Sunteți pe pagina 1din 107

UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR ION IONESCU DE LA BRAD IAI

FACULTATEA DE ZOOTEHNIE

ELEONORA GUGUIANU

MICROBIOLOGIE
ANUL II, SEMESTRUL I

MATERIAL DE STUDIU I.D.

IAI, 2013

CUPRINS CAPITOLUL I NO IUNI INTRODUCTINE 1.1 DEFINIIA I OBIECTUL DE STUDIU AL MICROBIOLOGIEI 1.2. SISTEMATICA MICROORGANISMELOR 1.3. ISTORICUL MICROBIOLOGIEI CAPITOLUL II VIRUSOLOGIE GENERAL 2.1. CARACTERELE GENERALE ALE VIRUSURILOR 2.2.FORMELE DE EXISTEN A VIRUSURILOR N NATUR 2.3. MORFOLOGIA i STRUCTURA VIRUSURILOR 2.3.1. FORMA i DIMENSIUNILE 2.3.2. STRUCTURA VIRIONULUI 2.3.2.1. Genomul viral 2.3.2.2. nveliul 2.4. RELAIA VIRUS GAZD. 2.4.1. TROPISMUL VIRUSURILOR 2.4.2. MULTIPLICAREA VIRUSURILOR 2.4.3. MODIFICRILE MORFOFIZIOLOGICE ALE CELULELOR INFECTATE CU VIRUS 2.4.4. TIPURILE DE INFECIE VIRAL 2.5. ACIUNEA UNOR AGENI FIZICI i CHIMICI ASUPRA VIRUSURILOR 2.6. CLASIFICAREA VIRUSURILOR CAPITOLUL III BACTERIOLOGIE GENERAL 3.1. CONCEPTUL DE BACTERIE 3.2. NOIUNI DE TAXONOMIE i NOMENCLATUR BACTERIAN 3.2.1. TAXONOMIA BACTERIILOR 3.2.1.1. Categorii de taxoni 3.2.2. NOMENCLATURA BACTERIILOR 3.3. MORFOLOGIA SI BIOLOGIA BACTERIILOR 3.3.1. MORFOLOGIA CELULEI VEGETATIVE 3.3.1.1. Forma si modul de grupare a bacteriilor 3.2.1.2. Constantele fizice 3.2.1.3. Structura celulei bacteriene 3.3.2. FIZIOLOGIA BACTERIILOR 3.3.2.1. COMPOZIIA CHIMIC A CELULEI BACTERIENE 3.3.2.1.1. Compuii anorganici 3.3.2.1.2. Compuii organici 3.3.2.2. NUTRIIA LA BACTERII 3.3.2.3. METABOLISMUL BACTERIAN 3.3.2.3.1. Catabolismul 3.3.2.3.2. Respiraia 3.3.2.3.3. Anabolismul 3.3.2..4. CRESTEREA SI MULTIPLICAREA BACTERIILOR 3.3.2.4.1 Creterea bacteriilor 3.3.2.4.2. Multiplicarea bacteriilor 3.3.2.4.2.1 Dinamica multiplicrii bacteriilor CAPITOLUL IV MICOLOGIE GENERAL
1

4.1. MORFOLOGIA CIUPERCILOR MICROSCOPICE 4.2. MODALITILE DE NMULIRE ALE CIUPERCILOR MICROSCOPICE 4.3. PARTICULARITI ECO-FIZIOLOGICE i IMPLICAII CAPITOLUL V NOIUNI DE GENETIC MICROBIAN 5.1. EREDITATEA LA MICROORGANISME i MECANISMELE EI 5.2 VARIABILITATEA LA MICROORGANISME i MECANISMELE EI 5.2.1. VARIAIILE FENOTIPICE 5.2.2. VARIAIILE GENOTIPICE 5.2.2.1. Mutaiile 5.2.2.2.Recombinrile genetice CAPITOLUL VI NOIUNI DE ECOLOGIE MICROBIAN 6.1. RSPNDIREA MICROORGANISMELOR N NATUR 6.2.MICROBIOTA APELOR 6.3. MICROBIOTA SOLULUI 6.4. MICROBIOTA AERULUI 6.5. MICROBIOTA UNOR ALIMENTE DE ORIGINE ANIMAL 6.5.1. Microbiota laptelui 6.5.2. Microbiota crnii 6.5.3. Microbiota oulor 6.6. MICROBIOTA ORGANISMULUI ANIMAL 6.6.1. Microbiota gastric 6.6.2. Microbiota intestinului subire 6.6.3. Microbiota intestinului gros 6.6.4. Microbiota rumenului 6.7. RELAIILE ECOLOGICE ALE BACTERIILOR 6.7.1. RELAIILE ECOLOGICE INTERBACTERIENE i ALE BACTERIILOR CU ALTE CATEGORII DE MICROORGANISME 6.7.1.1. INTERRELAII MICROBIENE DE TIP BENEFICIAL 6.7.1.1.1. Comensalismul 6.7.1.1.2. Simbioza 6.7.1.1.3. Mutualismul 6.7.1.1.4. Sinergismul 6.7.1.2. INTERRELAII MICROBIENE DE TIP ANTAGONIC 6.7.1.2.1. Parazitismul 6.7.1.2.2. Competiia 6.7.1.2.3. Antagonismul propriu-zis 6.7.2. RELAII ECOLOGICE NTRE BACTERII i MACROORGANISME 6.7.2. 1. RELAII DE TIP BENEFICIAL 6.7.2. 1.1. Comensalismul 6.7.2. 1.2. Simbioza 6.7.2. 2. RELAII DE TIP ANTAGONIC 6.7.2. 2.1. Patogenitatea bacteriilor i mecanismele ei 6.7.2. 2.1. 1. Virulena i factorii de virulen 6.7.2. 2.1. 2. Toxicitatea bacteriilor 6.7.2. 2.1. 3. Factorii de sensibilizare BIBLIOGRAFIE SELECTIV NTREBRI RECAPITULATIVE TEST
2

CAPITOLUL 1

NOIUNI INTRODUCTIVE

1.1. DEFINIIA I OBIECTUL DE STUDIU AL MICROBIOLOGIEI Microbiologia reunete tiinele biologice care au ca obiect studiul vieuitoarelor invizibile cu ochiul liber. Acestea au purtat denumiri diferite de-a lungul timpului, n raport cu nivelul cunotinelor asupra lor: miasme (HIPPOCRATE- 460-377 a. Chr.), germeni (,,seminaria morbi,, n concepia medicului italian FRACASTORO1468-1553 ), animaliculi (ANTONIUS van LEEUWENHOEK -1632-1723), fermeni, microbi. Termenul de ,,microb" a fost inventat de Charles Sedillot n 1878 i i are originea n cuvintele greceti micros mic i bios - via. Dei nu este considerat academic, el rmne de uz comun, la fel ca i sintagma ,,germeni microbieni".Termenul tiinific este cel de ,,microorganism". Lumea microorganismelor este imens i extrem de variat ca urmare a evoluiei pe parcursul a aproximativ 3 miliarde de ani cu succesiuni de ordinul minutelor ntre generaii, justificnd opinia potrivit creia trim ntr-o lume a microorganismelor i nu ntr-o lume cu microbi. Mult vreme, oamenii au fost tentai sa cread c lumea vie se rezum numai la ceea ce le relevau organele de sim, dei, nc din preistorie, sesizaser o serie de efecte ale activitii acestora, unele favorabile pe care, pragmatici, cutau s le obin (dospirea pinii, fermentaiile alcoolice, lactice, acetice, etc.), altele extrem de duntoare (bolile infecioase). Doar medicii, filozofii, chiar i unii poei ai acelor timpuri reflectau asupra cauzelor posibile ale acestor fenomene fr a putea depi ns stadiul de simple ipoteze. Descoperirea microorganismelor a fost posibil abia n doua jumtate a sec. XVII datorit inventrii aparatelor de amplificare optic. Studiul microcosmosului viu cu ajutorul microscoapelor din ce n ce mai performante a relevat existena de microorganisme cu o structur celular i subcelular (acelular). Microorganismele cel ulare sunt algele microscopice, protozoarele, fungii (miceii, ciupercile microscopice) i bacteriile. Ele au, n general, toate cele trei atribute ale vieii: flux material, flux energetic i flux informaional. n categoria microorganismele acelulare sunt incluse virusurile , viroizii, - care dispun doar de flux informaional - i prionii (proteinele infecioase transmisibile) - ageni patogeni neconvenionali lipsii de atributele vieii, pentru a cror descoperire PRUSINER a primit premiul Nobel n 1997.
3

Principalele caractere distinctive ale microorganismelor sunt redate n tabelul 1. Tabelul 1 Caracterele difereniale ntre principalele categorii de microorganisme
Caracterul diferenial Tipul de organizare Numrul tipurilor de acid nucleic Organizarea materialului genetic Echipament enzimatic i activitate metabolic proprie Cretere Mod de reproducere Capacitate de difereniere celular Parazitism absolut Forme biologice de existen n natur Prioni V acelular iroizi acelular 1 (ARN) Virusuri acelular. 1 (ADN sau ARN) niciodat ambii Genom viral Bacterii Celular procariot 2 (ADN i ARN) Un singur cromozom i plasmide Prezente Ciuperci microscopice Celular eucariot 2 (ADN i ARN Mai muli cromozomi Prezente

ARN de talie mic Absente

Absente

Absente

Absent Sintez amplificat prin conversie Nu este cazul

Absent Sunt sintetizai de celula gazd Nu este cazul Constant obligat ARN mic intranuclear

Absent Sunt sintetizate de celula gazd Nu este cazul

Prezent Independent, sciziparitate Absent

Prezent Independent, sexuat sau asexuat Prezent

Constant obligat P.P.C.=protein prionic celular normal P.P.S.=protein prionic patologic scrapie La grania dintre viu i neviu

Poziia pe scara filogenetic

La grania dintre viu i neviu

Constant, obligat Virion infecios, temporar extracelular Virus vegetativ, intracelular, n curs de sintez Virus integrat, fixat n genomul celulei gazd La grania dintre viu i neviu

Absent -Celul vegetativ, capabil de diviziune Spor (form de conservare )

Absent Miceliu sau pseudomi celiu Spori de nmulire Spori de rezisten

Organisme vii cu organizare simpl (protiste )

Organisme vii cu diverse grade de complexitate.

Pe msura perfecionrii metodelor de studiu i implicit a acumulrii de noi cunotine despre microorganisme, n cadrul microbiologiei s-au conturat numeroase discipline distincte, cu un caracter fundamental (algologia, protozoologia, micologia, bacteriologia, virusologia, genetica i taxonomia microbian, ecologia microbian ,a.) i aplicativ (microbiologia medical, veterinar, alimentar, microbiologia solului, microbiologia petrolului, microbiologia cosmosului etc.) Microbiologia are numeroase conexiuni interdisciplinare. Ea faciliteaz aprofundarea cunotinelor de morfopatologie, boli infecioase, imunologie, biologie molecular i reclam pentru a putea fi neleas i nsuit, temeinice cunotine de biochimie necesare nelegerii metabolisului bacterian, noiuni de biofizic pentru nelegerea funcionrii unor structuri anatomice ale celulei
4

bacteriene (membrana citoplasmatic, membrana extern a peretelui bacterian etc.), noiuni de anatomie i histologie pentru nelegerea funcionrii unor bariere antimicrobiene mecanice (epiteliul cutanat i cel al mucoaselor, esutul conjunctiv dens, splarea mucoaselor prin secreii i excrete, transportul mucociliar) .a. 1.2. SISTEMATICA MICROORGANISMELOR Stabilirea poziiei microorganismelor n sistematica biologic a ntmpinat n decursul anilor dificulti obiective, generate de criteriile care au stat la baza mpririi lumii vii n dou, trei, patru sau chiar cinci regnuri, de marea diversitate a acestor vieuitoare, ct i de faptul c unele categorii de microorganisme se apropie prin unele caracteristici de regnul animal (protozoarele) iar altele de regnul vegetal (algele, ciupercile microscopice, bacteriile). Privite n ansamblu, aceste vieuitoare au ns trsturi distinctive de restul lumii vii, fiind situate de fapt pe o treapt inferioar de evoluie i organizare. Lundu-se drept criteriu de baz nivelul de organizare biologic (subcelular, unicelular, sau pluricelular; eucariot sau procariot), la propunerea lui H a e c k e l (1866), reluat de S t a n i e r (1964 ), microorganismele au fost incluse ntr-un al treilea regn, alturi de cel vegetal i animal - regnul Protista divizat n protiste superioare care grupeaz microorganismele eucariote (algele, protozoarele, micromiceii) i protiste inferioare, reprezentate de microorganismele procariote (algele albastre-verzi i bacteriile). In 1968, M u r r a y ncadreaz bacteriile i algele albastre-verzi n regnul Procaryotae, taxon nsuit de Determinatorul Bergey (1984) lucrare de o nalt probitate tiinific, unanim acceptat de ctre bacteriologii din ntreaga lume. Un an mai trziu (1969), W h i t t a k e r creeaz un nou regn-regnul Fungi - care grupeaz ciupercile microscopice. Virusurile, deoarece se deosebesc de celelalte microorganisme prin cel puin dou trsturi eseniale structura subcelular i lipsa metabolismului propriu au fost ncadrate ntr-un regn de sine stttor, regnul Vira. 1.3. ISTORICUL MICROBIOLOGIEI Existena fiinelor microscopice a fost intuit de foarte mult vreme dar, din lipsa mijloacelor tehnice, descrierea acestora a fost posibil abia dup ce inventarea microscopului a permis extinderea simurilor umane dincolo de capacitatea lor normal de percepie. Dac din acest motiv studiul microorganismelor a nceput foarte trziu, diferitele procese produse de microorganisme - n special bolile care decimau populaii de oameni i animale, au fost n atenia oamenilor de tiin din cele mai vechi timpuri. Pn la HIPOCRATE (460-375 Hr) se considera c ele sunt cauzate de intervenia unor fore supranaturale. Hipocrate, fondatorul medicinei raionale, afirma c toate bolile sunt naturale, adic produse de factori naturali i nu de zeiti, iar n ceea ce privete bolile molipsitoare, el le considera ca fiind rezultatul ptrunderii n organism a unor particule prezente i vehiculate de aer. Aceste
5

particule au fost numite miasme, iar teoria care le admitea existena, teoria miasmatic. Trei sute de ani mai trziu, un scriitor i filozof roman, Varro (116-23 H) identifica miasmele cu nite animale mici animalia minuta invizibile cu ochiul liber. El coreleaz apariia unor mbolnviri cu particularitile zonale ale locului respectiv, cum ar fi existena mlatinilor. n lucrarea sa Rerum rusticarum de agricultura, Varro afirma: Dac ntr-un loc sunt mlatini, acolo cresc animale aa de mici, c ochii nu pot s le vad i acestea ajungnd n corp, cu aerul, pe gur sau pe nas, produc boli grele Implicaia practic a teoriei miasmatice a fost considerabil pentru acele vremuri, deoarece recomanda msuri eseniale de prevenire a rspndirii bolilor molipsitoare, care constau n fierberea apei i fumigaii cu sulf n spaiile considerate contaminate. Cu toate acestea, pn acum un secol i jumtate epidemiile evoluau nestnjenite; ciuma, holera i variola decimau uneori 80% din populaia arealelor geografice afectate (orae, ri, continente) , iar difteria, tifosul exantematic, febra tifoid fceau ca mortalitatea prin boli contagioase s depeasc cu mult pierderile de viei omeneti determinate de toate celelalte calamiti naturale i rzboaie. Istoria evului-mijlociu poate fi considerat, aadar, istoria marilor epidemii, a cror apariie i recrudescen erau favorizate de pauperitatea msurilor profilactice de care dispunea omenirea la acea dat i de empirismul aplicrii lor. Msurile antiepidemice nu au putut fi nelese pn cnd, n sprijinul ipotezelor privind existena microorganismelor, au fost aduse dovezi clare, indubitabile. Se poate afirma c istoria microbiologiei i progresul ei sunt strns legate de curiozitaea tiinific a lui Leeuwenhoeck i de geniul lui Pasteur. LEEUWENHOECK (1632-1723), cercettor olandez nnscut, portar de meserie, dar care avea pasiunea lefuirii lentilelor, a reuit s evidenieze cu ajutorul unui microscop construit de el nsui, n saliv, urin, puroi, ap de canal i alte materiale , organisme minuscule pe care le-a denumit animalicule. Descrierile lui Leeuwenhoeck sunt nsoite de desene surprinztor de exacte, care au fost reproduse n lucrarea Arcana naturae ope microspiorum detecta prezentat n anul 1675 Societii Regale de Biologie din Londra i tiprit la Delf n 1695. Deoarece lucrarea reprezint primul studiu de microbiologie din lume, este considerat certificatul de natere al microbiologiei. Constatrile lui Leeuwenhoeck nu au fost urmate de un progres rapid al cunotinelor, aa cum ar fi fost de ateptat. n schimb, ele au devenit obiectul unor polemici nverunate cu privire la originea microorganismelor, ntre preoi, partizani ai concepiei creaioniste i oamenii de tiin, susintori ai teoriei generaiei spontane. Aceast teorie, fondat nc din antichitate de marii filozofi materialiti Anaximandru, Democrit, Aristotel, Teofrast i alii, ncerca s explice apariia unor vieuitoare n alt mod dect prin actul creaiei divine. Aa s-a ajuns la acreditarea unor idei, cel puin bizare, potrivit crora broatele se nasc spontan din
6

nmol, petii din frunzele copacilor czute n ap, oarecii din rufe murdare, viermii din brnz sau carne alterat, puricii din praf etc. Teoria generaiei spontane a fost susinut de numeroi adepi pn trziu, n cursul secolului XIX. Chiar i astzi, ca o expresie a ignoranei, unii oameni continu s cread c puricii pot s apar din praf. Utilizarea microscopului n secolul XVII a relevat organizarea anatomic foarte complex a acestor vieuitoare, semnnd ndoial n convingerile partizanilor acestei teorii, n sensul c structuri att de complexe nu ar putea s apar dintr-o dat din praf sau din nmol.. Mai mult, n 1668 biologul englez FRANCESCO REDI a demonstrat printr-o experien simpl c larvele se nasc din prini, acoperind cu tifon, pentru a evita depunerea oulor de musc, vasele n care au fost introduse fragmente de carne. Cu toate aceste dovezi tiinifice, partizanii generaiei spontane susineau c dac mutele se nasc din ou, apoi fiinele invizibile se nasc de la sine. Secolul al XVIII-lea a marcat puine progrese n cunoaterea lumii microbiene descoperite de Leeuwenhoeck. Aceast perioad se caracterizeaz, n principal, prin acumulri de date privind morfologia microorganismelor, pe msura perfecionrii aparatelor optice i prin ncercri de sistematizare a cunotinelor LINN (1707-1778), n celebra lucrare aprut n 1735 Systema naturae, ncadreaz organismele microscopice n genul Chaos, nzestrndu-le cu puteri infernale (furia infernalis) care aveau semnificaia unei activiti patogene. n 1854, FERDINAND COHN creaz termenul de bacterie i mpreun cu EHRENBERG propune desprinderea acestui grup de microorganisme din regnul animal, argumentnd ncadrarea lui n regnul vegetal pe baza prezenei peretelui celular. n istoria microbiologiei, secolul al XVIII-lea se ncheie cu o realizare empiric genial n domeniul imunologiei. n 1789 EDWARD JENNER (17491823), bazndu-se pe o ndelungat experien popular, obine prima imunizare artificial a oamenilor mpotriva variolei utiliznd o suspensie de cruste recoltate de pe ugerul vacilor bolnave. Toate aceste descoperiri i experiene empirice au constituit pai importani n cucerirea microcosmosului invizibil, prefigurnd trecerea la etapa constituirii microbiologiei ca tiin independent. Aceast etap cuprinde a doua jumtate a secolului XIX i este indisolubil legat de numele marelui savant LOUIS PASTEUR (1822-1895), considerat n unanimitate printele microbiologiei. Plecnd de la observaia c fermentaiile alcoolic, lactic i butiric sunt rezultatul aciunii unor microbi, Pasteur fundamenteaz ntre anii 1857-1856 teoria microbian a infeciilor. El demonstreaz experimental relaia cauzal dintre micobi i infecie bazndu-se pe rezultatele cercetrilor efectuate asupra agentului etiologic al antraxului. Dei numeroi autori (Delafond, 1838; Pollender, 1849; Rayer i Davaine, 1850) au observat n sngele animalelor moarte de dalac
7

(antrax) formaiuni bacilare cu lungimea de dou ori mai mare dect diametrul globulelor roii, iar Davaine le-a intuit rolul etiologic, Pasteur a fost acela care a demonstrat practic c prezena acestor germeni n organele oilor moarte reprezint cauza real a morii i nu consecine ale bolii. Bazat pe descoperirile sale privind mecanismele fermentaiilor i a infeciei, Pasteur demonstreaz fr echivoc c microorganismele nu apar spontan n substraturile n care se multiplic, ci prin contaminare, de vreme ce un mediu nutritiv sterilizat ntr-un recipient nchis etan rmne steril la infinit. Flacoanele sale cu lichide sterile se pstreaz i astzi la fel de limpezi ca n ziua n care au fost sterilizate El a pus astfel bazele sterilizrii, oferind i mijloacele adecvate: pupinelul sau cuptorul lui Pasteur, autoclavul lui Chamberland.. n paralel cu elucidarea cauzelor bolilor contagioase, eminentul cercettor a fcut descoperirea epocal a vaccinurilor microbiene, care a revoluionat medicina i gndirea biologic. Vaccinul contra holerei aviare a fost primul vaccin atibacterian bazat pe atenuarea patogenitii microbilor n condiii de laborator. Descoperirea principiului atenurii s-a datorat unei ntmplri, mai precis unei neglijene; colaboratorul su, Chamberland, a uitat la termostat un timp mai ndelungat o cultur de Pasteurella multocida- agentul etiologic al holerei aviare. Inoculat la ginile sntoase, aceasta nu a mai produs infecia iar psrile respective au devenit rezistente la tulpina virulent ce le-a fost administrat ulterior. Inspirat de aceast ntmplare, trei ani mai trziu, n 1881, a procedat la atenuarea unei tulpini de Bacillus anthracis izolat de la oi moarte de antrax, pe care a inoculat-o apoi unor oi sntoase. Rezultatul a fost acelai, n sensul c dup reinocularea cu o cultur virulent oile au supravieuit deoarece deveniser imune. La 28 februarie 1881 Pasteur a comunicat aceast descoperire Academiei de tiine. Rspunznd nencrederii cu care a fost primit de adversarii si, savantul a procedat la efectuarea unei demonstraii la o ferm din apropierea Parisului, n faa unei asistene compus din medici umani i veterinari, farmaciti, agricultori, politicieni i alte categorii de ceteni. Experiena a constat din mprirea unui lot de oi n dou grupe: una format din oi ce urmau a fi vaccinate, iar cealalt, din oi crora nu li s-a administrat nici un vaccin, constituind martorul. Dup 15 zile, ntregul efectiv a fost inoculat cu o suspensie de bacili crbunoi viruleni. Experimentul a fost ncununat de succes, spulbernd scepticismul inamicilor vaccinrii. Ca urmare a aplicrii vaccinrii preconizate de Pasteur, incidena antraxului s-a redus considerabil, ceea ce a fcut ca utilizarea lui s se extind cu repeziciune n ntreaga lume. Geniul lui Pasteur este i mai pregnant ilustrat prin prepararea vaccinului antirabic. Fr a cunoate natura agentului etiologic al turbrii, de a crui existen nu s-a ndoit nici un moment, Pasteur reuete s obin prin treceri succesive pe creier de iepure, virusul rabic fix. Acesta este incapabil s reproduc turbarea inoculat subcutanat, n schimb confer imunitate fa de infecia cu virus slbatic (de strad).
8

Practica imunizrii antirabice cu virusuri fixe s-a pstrat pn n zilele noastre. Lui Pasteur i revine i meritul de a fi izolat i descris numeroi ageni etiologici ai unor infecii ale omului i animalelor: Clostridium septicum (vibrionul septic al lui Pasteur), stafilococii, streptococii, etc. Pasteur a avut numeroi discipoli, n jurul su constituindu-se o adevrat coal la care s-au format o serie de emineni microbiologi. Dintre acetia, lui EMILE ROUX i ALEXANDRE YERSIN li se datoreaz studiul toxinelor microbiene, ultimul fiind i descoperitorul agentului etiologic al ciumei (Yersinia pestis), iar Edmond Nocard mpreun cu Roux au izolat i identifica tmai muli germeni microbieni cunoscui astzi sub denumirea de micoplasme. CHARLES EDUARD CHAMBERLAND este autorul unor inovaii tehnice deosebit de utile activitii curente de laborator, ca de exemplu primul filtru bacteriologic i autoclavul. Pintre discipolii lui Pasteur se numr i Victor Babe, fondatorul colii romneti de microbiologie. Marile descoperiri ale lui Pasteur n-au ntrziat s-i gseasc laturi aplicative i n alte domenii ale medicinei. Aa a fost cazul introducerii antisepsiei n chirurgie de ctre JOSEPH LISTER (1827-1917), cel mai convins i activ susintor al teoriei biologice a lui Pasteur, cruia i scria: Dac vei veni vreodat la Edinburg, vei gsi, cred, cea mai bogat rsplat vznd n spitalul nostru ce binefaceri pentru umanitate produce opera dumneavoastr. Este vorba despre considerabila scdere a mortalitii prin infecia de spital, ca urmare a folosirii fenolului n dezinfecie. Un alt fondator al microbiologiei, ROBERT KOCH (1843-1910), inspirndu-se din lucrrile lui Pasteur, va completa conceptul de infecie, introducnd criterii stricte de stabilire a responsabilitii etiologice a unui microorganism, care au rmas n literatura de specialitate sub numele de postulatele sau triada lui Koch. Numele su mai este legat de descoperirea agentului etiologic al tuberculozei, introducerea mediilor de cultur solide n practica bacteriologic, semnalarea fenomenului de alergie i prepararea primei substane revelatoare: tuberculina. n perioada marilor descoperiri ale lui Pasteur i Koch au fost identificai i descrii agenii etiologici a numeroase boli, cum ar fi: Clostridium tetani de ctre NICOLAER i KITASATO(1884), Salmonella de ctre EBERTH (1884), SALMON i SMITH (1886), Escherichia coli de ctre ESCHERICH (1885), .a. Secolului XX, a marcat o nou perioad de importante descoperiri i aprofundare a unor aspecte pn atunci incomplet elucidate, precum: introducerea substanelor chimioterapice i a antibioticelor n terapia infeciilor, relevarea unor aspecte morfofiziologice de finee ale microorganismelor, descoperirea virusurilor i a mecanismului infecei virale, efectuarea primelor studii de genetic molecular, dezvoltarea imunologiei i afirmarea ei ca ramur independent a tiinelor biologice.
9

n jurul anului 1910 PAUL ERLICH introduce n practica medical primul chimioterapic salvarsanul -, folosit cu succes n tratamentul sifilisului. Antibioticele au intrat n patrimoniul terapiei antimicrobiene n anul 1941, cnd Ernst Chain i Howard Florey trateaz primii pacieni cu penicilin. Efectul antibacterian al acestei substane a fost descoperit nc din 1929 de ctre ALEXANDER FLEMING, n urma sesizrii antagonismului exercitat de o ciuperc din genul Penicillium fa de o cultur de stafilococ. Aprofundarea cunoaterii morfologiei i fiziologiei microorganismelor este tributar progreselor nregistrate n domeniul opticii, electronicii i chimiei. Astfel, vizualizarea virusurilor i cunoaterea ultrastructurii microorganismelor au devenit posibile dup inventarea microscopului electronic (1930-1940), iar determinarea structurii chimice a acestora i a activitii enzimelor bacteriene, prin folosirea izotopilor radioactivi. n cadrul etapei contemporane de evoluie a microbiologiei, a debutat i sa dezvoltat genetica microbian, tiina care are ca obiect ereditatea i variabilitatea microorganismelor. Avnd un aparat genetic mai redus, virusurile i bacteriile au constituit obiectul de studiu al cercetrilor fundamentale de genetic. Primele observaii care au contribuit la stabilirea sediului informaiei genetice la microorganisme i macroorganisme au fost efectuate de ctre GRFFITH n 1928 pe bacteria Diplococcus pneumoniae (pneumococul). El a constatat c n contact cu pneumococi viruleni, omori prin cldur, pneumococii neviruleni devin viruleni. n 1944, AVERY i colaboratorii si au reuit transformarea genetic a unor pneumococi neviruleni n tipul virulent cu ajutorul AND extras de la pneumococii viruleni, demonstrnd astfel, c acidul dezoxiribonucleic (ADN) este suportul material al ereditii. F. IACOB i J. MONOD lanseaz n 1961 ipoteza existenei unui ARN mesager prin intermediul cruia informaia genetic este transferat de la ADN la ribozomi. Tot ei elaboreaz teoria reglajului genetic al activitii celulare (teoria operonului), pentru care au primit premiul Nobel. Lui GEORGE PALADE, A. CLAUDE i C. DUVE laureai ai premiului Nobel n 1974, le datorm descoperirea rolului ribozomilor n sinteza proteinelor. DEZVOLTAREA MICROBIOLOGIEI N ROMNIA nceputurile cercetrii i practicii microbiologice n Romnia se situeaz spre sfritul secolului al XIX-lea. VICTOR BABE (1854-1925) a fost fondatorul colii romneti de microbiologie. Marele savant romn s-a format lucrnd n perioada 1881-1884 n laboratorul lui PASTEUR i n 1885 n laboratorul lui KOCH. BABE a desfurat o prodigioas activitate tiinific elabornd peste 1.000 lucrri, 25 monografii i primul tratat de bacteriologie n colaborare cu VICTOR CORNIL n 1883. Descoperirea n
10

1887 a incluziilor produse de virusul turbrii n celulele piramidale din cornul lui Ammon, cunoscute sub numele incluziile lui Babe-Negri, a serurilor imune (mpreun cu LEPP n 1889), a paraziilor din hematiile unor specii de animale, paternitatea acestei descoperiri fiind recunoscut prin crearea genului Babesia n care au fost ncadrate microorganismele respective, reprezint contribuiile cele mai importante cu care VICTOR BABE a mbogit tezaurul tiinei romneti i universale. Alturi de acestea trebuie menionate i numeroasele sale cercetri asupra antagonismului bacterian i descrierea granulelor metacromatice din citoplasma bacilului difteriei (corpusculii Babe-Ernst). Paralel cu activitatea tiinific, VICTOR BABE a dezvoltat i o bogat activitate didactic, organizatoric i obteasc, conturndu-se ca o figur luminoas de savant patriot. Savanii care ulterior au dezvoltat n mod strlucit coala de microbiologie medical romneasc au fost: IOAN CANTACUZINO (1863-1934), CONSTANTIN IONESCU-MIHESTI (1883-1962), MIHAI CIUCA (18831969), DUMITRU COMBIESCU (1887-1961), iar n domeniul virusologiei CONSTANTIN LEVADITI (1874-1953) i TEFAN S. NICOLAU (1896-1967). PAUL RIEGLER (1867-1938) a fost fondatorul colii romneti de microbiologie veterinar. Elev al lui VICTOR BABE, el a introdus la noi n ar practica diagnosticului bacteriologic n medicina veterinar. n 1911 a fondat institutul de seruri i vaccinuri de uz veterinar (n acea perioad, al treilea de acest fel n lume), care n 1922 primete numele lui PASTEUR.. A desfurat o susinut activitate tiinific, remarcndu-se prin lucrrile sale privind bacilul morvei.. ALEXANDRU VECHIU (1890-1954) s-a remarcat printr-o activitate multilateral. El a condus, dup RIGLER, Institutul Pasteur i Catedra de Microbiologie. VECHIU a fost printre primii cercettori care au reuit adaptarea virusului pestei porcine pe iepure. ALEXANDRU CIUC (1880-1972) a fost profesor de Boli Infecioase la Facultatea de Medicin Veterinar din Bucureti. Prin activitatea sa tiinific a adus contribuii importante n probleme ca: infecia experimental cu bacilul morvei la taurine, tipizarea virusului febrei aftoase prin RFC, tratamentul durinei cu neosalvarsan etc. ILIE POPOVICI (1902-1982), personalitate fecund i multilateral, a adus printre altele contribuii deosebite n problema preparrii de noi vaccinuri contra febrei aftoase, turbrii, agalaxiei contagioase a oilor i caprelor i holerei aviare. NICOLAE MUNIU (1909-1977), dup o serie de lucrri inedite privind bacilul morvei, a iniiat i organizat cercetarea i producia de biopreparate n domeniul febrei aftoase. NICOLAE STAMATIN, profesor de Microbiologie la Facultatea de Medicin Veterinar din Bucureti, continund tradiia inaugurat de PAUL RIGLER contribuie la nflorirea colii romneti de Microbiologie Veterinar. Practica veterinar i datoreaz, printre altele, dou vaccinuri cu mare valoare profilactic: vaccinul anticrbunos preparat din tulpina acapsulogen 1190
11

R i vaccinul antirujetic preparat din tulpina VR2 - vaccinuri adoptate ulterior i n alte ri. Totodat, cercetrile fundamentale ntreprinse n domeniul biologiei sporogenezei, a antagonismului microbian, a bacteriofagilor speciilor din genul Bacillus, contribuiile aduse n domeniul clasificrii stafilococilor i pasteurelelor, completeaz palmaresul care l situeaz pe NICOLAE STAMATIN printre reprezentanii de frunte ai bacteriologiei veterinare romneti.

