Ingineria tisular

Dr.hab.med. prof. Viorel Nacu

Nu ndrznim pentru c lucrurile sunt dificile, ci pentru c nu ndrznim lucrurile sunt dificile Seneca

Ingineria tisular este un domeniu multidisciplinar care include biologia, medicina i ingineria i are ca scop promovarea calitii vieii umane prin restabilirea, meninerea sau ameliorarea funciei esuturilor sau organelor.

 Morfogeneza complex a esuturilor n dezvoltarea embrionar poate fi replicat sau repetat n ingineria tisular n esuturile postnatale.

Regenerarea la amfibii: triton

Ingineria tisular
Aplicaie terapeutic - esutul crete n corpul pacientului sau n afara lui i ulterior este transplantat. Aplicaie diagnostic - esutul este crescut in vitro i este utilizat pentru testarea metabolismului in prezenta unor substane medicamentoase, toxicitatea i patogenitatea lor.

Scopul Ingineriei tisulare:

Restabilirea funciei prin distribuirea elementelor vii care devin integrate n corpul pacientului.
Joseph P. Vacanti 1999

Ingineria tisular necesit colaborare interdisciplinar Inginerie Chimia Biologie celular Proteomica Clinicienii, tiina materialelor Fizica Imagistica Genomica

Baza Ingineriei tisulare:

1) Biomaterialele: materiale noi, neviabile care sunt prevzute pentru organizarea creterii i diferenierii celulelor n procesul de formarea a unui esut funcional (Matrige, spongii Sintetice sau naturale). 2) Celulele: Sursa, Diferenierea, Purificarea Metode, protocoale, care trebuie s asigure numrul necesar de celule, i diferenierea lor n dependen de esutul lezat (celule autologice, alogene, xenogene, celule obinute prin inginerie i prin manipulare imunologic).

3) Biomoleculele: includ factori de cretere sau genele lor, factori de difereniere i proteine morfogenetice.

4) Aspectele de Desigh Ingineresc: includ expansia celulelor pe structuri 2-D, creterea esuturilor 3-D, bioreactore, stocarea celulelor i esuturilor i distribuirea lor. 5) Aspectul biomecanic: determin proprietile esuturilor native; identificarea unor proprieti minime necesare esutului ingineresc, semnalelor mecanice care influeneaz esuturile ingineriei tisulare, eficacitatea i sigurana acestor esuturi.

6) Informatizarea pentru susinerea ingineriei tisulare: analiza secvenelor de gene i proteine, analiza expresiei genice, expresiei proteinelor. Analiza interaciunilor, analizarea cantitativ a celulelor i esuturilor, modelarea tisular i celular, manufactura digital a esuturilor, sisteme automatizate de asigurare a calitii, interfeelor.

 Biomaterial - material neviabil utilizat pentru interaciune cu un sistem biologic n scopuri medicale. Bioactivitatea - reprezint aciunea pe care o exercit asupra activitii celulei (respiraie, metabolism, difereniere, proliferaie) att materialul, ct i produsele care apar la biodegradarea lui n organism. Materialul sub acest aspect poate fi bioinert (care are o aciune minim asupra celulelor (nu exist materiale absolut bioinerte)) pn la bio- sau citotoxic.

Bioactivitatea materialului depinde de componena chimic, viteza de degradare, produsele care apar la degradare.
Adaptarea celulei la mediul nconjurtor este determinat de parametri fiziologici (homeostaza intern): temperatur, pO2, pH, concentraia K i Na.

Biocompatibilitate
Este o particularitate a biomaterialului care reflect posibilitatea coexistenei lui cu biosistemul (organismul viu) prin pstrarea funciilor normale ale esuturilor i posibilitii de regenerare. (aprecierea
biocompatibilitii poate fi efectuat numai n experimente in vivo).

 Biorezisten este capacitatea biomaterialului de a rezista pentru o perioad anumit de timp la contactul i aciunea esuturilor adiacente exprimata prin meninerea proprietilor sale fizice, chimice i mecanice.

 Citochinele - Un grup de proteine i peptide care sunt utilizate n organism n calitate de componente semnal (similare hormonilor) care faciliteaza comunicarea ntre celule i reprezint multiple proteine i glicoproteine de dimensiuni mici, cu masa de 8-30 kDa.

Citochinele utilizate n clinic

Interferon a (Roferon, Alferon-N, Intron A) terapie antiviral (chronic Hepatatis B and C), leucemiile. Interferoi b (Betaseron) scleroza multipl G-CSF (Neupogen) tratament de suport n transplantarea mduvei osoase. Interferon g (Actimunne) granulomatoza chronic. Epo (Procrite) maladii renale. GM-CSF, IFN-g, IL2, TNF au aciune toxic cnd sunt aplicate sistematic.

Problemele inginerii tisulare:

Trebuie esutul pentru implantare s fie produs in vitro sau in vivo? Ce tram (suport) trebuie utilizat? Din care material trebuie sa fie produs, caracterisitca porilor, capacitatea de resorbie, proprietile mecanice? Cum sa fie produs? Ce tip de celule trebuie s fie utilizate? Sursa de celule?

Expandarea pn la numrul necesar fara s-i schimbe fenotipul?

