanat (pustula malign) -crbunele intern (pulmonar, digestiv, meningian etc.). Toate formele pot evolua spre septicemie. Conduita de diagnostic. n caz de antrax diagnosticul trebuie confirmat ct mai rapid, avnd n vedere posibilitatea crerii de surse telurice de infecie i importana ca boal profesional. Testul Jensen-Kleemeyer (Perlschnurtest) -nsmnarea germenului pe suprafaa unei geloze simple cu 0,05-0,5 % penicilin/ml; -dup o incubare de 21/2- 3 ore, n frotiuri se constat lanuri constituite din forme globuloase, n loc de streptobacili.Acest aspect nu apare la celelalte specii ale genului Bacillus Examen serologic: Tehnica Ascoli-Valenti. Tehnica dublei difuzii n gel de agar. Imunoprofilaxia. - Vaccinuri anticrbunoase. - din tulpini atenuate de B. anthracis. -utilizarea de tulpini apatogene, acapsulogene i edematogene ( N. Stamatin i Ludmila Stamatin (1936) au obinut mutanta 1190-R, prin cultivare pe snge defibrinat de cal) -Serul imun anticrbunos
54

-prin hiperimunizarea cailor cu tulpina 1190-R -are o nalt concentraie n anticorpi, fiind utilizat att preventiv ct i curativ. -Serul anticrbunos precipitan -se prepar pe iepure sau pe cal, dup un protocol de hiperimunizare, diferit de cel utilizat n prepararea serului imun -se folosete pentru diagnostic, n reacia Ascoli-Valenti sau precipitarea n gel de agar. Bacillus cereus -germen foarte rspndit n sol, aer, ap i alimente -se deosebete B. anthracis prin faptul c prezint capetele rotunjite, dispunerea n lanuri mai scurte, avnd un spor oval ce poate deforma uor celula vegetativ -este necapsulat i mobil, avnd numeroi cili dispui peritrichi -Gram pozitiv -pentru difereniere de B. anthracis se urmrete i evidenierea sensibilitii/rezistenei la penicilin (sensibil B. anthracis, rezistent B. cereus). Cultivarea -se realizeaz pe medii obinuite sau pe agar cu snge -este capabil s se multiplice la 45oC, -pe geloz-snge produce o hemoliz beta intens. Antigenic
55

-se nrudete cu B. anthracis -produce o proteaz i o lecitinaz puternic (fosfolipaza C) Patogenitatea pentru oarece se manifest numai la doze mari. -este slab patogen, att n condiii naturale ct i experimentale -a fost izolat din mamite de la vaci -provoac toxiinfecii alimentare dac se nmulete excesiv n alimente (forma diareic i forma cu vomismente) -la om se consider c poate provoca uneori bacteriemii i meningite. Bacillus thuringiensis -germen patogen pentru insecte, afectnd larvele -tulpinile patogene produc --endotoxin coninut n corpii cristaloizi parasporali, o exotoxin termostabil, de natur polipeptidic --exotoxin, termostabil -lichefiaz gelatina, -produce hemoliz i are activitate lecitinazic -tulpinile sunt rezistente la penicilin i nu sunt patogene pentru oarece sau cobai. Bacillus larvae -bacili lungi i subiri de 1,5-6/0,5-0,6 m, ciliat (flagelii formnd un fel de corzi) -sporul este de form oval i conine corpi parasporali -izolarea este posibil numai pe medii speciale cu ser sangvin, glbenu de ou sau apilarnil (un extract din trntori)
56

-produce o proteinaz -prezint antigene O i H ce au permis prepararea de seruri specifice, -este considerat ca agent etiologic al locii americane a albinelor Bacillus thiaminolyticus -asemntoare cu celelate specii ale genului Bacillus -capabil s produc indol -singura specie ce are proprietatea de a degrada tiamina -se izoleaz din fecale de om i considerat ca posibil agent al locii europene a albinelor, alturi de B. alvei i B. laterosporus. Specii nepatogene ale genului Bacillus Cunoscute i sub numele de antracoizi (asemntori cu B. anthracis), B. subtilis -dei este considerat nepatogen, a fost izolat din cazuri de conjunctivite, iridociclite, panoftalmii, sinuzite cronice -a fost pus n eviden n bacteriemii i meningite -este incriminat i n toxiinfecii alimentare B. stearotermophilus -are spori ce sunt foarte rezisteni la cldur, se distrug n 15-18 minute la 121oC cldur umed -se utilizeaz n controlul eficienei sterilizrii la autoclav, la temperatura de 120oC timp de 30 de minute -produsul utilizat n acest scop poart numele de stearotest. B. circulans -este o specie genetic heterogen
57

-produc colonii variabile ca mrime, rotunde, care prezint mobilitate, avnd tendina de a se rspndi pe suprafaa agarului de o manier circular. -incubarea se face la 25oC -se coloreaz Gram variabil, adesea chiar Gram negativ -dimenisiunile formelor vegetative sunt de 2-5/0,5-0,7 m, iar sporii sunt elipsoidali, variabili ca poziie. Germeni din genul bacilus utilizai n obinerea de antibiotice: B. licheniformis - bacitracina, - B. brevis- gramicidina, - B. polymyxa - polimixina, - B. laterosporus laterosporina.

58

GRUPA BACILILOR GRAM POZITIVI SPORULAI ANAEROBI. Genul Clostridium: Clasificarea pe baza proprietilor fiziologice, utilizarea reprezentanilor n procese biotehnologice, i cerinele biologice ale acestora GRUPA BACTERIILOR DE FORMA ALUNGIT, DREAPT, GRAM POZITIVE, SPORULATE ANAEROBE Familia BACILLACEAE Genul Clostridium (Prazmowski 1880) Grupeaz bacili anaerobi, sporulai, prezint un perete a crui structur este similar cu cea a bacteriilor Gram pozitive. Genul cuprinde mai mult de 120 de specii diferite -sunt n totalitate anaerobe, -n marea lor majoritate mobile, sporulate, Gram pozitive -sporul este aezat central, subterminal sau terminal, cu diametru transversal mai mare ca al formei vegetative Genul cuprinde specii patogene i nepatogene. Speciile patogene pot fi clasificate n: - specii predominant sau exclusiv toxigene;
59

