Biofiz LP

UNIVERSITATEA "OVIDIUS" CONSTANA
FACULTATEA DE MEDICIN GENERALA

LUCRRI PRACTICE
BIOFIZIC MEDICAL

Teren Ovidiu
Petcu Lucian Cristian
Vasile Monica

-2009-
Ovidius University Press, 2009
2

Facultatea de Medicin
Disciplina Biofizic
Aleea Universitatii nr. 2
Constana
Romania

Tel/Fax: 0241-605000

Copyright2004
Toate drepturile sunt rezervate Editurii Universitii Constana
Ovidius University Press

Lucrri Practice de Biofizic Medical
3
PREFA

Cartea de Lucrri Practice de Biofizic Medical se adreseaz
studenilor Facultii de Medicin General din cadrul Universitii
Ovidius Constana.
Coninutul lucrrilor de laborator a fost adaptat cerinelor
programelor analitice ale facultii ct i la performana aparaturii
existente n dotarea laboratorului.
Tematica lucrrilor practice este n strns legtur cu
problemele teoretice predate la cursul de biofizic i este orientat
spre a dezvolta abilitile studentului de a utiliza aparatura de
laborator, a analiza i interpreta rezultatele obinute.
Lucrarea a fost astfel conceput nct s transmit att
cunotinele teoretice necesare pentru nelegerea lucrrilor
prezentate, ct i descrierea tehnicilor de lucru i a principiului de
funcionare a aparaturii ntlnite n mod curent n acest domeniu.
Sperm c n acest mod lucrarea va fi n acelai timp un
material de lucru ct i un material de documentare. Forma actual
a crii de lucrri practice a fost ntocmit de colectivul Disciplinei
de Biofizic, al Catedrei de Fiziologie Normal i Patologic din
cadrul Facultii de Medicin General, Constana.
Autorii
4
5

CUPRINS

Prelucrarea matematic a datelor experimentale 7
Microscopia de transmisie microscopia de reflexie 17
Tehnici speciale de microscopie 22
Cromatografie i electroforez 31
Sedimentare i centrifugare 42
Spectrofotometria de absorbie n UV-VIS 49
Poteniale de aciune 57
Fenomene de transport 65
Determinarea coeficientului de vscozitate a lichidelor 73
Determinarea coeficientului de tensiune superficial a lichidelor 79
Determinarea densitii lichidelor 86
Determinarea concentraiei unor soluii prin indice de refracie 91
Determinarea concentraiei substanelor optic active 98
Telecobaltoterapia 105
Bibliografie selectiv 122
6
7

Prelucrarea matematic a datelor experimentale

I. Noiuni teoretice
A. Indicatori de tendin central
Indicatorii de tendin central sunt valori ce localizeaz ntr-un
fel oarecare mijlocul setului de date. Dintre indicatorii de tendin
central menionm:
Modul - valoarea care apare cel mai frecvent.
Un set de date poate fi non-modal (dac toate valorile posibile au
aceeai frecven), mono-modal (o singur valoare maximal), multi-
modal (cu mai multe valori ce apar cu aceeai frcven maximal).
Mijlocul - media aritmetic a valorilor extreme ale setului de
date.
Mediana - valoarea ce mparte setul de date n dou grupe egal
populate.
Pentru setul de date S={X
1
,..., X
n
}, ordonat cresctor, cnd
n=2k+1 (numr impar de date), mediana este M
e
=X
k+1
. n cazul aceluiai
set dar pentru n=2k (numr par de date), mediana este:
2
X X
M
1 k k
e
+
+
=
Media - cele mai folosite sunt: media aritmetic (X
ma
),
geometric (X
G
), armonic (X
H
) i cuadratic (X
Q
). Se poate arta uor c
aceste medii se afl n relaia:
Q ma G H
X X X X s s s
8
B. Indicatori de poziie
Indicatorii de poziie sunt folosii pentru localizarea unui anumit
subgrup de date n relaie cu restul eantionului. Se numesc o-cuantile
acei indicatori ce mpart eantionul n pri egal populate. Cele mai
utilizate sunt: cvartila (qk), decila i percentila (pk), valori ce mpart
datele n pri coninnd o ptrime, o zecime, sau o sutime din elemente.
S considerm un set de date ordonat cresctor unde L este
valoarea cea mai mic din set iar H valoarea cea mai mare.

Percentila de ordinul pk este valoarea numeric pentru care k%
din date sunt mai mici dect pk iar (100-k)% sunt mai mari. Se observ
c p50 = q2.
C. Indicatori de mprtiere (dispersie)
Indicatorii de mprtiere descriu variabilitatea datelor. Datele
grupate strns au valori mici pentru indicatorii de dispersie, n timp ce
datele mprtiate au valori mari.
Principalii indicatori de mprtiere sunt: domeniul, variana,
deviaia i momentele.
Domeniul reprezint intervalul de valori al datelor.
A=[X
min
, X
max
]
Uneori se indic lrgimea domeniului (amplitudinea mprtierii):
9
Ax= X
max
- X
min

Toate deviaiile medii fa de un indicator de tendin central
(media aritmetic, geometric, cuadratic, armonic sau modul, mediana,
notate generic prin <x>) se definesc n acelai fel, ca medii ale diferenei
ntre valoarea msurat i indicatorul respectiv.
Mai general este momentul centrat de ordin q, m
q
(x) fa de
media x. n continuare vom analiza semnificaia i utilitatea unora dintre
momentele centrate:
- m
1
(x)=0, momentul centrat de ordinul 1, nu aduce nici o
informaie, ntruct ia valoarea zero oricare ar fi distribuia datelor; din
aceast cauz nu este folosit.
- m
2
(x) se numete varian (V); rdcina ptrat a varianei se
numete deviaie ptratic, notat cu o. Ambele mrimi arat
mprtierea datelor.
Orice rezultat experimental trebuie prezentat prin media
aritmetic deviaia. Intervalul (<x>-o, <x>+o) se numete interval de
ncredere sau confiden.
ntruct n biologie i medicin sunt n general puine date de
procesat, trebuie s se nlocuiasc variana V cu variana standard SV
i deviaia o
n
cu deviaie standard o
n-1
sau SD (se utilizeaz indicatorii
standard o
n-1
i SV cnd n<30, adic setul are mai puin de 30 de valori).
- m
3
(x) este numit nclinare sau oblicitate i se utilizeaz la
definirea coeficientului de asimetrie, ac (numit n englez skewness i
notat SKEW)
10
) x ( SKEW
m
ac
3
3
=
o
=
Funcie de valorile acestui coeficient exist trei tipuri de
distribuii: cu nclinare pozitiv, nul i negativ, aa cum reiese din
cazurile prezentate mai jos, unde Mo=modul, Me=mediana, <x>=media.

11
- m
4
(x) se numete exces i arat ct de aplatizat este distribuia.
Se folosete la definirea coeficientului de aplatizare sau boltire, t
(numit n englez kurtosis, notat prin KURT):
) x ( KURT 3
m
4
4
=
o
= t

II. Parte experimental
A. Determinarea intervalului de confiden
S presupunem c n urma unui experiment se obin n date
experimentale: x
1
, x
2
, ...., x
n
. Pentru acest set de date putem defini
urmtoarele valori:
- media aritmetic:
n
x ... x
X
n 1
med
+ +
=
- eroarea absolut:
med i i
X x = o
- deviaia standard: | |
2
n
2
1 1 n
...
1 n
1
o + + o
= o

Rezultatul determinrilor (R) n urma prelucrrilor statistice a
datelor, se prezint sub forma:
12
1 n med
X R

o =
Dup efectuarea acestor calcule, putem trage concluzia c
valoarea real X a mrimii ctuate se afl n intervalul:
) X , X ( I
1 n med 1 n med
o + o e
Acest interval se numete interval de confiden sau interval de
ncredere.
Problem: Pentru etalonarea unui colorimetru s-au realizat un
numr de n = 5 determinri, iar valorile transmisiei au fost urmtoarele:
50.2, 49.1, 49.6, 50.3, 48.9. S se calculeze rezultatul determinrilor (R)
i intervalul de confiden (I).
B. Reprezentarea grafic a datelor
Procesele fizice, chimice, biologice, etc., procese ce depind de
mai muli parametrii, pot fi reprezentate folosind un sistem de referin
format din dou drepte concurente n plan, sau trei drepte concurente n
spaiu, numite axe. Dac axele sunt perpendiculare cte dou, atunci
sistemul se numete rectangular.
Coordonatele (x
a,
y
a
) ale unui punct A ntr-un sitem rectangular
avnd originea O msoar proieciile segmentului OA pe ax.

Figura 1.1. Legtura dintre sistemul de referin rectangular i cel polar.
13

n practic se mai utilizeaz i sistemul de coordonate polare. n
acest caz coordonatele punctului A se definesc prin mrimile: r = OA
(raz polar) i unghiul dintre OA i axa OX. Aceast reprezentare se
utilizeaz n momentul cnd funcia reprezentat depinde de unghi.
Legtura ntre cele dou sisteme de coordonate este urmtoarea:
= cos r x , = sin r y
2 2
y x r + = ,
y
x
arctg =
Pentru ca reprezentarea grafic a datelor n coordonate
rectangulare s fie ct mai clar, se recomand s se in cont de
urmtoatele indicaii:
-asigurarea unei reprezentri grafice ct mai intuitive const n
alegerea scrii corespunztoare att pe scara absciselor ct i pe scara
ordonatelor (atunci cnd valorile variabilelor x sau y ncep de la un
numr oarecare, acest numr se recomand s fie reprezentat ct mai
aproape de originea axei respective).
-indicaiile de pe axele x i y trebuie s fie ct mai simple, adic
cu ct mai puine cifre (de regul indicaiile de pe axe nu trebuie s
conin numere cu mai mult de dou cifre; dac numerele sunt mai mari
trebuie indicat un factor de multiplicare la sfritul axei alturi de
unitile de msur).
-pe fiecare ax trebuie s se indice denumirea sau simbolul
mrimii reprezentate pe axa respectiv i n mod obligatoriu unitile de
msur.
14
S urmrim n continuare un exemplu simplu: presupunem c la
anumite intervale de timp msurm temperatura unui bolnav (datele
obinute se regsesc n tabelul de mai jos) i dorim s reprezentm grafic
acest proces: temperatura = f (timp).

Tabelul 1
Timp
(ore)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Temp.
(C
0
)
37,1 37,5 37,9 38 38,2 38,4 38,8 39 39,2 39,5

innd cont de precizrile de mai sus se traseaz graficul prin
puncte (dar far a le uni), avnd grij s reprezentm numai zona de
interes (figura 1.2).
36,5
37
37,5
38
38,5
39
39,5
40
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Timp (ore)
T
e
m
p
e
r
a
t
u
r
a

(
g
r
d

C
)

Figura 1.2. Reprezentarea grafic a datelor din tabelul 1.

Privind graficul de mai sus, ne putem pune urmtoarea ntrebare:
care este valoarea de temperatur a pacientului la un moment de timp la
care nu a fost fcut msurtoarea efectiv?
15
n aceast situaie suntem nevoii s determinm, pornind de la
datele noastre, curba ce se potrivete cel mai bine cu punctele experi-
mentale. n cazul graficului reprezentat n figura 1.2, putem presupune o
dependen de tip liniar: x a a y
1 0
+ = , unde coeficienii { }
1 0
a , a sunt
necunoscute.
Cea mai simpl variant de determinare a coeficienilor, o ofer
programul de calcul tabelar Microsoft Excel.
Dup introducerea datelor n foaia de lucru i trasarea graficului
se utilizeaz opiunea Insert Trendline. Din fereastra de dialog (figura
1.3) se alege de la grupul Type tipul de Trend dorit (n cazul nostru
liniar), iar de la grupul Options se selecteaz Display Equation on Chart.
Rezultatul este prezentat n figura 1.4.

Figura 1.3. Fereastra de dialog Format Trendline a programului Microsoft Excel.

Facem meniunea c utilizatorul este lsat s aleag, innd cont
de distribuia punctelor, tipul funciei cu care urmeaz s fie fcut
fittarea: liniar, logaritmic, exponenial, putere i polinomial (pn la
gradul 6).
16
y = 0,2521x + 36,973
36,5
37
37,5
38
38,5
39
39,5
40
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Timp (ore)
T
e
m
p
e
r
a
t
u
r
a

(
g
r
d

C
)

Figura 1.4. Determinarea coeficienilor a
0
i a
1
cu ajutorul programului Microsoft Excel.

Revenind la exemplul nostru, rezultatul este:
x 2521 . 0 973 . 36 y + =
Aa cum se poate vedea din graficul prezentat n figura 1.4,
punctele experimentale sunt apropiate de dreapa trasat. n cazul n care
exist puncte deprtate de drept, atunci n acea regiune putem avea o
alt dependena i este necesar reluarea procedeului cu alegerea unui
trend adecvat.
Problem: S se reprezinte grafic datele din tabelul de mai jos
y=f(x) i apoi utiliznd programul Microsoft Excel s se traseze curba
ce se potrivete cel mai bine cu punctele experimentale.
x 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
y 37.1 37.5 37.9 38.33 38.4 38.4 38.2 37.85 37.43 36.93
17

Microscopia de transmisie - Microscopia de reflexie

I. Noiuni teoretice
Microscopul reprezint un instrument optic alctuit dintr-un
ansamblu de dioptrii (sferici) i centrai ce are rolul de a forma imagini
mult mrite ale unor obiecte de dimensiuni mici.
Microscopul este alctuit din :
- sistemul mecanic
- sistemul electric
- sistemul optic

Figura 2.1. Schema microscopului de transmisie i de reflexie (sistemul optic).

Microscopia de transmisie: se folosete pentru preparate ce nu
au grosimi mai mari de un micron i prezint un contrast bun.
18
Microscopia de reflexie: se folosete pentru preparate ce nu
permit o transmisie eficient a luminii. Obiectivul poate juca rol de
condensor sau poate exista un condensor special dispus coaxial cu
obiectivul.
Sistemul mecanic (principalele elemente componente):
-msua microscopului prevzut cu doi cavaleri (sau clrei) ce
asigur fixarea preparatului pe msu.
-uruburi de punere la punct a imaginii (macroviza pentru
acordul brut i microviza pentru acordul fin).
-uruburi de centrare a componentelor optice pe acelai ax.
-revolverul cu obiective i diafragmele (fante circulare cu
diametrul variabil ce au rolul de a modifica fluxul de lumin pe preparat).
Sistemul optic (principalele elemente componente):
-condensorul focalizeaz razele de lumin ce vin de la surs, pe
preparat.
-obiectivul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce
formeaz o imagine real, mrit i rsturnat.
-ocularul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce
formeaz o imagine virtual, mrit i dreapt.
Sistemul electric (principalele elemente componente):
-sursa de tensiune.
-aparate de msur.
Mrimi caracteristice microscopului:
- mrirea transversal:
1
2
y
y
= |
19
unde: y
2
= dimensiunea imaginii (perpendicular pe axa optic)
y
1
= dimensiunea obiectului (perpendicular pe axul optic)
- grosismentul:
oc ob
1
2
G G
tg
tg
G =
o
o
=
unde:
2
= unghiul sub care se vede obiectul privit prin microscop,
1
= unghiul sub care se vede obiectul atunci cnd este privit cu
ochiul liber i situat la distana optim de citire (0.25m pentru un
ochi normal),
G
ob
= grosismentul obiectivului, G
oc
= grosismentul ocularului.
- puterea separatore:
o
=
c
=
22 , 1
sin n 2 1
P
unde: = distana dintre dou puncte ale obiectului care pot fi separate,
n = indicele de refracie dintre preparat i obiectiv,
= lungimea de und a radiaiei utilizate,
= unghiul dintre axa optic i razele cele mai deprtate de ax
care mai ptrund n obiectiv.