NTREBRI RECAPITULATIVE CAPITOLUL I 1. Care este obiectul de studiu al microbiologiei ? 2. Care sunt caracterele distinctive ntre principalele categorii de microorganisme? 3. Care este poziia microorganismelor n sistematica biologic? 4. Cine este considerat fondatorul medicinei raionale i de ce? 5. Cine a efectuat primele obsrvaii i descrieri ale microorganismelor, bazate pe examenul microscopic? 6. Care sunt meritele savanilor Louis Pasteur i Robert Koch n constituirea microbiologiei ca tiin i progresul ei? 7. Cine este fondatorul colii romneti de microbiologie i n ce const aportul su la dezvoltarea microbiologiei? 1. Care sunt mecanismele patogenitii la bacterii?

12

CAPITOLUL 2

VIRUSOLOGIE GENERAL

Din lumea att de diversificat a microorganismelor, cele mai mici i cu structura cea mai rudimentar sunt virusurile. Virusurile sunt definite ca forme acelulare sau subcelulare de via, metabolic inerte i lipsite de capacitatea de cretere i multiplicare nafara organismelor vii, parazite obligatoriu intracelular {tiina care se ocup cu studiul virusurilor se numete virusologie. Ea. constituie un domeniu particular al microbiologiei prin specificitatea metodelor de cercetare care constau n cultivarea virusurilor pe esuturi vii, microscopia electronic, metode chimice i imunologice proprii. 2.1. CARACTERELE GENERALE ALE VIRUSURILOR Virusurile prezint unele particulariti care le difereniaz de celelalte microorganisme, i anume: 1.- dimensiuni foarte reduse, cuprinse ntre 10 i 300 nanometri (nm), care le confer urmtoarele proprieti: - nu sunt vizibile la microscopul optic, ci numai la microscopul electronic; - traverseaz fitrele obinuite care rein bacteriile i filtrele de colodiu, fiind deci filtrabile i ultrafiltrabile; - nu sedimenteaz spontan sau prin centrifugare la 3000-6000 turaii /minut; sedimentarea are loc numai prin ultracentrifugare (10000 t/m) 2.- nu au un metabolism propriu deoarece sunt lipsite de enzime metabolice i prin urmare: -nu cresc; -nu se divid ci sunt multiplicate de celulele n care ptrund ; -sunt parazii obligatorii ai celulelor vii (animal, vegetal, bacterian) crora le deviaz metabolismul n sensul sintezei de noi particule virale. 2.2.FORMELE DE EXISTEN A VIRUSURILOR N NATUR Virusurile pot exista n natur sub trei forme biologice, fiecare dintre ele reprezentnd, n acelai timp, un stadiu al ciclului ontogenetic.

13

Virusul complet (virion ul) constituie forma matur care posed toate componenetele caracteristice virusului i toate atributele speciei din care face parte. El are capacitatea de a rezista un timp limitat nafara celulei sensibile i este dotat cu infeciozitate (posibilitatea de a ptrunde ntr-o celul gazd receptiv, capabil s-l reproduc) i patogenitate (capacitatea de a determina modificri morfologice i funcionale echivalente cu starea de boal). Virusul vegetativ reprezint o form de existen intracelular a virusului, sub form de elemente structurale dispersate n citoplasma celulei. Conform informaiei genetice coninute n acidul nucleic viral, celula cu aparatul ei enzimatic sintetizeaz componentele virale care, n urma ansamblrii, formeaz noi virioni. Eliberai din celula parazitat, acetia vor ptrunde n alte celule receptive, relund circuitul care asigur conservarea virusului n natur. n faza de virus vegetativ, dependena virusului de celul este total, el fiind incapabil de a supravieui nafara acesteia. Virusul integrat sau provirusul este tot o form de existen intracelular total dependent de celula gazd, ca i virusul vegetativ, deosebirea constnd n faptul c celula parazitat nu sintetizeaz material viral. Acidul nucleic viral se integreaz n genomul celulei receptive, unde rmne n stare ocult un timp nelimitat, comportndu-se ca un fragment de material genetic propriu celulei. Aceast form de existen este bine cunoscut la bacteriofagi (virusuri care paraziteaz bacteriile) i la virusurile tumorale. Virusul integrat se poate transforma n virus vegetativ, de obicei sub aciunea unor factori stresani pentru celul, n care caz genomul viral se desprinde de cromozomul celulei i ncepe s codifice sinteza de material viral, trecnd n stadiul de virus vegetativ 2.3. MORFOLOGIA i STRUCTURA VIRUSURILOR 2.3.1. FORMA i DIMENSIUNILE Morfologia virusurilor poate fi examinat numai prin microscopie electronic din cauza dimensiunilor reduse, de ordinul nanometrilor, a particulelor virale. Ele se prezint ntr-o gam foarte variat de forme, n funcie de specie (fig.1.): bastona drept, filament pliat, icosaedru, corpuscul sferic, crmid cu colurile rotunjite, ghiulea, spermatozoid, etc. n general: - forma rotunjit (corpuscular) este specific virusurilor patogene pentru animale (zoovirusuri); - forma alungit, virusurilor patogene pentru plante (fitovirusuri) i insecte; - forma spermatozoidic, virusurilor patogene pentru bacterii (virusurile bacteriofage). Dimensiunile virusurilor difer de la o specie la alta i sunt cuprinse ntre 10-20 nanometri la virusurile mici (ex. virusul febrei aftoase) i 300-350 nanometri la virusurile mari (ex. virusurile variolice).

14

Fig. 1 Reprezentarea schematic a formelor i dimensiunilor comparative ale principalelor grupe (familii) de virusuri n raport cu Escherichia coli: 1.Picornavirus; 2.Parvovirus; 3.Papovavirus; 4.Togavirus; 5.Leucovirus; 6.Adenovirus; 7.Reovirus; 8.Coronavirus; 9.Orthomixovirus; 10.Arenavirus; 11.Colifagul T; 12.Rhabdovirus; 13.Herpesvirus; 14.Iridovirus; 15.Paramyxovirus; 16.Poxvirus; 17.Escherichia coli. 2.3.2. STRUCTURA VIRUSURILOR Virusurile complete (virionii) sunt formate dintr-un acid nucleic ADN sau ARN -,care constituie genomul viral i un nveli proteic n contact direct cu acidul nucleic, numit capsid , formnd mpreun nucleocapsida..La unele virusuri, nucleocapsida este nconjutat de un nveli suplimentar numit pericapsid (anvelop, peplos), prevzut cu cu o serie de emergene numite spiculi.(fig.2).

Fig.2 Structura general a virusurilor. De la interior spre exterior: mov genomul viral, galben- capsida alctuit din capsomere, verde- pericapsida prin care proemin spiculii (sferele de culoare verde i maro) 2.3.2.1 Genomul viral Genomul viral este reprezenrat de acidul nucleic viral i n funcie de natura acestuia, virusurile se mpart n ribovirusuri cu ARN i dezoxiribovirusuri
15

cu ADN. La virusurile fitopatogene (patogene pentru plante) acidul nucleic este ntotdeauna ARN, n timp ce la virusurile zoopatogene i la bacteriofagi, poate fi unul sau altul. Structura acidului nucleic poate fi, n funcie de numrul lanurilor din care este constituit molecula, monocatenar sau dublu catenar. De regul, dezoxiribovirusurile au AND dublu catenar, iar ribovirusurile au ARN monocatenar. Genomul viral conine ntre 3 i 250 de gene i este componenta esenial a virusului, deoarece poart informaia genetic necesar devierii metabolismului celulei gazd, n sensul sintezei constituienilor virali. Ribovirusurile constituie un unicat n biologie, n ce privete posibilitatea pstrrii informaiei genetice de ctre ARN. 2.3.2.2. nveliul nveliul extern, prezent la toate virusurile, se numete capsid (gr. kapsa=cutie) i este format din mai multe subuniti rotunde de natur proteic, numite capsomere(gr. kapsa+meros=pri ale cutiei). La unele virusuri, exterior capsidei se gsete un al doilea strat al nveliului, nimit pericapsid (anvelop, peplos), care la unele specii (ex. virusul pseudopestei aviare) prezint nite emergene (spiculi, hemaglutinine) cu rol de adsorbie pe diferite substraturi celulare i de aglutinare a globulelor roii (hemaglutinare). La virusurile gripale, pericapsida conine nite enzime numite neuraminidaze care favorizeaz ptrunderea virusului n celula receptiv. Virusurile lipsite de pericapsid se numesc virusuri nude. Capsomerele care alctuiesc capsida sunt riguros aranjate, conform unei arhitecturi cristalografice, numrul i simetria lor fiind bine definite pentru fiecare virus n parte. Se cunosc trei tipuri principale de simetrie a capsidei virale i anume: - capsid cu simetrie icozaedral sau cubic, de tipul 5, 3, sau 2 (fig.2) dispus n jurul genomului (acidul nucleic viral) pliat sub form de ghem;

Fig. 2 Schema tipurilor structurale de capsomere: 1 i 2 = lanuri peptidice; 3 = monomer; 4 i 5 = oligomere; 4 = hexamer (hexon); 5 = pentamer (pepton).

- capsid helicoidal, de forma unui tub cilindric care rezult din dispunerea capsomerelor n form de spiral, asemntor unui resort n stare comprimat Spirala capsomerelor delimiteaz pe faa intern a tubului un an n care este aezat tot helicoidal, ntr-un perfect paralelism cu capsida, genomul (fig. 3).. - capsida cu simetrie binar sau dubl este caracteristic bacteriofagilor cu cap i coad. Capsida capului este de tip icozaedral, iar capsida cozii este structurat dup tipul de simetrie helicoidal (fig. 4.).
16

Capsida mpreun cu pericapsida protejeaz genomul viral de aciunea factorilor de mediu i asigur fixarea virionului de receptorii celulei gazd.

Fig. 3 Schema structurii capsidei helicoidalea virusului mozaicului tutunului.

Fig. 4 Tipuri structurale de bacteriofagi (dup Bradley, 1971): 1.fagi cu coada contractil; 2.fagi cu coada lung necontractil; 3.fagi cu coada scurt; 4.fag fr coad, cu capsomere mari la coluri; 5.fag fr coad, cu capsomere mici la coluri; 6.fag filamentos. 2.4. RELAIA VIRUS GAZD 2.4.1. TROPISMUL VIRUSURILOR Deoarece genomul viral este extrem de simplu, virusurile nu dein informaia genetic necesar sintezei enzimelor metabolice (de ex. enzimele necesare catabolizrii glucidelor, enzimele care catalizeaz reaciile de biosintez a proteinelor, etc.).Prin urmare, fiind lipsite de metabolism propriu, ele sunt obligate s paraziteze diverse gazde celulare (celula animal, vegetal, bacterian), pentru ca, folosind mainria biochimic a acestora s poat supravieui i prolifera. Virusurile animale ptrund n organism pe diverse ci: digestiv, respiratorie, cutanat, pielea i mucoasele lezionate sau prin nepturi produse de artropode (arbovirusurile). Unele virusuri rmn cantonate la acest nivel iar altele sunt diseminate n organism pe dou ci: calea sanguin (diseminare hematogen) sau calea nervoas (diseminare neurogen). Diseminarea hematogen sau viremia const n trecerea virusurilor n snge la nivelul capilarelor i vehicularea lor prin intermediul leucocitelor polimorfonucleare neutrofile. Diseminarea neurogen (septinevrita) se realizeaz de-a lungul axonilor neuronali i poate fi centrifug (ex. virusul herpetic) sau centripet (ex. virusul turbrii). Virionii diseminai n ntreg organismul se localizeaz n anumite esuturi fa de care prezint un tropism special (histotropism) sau numai n anumite

17

celule (citotropism). Virusurile manifest, de asemenea, genotropism sau afinitate pentru specia biologic pe care o paraziteaz. Genotropismul a permis mprirea virusurilor n monopatogene (patogene pentru o specie) i polipatogene (patogene pentru dou, trei, sau mai multe specii), n zoovirusuri, fitovirusuri i bacteriofagi. n funcie de histotropism, virusurile pot fi grupate n : - virusuri epiteliotrope (dermatotrope), care au afinitate pentru piele i mucoase (ex. virusurile variolice , virusul febrei aftoase, virusurile herpetice); - virusuri neurotrope, cu afinitate pentru esutul nervos (ex. virusul rabic, virusul poliomielitei); - virusuri organotrope (viscerotrope), cu afinitate pentru anumite organe interne, care, la rndul lor, pot fi clasificate n: pneumotrope (ex. virusurile gripale, virusul jigodiei), enterotrope (ex. virusul diareei viralebolii mucoaselor); hepatotrope (virusurile hepatitelor); - virusurile pantrope (mezenchimotrope), cu afinitate pentru toate celulele i organele bogate n celule mezenchimale.(ex. virusurile pestelor la diferite specii animale. Citotropismul reprezint afinitatea virusurilor pentru anumite celule din cadrul aceluiai esut. De exemplu, virusul rabic (v. turbrii) se multiplic de preferin n neuronii piramidali din cornul lui Amon, iar virusul poliomielitei, n neuronii motori din coarnele anterioare ale mduvei spinrii. 2.4.2. MULTIPLICAREA VIRUSURILOR Virusurile nu se multiplic singure ci ele sunt sintetizate de celula gazd prin activitatea metabolic a acesteia, deviat de la normal n urma substituirii informaiei genetice a celulei cu cea a virusului.. Att proteinele virale, ct i noii acizi nucleici, se constituie pe seama rezervelor energetice i nutritive (aminoacizi, nucleotide) ale celulei parazitate. Multiplicarea virusurilor implic patru etape succesive. 1. Adsorbia sau fixarea virionului pe receptorul celular Adsorbia virionului se face numai pe anumite puncte de pe suprafaa membranei celulelor gazd. Responsabilitatea fixrii o poart complementaritile de natur stereochimic, electrostatic i geometric dintre capsida sau pericapsida virionului i membrana celular. Adsorbia poate fi oprit prin blocarea receptorilor n urma aciunii unor factori fizici, chimici sau biologici. Virionul rmas extracelular este repede distrus de factorii de aprare ai organismului. 2. Ptrunderea virionului n celul. Ptrunderea virionului prin membran se realizeaz printr-un proces activ de ncorporaredin partea celulei, numit viropexie. Membrana celular se invagineaz i se adncete progresiv n dreptul virionului pn cnd acesta este complet nglobat n celul. Virusul ptruns n celul este inclus ntr-o vacuol delimitat de membrana celular invaginat, care se dezintegreaz treptat.

18

n cazul virusurilor zoopatogene i fitopatogene, virionul ptrunde n ntregime n celula sensibil, inclusiv capsida, iar la bacteriofagi, numai acidul nucleic dup o prealabil decapsidare. 3. Multiplicarea propriu-zis Dup ptrunderea n celul are loc mai nti decapsidarea virusurilor zooi fitopatogene sub aciunea enzimelor produse de celula gazd, numite decapsidaze. Multiplicarea virusurilor implic totdeauna trei procese: - Replicarea genomului viral. La scurt timp dup ptrunderea n celul, acidul nucleic viral i preia atributele de material gemetic autonom, programnd i dirijnd sinteza componentelor virale: n prima faz, a acidului nucleic, iar apoi a proteinelor capsidale. Replicarea genomului are loc n mod diferit n funcie de structura monosau dublu catenar a acidului nucleic: replicare semiconservativ la ADN i ARN dublu catenar i replicare mai nti complementar i apoi semiconservativ cnd acizii nucleici sunt monocatenari. - Biosinteza proteinelor capsidale Paralel cu replicarea genomului viral , la nivelul ribozomilor celulari ncepe biosinteza moleculelor de proteine specifice capsidei, coordonat de acidul nucleic viral. Prin mecanisme nc neelucidate, genomul viral scoate din funcie AND celular n momentul copierii informaiei de pe AND pe ARNm . n celul va apare un ARNm transcris de pe genomul viral, care va transmite la nivelul ribozomilor un mesaj genetic nou, oblignd celula s sintetizeze material viral n locul enzimelor i a celorlalte proteine proprii. Sub aceast form, de subuniti dispersate n citoplasm i lipsite de identitate morfologic, virusurile nu pot fi puse n eviden prin mijloace electronooptice, motiv pentru care aceast faz se numete faza de eclips. - Ansamblarea sau morfogeneza noilor virioni La sfritul fazei de biosintez,dup ce n celul s-au acumulat cantiti mari de acid nucleic i proteine virale, are loc asamblarea noilor virioni. La virusurile mici, aezarea capsomerelor n jurul genomurilor virale, fenomen numit ncapsidare, se petrece spontan printr-un proces de autoansamblare. La cele mai multe virusuri, asamblarea implic ns intervenia unor enzime. ntre sinteza proteinelor capsidale i apariia lor n structura virionilor nou formai exist un interval de aproximativ 20 de minute. Morfogeneza, ca regul general, are loc pentru virusurile ARN n citoplasm, iar pentru virusurile AND, intranuclear, dup migrarea materialului viral din citoplasm n nucleul celulei gazd. - Eliberarea virionilor din celul Virionii nou formai pot fi eliberai din celul prin mai multe mecanisme 1. nmugurirea sau burjeonarea este modul cel mai frecvent de eliberare a virusurilor din celul. :

19

ntr-o prim faz, virionii nou asamblai sunt inclui n nite vezicule (cisterne) care se ataeaz de faa intern a membranei celulare pe care o bombeaz, proeminnd asemntor unor muguri. Ulterior, virusurile se detaeaz de celul prin mici aperturi care apar n membran. 2. Liza celulei gazd sub aciunea unor enzime sintetizate n celul n ultima faz a morfogenezei.. Acest mecanism, caracteristic bacteriofagilor, se ntlnete rar la virusurile animale. 3.Eliberarea virionilor consecutiv morii celulei i dezintegrrii acesteia. Aceste virusuri apar cel mai trziu, iar punerea lor n libertate se caracterizeaz printr-o frecven moderat. 4. Trecerea virionilor direct la celula adiacent celei n care a avut loc multiplicarea, prin porii membranei celulare. 2.4.3. MODIFICRILE MORFOFIZIOLOGICE ALE CELULELOR INFECTATE CU VIRUSURI Efetele multiplicrii in vivo a virusurilor zoopatogene difer n funcie de specia de virus i se traduc prin trei categorii de modificri morfologice i fiziologice ale celulei parazitate: - degenerarea i moartea celular (efect citopatic); - transformarea neoplazic (efect citocinetic); - supravieuirea, cu prezena incluziilor (efect incluziogen). Efectul citopatic const ntr-o serie de modificri morfologice ale celulelor infectate de virusuri i anume: - ratatinarea celulelor (arbovirusurile); - mrirea i fuzionarea celulelor (paramixovirusurile); - vacuolizarea citoplasmei (virusurile vacuolizante); - distrugerea celulei prin liz (enterovirusurile). Efectul citocinetic sau transformarea neoplazic - vezi cap. 2.4.4. Efectul incluziogen. n celulele n care se multiplic virusul, apar frecvent structuri corpusculare de dimensiuni variabile, numite incluzii virale. Ele au fost descrise cu mult nainte de descoperirea virusurilor i poart numele autorilor care le-au observat i descris pentru prima oar. De exemplu, incluziile Babe-Negri n turbare; incluziile Bollinger, n variola aviar; incluziile Guarnieri, n infeciile cu virus vaccinal, etc. Mecanismul de formare, locul i natura lor este diferit n funcie de virus. Evideniere lor prin coloraii speciale reprezint o metod frecvent utilizat n diagnosticul unor viroze. Specificitatea lor pentru un anumit virus este dat de prezena lor n esutul pentru care manifest tropism i de poziia lor: n citoplasm sau n nucleu. La noi n ar, la nivelul laboratoarelor veterinare judeene, evidenierea incluziilor Babe-Negri n neuronii piramidali din cornul lui Ammon, constituie o metod curent pentru diagnosticul turbrii.

20

2.4.4. TIPURILE DE INFECIE VIRAL Multiplicarea virusurilor n organismul animalelor poate declana trei tipuri diferite de rspuns din partea acestuia. 1. Infecia viral acut (boala clinic) apare atunci cnd multiplicarea virusului determin modificri care produc o alterare a strii normale a organismului i apariia strii de boal cu semne clinice evidente. Gravitatea bolii virale clinice este condiionat de o serie de factori ca: numrul de virioni infectani, rezistena general a organismului, vrsta, sexul, alimentaia, igiena, etc. 2. Infecia viral inaparent sau ocult se caracterizeaz prin lipsa semnelor clinice ca urmare a stabilirii unui echilibru ntre organism i virus. Acest tip de infecie se ntlnete n anemia infecioas a calului i n leucozele aviare i mamifere. Unii factori de mediu ca iradiaiile, temperatura, umezeala, sau factori interni ca infeciile intercurente, stimului endocrini, etc.pot determina ruperea echilibrului dintre organism i virus i implicit la instalarea bolii clinice. 3. Transformarea neoplazic este o modificare determinat de virusurile oncogene sau citochinetice, caracterizat printr-o multiplicare anarhic a celulelor infectate cu aceste virusuri. Ipoteza originii virale a unor tumori este veche (Metchnikov i Borrel, 1903) iar capacitatea unor virusuri de a produce tumori n condiii naturale i experimentale a fost evideniat n anul 1908 de Ellerman i Bang , care au demonstrat c leucozele aviare pot fi transmise n serie prin filtrate acelulare. Din 600 de virusuri identificate pn n prezent la animale, la aproximativ (150) s-a demonstrat un potenial oncogen. Mecanismul oncogenezei produse de virusuri nu este pe deplin cunoscut dar se pare c n genomul celulei gazd se produc modificri de ordin molecular prin integrarea unor gene virale. Aceast adiie genetic determin transformri profunde ale celulei normale care, n final, duc la pierderea controlului reglator asupra multiplicrii celulare i la apariia de tumori benigne i maligne. 2.5. ACIUNEA UNOR AGENI FIZICI i CHIMICI ASUPRA VIRUSURILOR Cunoaterea comportamentului virusurilor fa de factorii fizici i chimici are implicaii practice att pentru identificarea unui virus, ct i pentru msurile de profilaxie nespecific a bolilor virale. Temperatura n general, virusurile sunt sensibile la cldur, unele inactivndu-se n mediul extern la temperatura de 20-22C, n decurs de cteva ore. Inactivarea virusurilor are loc n majoritatea cazurilor la 56C n 30 minute, iar la 100C n cteva secunde. Temperatura optim pentru multiplicarea virusurilor coincide, n marea majoritate a cazurilor, cu temperatura optim pentru celula gazd. De aceea
21

reacia febril a organismului n cursul infeciei trebuie privit ca un mijloc de aprare antiviral, avndu-se n vedere c temperatura corporal realizat prin hipertermie este de cele mai multe ori nefavorabil multiplicrii virusului, fr a fi nociv pentru celula gazd. Temperaturile sczute au proprieti conservante, metoda folosit pentru pstrarea virusurilor n colecii, luni sau chiar ani de zile, fiind congelarea la 40 pn la 196C . Variaiile de pH Limitele de pH n care virusurile i menin viabilitatea se situeaz ntre 59, cu unele excepii cum ar fi enterovirusurile care i pstreaz infeciozitatea i la pH 2,2 (dup Buxton i col. citai de Carp-Crare M., 2001). Energia radiant Radiaiile cele mai active fa de virusuri sunt ultravioletele n doze mari. Efectul acestora este ns diminuat proporional cu protecia pe care o exercit asupra virusurilor materia organic n care sunt incluse (secreii, excreii, cadavre). Substanele chimice Diversele substane dezinfectante i antiseptice ca formolul, soda caustic, sublimatul de mercur, soluiile de iod, soluiile srurilor de argint, etc., distrug virusurile, viteza de aciune fiind n funcie de durata de contact i de concentraia soluiei. Hidroxidul de sodiu (soda caustic) exercit un puternic efect virulicid mai ales n soluie ferbinte. Formaldehida este activ dar aciunea ei antiviral este mai lent. Ea se utilizeaz ns n mod curent la prepararea vaccinurilor inactivate (omorte), deoarece nu modific structura antigenic a virusurilor. Eterul i cloroformul au o aciune electiv, n sensul c sunt inactivante pentru unele virusuri i inofensive pentru altele, astfel nct sensibilitatea la cele dou substane reprezint pentru virusuri, un criteriu taxonomic. Glicerina n soluie salin 50% constituie un bun conservant pentru majoritatea virusurilor, asigurndu-le infeciozitatea luni i chiar ani de zile. Antibioticele i chimioterapicele , substane de uz curent n terapia antibacterian (penicilina, streptomicina, tetraciclinele, sulfamidele, etc.), sunt inactive fa de virusuri. 2.6. CLASIFICAREA VIRUSURILOR Problema clasificrii virusurilor este nc nerezolvat; ea formeaz obiectul de studiu al unui comitet internaional. Principalele criterii care stau la baza clasificrii virusurilor sunt: - natura chimic a acidului nucleic (ADN sau ARN); - simetria nucleocapsidei (cubic, helicoidal, binar); - prezena sau absena unui nveli pericapsidal;
22

- numrul de capsomere pentru virusurile cu simetrie cubic sau diametrul nucleocapsidei pentru virusurile cu simetrie helicoidal. Pe baza acestor criterii, virusurile au fost ncadrate n phylum VIRA mprit n dou subphyla pe baza naturii chimice a genomului viral: - DEZOXIVIRA, - RIBOVIRA n funcie de simetria capsidei helicoidal sau cubic - , virusurile se grupeaz n clase: - dezoxihelica i dezoxicubica; - ribohelica i ribocubica. Ordinele se bazeaz pe prezena sau absena unui nveli pericapsidal, iar familiile, n principal, pe numrul de capsomere i diametrul nucleocapsidei. Pe baza unor criterii suplimentare, n cadrul familiilor au fost individualizate subfamilii i genuri virale, iar n cadrul fiecrui gen, una sau mai multe specii. Virusurile au o nomenclatur latin cu terminaiile: - viridae, pentru familii; - virus, pentru gen . Exemple: familia Coronaviridae genul Coronavirus; familia Parvoviridae, genul Parvovirus.

NTREBRI RECAPITULATIVE

CAPITOLUL II 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Care sunt formele de existen a virusurilor n natur i caracteristicile lor? Ce forme i ce dimensiuni pot avea particulele virale? Care sunt prile componente ale unui virus? Pe ce ci ptrund i disemineaz virusurile n organism? n ce const tropismul virusurilor i cum se clasific virusurile n funcie de tropism? Care sunt etapele multiplicrii particulelor virale? Care sunt efectele multiplicrii intracelulare a virusurilor ? Care sunt tipurile de infecie viral? Cum se comport virusurile fa de temperatur, pH, radiaii i substanele dezinfectante?

23

CAPITOLUL 3

BACTERIOLOGIE GENERAL

3.1. CONCEPTUL DE BACTERIE Bacteriologia este ramura microbiologiei care se ocup cu studiul bacteriilor. Termenul de bacterie a fost creat de F e r d i n a n d C o h n n 1872, odat cu ncercarea de a elabora una dintre primele clasificri ale acestor microorganisme. Bacteriile sunt microorganisme unicelulare cu structur procariot - tip de organizare caracterizat prin lipsa membranelor intracelulare, spre deosebire de tipul eucariot, la care nucleul i unele organite (cloroplastele, mitocondriile) posed membrane proprii. Materialul genetic sau genomul bacterian este reprezentat de un cromozom format dintr-o molecul mare de ADN i de uniti ereditare extracromozomale numite plasmide, constituite din molecule de ADN mult mai mici (aproximativ 1% din masa cromozomului). Bacteriile sunt lipsite de mitocondrii, aparat Golgi i reticul endoplasmatic propriu-zis. Funciile acestor structuri, caracteristice celulei eucariote, sunt suplinite de alte componente celulare, mai ales de membrana citoplasmatic. Bacteriile sunt metabolic active, deoarece dispun de un echipament enzimatic propriu care realizeaz reaciile celulare de degradare i biosintez. Nutriia este de tip absorbtiv, din punct de vedere al accesului substanelor nutritive n celul i de tip chimiotrof sau fototrof, dup modul de obinere a energiei necesare proceselor nutritive. Principala modalitate de multiplicare a bacteriilor este diviziunea simpl binar sau sciziparitatea. Unele specii bacteriene pot exista n natur sub dou forme biologice alternative: forma vegetativ care reprezint celula bacterian propriu-zis, dotat cu toate nsuirile caracteristice speciei din care face parte i forma sporulat, care este o form de rezisten i de conservare a speciei n condiii ostile, improprii vieii. Spre deosebire de celula vegetativ biologic activ, sporul bacterian este o form dormand, caracterizat prin absena funciilor de multiplicare i a celor biosintetice i cu o foarte redus intensitate a celorlalte activiti vitale. Bacteriile se difereniaz de celelalte grupe de microorganisme prin caracterele prezentate n tabelul 1.

