Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Este activitatea fundamentala a fiecarei celule din organism Ea reprezinta expresia informatiei genetice din ADN si este un fenomen care se desfasoara intr-un singur sens: ADNARNproteine Datorita universalitatii sale, acest proces este cunoscut sub denumirea de dogma centrala a biologiei moleculare
Semantida primara - ADN-ul cromozomial are drept caracteristica dispunerea liniara a informatiei genetice detine informatia primara a genelor; Semantida secundara ARN-ul celular are rolul de mesager intre nucleu si citoplasma - copiaza informatia genetica din ADN, folosita apoi in citoplasma pentru ordonarea aminoacizilor din structura polipeptidului; Proteinele, formate din lanturi polipeptidice sunt considerate semantide tertiare; Molecule episemantice - Glucidele si lipidele se sintetizeaza sub controlul unor enzime specifice; ele ca produs final nu exprima in totalitate informatia obtinuta din primele trei tipuri de semantide.
CODUL GENETIC
Intelegerea fluxului de informatie genetica cere cunoasterea modului particular in care sunt codificate mesajele in structura ADN-ului cromozomial; Informatia genetica este inregistrata in moleculele acizilor nucleici sub forma unui cod genetic. Codul genetic este determinat de ordinea bazelor azotate in structura primara a ADN-ului. Orice informatie genetica este reprezentata conventional prin semne simboluri (A, G, C, T/U); Totalitatea semnelor conventionale care servesc la obtinerea unui mesaj genetic reprezinta alfabetul genetic;
CARACTERISTICILE CODULUI GENETIC Mesajele au punctuatie. Semnele de punctuatie sunt reprezentate de un codon start sau initiator AUG, care specifica metionina sau la bacterii formil-metionina si 3 codoni denumiti non-sens(UAA, UAG, UGA) care semnifica oprirea sintezei proteice. Codoni start alternativi pot fi GUG sau UUG; acestia in mod obisnuit reprezinta valina si leucina dar in prezenta unor factori initiatori ai translatiei sunt tradusi drept metionina si formilmetionina
Mesajele au punctuatie. Semnele de punctuatie sunt reprezentate de un codon start sau initiator AUG, care specifica metionina si 3 codoni denumiti non-sens(UAA, UAG, UGA) care semnifica oprirea sintezei proteice. Intre codoni nu exista semne de separare sau virgule. Citirea mesajului se face in flux continuu pana la codonul terminator. Intre codoni nu raman dezoxi-ribonucleotide izolate, neintegrate in componenta unui triplet functional. Codul genetic nu accepta suprapunere. Fiecare codon poseda bazele proprii, care nu participa in acelasi timp la structurarea altui codon.
Codul genetic este universal. Aceeiasi codoni codifica aceiasi aminoacizi la marea majoritate a genelor la animale, plante si micoorganisme, iar semnalele START si STOP sunt universale si ele. Exceptii de la universalitate ale codului genetic Acestea se refera mai ales la desemnarea unuia sau doi codoni terminatori drept codoni codificatori la nivelul: Genelor mitocondriale Aminoacizilor nestandardizati
CARACTERISTICILE CODULUI GENETIC Aminoacizi nestandardizati Marea majoritate a proteinelor este asamblata din cei 20 de aminoacizi, chiar daca unii pot fi alterati prin fosforilare uneori; Cu toate acestea, au fost identificate doua cazuri in care un aminoacid care nu face parte dintre cei douazeci este inserat printr-un ARNt in lantul polipeptidic: Selenocisteina(aa 21) Acest aminoacid este codificat prin UGA. UGA este utilizat si ca terminator al lantului, dar complexul ribozomal este capabil sa discearna cand trebuie folosit ca selenocisteina, respectiv secventa terminator. Aceasta utilizare diferita a codonului a fost semnalata la Archea, eubacteria. La om s-au evidentiat 25 de proteine diferite continand seleniu. Pirolisina(aa 22) La cateva specii de Archea si de bacterii acest aminoacid este codificat prin UAG, dar poate opri si sinteza lantului proteic.