Figura 2.2. Reprezentare schematic a elementelor prezentate mai sus.

20
A. Determinarea diametrului eritrocitelor
Materiale necesare:
- preparat
- microscop
- micrometru ocular
Mod de lucru: se aeaz preparatul pe msua microscopului i se
pune la punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se
localizeaz apoi o celul (eritrocit) i se determin diametrul n diviziuni
(figura 2.3).
.
Figura 2.3. Eritrocitele vzute la microscop prin micrometrul ocular.

Diametrul n microni se calculeaz cu ajutorul formulei:
100
G
1
ob
div m
| = |
, unde ( 40 G
ob
= )
Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.
No.
|
div
|
m
|
med
o o
n-1

1
....

S se determine intervalul de confiden i s se compare
rezultatul obinut cu intervalul fiziologic admis n literatura de
specialitate pentru hematii.
21
B. Determinarea grosismentului obiectivului
Materiale necesare:
- microscop
- micrometru obiectiv
- micrometru ocular
Mod de lucru: se aeaz micrometrul obiectiv pe msua
microscopului i se pune la punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu
micrometul ocular. Se aliniaz cele doua scale la stnga i se caut
diviziuni ce coincid att pe scala micrometrului obiectiv ct i pe cea a
ocularului (figura 2.4).

Figura 2.4. Determinarea grosismentului obiectivului (n = numrul de diviziuni
pe micrometrul ocular, m = numrul de diviziuni pe micrometrul obiectiv).

Grosismentului obiectivului se calculeaz cu ajutorul formulei:
10
m
n
g
ob
=
Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.
No. n m g
ob
g
med

o
n-1

1
......

S se determine intervalul de confiden.
22

Tehnici speciale de microscopie

Aceast lucrare urmrete studierea metodelor de observare a
preparatelor ce nu pot fi vizualizate cu ajutorul microscopului n
transmisie sau n reflexie.

I. Noiuni teoretice
Metodele clasice de microscopie nu pot pune n eviden detaliile
preparatelor atunci cnd acestea au dimensiuni foarte mici (sub 1 m) sau
nu prezint un contrast bun (detaliile au aceeai culoare ca i restul
preparatului). n aceast situaie, la dispoziia observatorului stau
metodele de colorare a preparatului sau tehnicile speciale de microscopie.
Tehnicile de colorare (ce se vor studia n cadrul disciplinei de
Histologie) prezint n anumite situaii cteva dezavantaje: necesit o
cantitate mare de timp, manopera i substane chimice; nu pot fi
observate celule sau organisme vii; imaginea obinut difer mai mult sau
mai puin de structura real.
Pentru nlturarea acestor deficiene pot fi utilizate tehnicile
speciale de microscopie. Dintre acestea amintim:
- Microscopia de imersie
- Microscopia n ultraviolet (UV)
- Microscopia de cmp ntunecat
- Microscopia de polarizare
- Microscopia de fluorescen
23
- Microscopia de contrast de faz
- Microscopia electronic

1. Microscopia de imersie
Cele dou tehnici de microscopie prezentate (transmisie i
reflexie) nu permit o mrire mai mare de 1000 de ori deoarece apare
fenomenul de difracie a luminii pe detaliile preparatului.
Pentru a permite observarea unor detalii mai fine una din soluii
este introducerea ntre obiect i obiectiv a unui lichid omogen,
transparent i izotrop cu indice de refracie ct mai mare, numit lichid de
imersie. De obicei, se utilizeaz ulei de cedru (n=1.3-1.5) sau compui
sintetici (n=1.3-1.6). n acest mod se poate crete mrirea pn la cca.
2000 de ori fr s apar fenomenul de difracie. Un alt avantaj al
folosirii imersiei este mrirea luminozitatii imaginii:

= h
1 n
)
d
h 2
1 (
E
E
2
0

unde:
E - iluminarea imaginii cu lichid de imersie
E
0
- iluminarea imaginii n absena lichidului
h - distana obiectiv-obiect
d - diametrul obiectivului
n - indicele de refracie al lichidului de imersie
E=(1.2-4)E
0

n cazul utilizrii tehnicii de imersie este necesar ca preparatul s
fie acoperit cu o lamel pentru ca lichidul de imersie s nu modifice
24
structura acestuia. De asemenea, se utilizeaz obiective speciale (de
imersie) ce sunt inscripionate Apo caracterizate prin distan focal
mic, avnd totodat posibilitatea de a culisa, n scopul evitrii
contactului brutal dintre obiectiv i lamel.
Au fost studiate aproape toate tipurile de bacterii. Performanele
microscoapelor cu lumin vizibil merg pana la mrimi de ordinul 2000-
3000 de ori (c=0.25m).

2. Microscopia de ultraviolet
O alt modalitate de a crete puterea separatoare este micorarea
lungimii de und a radiaiei folosite pn n domeniul ultraviolet UV
(6 10
-10
, 3.810
-7
)m. n acest mod s-au putut distinge obiecte de
dimensiuni de 0,15m, atingndu-se o mrire de 6000-7000 de ori.
n cazul folosirii radiaiei UV este necesar ca toate componentele
optice ale microscopului s fie realizate din cuartz deoarece sticla
comun este opac la acest tip de radiaii.
Imaginea final va fi obinut pe un ecran de proiecie acoperit
cu o substana fluorescent. n cazul folosirii radiaiei UV este obligatorie
folosirea ochelarilor i a ecranelor de protecie deoarece retina este foarte
sensibil n acest domeniu de lungimi de und.

3. Microscopia de cmp ntunecat
Tehnica de cmp ntunecat este utilizat pentru observarea
preparatelor transparente i se bazeaz pe mprtierea luminii pe
detaliile preparatului. Orice neomogenitate din preparat va determina o
modificare a direciei razelor de lumin. Din punct de vedere constructiv
25
se utilizeaz un condensor special alctuit dintr-o oglind concav i una
convex (figura 3.1) astfel nct doar razele de lumina mprtiate pe
neomogenitile preparatului s ajung n obiectiv.

Figura 3.1. Microscopia de cmp ntunecat.

Condensoarele de cmp ntunecat ofer nclinri diferite razelor
de lumina trimise spre preparat. Cnd se dorete observarea detaliilor
foarte fine, se folosesc condensoare ce produc nclinri mari fascicolului
incident, fiind necesar n acelai timp mrirea intensitii luminoase,
deoarece fluxul de lumin ce ptrunde n obiectiv este foarte mic. Ataate
la microscop, condensoarele de cmp ntunecat trebuiesc centrate foarte
bine pe axul optic al microscopului, n caz contrar obinndu-se imagini
cu umbre.

4. Microscopia de polarizare
Microscopia de polarizare se utilizeaz n evidenierea i
observarea substanelor optic active ce se gsesc n preparat. Substanele
optic active au proprietatea de a roti planul luminii polarizate.
26

Figura 3.2. Microscopia de polarizare.

Pentru utilizarea acestei tehnici este necesar s se ataeze la
microscop un polarizor i un analizor, ambele confecionate din Spat de
Islanda, ce au proprietatea de a lsa s treac doar razele de lumin ce au
un anumit unghi de polarizare.
Aceasta tehnic se utilizeaz att n microscopia de transmisie
ct i n microscopia de reflexie. n cazul montrii corecte a polarizorului
i a analizorului doar razele de lumina ce strbat zonele din preparat ce
conin substane optic active vor ajunge la observator.

5. Microscopia de fluorescen
Fluorescena este proprietatea anumitor substane de a emite
lumin (radiaie vizibil) atunci cnd sunt excitate cu radiaie UV.
Deoarece multe substane de interes medical prezint fluorescen (acizi
nucleici, proteine) aceast tehnic este foarte utilizat n practica de
laborator i de cercetare medical.
Fiecare substan ce prezint fluorescen este caracterizat de o
lungime de und de excitaie (n UV) i de o lungime de und de emisie
27
(n vizibil), astfel nct tehnica poate nu doar pune n evident dar i
identifica substanele respective. n acest scop, se utilizeaz filtre optice
i de UV pentru selectarea radiaiei de excitaie i de emisie a substanei
ce urmeaz a fi observat. Filtrele se dispun ca n figura 3.3.

Figura 3.3. Microscopia de fluorescen.

n cadrul acestei tehnici, pentru observarea substanelor ce nu
prezint fluorescen n mod direct, se utilizeaz markeri de fluore-
scen, substane ce au urmtoarele proprieti:
- fluorescen intrinsec
- aditivitate foarte mare
- deterioreaz minim structura (substana) de care se fixeaz
Cele mai utilizate sunt substanele din clasa flavinelor.

6. Microscopia de contrast de faz
Este o tehnic ce se utilizeaz n special pentru observarea
celulelor i organismelor vii atunci cnd tehnicile de colorare nu pot fi
folosite. Metoda pune n eviden diferena de drum optic pe care o face
28
lumina trecnd prin diferite zone ale preparatului (reamintim c drumul
optic este produsul dintre drumul geometric i indicele de refracie al
mediului pe care l parcurge raza de lumin).
Deci aceast tehnic pune n eviden att diferene de grosime
ntre diferitele zone ale preparatului ct i diferene de indice de refracie
ntre acestea. Sunt utilizate obiective speciale (inscripionate Cf) care au
dispuse n planul focal o placa de faz, ce defazeaz lumina cu o
semilungime de unda (n + se numete contrast de faz pozitiv sau n
contrast de faz negativ), i un inel parial absorbant.
De asemenea, condensorul prezint o fanta inelar ce este
specific fiecrui obiectiv folosit. Pentru punerea la punct a micros-
copului este necesar un ocular special cu ajutorul cruia se pot observa
simultan att inelul parial absorbant ct i fanta inelar n scopul
suprapunerii acestor dou imagini.

Materiale necesare:
1. Microscop de cercetare MC9
2. Microscop Biorom
3. Condensoare de cmp ntunecat
4. Polarizor, analizor
5. Obiective de imersie
6. Obiective de contrast de faz
7. Lame cu diferite preparate
29
Modul de lucru:
A. Observarea nucleilor celulelor
-se aeaz lama cu preparat pe masua microscopului i se
fixeaz cu ajutorul clreilor;
-se aduce pe axul optic obiectivul x40 (sau x25) i se localizeaz
zona cu preparat;
-se coboar msua microscopului fr a deplasa preparatul;
-se aduce pe axul optic obiectivul Apo xl00;
-se aplic o pictur de lichid de imersie pe preparat (n dreptul
obiectivului);
-cu foarte mare atenie se coboar obiectivul pna ce se imer-
seaz n lichid;
-privind prin ocular se pune la punct imaginea.

B. Determinarea depozitelor glucidice
-se monteaz la microscopul MC9 polarizorul i analizorul;
-se fixeaz preparatul pe msu;
-se pune la punct imaginea;
-se deplaseaz n plan orizontal preparatul pe msu pn cnd
se gsete o zona liber;
-se rotete ncet polarizorul pn n momentul n care imaginea
este maxim de ntunecat;
-se aduce din nou preparatul n cmpul vizual; zonele luminoase
reprezint zonele n care se gsesc substane optic active.
30
C. Determinarea ncrcturii biologice a apei
-se monteaz la microscopul Biorom condensorul i obiectivele
de contrast de faz;
-se nlocuiete un ocular cu ocularul de punere la punct;
-din uruburile de punere la punct se centreaz sistemul astfel
nct inelul parial absorbant din obiectiv s corespund cu fanta inelar a
condensorului;
-se monteaz din nou ocularul microscopului;
-pe o lam curat se pune o pictur de ap sttut (24h);
-se fixeaz lama la microscop i se caut observarea germenilor
existeni n ap att prin tehnica de microscopie clasic ct i prin cea de
contrast de faz.
31

Cromatografia si electroforeza

I. Noiuni teoretice
1. Cromatografia
Cromatografia reprezint o tehnic de separare a componentelor
unui amestec, ntre dou faze: una mobil i alta staionar, ca urmare a
deplasrii fazei mobile de-a lungul celei staionare i a antrenrii compo-
nentelor amestecului n micare, cu viteze diferite, ocupnd astfel poziii
diferite de-a lungul fazei staionare. n acest mod componentele sunt
separate i apoi identificate.
n funcie de natura fazelor se disting urmtoarele tipuri de
cromatografie:
Faza mobila Faza staionara Denumire
lichid lichid lichid - lichid (LL)
lichid solid lichid - solid (LS)
gaz solid gaz - solid (GS)
gaz lichid gaz - lichid (GL)

Metodele de separare cromatografice se mpart n:
- metode bazate pe afinitatea diferit a componenilor (repartiie
de faz, adsorbie, absorbie, schimb ionic, afinitate);
- metode bazate pe mrimea diferit a componenilor (excluziune
sferic).
Din punct de vedere practic cele mai utilizate metode de
cromatografie sunt: cromatografia pe coloan, cromatografia pe hrtie,
cromatografia n strat subire, gaz cromatografia.
32
Cromatografia pe coloan Coloanele cromatografice sunt
confecionate din sticl. Pentru o bun rezoluie se folosesc coloane lungi
dar n condiiile n care se dorete separarea unei cantiti mari de
substane se folosesc coloane cu un diametru mai mare.
n interiorul coloanei se introduce faza staionar ce trebuie, ntr-
o prim etap, echilibrat cu solventul de lucru.
Amestecul ce urmeaz a fi separat se pipeteaz n partea
superioara a tubului.
Se conecteaz rezervorul cu solvent (faza mobil) la coloan i se
ateapt pn ce are loc separarea.
Datorit deplasrii fazei mobile de-a lungul celei staionare are
loc antrenarea componentelor din amestec ntr-o micare descendent, n
lungul coloanei astfel nct n timp vor ocupa poziii diferite. Fraciile
sunt colectate n tuburi i apoi analizate.

Figura 4.1. Cromatografie pe coloan.

33
Cromatografia pe hrtie - reprezint una din cele mai simple
metode de analiz. n aceast metod faza fix este reprezentat de o
suprafa de hrtie special sau hrtie de filtru, iar faza mobil (eluentul)
de un lichid ce se deplaseaz de-a lungul fazei fixe datorit forelor de
adeziune i forelor gravitaionale. Se mparte n: cromatografie pe hrtie
vertical (ascendent sau descendent) i orizontal (Pfeiffer). n figura
4.2 se poate urmri diferena dintre aceste metode.

Figura 4.2. Cromatografie pe hrtie vertical ascendent i descendent

Identificarea compuilor izolai n timpul cromatografiei se face
fie cu ajutorul spoturilor martor, fie calculnd timpul de reinere al
fiecrui component separat (R
j
), definit ca raportul dintre distana fa de
linia de start pe care a migrat componentul respectiv (notat cu X
j
) i
distana pe care a migrat eluentul (notat cu Y):
Y
X
R
j
j
=
Timpul de reinere depinde de: natura fazei fixe, natura fazei
mobile, natura substanei, temperatur; se gsete tabelat pentru diferite
substraturi, elueni i substane, de regul pentru temperaturi de 20
0
C.