- specii toxigene i virulente; - specii saprofite, nepatogene sau accidental patogene. I.Specii predominant sau exclusiv toxigene Clostridium tetani Ecologia -germen saprofit -prezent n mod curent sub form de spori, att n sol ct i n tubul digestiv al diferitelor specii de animale. Rezistena la factorii de mediu -sporii sunt foarte rezisteni la temperaturi ridicate i uscciune -la 100oC rezist 1 or, la 120oC rezist 15 - 20 minute -rmn viabili dup 2 luni n alcool de 90o -n sol i n materiale patologice uscate, rmn viabili zeci de ani -formele vegetative nu prezint o rezisten deosebit la aciunea agenilor fizici sau chimici -s-a pus n eviden un fag specific pentru Cl.tetani. Morfologia -bacil lung i subire, cu dimensiuni cuprinse ntre 2,4-5/0,4-0,5 m, ciliat (peritrich), -necapsulat i sporulat -sporii sunt aezai terminal, imprimndu-i un aspect de b de chibrit -Gram pozitiv -prezint fenomenul de "crare" pe suprafaa gelozei n condiii anaerobe
60

Cultivarea -este strict anaerob i crete pe mediile uzuale pentru germenii anaerobi. - n mediile lichide -se dezvolt bine la 37-39oC dup 24-48 de ore, -turbiditate moderat, cu producerea de gaz i miros de corn ars; -concentraia optim de toxin se obine dup 11-13 zile de la cultivare n mediul VF glucozat 8 %, la pH-5,8 i temperatura de 33oC. -Pe mediile solide, -formeaz colonii mari de 4 - 6 mm diametru, mate, de culoare gri, avnd un aspect fin rizoid; -pe medii cu snge produce hemoliz -pe geloza simpl se ntinde ca un vl uniform pe toat suprafaa mediului. Proprieti biochimice -este lipsit de proprieti glucido i proteolitice -produce indol i un numr redus de tulpini produc hidrogen sulfurat; -coaguleaz inconstant i lent laptele Sensibilitatea la antibiotice -forma vegetativ prezint o sensibilitate marcant la penicilin, cloramfenicol, tetraciclin, eritromicin -sunt sensibili la bacteriocinele produse de Cl. Perfringens. Structura antigenic
61

-omogen n ceea ce privete structura lui somatic, n schimb prezint diferene n privina antigenelor flagelare (10 serotipuri) -toate tulpinile produc acelai tip de toxin. Elemente de patogenitate -este dominat de toxina sa, care constituie prototipul exotoxinelor -toxina tetanic este o exotoxin tipic, de natur proteiccu grad de toxicitate foarte ridicat -este termolabil, fiind degradat n 5 minute la 65oC -ndeplinete condiii de antigenitate -sub aciunea formolului i a cldurii se transform n anatoxin, care este un vaccin ideal -este format din dou componente: -tetanolizina -produce liza hematiilor unor specii de animale (cal, iepure), -are efect cardiotoxic i necrotic, -tetanospasmina -este responsabil de aciunea sau efectul tetanigen. -propagarea spre sistemul nervos se face pe cale axonal i pe cale hematogen, blocnd inhibiia pre- i postsinaptic, n special n mduv i cerebel, producnd paralizii i convulsii generalizate Infecia natural -poart denumirea de tetanos i se ntlnete mai frecvent la cabaline, porcine, carnivore i mai rar la celelalte specii; -omul este de asemenea foarte sensibil
62

-boala se manifest prin contracii tetanice ale musculaturii striate -la nivelul unor plgi care ndeplinesc condiii de anaerobioz (plgi tetanigene), sporii rmn cantonai la acest nivel, germineaz i ncep s sintetizeze toxina -propagarea toxinei se face pe calea nervilor sau sngelui, perturbnd mecanismul de transmitere a influxului nervos La cabaline, la alte animale mari ca i la om, tetanosul ncepe cu: -contractura muchilor masticatori (trismus), -apoi se generalizeaz (tetanos descendent).

La unele animale de talie mic: -injectarea toxinei provoac o paralizie spastic, ce ncepe de partea i cu membrul n care s-a injectat -membrul este fixat n extensie forat, -corpul se curbeaz de aceeai parte, treptat survenind generalizarea tetaniei (tetanos ascendent). Conduita de diagnostic Aspectul clinic este de regul caracteristic, fiind suficient de relevant pentru precizarea diagnosticului. -se va cuta prezena plgii tetanigene Examenul de laborator se practic rar. -produsul patologic recoltat de la nivelul plgii se nclzete 30 minute la 80oC, pentru a distruge formele vegetative,
63

-se nsmneaz pe geloz-snge (incubarea n condiii de anaerobioz) -cultura pur se amestec cu 5 mg CaCl 2 i se inoculeaz i.m. la oarece, n membrul posterior -oarecii vor face, ntr-un interval de 4-5 zile, tetanos prezentnd clinic un aspect caracteristic de foc i coada ridicat "n drapel" -moartea se produce n cca 4 zile. Imunoprofilaxia -se utilizeaz dou produse biologice: anatoxina tetanic i antitoxina tetanic. Anatoxina tetanic. -reprezint vaccinul antitetanic -din toxina tetanic, ce se inactiveaz prin formol i cldur, i se adsoarbe pe hidroxid de aluminiu -ofer o protecie eficient, chiar pe via, n cazul efecturii a 2-3 rapeluri. Antitoxina tetanic. -serul antitetanic obinut pe cai prin hiper- imunizarea acestora -se folosete att preventiv ct i curativ Clostridium botulinum (Von Ermengen 1897) Germen foarte rspndit, fiind prezent n solul tuturor regiunilor geografice, ct i n intestinul omului i animalelor. Ca saprofit al solului, el poate contamina alimentele i furajele Rezistena la factorii de mediu
64

-sporii au o rezisten remarcabil, ceea ce le asigur supravieuirea n conserve, mai ales cele de cas, incorect sterilizate. -temperatura de 120oC distruge sigur sporii acestui germen. Morfologia -bacil drept, lung i gros, cu dimensiuni de 0,3-1/1,5-9 m -sporulat, ciliat, necapsulat, -Gram pozitiv Cultivarea. -germen strict anaerob, -condiii optime de dezvoltare la 25oC. -cultivarea se face pe medii uzuale anaerobe. - n medii lichide -turbiditate accentuat, cu depozit omogenizabil, -cultura degaj un miros rnced caracteristic. - n medii solide - formeaz colonii mari de 3-4 mm, mate, de culoare gri, cu margini rizoide -nsmnat n profunzime, formeaz colonii pufoase, cu centru opac -pe geloz-snge (de cal), coloniile sunt hemolitice, Proprieti biochimice. -sunt gelatinolitice, produc lecitinaz, H2S -nu produc indol -toate tulpinile sunt active fa de glucoz, maltoz, zaharoz i fructoz -sunt inactive fa de lactoza i galactoz. Structura antigenic.
65