24

3.2. NOIUNI DE TAXONOMIE i NOMENCLATUR BACTERIAN 3.2.1. TAXONOMIA BACTERIILOR Taxonomia (gr. taxon = grup) sau sistematica biologic este tiina clasificrii. Un taxon biologic reunete o sum de indivizi asemntori ntre ei n virtutea descendenei dintr-un strmo comun, deci posesori ai unei informaii genetice comune. Prin urmare, clasificarea organismelor vii este o clasificare natural sau filogenetic. Comparativ cu celelalte regnuri, clasificarea organismelor procariote pe baza acestui criteriu a ntmpinat numeroase dificulti, generate de cauze obiective cum ar fi imposibilitatea studierii bacteriilor ca indivizi ci doar ca populaii, din cauza dificultilor de manipulare a unei singure celule. n consecin, clasificarea bacteriilor s-a sprijinit deseori pe criterii fenotipice discutabile , din care deriv gradul mult mai mare de convenional i arbitrar al taxonomiei bacteriene, n comparaie cu cel al plantelor i animalelor. Gruparea bacteriilor n categorii taxonomice pe criterii filogenetice a devenit posibil relativ recent, prin aplicarea tehnologiilor moderne de biologie molecular i biochimie n studiile de genetic bacterian. 3.2.1.1. Categorii de taxoni Conceptul de specie bacterian. Unitatea taxonomic de baz a lumii vii este specia. n cazul organismelor superioare, din regnul vegetal sau animal, exist criterii bine stabilite de delimitare a speciilor, cel mai important fiind capacitatea de ncruciare. Lund n considerare acest criteriu de baz , specia poate fi definit ca o comunitate reproductiv format din populaii care habiteaz un anumit areal i ai cror indivizi se ncrucieaz liber n natur cu orice individ de sex opus, dnd natere la descendeni fertili care menin relativ omogen fondul de gene al populaiei (Buiuc G., 1999). Spre deosebire de reproducerea organismelor superioare, diviziunea celular a bacteriilor este o nmulire vegetativ, iar schimbul de material genetic prin conjugare (vezi cap. Genetic) este rar i nu reprezint un caracter de specie. Aceste diferene, la care se adaug deosebirile fenotipice mai puin tranante ale bacteriilor i capacitatea mult mai mare de a suferi variaii fenotipice i genotipice, sporesc gradul de dificultate n delimitarea speciilor bacteriene i gsirea unui punct de vedere unitar asupra conceptului de specie bacterian. Din cele cteva ncercri de definire, crora literatura ultimelor decenii lea acordat mai mult atenie ( S t a m a t i n- 1958; C o w a n- 1975; G o r d o n 1978; S t a l e y i K r i e g 1984; citai de Rducnescu i col., 1986) rezult c speciile bacteriene ar putea fi privite ca populaii de celule cu caractere fenotipice comune, prin care difer semnificativ de alte populaii. Fiecare populaie care
25

aparine unei specii poart numele de tulpin bacterian (clon sau su). Ea este o cultur pur care i are originea ntr-o singur izolare dintr-un mediu natural. Pentru practica bacteriologic, tulpina bacterian are, prin analogie cu organismele superioare, valoarea unui individ. Toate examenele necesare identificrii bacteriilor i ncadrrii lor taxonomice se execut pe tulpini i nu pe celule izolate, plecnd de la premiza c o populaie care constituie o tulpin provine din descendena uneia sau a unui numr restrns de celule i c este genetic omogen. Taxonii de rang superior speciei, n succesiunea lor ascendent, sunt: genul, familia, ordinul, clasa i diviziunea (ncrengtura sau phylum). Genul reprezint un grup taxonomic alctuit din mai multe specii nrudite cu specia tip. El poate fi format dintr-o singur specie (gen monotipic), sau, obinuit,din mai multe specii. Toate bacteriile i au locul n cadrul unui gen, iar identificarea genului st la baza diagnosticului bacteriologic curent. Familia grupeaz mai multe genuri nrudite, dintre care unul este considerat genul tip. Numeroase genuri nu au fost ncadrate nc n familii. Ordinul este un taxon format din familii nrudite, mai rar utilizat, puine grupe de bacterii fiind ncadrate n ordine. Clasa este un taxon superior, care grupeaz mai multe ordine nrudite. Diviziunea reprezint o grupare de clase nrudite. 3.2.2. NOMENCLATURA BACTERIILOR Conform normelor generale de nomenclatur n biologie, fiecare bacterie este denumit, dup sistemul binominal al lui L i n n , prin dou cuvinte latinizate (de exemplu, Bacillus anthracis), care caracterizeaz foarte sintetic bacteria respectiv. Primul cuvnt indic genul i este un substantiv la singular de origine latin, greac, sau de alt origine, dar latinizat. Numele genurilor sunt inspirate , de regul, de : - unele caractere morfologice, frecvent forma i modul de grupare (Bacillus = baston mic; Staphylococcus = ciorchine de strugure; Sarcina = pachet, etc.), asociate uneori cu habitatul natural al bacteriei (Lactobacillus = bastona din lapte); - numele bacteriologului care a izolat primul bacteria respectiv sau a avut merite deosebite n studiul ei : Brucella (Bruce), Pasteurella (Pasteur), Escherichia (Escherich), etc. Numele genului se scrie cu iniial majuscul, ntreg sau, n cazul unor enumerri i numai atunci cnd precede numele speciei, prescurtat : B. anthracis, E. coli, S. aureus. Cel de-al doilea cuvnt denumete specia i este descriptiv pentru substantivul care reprezint genul. Numele speciei se scrie ntotdeauna cu liter mic. El se poate referi la : - un caracter morfologic, cultural sau biochimic (Staphylococcus aureus, Lactobacillus acidophilus, etc.); - gazda receptiv la care produce infecii (Brucella suis, Streptococcus equi, Mycoplasma gallinarum, etc.);
26

- boala, un simptom sau o leziune caracteristic (Clostridium tetani, Bacillus anthracis, Mycoplasma agalactiae, Listeria monocytogenes, etc.); - numele bacteriologului care a descris primul bacteria (Actinobacillus lignieresii, Clostridium chauvoei, Coxiella burneti, etc.). Numeroase specii bacteriene au i nume comune, folosite deseori n vorbirea curent, ca de exemplu : bacilul piocianic sau bacilul puroiului albastru , pentru Pseudomonas aeruginosa; bacilul lui Koch sau B.K., pentru Mycobacterium tuberculosis; bacilul tetanosului, pentru Clostridium tetani, etc Ordinul i familia sunt denumite cu numele genului celui mai reprezentativ pentru gruparea taxonomic respectiv, la care se adaug sufixele ,,ales pentru ordin i ,,aceae pentru familie (ex. genul reprezentativ Rickettsia, ordinul Rickettsiales, familia Rickettsiaceae). 3.3. MORFOLOGIA SI BIOLOGIA BACTERIILOR 3.3.1. MORFOLOGIA CELULEI VEGETATIVE Cunoaterea caracteristicilor morfologice (form, dimensiuni, mod de grupare, afiniti tinctoriale, particulariti morfologice) are o importan deosebit n cercetarea i identificarea bacteriilor, deoarece acestea constituie criterii taxonomice de baz. 3.3.1.1. Forma si modul de grupare a bacteriilor Forma celulelor bacteriene este greu de apreciat n probele prelevate din mediile naturale, motiv pentru care morfologia bacteriilor se studiaz pe celulele cultivate n condiii artificiale de laborator pe medii de cultur adecvate. Forma bacteriilor este controlat genetic, dar este influenat ntr-o mare msur de factorii de mediu (temperatur, pH, compoziia mediului de cultur, etc.) i de vrsta culturii. Deoarece condiiile de cultur se modific n timp putnd cauza apariia unor forme aberante, morfologia bacteriilor se apreciaz numai pe culturi tinere (proaspete). Dup forma celulei, bacteriile pot fi grupate n patru categorii distincte: sferice, cilindrice, spiralate sau helicoidale i ptrate (fig.5.).

Fig.5. Forme posibile la bacterii 1.coc sferic; 2.coc oval; 3.coc asimetric cu un pol ascuit i unul rotunjit; 4.coc asimetric reniform; 5.form cocoid; 6.cocobacil; 7.bacil fin; 8.bacil asimetric n form de mciuc; 9.bacil cu capetele retezate; 10.bacil cu capetele rotunjite; 11.vibrion; 12.spirochet cu spire mari; 13.spirochet cu spire mici.
27

La cele mai multe specii bacteriene, celulele fiice rezultate n urma diviziunii se separ i rmn independente datorit micrii browniene, activitii flagelilor n cazul bacteriilor mobile, curenilor de convecie din mediu, etc. La unele specii ns, majoritatea celulelor-fiice nu se despart timp de una sau mai multe generaii, formnd constant grupri caracteristice cu valoare taxonomic . Modul de grupare a bacteriilor este determinat de raportul geometric dintre planurile succesive de diviziune i de tendina celulelor-fiice de a rmne unite. Bacteriile sferice In terminologia curent aceste bacterii poart denumirea de coci. Ele pot avea form sferic, oval, lanceolat sau reniform, diametrele celulei fiind aproximativ egale. In funcie de raporturile care se stabilesc ntre celulele-fiice dup diviziune, cocii pot fi izolai sau grupai. Principalele moduri de grupare sunt (fig. 6): - diplococul, care rezult prin diviziunea celulelor n planuri succesive paralele, celulele fiice rmnnd grupate cte dou; - streptococul, constituit din coci nlnuii ca urmare a diviziunilor succesive n planuri paralele i a persistenei legturilor ntre celulele-fiice pe parcursul mai multor generaii;

Fig.6. Modalitile de grupare a cocilor n funcie de orientarea planurilor de diviziune celular - tetrada sau tetracocul - o grupare de patru celule rezultat din dou diviziuni succesive n planuri perpendiculare; - sarcina - o grupare de opt coci sub forma a dou tetrade suprapuse, care rezult n urma a trei diviziuni n planuri perpendiculare: al doilea pe primul i al treilea pe primele dou; - stafilococul, la care planurile succesive de diviziune sunt dispuse n direcii diferite, astfel nct celulele rezultate formeaz grmezi neregulate asemntoare ciorchinilor de struguri Bacteriile cilindrice cunoscute sub denumirea comun de bacili, au form de bastonae. Raportul dintre cele dou axe variaz ns foarte mult, nct,

28

unii bacili au un aspect filamentos, uneori ramificat, iar alii se apropie de forma sferic-oval, fiind numii din acest motiv cocobacili. Bacilii pot fi drepi sau uor ncurbai la mijloc sau la una din extremiti, cu capetele tiate drept ca la Bacillus anthracis, rotunjite ca la majoritatea speciilor, ascuite ca la Fusobacterium fusiformis, sau dilatate n form de picot sau de haltere - caracteristic a genului Corynebacterium Diviziunea bacililor are loc dup un singur plan transversal pe axul longitudinal. Dup diviziune, bacilii pot rmne izolai sau grupai cte doi (diplobcili), n lanuri cu lungimi variabile (streptobacili), n palisad (asemntor dinilor unui pieptene), sau sub form de idiograme chinezeti (fig. 7).

Fig.7. Modalit ile de grup are a bac ililor: 1.diplobacil; 2.grupare n forma literei V; 3.streptobacil; 4.filament; 5.filament cu citoplasm granular; 6.form ramificat; 7.grupare n palisad; grupare n ideograme chinezeti. Filamentul este considerat de unii autori o form iar de alii, un mod de grupare. Se pare c ultimul punct de vedere este mai corect ntruct filamentul reprezint n realitate un plasmodiu, multiplicarea citoplasmei i a materialului nuclear nefiind urmat i de constituirea pereilor celulari i a membranelor citoplasmatice separatoare ntre celule. Formele ramificate sunt o excepie la bacterii. Ele reprezint tot plasmodii i sunt caracteristice actinomicetelor - grup de bacterii limitrofe, din punct de vedere morfologic i al poziiei taxonomice, ciupercilor. Bacteriile spiralate sau helicoidale In funcie de numrul de spire i flexibilitatea peretelui celular, exist trei subtipuri morfologice de bacterii spiralate : - vibrionul, cu aspect de virgul sau asemntor literei ,,S; - spirilul, cu mai multe spire i un perete celular rigid, care i confer stabilitate morfologic i dimensional.; - spirocheta, alctuit de asemenea din mai multe spire, dar care sunt flexibile (se pot strnge sau relaxa) datorit elasticitii peretelui celular . Bacteriile p trate au fost puse n eviden n probele de ap hipersalin prelevate din blile Peninsulei Sinai. Ele formeaz adesea placarde de 4-16 celule
29

rezultate din mai multe diviziuni succesive, la care se disting cu mult claritate planurile de diviziune. Forma ptrat a acestor bacterii i faptul c sunt mult aplatizate (0,1 0,5 m grosime) se explic prin lipsa presiunii interne a celulelor n mediu hiperosmotic, situaie n care, teoretic,bacteriile pot lua orice form. 3.2.1.2. Constantele fizice Dimensiunile bacteriilor variaz n funcie de specie, ntre 0,1 15 micrometri (m) lungime (bacteriile filamentoase ajunnd pn la 500 m) i 0,02 2 m, diametru transversal. Din acest punct de vedere, bacteriile pot fi grupate n trei categorii : mici 0,3 1,5/0,1 0,5 m (ex. Brucella spp.) ; mijlocii 2 3/0,5 1 m (ex.Escherichia spp.); mari 10 - 15/1 - 2 m (ex. Bacillus spp., Clostridium spp. ). In general, exist o corelaie ntre lungimea i diametrul transversal al celulelor bacteriene, fr ca aceasta s constituie o regul. Astfel, germenii din genurile Bacillus i Clostridium, care sunt cei mai lungi (cu excepia celor filamentoi) , sunt n acelai timp i cei mai groi, pe cnd bacilul rujetului (Erysipelothrix rhusiopathiae), a crui lungime poate ajunge la 3 4 m, este foarte subire (0,2 0,4m, diametru transversal ). Volumul bacteriilor oscileaz ntre 0,oo3 x 10-12 (ex. Mycoplasma spp. ) i 7,068 x 10-12 (Bacillus megatherium ). Densitatea sau greutatea specific a celulelor bacteriene este ceva mai mare dect a apei , situndu-se ntre 1,07 i 1,032. Datorit densitii apropiate de cea a apei, bacteriile plutesc n mediile lichide, din care pot fi separate prin centrifugare. 3.2.1.3. Structura celulei bacteriene Celula bacterin este constituit dintr-un nveli i un coninut. Unele specii bacteriene sunt prevzute n plus cu organite de micare (cilii sau flagelii) i/sau cu organite de aderen ( pilii sau fimbriile). In figura numrul 8 este reprezentat schematic structura unei bacterii ipotetice, cu toate componentele menionate.

Fig.8. Structura unei celule bacteriene tipice (dup Mzreanu C, 1999)


30

NVELIUL Principalele componente ale nveliului celulei bacteriene sunt : - membrana citoplasmatic, prezent la toate bacteriile n contact intim cu citoplasma; - peretele celular situat la exteriorul membranei, prezent la toate bacteriile cu excepia micoplasmelor; - capsula i glicocalixul structuri extraparietale prezente numai la un numr restrns de specii bacteriene i numai n anumite condiii de mediu. Membrana citoplasmatic Numit i membran plasmatic sau membran celular, aceast component esenial a tuturor bacteriilor acoper de jur mprejur citoplasma, separnd-o de faa intern a peretelui celular. Examinat la microscopul electronic, membrana citoplasmatic apare ca o formaiune triplu stratificat, cu o grosime de 7,510 nanometri, constituit dintrun strat subire electronotransparent, delimitat de ambele pri de cte un strat mai gros, electronoopac. Scheletul biochimic al membranei este constituit dintr-un strat dublu de fosfolipide amfipatice cu o orientare polar a regiunilor hidrofile, spre exterior i respectiv spre interior i a celor hidrofobe, fa n fa (fig.9). Acest strat bimolecular fosfolipidic confer membranei rolul de barier osmotic i ofer un sediu numeroaselor proteine enzimatice care se deplaseaz spre exteriorul sau interiorul celulei.

Fig. 9 Membrana citoplasmatic - reprezentare schematic a unui model tridimensional (dup Lodish i Rothman,1979; cit.de Zarnea G., 1983). Membrana citoplasmatic servete drept filtru selectiv, permind accesul substanelor nutritive n celul i eliminarea cataboliilor - procese reglate enzimatic de ctre sistemele de transport i permeaze. Ea este implicat, de asemenea, n reglarea proceselor de diviziune celular i sporogenez. Prin invaginarea i plierea membranei spre interiorul celulei bacteriene iau natere nite formaiuni numite mezozomi, care se leag de genomul bacterian.
31

Peretele celular Peretele cellular este situat la exteriorul membranei citoplasmatice fiind mai gros dect aceasta (15 30 nanometri), rigid i poros. Structura morfochimic a peretelui celular este determinant pentru grosimea, gradul de rigiditate i afinitatea sa fa de anumite substane colorante (afinitate tinctorial). In funcie de modul n care se coloreaz prin metoda Gram, bacteriile se mpart n Gram pozitive (colorate n violet) i Gram negative (colorate n rou), iar prin metoda Ziehl Neelsen, n acidorezistente i neacidorezistente. La bacteriile Gram pozitive peretele este gros i rigid , iar la cele Gram negative este mai subire i mai elastic. Peretele celular este format dintr-un strat bazal care ader la membrana citoplasmatic, similar ca i compoziie chimic la toate bacteriile i un strat superficial cu o structur diferit la cele trei categorii tinctoriale (Gram pozitive, Gram negative, acidorezistente), numit stratul structurilor speciale. Stratul bazal este un polimer glicopeptidic numit peptidoglican sau murein (lat. murus=zid). El este format din macromolecule lungi de zaharide (Nacetilglucozamin i acid N-acetilmuramic) dispuse paralel i legate ntre ele prin puni polipeptidice, realiznd astfel o reea care ncorseteaz celula i i confer rezisten mecanic. La bacteriile Gram pozitive, stratul structurilor speciale conine polizaharide i proteine iar la numeroase specii, acizi teichoici, lipoteichoici i teichuronici, care confer peretelui rigiditate. Peretele bacteriilor Gram negative, dei mai subire, are o structur mai complex. Stratul bazal este format dintr-un complex peptidoglican-lipoprotein, iar stratul structurilor speciale este constituit dintr-o membran extern n care predomin liopopolizaharidele (LPS). Complexul LPS are funcia de endotoxin. Intre peretele celular i membrana citoplasmatic a bacteriilor Gram negative se gsete un spaiu periplasmatic, care conine proteine de legare cu rol n chimiotaxie i numeroase enzime (fosfataz alcalin, enzime hidrolitice, deoxiribonucleaze, etc.) cu rol n pregtirea substanele care au traversat peretele, pentru trecerea lor prin membrana citoplasmatic. Stratul structurilor speciale este mai bine reprezentat cantitativ la speciile Gram negative, n comparaie cu cel bazal, raport inversat la speciile Gram pozitive (fig. 10 a, b). La bacteriile acidorezistente, structurile speciale sunt foarte bogate n complexe formate din acid micolic i ceruri, fapt care explic rezistena acestora la decolorarea cu acizi (coloraia Ziehl Neelsen). Peretele celulelor bacteriene are o semnificaie biologic multipl : - prin rigiditatea sa, asigur meninerea formei celulelor bacteriene; - ndeplinete rol protector fa de factorii nocivi de mediu, n special fa de ocul osmotic, avnd n vedere c mediile de via ale bacteriilor sunt hipotonice n raport cu coninutul celulei bacteriene; - prin porii si, mediaz schimbul de substane ntre mediu i celul;

32

- particip la procesul de cretere i diviziune celular, urmnd membrana citoplasmatic n formarea septurilor transversale care separ celula-mam n cele dou celule-fiice; - conine receptori pentru bacteriofagi i bacteriocine; - conine enzime autolitice care se activeaz n momentul sporulrii elibernd sporul prin liza sporangiului i n momentul germinrii determinnd liza nveliurilor sporale.

Fig.10 a. Structura peretelui bacterian la bacteriile Gram pozitive (dup Hart T. i Shears P., 1997) Orice factor care altereaz sau inhib sinteza peptidoglicanului (fermeni litici, antibiotice, carene nutritive , etc.) determin, att ,,in vitro ct i ,,in. vivo, apariia unor bacterii cu morfologie modificat, cunoscute sub denumirile de protoplati i sferoplati.

Fig.10.b. Structura peretelui bacterian la bacteriile Gram negative (dup Hart T. i Shears P., 1997) Capsula Capsula este o formaiune extraparietal, prezent numai la anumite specii bacteriene i numai n anumite condiii de mediu. Speciile patogene capsuleaz de regul n organism sau n cazul prezenei n mediul de cultur a unui lichid organic (ser sanguin, plasm, lichid ascitic, etc.)

33

Bacteriile capsulogene care intereseaz patologia veterinar sunt: Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae , Clostridium perfringens, Pasteurella multocida. Capsulele acestor specii se deosebesc prin gradul de aderen la peretele celular, grosime, consisten i structur chimic. Din punct de vedere chimic, capsula este format din 98% ap, restul fiind reprezentat de polizaharide sau polipeptide, n funcie de specie. Funcia biologic a capsulei este de a proteja celula bacterian fa de aciunea unor factori nocivi. In cazul speciilor patogene, capsula are un rol important n evitarea procesului de fagocitoz, constituind un important factor de agresivitate. Inafara organismului, prin coninutul crescut de ap, capsula protejeaz bacteriile de efectele desicaiei. CONINUTUL Coninutul celulei bacteriene se compune din citoplasm i genom bacterian. Citoplasma Citoplasma celulei bacteriene are consisten de gel, nu prezint cureni citoplasmatici i n consecin, nici deplasri evidente ale elementelor componente. La celulele tinere i n condiii normale de dezvoltare, citoplasma ader la membran i se prezint ca o mas dens, omogen i intens colorabil. La celulele mbtrnite, citoplasma i pierde treptat afinitatea tinctorial, se retracteaz centripet i capt o structur granular cu numeroase vacuole . Citoplasma reprezint sediul materialului genetic i al unor structuri cu caracter de granule, incluzii i vacuole. Spre deosebire de celulele eucariote, in citoplasma celulelor bacteriene lipsesc mitocondriile, aparatul Golgi i reticulul endoplasmatic propriu-zis. Ribozomii sau granulele lui Palade reprezint elementele de baz ale citoplasmei, n care apar ca mici granule relativ sferice, cu un diametru de 10-20 nanometri, numrul lor fiind de ordinul zecilor de mii. Din punct de vedere chimic, ribozomii sunt alctuii din acid ribonucleic (65%) i proteine (30-35%). Sub raport funcional, ribozomii constituie sediul sintezei proteinelor structurale i enzimatice, pe baza informaiei genetice preluate de la ADN prin intermediul ARN-ului mesager. Activitatea ribozomilor bacterieni poate fi inhibat de unele antibiotice cum sunt streptomicina, neomicina i tetraciclinele. La organismele eucariote, ribozomii sunt insensibili fa de antibiotice, fapt care permite utilizarea acestora n terapia bolilor infecioase, fr afectarea organismului. Incluziile sunt structuri inerte, prezente inconstant n citoplasma bacteriilor. Ele reprezint materiale de rezerv care se acumuleaz n celul direct
34

proporional cu vrsta i coninutul mediului n substane nutritive. Din punct de vedere chimic, incluziile sunt formate din polimeri organici (amidon, glicogen, acid poli--hidroxibutiric), cristale de substane anorganice (sulf, carbonat de calciu) i polimeri anorganici. Cromatoforii, prezeni la bacteriile fotosintetizante, sunt organite specializate n procesele de biosintez prin mecanisme analoage fotosintezei plantelor. Vacuolele sunt variabile ca mrime (0,3 0,5 m) i numr (6-20/celul), fiind mai frecvent ntlnite la celulele tinere. Ele pot conine lichide cu rol n reglarea presiunii osmotice, sau gaze. Vacuolele cu gaze sunt prezente n citoplasma unor bacterii din sol, capabile s capteze azotul atmosferic i la bacteriile acvatice aerobe pe care le antreneaz la suprafaa apei, asigurndu-le contactul cu oxigenul atmosferic. In citoplasma celulelor bacteriene se gsete cea mai important parte din echipamentul enzimatic rspunztor de metabolismul celulei, precum i diferite tipuri de ARN (mesager, ribozomal i solubil). Pigmenii sunt substane colorate prezente n citoplasma bacteriilor cromogene. Speciile patogene pentru om i animale, productoare de pigmeni sunt: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Rhodococcus equi, Mycobacterium tuberculosis.. Semnificaia biologic a pigmenilor bacterieni difer n funcie de natura chimic a pigmentului, fr a fi complet elucidat. Rolul clorofilelor n fotosintez este bine stabilit, ns asupra funciei celorlali pigmeni, prerile emise au valoare ipotetic. n practica identificrii bacteriilor, prezena pigmenilor este un criteriu taxonomic valoros i uor decelabil. Citoplasma constituie sediul metabolismului bacterian unde se desfoar procesele de asimilaie i dezasimilaie, precum i alte funcii vitale ale celulei bacteriene cum sunt reproducerea i sporogeneza. Materialul genetic Materialul genetic al bacteriilor este constituit din material genetic nuclear i din plasmide . Materialul genetic nuclear este format dintr-un singur cromozom i nu este delimitat de o membran proprie. Pentru a marca aceste diferene fa de nucleul celulelor eucariote, termenul de ,,nucleu a fost nlocuit cu termenii de ,,nucleoid, ,,genom bacterian, ,,cromozom bacterian sau ,,nucleozom. Cromozomul este constituit dintr-o macromolecul de ADN bicatenar care conine 4 . 106 perechi de nucleotide i are o lungime de aproximativ 1 mm. Macromolecula de ADN se afl ns ntr-o stare compact, condensat, prin pliere i superspiralare, astfel nct ocup doar 5-16% din volumul celulei. Nucleoidul are o form asemntoare cu a celulei bacteriene: sferic n cazul cocilor i alungit n cazul bacililor. Pe lng AND, cromozomul bacterian mai conine cantiti reduse de proteine, lipide i ARN.
35

Plasmidele sunt molecule mici de ADN dublu catenar, independente de cromozom, caracteristice pentru celula procariot. Pentru desemnarea lor se utilizeaz deseori termenii de material genetic auxiliar sau extracromozomal. Plasmidele reprezint aproximativ 1% din mrimea i masa molecular a cromozomului i sunt, n majoritatea lor, transferabile de la o celul bacterian la alta n cadrul fenomenului de conjugare. Att cromozomul ct i plasmidele au posibilitatea de autoreplicare. Replicarea plasmidelor are loc independent de cea a cromozomului. Funcia biologic a materialului genetic const n determinarea caracterelor care definesc fiecare specie bacterian i transmiterea lor ereditar. Avnd n vedere posibilitatea de transfer a plasmidelor, se poate aprecia c ele au un rol major n procesul de circulaie a informaiei genetice n cadrul populaiilor bacteriene, care are ca rezultat o mai bun adaptare a acestora la condiiile de mediu. ORGANITELE CELULARE Organitele celulare (cilii sau flagelii i pilii sau fimbriile) sunt formaiuni extraparietale, prezente numai la unele specii bacteriene, cu rol n procesele de adaptare la mediu. Cilii (flagelii ) Cilii sunt organite de form cilindric, cu diametrul de 12-25 nanometri i lungimea de 25-30 micrometri, ntlnite mai ales la bacteriile alungite bacili, vibrioni, spirili i mai rar la formele cocoide. Au rol n micare, bacteriile ciliate fiind mobile. Intre speciile bacteriene ciliate exist diferene sub aspectul numrului i al modului de dispunere a cililor pe suprafaa celulei bacteriene, distingndu-se urmtoarele categorii de bacterii: atricha (neciliate), monotricha (un singur cil dispus polar), amfitricha (cte un cil la ambii poli), lofotricha (un smoc de cili la unul din poli) i peritricha (numeroi cili amplasai pe toat suprafaa celulei) fig. 11.

Fig. 11. Numrul i modalitile de dispunere a cililor pe suprafaa celulei bacteriene: 1. atricha; 2, 3. monotricha;4.amfiticha; 5. lofotricha; 6. peritricha. Cu ajutorul cililor, bacteriile se pot deplasa cu viteza de 20-80 micrometri pe secund, echivalnd cu de 40 de ori lungimea celulei bacteriene. Pentru
36

comparaie, menionm faptul c ghepardul, considerat cel mai rapid dintre animale, alearg cu o vitez care nu depete de trei ori lungimea corpului pe secund. Bacteriile realizeaz o micare de rostogolire cnd cilii se rotesc n sensul acelor de ceasornic i o deplasare n linie dreapt cnd acetia se rotesc n sens antiorar. In determinarea direciei de deplasare intervin mecanismele de tip chimiotactic. Substanele utile metabolismului bacterian (glucidele, aminoacizii, ionii de calciu i de magneziu, oxigenul pentru bacteriile aerobe ,etc) sunt atractante, exercitnd un chimiotactism pozitiv asupra bacteriilor ciliate, iar cele nocive (alcoolii, ionii de hidrogen, ionii hidroxil, metalele grele, etc.) au un efect repelant (de respingere) printr-un chimiotactism negativ. Analog capsulogenezei, sinteza cililor este dirijat de factori genetici a cror represare i depresare este realizat de factorii mediului ambiant. Factorii de mediu capabili s induc variaii fenotipice n geneza i motilitatea cililor sunt temperatura i diverse substane chimice. Astfel, Yersinia enterocolitica i Listeria monocytogenes sunt mobile numai la 20-22 C (nu i la 37C), serurile hiperimune specifice inhib mobilitatea salmonelelor i a altor specii ciliate, iar acidul boric i sulfatiazolul inhib mobilitatea speciei Proteus vulgaris. Pilii (fimbriile) Pilii sunt apendici filamentoi mult mai subiri i mai scuri dect cilii dar mult mai numeroi, aezai peritrich pe suprafaa bacteriilor i vizibili numai la microscopul electronic. Denumirile prin care sunt desemnate aceste structuri sugereaz caracteristicile lor morfologice: fimbrii (lat. fimbria = franjuri), pili (lat. pilus = pr). In funcie de unele caractere morfologice, de numr i de funcia biologic pe care o ndeplinesc, se deosebesc 6 tipuri de pili, notate cu cifre romane de la I la V i cu litera F (pilul sexual sau donor). In ultimii ani exist tendina de a departaja, din punct de vedere semantic, cei doi termeni - ,,fimbrii i ,,pili - n sensul utilizrii primului pentru desemnarea tipurilor I-V i a celui de-al doilea, numai pentru pilii de sex. Fimbriile sunt formaiuni tubulare compacte, fr canal axial, cu dimensiuni cuprinse ntre 1-20 m lungime i 3-14 nm diametru. Ele sunt dispuse pericelular, uneori polar sau bipolar, numrul lor variind ntre 1 i 1000 per celul. Fimbriile confer bacteriilor capacitatea de a adera la suprafaa epiteliilor i a altor substraturi, fiind considerate factori de patogenitate. Pilii de tip F, denumii i pili sexuali, sunt structuri tubulare strbtute de canal axial, n structura crora intr o fosfoglicoprotein (pilina), ale crei molecule sunt ansamblate dup o simetrie helicoidal. Ei sunt codificai de o plasmid numit factorul ,,F (de fertilitate sau de sex), care confer celulei purttoare proprietatea de donor de material genetic sau celul - mascul F+. Rolul pililor ,,F este analog organului copulator, deoarece prin lumenul lor are loc transferul de ADN de la o celul bacterian F+ la una F- n cadrul procesului de conjugare - o form primitiv de sexualitate, singura posibil la bacterii.
37

3.3.2. FIZIOLOGIA BACTERIILOR 3.3.2.1. COMPOZIIA CHIMIC A CELULEI BACTERIENE Compoziia chimic elementar a bacteriilor, sub aspectul coninutului n elemente biogene, nu difer de a celorlalte organisme vii. Compoziia molecular se difereniaz ns de cea a organismelor vegetale i animale prin prezena unor constitueni moleculari specifici bacteriilor. O celul bacterian conine aproximativ 3000-6000 tipuri de molecule diferite, dintre care aproximativ jumtate aparin compuilor anorganici cu mas molecular mic (apa i srurile minerale), iar cealalt jumtate, compuilor organici cu diverse grade de complexitate structural. 3.3.2.1.1. Compuii anorganici Apa reprezint aproximativ 75-80 % din greutatea umed a celulei bacteriene, n care se gsete sub form liber sau legat inseparabil de alte structuri chimice. Ea constituie mediul care asigur vehicularea substanelor nutritive i a metaboliilor, precum i desfurarea reaciilor chimice care stau la baza proceselor vitale. Srurile minerale reprezint 2 30% din greutatea bacteriilor uscate. Elementele care intr n compoziia lor sunt : P, K, Na, Cl, S, O, H, Fe i n proporii mai reduse, Mg, Cu, i Zn. Srurile minerale ndeplinesc urmtoarele funcii biologice: - asigur reglarea presiunii osmotice la nivelul membranei citoplasmatice ; - realizeaz sistemul tampon adecvat meninerii pH-ului optim al mediului celular; - activeaz unele sisteme enzimatice, rol pe care l ndeplinesc mai ales ionii de Cu i de Mg ; - intr n structura unui important numr de constituieni celulari (rol plastic). 3.3.2.1.2. Compuii organici Glucidele totalizeaz 4 25% din greutatea celulelor bacteriene uscate, proporia lor variind n funcie de specia bacterian, vrsta culturii i compoziia chimic a substratului nutritiv. Ele au rol plastic, energetic sau de material de rezerv. Lipidele, prezente n celula bacterian n proporie de 1 20 % din greutatea uscat a bacteriilor, pot fi din punct de vedere chimic, gliceride, fosfatide, steride i ceruri. Alturi de glucide, lipidele constituie rezervele nutritive ale celulei bacteriene cu un potenial energetic crescut. Acizii nucleici . Spre deosebire de virusuri, care conin un singur tip de acid nucleic, n celula bacterian sunt prezeni ambii acizi nucleici. Acidul dezoxiribonucleic (ADN) reprezint aproximativ 1/5 din coninutul celulei, fiind constituientul nucleoidului, respectiv al cromozomului bacterian i al plasmidelor.
38

Acidul ribonucleic (ARN), se gsete n citoplasm sub cele trei forme diferite sub aspectul mrimii moleculei i al funciei biologice pe care o ndeplinesc n mecanismul sintezei proteinelor: ARN mesager, ARN de transport sau solubil i ARN ribozomal. ARN-ul total constituie 10 20 % din greutatea uscat a celulei. Proteinele reprezint aproximativ 60% din greutatea uscat a bacteriilor i constituie componentele eseniale pentru viaa celulei bacteriene. Ele se gsesc att n stare pur ct i sub form de complexe lipo- sau glicoproteice. Din punct de vedere al rolului pe care l ndeplinesc, proteinele bacteriene pot fi grupate n : - proteine constitutive, care fac parte din structura diferitelor componente celulare, i - proteine enzimatice (enzimele), care constituie biocatalizatorii ntregii activiti metabolice a celulei bacteriene. Enzimele constituie, n ansamblul lor, aparatul sau echipamentul enzimatic al celulei bacteriene. El este caracteristic pentru fiecare specie bacterian i reprezint, prin urmare, un important criteriu taxonomic. Punerea n eviden a enzimelor bacteriene prin reacii sau teste biochimice face parte din conduita curent a identificrii bacteriilor. 3.3.2.2. NUTRIIA LA BACTERII Microorganismele, ca i celelalte organisme vii, sunt caracterizate printr-o activitate fiziologic nentrerupt, mai mult sau mai puin intens, n cursul creia cresc, se divid ,i modific structura, compoziia chimic i poziia n mediu, etc. Exercitarea acestor activiti presupune prezena n mediile lor de via a unor substane nutritive utilizabile n sinteza constituienilor celulari (surse plastice) i a unor surse de energie . Exigene i tipuri nutritive la bacterii Posibilitile bacteriilor de a folosi diverse surse plastice i energetice sunt extrem de variate. Considerate n ansamblu, microorganismele sunt cele mai omnivore organisme cunoscute, deoarece i realizeaz metabolismul folosind cele mai diverse surse de substane nutritive : de la N molecular, CO2 i S, pn la substanele organice complexe. In raport cu sursa de energia pe care o utilizeaz n procesul de nutriie, bacteriile se ncadreaz n dou tipuri principale : - tipul fototrof care utilizeaz energia luminoas transformnd-o n energie de legare chimic cu ajutorul unor pigmeni asemntori clorofilei; - tipul chimiotrof, lipsit de pigmeni fotosintetizani, pentru care unica surs de energie o reprezint reaciile biochimice de oxidoreducere.