34
2. Electroforeza
Reprezint metoda de separare bazat pe migrarea sub influena
cmpului electric a substanelor ncrcate cu sarcin electric.
Eletroforeza poate fi folosit att n scop analitic (separarea
componenilor i dozarea lor), preparativ (obinerea unor componeni n
stare pur) dar i ca metod de studiu a proprietilor superficiale ale unor
celule sau organite celulare.
O particul ncrcata electric, cnd este dizolvat sau suspendat
ntr-un mediu lichid, sub influena unui cmp electric uniform, atinge o
vitez constant de migrare. Speciile ncrcate pozitiv se vor ndrepta
ctre catod, iar speciile ncrcate negativ ctre anod. Viteza de migrare a
ambelor specii va fi determinat de forele care acioneaz asupra lor.
Aceste forte sunt:
- fora de atracie electroforetic: E Q F
1
=
- fora de frecare Stokes: v r 6 F
2
q t =
- fora de frnare electroforetic: ( ) E r Q F
3
c =
- fora
4
F datorata efectului de relaxare
Imediat dup aplicarea cmpului electric, suma vectorial a
acestor patru forte este egal cu zero i viteza electroforetic devine
constant (figura 4.3). Neglijnd efectul de relaxare i innd cont de
direciile celor trei forte se obine viteza electroforetic:
q t
c
=
6
E
v
unde: - = permitivitatea absolut a mediului
- = potenialul electrocinetic
35
- E = intensitatea cmpului electric
- = coeficientul de vscozitate
Mobilitatea electroforetic se definete ca raportul dintre vitez i
intensitatea cmpului electric:
E
v
=
Datorit ncrcrii electrice nete de la suprafaa particulelor
biologice, n acest regiune se organizeaz, se structureaz, un strat
dublu electric alctuit dintr-o zon compact de grosime (a) i una difuz,
n care pentru simplitate, suprafaa de demarcare a particulei fa de
mediu este considerat plan (figura 4.3).
Cnd particula este pus n micare de ctre cmpul electric
aplicat, aceasta antreneaz o dat cu ea un strat de lichid mai gros dect
cel compact, notat cu (b). Planul care se afl la distana b>a de particul
se numete plan hidrodinamic de alunecare, iar potenialul n acest plan
se numete potenial electrocinetic (). Valoarea potenialului electro-
cinetic se poate determina indirect pe baza msurrii mobilittii
electroforetice a particulei n cmp electric.

Figura 4.3. Forele ce acioneaz asupra unei particule ncrcate cu sarcin electric
suspendat ntr-un mediu lichid. Distribuia ionilor n stratul dublu electric de la suprafaa
unei particule scufundate ntr-un electrolit.
36
Metoda microscopic de electroforez - acest metod este
singura tehnic disponibil pentru determinarea vitezei electroforetice a
particulelor mari, cum ar fi celulele sanguine, microorganisme, particule
coloidale, etc. Se bazeaz pe observarea direct, la microscop a migrrii
particulelor suspendate ntr-o soluie tampon adecvat ca urmare a
aplicrii unui cmp electric creat de un curent continuu.
Pentru aceast tehnic este necesar o celul electroforetic
(figura 4.4), prevzut cu doi electrozi, un sistem de umplere i golire, ce
se poate introduce n cmpul unui microscop. Celula poate fi plan sau
cilindric (capilar).

Figura 4.4. Electroforeza microscopic: cuva electroforetic folosit i imaginea
observat la microscop prevzut cu micrometru ocular.

Electroforeza la joas tensiune Este o metod ce permite
separarea proteinelor plasmatice. Dispozitivul experimental folosit este
prezentat n figura 4.5.
Ca suport al electrolitului (al soluiei tampon) se folosete att
hrtie special pentru electroforez (de tip Whatman) ct i membrane de
celuloz. Dintre avantajele utilizrii membranelor de celuloz amintim, n
primul rnd: rezoluia mult mai bun i un timp de migrare mai mic.

37

Figura 4.5. Electroforeza la joas tensiune dispozitiv experimental.

Dup separarea proteinelor urmeaz un procedeu de fixare i
colorare. n primul rnd, mediul suport este fixat prin introducere n
etanol, metanol sau acid, ori prin nclzire fcnd astfel proteinele
insolubile.
Benzile sunt colorate cu ajutorul unor colorani specifici
proteinelor (albastru de brom fenol), se spal n mai multe bi cu acid
acetic 2% i sunt trecute prin vapori de amoniac pentru regenerarea
colorantului (figura 4.6).

Figura 4.6. Electroforeza mediul suport dup procedeele de fixare i colorare.

Dup aceste procedee benzile sunt scanate cu ajutorul unor
densitometre prin reflexie, transmisie sau combinate, ce permit trasarea
spectrelor caracteristice probelor oferind totodat cantitatea n g/100ml.
38
Electroforeza pe un mediu suport acetat de celuloz a serului
uman este prezentat n figura 4.7.

Figura 4.7. Electroforeza pe un mediu suport acetat de celuloz a serului uman.

Este cunoscut faptul c scderea albuminelor survine de regul n
toate disproteinemiile, fiind ns mai accentuat n cazul unui deficit n
aportul de proteine, n deficitul de sintez (ciroz hepatic), sau n
pierderi de proteine (sindrom nefrotic, arsuri).
Creterea
1
,
2
globulinelor se nsoete de regul de o cretere
a fibrinogenului i a glicoproteinelor i de o accelerare a VSH-ului. O
cretere marcat a
2
globulinelor se ntlnete n sindromul nefrotic.
Modificrile globulinelor au o importan mai redus, dar
creterea globulinelor indic prezena unor inflamaii cronice, sau
sugereaz o proliferare reactiv sau tumoral a imunocitelor productoare
de imunoglobuline. Scderea globulinelor survine n sindromul
nefrotic, malnutriie.
Toate aceste modificri au ca rezultat forme diferite ale spectrlor
electroforegramelor analizate (figura 4.8).

39

Figura 4.8. Tipuri de disproteinemie: (A) Inflamaie acut, (B) Inflamaie cronic, (C)
Sindrom nefrotic, (D) Enteropatie exudativ, (E) Ciroz hepatic, (F) Mielom multiplu,
(G) Hipogamaglobulinemie.

Focalizarea izoelectrica (electrofocusing) - reprezint o metod
de separare a particulelor cu puncte izoelectrice diferite ntr-un gradient
de pH sub aciunea unui cmp electric omogen.
Punctul izoelectric al unei particule (sau molecule) corespunde
valorii pH-ului la care sarcina electrica net este nul.
Dispozitivele de electrofocusing folosesc o coloana n care se
realizeaz un gradient natural de pH prin utilizarea unor amfolii
transportori cu urmtoarele proprieti: bun capacitate de tamponare i
bun conductivitate la punctul izoelectric, mas molecular mic,
solubilitate bun la punctul izoelectric, absorbie mic a luminii peste
260nm, nu reacioneaz chimic cu componenii amestecului ce urmeaz a
fi descompus.
Cei mai utilizai sunt acizii poliaminopolicarboxilici avnd masa
molecular ntre 300-1000D i puncte izoelectrice situate n domeniul de
pH=3-10.
40

A. Separarea clorofilelor prin cromatografie pe hrtie
Materiale necesare: hrtie de cromatografie, vas de croma-
tografie, micropipete, benzen, eter etilic, ciclohexan, alcooletilic 98%,
ap distilat, stativ, mojar.
Mod de lucru: Se mojareaz cteva frunze ntr-o soluie de 80%
alcool etilic i 20% ap dup care se las ntr-un loc ntunecat 30 min. Se
traseaz foarte fin cu creionul linia de start pe hrtie i cu ajutorul unei
micropipete se pun spoturile de substana (o cantitate de 0.1-1l avnd
grij ca aceasta s nu se ntind).
Se pregtete ntr-un pahar Berzelius eluentul format din 50%
eter etilic, 40% ciclohexan, 8% benzen i 2% ap, se agit bine i apoi se
toarn n vasul de cromatografie astfel nct s acopere fundul vasului cu
cel mult 2-3mm.
Se introduce hrtia de cromatografie fixat n stativ 1mm n
lichid. Se acoper vasul i se ateapt 45min dup care se trece la
identificarea componentelor i la calculul timpilor de reinere pentru
fiecare component.

B. Determinarea vitezei electroforetice a eritrocitelor
Materiale necesare: cuv de electroforez, microscop Biorom,
suspensie de eritrocite, surs de tensiune, soluie izotonic, micrometru
ocular, cronometru.
Mod de lucru: Se conecteaz cuva de electroforeza la microscop
i se umple cu soluie izotonic dup care se ateapt 1-5min pn
41
eritrocitele difuzeaz n toat cuva. Se pune la punct imaginea astfel nct
s se observe cu micrometrul ocular o hematie. Se conecteaz sursa de
tensiune i se msoar timpul (t) n care o celul se deplaseaz ntre dou
repere ale micrometrului ocular (d). Datele se trec n tabelul de mai jos.

No. t(s)
v (m/s) v
med
(m/s) o
n-1
1
....

Figura 4.9. Imaginea observat prin micrometrul ocular
(dup aplicarea cmpului electric hematiile se afl n miscare cu vitez v)

Deoarece distana (d) vzut pe micrometrul ocular i parcurs
de celulele n micare este n diviziuni, trebuie ca aceasta s fie
transformat n microni (m) pentru a putea fi calculat valoarea vitezei
de deplasare.
100
g
1
d D
ob
= m
t
D
v =
s
m

S se calculeze intervalul de confiden i s se compare valorile
obinute cu cele din literatur.
) v , v ( v
1 n med 1 n med
o + o e
s
m

42

Sedimentarea si centrifugarea

I. Noiuni teoretice
1. Sedimentarea
Sedimentarea - Este o tehnic de separare ce se bazeaz pe
diferena de densitate dintre componentele amestecului. n practica
medical se utilizeaz nu numai ca tehnic de separare dar i ca o metoda de
analiz (VSH - viteza de sedimentare a sngelui).
Pentru o nelegere mai bun a procesului se poate modela
comportarea unei hematii n cmp gravitaional.
S consideram o suspensie de particule sferice de raz R i
densitate aflate ntr-un lichid de densitate
0
(<
0
). Asupra particulelor
acioneaz urmtoarele forte:
- fora de greutate: g R
3
4
g m G
3
t = =
- fora Arhimedic: g R
3
4
g m F
0
3
0 A
t = =
- fora de frecare cu moleculele lichidului - fora de vscozitate;
pentru particule sferice i viteze mici de deplasare, fora de vscozitate
este dat de legea lui Stokes: v R 6 F
V
q t =
unde: v este viteza, q coeficientul de vscozitate iar R raza particulei.
La echilibru dinamic rezultanta acestor fore este nul i particula
coboar cu vitez constant (figura 5.1).

43

Figura 5.1. Forele ce acioneaz asupra unei particule
de raz R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate
0
( >
0
).

v R 6 g R
3
4
g R
3
4
0
3 3
q t + t = t
( )
1
0
2
g R
9
2
v

q = (1)
Considernd
t
L
v = unde L este spaiul parcurs n micare
rectilinie i uniform iar t timpul de sedimentare, obinem:
( )
1
0
1 2
g R L
2
9
t

q =
Dup cum se constat din relaia (1) viteza de sedimentare
depinde att de mrimea particulelor (R) ct i de interaciunea acestora
cu lichidul n care se afl, prin coeficientul de vscozitate q.
Sedimentarea poate fi deci folosit nu numai ca tehnic de
separare a unor particule de interes dar i ca metod de cercetare n
vederea obinerii unor informaii legate de aceste particule.
De mare importan clinic este determinarea vitezei de
sedimentare a eritrocitelor. n tabelul urmtor sunt prezentate valorile
normale obinute prin metoda Westergreen.
44

Subiect 1 ora 2 ore
barbat 2 - 8 mm 5 - 18 mm
femeie 4 - 10 mm 6 - 20 mm
nou - nascut 1 - 2 mm -
sugar 5 - 10 mm -
copil mic 7 - 12 mm -

2. Centrifugarea
Centrifugarea - reprezint o tehnic de separare a componentelor
unui amestec cu densiti diferite sub influena unui cmp centrifugal.
Deoarece viteza de sedimentare pentru particule de mrimea
hematiilor, sau mai mici, este deosebit de sczut, este necesar o metod
care s creasc fora activ (greutatea n cazul sedimentarii). Astfel, n
cazul centrifugrii, rolul forei de greutate l joac fora centrifug.

Figura 5.2. Forele ce acioneaz asupra unei particule
de raza R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate
0
( >
0
).

x R
3
16
a m F
2 3 3
c cf
v t = =
Neglijnd fora de greutate i considernd c migrarea duce la
creterea razei traiectoriei circulare, avem urmtoarele relaii:
cf v a
F F F = +
45
dt
dx
R 6 F
v
q t =
x R
3
16
F
0
2 3 3
a
v t =
( )
x
dx
R
8
9
dt
1
0
2 2 2
v t q =

Prin integrare obinem timpul necesar separrii:
( )
i
f
1
0
2
c
x
x
ln ) R (
8
9
t v t q =

.
Ultracentrifugarea - Pentru particule foarte mici cum ar fi
proteinele plasmatice sedimentarea prin centrifugarea obinuit este
practic nerealizabil din cauza fenomenelor de difuzie. Sunt necesare n
acest caz turaii deosebit de mari >15000rot/min.
Ultracentrifugele ce realizeaz aceste turaii trebuie s fie bine
stabilizate mecanic (pentru a evita fenomenul de bti care ar duce la
ruperea axului) i bine termostatate (pentru a mpiedica degradarea
termic).
Cnd sistemul este monodispers apare o limit net de separaie
ntre solvent i particulele dispuse la fundul eprubetei.
Cnd sistemul este polidispers apar mai multe cmpuri i este
necesar o ultracentrifugare fracionat. Se centrifugheaz pe rnd la
fiecare turaie de interes i se recolteaz sau sedimentul sau super-
natantul.

46

A. Determinarea vitezei de sedimentare a eritrocitelor
(metoda Westergreen)
Materiale necesare:
-snge venos, 1.6 ml, recoltat pe anticoagulantul citrat trisodic
3.8%, n cantitate de 0.4 ml;
-materiale pentru puncie venoas;
-eprubete de hemoliz;
-hemosedimentrul Westergren, alctuit dintr-un stativ metalic
prevzut cu pipete Westergren, de aproximativ 300mm lungime i 2.5
3mm diametru.
Mod de lucru:
-se aspir cu seringa, n condiii sterile, o cantitate de 0.4ml citrat
trisodic 3.8%;
-se puncioneaz vena pacientului i se aspir snge pn la
diviziunea de 2ml;
-dup omogenizare sngele se pune ntr-o eprubet de hemoliz;
-se aspir sngele n pipetele Westergren pn la diviziunea zero;
-se fixeaz pipetele n stativ (ntr-o poziie perfect vertical), apoi
se noteaz timpul (momentul se start) i numele pacientului.
Citirea rezultatului se face la o or i/sau la dou ore, valoarea
fiind dat de nlimea coloanei de plasm aprut n partea superioar a
tubului exprimat n mm, pe unitate de timp.

47

B. Centrifugarea sngelui
Materiale necesare:
- sering i ac pentru puncie venoas
- eprubete de hemoliz
- stativ
- pipete gradate
- citrat trisodic 3,8%
- balan de echilibrare
- ser fiziologic
- eprubete de centrifugare
Mod de lucru:
-se recolteaz o cantitate de 5-6 ml snge dup metoda descris
anterior;
-se introduce n eprubeta de centrifugare 1ml citrat trisodic 3,8%,
4ml ser fiziologic i 5ml snge dup care se aseaz eprubeta pe balana
de echilibrare;
-pe platanul opus se aseaz o eprubet identic n care se
introduce ap distilat pn la echilibrarea balanei;
-se aeaz cele dou eprubete n centrifug n poziii diametral
opuse una fa de alta, se nchide capacul centrifugii i se regleaz la
2000rotatii/min, dup care se centrifugheaz 2minute;
-se scoate eprubeta i se masoar deplasarea frontului eritrocitar,
apoi se continu centrifugarea.