Prin reacia de seroaglutinare s-au putut diferenia mai multe tipuri antigenic distincte, dei toate provoac aceeai mbolnvire clinic, botulismul. Tipurile sunt notate cu literele alfabetului A, B, C, D, E, F i G. ntre tipurile A i D exist nrudiri antigenice, celelalte tipuri fiind net distincte. Tipul G a primit numele de Cl. argentinese (106). Elemente de patogenitae. -acioneaz exclusiv prin toxina botulinic -mbolnvirile se produc n urma consumului de alimente sau furaje nsilozate, n care germenii se multiplic n condiii de anaerobioz, producnd toxina Toxina botulinic este cea mai puternic toxin cunoscut pn n prezent. Se precizeaz c 1 mg de toxin conine 1.200.000 DLM/kg corp cobai, fiind capabil s omoare 1200 tone cobai Prin calcul s-a stabilit c 198,422 g toxin ar fi suficient s distrug viaa de pe toat suprafaa globului -chimic, toxina este de natur proteic -este distrus n 5-6 minute la 80oC, iar n conserve n 20 de minute la 100oC -este rezistent la aciunea sucului gastric, -mecanismul su de aciune const n blocarea transmiterii nervoase, prin inhibarea secreiei de acetilcolin la nivelul plcilor neuromusculare, antrennd paralizii ale muchilor Infecia natural. -este denumit botulism i se ntlnete la om, animale i psri
66

-mbolnvirile apar n urma consumului de furaje/alimente (siloz, mezeluri, conserve) n care germenii s-au mutiplicat i au produs toxina -la psri s-au constatat cazuri de mbolnviri, n urma consumului de larve de mute ce s-au dezvoltat pe cadavre -la copiii sugari sub 6 luni, s-au descris cazuri de botulism, ca urmare a producerii de toxin n intestin -manifestrile clinice constau n paralizii, iniial la nivelul capului (pleoape, urechi, buze, limb, faringe) cu tendin de generalizare. -boala se termin de regul prin moarte. Conduita de diagnostic. Aspectul clinic al animalelor bolnave, corelat cu datele anamnetice, pot permite suspicionarea bolii. -se urmrete evidenierea toxinei i determinarea tipului acesteia (toxinotipie) -toxina se caut n lichidul de spltur gastric sau vrstur, coninutul intestinal i lichidul obinut din alimentele/furajele suspecte Efectuarea diagnosticului de laborator prin cultivarea microorganismulului este recomandat numai n laboratoare de specialitate, din cauza pericolului pe care - l comport. Imunoprofilaxie.-toxina, sub aciunea formolului i a cldurii, se transform n anatoxin, avnd proprietile unui bun vaccin. -vaccinarea nu i-a gsit aplicaii practice din cauza caracaterului accidental al bolii.

67

-curativ se recomand administrarea de ser antitoxic specific, rezultatele sunt adesea nesatisfctoare, deoarece antitoxina, nu poate neutraliza toxina fixat pe sistemul nervos. II.Specii toxigene i virulente Clostridium chauvoei Habitat.-sporii sunt prezeni n sol, unde persist perioade foarte ndelungate (peste 11 ani) -prezena sporilor este legat de anumite regiuni, fapt care imprim bolii un caracter zonal. Rezistena la factorii de mediu-sporii rezist la 70oC timp de 30 de minute -n esutul muscular cu leziuni de crbune emfizematos, sporii se conserv timp de 8 ani -sunt distrui de formol 3 % n 15 minute -formele vegetative se distrug uor sub aciunea diverilor factori de mediu -sunt sensibile la antibiotice (penicilin, aureomicin, tetraciclin). Morfologia.-bastona, cu dimensiuni de 2-4/0,5-0,8 m -sporulat, ciliat, necapsulat, Gram pozitiv -sporul este oval, situat subterminal sau central, deformnd forma vegetativ -cilii sunt numeroi, dispui peritrichi. Cultivarea.-se dezvolt pe medii uzuale pentru anaerobi. - n medii lichide -se dezvolt n 18-24 de ore,
68

-turbiditate uniform i producerea de gaze. - Pe medii solide -formeaz colonii rotunde, de 1-3 mm, de culoare gri -zon slab de hemoliz -n profunzime, formeaz colonii pufoase, de mrimi diferite. Proprieti biochimice.-fermenteaz glucoza, fructoza, lactoza, zaharoza, galactoza, maltoza i manoza -produce lecitinaz i este indol negativ -produce acid acetic, acid butiric i alcool butilic Structura antigenic.-tulpinile sunt omogene n privina antigenelor somatice -prezint unele diferene n privina antigenelor flagelare Elemente de patogenitate.-este un germen virulent i toxigen -toxina este compus din mai multe fraciuni: alfa cu efect letal pentru animalul de laborator beta cu aciune hemolitic -unde germenul se multiplic i produce toxina, se dezvolt tumoarea emfizematoas -are loc descompunerea glicogenului muscular, cu producerea de gaze Infecia natural. Se cunoate sub numele de crbune emfizematos, crbune bacterian, crbune simptomatic sau armurar. -se ntlnete la taurine, bubaline, ovine, la cele aflate n stare bun de ntreinere, care au suferit un traumatism pe masele mari musculare
69

-evolueaz ca o toxiemie, nu ca septicemie -anatomoclinic, apare caracteristic tumoarea emfizematoas. Conduita de diagnostic.-se expediaz la laboratoarele veterinare poriuni din tumora emfizematoas i un os lung nedeschis. Examen bacterioscopic. -se fac frotiuri din musculatura lezionat i se coloreaz Gram. -semnificativ este prezena de germeni Gram pozitivi, de dimensiuni mari, forme vegetative i sporulate (sporuleaz n organism). Examen bacteriologic. - nsmnri din musculatur i din os - culturile sunt pozitive din muchi i negative din mduva osoas, diferit de alte boli septicemice. Infecia experimental. -cobaiul este cel mai receptiv -inocularea se face i.m. -pozitiv: - se produce la locul inoculrii o leziune caracteristic, cu aspect de gangren gazoas i moartea n 5-6 zile Imunoprofilaxia.Vaccinul contra crbunelui emfizematos se prepar dintro anacultur de Cl. chauvoei inactivat prin aciunea cldurii i a formolului, cu adaus de hidroxid de aluminiu. -vaccinarea se execut numai de necesitate Serul contra crbunelui emfizematos se folosete att pentru imunizarea pasiv, ct i n tratamentul bolii (seroterapie).

