DETERMINAREA PREZENŢEI ŞI NUMĂRULUI

DE STAFILOCOCI COAGULAZO-POZITIVI

Stafilococii sunt bacterii Gram-pozitive, de formă cocoidă, dispuşi în

ciorchine şi care se dezvoltă uşor pe medii uzuale şi hiperclorurate.

Stafilococii coagulazo-pozitivi, formează colonii tipice pe medii de cultură

selective şi produc coagulază.

Pentru controlul alimentelor, se acordă o importanţă deosebită stafilococilor

coagulazo-pozitivi, producerea de coagulază fiind luată ca un criteriu principal
pentru aprecierea enterotoxicităţii, deşi între producerea de coagulază şi
enterotoxină nu este o suprapunere totală. Capacitatea de determinare a
prezenţei enterotoxinei în produse sau în culturi, este destul de limitată din punct
de vedere tehnic şi de aceea se apreciază ca fiind enterotoxici, stafilococii care
produc coagulază.

Determinarea prezenţei stafilococilor în alimente se realizează pe seama

proprietăţilor lor de a se dezvolta în prezenţa unor concentraţii mari de clorură de
sodiu (7,5 – 15%), a unor substanţe inhibitoare pentru o parte din flora de
asociaţie (telurit, piruvat, glicocol) şi de a forma colonii caracteristice pe unele
medii selective.
Materiale necesare: plăci Petri, anse bacteriologice, pipete, eprubete, lame, bec
Bunsen, termostat, lame cu godeu, apă distilată.
Mediile de cultură selective de izolare şi identificare: agar hipersalin cu manită ca
indicator și mediul geloză – sânge.
Reactivi: plasmă citratată de om sau iepure, soluţie 10% de perhidrol.

Tehnica de lucru

1. Determinarea prezenţei şi numărului de stafilococi coagulazo-pozitivi cu

îmbogăţirea inoculului.
Din produsul pe care urmează să-l analizăm, realizăm soluţii decimale.
Din produsul omogenizat şi din fiecare diluţie, se însămânţează câte 1 ml în câte
o eprubetă care conţine unul din mediile de îmbogăţire. În produsele solide, în
cazul în care se verifică prezenţa stafilococilor coagulazo-pozitivi/gram de
produs, din prima diluţie (10 -1) se inoculează 10 ml într-o eprubetă cu 10 ml
bulion hipersalin dublu concentrat.
Se va proceda în această manieră când se raportează rezultatele ca
prezenţă sau absenţă de stafilococ la o anumită cantitate de produs (1, 0,1, 0,01
gram).
Din coloniile prezumtiv pozitive se fac frotiuri pe care se constată prezenţa
stafilococilor, iar apoi se fac treceri pe suprafaţa mediului de confirmare – geloză-
sânge, turnat în plăci Petri, prin striere cu ajutorul unei anse bacteriologice.
Plăcile care conţin mediile selective însămânţate, se incubează la 37 0C, timp de
24-48 de ore. Se citesc apoi plăcile şi din cele în care s-au dezvoltat colonii
caracteristice pentru stafilococ, două sau mai multe colonii se însămânţează în
câte o eprubetă de reacţie, care conţine 0,5 ml de bulion de creier şi cord sau
bulion nutritiv. Acestea vor fi incubate la 37 0C, timp de 18-24 de ore. Culturile vor
servi la studierea prezenţei coagulazei.
Pe mediul de cultură selectiv - Chapman, coloniile caracteristice pentru
stafilococ coagulazo pozitiv sunt rotunde, gălbui-aurii, convexe, cu diametrul de
1-2 mm, cu virarea mediului în galben, prin fermentarea manitei;

Pe mediul geloză-sânge coloniile sunt convexe cu o zonă de hemoliză totală – halou transparent
- în jurul lor.
 Obţinerea reacţiei pozitive pentru coagulază, la cel puţin o colonie din cele
pasate pe agarul selectiv însămânţat cu cultura dintr-o eprubetă cu mediu de
îmbogăţire, se consideră confirmare pentru stafilococ coagulazo-pozitiv pentru
eprubeta şi diluţia respectivă.

2. Determinarea prezenţei şi numărului de stafilococi coagulazo-pozitivi

prin însămânţarea inoculului direct pe mediile selective de izolare (fără
îmbogăţirea inocului)

Tehnica de lucru

Din macerat şi din diluţiile din produs se striază câte 0,1 ml pe suprafaţa
unui mediu selectiv, astfel încât să se obţină colonii izolate. Plăcile obţinute sunt
incubate la temperatură de 370C, timp de 24 de ore.
Sunt analizate plăcile pe care s-au dezvoltat un număr de 10 - 100 colonii
caracteristice. Se stabileşte astfel numărul prezumtiv de stafilococi coagulazo-
pozitivi/1 gram de produs. Se verifică 5 colonii din plăcile cu până la 50 de colonii
caracteristice şi 10 colonii din plăcile cu mai mult de 50 de colonii caracteristice.
Verificarea se concretizează prin examenul microscopic şi reacţia coagulazei.
Coloniile care la examenul microscopic nu se confirmă a fi formate din stafilococi,
nu mai sunt supuse testului coagulazei. Coloniile formate din stafilococi sunt
însămânţate în 0,5 ml bulion BHI sau bulion nutritiv. Pe baza numărului
prezumtiv de colonii de stafilococi coagulazo-pozitivi, se obţine numărul de
stafilococi coagulazo –pozitivi/1 gram sau mililitru de produs.
Această tehnică dă rezultate inferioare tehnicii în care inoculul este
îmbogăţit şi în care se crează condiţii optime pentru revivifierea celulelor latente.