48

Probleme:
1._Cunoscnd valorile fiziologice ale coeficientului de vscozitate
la brbat
B
=0,047Kg/ms i la femeie
F
=0,043Kg/ms, densitatea
eritrocitului =1095Kg/m
3
i a plasmei
o
=1027Kg/m
3
calculai din formula
vitezei de sedimentare ct ar trebui s fie raza eritrocitului presupus sferic.
2._Determinai viteza de sedimentare a unor particule de cret
suspendate ntr-un lichid i raza acestor particule presupuse sferice
cunoscnd
apa
=1 g/cm
3
,
apa
=1.05 10
-3
Kg/ms,
creta
=1,545 g/cm
3
.
3._Cunoscnd raza particulei de cret determinat anterior, evaluai
folosind modelul matematic al centrifugrii, timpul de centrifugare pentru
aceste particule suspendate ntr-un mediu vscos (glicerin). Se cunosc:
- =1000rot/min, (500rot/min)
-
glicerina
=13,93 10
-3
Kg/ms
-
glicerina
=1,26 g/cm
3

- ln(x
2
/x
1
)=0,143
Verificai experimental rezultatul obinut.
49

Spectrofotometria de absorbie n ultraviolet i vizibil

I. Noiuni teoretice
n aceast lucrare ncercm s prezentm aplicaiile spectro-
fotometriei n ultraviolet i vizibil pentru substane n stare lichid,
lichide pure, amestecuri i n special soluii. Spectrele urmrite sunt
spectre moleculere electronice la care structura de rotaie nu mai apare iar
cea de vibraie se manifest numai n anumite cazuri printr-o structurare a
benzilor de absorbie care, n general, sunt largi i nerezolvate n linii.
Benzile de absorbie din aceste domenii spectrale corespund
tranziiilor de pe nivelul electronic fndamental pe cele mai joase nivele
electronice excitate, pentru care tranziiile sunt permise conform legilor
de selecie. n aceste condiii tranziiile electronice implic cele mai mari
variaii de energie, iar frecvenele cuantelor absorbite se situeaz att n
domeniul vizibil ct i de ultraviolet al spectrului.
La aceste tranziii electronice particip electronii unor anumite
grupri structurale ale moleculelor numite cromofori. n cazul substan-
elor organice asemenea grupri structurale sunt reprezentate de legtura
simpl, dubl i tripl, gruparea bazic, etc.
Interacia cromoforilor ntre ei sau cu alte grupri atomice
provoac importante modificari ale spectru1ui de absorbie atribuit
cromoforului singur. n aceste condiii pot apare urmtoarele efecte:
- efectul batocromic - de deplasare a maximului de absorbie spre
lungimi de und mai mari (deplasarea spre rosu),
50
- efectul hipsocromic - de deplasare a maximului de absorbie spre
lungimi de und mai mici (deplasarea spre albastru),
- efectul hipercromic - de cretere a intensitii de absorbie,
- efectul hipocromic - de descretere a intensitii de absorbie.
Proprietile de absorbie ale mediului pot fi caracterizate prin
mrimile: absorban, trasmitan, extincie, coeficient de extincie.
Legea Bouguer-Lambert exprim relaia cantitativ dintre inten-
sitatea I, a luminii emergente, intensitatea I
0
, a luminii incidente,
grosimea x a substanei absorbante i natura substanei.

Figura 6.1. Reprezentarea grafic a legii Bouguer-Lambert
(X
1/2
grosimea de njumtire).

Expresia legii Bouguer-Lambert se poate scrie:
kx
0
e I ) x ( I

=
Prin definiie transmitana (T), sau coeficientul de transmisie al
unei substane este dat de formula:
100
I
I
(%) T
0
=
iar extincia natural E
n
, este dat de relaia:
x k
I
I
ln
T
1
ln E
n
0
n
= = =
51
unde k
n
reprezint coeficientul natural de extincie. Se poate arta uor c
0sE
n
s.
Avantajul folosirii extinciei este acela al proprietii de
aditivitate pe care o are aceast mrime: un amestec de mai multe soluii
diluate avnd extinciile E
1
,...,E
n
se comport ca o singur soluie cu
extincia global E, dat de relaia:
n 1
E ... E E + + =
Prin absorban (A), sau coeficient de absorbie se nelege:
100
I
I I
(%) A
0
0
=
n practic, deoarece logaritmii naturali sunt mai puin comozi se
folosete o relaie asemntoare n care intervin, ns logaritmii zecimali:
E
0
kx
0
e I 10 I I

= =
unde k reprezint coeficientul zecimal de extincie iar E extincia
zecimal sau densitatea optic.
Lege Beer este valabil numai pentru soluii diluate i
stabilete o legtur matematic ntre extincia E, concentraia C a
substanei i coeficientul molar de extincie care depinde de natura
substanei i de lungimea de und.
x C ) ( ) x , ( E c =
unde C se msoar n mol/dm
3
.
n aceste condiii legea Bouguer-Lambert-Beer se poate scrie:
x C ) (
0
10 I ) x , ( I
c
=
52
Curbele care dau dependen E=f(), T=f(), A=f(), c=f() sau
f(v), sunt cunoscute sub numele de spectre de absorbie.Un exemplu de
astfel de spectru este reprezentat n figura 6.2.

Figura 6.2. Spectrul de absorbie de tipul A=f().

Factorii care pot influena spectrul de absorbie al unei substane:
a) natura solventului nivelele energetice electronice ale molecu-
lelor n stare condensat pot fi modificate prin prezena
moleculelor solventului datorit interaciilor ce apar.
b) concentraia soluiei i temperatura cu creterea concentraiei
apar asocieri moleculare care dau un spectru distinct de cel al
monomerului substanei de studiat, temperatura favorizeaz
deplasarea echilibrului dintre concentraiile de monomer i dimer
iar temperaturile ridicate pot produce chiar transformri
ireversibile ale spectrelor de absorbie.
c) valoarea pH-ului soluiei la valori diferite de pH, punctul
izosbestic aprut n spectru indic prezena n amestec a unor
53
specii moleculaare ce se transform una ntr-alta ntr-o proporie
depinznd de pH.
d) iradierea substanelor iradierea optic a probei poate conduce
la polimerizarea unei specii moleculare i de aici modificri n
spectrul de absorbie.
e) formarea de compleci cationii prezeni n solvent pot duce la
formarea complecilor i deci influenarea spectrului probei.
f) fluorescena datorit fenomenului de fluorescen, intensitatea
radiaiei reemise va duce la o valoare aparent mai mic a
absorbiei probei dect cea real.
g) fenomene de oxidare
h) probele nu sunt dizolvate total sau precipit ulterior
i) fenomene de hidroliz

Descrierea instalaiei spectrofotometrice
Un spectrofotometru conine o parte optic i una electric.
Componentele de baz ale prii optice sunt: sursa, monocromatorul,
compartimentul probelor i detectorul mpreun cu sistemul de
nregistrare (figura 6.3).

Figura 6.3. Principalele componente ale unui spectrofotometru.

Spectrofotometrele se pot clasifica att dup sistemul dispersiv
ct i dup sistemul constructiv. Astfel, n funcie de primul criteriu
54
exist spectrofotometre cu prism, spectrofotometre cu reea, spectro-
fotometre mixte, iar n funcie de al doilea criteriu spectrofotometre cu
monofascicul i cu dublu fascicul.
Spectrofotometrul Camspec M330 are ca element dispersiv o
reea de difracie cu 1200 linii/mm i este de tipul monofascicul. M330
poate trasa spectre UV-VIS n intervalul de lungimi de und cuprins ntre
190-900nm, cu o acuratee de 1nm. n absorbie poate balea pe
intervalul -0.3 la 2.5Abs, iar n transmisie de la 0 la 200%. M330 poate fi
accesat fie direct utiliznd tastatura acestuia, fie prin intermediul unui
calculator.

Trasarea spectrelor de absorbie ale diferitelor tipuri de Hb
(A) Pentru obinerea hemoglobinei:
- se centrifugheaz sngele uman la 5000 rot/min
- se ndeprteaz supernatantul
- se suspend celulele roii n tampon izoton 0.9% NaCl.
- se centrifugheaz 10 min la 5000 rot/min (supernatantul trebuie
s fie ct mai limpede)
- se lizeaz globulele roii astfel: se adaug la un volum de
eritrocite 1.5 volume de ap i 0.5 volume cloroform
- se ndeprteaz cloroformul
- se folosete soluia de hemoglobin pentru citire la spectro-
fotometru.
55
(B) Pentru obinerea methemoglobinei (de culoare brun):
- se trateaz o parte din soluia de hemoglobin cu soluie de
fericianur de potasiu 3%
(C) Pentru obinerea hemoglobinei reduse:
- se adaug la soluia iniial de hemoglobin ditionit de sodiu n
exces pn la observarea culorii violete.

Mod de lucru: O posibilitate simpl i rapid de trasare a unui
spectru este utilizarea programului n varianta de lucru Immediate mod.
Acest mod permite scanarea probei ntre dou lungimi de und, mrirea
i micorarea unor zone prestabilite, deplasare cursorului n zonele dorite
obinndu-se valorile de absorbie i de lungime de und, afiarea datelor
sub form de tabel, derivatele 1-4 ale spectrului, salvare i printare a
graficului.
Primul pas l constituie selectarea tipului de grafic dorit absorbie
sau transmisie; acest lucru fcndu-se foarte uor prin selectarea cu
ajutorul mouse-lui a butoanelor Abs sau %T.
Se selecteaz apoi Scan , pe ecran aprnd o fereastr Enter
scan wavelengths pentru selectarea intervalului de lungimi de und.
Dup introducerea datelor se apas OK. Se ateapt cteva secunde pn
spectofotometrul i atinge lungimea de und de start. Fr prob n
compartimentul cuvelor sau de preferat cu o cuv coninnd numai
solventul n care a fost preparat soluia, se traseaz zeroul prin apsarea
butonului Set Zero.
56
Dup obinerea zeroului i primirea mesajului de confirmare se
trece la trasarea spectrului propriu-zis prin apsarea butonului Start.
Folosind butonul ID se poate face o fi de identitate a probei iar apsnd
butonul Disk graficul poate fi salvat pe disk n zona dorit. Butonul Data
permite listarea valorilor obinute, Zoom(+-) mrire i micorare a unor
zone prestabilite iar Deriv trasarea derivatelor spectrului.
Se traseaz spectrele de absorbie ale diferitelor tipuri de hemo-
globin (A), (B), (C) preparate i se compar cu datele din literatur.

Figura 6.4. Spectrele de absorbie ale diferitelor tipuri de hemoglobin.

57

Potenialul de aciune

I. Noiuni teoretice
n starea normal (numit stare de repaus) membrana celular
este polarizat, avnd faa intern mai negativ dect cea extern. n mod
uzual se ia faa intern drept referin.
Potenialul de membrana, V
m
numit potenial de repaus, ia valori
de la minus civa milivoli, pentru majoritatea celulelor, pana la 60mV
pentru axo1ema, 90mV pentru sarcolema si chiar 200mV pentru
membranele, celulelor din organul electric al petelui torpila, Torpedo
californicum.
Figura 7.1 prezint ceea ce se ntmpl cnd axolema este
excitat de un stimul electric depolarizant. Dac depolarizarea depeste
o valoare critic (sau liminar), atunci membrana se depolarizeaz n
continuare din proprie iniiativa (pana la 0mV) i chiar se repolarizeaz
dar n sens contrar pana pe la +50mV. Apoi potenialul iniial este
restaurat.
Aceasta oscilaie de tensiune de circa 120mV n amplitudine i
1ms durat se numete potenial de aciune. Depolarizarea extern este
de fapt doar un declanator (trigger) al fenomenului ntruct energia
rspunsului specific al membranei provine de la metabolismul celular i
nu de la stimul.
58

Figura 7.1. Simularea potenialului aciune.

Dup potenialul de aciune apar o serie de oscilaii mici i lente,
numite postpoteniale (pozitive i negative, n funcie de sensul depirii
potenialului de repaus). n timpul potenialului de aciune, membrana
este complet inexcitabil (perioada refractara absoluta). Pe durata
derulrii postpotenialelor, membrana este mai puin excitabil dect n
mod normal (perioada refractara relativa). Membrana are nevoie de
aproximativ zece durate ale potenialului de aciune, fr nici un stimul
pentru a-i reface complet potenialul de repaus i excitabilitatea
anterioar.
Potenialul de aciune se propag far decrement (atenuare) n
lungul axonului sub forma aa-numitului impuls nervos. Impulsul nervos
satisface legea totul-sau-nimic, ceea ce nseamn c nici un fel de
excitaie nu se transmite dac stimulul are o valoare inferioar pragului
de excitabilitate, i nici o modificare ca form, amplitudine i durat nu
apare dac stimulul este superior pragului. Pragul depinde de ampli-
59
tudinea, durata, frecvena i forma stimulului. Influena frecvenei devine
important peste 1000Hz, cnd excitabilitatea descrete rapid dac
frecvena de stimulare crete. La frecvene joase (sub 100Hz) nu se
observ nici o modificare a potenialului de aciune.
Un stimul cu o rampa mai lung, d posibilitatea membranei s
se acomodeze la excitaie i s i refac (cel puin parial) starea
perturbat de depolarizare, deci s i scad excitabilitatea. Scurtarea
timpului de stabilire a pulsului depolarizant las nemodificat capacitatea
de reacie a membranei. n cele ce urmeaz se consider numai pulsuri
rectangulare.
Pentru astfel de stimuli, caracteristicile de prag, adic intensitatea
liminar I (indiferent de natura pulsului: tensiune sau curent electric, oc
mecanic, chimic, etc.) i durata liminal t satisfac legea intensitate-
durat:
t
B
A ) t ( I + =
reprezentat grafic n figura 7.2. Legea este de tip hiperbolic i are dou
asimptote: una vertical i una orizontal.

Figura 7.2. Legea intensitate-durata pentru un puls rectangular
60

Intensitatea minim a unui stimul rectangular ce excit
membrana (avnd o durat infinit) se numete reobaz (notat cu R).
R A )
t
B
A (
lim
) t ( I
lim
t t
= = + =
o o

Cea mai mic durat a unui puls rectangular, cu amplitudinea
egal cu dublul reobazei, care nc excit membrana, a fost denumit
cronaxie (t). Cronaxia este cea mai utilizat mrime n caracterizarea
excitabilitii unui esut. Cu ct este mai mic cronaxia, cu att mai mare
este excitabilitatea membranei. O membran mai excitabil are nevoie de
mai puin energie de stimulare.
Cronaxia poate fi determinat nlocuind valoarea intensitii
I=2A (A=R) n legea intensitate-durat:
=
t
+ = B
B
R R 2 tR
Se poate rescrie acum legea prin nlocuirea constantelor A si B:
|
.
|
\
|
t
+ =
t
1 R ) t ( I
Reobaza i cronaxia depind de aciunea unor chimicale: hormoni,
toxine, anestezice etc., ce pot fi utilizate n scop medical, att n
diagnostic ct i n terapie. Uneori este necesar creterea excitabilitii,
alteori, din contr, este nevoie s fie sczut. Din aceast cauz studiile
electrofiziologice ale efectelor unor liganzi asupra bioelectrogenezei
membranei sunt o practic curent de peste un secol.
61
Au fost fcute numeroase ncercri de explicare a potenialului
de aciune. Cea mai productiv pentru o lung perioad de timp (fapt
pentru care e considerat clasic) a fost Teoria ionic, propus ntre
1949-1952 de doi cercettori britanici, laureai ai Premiului Nobel pentru
medicin n 1963, Hodgkin i Huxley.
Considernd c:
- exist blocani diferii pentru cele mai importante fluxuri ionice
active (TTX pentru Na
+
i TEA pentru K
+
),
- membrana celular este un dielectric (izolator) ce separ dou
medii conductive (citoplasma i lichidul interstiial sunt
electrolii),
- axonul perfuzat cu soluie salin izoton, avnd aceleai
concentraii de sodiu, potasiu i clor ca i axoplasma, are o
comportare electric similar celui integral, deci impulsul nervos
este un fenomen de membran,
Hodgkin i Huxley au propus modelul electric al membranei prezentat n
figura 7.3 i teoria aferenta lui.