70

Clostridium septicum (Clostridium oedematiens maligni) Germenul triete ca saprofit n tubul digestiv al animalelor i omului. Morfologia.-bacil lung i gros, cu dimensiuni de 3,0-14/1,5-1,6 m, fiind considerat ca cea mai mare bacterie patogen -germen necapsulat, ciliat peritrichi i sporulat, Gram pozitiv. -sporul este situat central sau subterminal i deformeaz forma vegetativ. Cultivarea. -se cultiv pe medii de cultur uzuale, pentru anaerobi. - n medii lichide -se dezvolt producnd turbiditate intens i o bogat cantitate de gaze. Pe medii solide -formeaz colonii de 1-5 mm diametru, lucioase, semitransparente, deseori cu tendin de roire. Proprieti biochimice. -degradeaz glucoza, fructoza, lactoza, maltoza, manoza i dulcitolul -lichefiaz gelatina, coaguleaz laptele turnesolat i produce hemoliza globulelor roii de iepure i oaie -nu produce indol Structura antigenic. s-au identificat 6 grupe serologice -prezint nrudiri antigenice cu Cl. chauvoei. Elemente de patogenitate. -este un germen virulent i toxigen
71

-elaboreaz o toxin compus din 4 fraciuni: - este un factor cu efect letal, necrotic i hemolitic; - este o dezoxiribonucleaz; - hialuronidaz - o hemolizin analoag streptolizinei O Infecia natural. -este implicat mai ales n etiologia gangrenelor gazoase la om i cabaline, fie singur, fie n asociaie -entiti clinice bine conturate sunt amintite: furaje dure, ngheate, care modific integritatea mucoasei stomacale; - edemul malign al porcului caracterizat printr-un edem gazos al stomacului, leziuni musculare i generale; - infecii cu caracter local sau general (apendicite, septicemii puerperale etc.) au mai fost descrise, att la om ct i la animale. Conduita de diagnostic. -se vor lua n considerare datele epidemiologice, evoluia clinic i leziunile ntlnite mai ales la nivelul stomacului. -se efectueaz examen bacterioscopic, bacteriologic i infecie experimental pe cobai. Imunoprofilaxie. Se pot practica imunizri cu vaccin constituit din anaculturi de Cl. septicum. Clostridium perfringens
72

bradsotul (braxy) infecie frecvent la oi i capre, favorizat de hrnirea cu

(Welchia perfringens) Clostridium perfringens a fost izolat pentru prima dat de Achalme i Wickleein (1891), iar Welch i Nuttal (1892) fac prima descriere complet a bacilului. -a fost cunoscut i sub urmtoarele denumiri: Bacillus perfringens (Veillon i Zuber - 1898); Bacterium welchi (Migula - 1900); Clostridium welchii (Holland -1920); Clostridium perfringens (Veillon i Zuber - 1920); Bacillus welchii - 1931). Habitat. -are o rspndire universal, fiind gsit n numeroase medii -n tubul digestiv la toate speciile de animale, domestice i slbatice, inclusiv la om -n sol, ap, aer, ca i n numeroase alimente, de origine vegetal sau animal (legume, lapte proaspt sau condensat, brnzeturi, conserve, carne, mezeluri, pete, etc), sub form vegetativ sau sporulat. Rezistena la factorii de mediu. -forma vegetativ nu prezint o rezisten deosebit la aciunea deosebit a diferiilor ageni fizici sau chimici, fiind inactivat de temperatura de 65 oC i dezinfectantele uzuale -sporii majoritii biotipurilor sunt distrui la 100oC n 2-3 minute, cu excepia tipului F ai crui spori rezist pn la 2 ore
73

-sporii uscai sunt mai rezisteni dect sporii umezi Proprieti biochimice. -are o intens activitate biochimic -fermenteaz numeroase substane hidrocarbonate: glucoza, fructoza, lactoza, galactoza, maltoza, zaharoza, manoza i inozitolul, cu producerea intens de gaze, ndeosebi CO2 i H2 -produce acid acetic, butiric, caproic i alii -hidrolizeaz amidonul, lichefiaz gelatina, produce H2S i coaguleaz laptele turnesolat -nu produce indol -laptele turnesolat prezint un aspect caracteristic, numit cheag alveolar (laptele este iniial redus, apoi fermentat, se coaguleaz, coloana de lapte limpezindu-se) -pe geloz glucozat, cu glbenu de ou, se produce reacia Nagler Structura antigenic. -toate tulpinile posed antigene somatice comune, dar i antigene specifice de biotip -biotipurile sunt notate cu literele alfabetului: A, B, C, D, E, F n cadrul unor biotipuri s-au putut identifica mai multe tipuri anti- genice ( exemplu: biotipul A cuprinde 8 tipuri serologice) Elemente de patogenitate. -este un germen virulent, dar mai ales toxigen -prezint un numr de 13 factori toxici notai cu literele alfabetului latin -secreia toxic este condiionat de tulpin i mediu
74

-temperatura optim pentru producerea toxinei este de 37-40oC, temperaturile mai mari de 40oC nu sunt favorabile producerii toxinei. -toxina este activ i se titreaz pe oarece (inoculare i.v.) moartea survenind n cteva minute pn la cteva ore -diferiii factori toxici sunt notai cu literele alfabetului grecesc, acetia fiind n numr de 12 [, ,, (delta), (epsilon), (eta), (teta), (iota), (kapa), (lamda), (miu), (niu)]. -caracterele luate n mod obinuit n considerare pentru aprecierea patogenitii tulpinilor sunt: -activitatea hemolitic i cea lecitinazic -factorul toxic (toxina major=, , i ) Patogeneza. -n intestin, sporii de Cl. perfringens germineaz, transformndu-se n forme vegetative -acestea se multiplic intens, elabornd complexul de factori toxici, care acioneaz mai nti asupra unor segmente ale mucoasei intestinale -efectele morfopatologice sunt brutale, ntruct cele mai multe toxine au aciune hemolitic, necrotic i letal -toxina i favorizeaz creterea permeabilitii capilare -unele dintre ele induc modificri, cum ar fi dezintegrarea colagenului (colagenaza), lichefierea gelatinei (gelatinaza), -frecvent sunt semnalate complexe etiologice n care Cl. perfringens se asociaz i acioneaz cooperant cu alte specii bacteriene
75