39

Pe baza capacitii de a utiliza substanele anorganice i organice ca surse de material de sintez i energie se difereniaz : - tipul litotrof ( lith = piatr ) sau autotrof ( n sensul de independent , liber) cruia i aparin bacteriile capabile s-i sintetizeze toi constituenii celulari pornind de la surse simple anorganice de C i de N ca : CO2 , NH3, NO2, NO3, etc.; - tipul organotrof sau heterotrof n care se ncadreaz bacteriile dependente de materia organic, care nu se pot dezvolta dect n prezena substanelor organice ca surse de energie, C i N . Deci, n timp ce autotrofele prin sintezele lor genereaz substane organice, heterotrofele le descompun. Ansamblnd cele dou criterii, bacteriile fototrofe pot fi mprite n fotoautotrofe ( fotolitotrofe ) i fotoorganotrofe ( fotoheterotrofe ), iar bacteriile chimiotrofe se pot clasifica , de asemenea, n chimioautotrofe ( chimiolitotrofe ) i chimioorganotrofe ( chimioheterotrofe ). In rndul bacteriilor chimiotrofe se pot ns diferenia tipuri intermediare capabile s utilizeze att compui organici ct i anorganici. Astfel, exist bacterii capabile s utilizeze carbonul organic sau anorganic i azotul anorganic constituind un subtip numit mezotrof. Altele pot metaboliza carbonul organic i azotul anorganic fiind ncadrate n subtipul prototrof. Deoarece bacteriile autotrofe nu intereseaz bacteriologia medical i medical-veterinar, n continuare vor fi menionate numai sursele de substane organice pentru cele mai importante elemente biogene necesare bacteriilor chimioheterotrofe, categorie n care se ncadreaz majoritatea bacteriilor patogene. Principala surs de carbon pentru aceste bacterii o reprezint glucidele i polialcoolii i ntr-o proporie mai redus diferii acizi organici, cetonele, lipidele, acizii grai, etc. Sursele de azot organic sunt reprezentate n primul rnd de aminoacizi, urmai n cazul a numeroase specii, de alte substane cu azot diferite ca grad de complexitate: uree, peptone, proteine . Unele bacterii patogene pot folosi i surse de azot anorganic, cum este amoniacul rezultat din hidroliza ureei sau din reducerea nitrailor n nitrii i a nitriilor n amoniac. Inafar de carbon i azot, toate bacteriile au nevoie de macroelemente (P, S,, O, H, K, Mg, Fe, Ca,Mn, etc. ) i microelemente ( Cu, Zn, Mo, etc.), acestea din urm fiind indispensabile activitii catalitice a unor enzime. 3.3.2.3. METABOLISMUL BACTERIAN Prin analogie cu celula vegetal i animal, metabolismul bacterian implic totalitatea reaciilor biochimice catalizate enzimatic care permit bacteriilor s obin din nutrieni, att compui necesari pentru sinteza constituienilor celulari, ct i energia necesar pentru aceste sinteze i pentru alte activiti care necesit consum de energie. Activitatea metabolic a bacteriilor poate fi difereniat n metabolism energetic care include catabolismul i respiraia i metabolism de sintez sau anabolism.

40

3.3.2.3. 1. Catabolismul Substraturile exogene care pot constitui surse energetice i plastice pentru bacteriile heterotrofe sunt reprezentate n majoritatea cazurilor de compui organici cu structur complex : proteine, glucide, lipide. Eliberarea energiei prin procesele de catabolism se realizeaz treptat, n trei faze distincte. Faza I . Macromoleculele sunt dezansamblate n unitile lor de construcie: proteinele n aminoacizi, polizaharidele n monozaharide, iar lipidele n glicerol i acizi grai. In aceast prim faz se elibereaz de obicei mai puin de 1% din energia total a macromoleculelor care se pierde n bun parte sub form de cldur. Faza II. Aminoacizii, monozaharidele i acizii grai rezultai n prima etap sufer o degradare incomplet cu formarea de produi intermediari - amoniac, acid piruvic, acizi grai inferiori, etc.- bioxid de carbon i ap. Energia eliberat reprezint aproximativ o treime din energia total a substraturilor iniiale. In aceast faz, hexozele pot fi metabolizate pe ci diferite - calea glicolizei, calea Entner-Doudoroff sau calea hexozomonofosfatului - dar produii finali nu sunt foarte diferii. In mod similar, aminoacizii pot fi catabolizai pe ci diferite , dar, indiferent de calea utilizat, rezultatul const n formarea de acetilCo A sau de intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici ( ciclul Krebs ) . Faza III In cursul acestei faze, produii intermediari sunt descompui n CO2 i H2O pe calea acizilor tricarboxilici, rezultnd, de regul, cantitatea maxim de energie. Nu toate substraturile ajung ns la aceast ultim faz. In multe cazuri, degradarea se oprete la produii intermediari care sunt deseori preluai sub form de precursori i introdui n filiera reaciilor anabolice sub aciunea enzimelor biosintetizante. Pentru produii finali rezultai din activitatea catabolic, celula bacterian dispune de multiple ci de utilizare, i anume : -hidrogenul rezultat din procesele de oxidare este introdus n circuitul respirator pentru reaciile de reducere cu cedare ctre ali acceptori. -oxigenul rezultat n urma reaciilor de reducere este valorificat n procesele de oxidare; -energia rezultat n diferitele etape ale degradrii catabolice este utilizat n procesele endergonice (consumatoare de energie) ale biosintezelor celulare. 3.3.2.3. 2. Respiraia Bacteriile, ca toate celelalte vieuitoare, respir, ceea ce n sensul obinuit al cuvntului nseamn c ele consum oxigen pentru a produce cu ajutorul lui reacii chimice exoterme eliberatoare de energie. Pasteur a observat cel dinti c unele specii bacteriene triesc i se nmulesc n absena oxigenului mai bine chiar dect n prezena lui, deci respir fr oxigen. Aceast constatare, pe lng altele, a dus la o lrgire a coninutului noiunii de respiraie, n sensul c se numete
41

proces respirator orice reacie chimic eliberatoare de energie care se petrece in vivo n prezena sau n absena oxigenului. Bacteriile chimiotrofe i procur cea mai important parte a energiei prin procesul de respiraie celular care const ntr-o succesiune de reacii de oxidoreducere biologic ce pot avea loc n aerobioz sau anaerobioz*. Prin oxido-reducere biologic se nelege pierderea atomilor de H ( e i H +) din molecula unei substane chimice ( S ) care se oxideaz elibernd energie i transferul lor ctre o substan acceptoare ( A ) care se reduce, conform ecuaiei: SH2 + A< => S + AH2 + energie Respiraia la bacterii se rezum n esen, la preluarea hidrogenului rezultat din reaciile catabolice prin intermediul unor enzime numite dehidrogenaze i cedarea lui ctre un acceptor final care poate fi oxigenul sau alt substan. Dup natura acceptorului final de electroni de H, respiraia bacterian este de trei tipuri : - respiraia aerob ( oxibiotic ), un proces de de oxidare complet a substraturilor cu ajutorul oxigenului molecular ca acceptor final de H i eliberarea unei cantiti mari de energie ; - respiraia anaerob ( anoxibiotic ) n care acceptorul final de H poate fi orice substan anorganic, exceptnd oxigenul; - fermentaia , un proces de oxido-reducere biologic care are loc n condiii de anaerobioz sau n prezena oxigenului dar fr intervenia lui i n care energia este obinut prin utilizarea compuilor organici att ca donatori ct i ca acceptori de electroni. Spre deosebire de respiraia aerob, n cursul fermentaiei se elibereaz o mic parte din energia coninut n substrat, rezultnd numeroi produi de degradare parial. Acetia variaz foarte mult n raport cu substratul i calea metabolic * * . Deoarece eliberarea brusc a energiei din substraturile oxidate - ntr-o singur treapt ( aa cum arat reacia de mai sus ) - ar fi duntoare pentru celul, transferul hidrogenului ctre acceptor se realizeaz n mai multe etape, cu participarea unui ntreg arsenal de enzime respiratorii care servesc ca acceptori tranzitorii de hidrogen. Ele se reduc i se oxideaz succesiv prin preluarea i respectiv cedarea hidrogenului de la una la alta ctre acceptorul final, constituind sistemul transportor de electroni sau catena de respiraie celular . 3.3.2.3.3. Anabolismul Anabolismul const n secvene de reacii enzimatice, desfurate n trepte, prin care se efectueaz sinteza constituienilor celulari pornind de la precursori reprezentai de produii intermediari ai catabolismului sau de substanele preluate din mediu. Ca i procesele de catabolism, reaciile de biosintez se realizeaz tot n trei faze care se succed n sens invers : - producerea de subuniti care vor intra n componena macromoleculelor specifice fiecrui constituient celular;
42

- activarea subunitilor cu ajutorul energiei eliberate prin descompunerea compuilor macroergici de tip ATP ( adenozin-trifosfat ) n care a fost stocat pe parcursul degradrii diferiilor compui ; - formarea de macromolecule prin polimerizarea sau condensarea subunitilor activate. Totui, cile catabolice i anabolice pentru un anumit substrat nu sunt complet reversibile. Astfel, reaciile anabolice au ca punct de plecare, de cele mai multe ori, compui intermediari foarte diferii de cei care rezult din catabolismul compusului respectiv iar enzimele implicate sunt parial diferite . De exemplu, catabolismul serinei duce la formarea de piruvat, n timp ce sinteza ei ncepe de la 3-fosfoglicerat; histidina este catabolizat la -cetoglutarat, iar sinteza ei este iniiat de la ribozo-5-fosfat; degradarea glicogenului la acid lactic este catalizat de 12 enzime, dintre care numai 9 catalizeaz reacii reversibile . 3.3.2.4. CRESTEREA SI MULTIPLICAREA BACTERIILOR 3.3.2.4.1 Creterea bacteriilor Celula bacterian crete pe seama depunerii de substan celular rezultat din metabolismul de biosintez i a sporirii coninutului n ap. Creterea se poate realiza uni- sau multidimensional, n funcie de locul i modalitatea de dispunere a substanei nou elaborate. Dup L a m a n n a ( cit. de Z a r n e a , 1984 ), exist urmtoarele posibiliti teoretice de cretere a celulei bacteriene: - creterea la una din extremiti ; - cretera la ambele extremiti ; - creterea n vecintatea constituirii viitorului sept de diviziune ; -creterea prin intususcepiune (depunerea de substan nou diseminat i intercalat printre constituienii celulari preexisteni ); - cretere prin depunerea materialului nou n zona periferic a celulei (limitrof nveliului). In cursul creterii celulei bacteriene, raportul suprafa / volum se micoreaz treptat datorit faptului c n timp ce suprafaa bacteriilor crete cu o raie ptratic, volumul lor se mrete cu o raie cubic. Ori, activitatea normal a bacteriilor este condiionat de existena unui raport optim ntre volumul celulei, care consum i suprafaa ei, prin care se face absorbia substanelor nutritive i eliminarea cataboliilor. In consecin, pe parcursul creterii, aportul de substane nutritive din mediu satisface din ce n ce mai puin exigenele metabolice ale celulei iar echilibrul ei chimic se altereaz deoarece circulaia substanelor prin difuzie n ambele sensuri devine mai dificil. Din cauza acestor perturbri, atunci cnd disproporia dintre suprafa i volum atinge un anumit punct critic, raportul lor adecvat se restabilete prin diviziunea celulei. Astfel, diviziunea celular este prin ea nsi o form necesar de reglare a activitii celulei bacteriene.

43

3.3.2.4.2. Multiplicarea bacteriilor Spre deosebire de organismele pluricelulare, la care multiplicarea celulelor duce la mrirea taliei individului, la bacterii i la toate celelalte organisme unicelulare, ea are ca rezultat creterea numrului de indivizi i implicit a populaiei respective. Majoritatea speciilor bacteriene se multiplic prin diviziune direct (diviziune simpl, sciziparitate ) iar un numr redus de grupuri taxonomice se poate multiplica pe alte ci : prin corpi elementari, ramificare , nmugurire, spori. Multiplicarea prin diviziune direct const n scindarea unei celule bacteriene care a atins punctul critic de cretere n dou celule-fiice, cel mai frecvent identice. La bacteriile de form alungit ( bacili, spirochete ), diviziunea se face transversal dup un plan perpendicular pe marele ax al celulei, n centrul acesteia i rareori excentric. La coci, diviziunea se poate realiza dup unul, dou sau trei planuri perpendiculare succesive. In urma diviziunii, celulele rezultate se pot separa sau, la numeroase specii, pot s rmn unite una sau mai multe generaii realiznd grupri caracteristice cu valoare taxonomic. Diviziunea celulei bacteriene este precedat i iniiat de replicarea semiconservativ a AND-ului cromozomial, n momentul n care corpii nucleari nou formai sunt disponibili pentru segregare, astfel nct cele dou celule surori s fie nzestrate cu o copie exact a genomului celulei parentale Multiplicarea prin corpi elementari a fost descris la chlamidii, la care, pe lng diviziunea direct, exist posibilitatea desfurrii unui ciclu vital. Punctul de plecare al acestui ciclu este reprezentat de structuri mici corpusculare, electronoopace, cu un diametru de aproximativ de 0,2 0,5 micrometri, numite corpi elementari. In celula gazd, fiecare corp elementar crete transformndu-se n corp iniial sau reticulat, ajungnd la 0,8 1,5 micrometri. In continuare, corpii reticulai se multiplic prin diviziune iar celulele-fiice se reorganizeaz n sensul transformrii lor n corpi elementari. Multiplicarea prin ramificare, nmugurire i spori - proprie ciupercilor microscopice ( micei filamentoi i levuri ) este ntlnit doar la actinomicete i unele bacterii fotosintetizante. 3.3.2.4.2.1 Dinamica multiplicrii bacteriilor Deoarece examinarea direct a bacteriilor n diferite medii naturale este foarte dificil, se cunosc puine date referitoare la multiplicarea populaiilor bacteriene n natur (Z a r n e a, 1994). Cultivarea bacteriilor n laborator a permis ns un studiu detaliat al dinamicii procesului de multiplicare n condiii experimentale i al relaiilor dintre multiplicare i factorii de mediu. S-a constatat astfel c o cultur bacterian prezint n cursul existenei sale patru faze, distincte prin viteza de multiplicare a germenilor i prin numrul de celule vii pe unitatea de volum.
44

Aceste faze sunt: faza iniial de adaptare ,de laten sau de lag1, faza de multiplicare exponenial sau logaritmic, faza staionar i faza de declin. Multiplicarea n mediile lichide Faza de laten este cuprins ntre momentul introducerii celulelor bacteriene n mediu, prin nsmnare sau transplantare i momentul cnd ele ncep s se multiplice (n medie, 2 ore), perioad n care cultura nu este vizibil macroscopic. Faza de multiplicare exponenial sau logaritmic se caracterizeaz prin multiplicarea celulelor bacteriene, la debut cu o vitez progresiv mrit, apoi ntrun ritm constant i caracteristic pentru fiecare specie bacterian. La majoritatea bacteriilor patogene, n condiii optime , diviziunile se succed la intervale de 2030 de minute, timp care reprezint vrsta unei generaii i care este urmat de dublarea populaiei bacteriene. Durata fazei de multiplicare logaritmic este n medie de 6-24 de ore Faza staionar urmeaz unei scurte perioade (aproximativ 2 ore) n care multiplicarea nu se mai produce n progresie geometric ci ntr-un ritm care scade progresiv. Incetinirea multiplicrii este determinat de modificarea mediului de cultur ( scderea concentraiei nutrienilor, acumularea metaboliilor toxici n concentraii inhibitorii, reducerea coninutului n oxigen , etc. ), dar mai ales de realizarea unei concentraii maxime de celule bacteriene pe unitatea de volum (3107 - 3109 pe ml ). O dovad a faptului c principala cauz este o problem de spaiu, o constituie multiplicarea de nlocuire care caracterizeaz aceast perioad, n care rata de cretere a populaiei bacteriene este nul. Practic, diviziunile continu numai n limita disponibilitilor de spaiu create prin moartea unor celule. Aceast faz dureaz de la cteva ore pn la 7-8 zile, n funcie de specie. Faza de declin se caracterizeaz prin absena diviziunilor i moartea logaritmic a celulelor bacteriene pn la sterilizarea mediului. Cauzele care duc la moartea bacteriilor sunt multiple i sunt legate n special de epuizarea substane nutritive, diminuarea rezervelor respiratorii i aciunea toxic exercitat de cataboliii acumulai n mediu . Uneori un numr mic de bacterii poate supravieui cteva sptmni sau luni pe seama substanelor nutritive eliberate prin autoliza celulelor moarte. Fenomenul este cunoscut sub denumirile de reluarea creterii, cretere criptic sau canibalism. S-a estimat c pentru un supravieuitor sunt necesare substanele provenite de la aproximativ 50 de celule moarte ( G r e c i a n u A., 1986 ). In faza de declin, bacteriile prezint un polimorfism accentuat determinat de prezena celulelor mbtrnite, cu forme atipice ( celule sferice, mici sau gigante, deformate, filamentoase, ramificate, etc. ) i cu afinitate tinctorial sczut. Evitarea erorilor generate de aceste modificri reclam efectuarea examenelor pentru ncadrarea taxonomic, testarea patogenitii, testarea sensibilitii bacteriilor .a., numai pe culturi n faza exponenial.
1

(engl. to lag =a ntrzia, a rmne n urm) 45

Multiplicarea bacteriilor pe mediile solide Particularitile multiplicrii pe mediile solide se datoreaz n primul rnd absenei micrilor browniene care asigur dispersarea bacteriilor n masa mediilor lichide i accesul nediscriminatoriu al celulelor la resursele nutritive. Prin urmare, att pe suprafaa ct i n profunzimea mediilor solide, n urma multiplicrii rezult aglomerri de milioane de bacterii care, n funcie de abundena inoculului i activitatea aparatului ciliar, pot mbrca macroscopic dou forme : colonia izolat i gazonul bacterian. Colonia reprezint o mas compact de celule rezultate, de regul, din multiplicarea unei singure celule bacteriene. Dup declanarea fazei logaritmice, diviziunile se distaneaz treptat pe msur ce colonia crete, deoarece ntre celulele bacteriene care o compun se creeaz diferene privind posibilitile de acces la substanele nutritive din mediu sau la oxigen ( n cazul speciilor aerobe ) n funcie de poziia lor: limitrof mediului sau n centrul coloniei. Celulele de la periferia coloniilor, deoarece beneficiaz de un aport optim de oxigen i de nutrieni, se multiplic activ n timp ce bacteriile din centrul coloniei pot fi moarte. Dezvoltare unei colonii bacteriene este condiionat nu numai de interaciunile celulelor individuale ci i de influena coloniilor vecine; cu ct coloniile sunt mai numeroase i mai dese, cu att sunt mai mici, din cauz c se jeneaz reciproc prin eliminarea de metabolii toxici i prin diminuarea concentraiei nutrienilor. Gazonul reprezint cultura care rezult prin confluarea coloniilor n cazul unui inocul abundent, sau prin invazia mediului de ctre bacteriile ciliate peritrich,- fenomen numit roire sau crare. NTREBRI RECAPITULATIVE Care sunt formele de existen a bacteriilor n natur? Ce semnificaie are conceptul de specie bacterian? Ce forme pot avea bacteriile i cum se grupez celulele bacteriene la unele specii? ntre ce limite variaz dimensiunile celulelor bacteriene? Care sunt prile componente ale celulei bacteriene? Care sunt structura i funciile membranei citoplasmatice? Ce elemente morfochimice ale peretelui celular condiioneaz modul de colorare a bacteriilor prin metodele Gram I Ziehl-Neelsen? 8. Care este semnificaia biologic (rolul) peretelui celular? 9. Ce rol ndeplinete capsula bacterian ? 10. Ce structuri conine citoplasma celulei bacteriene i care este rolul lor? 11. Din ce se compune materialul genetic al bacteriilor? 12. Ce sunt cilii (flagelii) bacterieni i ce rol ndeplinesc? 13. Ce sunt pilii bacterieni, de cte feluri sunt i care este semnificaia lor biologic? 14. Cte tipuri de bacterii exist n raport cu sursa de energie i de carbon pe care le utilizeaz? 15. n ce constau catabolismul, respiraia i anabolismul la bacterii? 16. Pe ce cale se multiplic majoritatea speciilor bacteriene? 17. Care sunt fazele multiplicrii bacteriilor n mediile de cultur i particularitile generate de starea de agregare a mediului (lichid, solid)? 18. Care sunt mecanismele patogenitii la bacterii?
46

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

CAPITOLUL 4

MICOLOGIE GENERAL

Micologia este tiina care se ocup cu studiul ciupercilor microscopice un grup heterogen de microorganisme cu rspndire ubicvitar. Ciupercile microscopice (micromiceii, fungii, mucegaiurile) au un tip de organizare eucariot, sunt constituite din ansambluri celulare (micelii, pseudomicelii) deseori specializate pe funcii i se multiplic printr-o mare diversitate de forme sexuate i asexuate. Se apreciaz c exist aproximativ 3000-4000 de genuri de micei cu peste 200000 de specii. 4.1. MORFOLOGIA CIUPERCILOR MICROSCOPICE Pe baza nsuirilor morfologice i fiziologice, ciupercile microscopice au fost mprite n dou grupe mari: levuri (drojdii) i fungi fi lamentoi (mucegaiuri). ntre aceste dou forme distincte se plaseaz fungii dimorfi care, n raport de condiiile de mediu (organism, mediu de cultur, temperatur, etc.), pot crete fie ca levuri, fie ca fungi filamentoi. Indiferent de morfologie, unitatea funcional a ciupercilor microscopice este celula, alctuit din urmtoarele structuri: - perete e xtern relativ rigid (la levuri, cu o structur mai dens spre interior i una mai lax la periferie), cu funcii protectoare, n structura cruia intr substane proteice, polizaharide (hemiceluloz, glucan, manan, chitin), acizi organici superiori; structura i grosimea prezint diferene de la o specie la alta dar i n funcie de vrsta celulelor i de condiiile de cultivare; - membran citoplasmatic lipoproteic ce conine steroli (compui care la bacterii sunt prezeni numai la micoplasme); - citoplasm, n care se gsesc organite (mitocondrii, reticul endoplasmatic, aparat Golgi) i structuri granulare (ribozomi, substane de rezerv); - nucleu, delimitat de membran nuclear i alctuit din carioplasm, 2-4 cromozomi i nucleol. Levurile Levurile au, de regul, o organizare unicelular asemntoare bacteriilor. Celulele levurice au form sferic sau oval i pot forma ansambluri celulare numite pseudomicelii (fig.12.).
47

Fig.12 Aspectul morfologic al levurilor cu forme pseudomiceliene

Ciupercile filamentoase Ciupercile filamentoase reprezint grupul de fungi situai pe o treapt filogenetic superioar levurilor, deoarece la ele apare diferenierea ansamblurilor celulare pe principalele funcii vitale: de nutriie i de reproducere. Ele sunt constituite din filamente lungi i subiri numite hife, care formeaz n ansamblul lor un miceliu adevrat numit i tal. Miceliul majoritii ciupercilor filamentoase este format din dou pri distincte morfologic i fiziologic: aparatul vegetativ i cel reproductor. Aparatul veg etativ este constituit din hife ramificate care pot fi septate (caz n care ciupercile sunt numite generic septomicete) delimitnd celule cilindrice, sau neseptate (caz n care ciupercile poarta denumirea de sife) ( fig.13)

Fig.13 Tipuri de micelii fungice: A- miceliu neseptat B- miceliu septat

Septurile prezint pori prin care citoplasma i chiar nucleii trec dintr-o celul n alta, sub influena curenilor intracitoplasmatici (Zarnea, G., 1970). Ele confer hifelor un grad crescut de rezisten i rigiditate. Hifele neseptate sunt alctuite dintr-o celul unic, alungit, multinucleat (conine uneori sute de nuclei ntr-o citoplasm comun), numit sifonoplast sau aparat vegetativ cenocitic. Indiferent de tipul de miceliu (septat sau neseptat), numrul nucleilor este relativ constant pentru o anumit specie i pentru speciile nrudite. Hifele miceliene se formeaz prin germinarea elementelor reproductive (vezi cap. 4.3). Sub aspectul raportului cu mediul pe care se dezvolt, la un miceliul se pot deosebi dou poriuni:

48

- miceliul rizoidal constituit din hife fine, ramificate i bine implantate n mediu; - miceliul aerian format din hife care se detaeaz din sistemul rizoidal i care sunt mai puin ramificate i mai rezistente. Aparatul re productor este constituit din hife aeriene specializate pe care se formeaz organele de nmulire numite n mod curent corpi fructificani, deoarece conin spori n interiorul sau pe suprafaa lor (endo-, respectiv ectospori). Morfologia corpilor fructificani se caracterizeaz printr-o mare diversitate, constituind un important criteriu de difereniere a numeroaselor specii de fungi (criteriu taxonomic). 4.2. MODALITILE DE NMULIRE LA CIUPERCILE MIC ROSCOPICE nmulirea micromiceilor se poate face asexuat i sexuat. nmulirea as exuat se realizeaz prin sciziparitate (la levuri) i prin spori de vegetaie aprui consecutiv mitozei. Sporii asexu ai (mit otici, v egetativi, imperfeci) iau natere prin transformarea n spor a unor celule constituiente ale miceliului sau pseudomiceliului i poart denumirea generic de talospori, sau printr-un proces de morfogenez n interiorul sau pe suprafaa corpilor fructificani. Din categoria talosporilor fac parte blastosporii, clamidosporii, artrosporii i aleuriile, iar sporii asexuai derivai din corpii fructificani sunt sporangiosporii i conidiosporii. Blastosporii iau natere printr-un proces de burjeonare sau nmugurire. ntlnit mai frecvent la levuri. Procesul const n formarea unui mugure, reprezentnd o celul-fiic, prin evaginarea peretelui celular al celuleimam. Pe celula de origine, mugurii pot fi dispui polar, bipolar sau multilateral. Atunci cnd celulelefiice nu se transform n spori separndu-se de celula-mam ci continu formarea de muguri adiionali, rezult, n cazul levurilor, pseudomicelii arborescente.
Fig. 14 Segmentarea hifelor terminale pentru a forma artrospori (A) si modul de formare al clamidosporilor (C); B- artrospor pe cale de germinare (Zarnea G., 1970)

Clamidosporii (fig.14)se formeaz n interiorul unor celule hifale ntr-un mod asemntor sporilor bacterieni (endospori). Ei au peretele ngroat i citoplasma condensat, fiind deosebit de rezisteni la cldur i uscciune. Forma clamidosporilor este globuloas avnd un diametru mult mai mare dect celelalte celule din cadrul filamentului respectiv (Ileana Nichita, 2007). Clamidosporii sunt
49

spori de rezisten programai genetic s asigure, prin structura lor, persistena speciei n condiii nefavorabile, ca i sporii bacterieni. Prin comparaie cu acetia, ceilali spori vegetativi i sporii sexuai (meiotici) sunt doar spori de nmulire deoarece nu rezist mult timp n mediul ambiant. Ei sunt programai genetic s germineze rapid i s regenereze aparatul micelian, asigurnd nmulirea ciupercilor microscopice n condiii favorabile de mediu. Artrosporii sau oidiile se formeaz la mucegaiurile septate prin fragmentarea n celulele componente a unor hife vegetative terminale. Aleuriile (fig.15), sunt sporii unor ciuperci dermatofite ce se dezvolt pe filamentul micelian, de care rmn ataai; pot avea diferite mrimi (macroaleurii, microaleurii) i diverse moduri de dispunere.

Fig.15 Corpi fructificanti la ciuperci dermatofite: 1.Tricophyton; 2-Microsporum

Sporangiosporii sunt caracteristici fungilor neseptai din genurile Mucor, Absidia i Rhizopus (fig.16). Ei se formeaz n interiorul unui corp fructificant cu aspect globulos numii sporangiu sau sporocist, rezultat prin dilatarea extremitii unor hife fertile (sporangiofori) i formarea unui perete transversal care realizeaz disjuncia ntre hif i sporange. Uneori, filamentul sporangiofor pe care se edific sporocistul poate prezenta o dilataie terminal numit columel n interiorul sporangelui au loc mitoze repetate, dup care nucleii-nou formai se nconjoar de o mas de citoplasm proprie prin formarea unui perete celular, transformndu-se n spori. Conidiosporii (conidiile) sunt spori externi care iau natere pe vrful dilatat al hifei specializate numite conidiofor, printr-un proces asemntor nmuguririi, formnd iraguri.

Fig.16 Rhizopus nigricans: A-miceliu reproducator: a-sporange imatur:b-columela, c- sporange matur plin cu spori, d-sporange rupt, f-spori; B- miceliu vegetativ: g-rizoizi

50

ntre hif i iragurile de conidii se interpun nite piese intermediare numite metule i sterigme (fialide). Forma corpilor fructificani conidiogeni variaz n funcie de gen sau specie; la Aspergilus spp., de exemplu, au aspect de mciuc, iar la Penicillium spp., aspect de penson (fig. 17)

Fig. 17 Aspecte de micelii aeriene cu corpi fructificanti: 1-Rhizopus, 2- Aspergillus, 3-Penicillium

nmultirea sex uat se realizeaz prin spori meiotici (sexuai, p erfeci) rezultai din fuzionarea a dou celule-gamei, cu potenial ereditar diferit, situate pe aceeai hif sau pe hife distincte dar apropiate. Cu excepia unor particulariti de detaliu, corelate cu nivelul evolutiv al miceilor, procesul de fuzionare a celor dou celule se realizeaz n dou faze succesive. n prima faz are loc fuzionarea citoplasmei (plasmogamia) iar n etapa urmtoare, fuzionarea nucleilor (cariogamia), rezultnd astfel un zigot cu nucleu unic diploid (set dublu de cromozomi). Dup un anumit interval de timp, nucleul sufer o diviziune reducional (meiotic) reveninindu-se la haploidie. Se deosebesc urmtoarele tipuri de spori sexuai: zigosporii, oosporii, ascosporii i bazidiosporii. Zigosporii rezult din gamei identici ca structur, form i dimensiuni (izogamei sau gametangi) care apar sub forma unor protuberane pe dou hife apropiate din acelai miceliu sau aparinnd unor micelii diferite. Ajungnd la un moment dat n contact, membranele celulare se rezorb la acel nivel iar coninutul lor protoplasmatic se contopete rezultnd un zigospor (fig.18)

Fig. 18 Etapele succesive ale procesului de formare a unui zigospor. Dou celule din acelai miceliu sau din micelii diferite se ntlnesc (A,B) produc celule sexuale speciale (C) care fuzioneaz (D) i formeaz un zigospor acoperit cu un perete protector, negru (E) care rmne n stare laten pn la germinare, cnd formeaz un corp fructificant de tip asexuat (F)
51

Oosporii rezult din gamei difereniai morfofiziologic (heterogamei): unul mai mare (oogonul), de sex feminin i altul mai mic, de sex masculin (anteridia). Oogonul fecundat se transform n oospor. Att zigosporii ct i oosporii sunt ntlnii la ciupercile inferioare i reprezint faza diploid a ciclului de dezvoltare al acestora. Prin germinarea sporilor se revine la faza haploid reprezentat att prin aparatul vegetativ ct i prin sporii asexuai (fig18) Ascosporii i bazidiosporii sunt caracteristici ciupercilor microscopice superioare, la care cariogamia nu are loc imediat dup contopirea celor doi gamei: ascogonul i anteridia. n urma acestui proces va rezulta mai nti un miceliu special care va da natere unor corpi fructificani diferii ca form, numii asce (aspect saciform) la micromiceii din subncrengtura Ascomycotina i bazidii (aspect de mnu cu degete), la cei din subncrengtura Bazidiomycotina. n interiorul acestor formaiuni are loc cariogamia prin fuzionarea celor doi nuclei. Dup un interval de timp, nucleul diploid sufer una sau mai multe diviziuni reducionale. La ascomicete diviziunea reducional va conduce la formarea a doi, patru sau opt nuclei haploizi care, la rndul lor, nconjurndu-se de un strat de plasm condensat i un perete celular, vor genera un numr echivalent de ascospori (fig.19). Eliberarea ascosporilor se face prin ruperea ascelor. Bazidia este ntructva similar unei asce, dar, spre deosebire de aceasta, i poart sporii nu n interiorul, ci la exteriorul ei.