Figura 7.3. Circuitul echivalent al unei poriuni de membran axonal
62

Citoplasma i lichidul interstiial, medii conductoare, sunt
reprezentate prin rezistori electrici conectai n serie. Membrana este
conceput ca fiind compus din celule electrice independente.
Fiecare celul conine un condensator i trei ramuri pentru
transportul selectiv al ionilor: una pentru sodiu, una pentru potasiu, i una
de scurgere pentru toi ceilali ioni la un loc.
Din cauza gradienilor de activitate chimic a ionilor implicai
ntre cele dou fee ale membranei, fiecare ramur conine o baterie
Nerst, a crei for electromotoare E este proporional cu logaritmul
raportului activitilor chimice.
Conductanele ionice selective sunt reprezentate de rezistori, a
cror rezisten poate varia datorit unui puls de tensiune a membranei
sau/i aciunea unor liganzi.

Efectul TTX
Adugarea de tetrodotoxin, TTX (o neurotoxin puternica
extras din ficatul i ovarele unui peste din Marea Japoniei, Sphoeroides
rubripes, i unii tritoni), n soluia de imersie a axonului, blocheaz
transportul de sodiu i nu are efecte directe notabile asupra transportului
de potasiu.
Figura 7.4 prezint efectul TTX asupra probabilitilor n, m, h, a
conductanelor de sodiu i potasiu, a potenialului de aciune. Toxina are
nevoie de ceva timp pentru a difuza n structur i a da efect. Cnd
conductana maxim a sodiului scade sub o valoare critic, membrana nu
mai rspunde.
63

Figura 7.4. Efectul TTX.

Figura 7.5. Efectul cesiului asupra bioelectrogenezei membranei.
64

Efectul cesiului
Datorit competiiei la legarea de componentele proteice ale
membranei cu ceilali cationi monovaleni (n special cu ionii de K
+
)
prezenta cesiului n soluia de imersie afecteaz dinamica probabilitatilor
n, m si h i duce la o scdere semnificativ a conductanei superficiale a
potasiului i la o foarte mic cretere a conductanei de sodiu. Aceste
schimbri modific potenialul de aciune, crescndu-i puin durata dup
cum se observa n figura 7.5.

Utiliznd programul de simulare din dotarea laboratorului de
biofizic s se determine valoarea reobazei, a cronaxiei, perioadei
refractare i s se urmareasc efectele TTX i Cs. Comentai rezultatele
obinute.
65

Fenomene de transport

I. Noiuni teoretice
1. Difuzia
Difuzia pasiv reprezint fenomenul de transport pasiv, datorat
agitatiei termice, a unor particule din zonele de concentratie, densitate
mai ridicate, spre zonele cu valori mai mici ale acestor mrimi, printr-un
mediu suport omogen.
Fenomenul de difuzie pasiv este cel mai intens la gaze, unde
viteza termic este foarte mare i cel mai lent n cazul solidelor, unde
moleculele (sau ionii) au poziii relativ fixe n spaiu.
nainte de a prezenta legile difuziei, vom face unele precizri n
legatur cu anumii termeni folosii: flux i gradient.
Fluxul reprezint cantitatea de substan, sarcin, energie
transportat printr-o suprafa n unitatea de timp.
Prin gradient se ntelege variaia unei mrimi (concentraie,
densitate, potenial electric etc.) ntre dou puncte ale spaiului, raportat
la distana dintre cele dou puncte.
n aceste condiii definim difuzia ca cel mai general tip de
transport pasiv (spontan), produs de gradientul de concentraie (pentru
gaze), sau de gradientul de activatate chimic (pentru materia conden-
sat).
Difuzia pasiv ntr-un mediu omogen se supune la dou legi,
cunoscute sub numele de legile lui Fick:
66
(1) Cantitatea de substan difuzat printr-o suprafa E, n
unitatea de timp este proporional cu aria suprafeei, cu gradientul de
concentraie i depinde de condiiile de mediu. Factorul de proporiona-
litate se noteaz cu D i reprezint coeficientul de difuzie.
dx
dc
S D
dt
dm
=
m=masa de substan, S=supraa de difuzie, D=coeficientul de difuzie,
dx
dc
= gradientul de concentraie, t = timpul.
(2) Viteza de variaie a concentraiei este proporional cu
variaia spatial a gradientului de concentratie.
|
.
|
\
|
c
c
c
c
=
c
c
=
x
c
x
D
x
c
D
dt
dc
2
2

Reprezentare grafic a variaiei de concentratie cu distana (ntr-
un solvent) ofer o imagine a gradientului sub forma unei pante de-a
lungul creia "coboar" solvitul.

Figura 8.1. Reprezentarea schematic i grafic a dependenei concentraiei unui solvit
(molecule difuzante) care se injecteaz n partea stng a unui solvent (faza omogen).

67
Transportul de substan prin difuzie conduce la modificarea
concentraiei n fiecare punct al spaiului ocupat de ansamblul solvit-
solvent, n final ajungndu-se la o egalizare a concentraiei.

Figura 8.2. Distribuia spaial a concentraiei la diferite momente de timp (t
0
<t
1
<t
2
<...t
o
)
dup nceperea procesului de difuzie, n urma contactului dintre solvit i solvent.

Prima lege a lui Fick permite calcularea cantitii de substana ce
strabate o membrana permeabil:
t c S P m A A = A
unde: Ac = diferena de concentraie, At = intervalul de timp.
Fie dou vase de volume V
1
si V
2
desprite de o membran
semipermeabil, ce conin solvent, respectiv o soluie de concentraie C
0

cunoscut.
n timpul difuziei lichidul din vasul V
2
trece de la concentraia C
0

la concentraia C
2
(mai mica), iar n vasul V
1
concentraia crete de la
C
01
(=0) la C
1
. Conform legii conservrii masei se poate scrie relaia:
2 2 1 1 0 2
C V C V C V + =
din care explicitnd variaia masei:
1 1
V C m A = A
se ajunge la coeficientul de permeabilitate al membranei:
68
t C
V
V V
C S
V C
P
1
2
2 1
0
1 1
A
|
|
.
|
\
|
+

A
=
Problema n aceasta situatie o reprezint determinarea
concentraiei C
1
. Pentru aceasta se folosete metoda conductometric
deoarece pentru substanele ionice, ntre anumite limite ale concentraiei,
aceasta este proportional cu conductivitatea solutiei ().
Conductana este inverul rezistenei i se msoar n O
-1
(mho):
R
1
G =
2. Osmoza
n unele situaii solvitul este mpiedicat s difuzeze ntre
compatimente datorit existenei unei membrane semipermeabile. n
aceast situaie sistemul tinde spre o stare stationar (steady state) i nu
spre o stare de echilibru, prin difuzia solventului prin membran.
Osmoza duce la apariia unei asimetrii a presiunii hidrostatice n
sistemul considerat. Diferena de presiune hidrostatic ce blocheaz
difuzia solvitului se numete presiune osmotic.

Figura 8.3. Procesul de osmoz.
69

Pentru soluii diluate presiunea este dat de legea lui Van't Hoff:
T R n V = H
unde: H = presiunea osmotic
n = numrul de moli de substan osmotic activ dizolvai
R = constanta universal a gazelor
T = temperatura absolut
n cazul soluiilor de electrolii se introduce un factor de corecie (i)
dependent de gradul de disociere al electrolitului:
T R n i V = H

A. Determinarea concentraiei unor soluii ionice prin conductometrie
Materiale necesare:
- sursa de tensiune 12V cc
- punte Wheastone
- electrozi
- soluii ionice de concentraie cunoscut
Mod de lucru: Se realizeaz montajul experimental ca n figura
8.4. Se introduce prima soluie pn ce aceasta acoper complet
electrozii, dup care se apas butonul (K) punii; dac acul deviaz se va
ajusta valoarea rezistenei pn la atingerea echilibrului punii. Valoarea
rezistenei se introduce n tabelul de mai jos. Se procedeaz analog i
pentru celelalte soluii.
70

No. C (mol/l)
R (O) G (O
-1
)
1
....

Se traseaz graficul conductan = f (concentraie), iar cu ajutorul
metodei celor mai mici ptrate se traseaz curba ce se potrivete cel mai
bine datele experimentale (vezi prelucrarea matematic a datelor).

Figura 8.4. (1) surs de tensiune, (2) punte Wheastone, (3) cuv cu electrozi.

B. Determinarea coeficientului de permeabilitate al unei membrane
Materiale necesare:
- sursa de tensiune 12V cc
- punte Wheastone
- electrozi
- membrane sintetice
- vas de difuzie
- cronometru
Mod de lucru: Se realizeaz montajul experimental ca n figura
8.5. Se umple compartimentul din stnga al cuvei cu o soluie concentrat
de NaCl iar cel din dreapta cu ap distilat. Se masoar conductana
71
soluiei din cuva cu electrozi la fiecare 3 minute. Datele obtinute se trec
n tabelul de mai jos.

Figura 8.5. (1) surs de tensiune, (2) punte Wheastone, (3) vas de difuzie.

No. t (min)
R (O) G (O
-1
)
P (m/s)
1.
.....

S se traseze garficele G = f(t) i R = f(t).

C. Determinarea presiunii osmotice a unor soluii
Materiale necesare:
- osmometru
- membrane semipermeabile
- soluii de glucoz
- vas de 500ml
- ap distilat
Mod de lucru: Se monteaz la osmometru prima membran, dup
care se introduce n vasul cu ap distilat pn cnd suprafaa lichidului
din vas se afl la diviziunea 0 a osmometrului. Se introduce prima soluie
de analizat n osmometru tot pana la diviziunea 0. Dupa 5 minute se
msoar diferena de nivel i se calculeaz presiunea osmotic a
72
soluiilor. Datele se trec n tabelul de mai jos. Se goleste osmometrul, se
spal cu ap distilat i se reia procedeul pentru soluiile urmtoare.

Figura 8.6. Determinarea presiunii osmotice cu ajutorul osmometrului.

No. Soluia
Ah (mm) H (atm)
1.
...

73

Determinarea coeficientului de vscozitate a lichidelor biologice

I. Noiuni teoretice
Vscozitatea este fenomenul de frecare intern ce apare n
sistemele lichide. Fenomenul de vscozitate se manifest n dou
ipostaze: cnd o particul se mic n raport cu un lichid staionar
vscozitate static i cnd straturile adiacente de lichid se mica unele n
raport cu altele vscozitate dinamica.
Vscozitatea static face obiectul unei alte lucrri practice de
tehnici de separare (sedimentarea).
Vscozitatea dinamic n cazul lichidelor reale care curg se
constat c acest proces are loc n straturi subiri vecine, moleculele din
acelai strat avnd aceeai vitez, n timp ce moleculele din straturile
vecine au viteze diferite.
ntre moleculele straturilor vecine (ca i ntre moleculele
aceluiai strat) se exercit fore de atracie, forte ce se opun deplasrii
relative a acestor straturi, determinnd apariia unei frecri interne n
lichide numit vscozitate.
Dac n timpul curgerii straturile de lichid rmn paralele,
curgerea este cunoscut sub numele de curgere laminar. Pentru
curgerea laminar, fora de vscozitate este dat de legea lui Newton:
dx
dv
S F
v
q =
unde: q = coeficientul de vscozitate dinamica a lichidului
74

dx
dv
= gradientul de vitez
S = aria comun a celor doua straturi
Coeficientul de vscozitate depinde de natura lichidului i de
temperatur (scznd cu creterea temperaturii). Lichidele pentru care
este valabil relaia de mai sus se numesc lichide Newtoniene. Marea
majoritate a lichidelor de interes medical (lichidul cefalorahidian, plasma
sangvin, serul sangvin, urina) sunt lichide Newtoniene.
Vscozitatea dinamic este un fenomen foarte important n
circulaia sngelui.
S consideram un vas de snge de lungime L i raza R la capetele
cruia acioneaz o diferen, de presiune Ap=p
1
p
2
>0 (unde p
1
este
proiecia presiunii sistolice pn n acel teritoriu iar p
2
rezistena
periferic). La peretele vasului ader o pelicul fin de lichid ce rmne
n repaus. Dac diferena de presiune nu este foarte mare, atunci curgerea
are loc n pturi cilindrice paralele, cu viteze din ce n ce mai mari de la
periferie spre ax (figura 9.1).

Figura 9.1. Curgerea unui fluid printr-un tub cilindric de lungime L i raza R; p
1
, p
2
sunt
presiunile ce acioneaz la capetele tubului (Ap = p
1
p
2
>0)

Se poate determina n acest context fluxul u de snge (volumul
ce trece n unitatea de timp) prin seciunea transversal a vasului:
75
L 8
) p p ( R
2 1
4
q
t
= u (1)
Pentru lichidele care curg n conducte se introduce aa numitul
numr Reynolds:
q
=
r v
R
e

unde: r = raza conductei
= densitatea fluidului
v = viteza de curgere
q = coeficientul de vscozitate dinamic a lichidului
Pentru sngele din arterele mari exist o valoare critic a
numrului Reynolds (R
e
CR
) egal cu 1000. n funcie de aceast valoare
exist mai multe regimuri de curgere a sngelui :
a) pentru R
e
< 1000, curgerea este laminar
b) pentru 1000< R
e
<2000, curgerea este nestabil
c) pentru R
e
> 2000, curgerea devine turbulent (cu vrtejuri)
n sistemul cardiovascular uman, curgerea turbulent poate s
apar n aorta, imediat deasupra valvulelor sigmoide, n perioada de
expulzie a sngelui (cnd viteza sngelui atinge cea mai mare valoare).
Aceast curgere turbulent este caracterizat prin zgomote caracteristice.
Turbulena (consumatoare de energie) poate s apar i n alte vase, n
stri patologice, cnd vscozitatea sngelui este mult mai sczut
(anemie, sau n cazul scderii CO
2
din snge).

76
Vscozitatea sngelui
Vscozitatea sngelui, la temperatura de 37
o
C, este de
aproximativ 4 ori mai mare dect cea a apei, sngele fiind un lichid
nenewtonian. Mai mult, sngele nu constituie o faz omogen, ci un
sistem dispers heterogen, mai precis, o suspensie de elemente figurate n
plasm.
Tot lichidele nenewtoniene sunt i soluiile coloidale i
macromoleculare, pentru care coeficientul de vscozitate depinde de
concentraia particulelor dispersate, conform legii lui Einstein:
=
d
(1+KV)
unde:
d
= coeficientul de vscozitate dinamic al mediului respectiv,
V = volumul fazei dispersate din unitatea de volum a suspensiei,
K = constant ce depinde mrimea i natura particulelor
dispersate (pentru proteine globulare K=4-10)

Determinarea coeficientului de vscozitate a unor lichide
Principiul metodei: Determinarea vscozitii cu vscozimetrul
Ostwald se bazeaz pe msurarea timpului de scurgere a unui volum
determinat de lichid printr-un tub capilar etalonat sub aciunea unei
diferene de presiune cunoscut.
Pornind de la relaia (1) i innd cont c diferena de presiune
este de tip hidrostatic p
1
-p
2
=gh se poate arta c expresia coeficientului
de vscozitate se poate scrie sub forma:
q = Kt
77
unde: K = o constant ce depinde numai de vscozimetrul utilizat.
Dac un volum V de lichid al crui coeficient de vscozitate q
este necunoscut curge n timpul t printr-un tub capilar ntre doua repere i
dac acelai volum de apa V avnd coeficientul de vscozitate cunoscut
q
0
parcurge aceeai distan n timpul t
o
putem determina vscozitatea
relativa a lichidului q
rel
:
0 o 0 0
rel
t
t
d
t
t
=

=
q
q
= q (2)
unde:
0
d
= reprezint densitatea relativ.

Dac cunoatem ns i q
0
se poate calcula vscozitatea absolut
a lichidului q.