-cele mai frecvente sunt infeciile mixte produse mpreun cu E. coli, germen a crei patogenitate pare s fie potenat de multiplicarea lui Cl. perfringens -se descriu asocieri i mai complexe, n care alturi de Cl. perfringens se izoleaz Cl. dificile, Campylobacter spp., i Salmonella. Infecia natural. Cl. perfringens este considerat ca un germen condiionat patogen, comensal al mucoaselor tubului digestiv, capabil s provoace infecii la diferite specii de animale. -caracterul infeciei depinde de biotip, de patogenitatea tulpinii, de factorii de mediu i de vrsta animalelor -de cele mai multe ori, forma anatomo-clinic a bolii este o enterit sau enterotoxiemie. -infeciile produse de Cl. perfringens se ncadreaz n categoria de boli denumite generic anaerobioze, (welchioze). Imunoprofilaxie. La noi n ar se folosesc vaccinuri i seruri. Specii de Clostridium ocazional patogene - Clostridium histoliticum. -germen mai scurt i mai fin, comparativ cu celelalte clostridii -este ciliat, necapsulat, sporulat, Gram pozitiv

76

-biochimic i prin infecia experimental pe cobai, se evideniaz o enzim proteolitic cu aciune foarte brutal, putnd provoca liza esuturilor pn la os - utilizat n obinerea unor enzime proteolitice - Clostridium sporogenes. -bacil lung, gros, de 3-8/0,8-1,0 m, cu mobilitate accentuat, datorit cililor dispui peritrichi -are un spor de form rotund sau ovalar, dispus subterminal, care rezist mai multe ore la fierbere - Clostridium bifermentans. - bacil lung i gros, cu dimensiuni de 5,0-6,0/0,8-1,0 m, -Gram pozitiv, necapsulat, sporulat, -sporul fiind situat subterminal, deformnd uor corpul formei vegetative. -cultura n ansamblu se transform ntr-o mas de spori, ntre care se observ rare elemente vegetative care nu au sporulat. - Clostridium sordelli. -bacil de 2-5/0,5-1 m, Gram pozitiv, cu spori ovoidali subterminali, care deformeaz forma vegetativ -produce o lecitinaz, antigenic nrudit cu toxina de la Cl. perfringens i lichefiaz gelatina. - Clostridium spiriforme. -germen anaerob de aspect ncurbat sau spiralat, cu spori terminali, cu o slab activitate biochimic -acidifiaz glucoza i sucroza
77

-produce o citotoxin i o enterotoxin, este patogen pentru iepuri i cobai, fiind incriminat n diferite forme de enterit, n deosebi mucoid. -boala poate fi reprodus la iepuri aduli dup administrarea de antibiotice, n deosebi clindamicin - Clostridium difficile. -dimensiuni de 3-6,5/1,3-1,6 m, mobil, datorit unor cili dispii peritrichi, -spori ovali subterminali/terminali, Gram pozitiv -necesit medii cu snge, care s conin extract de drojdie, hemin, vitamina K, cistein i ageni antimicrobieni -produce o enterotoxin i o citotoxin -este incriminat n producerea de enterocolite la om, (mai ales dup terapia prelungit cu antibiotice), la hamsteri, cobai, dar i la alte categorii de animale (cini, mnji i purcei). GRUPA BACTERIILORGRAM NEGATIVE DE FORM BACILAR, AEROBE I ANAEROBE: Bacterii aerobe de form bacilar sau cocobacilar. FAM. ENTEROBACTERIACEAE Genurile Escherichia, Salmonella, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Morganella, Shigella, Yersinia, Serratia. Clasificarea pe baza proprietilor fiziologice,implicarea reprezentanilor n procese biotehnologice, i cerinele biologice ale acestora

78

GRUPA BACTERIILOR DE FORM ALUNGIT DREAPT GRAM NEGATIVE, AEROBE Familia ENTEROBACTERIACEAE

Cea mai vast grupare taxonomic dintre bacteriile de interes medical, cuprinde peste 40 de genuri. Germenii familiei Enterobacteriaceae prezint urmtoarele caractere comune: -nia ecologic este tubul digestiv; -sunt asemntoare morfologic, predominnd formele cocobacilare; -fermenteaz glucoza, -oxidazo-negativi; -acioneaz prin virulen i toxine polizaharidice.

Genul Escherichia Cuprinde germeni comensali, constitueni obinuii ai florei normale intestinale la om i animale, dar care n anumite condiii pot manifesta evidente caractere de patogenitate. Denumirea de Escherichia provine de la numele lui Theodor Escherich (1885) cel care a izolat specia tip a genului.

79

-sunt recunoscute mai multe specii, difereniate pe baza caracterelor biochimice dup cum urmeaz: E. coli (tip 1 i 2), E. adercaboxylata, E. fergusoni, E. hermanni, E. vulneris. (tabel nr.15). Escherichia coli

Ecologia.-se gsesc dominant n tubul digestiv, mai ales n intestinul gros (colon) al omului i animalelor este rspndit n diverse medii naturale (ap, sol, alimente) Morfologia. - este un bacil sau cocobacil Gram negativ, aerob i facultativ anaerob, polimorf, cu dimensiuni de 2-6/1,1-1,5 m, nesporulat, necapsulat, mobil datorit unui bogat aparat ciliar dispus peritrih sau uneori imobil. Cultivarea. Se dezvolt bine n mediile uzuale la temperatura optim de 370C. n bulionul nutritiv produce turbiditate intens, uneori inel la suprafaa coloanei de mediu, iar n culturile mai vechi, depozit abundent neaderent. Pe suprafaa agarului nutritiv formeaz colonii cu diametrul de 2-6 mm, opace, nepigmentate, uor bombate.
80

Proprieti biochimice.-germen cu intense proprieti fermentative -nu utilizeaz citratul ca unic surs de carbon -glucoza i ali carbohidrai sunt fermentai cu producere de piruvat, -produc indol i nu produc H2S -unele tulpini de E. coli sunt capabile s produc substane cu aciune antagonic (colicine) active fa de alte tulpini de E. coli sau alte enterobacterii.