CARACTERISTICILE CODULUI GENETIC Mutatii missense Anemia Sickle-cell: GAG se transforma in GTG in gena beta a hemoglobinei; APC: varianta missense GAC la GTC Cancer prostatic: mutatie missense GCC la ACC in gena steroid 5 alfa-reductaza Mutatii nonsens: -thalassemia (-globin gene) Boala McArdles glicogenoza prin mutatie nonsens in gena miofosforilazei Deletia: Fibroza chistica deletia UUU
Prin asamblarea ribonucleotidelor in structura ARN-m, respectandu-se principiul complementaritatii bazelor se reproduce fidel, in negativ, informatia genetica din segmentul cistronului de ADN. Transcriptia ARN-m are loc in 3 etape:
ARN polimeraza
Sinteza ARN implica existenta unei enzime Enzima capabila sa sintetizeze ARN se numeste ARNpolimeraza(ARNpol), mai exact ARNpolimeraza-AND-dependenta; ARN-P pentru a functiona necesita: 1.ADN dublu catenar 2.Cele 4 ribonucleozide5-trifosforilate NTP(ATP, GTP, CTP, UTP) 3.Mg2+.
Tipuri de ARN-polimeraze
Procariote Toate cele 3 tipuri de ARN sunt transcrise de aceeasi ARN-polimeraza Eucariote Fiecare tip de ARN este transcris de catre un tip diferit de ARN-polimeraza ARN-pol I(localizata n nucleol): ARNr 45 S ARN-poI II(localizata n nucleoplasma): ARNm, ARNsn ARN-pol III(localizata n nucleoplasma): ARNt si ARN 5S, ARNsn.
FAZA DE INITIERE A TRANSCRIPTIEI Incepe cu o secventa particulara de ADN denumita situs promotor, unde se ataseaza enzima ARN-polimerazaADN-dependenta, care initiaza transcriptia; ARN-polimeraza sintetizeaza acid nucleic in directia 5 la 3, iar citirea matritei de ADN se face in directia 3 la 5; La acest nivel se gaseste si o subunitate proteica denumita factor sigma, care are rolul de a mentine conformatia de dublu helix necesara recunoasterii situsului promotor; In momentul in care complexul ARN-polimeraza/factor sigma recunoaste corect promotorul, factorul sigma se disociaza de ARN polimeraza si enzima incepe sa despiralizeze helixul de ADN, formand o regiune de dezoxiribonucleotide neimperecheate, care serveste drept matrita pentru sinteza ARN-ului.
Initiation
Structura promotorului
Este alcatuit din regiunea de recunoastere situata in pozitia 35 pb fata de situsul initial de transcriptie(tss). Are structura TTGACA si la nivelul ei se ataseaza ARN polimeraza. Aceasta structura se refera la catena superioara care nu va fi transcrisa. Polimeraza paraseste secventa -35 si se deplaseaza in aval spre o alta regiune conservata. Aceasta este a doua secventa de consens(TATAAT) si este situata in pozitia -10 fata de tss. Este denumita PRIBNOW BOX(PB)
Distanta dintre PB si secventa -35 este de aproximativ 16-18b; PB este regiunea unde polimeraza se ataseaza ferm de ADN si se considera ca este pozitia in care helixul de ADN se deschide pentru a permite imperecherea de recunoastere intre matrita de ADN si ARNm; Atasarea ARN-polimerazei este conditionata de o serie de factori de transcriptie; Regiunea deschisa se intinde de la PB pana la cateva pozitii inaintea punctului +1(tss); Numai una dintre cele doua catene de ADN este folosita drept matrita, catena numita antisens(35); Se obisnuieste sa se descrie secventa genica de pe catena sens; Transcriptul de ARN(53) va fi complementar ca directie si structura( cu exceptia U care inlocuieste T) cu catena sens; Primul nucleotid al transcriptului de ARN este de obicei o purina(A sau G) situata la capatul 5; Aceasta inseamna ca pe catena antisens a secventei de ADN care va fi transcrisa se va gasi la capatul 3 o pirimidina(T sauC).
Faza de elongatie
In timp ce polimeraza se deplaseaza de-a lungul catenei antisens, pe lantul de ARN sunt adaugate resturi de ribonucleozid monofosfati(AMP, CMP, GMP, sau UMP) la capatul 3; Aceste nucleotide rezulta din clivarea precursorilor ribonucleozid trifosfati(ATP, CTP, GTP si UTP) de o molecula de pirofosfat(PPi); Aceasta inseamna ca la capatul 5 al transcriptului ARN se va gasi un nucleotid initiator diferit, cu un grup trifosfat la 5; Produsul transcriptiei este totdeauna un ARN(ARNt, ARNm, ARNsn); Pe masura ce lantul de ARN se elongheaza, enzima despiralizeaza ADN-ul, ataseaza ribonucleozidmonofosfati si elibereaza difosfatul;
Faza de elongatie
Faza de elongatie
Subunitatea sigma se detaseaza de pe restul enzimei dupa ce s-au format 6-10 legaturi fosfodiesterice de NTP si se poate atasa la un alt complex polimerazic; Regiunea deschisa a ADN-ului se extinde pe o portiune de aprox. 15pb, deoarece dublul helix de ADN se reface in spatele enzimei sub actiunea topoizomerazei; Fiecare transcript in crestere va avea un capat 3 liber la care se poate atasa capatul 5 al unui nou nucleotid
Faza de elongatie
TERMINATOR SEQUENCE
Transcriptia la eucariote
Diferita fata de procariote Eucariotele au 3 ARN-polimeraze diferite, in vreme ce procariotele au decat una Eucariotele nu sintetizeaza ARNm policistronic; ARNm eucariot este prelucrat inainte de a fi utilizat pentru sinteza proteinelor.