Fig.19 Formarea a scosporului la mucegaiuri. n celula binuclear (A) produs prin fuzionarea a dou celule din acelai miceliu sau din micelii diferite, nucleii se unesc (B), se divid repetat (C i D) formnd 8 nuclei sporali (E) coninui ntr-o celul numit asc(F).

Nucleul diploid al bazidiei se divide de dou ori rezultnd patru nuclei haploizi. n partea apical a bazidiei se formeaz apoi patru mici excrescene, numite sterigme, n care vor migra cei patru bazidiospori (fig.20). Pentru eliberarea acestora, la baza sterigmelor apare cte o pictur de lichid care crete treptat i care, prin presiunea pe care o exercit, determin deschiderea sterigmelor i proiectarea sporilor n aer (Zarnea G., 1970).

52

Fig. 2 0 Et apele succ esive ale fo rmrii unei bazidii i eliberarea baz idiosporilor: Acelula binucleat, B- fuziunea nucleilor, C- i D diviziunea nucleilor, E- formarea bazidiosporilor, F i G eliberarea lor (dup Stanier, cit.Zarnea,G. 1970)

4.3. NUTRIIA I CRETERE FUNGILOR Fungii au o nutriie chimioheterotrof (utilizeaz substanele organice ca surs de carbon i energie) de tip absorbtiv, asemntoare cu cea a bacteriilor, dezvoltndu-se pe materia organic moart (fungii saprofii) sau pe seama organismelor vii (fungii parazii). Substanele cu molecul mic (monozaharidele, aminoacizii) strbat peretele celulelor hifale i levurice prin difuzie simpl. Substanele macromoleculele sunt supuse mai nti unui proces de digestie extracelular sub aciunea enzimelor fungice glicolitice, proteolitice, lipolitice, fiind transformate astfel n nutrieni ce pot fi preluai ulterior prin absorbie transparietal. La fungii patogeni, aceste enzime constituie factori de virulen cu ajutorul crora strbat barierele naturale ale organismelor vii pe care s-au adaptat s triasc. Fungii se pot dezvolta la o gam larg a valorilor de pH (2,0 9,0), fiind n general acidofili (prefer pH-ul =5,0 6,0). Temperatura optim de dezvoltare este de 22-32o C, limitele extreme situndu-se ntre 5 oC i 45 oC. Umiditatea crescut influeneaz favorabil metabolismul, creterea i multiplicarea ciupercilor filamentoase (mucegaiurile) - activiti stopate cnd umiditatea mediului se reduce la 20%. Majoritatea mucegaiurilor sunt aerobe, dezvoltndu-se n special la suprafaa substraturilor nutritive, iar drojdiile sunt facultativ anaerobe: ele desfoar un metabolism oxidativ, descompunnd carbohidraii pn la bioxid de carbon i ap, dar sunt active metabolic i n lipsa oxigenului, cnd recurg la un metabolism fermentativ cu producere de etanol i bioxid de carbon. Datorit structurii peretelui celular, fungii sunt mai rezisteni la presiunea osmotic n comparaie cu bacteriile, fiind capabili s creasc i n medii cu o concentraie ridicat de zahr sau sruri. Datorit echipamentului enzimatic complex, fungii sunt capabili s utilizeze zaharuri complexe, cum ar fi lignina, inaccesibil pentru majoritatea
53

bacteriilor. Ei se remarc, de asemenea, prin posibilitatea de a obine nutrieni din substraturi cu umiditate redus. Creterea fungilor se realizeaz la extremitile libere ale hifelor, pe baza substanelor rezultate din metabolismul de biosintez,. Celula terminal se alungete apoi se formeaz un sept transversal care o mparte n dou celule-fiice. Totdeauna, celula terminal continu procesul de cretere i diviziune n timp ce celula subterminal particip doar facultativ, atunci cnd produce o ramnificaie lateral, dotat la rndul ei cu capacitatea de cretere apical. n dinamica procesului de cretere ,,in vitr o se pot distinge 3 faze i anume: faza de lag, faza de cretere liniar i faza de nvechire. - Faza de lag, n care procesul propriu-zis de cretere, este absent. Aceast faz se caracterizeaz prin regenerearea hifelor care au survenit la nsmnare sau germinarea sporilor. - Faza de cretere linear, corespunde cu apariia pe suprafaa mediului de cultur, a coloniei circulare. Aceast colonie are o cretere mai rapid la periferie, n timp ce zona central se caracterizeaz printr-o cretere mai lent sau chiar prin absena creterii. Pe medii srace n principii nutritvi, creterea are loc n suprafa, sub forma unei reele fine de hife. Pe medii bogate creterea se face mai lent n diametru transversal, n schimb, miceliul este mai gros. - Faza de nvechire, se traduce prin ncetinirea vitezei de cretere, pe msur ce marginile coloniei se apropie de bariera mecanic reprezentat de marginea plcii Petri, n care se cultiv respectivul mucegai. Aceast ncetinire este determinat de acumularea produilor de catabolism, care se face cu att mai rapid cu ct condiiile nutritive, de temperatur i aeraie sunt mai aproape de exigenele optime ale speciei cultivate. 4.4. PARTICULARITILE ECO-FIZIOLOGICE ALE CIUPERCILOR MICROSCOPICE i IMPLICAIILE N ACTIVITATEA OMULUI Ciupercile microscopice sunt omniprezente. Majoritatea lor sunt saprobiote utiliznd n scop trofic substanele organice din materia n descompunere. Acestea sunt prezente n mediile naturale (sol, ap, aer) intervenind activ n procesele de autopurificare a solului i a apelor prin degradarea i mineralizarea materiei organice moarte (cadavre animale i vegetale). Unele specii, dei nu att de numeroase ca cele saprobiote, sunt parazite ale organismele vii plante, insecte, peti, reptile, psri, mamifere, om provocnd boli a cror gravitate depeete uneori pe aceea cauzat de bacterii i virusuri. Numeroase specii de ciuperci pot tri n anumite faze ale dezvoltrii lor ca saprobiote, iar n anumite condiii ca parazite. Din aceast categorie fac parte ciupercile facultativ parazite, care se dezvolt obinuit pe substraturi lipsite de via dar pot s se adapteze pentru o perioad scurt de timp pe esuturi vii i ciupercile facultativ saprobiote, care sunt adaptate la parazitism dar pot avea i o existen saprobiot (Ileana Nichita, 2007).

54

Capacitatea miceilor de a popula un anumit biotop este condiionat de posibilitile de a exploata resursele nutritive i energetice ale acestuia prin intermediul echipamentului enzimatic de care dispun i care difer de la o specie la alta. Din acest punct de vedere, ciupercile microscopice pot fi clasificate n trei categorii: monofage, oligofage i polifage (Coman I., Mare M., 2000). Ciupercile monofage i oligofage dispun de un sistem enzimatic redus, limitat uneori la compoziia chimic a esuturilor unei singure specii vegetale sau animale, ca o consecin a adaptrii lor la un mod de via strict parazit. n categoria ciupercilor polifage intr majoritatea speciilor saprobiote, dar i cele facultativ parazite i facultativ saprobiote specii dotate cu un echipament enzimatic complex. n raport cu activitatea omului, efectul miceilor poate fi favorabil sau nefavorabil. Efectul favorabil const n activitile enzimatice valorificate n diferite ramuri ale industriei. Industria alimentar: - obinerea alcoolului, berii i cidrului prin fermentaia alcoolic a unui substrat glucidic (amidon, suc de fructe), produs de levuri aparinnd genurilor Saccharomyces, Kluiveromyces, Candida; - fermentarea dirijat a laptelui cu ajutorul unor specii de micei din genul Penicillium (P. roqueforti, P. camemberti, P. candidum) pentru obinerea brnzeturilor din sortimentele Roquefort,Camembert, Brie.a., ; Industria farmaceutic: - obinerea de antibiotice naturale din categoria penicilinelor i a cefalosporinelor din culturi de micei din genul Penicillium respectiv, Cephalosporium; - sinteza unor hormoni (ex., micetul Rhizopus arrhizus, datorit capacitii de a hidroliza progesteronul - intermediar n procesul de sintez a cortizonului reduce considerabil numrul etapelor de sintez chimic a acestui hormon); - sinteza de interferoni (n 1981 genele interferonului au fost transferate prin inginerie genetic n celulele levurei Sacharomyces cerevisiae, fiecare celul fiind capabil s sintetizeze pn la 106 molecule de interferon); - sinteza de proteine virale imunogene (antigenul HbsAg) utilizate la prepararea vaccinurilor contra hepatitei B, cu ajutorul levurilor modificate genetic (Sasson A., 1993); - sinteza unor enzime: amilaze (Aspergillus niger, Aspergillus oryzae), proteaze (Aspergillus spp., Mucor pusillus), lipaze (Saccharomycopsis lipolytica), etc. -industria producerii de biomas i proteine neconvenionale. Efectul nociv al miceilor poate fi exercitat prin prezena i multiplicarea lor n diferite esuturi sau prin efectul nociv al toxinelor (micotoxinelor) ingerate cu alimentele sau furajele n care au fost n prealabil elaborate de speciile toxigene (Carp-Crare M., 1991). Bolile produse de ciuperci pot fi clasificate pe baza mai multor criterii.
55

n funcie de categoria n care se ncadreaz micetul ele pot fi grupate n levuroze i micoze propriu-zise. Dup mecanismul patogenitii micetului-agent etiologic, aceste boli se clasific n micoze i micotoxicoze. Micozele se caracterizeaz prin prezena i multiplicarea miceilor n organe i esuturi. Pe baza afinitii i a localizrii lor n organe i esuturi, micozele se clasific n: dermatomicoze (micoze externe) i micoze viscerale sau interne (endomicoze). Micotoxicozele se caracterizeaz prin leziuni i tulburri produse de micotoxinele elaborate de ciuperci n alimente sau n furaje. Ele sunt de fapt, intoxicaii cu origine micotic. 4.5. NCADRAREA TAXONOMIC I NOMENCLATURA CIUPERCILOR MICROSCOPICE n prezent ciupercile microscopice sunt incluse ntr-un regn de sine stttor, regnul FUNGI cu dou ncrengturi: PSEUDOMYCOTA i EUMYCOTA. ncrengtura Pseudomycota include micei lipsii de importan medical, cu excepia speciei Rhinosporidium seeberi (Nichita Ileana, 2007). Fungii de importan medical sunt plasai n ncrengtura Eumycota care se subdivide n patru subncrengturi: Zygomycotina, Ascomycotina, Bazidiomycotina, Deuteriomycotina. Principalele caractere discriminatorii pentru subdiviziunile taxonomice sunt structura miceliului (septat, neseptat), posibilitatea de reproducerea sexuat i caracteristicele formelor sexuate . Nomenclatura ciupercilor microscopice este cea binar latin, conform cu normele Codului Internaional al Nomenclaturii Botanice (International Cod of Botanical Nomenclature ICBN). NTREBRI RECAPITULATIVE CAPITOLUL IV 1. Care sunt particularitile structurale ale celulei micotice, raportate la structura celulei bacteriene? 2. Care este structura fungilor filamentoi i care sunt prile distincte din punct de vedere morfo-fiziologic? 3. Prin ce se deosebesc levurile de fungii filamentoi? 4. Care sunt modalitile de multiplicare ale ciupercilor microscopice? 5. Ce rol ndeplinesc n natur miceii saprobioi? 6. Cum se clasific bolile produse de micei?

56

CAPITOLUL 5

NOIUNI DE GENETIC MICROBIAN

Genetica este ramura biologiei care studiaz dou fenomene biologice fundamentale: ereditatea i variabilitatea speciilor. . Ereditatea este nsuirea biologic general a vieuitoarelor de a conserva proprietile structurale i funcionale ce caracterizeaz specia i de a le transmite nemodificate din generaie n generaie. Variabilitatea reprezint latura opus stabilitii ereditare, care duce la apariia unor diferene ntre descendeni i genitori, asigurnd evoluia speciilor. Avnd un aparat genetic mai simplu, virusurile i bacteriile au constituit i constituie principalul obiect de studiu al cercetrii fundamentale n genetic. S-a demonstrat astfel, prin experienele ncepute n 1928 de englezul Griffith asupra bacteriei Streptococcus (Diplococcus) pneumoniae i continuate n 1944 de americanul Avery i colaboratorii si, c informaia genetic este deinut de acidul dezoxiribonucleic (ADN), care reprezint suportul material al ereditii. 5.1. EREDITATEA LA MICROORGANISME i MECANISMELE EI Ca la toate organismele vii, materialul genetic al microbilor ndeplinete dou funcii: autocatalitic (capacitatea genomului de a se autoreproduce cu mare fidelitate) i heterocatalitic (nsuirea de a induce i de a controla sinteza de proteine sau alte biomolecule). Mecanismele prin care se realizeaz cele dou funcii (autoreplicarea, respectiv transcrierea, translaia) i procesele ce determin variabilitatea genetic (mutaia i recombinarea genetic) au fost descifrate n cea mai mare msur prin studiile efectuate asupra sistemului fag-bacterie gazd, ambele microorganisme avnd cte un singur cromozom. Funcia autocatalitic a materialului genetic Multiplicarea propriuzis a microorganismelor (virusuri, bacterii, micei) este precedat de un proces de autoreplicare a genomului ADN sau ARN (n cazul ribovirusurilor), mediat de enzime. Autoreplicarea ADN dublu catenar este de tip semiconservativ. Cele dou catene care alctuiesc macromolecula de ADN se separ mai nti dup modelul clasic al fermoarului prin ruperea punilor de hidrogen care le unesc, ncepnd dintr-o anumit zon numit punct de iniiere.

57

Fiecare caten i reface apoi congenera din nucleotidele libere aflate n citoplasm, prin complementaritate: o baz azotat purinic (adenin, guanin) se leag ntotdeauna de o baz pirimidinic (timin, citozin) de pe catena veche i invers. Rezult astfel patru tipuri de legturi posibile: A T; T A; G C i C G. n acest mod, fiecare caten veche refcndu-i duplexul, se ajunge la dublarea cantitii iniiale de ADN. Replicarea genomului viral se realizeaz n mod diferit n funcie de structura mono- sau dublu catenar a acidului nucleic:o replicare semiconservativ la ADN i ARN dublu catenar i o replicare , mai nti complementar i apoi semiconservativ, la ADN i ARN monocatenar. Microorganismele sunt supuse acelorai legi ale ereditii, unitare ntregii lumi vii, cu aspecte particulare dictate de gradul lor de organizare. Astfel, dac nici un accident genetic nu are loc, toi descendenii unui microb sunt identici ntre ei i identici cu genitorul. Acest fenomen poart numele de descenden vertical i are ca rezultat formarea de clone, populaii de indivizi identici. Aceast stabilitate, ntlnit n condiii naturale numai la procariote i virusuri, este asigurat de organizarea de tip haploid (set unic de gene, provenit de la un singur genitor) i nmulirea asexuat (replicarea identic a cromozomului unic). Funcia heterocatalitic a materialului genetic Informaia genetic nscris n molecula de ADN este determinat de succesiunea bazelor azotate transcris pe ARN mesager (ARNm), iar combinaiile de cte trei baze de pe traseul lanului de ARNm, sunt responsabile de poziia aminoacizilor n structura polipeptidelor. Secvena a trei baze care codific un aminoacid poart denumirea de triplet sau codon. n afar de codonii purttori de informaie genetic, exist i triplete care nu codific aminoacizi (triplete non sens), ci intervin n mecanismele de stopare a sintezei lanurilor peptidice. Acelai aminoacid este codificat de acelai (aceiai) codon(i) indiferent dac el intr n structura fiinelor unicelulare sau a macroorganismelor - corelaie care poart numele de cod genetic. Transmiterea informaiei de la ADN la locul de sinteze a proteinelor (ribozomii) se numete translaie, deoarece comport traducerea limbajului de patru litere al ADN-ului (A=adenin; C=citozin; G=guanin; T=timin), n limbajul de 20 de litere (aminoacizi) al proteinelor. Informaia genetic nu este transmis direct la ribozomi, ci prin intermediul ARN m. Deci, molecula de ADN este o matri pentru ARNm, care trece n citoplasm la locul de sintez a proteinelor. n cursul sintezei ARNm, timina (T) este nlocuit ns cu o alt baz pirimidinic, uracilul (U). Aadar, o matri ADN pe care scrie: TTTTGCTCGTAATACTT, va fi transcris mai nti n molecula de ARNm, sub forma: UUUUGCUCGUAAUACUU.
58

Translaia (traducerea) este un mecanism complex prin care mesajul genetic transmis de la ADN prin ARNm, este recepionat i citit la nivelul ribozomilor, n vederea constituirii lanurilor peptidice. La traducerea mesajului ARNm particip o colecie de molecule de ARN de transport (ARNt), molecule capabile s recunoasc i s lege specific un anumit aminoacid din citoplasm, pe care-l transport la nivelul codonului corespunztor din molecula de ARNm ataat de ribozomi. Virusurile ARN determin biosinteza materialului viral de ctre celula gazd folosind trei strategii (Carp-Crare M.,2001): - ARN viral transmite informaia genetic la nivelul ribozomilor n mod direct, i nu prin intermediul ARNm, substituind ARNm celular; - informaia genetic este transmis la nivelul ribozomilor prin ARNm copiat de pe genomul viral cu ajutorul enzimei ARNm polimeraza ARN dependent; - ARN viral, printr-un proces de transcriere invers (fenomen unic n biologie) cu ajutorul unor enzime numite reverstranscriptaze, determin formarea unui ADN proviral care preia conducerea sintezelor celulare. 5.2 VARIABILITATEA LA MICROORGANISME i MECANISMELE EI n cursul multiplicrii microorganismelor, la fel ca la celelalte grupe de vieuitoare, poate avea loc fenomenul de variabilitate. Acesta const n apariia unui numr redus de descendeni-variante (celule bacteriene, celule micotice, particule virale) care exprim un fenotip ce difer de al populaiei microbiene n care au aprut, prin unul sau mai multe caractere. Spre deosebire de plante i animale, la microorganisme variabilitatea este mult mai accentuat datorit simplitii tipului de organizare i a succesiunii rapide a generaiilor. n funcie de mecanismul de producere i de caracteristicile lor, variaiile pot fi grupate n dou categorii: fenotipice i genotipice (tabelul 2). Tabelul 2 Caracterele distinctive ntre variaiile fenotipice i genotipice Variaii Caracterul considerat Fenotipice Genotipice Se realizeaz prin Aciunea mediului Mutaii i recombinri genetice Starea genomului Nu comport Comport modificri modificri structurale Rolul factorilor de mediu Inductori al variaiei Selectivi ai variantelor prin actualizarea unei posibiliti genetice Proporia celulelor afectate Toate sau majoritatea Foarte mic dintr-o populaie microbian (1/108 - 109 ) Stabilitatea Dispar odat cu Stabile factorul inductor Transmiterea variaiei la Nu Da; descendenii formeaz descendeni o clon variant
59

5.2.1. VARIAIILE FENOTIPICE Variaiile fenotipice (negenetice sau fiziologice) sunt induse de factorii de mediu (fizici, chimici, biologici), fa de care constituie fenomene de adaptare. Variaiile fenotipice afecteaz o ntreag populaie microbian simultan, sunt instabile (n sensul c dispar odat cu factorul inductor) i nu se transmit ereditar, deoarece nu implic nici o modificare n structura genomului. Variabilitatea fenotipic poate interesa toate caracterele microorganismelor: morfologice, fiziologice, de patogenitate, etc. Redm n continuare cteva exemple de variaii fenotipice ntlnite la bacterii. 1.Variaii ale capsulogenezei. Speciile bacteriene capsulate Bacillus anthracis i Diplococcus pneumoniae i sintetizeaz capsula numai n organismul animalului infectat sau pe mediile de cultur care conin lichide organice (ser sanguin, snge 5-10%). Pe mediile simple, n absena substanelor necesare capsulogenezei, ele formeaz culturi de variante acapsulogene. Pierderea capsulogenezei poate deveni i un caracter ereditar. 2.Variaii privind sporogeneza. Cultivarea speciilor sporogene pe medii cu antiseptice sau pe medii bogate n ioni de calciu poate induce apariia de variante asporogene. Acelai efect represor asupra genelor responsabile de sporogenez l exercit anumite valori termice. La Bacillus anthracis, de exemplu, sporogeneza are loc numai n intervalul 1242,50 C. 3. Variaii ale caracterelor biochimice. Variaiile fenotipice ale caracterelor biochimice constau n sinteza enzimelor adaptative, indus de substrat, care exercit o aciune de derepresare a genelor respective. La E. coli, de exemplu, sinteza beta-galactozidazei i a celorlalte enzime codificate de operonul ,,lac este condiionat de prezena lactozei n mediul de cultur. Gama caracterelor supuse variaiilor fenotipice este extrem de larg i numrul exemplelor de felul celor prezentate mai sus este nelimitat pentru lumea microorganismelor. 5.2.2. VARIAIILE GENOTIPICE Genotipul reprezint complexul de gene care determin realizarea unui anumit fenotip (caracter, nsuire). Variaiile genotipice sau genetice se produc ca o consecin a unor modificri n structura materialului genetic, prin urmare ele sunt stabile i se transmit ereditar. n funcie de caracterul fenotipic afectat, variaiile genotipice pot fi: a) morfologice, care privesc capsulogeneza, cilogeneza, sporogeneza, etc.;
60

b) metabolice sau biochimice , care constau n dobndirea sau pierderea capacitii de sintez a unei enzime i implicit, obinerea variantelor auxotrofe; c) de p atogenitate, generatoare de mutante apatogene, cu patogenitate atenuat sau exacerbat; d) de re zistena l a agenii inh ibitori fizici, chimici s au b iologici, cum este cazul variantelor antibiorezistente Mecanismele de producere a variaiilor genotipice sunt mutaiile i recombinrile genetice. 5.2.2.1. Mutaiile Mutaiile reprezint modificri ale numrului sau secvenei bazelor azotate din structura moleculei de ADN (sau ARN, n cazul ribovirusurilor). Ele survin brusc i se exprim fenotipic prin apariia n snul unei populaii omogene, a unei ,,mutante, adic a unui individ capabil de a transmite descendenilor caractere noi, prin care se deosebete de populaia omogen n care a aprut. Una din teoriile cele mai pertinente asupra mecanismelor moleculare ale mutaiilor este teoria ,,copierii greite a informaiei genetice de pe catena complementar n cursul autoreplicrii acizilor nucleici.(W a t s o n i C r i c k, 1953). Aceste erori de transcriere pot consta n: - substituia unei baze azotate cu alta; - deleia sau suprimarea unei baze sau a unui bloc de baze; - inseria sau adiia unei baze sau a unui bloc de baze suplimentare; -inversarea succesiunii bazelor, care n cursul copierii i schimb poziia. Mutaiile pot fi favorabile organismului la care apar sau nefavorabile, mergnd pn la incompabilitatea cu viaa. Clasificarea mutaiilor se poate efectua dup mai multe criterii. 1. Dup modul de apariie, mutaiile se mpart n induse i spontane. Mutaiile induse sunt consecina aciunii dirijate, n scop experimental, a unor factori de mediu numii ageni mutageni deoarece sunt capabili s determine modificri n structura ADN. (Rducnescu H. i col., 1986; Zarnea G.,1986). Agenii mutageni mai frecvent utilizai sunt factori fizici (radiaiile ultraviolete, radiaiile ionizante, temperaturile disgenetice, etc.) i chimici (5bromuracilul, 2-aminopurina, hidroxilamina, acidul nitros, coloranii de acridin, ageni alchilani, etc.), care acioneaz asupra ADN n diferite moduri. Unii ageni mutageni, cum sunt analogii bazelor azotate, induc erori de replicare a ADN prin substituirea unor baze normale (ex. 5-bromuracilul se substituie timinei, determinnd ncorporarea n catena complementar, a guaninei n locul adeninei, rezultatul fiind nlocuirea perechii de baze originare T-A cu G-C), alii prin modificarea structurii chimice a bazelor azotate (ex. guanina metilat formeaz legturi de hidrogen cu timina i nu cu citozina), iar alii acionnd asupra enzimelor implicate n sinteza AND (AND-polimerazele).

61

Mutaiile induse sunt utilizate n practic n scopul obinerii unor tulpini microbiene cu nsuiri dorite, utile n diverse domenii de activitate. Astfel, exist preocupri privind obinerea de mutante bacteriene capabile s determine caliti gustative deosebite unor produse alimentare, mutante bune productoare de antibiotice i vitamine, mutante auxotrofe utilizate n experienele de inginerie genetic, mutante nepatogene sau cu patogenitate atenuat utilizate la prepararea vaccinurilor, etc. n scopul obinerii de tulpini vaccinale, reducerea patogenitii bacteriilor se poate realiza utiliznd mijloace fizice i chimice . Dintre mijloacele fizice, n mod curent se utilizeaz temperaturile disgenetice, superioare confortului termic al speciei supuse atenurii. Factorii chimici atenuani sunt reprezentai de diverse substane care, introduse n mediul de cultur, frneaz dezvoltarea normal a germenilor. Apelnd la cel de-al doilea mijloc, C a l m e t t e i G u r i n au obinut n 11 ani (1908 1919) atenuarea unei tulpini de Mycobacterium bovis n urma a 198 de treceri pe cartof glicerinat cu bil de bou. Vaccinul B.C.G., preparat din aceast variant atenuat (bacilul C a l m e t t e - G u r i n ), este utilizat i astzi pe scar larg n medicina uman pentru vaccinarea antituberculoas a copiilor. Un alt exemplu l constituie tulpinile de Bacillus anthracis acapsulogene obinute prin cultivarea pe snge defibrinat de cal (tulpina 1190 R Stamatin, 1936) i pe ser de cal, n atmosfer de bioxid de carbon (tulpina 34 F2 - Sterne, 1937). Ambele tulpini i-au pierdut definitiv capacitatea de a-i sintetiza capsula i implicit patogenitatea, deoarece capsula confer bacteriilor protecie antifagocitar. n cazul virusurilor, pentru obinerea unor variante nepatogene sau cu patogenitate atenuat, utilizate la prepararea vaccinurilor, se utilizeaz mijloacele biologice de atenuare. Acestea constau n: - inocularea repetat a virusului pe o specie animal care, n mod natural, este rezistent la infecia respectiv, obinndu-se consecutiv acestor pasagii o reducere a patogenitii fa de specia sau speciile natural sensibile; astfel, prin lapinizare (adaptarea la organismul iepurelui) au fost obinute variantele nepatogene de virus pestos porcin (varianta chinezeasc C i varianta Koprowsky Rovac), iar prin avianizare (adaptarea pe embrioni de gin), o variant de virus jigodios nepatogen pentru cine, mai multe variante de virus rabic ( variantele Flury LEP, Flury HEP, Kelev), o variant atenuat a virusului bolii lui Aujeszky, .a.; - inocularea animalelor receptive pe alt cale dect calea natural de ptrundere a virusului. Virusurile rabice fixe clasice, de exemplu,se obin prin treceri intracerebrale repetate pe iepure.Aceste variante nu i-au atenuat patogenitatea (ele sunt chiar mai virulente n special pentru specia pe care au fost obinute) ns au pierdut capacitatea de a se propaga pe calea nervilor periferici
Mutantele (variantele) auxotrofe rezult din bacteriile prototrofe (tulpini slbatice, izolate din natur), prin pierderea sau dobndirea capacitii de a metaboliza diferii compui chimici. Mutantele auxotrofe au permis descoperirea recombinrii la bacterii. 62

(neuroprobazia), fiind patogene numai inoculate intracerebral, cnd produc infecii grave. Inoculate pe alte ci, sub form de vaccin, sunt lipsite de patogenitate, determinnd imunizarea organismului vaccinat. Mutaiile spontane sunt cele care apar n natur datorit unor cauze necunoscute, n condiii de mediu obinuite i fr intervenia unui factor decelabil. Indiferent de tip, mutaiile au urmtoarele caracteristici comune: spontaneitatea, discontinuitatea, raritatea, stabilitatea i specificitatea. Spontaneitatea. Modificrile produse de factorii mutageni apar ntr-un moment imprevizibil, iar faptul c intereseaz o anumit gen este un fenomen ntmpltor. Mutaia are deci un caracter spontan, fenomenul mutaional fiind distribuit aleator n timp i spaiu genetic. Caracterul spontan mai rezid i n faptul c mutaia se produce n lipsa factorului de mediu fa de care celula bacterian cu genom modificat manifest un comportament mutant. L u r i a i D e l b r k (cit.de Rducnescu H. i col., 1986) au fost primii care au demonstrat n 1943 c mutantele streptomicinorezistente de E.coli apar n absena antibioticului. Punerea n eviden a mutantelor este posibil ns numai pe agar cu streptomicin, care permite dezvoltarea mutantelor, inhibnd restul celulelor bacteriene sensibile. Deci, mediul cu antibiotic nu induce mutaia, ci o relev. Discontinuitatea se refer la faptul c, o mutant poate s apar brusc sau trecnd prin etape succesive. Raritatea . Probabilitatea ca o bacterie s sufere o mutaie ntr-o unitate definit de timp, de obicei egal cu timpul unei generaii, este foarte mic. n majoritatea cazurilor, ea se situeaz n jurul valorii de 1 dintr-o populaie de 105109 celule bacteriene. Stabilitatea. Spre deosebire de variaiile negenetice, proprietile noi obinute prin mutaie persist n absena agentului care a servit la selecie i se transmit ereditar. Specificitatea. Fiecare caracter poate suferi o mutaie, independent de celelalte caractere. Rezistena la penicilin, de exemplu, este independent de rezistena la sterptomicin. Probabilitatea ca o bacterie s devin, prin mutaie, rezistent la ambele antibiotice este egal cu produsul probabilitilor individuale ale celor dou mutaii. 5.2.2.2. Recombinrile genetice Recombinrile genetice se realizeaz pe ci specifice diferitelor categorii de microbi. La BACT ERII, recombinrile genetice se realizeaz consecutiv transferului de material genetic cromozomal sau plasmidic de la o celul donatoare la o celul receptoare. Transferul are loc prin: transformare, transducie i conjugare.
63

Transformarea Transformarea rezid din transferul unidirecional al unui fragment de ADN cromozomal de la bacteria donatoare la bacteria receptoare i integrarea lui n cromozomul celulei receptoare prin crossing-over. Fragmentul de ADN care ptrunde n bactera receptoare poate proveni de la bacterii moarte, aa cum au demonstrat experienele pe pneumococi efectuate de Griffith (1928) i Avery (1944) (fig.21). Injectnd la oareci dou tipuri de pneumococi distinci antigenic, tipul S III capsulogen i virulent sub form de suspensie de germeni omori i tipul R II acapsulogen i nevirulent sub form de suspensie de germeni vii, G r i f f i t h a izolat de la oarecii mori, pneumococi aparinnd tipului virulent. El nu a putut s explice atunci, cum a fost posibil transformarea pneumococilor neviruleni sub influena germenilor viruleni omori. Natura agentului transformant care opera n experienele lui G r i f f i t h a fost cunoscut abia dup 16 ani, cnd A v e r y, Mc C a r t y i Mac L e o d au artat c fragmente de ADN, eliberate prin liza bacteriilor moarte sau prin extracie chimic, ptrund n celulele pneumococul viu, nzestrndu-l cu determinanii genetici ai sintezei polizaharidelor capsulare de tip S III. n mod similar pot fi transmii determinanii genetici ai rezistenei la antibiotice, ai sintezei enzimelor implicate n catabolismul sau anabolismul celular, etc. Fenomenul de transformare se realizeaz n mai multe etape i depinde de unele condiii pe care trebuie s le ndeplineasc materialul genetic transferabil i celula receptoare.