Sensibilitatea la factorii de mediu. -supravieuiesc n mediul extern (sol, ap, alimente etc.) sptmni sau luni de zile -sunt distrui prin expunerea la 60oC n 30 de minute -sunt sensibili la aciunea antisepeticelor uzuale (fenol, sublimat, cloramin -clorul n concentraie de 0,5-1/1 000 000 este folosit pentru purificarea apei, -sunt sensibili la aciunea fagilor specifici; unele tulpini sunt lizogene. Sensibilitatea la antibiotice. -sunt sensibili, ndeosebi, fa de antibioticele de tip streptomicinic (neomicin, kanamicin, gentamicin, colimicin, polimixina B), -cele cu spectru larg (tetracicin, cloramfenicol) -fa de sulfamide (nitofurantoin, furazolidon, olaquindox, carbadox), -chimioterapice urinare (acid nalidixic, cotrimoxazol)
81

-multe tulpini prezint fenomen de antibiorezisten, care se transmite prin plasmide R Structura antigenic. -se caracterizeaz printr-o pronunat variaie antigenic Antigenul O -antigen de suprafa, termostabil, existent la toate formele S ale enterobacteriaceelor -de natur glucido-lipido-polipeptidic, -rezist la aciunea alcoolului, formolului i acidului clorhidric -Ag O reprezint polizaharidul O specific al lipopolizaharidului peretelui celular -n baza lor tulpinile de E. coli se mpart n serogrupe i serotipuri -cele mai rspndite serotipuri sunt urmtoarele: - la viei cu diaree: O15; O21; O17; O5; O78; O26; O115 etc. - la porci cu diaree: O8; O11; O41; O84; O117; O45; O54; O138; O139 etc. - la vaci cu mamit: O39; O88; - la psri: O1; O2; O3; O5; O8; O73; O78; O11; O22; O47 etc. Serotipul O157 este implicat n producerea unui sindrom neurologic la om, acest serotip a fost izolat i de animale (porci). Antigenul H. -de natur proteic, termolabil, prezent n flagelii colibacililor mobili
82

-rezist la aciunea formolului i este inhibat de alcool -este sensibil la aciunea acidului clorhidric -au fost descrise 56 de fraciuni antigene flagelare Antigenul K. -antigenele capsulare -reprezentate prin 3 factori antigenici diferii notai L, A i B -sunt de dou tipuri: antigene K de natur polizaharidic i antigene K de natur proteic Antigenul F. -are origine fimbrial i prezint rol deosebit n mecanismul patogenetic, intervenind n procesul de aderen a colibacililor la enterocite. -au fost foarte bine studiate F-4, extras din tulpini toxigene provenite de la purcei i F-5, extras din tulpini toxigene de la viei i miei -ambele antigene se transmit prin plasmide. Antigenul M. -chimic este acid colanic i este comun i altor enterobacterii -imprim caracterul mucos al tulpinilor de E. coli. Elementele de patogenitate. Patogenitatea se datorete unor factori de virulen i toxici. Se clasific astfel: -tulpini enteropatogene (EPEC),
83

-tulpini enterotoxigene (ETEC), -tulpini enteroinvazive (EIEC) -tulpini enterohemoragice (EHEC). 1. Factorii de virulen.- se includ urmtorii: a) Factorii de aderen (antigenele fimbriale, de tipul F-4 i F-5); b) Factorii de colonizare reprezentai de structuri care prezint asemnri morfologice i biologice cu antigenele F-4 i F-5; c) Antigenele de suprafa de tip K- fac ca germenii s fie mai puin sensibili la fagocitoz i aciunea litic a complementului, favorizeaz aderarea celulelor bacteriene la celulele epiteliale. 2. Factorii de toxicitate.- joac un rol important n mecanismul patogenetic. a) Antigenul somatic de tip O -protejaz colibacilii de macanismele de aprare ale gazdei b) Hemolizinele sunt prezente numai la unele tulpini de E. coli ndeosebi la cele izolate de porci cu boala edemelor. c) Enterotoxinele -au fost descrise dou tipuri de enterotoxine: Enterotoxina termolabil (LT) -se aseamn structural i funcional cu toxina holeric

84

-perturb grav activitatea enterocitului, avnd loc o eliminare masiv de lichid bogat n electrolii n lumenul intestinal, manifestat clinic printr-o diaree apoas Enterotoxina termostabil (ST) -produs de tulpinile ETEC de origine uman i porcin -perturb, de asemenea funcia enterocitului, ducnd la sporirea secreiei de lichid n lumenul intestinal -producerea de enterotoxin este codificat de plasmidul Ent, care se transmite relativ uor prin procese de recombinare genetic, ndeosebi conjugare -unele tulpini produc colicine V care le permit s devin dominante n intestin, fiind favorizat diseminarea sistemic, favorizat i de structurile de nveli de tipul antigenelor K Infecia natural. -poart denumirea de colibaciloz/colibaciloze i evolueaz la majoritatea animalelor nou-nscute, mai frecvent la viei, purcei i miei Ca entiti clinice mai bine conturate sunt urmtoarele: - septicemia colibacilar produs de tulpini enteroinvazive, ntlnit la diferite specii de animale i categorii de vrst; - enterita colibacilar produs de tulpini enterotoxigene i care provoac obinuit mbolnviri la animalele nou-nscute (viei, purcei, miei); - boala edemelor ce apare la purcei n perioada nrcrii;
85

- mamita colibacilar a vacilor; - coligranulomatoza la psrile adulte. -pot s apar deseori ca germeni de infecie secundar, suprapunndu-se peste infecii virale sau evolund concomitent cu alte infecii bacteriene Conduita de diagnostic. Demonstrarea patogenitii tulpinilor. n acest scop pot fi utilizate urmtoareale teste: -Testul ansei ligaturate (loop test) -se practic pe anse de viel, purcel, iepure i chiar alte specii -este pozitiv cnd ansele inoculate sunt mrite n volum, sunt congestionate i au un coninut fluid, galben sau chiar hemoragic -este cea mai bun metod de detectare a activitii enterotoxice a tulpinilor -Evidenierea enterotoxicitii n culturi celulare. -tulpinile producoare de enterotoxine determin modificri ale substratului celular -se utilizeaz frecvent linia celular Vero -Hemaglutinarea fa de hematiile de om, cobai, cal. -se datorete prezenei fimbriilor - Infecia experimental la oarece pe cale i.p., -nu se examineaz n mod curent, -poate constitui un indicator important pentru stabilirea patogenitii tulpinilor
86