Transcriptia la eucariote
ARN polimeraza I (nucleol) ARNr 20S si ARNr 50S;); ARN polimeraza II sintetizeaza ARNm codificat in toate genele structurale si ARNsn; ARN polimeraza III - ARNt, ARNsn si ARNr 5S
Transcriptia la eucariote
Cele trei polimeraze nu sunt capabile sa recunoasca si sa se lege de secvente specifice din promotori; Ele au nevoie de factorii de transcriptie, de care depind in totalitate; FT sunt proteine care recunosc specific secventele promotorilor si initiaza transcriptia; Majoritatea promotorilor care interactioneaza cu ARN polimeraza II contin o secventa conservata numita caseta HOGNESS( TATA box).
Transcriptia la eucariote
Secventa TATA determina situsul exact pentru initierea transcriptiei, dar nu este singurul; Alte doua secvente sunt caseta CAAT si caseta GC. Acestea au rol in modificarea expresiei genice prin controlul transcriptiei; I.CAAT box are secventa de consens GGCCAATCT si este localizata in pozitia -80 in amonte fata de +1. Mutatiile in CAAT reduc nivelul transcriptiei de la promotor in aval; Mutatiile in TATA box reduc partial activitatea transcriptionala, dar altereaza major situsul initial de transcriptie.
Transcriptia la eucariote
II.GC box cuprinde 2 casete, fiecare cu secventa de consens GGGCGG; Una dintre casete este situata in amonte si cealalta in aval fata de caseta CAAT; TATA box si CG box interactioneaza cu cativa factori de transcriptie bine definiti; CAAT box este recunoscuta de diferite molecule proteice, unele dintre ele facilitand transcriptia; Secventele enhancer sunt situsuri de legare pentru o mare varietate de FT. Ele au rolul de a stimula rata transcriptiei.
Transcriptia la eucariote
TRANSCRIPTIA INFORMATIEI GENETICE PROCESAREA/MATURATIA ARN MESAGER Precoce in transcriptie este adaugat un nucleotid neobisnuit 7-metilguanilat la capatul 5 al ARN-pm, numit cap; Acesta are rolul de atasare a ribozomilor pentru translatie; In momentul in care transcriptia este aproape completa, la capatul 3 este atasata o serie de 100-250 nucleotide cu adenina, numita coada poli-A;
Elementele implicate in realizarea translatiei sunt: ARN-r ARN-t Aminoacizi Enzime Donatorii de energie
Elementele implicate in realizarea translatiei: ARN-t, aminoacizi In timpul translatiei ARN-t specifici fixeaza aminoacizii specifici, ii transfera pe ribozomi si ii insera intr-o pozitie specifica , in functie de mesajul din ARN-m;
Aminoacid activation
Polyribosome
Genele din operon sunt gene structurale-acestea codific sinteza diferitelor catena polipeptidice din care se formeaz proteinele.
Corepresor - modifica forma proteinei represor astfel incat ea sa se poata cupla cu operatorul si sa blocheze transcriptia Este produsul final al sintezei proteice
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN COREPRESOR Operonul represibil in absenta corepresorului (operon Trp)
Pasul 1: Gena reglatoare codifica o proteina represoare inactiva; Pasul 2: Proteina represor inactivata nu se poate lega de regiunea operator a operonului;
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN COREPRESOR Un operon represibil in absenta corepresorului (operon Trp)
Pasul 3: deoarece proteina represor inactiva nu este capabila sa se ataseze de regiunea operator, ARN polimeraza (enzima responsabila pentru transcrierea genei) este capabila acum sa se lege de regiunea promotor a operonului; Pasul 4: ARN polimeraza este capabila acum sa transcrie cele 5 gene ce codifica enzima in ARNm; Pasul 5: prin transcrierea acestor gene sunt sintetizate cele 5 enzime necesare bacteriei pentru sinteza aminoacidului triptofan.