Fig. 21.Experiena de transformare a pneumococilor efectuat de Griffith Transducia Transducia const n transferul unui fragment de cromozom bacterian de la o celul bacterian la alta prin intermediul bacteriofagilor. n funcie de ciclul evolutiv al bacteriofagului transductor i de materialul genetic transferat prin fag, transducia poate fi mprit n dou tipuri distincte: transducie generalizat i specializat.
64

Trasducia generalizat presupune transducerea oricrei gene cromozomale, indiferent de poziia ei n cromozom. Ea se realizat n majoritatea cazurilor atunci cnd infecia fagic evolueaz sub forma ciclului litic (productiv), care presupune replicarea ADN-ului viral i traducerea informaiei genetice virale, concretizat n formarea de noi virioni. Fagii de transducie generalizat se formeaz printr-o greeal de ansamblare, cnd unele capside fagice ncorporeaz ADN bacterian n loc de ADN fagic, sau ADN bacterian i o cantitate mic de ADN fagic. Mrimea fragmentului cromozomal ncorporat este proporional cu cea a genomului fagic normal, astfel nct ei nu se deosebesc ca dimensiuni i form de fagii normali, alturi de care se formeaz (Zarnea G., 1986). Dup liza celulei n care s-au format, bacteriofagii vor infecta alte celule n care transduc genele bacteriene incorporate. Fagii de transducie generalizat sunt ntotdeauna defectivi, n sensul c nu se mai replic i nu lizeaz noua celul gazd, deoarece sunt lipsii de genele virale eseniale. Transducia specializat, cunoscut i sub denumirea de transducie restrictiv sau localizat, presupune integrarea fagului n cromozomul bacteriei gazd, situaie n care genomul viral nu se replic i nu codific sinteza de proteine virale. Sub aceast form, de virus integrat (profag), bacteriofagii poart denumirea de fagi temperai deoarece nu distrug celula bacterian mai multe generaii, comportndu-se ca material genetic propriu celulei bacteriene. Evoluia intracelular a fagului n acest mod este denumit curent, ciclu reductiv sau lizogenizant. Din cnd n cnd, sub aciunea unor factori inductori (radiaii UV sau X, diferii ageni chimici, etc.), bacteriile lizogene (purttoare de profag) produc bacteriofagi ca rezultat al trecerii profagului n starea de fag vegetativ Odat cu excizia genomului viral din cel bacterian, de genomul viral vor rmne ataate genele adiacente acestuia, care vor fi transferate de fag ntr-o alt celul bacterian.. Astfel, s-a stabilit c fagul (lambda), care infecteaz celulele de Escherichia coli, se integreaz n mod constant ntr-o regiune a cromozomului situat ntre operonii gal i bio,pe care i transduce n mod obinuit. Genele transduse sunt ncorporate n genomul celulei receptoare, care dobndete astfel caractere noi. Conjugarea Conjugarea este o modalitate de transfer de material genetic printr-un pil sexual, n urma contactului direct dintre celula donatoare i cea receptoare, opuse ca sexualitate . Descoperirea fenomenului de conjugare s-a datorat cercetrilor efectuate de L e d e r b e r g i T a t u m n 1946, pe trei tulpini de Escherichia coli, diferite din punct de vedere al exigenelor nutritive: - o tulpin slbatic (prototrof) de E. coli K12, capabil s sintetizeze singur 4 aminoacizi (biotina, metionina, treonina i leucina) i
65

- dou tulpini auxotrofe, din care una capabil s sintetizeze doar biotina i metionina, iar cealalt, treonina i leucina. Autorii au cultivat cele trei tulpini pe medii de cultur minimale (uzuale), care nu conineau cei 4 aminoacizi menionai mai sus. Tulpina slbatic s-a dezvoltat bine pe acest mediu, deoarece i-a sintetizat cei 4 aminoacizi necesari, n timp ce nici una din mutantele auxotrofe n-a crescut, ele nefiind capabile s-i sintetizeze cte 2 din cei 4 aminoacizi necesari. nsmnnd ns pe acelai mediu minimal un amestec din ambele mutante auxotrofe, s-au dezvoltat aproximativ 20 de colonii. Deci, mpreun ele au fost capabile s sintetizeze cei 4 aminoacizi. Cutndu-se explicaia acestui fenomen, s-a avut n vedere faptul c, utilizarea unor tulpini dublu mutante, deficiente n ceea ce privete sinteza a cte doi factori de cretere, exclude posibilitatea unei retromutaii spontane la condiia prototrof, deoarece probabilitatea acestui fenomen este extrem de redus. Rmnea ca plauzibil ipoteza unui transfer genetic ntre cele dou tulpini diferite genotipic, nsmnate mpreun pe mediul minimal. Cultivarea lor ntr-un mediu lichid, n cte una din ramurile unui tub n form de ,,U, separate printr-un filtru poros, nu a mai avut ca efect apariia de celule prototrofe, ceea ce a confirmat presupunerea c dezvoltarea de colonii prototrofe pe mediul solid era rezultatul unui transfer genetic, realizabil numai n condiiile unui contact direct ntre celulele celor dou tulpini. Faptul c deplasarea repetat, sub presiune, a lichidului de cultur dintr-o parte n alta a filtrului separator, era ineficient pentru reconstituirea prototrofiei, excludea intervenia ca agent transformant a ADN- ului eliberat din celulele lizate i sugera necesitatea unui contact obligatoriu ntre celulele intacte, vii. Ulterior, studii de microscopie electronic i analiza genetic au confirmat aceast ipotez, dovedind realizarea transferului de material genetic printr-un proces de conjugare ntre celulele bacteriene (Zarnea G.,1986). Capacitate bacteriilor de a transfera material genetic prin conjugare este determinat de prezena n celul a plasmidelor F, care controleaz sinteza pililor sexuali. n funcie de starea autonom (plasmidic) sau integrat n cromozom (epizomal) n care se gsete factorul F n celula donatoare, receptorul fiind n toate cazurile o celul F- , exist mai multe tipuri de conjugare. Conjugarea dintre bacteriile F+ i F Este forma cea mai frecvent i mai simpl, care presupune prezena factorului F n starea lui plasmidic. Dup sinteza pilului sexual i formarea cuplurilor, celulele F+(mascule) transfer o copie a plasmidei F, celulelor F (femele). Transferul se caracterizeaz printr-o eficien mare, de pn la 100%, astfel nct n populaiile bacteriene n care are loc aceast form de conjugare, proporia celulelor F+ crete considerabil, n relaie direct cu scderea celulelor F-. n urma conjugrii, fiecare celul F- care primete factorul F, devine F+.
66

Conjugarea ntre bacterii Hfr (High frequency of recombinants) i F -, numit recombinare de nalt frecven, presupune integrarea prealabil a factorului F n cromozomul celulei , n regiuni ale acestuia n care exist similitudini de secven a bazelor azotate (trecerea lui n faza epizomal) fig. 22.

Fig.22 Reprezentarea schematic a procesului de conjugare la E. coli ntre o celul Hfr i una F- : sus transferul integral al cromozomului, inclusiv factorul F; jos transferul parial (un singur marker genetic) datorit ntreruperii procesului. Prezena n cromozom a factorului F confer acestuia capacitatea de a fi transferat parial sau total prin conjugare i este determinant pentru calitatea de Hfr sau de ,,supermascul a celulei bacteriene. n stare integrat, factorul F se comport diferit de forma sa plasmidic, n sensul c nceteaz s se mai replice autonom i nu mai este transferabil dect excepional de rar, deoarece el constituie ntotdeauna fragmentul terminal al cromozomului angajat n transfer. n plus, replicarea factorului F integrat, sincron cu cea a cromozomului, nu mai poate fi inhibat de acridinorange. Recombinarea de nalt frecven se desfoar n urmtoarele faze: I. deschiderea inelului cromozmic n zona de inserie a factorului F i trecerea lui de la configuraia ciclic, la cea linear; II. transferul cromozomului ctre celula F-, ncepnd cu extremitatea opus factorului F; III. ncheierea procesului de conjugare, care poate avea loc fie ca urmare a transferrii cromozomului n ntregime, fie ca urmare a ntreruperii transferului pe parcurs. n prima situaie, care presupune transferul factorului F, procesul dureaz 90 100 minute, iar celula receptoare devine F+ . n a doua situaie, factorul F rmne n celula donatoare (avnd n vedere poziia sa terminal), motiv pentru care celula receptoare, dei a primit prin transfer material genetic, rmne F-.
67

Durata conjugrii depinde n cazul transferului parial de mrimea segmentului transferat, innd seama c viteza de conjugare este de aproximativ 105 perechi de baze pe minut. Conjugarea de nalt frecven nu duce la srcirea materialului cromozomic n celula donatoare, fapt care se explic prin replicarea ADN-ului cromozomal n timpul conjugrii, materialul transferat fiind, de fapt, o copie. Conjugarea ntre bacterii F i F (sexducia sau F-ducia) fig. 23. Tulpinile Hfr au uneori tendina s redevin F+ , prin reversia factorului F din starea epizomal n starea plasmidic. n acest caz, factorul F poate conine un numr variabil de gene cromozomale pe care le-a ncorporat n momentul reversiei din regiunile adiacente locului su de inserie, devenind factor F. Consecutiv transferului unui factor F, celula receptoare F- dobndete calitatea de F+ prin primirea factorului de sex, caracterele codificate de genele cromozomice integrate n structura sa, precum i caliti Hfr. Transferul factorului F poate fi comparat cu transducia, rolul fagului transductor fiind suplinit n acest caz de factorul F, care vehiculeaz genele cromozomice ctre celula receptoare.

Fig.23 Fenomenul de sexducie la bacterii (dup Zarnea G.,1970). La CIU PERCILE MICROSCOPICE, se pot ntlni, de asemenea, mai multe posibiliti de recombinare genetic: intercromozomial, intracromozomial i conversia. Recombinarea intercromozomial este combinaia probabilistic a cromozomilor provenii de la cei doi parentali, n timpul diviziunii meiotice.
68

Recombinarea intracromozomial const n schimbul reciproc de gene ntre cromozomii pereche, unul provenind de la mam, cellalt, de la tat (crossing-over). Conversia este un proces de recombinare genetic nereciproc constnd din transferul de pe o cromatid pe alta a unui segment de ADN format din 100200 nucleotide. La VIRUSURI, recombinarea este posibil numai n celula gazd i are loc n cazurile unei infecii concomitente cu dou virusuri, ntre care se produce recombinarea.

Fig.24. Interactiune genetice i negenetice virusuri. A. reasortare genic: sunt prezentate dou posibiliti. Sunt marcate fragmentele genomului i antigenele de suprafa.Sgeile interioare arat corespondena genprotein. B. Heteroploidie si amestec fenotipic. C. Amestec fenotipic i transcapisidare la virusuri icosaedrice. (dupa Ivanof A. i col., 1982)

n fenomenele de recombinare pot fi angajate nu numai virusurile complete sau active, capabile s se multiplice n celula infectat, dar i virusuri inactivate sau defective (care nu pot realiza dect parial ciclul de multiplicare). Mecanismele recombinrii genetice la virusuri sunt (fig.24). - copierea alternativ (copy-choice), n care genomul recombinat conine secvene de nucleotide de la cei doi parentali ca urmare a replicrii dup matria catenei ADN sau ARN a unui virus, pn la un punct, apoi dup a celuilalt virus; - reasortarea genic produs ca urmare a ncapsidrii n acelai virion a unor segmente din genomurile ambelor virusuri; - reactivarea ncruciat n care gene ale unui virus inactivat ptrund n genomul unui virus activ, exprimndu-se fenotipic la virionii recombinai;
69

- reactivarea de multiplicitate, n care virioni ai aceluiai virus, inactivai n gene diferite, se recombin ntr-un genom complet. n infeciile virale concomitente, pot rezulta virusuri recombinate i ca urmare a unor interaciuni negenetice, prin: - mixaj fenotipic i transcapsidare proteine capsidale sau din peplos ale celor dou virusuri se amestec n acelai virion, genomul aparinnd numai unuia dintre ele; dac toat capsida este a unui virus i genomul al altui virus , procesul se numete transcapsidare; - mixaj genotipic (heteroploidie) - includerea acizilor nucleici a celor dou virusuri n aceeai capsid. Recombinrile prin mixaj nu sunt stabile genetic.

NTREBRI RECAPITULATIVE CAPITOLUL V 1. Care sunt caracterele distinctive ntre variaiile fenotipice i variaiile genotipice? 2. Ce reprezint mutaiile, de cte feluri sunt i care sunt caracteristicile lor comune? 3. Care sunt mecanismele recombinrilor genetice la bacterii, ciupercile microscopice i virusuri?

70

CAPITOLUL 6

NOIUNI DE ECOLOGIE MICROBIAN

Ecologia microorganismelor este unul dintre cele mai noi domenii ale microbiologiei, care studiaz relaiile biologice dintre microorganismele prezente ntr-un habitat comun i interaciunile care apar ntre componenii biotici i abiotici ai acestuia (Zarnea G., 1999). Pentru a caracteriza poziia unei populaii de microorganisme ntr-o comunitate se utilizeaz n mod curent termenii de ,,habitat, ,,ni ecologic sau ,,biotop, dei semnificaia lor nu este n ntregime superpozabil. Habitatul unui microorganism reprezint locul n care acesta triete, se reproduce sau, cel puin, supravieuiete. Dimensiunile habitatelor variaz de la foarte mari (oceane, mri), la foarte mici (intestinul unei insecte) iar numrul lor este imens, deoarece, puine regiuni de pe suprafaa planetei sunt lipsite de microorganisme. Natura habitatelor este de asemenea foarte variat incluznd solul, apele dulci i marine, aerul, animalele, plantele, etc. Atunci cnd n perimetrul unui habitat parametrii factorilor fizico-chimici sunt neuniformi, se creaz regiuni, uneori foarte apropiate, care ofer condiii favorabile pentru anumite specii i intolerabile pentru altele, numite microhabitate. Tractusul intestinal al mamiferelor, de exemplu, nu reprezint un habitat unic ci un mozaic de microhabitate, situate n lumenul diferitelor segmente anatomice, pe suprafaa epiteliilor i n criptele mucoaselor care cptuesc aceste segmente. Conceptul de ,,biotop i cel de ,,ni ecologic au o semnificaie mai larg, deoarece se refer nu numai la spaiul ocupat de un microorganism ci i la funcia lui n habitat. Ansamblul de microorganisme care populeaz un biotop constituie microbiocenoza sau microbiota biotopului respectiv. 6.1. RSPNDIREA MICROORGANISMELOR N NATUR Microorganismele sunt prezente, din abunden, n toate mediile n care au fost cutate: sol, ape, aer, corpul fiinelor vii (om, animale, plante), materia organic moart, etc. Aceast ubicvitate decurge din capacitatea de a coloniza i de a supravieui n habitatele cele mai puin adecvate vieii (fundul oceanelor, gheurile polare, zcmintele de iei, izvoarele hidrotermale, etc.) i de a

71

metaboliza cele mai neobinuite substraturi anorganice (N2, S, CO, CO2) i organice (hidrocarburi, fenoli, crezoli, lemn, asfalt, etc.). n ceea ce privete rspndirea pe vertical a microorganismelor, ea este de asemenea neobinuit de extins n raport cu a celorlalte vieuitoare. Cu ajutorul unor sonde speciale, bacteriile au putut fi detectate n atmosfer la nlimea de 12.000 m, la 4000 m adncime n pmnt i la 11000 m n adncul mrilor i al oceanelor. Practic, nu exist mediu natural la nivelul cruia s fie posibil viaa i din care microorganismele s lipseasc. Distribuia microorganismelor n natur, aspectele calitative i cantitative ale microflorei sunt determinate n cea mai mare parte de particularitile biotopului. De exemplu, n lacurile srate predomin bacteriile halofile, n apele termale se gsesc microorganisme termofile i termotolerante, care lipsesc n izvoarele reci, iar n regiunile polare i n adncul oceanelor, unde temperatura rmne tot timpul cobort, triesc numai bacterii psichrofile. n mediile naturale obinuite, mai puin selective, microflora este mult mai heterogen i mai uniform rspndit, astfel nct graniele comunitilor de microorganisme sunt greu, sau uneori chiar imposibil de delimitat. Cu toate acestea, pe baza unor criterii cum sunt prezena constant i n numr mare, microorganismele din fiecare biotop pot fi grupate n dou categorii: - microorganisme adaptate filogenetic la condiiile fizico chimice oferite de biotop, care alctuiesc o comunitate de populaii (specii) relativ stabil, formnd microbiota autohton ( normal sau rezident ) i - microorganisme provenite din alte medii, a cror prezen este n mod obinuit tranzitorie deoarece sunt mai puin adaptate la noile condiii. Ele constituie microbiota alohton sau strin a biotopului respectiv. Eliminarea alohtonilor este determinat de incapacitatea lor de a competiiona cu microorganismele autohtone, mai numeroase i mai bine adaptate, sau cu factorii abiotici diferii. Studiul comunitilor de microorganisme care ocup constant un biotop a artat c structura lor evolueaz n timp i c stabilitatea final a acesteia este condiionat de nlocuirea unor populaii cu altele mai bine adaptate i care, prin interaciuni de tip cooperant, asigur cea mai bun exploatare a habitatului. Fenomenul este cunoscut sub denumirea de succesiune ecologic, iar ecosistemul terminal stabilizat este numit climax. 6.2. MICROBIOTA APELOR Micobiota autohton a apelor variaz, sub aspectul structurii populaiilor de microorganisme, n funcie de caracteristicile fizico-chimice ale mediului acvatic i este corelat cantitativ cu bogia n nutrieni. Cea mai redus ncrctur microbian o are apa de izvor n apropiere de surs, datorit suportului nutritiv foarte redus. Microorganismele prezente sunt cele antrenate din straturile subterane n cursul trecerii spre suprafa.
72

n cazul izvoarelor minerale, apa conine o microbiot autotrof specific, capabil s metabolizeze Fe, S, sau alte minerale i compuii lor anorganici. Cea mai abundent i mai variat microflor se gsete n apele de suprafa (ruri, lacuri), deoarece conin cantiti relativ mari de substane organice provenite din flora i fauna proprie. n plus, ele sunt expuse contaminrii cu microorganisme din sol i din apele reziduale deversate de centrele urbane i marile complexe zootehnice. Pe lng bacteriile provenite din sol, (Azotobacter spp, bacterii nitrificatoare, etc.), rurile conin comuniti bacteriene ce se diversific pe msura ndeprtrii de izvoare. Microbiota normal, cu un caracter permanent, este compus din bacterii aprinnd genurilor Achromobacter, Acinetobacter, Caulobacter, Flavobacterium, Hyphomicrobium, Moraxella, Pseudomonas, Aeromonas, etc., din cianobacterii, levuri i microfungi. Lacurile i alte ape stttoare au o microbiot extrem de variat, care include practic toate categoriile de microorganisme: bacterii, microfungi, microalge i protozoare. Microbiota mrilor i a oceanelor este alctuit din microorganisme psichrofile, barofile i halofile - nsuiri care constituie adaptri la particularitile acestui biotop. Ele prezint i un pleomorfism accentuat, determinat probabil de efectele presiunilor hidrostatice mari (Zarnea G., 1999). Majoritatea microorganismelor al cror habitat natural l constituie apele nu triesc liber ci sunt asociate cu planctonul i cu detritusurile organice, avnd un rol major n mineralizarea acestora. Dintre bacteriile asociate zooplanctonului, unele prezint potenial patogen pentru peti, fiind capabile s produc infecii cu evoluie endemico-epidemic i pierderi economice apreciabile (Aeromonas hydrophila, Aeromonas salmonicida, Vibrio anguillarum, etc.), iar altele, prezente la diverse specii din fauna marin (peti, crabi, scoici, etc.), sunt ageni ai toxiinfeciilor alimentare (Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Aeromonas hydrophila, Clostridium botulinum tip E, etc.). Microbiota alohton, contaminant, a apelor de suprafa se compune deseori din bacterii patogene pentru om i pentru animale, apa reprezentnd sursa de infecie pentru un numr mare de boli infecto-contagioase (leptospiroza, salmoneloza, tuberculoza, febra aftoas, etc.). Infeciile pentru care sursa principal de contaminare este apa, sunt cunoscute sub denumirea generic de infecii hidrice. Bacteriile patogene, ajunse accidental n mediul acvatic, au o existen temporar din cauza urmtorilor factori inhibani : - diluia mare a substanelor nutritive i temperatura relativ sczut a apei; - competiia cu populaiile microbiene acvatice rezidente, mult mai numeroase i mai adaptate la condiiile oferite de acest mediu; - prezena n ap a bacteriofagilor, care le distrug prin bacterioliz; - aciunea bactericid a razelor solare, care sunt eficiente, dac apa este limpede, pn la 1 m adncime.
73

Datorit factorilor menionai, apele de suprafa sufer un proces de autopurificare, graie cruia, la aproximativ 10-20 km n aval de sursa contaminant, apele rurilor sunt n general lipsite de germeni patogeni. Apele subterane rezult din ploi, topirea zpezilor i infiltrarea apei din lacuri i ruri pn la nivelul unor straturi impermeabile. ncrctura microbian a acestor ape este invers proporional cu adncimea i dependent de natura subsolului strbtut, care acioneaz ca un filtru mai mult sau mai puin sterilizant. Rocile nisipoase au proprietatea de a reduce numrul germenilor din ap, reinndu-i n cursul fitrrii, n timp ce rocile calcaroase, care sunt parial dizolvate, permit trecerea microorganismelor. O l s o n i colaboratorii (cit. de Zarnea G.,1999) au evideniat prezena bacteriilor sulfito-reductoare la adncimea de 1264 1752 m. 6.3. MICROBIOTA SOLULUI Solul conine un numr imens de virusuri bacteriofage, bacterii, microfungi, protozoare i alge, de o diversitate mai mare dect alte medii naturale. Microorganismele autohtone sunt cele mai numeroase i sunt caracteristice pentru un anumit tip de sol. Majoritatea sunt autotrofe, astfel nct dezvoltarea lor nu este condiionat de nutrienii din afara solului i nu sunt expuse la fluctuaii numerice semnificative (Zarnea G., 1999). Rolul lor este imens pentru nutriia plantelor i asigurarea fertilitii solului, deoarece sunt singurele organisme capabile s mbogeasc solul n azot prin fixarea azotului molecular din marele rezervor atmosferic. Unele dintre ele microorganismele zimogene, sau de fermentaie - sunt heterotrofe, fiind dependente de substanele organice provenite din exterior (resturi vegetale, excrete, cadavre animale, etc.). Prin activitatea lor metabolic, aceste bacterii realizeaz mineralizarea rezidurilor organice, avnd un rol esenial n circuitul natural al carbonului i azotului. Ele sunt puin numeroase i au o activitate periodic, dezvoltndu-se luxuriant dup adugarea substanelor organice exogene, pentru a reveni la normal cnd concentraia nutrienilor accesibili a diminuat. Microbiota alohton a solului se compune din patogenii pentru plante, animale i om, care ajung n sol odat cu esuturile vegetale infectate, apele reziduale, dejeciile, secreiile i cadavrele animalelor bolnave. Solurile cele mai contaminate se afl n perimetrul spitalelor, fermelor zootehnice, staiunilor de ecarisaj, cimitirelor de animale, etc. Aceste microorganisme au un caracter tranzitoriu, deoarece n sol nu gsesc condiii de multiplicare ci numai de supravieuire temporar, condiionat de factorii de mediu i de eventualitatea ntlnirii cu specia-gazd. Cea mai mare longevitate o au bacteriile patogene sporogene (genurile Bacillus i Clostridium), care rezist n sol zeci sau chiar sute de ani. Infeciile pentru care sursa primar de contaminare este solul, poart denumire de infecii telurice (antraxul, tetanosul, crbunele emfizematos).
74

Concentraia microorganismelor n sol este maxim n straturile superioare ale acestuia (primii 5 cm; rareori pn la 150 cm), exceptnd stratul extern cu o grosime de civa milimetri, unde numrul de germeni este mai redus din cauza factorilor de mediu care acioneaz direct asupra lor (razele ultraviolete, cldura, variaiile brute de temperatur i umiditate, etc). Straturile profunde ale solului, cu excepia celor care prezint fisuri, sunt lipsite de microorganisme, din cauza rolului de filtru pe care l joac straturile succesive. 6.4. MICROBIOTA AERULUI Aerul nu poate fi considerat un biotop n sensul strict al cuvntului deoarece, fiind lipsite de un suport nutritiv, microorganismele nu se pot multiplica. n acest mediu, ele gsesc doar condiii de supravieuire temporar, cel mai adesea n stare latent (sub form de spori). De aceea, ideea mai veche a existenei unei microbiote specifice aerului, a fost abandonat (Zarnea G., 1999). Aerul reprezint ns cel mai important mijloc de dispersare a microorganismelor, curenii de aer putnd s le vehiculeze, att pe orizontal ct i pe vertical, la distane apreciabile. Antrenate de curenii de aer i protejate de picturile mici de ap sau praf, bacteriile ajung pn la nlimea de 500 m, dar s-au putut izola i la 12.000 m, unde au ns o supravieuire redus din cauza efectului bactericid al razelor ultraviolete, temperaturilor sczute i variaiilor mari ale umiditii relative. Spaiul cosmic explorat pn n prezent este microbiologic steril. Principalele surse de contaminare microbiologic a aerului sunt solul (prin particulele de praf, secreii i excreii uscate, care sunt antrenate n atmosfer de curenii de aer) i aerosolii fini, microscopici, numii picturi Pflge, expulzai din cile respiratorii ale omului i animalelor, prin expiraie, tuse i strnut.

Fig.25 Hot cu flux


de aer laminar pentru siguran microbiologic

75

Cele mai importante implicaii ale prezenei microorganismelor n aer sunt transmiterea pe cale aerogen a unor boli infecioase (tuberculoza, difteria, micoplasmoza, gripa, etc.) i contaminarea culturilor microbiene n timpul operaiunilor de nsmnare i transplantare. Cel de-al doilea neajuns poate fi evitat prin efectuarea manoperelor microbiologice n hote (boxe) cu aer laminar pentru siguran microbiologic (fig. 25). Spaiul de lucru din aceste boxe este scldat de aer sterilizat prin filtrare, cu ajutorul filtrelor HEPA (High Efficienty Particulate Air Filtres ). 6.5. MICROBIOTA UNOR ALIMENTE DE ORIGINE ANIMAL Prin nutrienii din compoziia lor, alimentele constituie un mediu de cultur optim pentru multiplicarea unui numr mare de specii bacteriene i microfungi i asigur supravieuirea pentru un timp limitat a microorganismelor strict parazite (rickettsii, chlamidii, virusuri). Microbiota autohton a alimentelor este constituit din microorganismele saprofite pe care fiecare aliment le ntlnete n circuitul su, de la obinere pn la consumator. Prezena acestor microorganisme n numr mare reprezint un indicator al condiiilor de igien necorespunztoare i influeneaz negativ sntatea consumatorului prin produii rezultai din degradarea enzimatic a alimentelor (alterare). De asemenea, prin microorganismele patogene pe care le vehiculeaz i prin metaboliii lor toxici, alimentele pot genera toxiinfecii alimentare i boli infecioase grave cu poart de intrare digestiv ( tuberculoza, antraxul, hepatitele virale, etc. ). 6.5.1. MICROBIOTA LAPTELUI Laptele provenit de la animalele sntoase i recoltat n condiii igienice conine de obicei un numr redus de microorganisme (300 500/ml). ncrctura microbian a laptelui este mai mare n primele jeturi, deoarece antreneaz microflora existent pe mucoasa canalelor galactofore, apoi scade treptat. n laptele provenit de la animalele cu infecii ale glandei mamare, cazate n adposturi insalubre, sau la care mulsul se efectueaz n condiii necorespunztoare (recipiente sau instalaii de muls neigienizate, mulgtori cu minile murdare, uger murdar, etc.), numrul microorganismelor pe mililitru poate fi de ordinul sutelor de mii sau chiar mai mult ( Grecianu Al. i col., 1973) Imediat dup muls, microorganismele sunt repartizate uniform n masa laptelui. n timpul pstrrii ns, odat cu ridicarea grsimilor, ele sunt antrenate ctre suprafa, concentrndu-se n stratul de smntn. Microbiota normal a unui lapte igienic se compune n cea mai mare parte din bacterii aparinnd genurilor Lactobacillus (L. acidophilus, L.casei, .a. ) i Streptococcus ( S. lactis, S. cremoris, S. thermophilus, etc.) - bacterii care prin activitatea lor fermentativ imprim produselor lactate gustul specific.

76

Mirobiota de contaminare a laptelui este dependent calitativ i cantitativ de condiiile de recoltare i de pstrare. Ea poate nsuma specii bacteriene aparinnd genurilor: Pseudomonas, Achromobacter, Leuconostoc, Micrococcus, Propionibacterium, Proteus, Escherichia, Enterobacter, Clostridium, etc. (Mnescu S., 1989). Dat fiind originea intestinal a unora dintre aceste bacterii (Escherichia coli, Proteus spp., Clostridium perfringens), prezena lor denot o poluare de origine fecal i constituie un indicator al condiiilor sanitare pe circuitul laptelui. Speciile patogene care pot contamina laptele i care produc infecii la om n urma consumului de lapte nefiert sunt: Mycobacterium bovis, Brucella abortus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus pyogenes etc. 6.5.2. MICROBIOTA CARNII Carnea conine o flor microbian foarte variat, dependent de posibilitile de contaminare n timpul vieii animalului (n cursul infeciilor septicemice) i dup sacrificare. Condiiile de mediu, n special temperatura crescut i umiditatea, permit microflorei existente s se multiplice i s produc, ntr-un timp relativ scurt, alterarea (putrefacia) crnii prin proteoliz enzimatic. Microorganismele care iau parte la procesul de putrefacie se succed n funcie de condiiile favorabile multiplicrii, existente la un moment dat. Astfel, bacteriile aerobe i anaerobe facultativ, cum sunt micrococii, streptococii, speciile aparinnd genurilor Pseudomonas, Proteus, Achromobacter, bacilii sporulai aerobi (Bacillus subtilis, Bacillus mycoides) intervin primele, consumnd oxigenul de la suprafa i crend condiii favorabile dezvoltrii bacteriilor anaerobe din genul Clostridium. Putrefacia crnii poate avea loc i la temperaturi sczute, cnd intervin bacteriile criofile i mucegaiurile din genurile Mucor, Penicilium, Aspergillus, Cladosporium, etc. Prin intermediul crnii contaminate se pot transmite la om numeroase boli infecioase ca antraxul, tuberculoza, salmoneloza, rujetul, bruceloza, tularemia, morva i altele. Din acest considerent, carnea constitiuie unul din obiectivele principale ale expertizei sanitar-veterinare. 6.5.3. MICROFLORA OUALOR La depunere, oule psrilor sntoase sunt sterile. Ele se contamineaz ulterior cu microorganismele din cuibare sau de pe grtare i n timpul manipulrii. De pe coaja oulor proaspete se izoleaz frecvent bacterii din genurile Proteus, Pseudomonas, Achromobacter, Aeromonas, Escherichia, etc. Ca o consecin a nvechirii oulor, aceste bacterii ptrund n interior determinnd alterarea coninutului prin putrefacie (Grecianu Al., 1986; Mnescu S., 1989). Alterarea prin mucegire apare sub form de pete colorate pe faa intern a cojii i pe glbenu. Mai frecvent implicate n mucegirea oulor sunt genurile: Cladosporium, Penicillium, Sporotrichum i Mucor.
77

n albuul oului proaspt, microorganismele sunt absente sau n numr foarte redus, datorit aciunii bactericide a lizozimului (ferment glucidolitic activ fa de bacteriile Gram pozitive), care se gsete n cantitate apreciabil. Dintre bacteriile patogene pentru om, mai frecvent vehiculate prin ou sunt salmonelele, deoarece pot fi transmise pe cale vertical de psrile purttoare. Consumul de ou contaminate cu salmonele, ca atare, sau sub form de preparate neprelucrate sau insuficient prelucrate termic, constituie o cauz frecvent a toxiinfeciilor alimentare. 6.6. MICROBIOTA ORGANISMULUI ANIMAL Corpul animalelor i al omului ofer condiii favorabile de dezvoltare pentru numeroase microorganisme: bacterii, microfungi i protozoare. Ele gsesc pe i n corpul animalelor, suport nutritiv, condiii constante de pH i presiune osmotic, iar n cazul homeotermelor, i condiii de temperatur constante. n cursul vieii intrauterine, organismele animale sunt sterile. Popularea cu microorganisme ncepe la natere, n timpul trecerii prin vagin i continu prin contactul cu indivizii i obiectele din jur, prin inspiraie, alimentaie, etc., pe tot parcursul vieii. Ele colonizeaz pielea i mucoasele care cptuesc diferite regiuni i caviti ce comunic cu mediul extern: nazofaringele, conjunctiva, tubul digestiv i cile genitourinare inferioare. Microorganismele asociate cu organismele animale se constituie n cele dou tipuri de microbiot deja cunoscute: microbiota autohton i microbiota alohton. Microbiota autohton este reprezentat de comuniti de microorganisme a cror asociere cu organismul animal a fost stabilit filogenetic, n cursul evoluiei comune i a cror structur difer n cursul evoluiei ontogenetice a fiecrui individ. Imediat dup natere, colonizarea tegumentelor i a mucoaselor aparente este fortuit i dependent de primele microorganisme ntlnite, un rol important revenind microbiotei organismului matern. Dup cteva sptmni ns, ca urmare a contactului cu ali indivizi i cu diverse medii naturale, organismul nounscutului este populat de o microbiot asemntoare celei a adultului sntos. Deoarece fiecare regiune a corpului animal difer din punct de vedere fizico-chimic de celelalte regiuni, organismul animal constituie n ansamblul su un mozaic de microhabitate. Pentru a le coloniza, microorganismele trebuie s nving numeroase obstacole, care difer n funcie de natura habitatelor respective. Printre acestea se numr sistemele de eliminare mucociliare i peristaltismul intestinal (care ndeprteaz bacteriile nelegate de epitelii), procesul periodic de ndeprtare a celulelor epiteliale senescente, imunitatea local, variaiile de Ph, competiia cu alte microorganisme, etc. O condiie esenial a colonizrii este complementaritatea care terbuie s existe ntre adezinele bacteriene i receptorii de pe suprafaa celulelor epiteliale
78

ale gazdei. Cel mai frecvent, adezinele sunt reprezentate de fimbrii, care se leag de receptori de natur glicoproteic. n ultimii ani s-a semnalat existena unei nrudiri imunologice ntre microorganismele i mucusul sau mucoasa intestinal n care acestea ocup n mod normal un habitat (Zarnea G., 1999). Prin urmare, faptul c aceste microorganisme sunt recunoscute ca proprii (,,self) de sistemul imunitar al gazdei, constituie un alt factor favorizant al colonizrii habitatelor respective. ntre diferitele specii de microorganisme care alctuiesc microbiota normal a microhabitatelor organismului animal exist un echilibru dinamic, care poart denumirea de eubioz. Ruperea acestui echilibru din diverse cauze (frecvent, antibioterapia de lung durat pe cale oral i modificrile de Ph) se numete disbioz i favorizeaz apariia mbolnvirilor prin multiplicarea n exces a unor specii rezidente, sau prin implantarea microorganismelor strine patogene. Microbiota alohton sau strin a organismului animal se compune din microorganismele provenite din mediul extern (aer, ap, sol, alimente) sau de la alte animale. Comparativ cu microbiota autohon, ea are un caracter tranzitoriu deoarece este incapabil s se adapteze la noile condiii i implic posibilitatea de a conine specii patogene. Microorganismul strin poate ocupa doar o ni eliberat de un autohton, atunci cnd aceasta este perturbat i adus la o condiie anormal. Cnd sistemul revine la normal, microorganismul autohton i va reocupa nia, eliminnd specia alohton. Capacitatea microorganismelor alohtone de a coloniza un anumit habitat i de a se multiplica n el numai n circumstane anormale reprezint, dup Savage, 1997 (citat de Zarnea G., 1999), distincia fundamental dintre microbiota alohton i cea autohton. Cele mai studiate dintre microhabitatele organismului animal sunt cele oferite de segmentele anatomice ale tubului digestiv. Menionm faptul c la acest nivel, un microorganism poate fi autohton pentru un anumit segment i alohton pentru altul, pe care-l tranziteaz dup ce s-a desprins din habitatul su natural. De exemplu, un microorganism din colon poate fi alohton dac provine din segmentele superioare (cavitatea bucal, stomac, intestin subire) sau chiar de la nivelele inferioare colonului (n cazul animalelor coprofage). 6.6.1. MICROBIOTA GASTRICA Microorganismele ajung n stomac odat cu alimentele ingerate i apa. Acest contaminare este foarte accentuat n cazul animalelor coprofage (iepure, porc), care pot ingera zilnic cantiti imense de microorganisme alohtone provenite din fecale.