Dispozitivul experimental:
Pentru determinarea vscozitii unor lichide se folosete
dispozitivul Ostwald. Acesta este confecionat dintr-un tub de sticl n
forma literei "U" avnd o ramur (A) cu un diametru de aproximativ 2cm
prevzut cu un rezervor de 3ml capacitate i respectiv o ramur (B)
avnd un diametru de aproximativ 0.8cm cu un rezervor de 2ml
capacitate situat n partea superioar. Acest rezervor este delimitat de
dou tuburi capilare i este prevzut cu dou repere R
1
si R
2.

Ramura (B) continu cu sistemul de aspiraie alctuit dintr-un tub
de cauciuc, un tub de sticl prevzut cu un orificiu lateral i o pomp de
cauciuc.
78

Figura 9.2. Vscozimetrul Ostwald.

Mod de lucru:
Se introduce apa distilat n ramura A. Cu ajutorul sistemului de
aspiraie se ridic apa n ramura B undeva deasupra reperului R
1
. Se
elibereaz pompa iar n momentul cnd suprafaa lichidului se afl n
dreptul reperului R
1
se pornete cronometrul i se msoar intervalul de
timp necesar apei s curg ntre R
1
si

R
2
.
Se nlocuiete lichidul de referina (ap distilat) cu lichidul de
studiu i se repet procedeul prezentat mai sus. Pentru calcul
coeficientului de vscozitate se va folosi relaia (2).
Se vor efectua 15 determinri pentru fiecare lichid n parte iar
datele experimentale se vor introduce n tabelul de mai jos.

No t
apa

(s)
t
apa

mediu
(s)
t
lichid
(s)
d
q
rel
(Ns/m
2
)
q
rel

med
(Ns/m
2
)
o
n-1

(Ns/m
2
)
1.
....

79

Determinarea coeficientului de tensiune superficial
a lichidelor biologice

I. Noiuni teoretice
-_O substan lichid este separat de atmosfera nconjurtoare
(n care se gsesc i vaporii si) printr-o ptur superficial. Moleculele
din ptura superficial se gsesc n condiii care se deosebesc de cele din
interiorul lichidului astfel:

Figura 10.1. Moleculele din ptura superficial se gsesc n condiii diferite dat de
moleculele din interiorul lichidului: (a1) molecul situat n interiorul lichidului,
(a2) molecul situat n stratul superficial.

- fiecare molecul din interiorul lichidului este nconjurat
complet de moleculele lui. Corespunztor, forele de interaciune care se
manifest ntre aceast molecul i moleculele vecine sunt repartizate
aproximativ simetric. Rezultanta acestor fore este apropiat de zero i
influeneaz puin micarea moleculelor n interiorul lichidului.
- moleculele de la suprafa se gsesc la limita de separare ntre
starea lichid i atmosfera nconjurtoare. Ele interacioneaz
concomitent cu moleculele din cele dou stri astfel nct rezultanta
forelor de interaciune este ndreptat spre interiorul lichidului.
80
Fore de tensiune superficial apar ca rezultat macroscopic al
forelor de interaciune ntre moleculele lichidului. Forele de tensiune
superficial sunt tangente la suprafaa lichidului i acioneaz n sensul
micorrii ei.
Mrimea fizic care caracterizeaz lichidul din acest punct de
vedere se numete coeficient de tensiune superficial (o). Acesta se poate
defini n dou moduri:
- coeficientul de tensiune superficial este numeric egal cu
lucrul mecanic efectuat de forele de tensiune superficial
pentru a mrii suprafaa lichidului cu o unitate:
S
W
= o
sau
- coeficientul de tensiune superficial este numeric egal cu
fora de tensiune superficial care se exercit asupra unitii
de lungime:
l
F
= o
-_La suprafaa de contact solid lichid apar de asemenea fore
de atracie molecular care au fost denumite fore de adeziune. Din
experien se tie c unele lichide ud pereii solidelor cu care intr n
contact iar altele nu, aceasta depinznd de valorile forelor de coeziune i
de adeziune.

81

Figura 10.2. Forma pe care o ia o pictur de lichid, pentru un lichid care nu ud pereii
vasului i pentru un lichid care ud pereii vasului.

Dac forele de coeziune F
c
sunt mai mari dect forele de
adeziune F
a
atunci lichidul nu ud solidul cu care este n contact, unghiul
de racordare o e (90
0
,180
0
). Dac forele de coeziune F
c
sunt mai mici
dect forele de adeziune F
a
atunci lichidul ud solidul cu care este n
contact iar o e (0
0
,90
0
).
Valoarea unghiului o depinde de compoziia chimic a solidului,
lichidului si gazului; de puritatea celor trei componeni; de temperatur.
-_Dac turnm un lichid ntr-un vas marginea suprafeei
lichidului o s primeasc o form determinant. Se numete menisc
suprafaa liber curbat a unui lichid n vecintatea unui corp solid.
Pentru un lichid care nu ud pereii vasului suprafaa meniscului este
convex, iar pentru un lichid care ud pereii vasului suprafaa meniscului
este concav.

Figura 10.3. Forma suprafeei meniscului n cazul a dou lichide:
mercur - suprafa convex (stnga), ap - suprafa concav (dreapta).
82
-_n cazul unui tub capilar, ascensiunea capilar (h), adic
nlimea la care urc lichidul este dat de urmtoare relaie:
r g
2
h

o
=
unde: = este densitatea lichidului
o = coeficientul de tensiune superficial
r = raza capilarului
h = ascensiunea capilar

Figura 10.4. Lichid care urc ntr-un tub capilar.


Determinarea coeficientului o pentru lichide biologice
A. Metoda stalagmometric
Este o metod dinamic de determinare a tensiunii superficiale a
unui lichid biologic constnd n numrarea picaturilor ce se formeaz la
curgerea unui volum bine determinat de lichid printr-un orificiu capilar.
Pornind de la condiia de desprindere a unei picturi se poate determina
expresia coeficientului de tensiune superficial:

83

G F = g
n
V
r 2
g v = g m = G
r 2 = F
= o t
(
(

o t

n r 2
g V
t

= o
n
K

= o (1)
unde: K = constant ce depinde de tipul stalagmometrului utilizat
= densitatea lichidului
n = numr de picturi
Dispozitivul experimental folosit (stalagmometrul) este prezentat
n figura 10.5. Este alctuit dintr-un tub de sticl prevzut cu dou
poriuni capilare, una vertical (A) i una orizontal (B), un tub vertical
(C) ce prezint un rezervor de volum V i un sistem de aspiraie (D)
alctuit dintr-un tub de cauciuc, un tub de sticl prevzut cu un orificiu
lateral i o par de cauciuc.

Figura 10.5. Dispozitivul experimental pentru determinarea coeficientului
de tensiune superficial (metoda stalagmometric).

84

n cazul n care nu cunoatem constanta K, pentru determinarea
lui o este necesar folosirea unui lichid de referin pentru care cunoatem
o
0
i
0.
Astfel relaia (1) de determinare a lui o devine:
0
l
l
0
0 l
n
n
o = o (2)
Mod de lucru:
Se aspir lichidul de referina n stalagmometru pn deasupra
diviziunii R
2
. Se las apoi s curg liber lichidul i se numr picturile
ce se formeaz la curgerea acestuia ntre cele dou repere R
2
si R
1.
Se
nlocuiete lichidul de referin (ap distilat) cu lichidul de studiu i se
repet procedeul prezentat mai sus. Pentru calcul coeficientului de
tensiune superficial se va folosi relaia (2). Se vor efectua 15 determinri
pentru fiecare lichid n parte iar datele experimentale se vor introduce n
tabelul de mai jos.

B. Metoda ascensiunii capilare
Este o metoda foarte simpl de determinate a coeficientului de
tensiune superficial ce se bazeaz pe faptul c ascensiunea capilar
(nlimea la care urc un lichid) pentru un tub capilar este dat de relaia:
r g
2
h

o
=
No. n
0
n
0 mediu
n
l

o o
mediu
o
n-1
(SD)
1.
....
85
Metoda presupune folosirea a dou tuburi capilare de diametre
diferite D
1
i D
2
pe care le imersm ntr-un lichid (figura 10.6) al crui
coeficient de tensiune superficiala dorim s-l determinm.

Figura 10.6. Dispozitivul experimental pentru determinarea coeficientului
de tensiune superficial (metoda ascensiunii capilare)

Notnd cu h
1
si h
2
nlimile la care urc lichidul n cele dou
capilare i considernd c D
1
> D
2
putem scrie urmtoarele relaii:
1
1
D g
4
h

o
= ,
2
2
D g
4
h

o
=
de unde, prin diferen, se obine expresia coeficientului de tensiune
superficial:
) D D ( 4
D D g ) h h (
2 1
2 1 1 2

= o (3)
Diametrele D
1
si D
2
respectiv diferena de nivel h
2
-h
1
, se vor
determina la un microscop prevzut cu un micrometru ocular, mai nti n
diviziuni, iar apoi folosind relaiile de mai jos se vor face transformrile
n microni (m):
100
g
1
h h
1 ob
diviziuni
2 , 1 2 , 1
= , 100
g
1
D D
2 ob
diviziuni
2 , 1 2 , 1
=
Cu valorile astfel determinate se calculeaz o din relaia (3).

86

Determinarea densitii lichidelor biologice
cu densimetrul i picnometrul

I. Noiuni teoretice
Densitatea unei substane este o mrime fizic caracteristic
substanei respective. Densitatea absolut se definete ca fiind masa
unitii de volum.
V
m
= (1)
avnd ca unitate de msur g/cm
3
i kg/m
3
.
Mrimile prin care se definete densitatea, respectiv masa i
volumul, sunt dependente de presiune i temperatur, aceti factori
influennd valoarea densitii. De aceea, determinarea densitii
corpurilor solide i lichide se va face la temperatur constant n tot
timpul determinrii, iar pentru gaze trebuie respectat i condiia
meninerii constante a presiunii.
Deoarece determinarea densitii presupune msurarea masei i a
volumului, n practic se determin densitatea prin comparatie cu
densitatea unui corp de referin (densitatea relativ), de obicei apa
distilat pentru solide i lichide i aerul atmosferic uscat pentru gaze.
Astfel, densitatea relativ se definete ca fiind raportul dintre
densitatea a unui corp i
0
densitatea corpului de referint:
0
d
= (2)
87
iar pentru volume egale ale corpului de studiat i a celei de referint,
relaia devine:
0
m
m
d = (3)
Cele mai utilizate metode pentru determinarea densitii
lichidelor sunt:
- cu densimetre
- cu picnometre
- cu balanta Mohr-Westphal

a) Determinarea densitii cu densimetrul
Densimetrul numit i plutitor liber sau areometru, fiind un
instrument bazat pe principiul plutirii corpurilor, este format dintr-un tub
de sticl, avnd prevzut la partea inferioar o umfltur unde se
introduce mercur sau alice de plumb pentru meninerea sa n poziie
vertical la introducerea n lichide. Citirea valorii densitii relative se
face cu ajutorul unei scri gradate aflat pe tija densimetrului.
Se utilizeaz truse de densimetre gradate diferit pentru intervale
de densitate diferite. Lichidul de analizat se introduce ntr-un cilindru
uscat i se aduce la temperatur constant. Densimetrul perfect uscat se
introduce n lichid, iar msurarea densitii se face cnd densimetrul
ocup o poziie vertical fr s ating pereii vasului. Se citete gradaia
de la nivelul meniscului lichidului. Pentru o precizie mai mare citirea se
repet de mai multe ori i se face media determinrilor.
88
b) Determinarea densitii cu picnometrul
Picnometrele sunt vase de sticl de diferite forme n funcie de
tipul de determinare. Au capacitate cunoscut nscris pe vas, ca de altfel
i temperatura de lucru.
n cadrul lucrrii se va urmri determinarea:
- punctului zero al balanei;
- masei picnometrului gol;
- masei picnometrului pentru soluii date i pentru apa distilat;
- densitii relative

Mod de lucru:
A. Determinarea densitii absolute a unui lichid biologic:
- se determin punctul zero al balanei;
- nainte de folosire, se spal picnometrul cu ap distilat, se
cltete cu aceton i se terge cu un tifon uscat;
- se cntrete picnometrul gol mpreun cu dopul, valoarea
masei se noteaz cu m
1
;
- se umple picnometrul cu lichidul de studiu (soluia 1);
- se nchide picnometrul cu dopul rodat care este prevzut cu un
canal capilar (sau tub lateral) prin care se elimin surplusul de lichid.
- se citete masa picnometrului cu soluia 1, masa respectiv
notndu-se cu m
2
.
89

Figura 11.1. Determinarea densitii cu picnometrul.

Densitatea absolut se calculeaz cu formula:
V
m m
V
m
1 2

= = (4)
unde: V = volumul picnometrului, n cm
3
(scris pe vas)
aer
= densitatea aerului n conditii normale (0.0012g/cm
3
)
- se procedeaz n mod asemntor, cu determinarea densittii
soluiei 2.
B. Determinarea densittii relative a unui lichid biologic:
Densitatea relativ d este raportul dintre densitatea a unui corp
i densitatea
o
a lichidului de referint - ap distilat:
1 3
1 2
0
m m
m m
d
= (5)
unde: m
3
= masa picnometrului cu ap distilat.
- se golete picnometrul i se blocheaz balana.
Rezultatele experimentale se trec n tabelul de mai jos.
90

Soluia
Masa
picnometrului d
m
1
m
2
m
3

1
2

Importana densimetriei n practica medical
Determinarea densitii lichidelor biologice are multe aplicaii
clinice. De exemplu: determinarea densittii urinii permite, alturi de alte
metode, diagnosticarea unor afeciuni renale.
Creterea densittii urinii peste 1.022 (valoarea normal este
cuprins ntre 1.015 i 1.022), apare n nefropatii glomerulare
compensate; n cazul glicosuriei atinge 1.030 i chiar mai mult.
Scderea densitii urinii apare n insuficiena renal decom-
pensat, n nefropatii cu lezarea predominant a tubilor distali (sub
1.010).
De menionat i variaii fiziologice ale densitii urinii:
- n raport excesiv de ap,
- n pierderi extrarenale de ap,
- n funcie de vrsta pacientului.
Densitatea urinii se determin n urina colectat pe 24 de ore.

91

Determinarea concentraiei unor soluii prin indice de refracie
Refractometrul Abbe

I. Noiuni teoretice
Prin refracie se nelege schimbarea direciei unei raze de lumin
la trecerea prin suprafaa de separaie a dou medii transparente cu indici
de refracie diferii.
Fie o raz de lumin care cade pe suprafaa de separaie a dou
medii sub un unghi de inciden (i). Raza sufer fenomenul de refracie
(figura 12.1) i intr n al doilea mediu sub unghiul de refracie (r). ntre
cele dou unghiuri exist relaia:
21
2
1
1
2
n
v
v
n
n
r sin
i sin
= = = (1)
unde:
v
1
= viteza de propagare a luminii n mediul cu indice de refracie n
1

v
2
= viteza de propagare a luminii n mediul cu indice de refracie n
2

n
21
= indice de refractie relativ (al mediului 2 fa de mediul 1)

Figura 12.1. Refracia luminii (sursa de lumin se afl n mediul n
1
)
Dac n
1
< n
2
unghiul de inciden (i) este mai mare dect cel de refracie (r).
92
Indicele de refracie absolut este definit ca raportul dintre viteza
luminii n vid i viteza luminii n mediul respectiv:
v
c
n = (2)
Indicele de refracie al unei substane depinde de o serie de
factori, cum ar fi: natura substanei, lungimea de und a luminii utilizate,
temperatur etc.
n cazul n care lumina trece dintr-un mediu optic mai dens ntr-
un mediu mai puin dens (n
1
> n
2
), din legea refraciei se observ c i < r,
deci raza refractat se ndeprteaz de normala dus la suprafata de
separaie n punctul de inciden.
n cazul n care lumina trece dintr-un mediu optic mai puin dens
ntr-unul mai dens (n
1
< n
2
), i > r, raza se apropie de normal.
Dac raza de lumin cade normal (perpendicular) pe suprafaa de
separaie (i=0), ea trece nedeviat n al doilea mediu.
n cazul n care raza de lumin cade pe suprafaa de separaie a
dou medii, al doilea avnd indicele de refracie mai mic dect primul
pentru anumite valori ale unghiului de incident are loc reflexia total a
razei dup cum urmeaz (figura 12.2):
- dac i = l caz n care raza de lumin se refract sub un unghi r =
90, fiind tangent la suprafaa de separaie, valoarea unghiului limita (l)
este dat de relaia:
1
2
0
n
n
90 sin
l sin
=
1
2
n
n
l sin = (3)
93
- dac i > 1 raza de lumin sufer reflexie total pe suprafaa de
separaie ntorcndu-se n mediul din care a venit.