-se mai poate efectua i un test conjunctival (cheratoconjunctivit) Alte teste de diagnostic. -testul de conglutinare cu proteina A a stafilococului, -testul de aglutinare cu particole de latex (LPAT), -chimioluminiscena, -teste de tip ELISA, PCR, RIA, IF i altele. Imunoprofilaxia. Imunitatea anticolibacilar este predominant de tip umoral, anticorpii sintetizai fiind de tip IgM, IgG1, IgG2 i ntr-o mai mic msur de tip IgA. Cercetri mai recente au demonstrat i participarea efectorilor celulari. Vaccinurile anticolibacilare pot fi clasificate astfel: - vaccinuri monomicrobiene preparate exclusiv din tulpini de E. coli ; - vaccinuri polimicrobiene preparate din amestecuri de tulpini de E. coli care n funcie de situaia epidemiologic din uniti se poate combina cu alte bacterii, ndeosebi Salmonella, Pasteurella, Clostridium, Corinebacterium, Pseudomonas etc. -vaccinuri moderne preparate din enterotoxine sau din fimbrii purificate. O rspndire larg o au autovaccinurile, preparate din tulpini izolate din focarele endemice de boal.

87

-Vaccinurile sunt inactivate cu aceton i se aplic de regul femelelor gestante, pentru transmiterea efectorilor imuni pe cale transplacentar sau colostral. O metod modern de prevenire a colibacilozei neonatale se bazeaz pe utilizarea de preparate probiotice. n acest sens Marica i Rpuntean au selectat o tulpin productoare de colicine (M 951) care se administreaz la purcei pe cale bucal n prima zi de via. Tulpina s-a dovedit stabil din punct de vedere genetic, este rezistent la tetraciclin i a demonstrat o intens activitate inhibitoare in vitro i in vivo fa de tulpinile slbatice de E. coli ca i fa de alte enterobacterii. Importana E. coli ca indicator sanitar. Numrul colibacililor, ct i a altor enterobacterii lacotozo-pozitive (Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella), pentru care se utilizeaz termenul de germeni coliformi, din ap i alimente, constituie un important indicator igienico-sanitar. Se urmrete umrul de germeni, pe unitatea de volum care reprezint un important indicator igienico-sanitar, Indicele coli reprezint criteriul de apreciere a gradului de poluare a apei i alimentelor cu materii fecale. Pentru ca o surs de ap s fie considerat potabil, iar un aliment apreciat ca bun pentru consum, trebuie ca numrul de germeni coliformi s se ncadreze n anumite standarde. Genul Citrobacter n cadrul genului se include mai multe specii:
88

C. amalonaticus, C. farmeri, C. freundi, Morfologia. Prezint caracterele generale ale celorlalte enterobacterii. Cultivarea.Se cultiv pe aceleai medii ca i celelate enterobacterii Pe mediul CMV enteric agar, tulpinile de Citrobacter produc colonii caracteristice, n funcie de capacitatea de a fermenta lactoza: Structura antigenic.-au o structur antigenic complex, fiind evideniate antigene O, H i K -unele tulpini posed antigene Vi, -exist nrudiri antigenice i serologice O i H cu germenii din genurile Salmonella i Escherichia. Proprieti biochimice.-numele genului este inspirat din capacitatea de a utiliza citratul de amoniu ca unic surs de carbon -se difereniaz de E. coli i Salmonella prin faptul c: -produc acid din lactoz (lent) -nu produc lizindecarboxilaz Patogenitatea. C. freundii i C. amalonaticus au fost izolai n principal din fecale, dar mai ales din urin, din plgi, din snge
89

-unele tulpini de C. freundii s-au pus n eviden toxine, care antreneaz diaree sau toxiinfecii alimentare. -speciile de Citrobacter au fost implicate n diferite afeciuni: - la ovine i caprine : mamite, avorturi i diaree; - la porc : agalaxie i diaree; Conduita de diagnostic. -identificarea bacteriologic, se efectueaz dup metodologia comun germenilor din familia Enterobacteriaceae -utilizarea de medii multitest ca TSI i MILF permit o difereniere fr dificultate a tulpinilor de Citrobacter, care sunt constant LDC negative, -identificarea biochimic se completeaz cu identificarea serologic Genul Salmonella Istoric. Specia tip Salmonella choleraesuis este descris de Salmon i Smith (1885) pe care o denumesc bacteria holerei porcine, creznd n mod eronat c este agentul etiologic al acestei boli. Lignires n 1900 propune ca aceti germeni s fie ncadrai n genul Salmonella, n onoarea lui Salmon. Taxonomia.n funcie de etapa n care au fost izolate i omologate, se ntlnesc la salmonele 3 feluri de denumiri sau notri: a) numele speciei receptive, afeciunea provocat sau combinaia ntre ambele: exemple - S. typhi, S. choleraesuis, S. enteritidis, S. typhimurium, S. abortusovis, S. gallinarum-pullorum etc.
90

b ) desemnarea cu numele localitii n care au fost izolate: S. nytra, S. helsinki, S. leopoldville, S. montevideo, S. dublin, S. panama etc. c) desemnarea dup formula antigenic, lund n considerare anti genul somatic O pentru stabilirea apartenenei de grup i antigenele flagelare H (faz 1 i faz 2) pentru apartenena la tip. Habitat.Salmonelele sunt larg rspndite n natur, toate serotipurile cunoscute fiind parazite pentru om i animale. -au fost izolate de la insecte, reptile, psri, mamifere, om, ca i din diferite elemente ale mediului ambiant (sol, ape de suprafa, alimente, furaje etc.).--prezena salmonelelor este legat de starea de boal sau de portaj -spre deosebire de E. coli, ele nu sunt prezente la fiecare individ, iar sub raport cantitativ, numrul lor este mai redus Morfologia. - este un bacil sau cocobacil Gram negativ, cu dimensiuni de 2-3/0,6 m, nesporulat, necapsulat, mobil cu excepia unui serotip S.gallinarum (pullorum) sau a unor mutante imobile. Cultivarea. n bulionul nutritiv produce uniform destul de evident, cu depozit neaderent. Pe suprafaa agarului nutritiv formeaz colonii cu diametrul de 2-4 mm, semitransparente, nepigmentate, uor bombate. Caractere biochimice. - utilizeaz citratul ca unic surs de carbon -glucoza este fermentat cu producere de gaze -produc H2S i nu produc indol
91