79

Deoarece, odat ajunse n stomac, majoritatea microorganismelor sunt distruse de aciditatea sucului gastric (Ph = 1,7 2,2) i de enzime, mult vreme stomacul a fost considerat steril. Totui, din coninutul gastric se izoleaz frecvent specii acido-tolerante aparinnd genurilor Lactobacillus, Candida i Torulopsis. n numr mai mic au mai fost semnalate: Bifidobacterium spp., Clostridium spp., Streptococcus spp., Veillonella spp., Peptostreptococcus spp., Bacteroides spp., Helicobacter spp., .a. Pentru a fi considerate ca semnificativ prezente n stomac, microorganismele trebuie s fie prezente la mai muli indivizi investigai i s depeasc densitatea de 103 celule/ ml. 6.6.2. MICROBIOTA INTESTINULUI SUBTIRE Acest segment al tubului digestiv cuprinde cel puin trei habitate diferite sub aspectul gradientului de Ph: duodenul (Ph apropiat de cel al stomacului), jejunul (Ph = 5,9 6,6) i ileonul (Ph = 7 7,3). n duoden i jejun, din cauza aciditii nc destul de crescute, este prezent un numr redus de specii (Streptococcus spp., Lactobacillus spp. i Candida albicans), unele dintre ele fiind derivate n mod cert din cavitatea bucofaringian. Numrul acestora poate crete ns, n aclorhidrie i n alte stri patologice. Ileonul, datorit Ph-ului uor alcalin, constituie un habitat optim. Dintre speciile prezente n densiti semnificative sunt de menionat cele aparinnd genurilor: Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Clostridium, Bacteroides, Veillonella, Staphylococcus, Actinobacillus, crora li se altur bacteriile coliforme i bacilii anaerobi Gram pozitivi. Ali factorii care limiteaz prezena i multiplicarea bacteriilor n intestinul subire, nafar de aciditate, sunt peristaltismul rapid i existena unor substane care inhib multiplicarea acestora. 6.6.3. MICROBIOTA INTESTINULUI GROS Rezervor major de microorganisme, intestinul gros conine o comunitate microbian exterm de complex. Ea este alctuit, la cele mai multe mamifere, inclusiv la om, din cteva sute de specii bacteriene, dintre care numai puine au fost cultivate in vitro i identificate. Majoritatea aparine genurilor: Escherichia, Proteus, Aerobacter, Fusobacterium, Bacteroides, Enterococcus, Clostridium, .a. Din numrul total al bacteriilor, contrar statisticilor mai vechi, coliformii reprezint doar 0,1 - 1% (Zarnea G., 1999). Microbiota intestinului gros include i microorganisme alohtone provenite din alimente sau din segmentele superioare ale tubului digestiv. Aflate n tranzit, ele sunt nesemnificative numeric i funcional comparativ cu populaiile microbiene stabile. Din cauza tranzitului lent, care permite multiplicarea bacteriilor, n ultimul segment al intestinului gros (rectum) numrul acestora atinge densiti enorme:
80

aproximativ 1010 celule bacteriene/gram, ceea ce reprezint 10% din greutatea coninutului total al colonului sau 25% din greutatea uscat a fecalelor. Aceast microflor desfoar o activitate metabolic considerabil, n cea mai mare parte benefic pentru organism: - la ierbivore fermenteaz celuloza, punnd la dispoziia organismului o surs suplimentar de energie; - sintetizeaz cantiti importante de vitamine din grupul B, vitamina K, vitamina PP, acid pantotenic, acid folic, etc., acoperind o parte din necesarul organismului; Aspectele negative legate de prezena microbiotei intestinale constau n eliberarea de produi toxici (indol, scatol, amoniac, etc.) prin hidroliza enzimatic a unor proteine i aminoacizi. Deoarece membranele celulare ale epiteliului intestinal sunt extrem de permeabile fa de amoniac i din cauza toxicitii cronice a acestui catabolit, se consider c microbiota colonului ar avea rol n geneza unor boli, printre care i cancerul de colon (Zarnea G., 1999). 6.6.4. MICROBIOTA RUMENULUI Sucurile digestive la ierbivore, ca i la celelalte mamifere, sunt lipsite de enzime digestive pentru celuloz i alte polizaharide complexe (pectine, amidon, etc.), dei acestea reprezint substratul de baz al nutriiei lor vegetale. Din aceast cauz, ierbivorele folosesc microorganismele celulozolitice prezente n tubul digestiv pentru a asigura transformarea substanelor polizaharidice complexe n forme solubile i asimilabile. Contribuia microorganismelor la nutriia gazdei este diferit n funcie de compartimentul n care i desfoar activitatea. La erbivorele nerumegtoare, degradarea esuturilor vegetale are loc, dup digestia n stomac i intestinul subire, ntr-un cecum lrgit i uneori foarte lung, unde gradul de digerare a celulozei i a altor polizaharide este de 20 30 %. La iepuri i la cobai aceast ineficien este parial compensat prin coprofagie. La rumegtoare, digestia acestor substane se realizeaz n rumen cu participarea unor microorganisme bacterii anaerobe i protozoare mult mai eficiente. Sub aciunea enzimelor bacteriene (celulazele), celuloza este scindat n glucoz, care prin fermentaie se transform n acizi grai volatili i gaze ( H2 , CH4 , CO2 , etc. ). Acizii grai rezultai (acetic, propionic, butiric) se absorb n snge, reprezentnd o important surs energetic. Se apreciaz c, din cele cteva sute de specii bacteriene prezente n rumen, numai 17 30 domin numeric i au o activitate metabolic semnificativ, fapt sugerat de prezena lor constant la diferite specii de rumegtoare, din diferite regiuni geografice. Printre acestea se numr: Bacteroides spp., Methanobacterium spp., Peptostreptococcus spp., Ruminococcus albus, Veillonella gazogenes i alte specii anaerobe.

81

Protozoarele prezente n rumen aparin, asemenea bacteriilor, unui numr nsemnat de genuri i specii. Pe lng faptul c particip efectiv, lturi de bacterii, la procesul de digestie, protozoarele consum oxigenul, realiznd anaerobioza necesar dezvoltrii microflorei bacteriene i intervin n reglarea numrului de bacterii prin competiie pentru nutrieni. 6.7. RELAIILE ECOLOGICE ALE BACTERIILOR ntre speciile bacteriene componente ale microbiocenozelor, ntre acestea i alte categorii de microorganisme care colonizeaz un habitat sau se gsesc n tranzit (virusuri, micromicei, protozoare), precum i ntre microorganisme i macroorganisme, apar interaciuni care pot fi grupate n trei categorii: indiferente (neutralism), de tip beneficial sau cooperant i de tip antagonic. 6.7.1. RELAIILE ECOLOGICE INTERBACTERIENE i ALE BACTERIILOR CU ALTE CATEGORII DE MICROORGANISME Neutralismul, care presupune lipsa unor influene reciproce ntre dou sau mai multe specii, este considerat de muli cercettori ca o relaie puin probabil n natur sau, n orice caz, cu o importan minim. El este ntlnit atunci cnd populaiile microbiene sunt destul de ndeprtate unele de altele i n cazul microorganismelor foarte diferite sub raportul exigenelor nutritive, care nu competiioneaz pentru aceiai nutrieni. 6.7.1.1. Interrelaii microbiene de tip beneficial Relaiile de tip beneficial sau cooperant presupun ca cel puin una dintre speciile care interacioneaz s aib un beneficiu. n funcie de gradul de reciprocitate al beneficiului, de gradul de dependen care se creaz ntre speciile partenere i de efectele aciunii cooperante a bacteriilor asupra substratului, relaiile beneficiale pot fi de mai multe feluri. 6.7.1.1.1. Comensalismul Comensalismul sau metaboliz a este un tip de relaie n care una dintre specii profit de asociere, iar cealalt, n aparen, nici nu profit i nici nu este influenat negativ. Relaiile comensale, la rndul lor, mbrac mai multe aspecte. - Relaii n care beneficiul const n punerea la dispoziia bacteriei care profit, a unei substane nutritive necesare activitii ei vitale, care este un metabolit produs de cealalt bacterie. Pe baza unui asemenea tip de relaie se realizeaz circulaia n natur a principalelor elemente biogene (N, C, S), unele specii bacteriene producnd substratul necesar celorlalte. Un exemplu n acest sens l constituie bacteriile din sol care oxideaz nitriii n nitrai (Nitrobacter, Nitrocystis) i care nu se pot dezvolta dect n prezena bacteriilor care oxideaz n prealabil amoniacul n nitrii (Nitrosomonas, Nitrosocystis), furnizndu-le subsatana azotat absolut necesar nutriiei.
82

- Relaii n care una dintre bacteriile asociate furnizeaz celeilalte un factor de cretere esenial. Un exemplu tipic pentru acest gen de relaie este asocirea dintre hemofili - bacterii care reclam prezena n mediul de cultur a factorului V (NAD sau NADP ) - i unele specii capabile s-l sintetizeze, desemnate din acest considerent cu termenul de doic: stafilococi albi, Bacillus spp., Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Sarcina lutea, levuri (Buiuc G., 1999 ). Coloniile de Haemophilus se dezvolt cu precdere limitrof coloniilor-doici, datorit concentraiei mari de factor V n aceast zon, fenomen ce poart denumirea de ,,satelitism. - Relaii n care beneficiul rezult din degradarea sau neutralizarea unei substane cu efect nociv pentru partener. Astfel, Escherichia coli i ali Gram negativi produc penicilinaz - enzim cu ajutorul creia degradeaz penicilina, crend condiii de multiplicare bacteriilor penicilinosensibile . - Relaii bazate pe modificarea mediului, astfel nct acesta devine favorabil pentru comensal, sub raport fiziologic. Microorganismele aerobe i facultativ anaerobe, consumnd oxigenul, diminueaz potenialul redox al mediului i creaz condiii favorabile pentru anaerobii strici. Un exemplu caracteristic este cel al gangrenei gazoase, n care bacteriile contaminante creaz condiiile necesare pentru dezvoltarea agenilor patogeni specifici (Clostridium perfringens, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, etc.). 6.7.1.1.2. Simbioza Simbioza este o relaie cu caracter specific i permanent (se creaz o dependen complementar ntre parteneri), n care beneficiul este bilateral. Acest tip de relaie este ntlnit mai frecvent la cianobacterii, licheni i protozoare. 6.7.1.1.3. Mutualismul Mutualismul sau simbioza n utriional reprezint o relaie ntre dou specii de microorganisme, care au nevoie una de alta pentru dobndirea anumitor metabolii eseniali. Spre deosebire de simbioza propriu-zis, n cadrul relaiilor mutuale asocierea nu este permanent i nu constituie o condiie sine qua non a existenei celor doi parteneri. Relaia poate fi pus n eviden pe medii de cultur deficiente, n care nici unul dintre microorganisme nu poate crete separat. Speciile Haemophilus canis i Haemophilus parainfluenzae, de exemplu, nu cresc atunci cnd sunt nsmnate separat n ap peptonat, dar, dac sunt asociate formeaz pe acelai mediu culturi abundente. Analiza activitii lor metabolice a artat c fiecare dintre ele realizeaz sinteza unui factor de cretere absolut indispensabil celeilalte, care ns nu are capacitatea de a-l elabora: H. canis sintetizeaz factorul V, iar H. parainfluenzae, factorul X (hematina). Un alt exemplu l constituie asocierea Mucor Rhodotorula, dou ciuperci microscopice care nu cresc pe medii lipsite de tiamin (vitamina B1). Cultivate mpreun, ele nu mai necesit aport exogen de tiamin, deoarece Mocor

83

sintetizeaz o parte din molecula vitaminei (nucleul tiazolic) iar Rodothorula, cealalt parte (nucleul pirimidinic). 6.7.1.1.4. Sinergismul Sinergismul este o relaie facultativ, n care dou bacterii care se multiplic la nivelul aceluiai biotop produc un efect (degradare, sintez, leziune, etc.) pe care nici una dintre ele nu este capabil s-l produc singur. Relaia este ntlnit n mediile naturale, n cadrul microbiocenozelor organismului animal i chiar n etiopatogeneza unor infecii. Astfel, arginina este descompus pn la stadiul de putrescein numai prin aciunea sinergic a speciilor Escherichia coli i Streptococcus faecalis; pigmentul prodigiosina poate fi sintetizat uneori de tulpini apigmentogene de Serratia marcescens cultivate mpreun; n pododermatita infecioas a bovinelor i ovinelor, specia Bacteroides nodosus declaneaz procesul patologic, iar Fusobacterium necrophorum i alte specii asociate n mod constant (stafilococi, actinomicete, treponeme, etc.) poart responsabilitatea tabloului lezional. Relaiile sinergice dintre microorganisme au gsit aplicaie n diverse domenii de activitate, printre care i industria laptelui. Maelele obinute din asocierea unor bacterii lactice (Streptococcus lactis, S. cremoris, Lactobacillus acidophylus, etc.), din bacterii i levuri, sunt utilizate la prepararea diferitelor produse lactate, pentru a le conferi caliti gustative specifice. 6.7.1.2. Interrelaii microbiene de tip antagonic Relaiile de tip anatagonist presupun un efect nefavorabil sau nociv al unuia dintre parteneri pentru cellalt. n funcie de mecanismul de aciune, relaiile antagonice pot fi, la rndul lor, de mai multe feluri. 6.7.1.2.1. Parazitismul Parazitismul este un tip de relaie n care un microorganism se multiplic pe seama celuilalt, distrugndu-l. O relaie tipic de parazitism n lumea microorganismelor este bacteriofagia - fenomenul de parazitism al virusurilor bacteriene, numite i bacteriofagi sau fagi, n celula bacterian. Efectul multiplicrii bacteriofagilor de ctre celula bacterian este liza celulei gazd (bacterioliza). El este vizibil n gazonul bacterian pe medii solide, sub forma unor discontinuiti circulare numite plaje. Specificitatea de gazd a bacteriofagilor a permis valorificarea fenomenului de bacteriofagie n scopul identificrii unor genuri i specii bacteriene prin test fagic (Salmonella spp., Brucella abortus, Bacillus anthracis, etc.), i al crerii de subdiviziuni n cadrul unor specii (fagovariante, fagotipuri sau lizotipuri). Fagotipizarea este util mai ales n stabilirea filierelor epidemiologice a unor infecii bacteriene cum sunt cele produse de Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, .a.
84

Parazitarea unei bacterii de ctre o alt bacterie este un fenomen mai rar ntlnit dect bacteriofagia, dar care are acelai rezultat : bacterioliza. Un caz foarte cunoscut este endoparazitismul speciei Bdellovibrio bacteriovorus la numeroase bacterii din genurile Escherichia, Salmonella, Serratia, Proteus, Pseudomonas, Streptococcus, etc. Datele de microscopie electronic arat c, dup un atac mecanic direct asupra peretelui celular, foarte probabil asociat cu aciunea unei exoenzime, parazitul ptrunde n celula gazd determinnd dezorganizarea i digestia coninutului celular pe seama cruia crete i se multiplic, producnd n cele din urm liza celulei parazitate. 6.7.1.2.2. Competiia Competiia este o interaciune cu importan fundamental pentru toate organismele i probabil cea mai important ca mecanism selectiv. Ea este observat frecvent n cazul microorganismelor stabilite n acelai habitat, care au nevoie de aceiai nutrieni, iar acetia se gsesc n cantiti limitante, adic prea mici pentru a le satisface cerinele. Unii cercettori extind conceptul de competiie, de la nutrieni, la spaiu, lumin, oxigen i oricare alt necesitate comun fa de o surs limitat a biotopului comun. Spre deosebire de parazitism, n competiie influenele adverse se realizeaz indirect, prin lupt bilateral pentru satisfacerea unor necesiti comune. Specia privilegiat este aceea care se multiplic mai repede, eliminnd din biotop specia sau speciile competitoare care au un ritm de multiplicare mai lent. Un exemplu n acest sens l constituie evoluia n culturi mixte a speciilor E. coli i S. aureus. fig. 26 prezint curbele de cretere, practic identice, n culturi monospecifice i efectul cultivrii lor asociate.

Fig.26 Competiia dintre Escherichia coli i Staphylococcus aureus (dup Oberhofer i Frazier, 1961, citat de Zarnea G., 1994)

Se observ diminuarea net a numrului de celule bacteriene aparinnd speciei S. aureus, determinat de ritmul mai rapid de multiplicare a E. coli, care, consumnd nutrienii, limiteaz creterea speciei asociate. Un alt avantaj pentru o specie aflat n competiie, pe lng viteza mai mare de multiplicare, este mobilitatea. Bacteriile invadante, care roiesc de obicei
85

pe suprafaa mediilor solide, sunt capabile s ocupe un habitat naintea celor imobile i a celor cu un aparat ciliar mai puin activ. Competiia este observat frecvent in vitro pe plcile Petri: coloniile foarte apropiate ntre ele, care competiioneaz pentru spaiu i nutrieni, sunt mult mai mici comparativ cu cele distanate. De asemenea, n culturile mixte nu se ajunge niciodat la densitatea maxim observat n culturile monospecifice, deoarece, n majoritatea cazurilor, exist o specie avantajat prin viteza de multiplicare i/sau mobilitate, care va inhiba multiplicarea celorlalte prin spolierea mediului n nutrieni eseniali. n condiii naturale, competiia dintre microorganisme este influenat i de o serie de parametri abiotici ai mediului (Ph, temperatur, concentraia oxigenului sau a srurilor, etc.), care pot afecta viteza de cretere a populaiilor de microorganisme. Acest fenomen este evident n cazul populaiilor de bacterii psichrofile i psichrotrofe, care, prezente asociat, competiioneaz pentru aceiai nutrieni. La temperaturi joase sunt avantajate microorganismele psichrofile, care se multiplic cu viteze mai mari, putnd exclude psichrotrofele. La temperaturi mai ridicate, situaia se inverseaz, fiind avantajate psichrotrofele. n habitatele cu variaii periodice de temperatur, avantajele evolueaz cnd ntr-un sens, cnd ntr-altul, determinnd predominana uneia sau alteia din cele dou populaii. 6.7.1.2.3. Antagonismul propriu-zis Antagonismul propriu-zis sau a ntibioza se realizeaz prin intermediul unor substane sintetizate i eliminate n mediu de unele specii microbiene, care exercit un efect nociv asupra altor specii. n funcie de natura acestor substane i de modalitatea de aciune, antagonismul microbian poate fi specific i nespecific. Antagonismul specific se realizeaz pe baza unor substane sintetizate de unele specii de bacterii i fungi, denumite antibiotice. n funcie de toxicitatea pentru celula animal i de spectrul antibacterian, antibioticele se mpart n dou categorii: antibiotice propriu-zise i bacteriocine. Primul antibiotic a fost descoperit de A l e x a n d e r F l e m i n g n 1929, n urma sesizrii antagonismului exercitat de o ciuperc din genul Penicillium fa de stafilococ. Plecnd de la observaia lui F l e m i n g, o echip de cercettori de la Universitatea din Oxford, condus de C h a i n i F l o r y, a reuit n 1940 s extrag din culturile de Penicillium i s purifice substana activ cu efect antibiotic (penicilina), introducnd-o pe scar larg n terapia infeciilor. n anii urmtori au fost identificate i extrase numeroase alte antibiotice. Cele mai multe se obin din actinomicete aparinnd genului Streptomyces (streptromicina, cloramfenicolul, tetraciclina, eritromicina, etc.), din bacterii aparinnd genului Bacillus (polimixina, bacitracina, etc.) i din ciuperci microscopice, cum este cazul genurilor Penicillium i Cephalosporium (penicilina, cefalosporina, etc.).
86

Pe lng antibioticele de biosintez, exist numeroase antibiotice obinute prin sintez chimic i semisintez. Antibioticele acioneaz selectiv, numai asupra celulei bacteriene (majoritatea avnd un efect bacteriostatic), fiind lipsite de nocivitate pentru celula animal. Ele pot fi clasificate dup mai multe criterii: compoziia chimic, spectrul antibacterian, mecanismul de aciune, etc. Pe baza spectrului antibacterian, antibioticele se mpart n : - antibiotice de tip penicilinic, predominant active fa de bacteriile Gram pozitive (penicilina, eritromicina, novobiocina, etc.); - antibiotice de tip streptomicinic, predominant active fa de bacteriile Gram negative (streptomicina, neomicina, kanamicina, polimixina B, etc.); - antibiotice cu spectru larg, active fa de bacteriile Gram pozitive i Gram negative (tetraciclinele, cloramfenicolul, cefalosporinele, etc). Pe baza mecanismului de aciune, antibioticele pot fi grupate astfel : - antibiotice cu efect inhibitor asupra sintezei peretelui celular, care blocheaz diferite faze ale sintezei peptidoglicanului (penicilina, cefalosporinele .a.); - antibiotice care altereaz ireversibil structura membranei citoplasmatice i implicit funcia de barier osmotic a acesteia, astfel nct celula pierde ioni eseniali pentru desfurarea normal a metabolismului (polimixina B, nistatina, colistina, .a.); - antibiotice cu efect dereglator asupra transcrierii sau traducerii informaiei genetice, care acioneaz prin blocarea replicrii ADN, blocarea fazei de iniiere a transcrierii informaiei genetice de pe ADN pe ARN mesager, modificarea secvenei aminoacizilor n cursul sintezei lanurilor peptidice prin schimbarea conformaiei ribozomilor, etc. Fiecare specie bacterian se caracterizeaz printr-un spectru de sensibilitate i de rezisten natural la antibiotice, controlat genetic de gene cromozomale sau plasmidice. Acest spectru se poate modifica datorit posibilitii dobndirii antibiorezistenei prin diferite mecanisme genetice i biochimice. Mecanismele genetice de dobndire a rezistenei la antibiotice sunt mutaiile la nivel cromozomal (cu o rata de 10-5 - 10-11) i recombinrile genetice consecutive primirii de material genetic exogen prin transformare, transducie, conjugare. Rolul cel mai important n dobndirea antibiorezistenei l are, ns, transferul plasmidelor R. Mecanismele biochimice de rezisten la antibiotice constau n: - inactivarea antibioticului n afara celulei bacteriene cu ajutorul unor exoenzime; - stoparea accesului n celul; - alterarea sediului-int al antibioticului. Practica medical i cea veterinar trebuie s urmreasc limitarea posibilitilor de dobndire a antibiorezistenei de ctre bacterii, prin utilizarea ct mai raional a antibioticelor n scopuri terapeutice i folosirea ct mai limitat i mai atent supravegheat a deeurilor rezultate de la fabricarea antibioticelor, ca
87

biostimulatori n zootehnie. Tendina actual este de nlocuire a acestora ntr-o proporie ct mai mare, mai ales n reetele furajere, cu probioticele. Bacteriocinele reprezint o clas special de substane antibiotice cu aciune bactericid, sintetizate de un numr mare de specii bacteriene purttoare de informaie genetic specific, coninut n plasmidele ,,col. Primele bacteriocine au fost identificate i descrise la specia Escherichia coli de A n d r G r a t i a (1925), care le-a dat denumirea generic de colicine. Ulterior, deoarece s-au identificat substane asemntoare la numeroase alte specii bacteriene, s-a creat termenul mai general de bacteriocine, iar n funcie de specia bacterian care le produce, ele au primit denumiri inspirate din epitetul de gen (listeriocine, vibriocine, etc.) sau de specie (colicine, piocine welchicine, etc.). Din punct de vedere al structurii, bacteriocinele se mpart n dou categorii: bacteriocine cu nivel de organizare molecular i bacteriocine cu structur corpuscular, vizibile electronooptic, asemntoare cu bacteriofagii sau cu fragmente din particula fagic (capete, dar mai ales cozi). Bacteriocinele produse de bacteriile Gram-negative au un spectru ngust de activitate, limitat, n cele mai multe cazuri, la tulpini bacteriene din aceeai specie sau aparinnd unor specii nrudite taxonomic. Bacteriocinele Grampozitivilor sunt lipsite de specificitate, fiind active fa de unele bacterii Grampozitive ndeprtate taxonomic de specia productoare. Mecanismele prin care aceste substane i exercit efectul bactericid sunt elucidate doar n cteva cazuri. n general, bacteriocinele se leag iniial de celulele sensibile prin intermediul unor receptori specifici de pe suprafaa acestora (asemntor bacteriofagilor), apoi ptrund n interior i acioneaz dereglator asupra unor ,,inte vitale (metabolism energetic, biosinteza de ADN i ARN, etc.). Caracteristica principal a bacteriocinelor, care le deosebete fundamental de antibioticele propriu-zise, const n faptul c biosinteza lor are efect letal asupra celulelor productoare. n acest caz, perpetuarea proprietii de bacteriocinogenez n rndul populaiilor bacteriene se explic prin numrul redus de celule n care acest caracter letal potenial devine actual i prin faptul c restul celulelor bacteriene purttoare de factor ,,col sunt imune la aciunea colicinei exogene omologe. Prin urmare, odat elaborat n mediu, o anumit colicin are efect antibiotic numai asupra celulelor aparinnd aceleeai specii, dar care nu o pot elabora, fiind lipsite de factorul ,,col respectiv. Avndu-se n vedere aciunea bactericid a tulpinilor purttoare de plasmide ,,col, centrat n jurul speciei omologe, se poate presupune c fenomenul de bacteriocinogenez are un rol de reglare a populaiilor bacteriene n diferite ecosisteme naturale (Buiuc G., 1999). n practica diagnosticului bacteriologic, bacteriocinogeneza i bacteriocinosensibilitatea sunt acceptate uneori ca markeri ai patogenitii. S-a

88

constatat, de exemplu, c n cadrul speciei Escherichia coli tulpinile colicinogene sunt de regul i patogene, iar cele bacteriocinosensibile, nepatogene. O alt aplicaie a bacteriocinelor n practica de laborator este bacteriocinotipia. Bacteriocinotipul (bacteriocinovarianta) este o subdiviziune a speciei bacteriene care grupeaz toate tulpinile sensibile la aceleai bacteriocine. Bacteriocinotipia are implicaii asemntoare cu fago(lizo)tipia, n urmrirea unor filiere epidemiologice, sau n evidenierea altor proprieti corelate n mod constant cu bacteriocinotipul. Antagonismul ne specific este impus de speciile bacteriene capabile s produc substane nocive pentru alte specii, asupra crora acioneaz neselectiv (Duca Eugenia i col., 1979 ). Un exemplu l constituie bacteriile acido-lactice componenete ale microbiotei normale a intestinului, mucoasei bucale, mucoasei vaginale, care inhib dezvoltarea bacteriilor patogene prin acidifierea mediului. Pe baza acestui considerent, n tratamentul unor infecii intestinale se recomand nlocuirea antibioticelor cu preparatele probiotice. Majoritatea cercettorilor definesc drept probiotice, produsele ce conin bacterii vii, n stare vegetativ sau sub form de spori, care administrate la om i animale mpiedic nmulirea bacteriilor potenial patogene. Probioticele conin culturi pure sau mixte de tulpini bacteriene aparinnd genurilor Lactobacillus (L. acidophilus, L. casei, L. helveticus, L. lactis, L. bulgaricus), Bifidobacterium, Streptococcus (S. thermophilus), Enterococcus ( E. hirae), etc., levuri, sau amestecuri de bacterii i levuri (de exemplu, Lactobacillus spp. i Sacharomyces spp.). Administrarea de suspensii sau preparate comerciale de Lactobacillus acidophilus este considerat astzi indispensabil pentru ameliorarea echilibrului microbiotei normale a intestinului, compromis n cursul administrrilor orale de antibiotice cu spectru larg. I l i a Me c i n i c o v laureat al premiului Nobel - a fost primul cercettor care a avut ideea nlocuirii terapeutice a microflorei patogene a tubului digestiv, cu o microflor ,,impus format din lactobacili i streptococi, prin consum de iaurt i lapte btut (Duca Eugenia i col., 1979; Carp-Crare M., 1991). Caracteristicile unui bun probiotic nsumeaz: - lipsa de patogenitate i toxicitate pentru organismul animal; - capacitatea de a supravieui i de a fi metabolic activ n mediul gastrointestinal; - efectele benefice asupra organismului; - accesibilitatea din punct de vedere economic. Efectele produselor probiotice sunt, n principal, urmtoarele: - reducerea numrului unor grupe de microorganisme cu potenial patogen, prin producerea de metabolii cu efect toxic (acizi organici, H2O2, antibiotice) i/sau prin competiie pentru nutrieni sau pentru situsurile de adeziune de pe suprafaa epiteliilor intestinale (experimental, s-a demonstrat c Lactobacillus spp.