Figura 12.2. Reflexia total.

Unghiul limit se determin cu ajutorul refractometrului Abbe.
Cunoscnd indicele de refracie al aerului n
1
= 1.0003, din formula (3) se
poate determina indicele de refracie al substanei de cercetat.
Refractometrul Abbe permite citirea direct a produsului n
1
sin l.

Descrierea dispozitivului experimental
Prile componente ale refractometrului Abbe sunt prezentate n
figura 12.3.
1. Corpul prismei de msurare care cuprinde:
- prisma de msurare
- prisma de iluminare
Bazele celor dou prisme nchid ntre ele un volum mic n care se
introduce proba de cercetat. Corpul prismei are racorduri pentru
termostat, un termometru i o oglind de iluminat.
94

Figura 12.3. Refractometrul Abbe.

2. Luneta de punere la punct - privind prin ea se observ dou
cmpuri inegal iluminate (figura 12.4).

Figura 12.4. Imaginea vzut prin lunet.

3. Compensatorul - servete la nlturarea haloului colorat care
apare la linia de separaie a celor dou cmpuri, iar cu ajutorul scalei 4 se
poate aprecia cifra de dispersie.
5. Tambur pentru rotirea corpului prismei;
6. Luneta de citire - este cuplat rigid cu luneta de punere la
punct i indic valoarea indicelui de refracie a probei.
Domeniul de msurare al refractometrului Abbe cuprinde indici
ntre 1.3 si 1.7. Scala permite citirea indicelui de refractie pna la
zecimala a treia i aprecierea celei de-a patra zecimale.
95

Mod de lucru - Verificarea aparatului:
- corpul refractometrului se rotete nainte pn n poziia
extrem;
- cu ajutorul urubului se deschide corpul prismei i se aduce fa
lucioas n poziie perfect orizontal;
- cele dou fee ale prismelor se degreseaz cu amestec de alcool-
eter;
- cu ajutorul unei pipete se pun 2-3 picturi de ap distilat pe
faa lucioas;
- meninnd orizontalitatea prismei de msurare se nchide corpul
prismelor i se readuce refractometrul n poziia iniial;
- privind prin luneta de citire (6) se roteste tamburul (5) pna la
captul scalei (valoarea 1.3 a indicelui de refracie);
- cu ajutorul oglinzii se realizeaz o iluminare uniform i
maxim a cmpului observat n luneta de msurare;
- prin rotirea tamburului (5) se observ o ntunecare a cmpului
de jos n sus; se continu rotirea pn cnd linia de demarcaie
lumin/ntuneric ajunge la intersecia celor dou fire perpendiculare;
- n aceast poziie se citete n luneta (6) indicele de refractie al
apei distilate, care la temperatura de 20C are valoarea de 1.3330;
- se repet determinrile de 3 ori, iar valorile citite se trec n
tabel, calculndu-se media lor aritmetic.

96
Modificarea indicelui de refracie n funcie de concentraie i
temperatur. Construirea curbei de etalonare.
Scopul lucrrii este de a studia dependena indicelui de refracie
de concentraie la diferite temperaturi (t
0
= temperatura camerei; t
1
=
37C). Totodat se va construi curba de etalonare n vederea daterminrii
concentraiilor necunoscute ale unor soluii.
A. Determinarea indicelui de refracie n funcie de concentraie
la temperatura camerei
- dup etalonarea aparatului cu ap distilata se degreseaz locaul
probei cu amestec alcool-eter i cu ajutorul unei pipete se pun dou, trei
picturi din soluia 1 pe suprafaa lucioas a prismei;
- se citete indicele de refracie ca la etalonare i valoarea
acestuia se trece n tabel;
- determinrile se repet nc de dou ori pentru soluia dat.
Operaia se repet pentru toate soluiile inclusiv pentru cele cu
concentraie necunoscut (X
1
i X
2
).
B. Determinarea indicelui de refracie n funcie de concentraie
la temperatura de 37C
- n vederea aducerii i meninerii corpului prismelor la
temperatura de 37C se pune n funciune termostatul Hppler;
- se repet determinrile de la punctul (A), avnd grij ca n urma
umplerii spaiului dintre prisme s se atepte 3 minute pentru realizarea
echilibrului termic, dup care se efectueaz citirea indicelui de refracie;
- pentru fiecare soluie se execut cte 3 determinri, iar
rezultatele se trec n tabel.
97
Dup executarea determinrilor se terg prismele cu amestec
alcool-eter, se las deschise pn la uscare apoi aparatul se aduce n
poziie de lucru.
C
Numrul determinrilor
n-1
1 2 3 Media
t
0
t
1
t
0
t
1
t
0
t
1
t
0
t
1

1
....
10
X
1

X
2

C. Construirea curbei de etalonare
Construirea curbei de etalonare se efectueaz n felul urmtor:
Pentru o serie de soluii de concentraii cunoscute (n cazul
nostru 10 soluii cu concentraii diferite de alcool n ap) se determin
indicele de refracie. Dup determinarea indicelui de refracie cores-
punztor concentraiilor cunoscute se traseaz graficul: C = f(n).
Dup trasarea curbelor de etalonare (cu rezultatele obinute la t
0
i la t
1
) se determin concentraiile celor dou soluii X
1
i X
2
cunoscnd
indicele lor de refracie.

98

Determinarea concentraiei substanelor optic active
prin metoda polarimetric

I. Noiuni teoretice
Lumina, ca orice und electromagnetic, const dintr-un cmp
electric (E) i un cmp magnetic (B). Cele dou cmpuri oscileaz n
faz, perpendicular pe direcia de propagare (figura 13.1), fiind perpen-
diculare i ntre ele. Lumina este o unda transversal.

Figura 13.1. n fiecare punct al spaiului atins de o und electromangetic,
vectorii E i B, oscileaz n faz, n direcii normale pe direcia de propagare.

S-a stabilit pe cale teoretic i experimental c aciunile
luminoase (impresionarea retinei) se datoresc n exclusivitate vectorului
electric i nu celui magnetic.
Lumina este emis sub form de unde electromagnetice de atomii
excitati ai sursei de lumin i ca atare se poate afirma c fiecare atom
emite lumin polarizat. Datorit faptului c fiecare atom emite unde
electromagnetice de polaritti diferite, lumina emis de multitudinea de
atomi este n ansamblu nepolarizat.
Lumina emis deci, n acest mod nu are o direcie preferenial
de oscilatie i poart numele de lumin natural. n lumin natural
99
planul de oscilaie al vectorului electric se deplaseaz de-a lungul
directiei de propagare cu viteza luminii (figura 13.2a). Dac vectorul
electric are o singur direcie de oscilaie avem de a face cu lumin total
polarizat sau lumin liniar polarizat (figura 13.2b). Dac vectorul
electric oscileaz dup mai multe direcii (figura 13.2c) dar care sunt
cuprinse ntr-un anumit interval unghiular avem lumin parialial
polarizat.

Figura 13.2. Diferena dintre lumina natural, lumina total polarizat i lumina parial
polarizat din punctul de vedere al direciei de oscilaie a vectorului cmp electric.

Lumina natural poate fi polarizat prin reflexie, respectiv
refracie (figura 13.3) sau prin dubl refracie (figura 13.4).

Figura 13.3. Polarizarea prin reflexie, respectiv refracie.

n lucrarea de fa ne vom ocupa doar de polarizarea luminii prin
dubl refracie, utiliznd un cristal de spat de Islanda. Cristalul este tiat
dup una din diagonale, iar feele astfel obinute se lipesc cu balsam de
Canada. Ansamblul astfel obinut poart denumirea de nicol.
100

Figura 13.4. Polarizarea prin dubl refracie.

Polarizarea luminii prin dubl refracie genereaz dou raze
polarizate, avnd planele de polarizare perpendiculare (figura 13.4):
- raza ordinar, care se supune legilor refractiei;
- raza extraordinar, care nu se supune legilor refractiei.
Balsamul de Canada are pentru raza extraordinar un indice de
refracie foarte apropiat de cel al spatului de Islanda i ca atare aceasta va
trece practic nedeviat prin nicol.
Raza ordinar, odat intrat n nicol sufer reflexie total pe faa
AB (pentru aceast raz balsamul de Canada are indicele de refractie
considerabil mai mic fa de spatul de Islanda) i este eliminat.
Unele substane (n majoritate organice), datorit prezenei unuia
sau mai multor atomi de C asimetrici prezint proprietatea de a roti
planul de polarizare a luminii incidente. Astfel de substante se numesc
substane optic active. Dac planul de polarizare este rotit spre dreapta,
substana se numete dextrogir (de exemplu: glucoza, lactoza, alanina,
progesteron etc). n cazul n care planul de polarizare este rotit spre
stnga, substana se numete levogir (de exemplu: fructoza, serina,
colesterolul etc). Substanele optic inactive nu rotesc planul de polarizare.
101
Unghiul de rotatie depinde de concentraia substanei, de
lungimea de und a luminii folosite i de lungimea stratului de substan
strbtut conform relaiei:
l ] [
100
c
20
D
o
o
= (1)
unde:
c = concentraia procentual a substanei (g la 100ml soluie);
l = lungimea stratului de substan strbtut (l = 0.19014m);
= unghiul de rotaie determinat;
20
D
] [o = unghiul de rotaie specific dat de o coloan de lichid de lungine
l, de concentraie 1g/ml, la temperatura de 20C pe care cade o radiaie
avnd lungimea de und =589.2nm i valoarea de 52.75 pentru glucoza
pur.
Descrierea aparatului: Polarimetrul circular "SM" (figura 13.5)
se compune din urmtoarele elemente:
- polarizor, care este un nicol pe care cade lumina provenit de la
o surs de lumin; la ieirea din polarizor se obtine lumin plan
polarizat;
- tub de sticl n care se introduce soluia de cercetat;

Figura 13.5. Schema polarimetrului circular.
102

- analizor, care este tot un nicol; n cazul n care planul de
vibraie a luminii este paralel cu planul analizorului, lumina trece prin
analizor, deci n ocular luminozitatea este maxim; n cazul n care planul
de vibratie este perpendicular pe planul analizorului, n ocular
luminozitatea este minim;
- vernier, constituit dintr-un inelar circular fix pe care sunt
nscrise unghiuri ntre 0 i 360 i o plac circular legat solidar cu
analizorul, care poate fi rotit cu ajutorul unui dispozitiv de rotire fin i
pe care sunt gravate dou seturi de cte 20 de diviziuni ncepnd cu 0 i
terminnd cu 10.
Citirea: n momentul n care diviziunea 0 de pe inelul exterior
coincide cu diviziunea 0 de pe una din scrile gravate pe placa circular
interioar, avem extinctie (luminozitate minim) datorit poziiei
perpendiculare a planului polarizorului fa de cel al analizorului.
n momentul introducerii soluiei de cercetat n tub, datorit
rotirii planului de polarizare se modific luminozitatea cmpului vizual;
pentru a ajunge din nou la luminozitatea minim initial, se rotete
vernierul; unghiul obinut care reprezint unghiul de rotire a planului de
polarizare se citete n felul urmtor:
- gradele se citesc pe inelul exterior, diviziunea 0 de pe placa
interioar depete diviziunea 3 de pe inelul exterior, numrul de grade
va fi deci, egal cu 3;
- zecimalele de grad se citesc pe placa interioar; se caut acea
diviziune de pe placa interioar care se suprapune cu o diviziune de pe
inelul exterior; n exemplul nostru suprapunerea perfect apare la
103
diviziunea 6.5 de pe placa interioar; deci unghiul de rotire va fi n cazul
nostru 3.65.
- manonul prevzut la capt cu un ocular, care permite obinerea
unei imagini circulare clare prin deplasarea nainte napoi.
n cadrul lucrrii se va determina:
-
0
corespunztor tubului gol;
-
1
corespunztor tubului umplut cu soluia numrul 1;
- se calculeaz unghiul de rotire a planului de polarizare;
- n mod asemntor se determin
2
.

Figura 13.6. Imaginea vzut prin ocular n timpul determinrilor.

Mod de lucru:
- privind prin ocular se potrivete sursa de lumin (dac este
cazul) prin micarea stnga dreapta a suportului becului;
- pentru a obine
0
se luczeaz cu tubul gol;
- prin rotirea plcii interioare se observ o imagine divizat net n
trei cmpuri (o band ntunecat mrginit de dou cmpuri luminoase
(figura 13.6a); rotind n continuare se caut imaginea n care banda
luminoas este mrginit de dou cmpuri ntunecate (figura 13.6b); ntre
cele dou imagini extreme se caut obinerea unui cmp cu luminozitate
uniform i minim (figura 13.6c).
104
- se citete unghiul de rotire n modul descris mai sus; se
efectueaz mai multe determinri cu tubul gol i se calculeaz media
aritmetic a citirilor, notndu-se cu
0med
valoarea obinut;
- se scoate tubul i se umple cu soluia de cercetat; se introduce
tubul plin cu soluie n jgheab i se acoper cu capacul metalic;
- privind n ocular se observ c imaginea a devenit neuniform
iluminat; se rotete placa interioar i se obtine din nou un cmp de
luminozitate minim i uniform (situat tot ntre cele dou poziii
extreme descrise mai sus); se citete unghiul de rotire i se noteaz cu
1
;
se repet procedeul de mai multe ori;
- se calculeaz media aritmetic i se noteaz cu
1med

-

se calculeaz diferena: =
1med

0med
-

se repet operaiile de mai sus i pentru celelalte soluii de
cercetat, iar rezultatele obinute se trec n tabelul de mai jos;
- cu ajutorul formulei (1) se calculeaz concentraia.

0

1

2

Soluia 1
Soluia 2
Soluia 3
Media (
i
)
n-1

-
C -

105

Telecobaltoterapia

I. Noiuni teoretice
Radiaia Cobalt-60 este considerat ca o radiaie de energie mult
mai sczut dect cea obinut cu acceleratoare liniare. Fascicolul de
radiaii al Cobalt-60 prezint o serie de particulariti de ordin calitativ,
geometric i cantitativ.
1. Calitatea fascicolului
Izotopul radioactiv artificial Cobalt-60 se obine prin reacia
(n, ), din elementul natural Cobalt-59.
+ + Co n Co
60
27
1
0
59
27

Dezintegrarea Co
60
27
are loc n cascad: fiecare atom emite o
radiaie beta cu energia E=0.31MeV i doi fotoni gamma de 1.17 MeV i
1.33MeV, trecnd n elementul Ni
60
28
.

Figura 14.1. Schema de dezintegrare i caracteristicile fizice ale radiaiei Cobalt-60.