n baza comportamentului biochimic al unui mare numr de serotipuri, Kauffman a definit 4 grupe distincte, pe care le-a denumit subgenuri, numerotate de la I la IV, la care Le Minor adaug un al V-lea subgen. -subgenul I grupeaz salmonelele tipice de la animalele cu snge cald, -celelalte subgenuri au fost ntlnite la animalele cu snge rece i n mediul nconjurtor, Sensibilitatea la factorii de mediu. -germeni rezisteni la aciunea factorilor de mediu -la 60oC culturile mor n 15-20 de minute, iar la 100oC n 5-7 minute -n sol 28-280 de zile, -n ap 2-45 de zile, -lapte 2-4 luni, -fin de pete - pn la 2 ani, -n pulberea de ou, 4 ani. -agenii sterilizani chimici, n concentraii uzuale, au un efect antibacterian satisfctor, Dintre antibiotice sunt mai active cloramfenicolul, tetraciclina, ampicilina, gentamicina, kanamicina, cefalosporinele etc. -se recomand efectuarea antibiogramei. -antibioticele nu acioneaz asupra salmonelelor localizate intracelular -sunt atacate de fagi, cu rol tipizarea fagic. Structura antigenic.

92

-structur antigenic complex, n baza creia se mpart n mai multe grupe serologice -pentru medicina veterinar o importan deosebit o au grupele A, B, C, D i E. -s-au descris pn n prezent 51 de grupe, cu peste 2000 de serotipuri. - Antigenele somatice O. -constituie suportul mpririi n grupe O, n cadru schemei KauffmanWhite. -sunt termostabile, alcoolorezistente i sunt reprezentate de complexul lipidopoliglucidic din membrana extern a peretelui celular - Antigenele flagelare H. -se extrag din flageli, -sunt de natur proteic -sunt termolabile i alcoolo-sensibile. -se descrie ceea ce se denumete variaia de faz, ntlnit la marea majoritate a salmonelelor mobile. -nu posed asemenea antigene S. pullorum-gallinarum. Antigenele de faza 1 (specific) -definesc serotipul i ele aglutineaz specific numai cu serul omolog -se noteaz cu literele mici ale alfabetului latin. Antigenele de faz 2 (nespecific) -sunt notate cu cifre arabe i unele litere mici, -ele sunt nespecifice, este comun tuturor serotipurilor -determin aglutinri ncruciate ntre serotipuri
93

-n tipizarea serologic s se folosesc culturi tinere, la care predomin antigenele H de faz 1 (specific). Grupele serologice -sunt constituite pe baza structurii antigenelor somatice de tip O -grupele mai vechi sunt notate cu literele mari ale alfabetului, de la A la Z, -cele mai recente cu cifre arabe -toate salmonelele dintr-o grup sunt caracterizate prin unul sau mai multe antigene somatice majore comune, considerate antigene de grup ( exemple: grupa A - antigenul 2; grupa B - antigenul 4 etc.) Serotipurile -se difereniaz ntre ele pe baza antigenelor H. -antigenele specifice de serotip sunt cele de faza 1; - n cadrul unor serotipuri se disting subdiviziuni bazate pe criterii biochimice (biotip/biovar), al sensibilitii la bacteriofagi (fagotip/lizotip), la bacteriocine (bacteriocinotipuri) i la antibiotice. - Antigenele de nveli (Vi). -se ntlnesc numai la unele salmonele (exemple: S. typhi, S. paratyphi B, S. typhimurium, .a), fiind plasate la exteriorul antigenului O. -prezena lor mpiedic aglutinarea somatic O (innaglutinabilitate). -denumirea Vi desemeneaz capacitatea de virulen a salmonelelor respective, - Antigenul M.

94

-descris iniial la tulpinile mucoide de S. paratyphi B, ns ulterior a fost identificat i la alte specii: S. typhimurium, S.choleraesuis, S. newport, S. enteritidis, S. anatum etc. Patogenitatea. -acioneaz prin virulena i endotoxinele. -antigenul O (lipopoliglucidic), ct i antigenul Vi au i funcie toxic. -simptomatologia general (alterarea strii generale, febra, prostraia, starea de oc) este determinat de endotoxiemia masiv. -simptomatologia digestiv (anorexia, durerile abdominale, constipaia, diareea) se explic prin agresiunea asupra intestinului, ficatului i vezicii biliare. -la femelele gestante (oi, iepe, vaci) salmonelele manifest un tropism particular pentru uterul gestant, provocnd avorturi. Infecia natural. mbolnvirile produse de salmonele poart numele de salmoneloze sau paratifoze, i se ntlnesc la om, animale i psri. -pot evolua ca boli primare sau ca boli secundare, complicnd n deosebi infeciile virale. -la om salmonelele sunt agenii cei mai frecveni ai toxiinfeciilor alimentare. -unele serotipuri sunt monopatogene, producnd mbolnviri n exclusivitate fie la om (S. paratyphi A., S. typhi i altele) fie la o singur specie de animale ( S. abortusovis - la oaie; S. abortusequi - la iap; S. typhisuis - la porc; S. galinarum-pullorum - la psri).
95

-alte pot produce infecii la diferite specii de animale ( S. typhimurium, S. enteritidis i altele). Ca entiti clinice mai bine cunoscute sunt urmtoarele: - La om: febra tifoid i toxiinfeciile alimentare. - La animale: salmoneloza la viei, porc, animale de blan, avorturile la oi, vaci, iepe. - La psri: tifoza aviar, puloroza, paratifozele aviare (la porumbei, rae i gini). -infeciile salmonelice sunt caracterizate, n general, prin stri febrile, simptome digestive, respiratorii, articulare, avorturi i leziuni de enterit, hepatit necrotic, splenit hiperplastic. -la psri domin tulburrile de ouat, diareea, scderea procentului de ecloziune, leziunile de ovarit i enterit. Imunoprofilaxia. Salmonelele nu produc, n general, o imunitate satisfctoare. -n numeroase ri se aplic programe de vaccinare, utiliznd vaccinuri inactivate sau vaccinurii din tulpini vii atenuate. -vaccinurile pot fi numai antisalmonelice sau vaccinuri mixte, n amestec cu colibacili i pasteurele. -la noi n ar au ntrebuinare mai frecvent vaccinurile inactivate cu aceton, n prevenirea salmonelozei la viei, purcei, animale de blan, avortul salmonelic la oaie.

96

-se folosete vaccinul viu contra salmonelozei porcului (tulpina Sm/237 de S. choleraesuis) i contra salmonelozei psrilor (tulpina 9R de S. gallinarum).

97