89

ader la peretele intestinal, rezistnd la cel puin patru splri succesive cu soluie tampon); - stimularea creterii animalelor prin stimularea apetitului, mbuntirea conversiei hranei i protecia oferit fa de infeciile intestinale; - efect anticancerigen (n special, Lactobacillus spp.) prin inhibarea creterii celulelor tumorale sau supresia bacteriilor care produc enzime (betaglucuronidaz, nitroreductaz) rspunztoare de eliberarea unor substane cancerigene din compui inofensivi; - stimularea imunitii prin creterea activitii macrofagelor sau a concentraiei imunoglobulinelor anticorp - efect condiionat de trecerea probioticelor n circulaia general (B e a l m e r i col. citai de Zarnea G., 1994). Dup cum s-a demonstrat, lactobacilii pot strbate mucoasa intestinal, supravieuind cteva zile n splin, ficat i pulmon. 6.7.2. RELAII ECOLOGICE NTRE BACTERII i MA CROORGANISME ntre bacteriile componente ale microbiotei rezidente (autohtone) i tranzitorii (alohtone) a organismelor animale i vegetale i gazd se stabilesc relaii de tip cooperant sau antagonic, asemntoare celor existente ntre microorganismele care interacioneaz. 6.7.2.1. Relaiile de tip beneficial 6.7.2.1.1. Comensalismul Comensalismul este relaia dintre organismul animal i majoritatea bacteriilor rezidente pe tegumente i mucoase, unde gsesc surse de hran (celule descuamate, mucus) i condiii de multiplicare, de care beneficiaz fr a prejudicia gazdei. 6.7.2.1.2. Simbioza Simbioza reprezint tipul de interaciune al bacteriilor din tubul digestiv al ierbivorelor cu animalul-gazd. Prin activitatea lor biologic, aceste bacterii degradeaz unele polizaharide inaccesibile enzimelor digestive (celuloza, hemicelulozele, lignina, etc.), transformndu-le n produi absorbabili cu un potenial energetic de obicei considerabil. Totodat, bacteriile intestinale i cele ruminale sintetizeaz majoritatea vitaminelor complexului B. Alte activiti biosintetice de natur bacterian au ca rezultat convertirea unor compui simpli care conin n molecula lor azot, n proteine microbiene, digerabile prin aciunea unor enzime proteolitice prezente n segmentele posterioare ale tubului digestiv. Relaiile de tip simbiotic ntre bacterii i plante sunt cunoscute ndeosebi la leguminoase, care preiau azotul atmosferic prin intermediul bacteriilor fixatoare de azot din genul Rhizobium, prezente n nodozitile de pe traiectul rdcinilor. n categoria interaciunilor cooperante micro-macroorganism se situeaz i antagonismul impus microorganismelor alohtone patogene de ctre microbiota
90

normal, prin ocuparea nielor anatomice, elaborarea de substane antibiotice, competen mai mare n utilizarea nutrienilor i a altor resurese din habitat, etc. 6.7.2.2. Relaiile de tip antagonic Principala relaie conflictual macro-microorganism este infecia (lat. inficere = a otrvi, a deteriora). n sens larg, prin infecie se nelege ptrunderea i multiplicarea microorganismelor patogene n organismele cu organizare superioar, precum i reacia de rspuns pe care o provoac acestora. Ea poate mbrca forma unei stri poteniale (infecie inaparent clinic sau latent), nsoit doar de restructurarea imunologic a organismului, sau poate avea o evoluie asociat cu perturbarea strii normale de sntate a organismului-gazd i cu fenomene de disconfort caracteristice strii de boal (boala infecioas). Infecia este o interrelaie ecologic dinamic, la apariia i evoluia creia particip activ ambii parteneri: microorganismul prin mecanismele sale de patogenitate i organismul-gazd prin factorii aprrii antiinfecioase (genetici, fiziologici, imunologici). Numeroi factori endogeni i de mediu pot influena aceast relaie de tip conflictual n favoarea unuia sau a celuilalt partener. 6.7.2.2.1. Patogenitatea bacteriilor i mecanismele ei Termen discutabil din punct de vedere semantic, patogenitatea definete n sensul cel mai larg, aptitudinea unui microb de a determina, n mod natural sau n condiii experimentale, un efect nociv asupra organismului-gazd. Patogenitatea bacteriilor este legat n general de parazitismul lor, dei cele dou proprieti nu sunt superpozabile. Principalele nsuiri care condiioneaz patogenitatea intrinsec a bacteriilor sunt virulena i toxicitatea, la care se adaug uneori capacitatea de sensibilizare alergic a organismului. 6.7.2.2.1.1. Virulena i factorii de virulen Virulena reprezint capacitatea bacteriilor de a coloniza la poarta de intrare (de a se adapta i de a se nmuli) i, eventual, de a invada umorile i esuturile, evitnd sau neutraliznd mecanismele de aprare nespecific ale gazdei. Factorii care confer bacteriilor virulen sunt reprezentai de structuri ale celulei bacteriene i enzime. Ei pot fi grupai n funcie de modalitatea de aciune n dou categorii: factori de colonizare i ptrundere n organism i factori de invazie . 1. Factorii de colonizare i ptrundere Fimbriile (pilii) de a deren i alte adezine (acizii lipoteichoici, proteinele membranei externe a bacteriilor Gram-negative, etc.), asigur legarea bacteriilor de epiteliile mucoaselor dar i de celulele epiteliale cheratinizate,
91

endotelii, dini, etc., mpiedicnd astfel eliminarea lor prin fluxul diferitelor secreii, tuse, micarea cililor, peristaltism. Totodat, se creaz posibilitatea de acces a bacteriilor patogene la nutrieni, temperatur favorabil, protecie fa de anticorpi i lizozim, etc. Ca dovad, celulele de Escherichia coli aderente la epiteliul intestinal, dup o perioad de lag mai scurt, se multiplic mult mai intens dect celulele neaderente. Legarea este condiionat de existena unor receptori celulari specifici adezinelor bacteriene, avnd uneori un important grad de selectivitate. Astfel, fimbriile de tip - 1 permit aderarea la mucoasa intestinului gros, iar fimbriile P sau Pap (Pyelonephritis associated pili) i adezina 075X favorizeaz colonizarea cilor urinare (Zarnea G.,1994). n baza acestei specificiti, Streptococcus pyogenes i Corynebacterium diphteriae ader la epiteliul faringian, Escherichia coli enteropatogen i Vibrio cholerare ader la mucoasa jejun-ileonului, iar Neisseria gonorrhoeae ader n mod special la epiteliul uretral i cervical (Duca Eugenia i col., 1979). Cele mai multe bacterii au ns dou sau mai multe tipuri de adezine cu specificiti de legare diferite. Rolul receptorilor celulari n producerea infeciilor a fost demonstrat fr echivoc de S e l l w o o d i colaboratorii (citai de Zarnea G., 1994) n 1975. Porcii foarte rezisteni la infecia cu tulpini de Escherichia coli K88, productoare de enterite severe, nu au receptori pentru aceast bacterie, spre deosebire de animalele foarte sensibile, care poart numeroi receptori de adezine. n mod asemntor, sensibilitatea omului la pielonefrita cu Escherichia coli este corelat cu numrul receptorilor de pe membrana uroepiteliului, foarte variabil de la o persoan la alta. Se pare c n infeciile urinare ascendente cu E. coli uropatogen, colonizarea se datoreaz i flagelilor (cililor), cu ajutorul crora bacteria se deplaseaz contra curentului de scurgere a urinei. Ig A proteazele reprezint un factor important de colonizare, deoarece permite bacteriilor patogene s supravieuiasc pe suprafaa mucoaselor, prin clivarea moleculei anticorpilor de tip Ig A. Ele au fost evideniate la Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenze, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, etc. Ptrunderea n organism a bacteriilor se realizeaz prin mecanisme incomplet elucidate. La majoritatea speciilor, ea este condiionat de apariia unor discontinuiti accidentale (plgi, microleziuni) sau disfuncii la nivelul barierelor naturale antiinfecioase. Bacteriile foarte mobile i foarte subiri aparinnd genurilor Leptospira, Borrelia i Treponema sunt capabile s ptrund prin mucoase i chiar prin tegumentele intacte. Mobilitatea acestor bacterii se datoreaz flagelilor periplasmatici numii i filamente axiale.

92

Unele bacterii (ca de exemplu, Corynebacterium diphteriae) sunt dotate cu fimbrii i cu enzime de alterare, prin care produc leziuni locale, crendu-i pori de intrare i coloniznd n mucoas. La bacteriile parazite intracelular, mecanismul cel mai frecvent de ptrundere n celula-gazd este endocitoza facilitat de parazit prin intermediul unor lipopolizaharide i proteine membranare (procedeu descris la Shigella flexneri, Escherichia coli enteroinvaziv (EIEC), Neisseria gonorrhoeae) i prin mecanisme nc necunoscute (Duca Eugenia i col., 1979; Zarnea G., 1994). Bacteriile endocitate sunt incluse n vacuole delimitate de o membran derivat din membrana celulei-gazd, n interiorul crora se multiplic i supravieuiesc, rezistnd la fagocitoz. 2. Factorii de invazie Invadarea organismului este condiionat, n principal, de factorii bacterieni antifagocitari i de enzimele care faciliteaz difuzarea bacteriilor n esuturi. a. Factorii antifagocitari de inhibare a nglobrii n fagocit Capsula reprezint pentru speciile capsulate (Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae, Clostridium perfringens) un important factor de virulen, deoarece bacteriile dotate cu acest nveli vscos nu sunt nglobate de leucocitele polimorfonucleare neutrofile, prin neaderarea acestora la suprafaa bacteriei. Ca exemplu clasic de patogenitate datorat n exclusivitate prezenei capsulei, poate fi citat pneumococul; tulpinile de tip S (smooth) capsulate sunt patogene, iar cele de tip R (rough) necapsulate sunt lipsite de patogenitate (vezi experiena lui Griffith, cap. de Genetic bacterian). Compuii parietali ce fac parte din structurile speciale ale peretelui bacterian prezint proprieti antifagocitare bine demonstrate pentru proteina ,,M a streptococilor beta-hemolitici grup A, antigenul ,,Vi prezent la unele specii de Salmonella (S. typhi, S. paratyphi C, S. dublin), antigenul K prezent la Escherichia coli, etc. Unii autori identific aceti factori cu fimbriile de virulen, care asigur aderena specific la esutul parazitat i implicit rezistena la fagocitoz. Rolul antifagocitar al acestor factori este demonstrat experimental prin anularea virulenei consecutiv tratrii bacteriilor cu ser imun specific factorului respectiv: ser anticapsular, antiprotein M, anti-Vi. Coagulaza liber , o enzim elaborat de Staphylococcus aureus, este din punct de vedere chimic i funcional asemntoare cu protrombina. Ea coaguleaz plasma sanguin n jurul celulelor bacteriene, formnd un manon cu rol antichimiotactic pentru fagocite. Avnd la suprafa acest strat protector, bacteriile nu mai sunt recunoscute ca non-self, fiind vorba deci, de un mimetism la scar celular.
93

Mobilitatea, dup B r u b a k e r, 1985 (citat de Zarnea G., 1994), ar constitui un factor important pentru virulen. Astfel, prin capacitatea lor de a se deplasa rapid n mediile vscoase, cum sunt cele din organism, spirichetele (Leptospira, Borrelia, Treponema) se sustrag procesului de fagocitoz, nct leucocitele le captureaz cu mare dificultate. b. Factorii antifagocitari de inhibare a digestiei n fagocit Unele bacterii, numite bacterii parazite facultativ intracelular, supravieuiesc n interiorul fagocitelor, iar unele reuesc chiar s se multiplice, transformnd aceste celule n factori de diseminare a infeciei n organism. Rezistena la digestia n fagocit se realizeaz prin mecanisme incomplet elucidate, ce difer de la o specie bacterian la alta (Zarnea G., 1994). 1.mpiedicarea fuziunii fagolizozomale este un mecanism comun, ntlnit la Mycobacterium spp., Chlamydia spp., Legionella pneumophila, etc., dar care are baze moleculare diferite. Astfel, la Mycobacterium tuberculosis, fuziunea este blocat de ,,cord-factor- o glicolipid (6,6-dimycoltrehaloza) din structura peretelui celular; la Mycobacterium microti, prin creterea concentraiei intracelulare a AMP; la Chlamidia psittaci, prin modificarea structurii membranei fagozomului n care este coninut. 2.Evadarea din fagozomi la scurt timp dup ptrunderea n celule a fost descris la rickettsii (Rickettsia mooseri, Rickettsia tsutsugamushi). Un rol esenial n acest proces l are fosfolipaza A, care atac membrana fagozomului. 3.Rezistena la aciunea enzimelor lizozomale n macrofagele din organismul neimunizat este ntlnit la unele bacterii Gram-pozitive (Listeria monocytogenes, Erysipelothrix insidiosa), la numeroase genuri Gram-negative (Salmonella, Brucella, Yersinia, Shigella, Coxiella, Francisella, Haemophilus) i la bacteriile acidorezistente (Mycobacterium spp.). Mecanismele rezistenei sunt incomplet cunoscute. La unele specii, se pare c factorul care opune rezisten enzimelor lizozomale l constituie lipidele de perete (factorul cord, lipopolizaharidele Gram-negativilor). c. Agresinele - enzime care favorizeaz difuzarea n esuturi Hialuronidazele sunt exoenzime care cliveaz acidul hialuronic din structura substanei fundamentale a esutului conjunctiv, realiznd astfel permeabilizarea barierelor fiziologice (epiteliale, mucoase, tisulare), favorabil difuzrii bacteriilor n organism. Ele sunt sintetizate de streptococii betahemolitici, stafilococi, clostridii, etc. Fibrinolizinele produc liza barierei de fibrin pe care organismul o formeaz n jurul focarelor inflamatorii pentru a limita diseminarea germenilor n esuturi. Prin intermediul acestor agresine, unii stafilococi i streptococi determin infecii septicemice.
94

Colagenaza, enzim puternic proteolitic elaborat de Clostridium perfringens, hidrolizeaz colagenul din structura esutului conjunctiv, crend astfel bree adnci pe care apoi le invadeaz. Alte enzime bacteriene, ca proteazele, lipazele, dezoxiribonucleaza, ureaza, fosfataza acid, etc., fr a avea o valoare deosebit n determinarea patogenitii, o poteneaz. 6.7.2.2.1.2. Toxicitatea bacteriilor Toxicitatea este proprietatea unor bacterii de a exercita un efect alterativ sau dereglator asupra unui organism neimunizat, prin componente structurale sau prin secreii celulare, numite toxine. Ele sunt neutralizate n organismul imunizat (Carp-Crare M., 1991; Duca Eugenia, 1974). Ideea c unele manifestri patologice sunt produse de anumite substane chimice (,,sepsine) a fost formulat pentru prima dat de K l e s s (1872), referindu-se la leziunile produse de stafilococi. L f f l e r (1880) a demonstrat faptul c specia Corynebacterium diphteriae rmne localizat n nazofaringe, fiind absent in organele interne (miocard, rinichi, ficat, sistem nervos, etc.), care sunt cele mai afectate de leziunile produse la distan de locul infeciei. K o c h (1884) a descris holera ca pe o toxicoz, pe baza observaiilor c agentul patogen rmne n intestin, fr s invadeze structurile acestuia i esuturile nvecinate. n plus, administrarea oral a filtratului de cultur reproduce boala, n timp ce, pe cale parenteral este inofensiv. R o u x i Y e r s i n (1888) au folosit primii termenul de ,,toxin, pe care o considerau ,,un fel de enzim. n prezent, termenul definete orice substan toxic de provenien biologic, sintetizat de bacterii, fungi (micotoxine), celule vegetale sau animale (Zarnea G., 1994). Termenul de ,,otrav este rezervat substanelor chimice organice sau anorganice (stricnin, sruri de argint, arseniu, etc.) care, introduse ntr-un organism pe diverse ci, produc leziuni celulare sau tisulare, perturbarea sau suspendarea unor activiti fiziologice normale i, n funcie de doz, chiar moartea organismului. Clasificarea toxinelor bacteriene Au fost propuse mai multe sisteme de clasificare a toxinelor. Probabil, faptul c nici unul nu satisface exigenele unei clasificri riguros tiinifice, explic utilizarea curent (cu toat ambiguitatea sa) a conceptului dualist de mprire n exotoxine (toxine extracelulare) i endotoxine (legate de corpul bacterian sau reinute n celul). Principalele diferene ntre cele dou categorii de toxine sunt sintetizate n tabelul numrul 3.

95

Tabelul 3 Caractere distinctive ntre exo- i endoenzimele bacteriene


Caracterul diferenial Bacterii productoare Compoziia chimic Exotoxine E Gram-pozitive Proteine ndotoxine Gram-negative 1.Lipopolizaharide (LPS prezente n membrana extern a peretelui celular la toate bacteriile Gramnegative); 2.Proteine (toxina holeric i toxina shiga) Dezintegrarea celulei

Mecanismul eliberrii din celul

Sensibilitatea la 600 C i la enzimele proteolitice Efectul toxic

Sunt eliminate pe parcursul sintezei. Concentraia intracelular este neglijabil. Sensibile Specific i puternic n doze mici Prin filtrarea sau centrifugarea culturilor Se transform n anatoxine (toxoizi) netoxice dar antigenice Puternic (induc formarea unor cantiti mari de anti-corpi antitoxici neutralizani)

Relativ rezistente Nespecific i slab

Modul de separare Rspunsul la aciunea formolului 0,4% i a cldurii (400 C) Imunogenitate

Dezintegrarea celulelor bacteriene prin metode: fizice (ultrasonare, nghe-dezghe); chimice (tripsin, acid tricloracetic); biologice (bacteriofagi) Nu se transform n anatoxine

Slab

n funcie de esutul sau celula int asupra crora acioneaz i efectul pe care-l produc, se cunoate o mare varietate de toxine: hemolizine, leucocidine, neurotoxine, toxine cu efect necrotic, enterotoxine, etc. Hemolizinele sunt enzime bacteriene care determin n principal liza globulelor roii dar i a altor categorii de celule (leucocite, trombocite, celule tisulare). Ele au fost puse n eviden la numeroase specii bacteriene: Clostridium tetani, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, stafilococi, streptococi, enterobacteriacee, etc. Leucocidinele sunt factori eliberai de unele bacterii dup nglobarea lor n fagocite, determinnd moartea acestora. Bacteriile productoare de leucocidine, ca stafilococii i streptococii, sunt denumite bacterii ,,piogene, deoarece leucocitele moarte se acumuleaz n focarul inflamator, contribuind la formarea puroiului. Neurotoxinele sunt exotoxine cu tropism pentru esutul nervos, determinnd tulburri n transmiterea influxului nervos ctre organele efectoare. Principalele specii productoare de neurotoxine sunt Clostridium tetani (toxina

96

tetanic), Clostridium botulinum (toxina botulinic) i Shigella dysenteriae (toxina shiga). Toxinele cu efect necrotic acioneaz asupra esuturilor, determinnd moarte local prin citoliz sau citotoxicitate. Reprezentative pentru aceast categorie sunt toxina difteric i lecitinaza. Toxina difteric (Corynebacterium diphteriae) acioneaz att local, la nivelul mucoasei faringiene, ct i la distan, ca urmare a difuzrii pe cale sanguin i a fixrii mediate de receptori, pe diverse esuturi i organe (miocard, esutul nervos, ficat, rinichi,etc.). Lecitinaza este o toxin-enzim produs de Clostridium perfringens i de unele tulpini de Staphylococcus aureus, care scindeaz lecitina (lipid ce constituie o important substan de cimentare a membranelor celulare i a mitocondriilor) i produce liza rapid a globulelor roii, leucocitelor i a unor celule tisulare. Enterotoxinele constituie un grup particular de exotoxine, implicate n majoritatea toxiinfeciilor alimentare (Brzoi B., Meica S., Negu S., 1999). Ele sunt elaborate de specii bacteriene Gram-pozitive (Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, Clostridium difficile, Clostridium sordellii), dar mai ales de bacterii Gram-negative: Escherichia coli enterotoxigen (ETEC) i enterohemoragic (EHEC), Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella spp., Shigella dysenteriae, Aeromonas hydrophila, Campylobacter jejuni, etc. n general, enterotoxinele acioneaz direct asupra mucoasei intestinale, determinnd fenomene citotoxice i distructive (liza i descuamarea enterocitelor) sau tulburri funcionale, care modific fluxul apei i ionilor prin bariera epitelial. Dereglrile funcionale sunt cauzate de activarea enzimelor adenilatciclaza sau guanilat-ciclaza din membrana celular, urmat de creterea cantitilor de AMPc (adenozin-monofosfat ciclic), respectiv GMPc intracelular. Consecina acestei acumulri este inversarea polaritii funcionale a enterocitului, care, din celul absorbant devine celul excretoare de ap i electrolii (Na+, Cl-). Alterrile histologice i funcionale produse de enterotoxine se traduc, din punct de vedere clinic, printr-o diaree abundent. Un alt mecanism de aciune, specific enterotoxinelor stafilococice, ar consta (dup Rducnescu H., Bica-Popii Valeria, 1986; Brzoi D. i col. 1999) n stimularea terminaiilor nervului vag la nivelul stomacului, stimuli care, ajungnd la centrul vomitiv din creier, declaneaz contracii peristaltice i antiperistaltice i, consecutiv acestora, descrcri diareice i vomismente dup o perioad scurt de incubaie (1-6 ore). Tulburrile se accentueaz pn la stare de oc dup trecerea toxinei n circulaia sanguin, unde interacioneaz cu macrofagele i limfocitele T, determinnd eliberarea n exces a citokinelor. 6.7.2.2.1.3. Factorii de sensibilizare Factorii de sensibilizare sau factorii de alterare secundar sunt substane bacteriene corpusculare sau excretate (enzime, toxine), puternic antigenice, care complic boala infecioas dup apariia anticorpilor, prin cuplare cu acetia.
97

Nu toate reaciile antigen-anticorp care au loc n organism sunt favorabile acestuia. Uneori, alterri grave pot fi produse de prezena concomitent a antigenului (bacterie, produs microbian, antigene tisulare similare antigenelor bacteriene) i a anticorpilor corespunztori. n principiu, orice microorganism care a produs o infecie, dac nu a fost repede eliminat din organism, poate cu condiia ntrunirii anumitor proporii i cantiti antigen-anticorp s determine fenomene de sensibilizare mediate de anticorpi i/sau limfocitele T. Bacteriile care determin frecvent complicaii prin fenomene de sensibilizare sunt prezentate n tabelul numrul 4. Tabelul 4 Factori bacterieni de sensibilizare Bacteria productoare Mycobacterium spp. Bulkholderia mallei Brucella spp. Treponema pallidum Francisella tularensis Streptococcus pyogenes serogrup A Bacterii Gram-negative Natura chimic Protein Protein Protein Protein Protein Denumirea Tuberculin Malein Brucelin Luetin Tularin Factor ,,reumatogen Factor ,,nefritogen Endotoxine

LPS

NTREBRI RECAPITULATIVE 1. Ce reprezint habitatul, biotopul sau nia ecologic a unui microorganism? 2. Cum se clasific microorganismele dintr-un habitat lund drept criteriu prezena constant i numrul lor? 3. Care sunt repartiia, particularitile morfo-fiziologice, i rolul microbiotei mediilor naturale (sol, ap, aer) ? 4. Cum se numesc infeciile pentru care sursa primar de contaminare sunt solul i apa? 5. Care este proveniena microorganismelor din lapte, carne i ou i care sunt implicaiile de ordin igienico-sanitar ale contaminrii microbiene a alimentelor? 6. Care sunt niele anatomice ale organismului animal populate de microorganisme ? 7. Ce rol ndeplinete microbiota normal a intestinului gros i a rumenului? 8. Ce fel de relaii se stabilesc ntre microorganismele care populeaz acelai habitat i prin ce se caracterizeaz fiecare tip de relaie? 9. Care sunt relaiile de tip beneficial i relaiile de tip antagonic dintre micro i macroorganisme? 10. Care sunt mecanismele patogenitii la bacterii?

98

TEST 1. Teoria miasmatic a infeciilor a fost elaborat de: a.Hipocrat b.Leeuwenhoeck c.Linee 2. Demonstreaz natura microbian a fermentaiilor i a infeciilor; a. Eduard Jenner b. Louis Pasteur c. Joseph Lister 3. Fondatorul colii romneti de microbiologie a fost: a. Ioan Cantacuzino b. Nicolae Stamatin c. Victor Babe 4. Virusurile au dimensiuni de ordinul: a. micrometrilor b. nanometrilor c. milimetrilor 5. Formele de existen a virusurilor n natur sunt: 1 2 3 6. Prile componente ale unui virus sunt: a. citoplasma b. capsida c. membrana citoplasmatic d. genomul ADN sau ARN 7. Virusurile: a. dispun de echipament enzimatic i metabolism propriu b. nu dispun de enzime metabolice, din care cauz sunt parazite obligatoriu ntr-o celul vie 8. n funcie de histotropism, virusurile pot fi grupate astfel: 1.. 2.. 3... 4... 9. Virusurile : a. se multiplic prin diviziune direct (sciziparitate) b. sunt multiplicate de celulele n care paraziteaz

99

10. Multiplicarea virusurilor parcurge urmtoarele 4 etape: 1.. 2.. 3.. 4... 11. Efectul citopatic al multiplicrii virusurilor n celule const n : a. degenerare i moarte celulular b. multiplicarea anarhic a celulelor infectate c. apariia unor incluzii intracitoplasmatice sau intranucleare 12. Incluziile Babe - Negri din neuronii piramidali situai n cornul lui a. Amon apar n: a. turbare b. grip c. variola aviar 13. Substanele care acioneaz distructiv asupra virusurilor sunt: a. hidroxidul de sodiu b. formaldehida c. glicerina d. majoritatea antibioticelor 14. Bacteriile sunt microorganisme: a. unicelulare b. pluricelulare c. eucariote d. procariote 15. Nucleul celulei bacteriene este format: a. dintr-un singur cromozom b. 2-4 cromozomi 16. Capsula protejeaz bacteriile fa de: a. fagocitoz b. radiaiile ultraviolete c. desicaie (uscciune) 17. Mobilitatea bacteriilor se datoreaz: a. cililor b. pililor c. plasmidelor 18. Sediul sintezei proteinelor n celula bacterian l constituie: a. vacuolele b. ribozomii c. nucleul 19.Bacteriile autotrofe (litotrofe) utilizeaz ca surs de carbon: a. compuii organici ai carbonului b. compuii anorganici ai carbonului

100

20. Bacteriile chimioorganotrofe utilizeaz: a. energia luminoas b. energia rezultat din reaciile de oxidoreducere 21.Respiraia la bacterii const n: a. sinteza structurilor celulei bacteriene b. reacii de oxidoreducere prin care bacteriile i procur energia c. preluarea oxigenului din aer i eliminarea bioxidului de carbon 22. n funcie de natura chimic a ultimului acceptor de hidrogen, respiraia la bacterii este de trei tipuri: 1. 2. 3. 23. Majoritatea speciilor bacteriene se multiplic prin: a. diviziune direct (sciziparitate) b. nmugurire c. spori 24. Fazele multiplicrii bacteriilor n mediile de cultur sunt: 1.. 2... 3. 4 25. n faza staionar a multiplicrii bacteriilor are loc: a. o multiplicare activ la fiecare 15-20 minute b. moartea logaritmic a bacteriilor c. o multiplicare de nlocuire 26. Sunt alctuii din celule care prin nmugurire generaz pseudomicelii: a. fungii levuriformi b. fungii filamentoi 27. Ciupercile microscopice se inmulesc prin: a. spori sexuai b. spori asexuai c. poriuni de miceliu 28. Sunt spori asexuai: a. bazidiosporii b. ascosporii c. blastosporii d. artrosporii e. conidiosporii 29. Asigur conservarea miceilor n condiii de mediu nefavorabile: a. ascosporii b. clamidosporii 30.Bolile produse de micei poart denumirea generic de iar cele produse de toxinele acestora ,.

101

31. Se realizeaz prin mutaii I recombinri genetice: a. variaiile fenotipice b. variaiile genotipice 32. Variaiile fenotipice: a. sunt induse de factorii de mediu b. apar ca o consecin a modificrii genomului c. nu se transmit ereditar 33. Transducia de material genetic de la o celul bacterian la alta se realizeaz prin intermediul: a. plasmidelor F b. bacteriofagilor 34. Sunt mecanisme de recombinare genetic la virusuri : a. copierea alternativ b. mixajul fenotipic i transcapsidarea c. reasortarea genic 35. Recombinrile virusurilor prin mixaj: a. sunt stabile genetic b. nu sunt stabile genetic 36. Microorganismele care populeaz n mod constant un biotop (habitat) constituie: a. microbiota autohton a biotopului b. microbiota alohton a biotopului 37. Cea mai mare i diversificat ncrctur microbian o are: a. apa de izvor b. apa rurilor I a lacurilor c. apa subteran 38. Concentraia microorganismelor din sol este maxim n: a. stratul extern cu o grosime de civa milimetri b. primii 5-150 cm c. straturile profunde 39. Aerul reprezint pentru microorganisme: a. un biotop propriuzis b. un mijloc de dispersare pe orizontal i pe vertical 40. ncrctura microbian a laptelui este mai mare: a. n primele jeturi de lapte b. n ultimele jeturi de lapte 41. Alterarea (putrefacia) crnii determinat de microorganisme poate avea loc: a. numai la temperaturi crescute i umiditate b. la temperaturi sczute 42. Oule proaspete conin microorganisme: a. la suprafaa cojii b. n albu c. n glbenu

102

43. Dintre bacteriile patogene pentru om, prin ou se transmit mai frecvent: a. bacilul antraxului b. bacilii tuberculozei c. salmonelele 44. Microbiota normal a organismului animal populeaz: a. pielea b. musculatura c. tubul digestiv d. sngele i limfa 45. Echilibrul existent ntre diferitele specii de microorganisme care alctuiesc microbiota normal a organismului se numete . Ruperea acestui echilibru poart denumirea de .. 46. Care dintre proprieti constituie un avantaj pentru speciile bacteriene aflate n competiie pentru nutrieni i spaiu: a. sporogeneza b. mobilitatea c. viteza mare de multiplicare d. capsulogeneza 47. Antagonismul bacterian specific (antibioza) se realizeaz prin intermediul unor substane numite . 48. Probioticele sunt : a. antibiotice utilizate n terapia bolilor infecoase b. culturi de microorganisme nepatogene 49. MenionaI dou dintre efectele produselor probiotice: 1 2. 50.Relaia dintre microbiota rumenului i animalul-gazd este: a. simbioza b. comensalismul c. competiia 51. Capsula confer bacteriilor virulen prin: a. inhibarea nglobrii bacteriilor capsulate de ctre fagocite; b. inhibarea digestiei n interiorul fagocitelor dup ce bacteriile au fost nglobate; 52. Sunt enzime care favorizeaz difuzarea bacteriilor n esuturi i se numesc agresine: a. hialuronidazele b. hemolizinele c. leucocidinele d. fibrinolizinele 53. Sunt sensibile la temperatura de 60 C: a. exotoxinele bacteriene b. endotoxinele bacteriene

103

54. Enterotoxinele bacteriene: a. sunt implicate n majoritatea toxiinfeciilor alimentare b. acioneaz direct asupra mucoasei intestinale c. determin tulburri nervoase. 55. Se transform n anatoxine (toxoizi): a. exotoxinele bacteriene b. endotoxinele bacteriene

104

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

BRZOI D., MEIC A S., NEGU M., 1999 Toxiinfeciile alimentare. Editura Diacon Coresi, Bucureti. BUIUC D.,NEGU M., 1999 Tratat de microbiologie clinic. Editura Medical. CARP-CRARE M.,1991 Microbiologie. Curs. Institutul Agronomic ,,Ion Ionescu de la Brad Iai. CARP-CRARE M., 2001 Microbiologie veterinar. Virusologie. Casa de Editur Venus. Iai. COMAN I. , MA RE M., 2000 Micologie medical aplicat. Editura Junimea, Iai. COMAN I.,BR HAL HELEN A-MARIA, FLORES CU RODICA, 1997 Decontaminarea. Vol.I. Editura Satya. Iai. DUCA EUGENIA, 1974 Microbiologie medical. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. DUCA EUGENIA, DU CA M., FU RTUNESCU G., 1979 Microbiologie medical. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. GRECIANU Al., 1986 Microbiologie general i imunologie. Curs. Institutul Agronomic ,,Ion Ionescu de la Brad Iai. HART T., SHEARS P., 1997 Atlas de poche de microbiologie. Mdicine Sciences. Flamarion. Paris. IVANOF A., C IUPE M., SAC C., VAN CEA DO INA, 1982 Microbiologie. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. LARPENT J. P., 20 00 Listeria. Technique & Documentation Lavoisier. Paris. LARPENT J. P. , LARPENT GOURGAUD M., 1990 Mmento technique de microbiologie. Technique & Documentation Lavoisier. Paris. MNESCU S., 1989 Microbiologie sanitar. Editura Medical. Bucureti. MZREANU C., 1999, - Microbiologie general. Editura Alma Mater. Bacu. NICHITA ILEANA, 2007 Micologie. Editura MIRTON , Timioara. RAICU P., STOIAN V., 1989 Gene i cromozomi. Editura tiinific i enciclopedic. Bucureti. RPUNTEAN GH., R PUNTEAN S ., 199 9 Bacteriologie special veterinar. Tipo Agronomia Cluj-Napoca. STAMATIN N ., 1965 Microbiologie i imunologie veterinar. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. TMA V., ERBAN M., COTRU M ARIA, 1981 Biochimie medical veterinar. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. TOPAL D. N., 197 8 Microbiologie general. Vol.II. Universitatea ,,Al. I. Cuza Iai. TORTORA J.,G., FU NKE R ., B., C ASE L. CHRISTINE, 1997 Microbiology. An introduction. Sixth edition. Benjamin/ Cummings Publishing Company. California.

105

ZARNEA G ., 1963 Microbiologie. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. ZARNEA G., 1970 Microbiologie general. Editura Didactic i Pedagogic. Bucureti. ZARNEA G., 1983 Tratat de microbiologie general. Vol.I. Editura Academiei Republicii Socialiste Romnia. ZARNEA G., 1984 Tratat de microbiologie general. Vol.II. Editura Academiei Republicii Socialiste Romnia. ZARNEA G ., 1986 Tratat de microbiologie general. Vol.III. Editura Academiei Republicii Socialiste Romnia. ZARNEA G., 1994 Tratat de microbiologie general. Vol. V. Editura Academiei Romne.

106