106
Radiaia gamma emis de cobalt-60 este de natur electro-
magnetic fiind constituit din fotoni transportori de energie i poate fi
considerat monocromatic, cu o energie medie de 1.25MeV.
n aer, fascicolul de fotoni nu prezint practic interaciuni i
energia pe care o transport rmne constant, indiferent de distana de
surs, repartizndu-se uniform pe seciunile sferice ale suprafeelor de
unde crescnde.
Intensitatea fluxului de fotoni, respectiv energia repartizat pe
unitatea de suprafa este uniform pe suprafaa unei seciuni sferice i
scade proporional cu ptratul distanei fa de sursa de emisie.
La impactul fascicolului cu un mediu material, acesta intr n
coliziune cu atomii mediului i o parte din energia fotonilor este
progresiv transferat electronilor secundari generai n urma interac-
iunilor elementare. Interaciunea fascicolului de fotoni cu mediul are ca
rezultat patru efecte mai importante:
1. modificarea traiectoriei fotonilor incideni, fr modificarea
energiei;
2. modificarea traiectoriei fotonilor cu cedare de energie sau efect
Compton;
3. dispariia fotonilor: efectul fotoelectric i generarea de perechi;
4. fascicolul, respectiv fotonii, trec fr nici o modificare.
Primele dou mecanisme produc o mprtiere a radiaiei (sau
fenomenul de difuziune), iar efectul Compton, efectul fotoelectric i
generarea de perechi sunt mecanisme prin care energia este cedat de
fascicolul i absorbit de ctre mediu.
107
Ambele fenomene, absorbia i difuziunea, contribuie n mod
distinct la determinarea debitului dozei absorbite n mediul iradiat.
Absorbia energiei se face prin intermediul electronilor mediului iradiant
pui n micare de fotonii purttori de energie ai fascicolului prin cele trei
mecanisme: efect fotoelectric, efect Compton i generare de perechi.
Efectul fotoelectric este important pn la 0.5MeV i const n
expulzarea unui electron periferic de ctre un foton incident care, n
aceast interaciune i cedeaz ntreaga energie.
Efectul Compton sau fenomenul de difuziune inelastic este o
interaciune prin care fotonul i cedeaz doar o parte din energie unui
electron care este expulzat de pe orbit, iar fotonul incident i continu
parcursul, dar cu modificarea traiectoriei.
Generarea de perechi este prezent pentru fotoni a cror energie
depete 1.05MeV, dar nu devine important dect pentru radiaii de
circa 20MeV. Fotonul incident, trecnd n apropierea nucleului, se
transform ntr-un electron i un pozitron, fiecare cu energia de
0.51MeV. Pozitronul este anihilat de un electron i se produc 2 fotoni de
0.51MeV, numii radiaie de anihilare.

Figura 14.2. a. Efect fotoelectric; b. Efect Compton; c. Formare de perechi electron
pozitron; e
-
= electron; e
+
= pozitron; h = energia fotonului incident; h = energia
fotonului mprtiat prin efect Compton; h
1
= h
2
= energia fotonilor rezultai din
anihilarea unui electron cu un pozitron; = unghiul de mprtiere.
108
Pentru domeniul de energie al cobaltului, efectul Compton este
preponderent i un foton va produce circa 30 de coliziuni nainte de a-i
ceda complet energia unui electron (prin efect fotoelectric). Electronii
rezultai prin cele trei mecanisme de mai sus sunt principalii ageni prin
care se realizeaz absorbia energiei i ei sunt cei care declaneaz toate
efectele fizice, fizico-chimice, biochimice i biologice ale radiaiilor.
Energia mare a radiaiilor cobaltului i confer anumite
caracteristici fizice, cum sunt creterea parcursului electronilor secundari,
diminuarea coeficienilor de atenuare i difuziune i egalizarea
coeficienilor masici de absorbie n diferite medii biologice. Energia
iniial a electronilor produi prin interaciunea fotonilor gamma ai
cobaltului cu materia, este mare i direcia lor de deplasare va fi apropiat
de cea a fascicolului incident.
Parcursul maxim al acestor electroni rapizi este de 5mm n ap
sau esuturi moi i ei vor ceda treptat din energie, prin ionizri i excitri,
pn cnd vor intra n echilibru termic cu moleculele nvecinate.
Importana ionizrilor i excitrilor este mai mare la sfritul traiectoriei
unde viteza lor este mai redus i explic decalajul dintre locul
interaciunii radiaiei cu mediul i locul n care se realizeaz absorbia
maxim de energie.
Zona ntre suprafa i profunzimea de 5mm este o zon de
tranziie n care fluxul electronilor secundari crete progresiv pn cnd
atinge valoarea maxim.
La 5mm profunzime se realizeaz un echilibru ntre electronii
aflai la sfritul traiectoriei i electronii pui n micare de radiaia
109
incident. Dup aceast profunzime, intensitatea radiaiei i a ionizrilor
scade, datorit atenurii fascicolului i sub influena scderii debitului,
invers proporional cu ptratul distanei.
Doza ntr-un anumit punct n profunzimea mediului iradiat este
rezultatul radiaiei absorbite n acel punct direct din fascicolul primar sau
radiaia primar i a radiaiei difuzate produse n urma interaciunii
radiaiei cu mediul nconjurtor sau volumul difuzant. Pe msur ce
profunzimea crete, contribuia fascicolului primar scade, dar rmne
ntotdeauna superioar radiaiei difuzate.
Fenomenul de difuziune (sau radiaia difuzat) este dependent de
mai muli factori, cei mai importani fiind energia radiaiei incidente i
volumul difuzant, delimitat de suprafaa i forma cmpului de iradiere i
profunzimea lui.
Avantajele clinice ale radiaiei cobaltului rezult din carac-
teristicile fizice i sunt comune tuturor radiaiilor de mare energie.

2. Geometria fascicolului
Fascicolul de radiaii este definit prin mai muli parametrii care
se utilizeaz n calcule dozimetrice:
a)_Distana F fa de surs, exprimat ca:
- distana surs-piele (DSP), respectiv distana dintre planul
frontal al sursei i suprafaa de intrare n mediul iradiat, msurat n axul
central al fascicolului;
- distana surs-ax (DSA), care la aparatele cu montaj izocentric
corespunde distanei dintre planul frontal i axul de rotaie.
110
b)_Cmpul de radiaii corespunde suprafeei de seciune a
fascicolului, perpendicular pe axul central. Cmpul se delimiteaz prin
colimare la distan fa de surs specific aparatului. Dup cum se alege
ca distan de lucru, DSP sau DSA, respectiv distan surs-piele sau
distan surs-ax, se difereniaz dou aspecte:
- cmpul definit la nivelul dozei maxime, n cazul cobaltului sub
nivelul pielii la 0.5cm profunzime;
- cmpul definit n axul de rotaie al aparatului, cnd coincide n
general cu centrul volumului tumoral.
3)_Profunzimea p
m
a dozei maxime D
m
: pentru cobalt-60 cores-
punde punctului (P) situat pe axul central al fascicolului la 0.5cm
profunzime.
4)_Debitul dozei D
m
la profunzime p
m
: valoarea care caracte-
rizeaz cantitativ un anumit fascicul definit geometric, msurat n
fantom sau liber n aer.

Figura 14.3. Parametrii geometrici ai fascicolului,
delimitarea geometric a fascicolului.
111
3. Calculul timpului de expunere
Calculul dozei absorbite n mediul iradiat se face cu relaia:
( ) ( )
f FRD C Exp D
A ) DSP ( DSP , A med
=
unde:
-
( ) DSP , A med
D debitul dozei absorbite n mediul iradiat, pentru un
cmp de seciune A, la distana DSP, exprimat n cGy/min
- Exp
(DSP)
= debitul sau expunerea msurat n aer pentru un
cmp de 10x10cm
2
la distana de referin DSP, exprimat n
R/min
- C = factorul collimator
- FRD
(A)
= factorul de retrodifuziune corespunztor radiaiei
difuzate de mediu pentru cmpul ptrat echivalent de seciune A
- f = factorul de conversie doz absorbit/doz expunere (cGy/R)
egal cu 0,957 pentru esutul muscular i 0.922 pentru oase

Calculul dozei adsorbite n axul fascicolului la profunzimea p
Doza absorbit n axul fascicolului poate fi determinat prin dou
metode: folosind randamentul n profunzime (RP), cnd se lucreaz cu
distana surs-piele (DSP) fix, sau folosind raportul esut aer (RTS)
cnd distana surs-ax (DSA) este fix i distana surs piele variabil.
a) Calculul cu randamentul n profunzime: tehnica de iradiere
folosete o distan surs-piele fix, cu dimensiunile cmpului stabilite la
nivelul porii de intrare. Astfel, debitul dozei adsorbite n axul
fascicolului la profunzimea p este:
( ) ( ) ( ) p , DSP , A DSP , A med p , DSP , A med
RP D D =
112
unde:
-
( ) p , DSP , A med
D = debitul dozei absorbite n mediu, pentru cmpul
de seciune A, la distana DSP fa de surs i profunzimea p,
exprimat n cGy/min
-
( ) DSP , A med
D = debitul dozei absorbite n aer pentru cmpul A i
distana DSP
-
( ) p , DSP , A
RP = randamentul n profunzime pentru cmpul A,
distana DSP i profunzimea p

Randamentul n profunzime (RP) este definit de raportul dintre
debitul dozei pentru cmpul de seciune A, la distana DSP i
profunzimea p, D
(p,A,DSP)
, fa de debitul dozei ntr-un punct de referin r,
D
(r,A,DSP)
, n condiii similare (cmp de seciune A i distan DSP).
Punctul de referin n cobaltoterapie corespunde dozei maxime 100% la
profunzimea de 5mm. Randamentul n profunzime se exprim n
procente fa de doza de referin:
( )
( )
( )
% 100
D
D
RP
DSP , A , r
DSP , A , p
DSP , A , p
=
Valorile randamentului n profunzime, a raportului esut-aer i a
factorului de retrodifuziune sunt date pentru cmpuri ptrate. Valorile
respective pentru cmpurile dreptunghiulare, care sunt mai frecvent
folosite n radioterapie, sunt inferioare celor ptrate sau circulare de
aceeai suprafa, datorit contribuiei mai reduse a radiaiei difuzate de
periferia volumului la doz n axul central. Din acest motiv, nainte de a
utiliza tabelele din literatur, care se refer la o anumit suprafa a
113
cmpului, se face trecerea de la cmpul dreptunghiular folosit la cmpul
ptrat echivalent, aplicndu-se formula:
( ) b a
ab 2
l
+
=
unde: l = latura cmpului ptrat echivalent;
a i b = lungimea i lrgimea cmpului dreptunghiular;
Timpul de expunere se obine prin mprirea dozei D pe care
dorim s o administrm la
( ) p , DSP , A med
D :
Timp expunere =
) p , DSP , A ( med
D
D

min
cGy
cGy

b) Calculul cu raportul esut-aer: tehnica de iradiere cu DSA
(DTS) fix se utilizeaz la aparatele cu montaj izocentric, dimensiunea
cmpului de iradiere fiind luat n axul de iradiere sau centrul volumului
tumoral. Debitul dozei n punctul p se calculeaz dup formula:
( )
min
cGy
RTA f C Exp D
) p , A ( ) DSA ( p , DSA , A
=
unde:
-
( ) p , DSA , A
D = debitul dozei absorbite pentru cmpul de seciune
A, la distan DSA i profunzimea p, exprimat n cGy/min
- Exp
(DSA)
= expunerea pentru cmpul standard (10x10cm
2
) la
distana DSA, exprimat n R/min
- C = factorul colimator pentru cmpul ptrat echivalent de
seciune A
- f = factorul de conversie doz absorbit/doz expunere
114
- RTA
(A ,p)
= raportul esut-aer pentru cmpul A la profunzimea p

Raportul esut-aer (RTA) a fost introdus de Johns n 1953 i
reprezint raportul dintre debitul dozei absorbite msurat ntr-un anumit
punct p n esut i debitul dozei absorbite msurat n acelai punct n aer,
n condiii de echilibru electronic i condiii similare de iradiere
( )
A , aer , p
A , tesut , p
E , A , p
D
D
RTA =
Timpul de expunere se obine prin mprirea dozei D pe care
dorim s o administrm la
( ) p , DSA , A
D :
Timpul de expunere =
) p , DSA , A (
D
D

min
cGy
cGy

4. Instalaia Theratron Elite 100
Theratron Elite 100 aflat n dotarea Spitalului Judeean
Constana, este un aparat destinat radioterapiei oncologice, avnd urm-
toarele componente majore: surs radioactiv de Cobalt-60, suport n
micare GANTRY, partea staionar (sistemele de alimentare electric,
sistemul de aer comprimat care comand micarea sursei, sistemele
electrice i electronice de comand i control), cap rotativ, colimator
ajustabil, masa de tratament, pupitre suspendate de comand (unul pentru
sistem i altul pentru masa de tratament), pupitru central de comand i
control.
Sistemul Theratron Elite 100 poate funciona n urmtoarele
moduri: RT fix, RT cinetic, RT rotativ, RT pe arc (pendular).
115

Figura 14.4. Instalaia Theratron Elite 100 schem general.

A._Valoarea debitului msurat n aer pentru un cmp de
A=10x10cm
2
, DSP=80cm este de Exp
(DSP)
=100R/min. S se calculeze
D
med(A,DSP)
pentru un cmp A=10x10cm
2
, A=6x12cm
2
,

A=12x17cm
2
cnd

DSP=80cm.
B._S se calculeze debitul dozei D
med(A,DSP)
i timpul de expunere
pentru D=250cGy, n cazul unui cmp de A=10x10cm
2
, DSP=80cm la
profunzimile p=10cm i p=20cm.
C. S se calculeze debitul dozei D
med(A,DSA)
i timpul de expunere
pentru D=250cGy, n cazul unui cmp de A=10x10cm
2
, DSA=80cm, la
profunzimile p=10cm i p=20cm. Se cunoate Exp
(DSA)
=100R/min.
- Factorul colimator: C
10x10
=1, C
8x8
=0.99, C
14x14
=1.02
- Factorul de conversie: f=0,957cGy/R (muchi), f=0.922cGy/R (oase)
- Randamentul n profunzime, raportul esut aer i echivalentul ptrat al
cmpurilor dreptunghiulare se gsesc date n tabelele 1-6.
116

Tabelul 1. Cobalt-60 DSP 50cm Randament n profunzime (RP)

117


118


119


120

Tabelul 5. Cobalt-60 Raport esut aer (RTA)

121

Tabelul 6. Echivalentul ptrat al cmpurilor dreptunghiulare

122

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

1. Dimoftache C., Herman S., Biofizic medical, Ed. Cerma
Bucureti, 1999
2. Dinu V., Truia E., Biochimie Medical, Ed. Medical
Bucureti, 1996
3. Gheorghe V., Popescu A., Introducere n bionic, Ed. Stiinific
Bucureti, 1990
4. Ghilezan N., Cobaltoterapia, Editura Medical, Bucureti, 1983
5. Herman S., Aparatur medical, Ed. Teora Bucureti, 2000
6. Iacoba A.D., Biofizic Molecular, Vol I, Ed. Bucura Mond
Bucureti, 1995
7. Iosif N., ndreptar de lucri practice de biofizic, Ed. Eurobit,
Timioara, 1993
8. Mrgineanu D., Biofizic, Ed. Didactic i Pedagogic
Bucureti, 1980
9. Popescu A., Fundamentele biofizicii medicale., Ed. ALL.
Bucureti, 1994
10. Petcu L.C., Biofizic medical, Vol 1, Ed. Muntenia Leda,
Constana, 2001
11. Turcu G., Biochimie - Bioenergetic, Ed. Universitii
Bucureti, 1984
12. Vasilescu V., Biofizic Medical, Ed. Didactic i Pedagogic
Bucureti, 1977

Biofiz LP

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Biofiz LP

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSITATEA "OVIDIUS" CONSTANA

FACULTATEA DE MEDICIN GENERALA

= reprezint densitatea relativ.

S-ar putea să vă placă și