Ce substane regulatorii sunt necesare pentru stimularea proliferrii celulare i sinteza matricei pentru facilitarea diferenierii celulelor stem?

Regenerarea
In Vitro
Se produce esutul definitivat in vitro prin plasarea celulelor ntr-o matrice i apoi se implanteaz esutul n corpul recipientului.

In Vivo
Se implanteaz in vivo biomatricea cu sau fr celule n corpul uman pentru a facilita regenerarea esutului in vivo.

Ingineria medical a esuturilor

Creterea grefelor in Vitro Avantaje Evaluarea esuturilor pn la implantare Creterea grefelor In Vivo Avantaje Incorporarea i formarea sub aciunea factorilor reglatori intracorporali incluznd i aciunea mecanic. Dezavantaje Deplasarea i degradarea sum aciunea stresului mecanic in vivo.

Dezavantaje Pentru incorporare esutul trebuie sa fie remodelat, fiindc nc nu este posibil arhitectura de stres in vitro.

Celule i matrice necesare pentru ingineria tisular

Connective Tissues (Musculoskeletal) Osul Mitoz Migrare Biosintez Contracie

Cartilajul articular

ligamente/ tendoane

Discul Intervertebral

Meniscul

 Mitoza inadecvat necesit celule din exterior.

Migrare inadecvat necesit utilizarea unei trame, matrice. Biosintez inadecvat necesit anumite gene sau factori de cretere.

Materialele
Naturale - colagenul Matrice tisular acelular (submucoasa intestinal, etc.) Polimeri sintetici poliglucozide, Polilactide. Ceramice Biogsticl, hidroxiapatite

Ingineria tisular
Expandarea celular Colectarea celulelor din corp. O matrice corespunztoare cu factori de cretere i citochine necesare.

Reimplantarea esutului n locul deteriorat. Aplicarea n cultur celular

http://biomed.brown.edu/Courses/BI108/BI108_2007 _Groups/group12/Homepage.html

Ingineria tisular

Celule: Differentiate Stem adulte Embrionare

Hidrogel Spongii nanostructurate Spongii autoasamblate Spongii fabricate din materiale solide
Celule Spongii

Ingineria tisular

Plasarea dinamica a celulelor Creterea masei transferabile Stimuli mecanici

Biorectoa re

Semnale

Molecule mici Factori de cretere, polipeptide Acizi Nucleici (ADN, ARN, oligonucleotide)
Nanotechnology and Tissue Engineering: The Scaffold, CRC Press; 1 edition (June 16, 2008)

Configurare 3D: Materials

Pentru ca un material s regenereze un material destinat esuturilor trebuie s: Stimuleze; - creterea celulelor/differentierea - ataarea celulelor, - depozitarea matricei extracelulare, Ca un template pentru creterea esuturilor in 3D pentru implantare, s fie resorbabile Pentru producerea medicamentelor s fie insolubile

 Ce este Nanotehnologia? De ce se folosete nanotehnologia pentru ingineria tisular? Cum nanotehnologia se aplic n ingineria tisular?

Materiale
Polyglycolic acid (PGA) Polylactic acid (PLA)
Highly crystalline, hydrophilic, byproduct is glycolic acid

Polydioxanone (PDO)
Highly crystalline

Hydrophobic, lower melting temperature, byproduct is lactic acid

Elastin Gelatin collagen Fibrillar collagen Collagen blends Fibrinogen

Polycaprolactone (PCL)

Synthetic polymers

Blends

Semi-crystalline properties, easily co-polymerized, byproduct caproic acid PGA-PLA PGA-PCL PLA-PCL PDO-PCL

Natural polymers

PGA, PLA and PLGA most commonly used PDO most similar to Elastin collagen blend (limited by shape memory) PCL most elastic and mixed frequenlty with other material s Provide nanoscale physical features
Collagen Type I & III + PDO: best possible match for blood vessels
Advanced Drug Delivery Reviews Volume 59, Issue 14, 10 December 2007, Pages 1413-1433

World's Lightest Material Unveiled, Metal Is 99.9% Air A team of researchers from UC Irvine, HRL Laboratories and the California Institute of Technology have developed the worlds lightest material with a density of 0.9 mg/cc about one hundred times lighter than Styrofoam. Their findings appear in the Nov. 18 issue of Science.

Aerographite - a conductor as light as air

The tetrapods of the zinc oxide form an ideal basis for the robust material Aerographite.
http://www.electroline.com.au/articles/55944-Aerographite-a-conductor-aslight-as-air

Matricea osoas demineralizat, ce reprezint substratul organic al esutului osos, compus din fibre de colagen i substratul de baz glucido-proteic. Matricea osoas este obinut din os compact, demineralizat n soluie de acid clorhidric, ulterior fiind pstrat n soluie de alcool etilic.

Bioreactoare
Stem cells can be grown in beads Differentiation can occur within beads cultured in defined medium e.g. to bone Scalable production of stem cells can be achieved in 3D culture

Avantajele Bioreactorului
Metod universal Echipament automatizat Reducerea timpului de cretere de la (45 la15 zile) Road crescut (+500%) pentru producie industrial

Promitei-v c vei face tot ce este posibil pentru a v atinge obiectivele; avei ncredere n via, avei ncredere n voi niv.