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN COREPRESOR Un operon represibil in prezenta unui corepresor(operon Trp)
Pasul 1: Gena reglatoare codifica o proteina represor inactiva; Pasul 2: Daca corepresorul triptofan este prezent, el se leaga de proteina represor inactiva; Pasul 3: Legarea corepresorului produce activarea proteinei represor inactive; Pasul 4: Proteina represor activata se leaga apoi la regiunea operator a operonului;
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN COREPRESOR Un operon represibil in prezenta unui corepresor (operonul Trp)
Pasul 5: Odata cu legarea proteinei represor active la regiunea operatoare, ARN polimeraza (enzima responsabila pentru transcrierea genelor) nu mai este capabila sa se lege la regiunea promotoare a operonului; Pasul 6: Daca ARN polimeraza nu se mai leaga la regiunea promotoare, cele 5 gene enzimatice nu vor mai fi transcrise in ARNm; Pasul 7: In lipsa transcriptiei celor 5 gene, cele 5 enzime necesare pentru ca bacteria sa sintetizeze aminoacidul triptofan nu mai sunt sintetizate.
Inductor- altereaza forma proteinei reglatoare, blocheza cuplarea cu operatorul si permite transcriptia Este substanta care trebuie metabolizata
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN INDUCTOR Un operon inductibil in absenta inductorului (operonul lactoza) Pasul 1: Gena reglatoare codifica o proteina represor activa; Pasul 2: Proteina represor se leaga apoi la regiunea operator a operonului;
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN INDUCTOR Un operon inductibil in absenta inductorului (operonul Lac)
Pasul 3: ARN polimeraza nu se poate lega de regiunea promotor a operonului cind proteina represor activa este legata de regiunea operator; Pasul 4: Daca ARN polimeraza nu se leaga la regiunea promotor genele celor 3 enzime (Z, Y si A) nu sunt transcrise in ARNm; Pasul 5: In lipsa transcriptiei celor 3 gene enzimatice, cele 3 enzime necesare pentru utilizarea lactozei de catre bacterie nu sunt sintetizate.
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN INDUCTOR Un operon inductibil in prezenta inductorului (operonul
Lac)
Pasul 1: Gena reglatoare codifica o proteina represor activa; Pasul 2: Lactoza, molecula inductoare se leaga de proteina represor activa; Pasul 3: Legarea inductorului inactiveaza proteina represor;
Pasul 4: Proteina represor inactiva nu se mai poate lega la regiunea operatoare a operonului;
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE PRIN INDUCTOR Un operon inductibil in prezenta inductorului(operonul Lac)
Pasul 5: Deoarece proteina represor inactiva nu este capabila sa se lege la regiunea operatoare, ARN polimeraza va fi din nou capabila sa se lege la regiunea promotor a operonului;
Pasul 6: ARN polimeraza este acum capabila sa transcrie cele 3 gene enzimatice (Z, Y si A) in ARNm;
Pasul 7: Odata cu transcrierea acestor gene sunt sintetizate cele 3 enzime necesare bacteriei pentru a utiliza lactoza.
REGLAREA SINTEZEI PROTEICE B). CONTROLUL ACTIVITATII ENZIMATICE (Inhibitie prin feed-back)
Inhibitie non-competitiva;
Inhibitie competitiva.
Produsul final (inhibitor) al caii metabolice se leaga la situsul activ al primei enzime a caii;
Ca rezultat enzima nu se mai poate lega la substratul initiator al caii metabolice.
CONTROL TRANSCRIPTIONAL
CONTROL POSTTRANSCRIPTIONAL
CONTROL TRANSCRIPTIONAL
Punctul primar de control este reglarea sintezei ARN dintr-un ADN matrita. Toate celulele poseda secvente specifice de proteine reglatoare care actioneaza printr-un mecanism turn on sau off la nivel transcriptional; Proteinele care se atasaza de ADN poseda structuri specifice care se leaga la secvente specifice de ADN.
CONTROL POSTTRANSCRIPTIONAL
Sunt mecanisme secundare care controleaza expresia genica dupa transcriptie. Acestea cuprind: Controlul procesarii ARN; Controlul translational; Controlul degradarii mRNA; Controlul activitatii proteice;
II.Controlul translational
Se realizeaza prin urmatoarele mecanisme: Adaugarea secventei cap la extremitatea 5 a ARNm cu rolul de a-l proteja de actiunea 5 a exonucleazelor si de atasare a ribozomilor. Procesul de splicing Adaugarea cozii poli-A(poliadenilare) la capatul3 actioneaza protector impotriva exonucleazelor si stimuleaza viteza translatiei; Procesul de editare al ARNm este un mecanism evolutiv prin care se modifica structura ARNm in timpul procesului de maturare(modificari nucleozidice, deaminare, editare la virusuri)