Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Obiectivele:
1. Proprietile fizico-chimice ale proteinelor
2. Masa molecular, metode de deteminare
3. Solubilitatea proteinelor, factorii ce o influeneaz.
4. Proprietile soluiilor proteice (coloizi). Factorii de stabilizare n soluie a substanelor coloidale.
5. Starea soluiilor coloidale sol, gel, xerogel. Exemple.
6. Sarcina electric a proteinelor. Punctul i starea izoelectric.
7. Denaturarea proteinelor, agenii ce provoac denaturarea. Ce modificri sufer structura proteinei la denaturare.
8. Coagularea proteinelor. Factorii care previn coagularea.
9. Metodele de studiere a componenei calitative i cantitative a proteinelor a) hidroliza b) cromatografie c)
electroforeza d) salifiere e) dializa f) gel-filtrare
Proprieti fizico-chimice
Mas molecular
Solubilitatea proteinelor
Proprietile amfotere
Denaturarea
Sarcina electric a proteinei
Mas molecular a proteinelor
proteinelor
este comparativ cu alte substane mare: intre 10.000 i 40.000.000 Daltoni.
se determin prin diferite metode:
prin calcul cu ajutorul compoziiei chimice cunoscute: Ex:
Prin analiza de sedimentare
Prin studierea presiunii osmotice
Prin difuzia luminii
Prin cromatografia de excludere molecular
Masa molecular a diferitelor proteine. Solubilitatea proteinelor
Variaz n limite mari:
- Proteinele globulare prezint grade diferite de solubilitate,
- cele fibrilare sunt insolubile n ap.
1
Vitez de difuzie mic.
Viscozitate mare
Proprieti osmotice
pot forma geluri
Proprietile optice
Soluiile proteice concentrate posed opalescen specific. La iluminarea lateral a soluiei proteice raza de
lumin n ea devine vizibil., formnd conul de lumin, numit efectul Tindal. Acest efect de dispersie a luminii se explic
prin difracia razelor de lumin de ctre particulele n soluie.
Capacitatea proteinelor de a dispersa lumina este folosit:
- la determinarea cantitativ a proteinelor prin metoda nefelometric
- la studierea microscopic a structurilor celulare.
Soluiile proteice posed absorban n limitele spectrului ultrafiolet, caracterizat de prezena in ele a resturilor
aminoacizilor fenilalanina, tirozina i triptofan. Fenilalanina i tirozina are absorbana maxim la lungimea de und 280
nm, iar triptofanul - 254 nm.
Viscozitate mare
e dependent de masa i forma moleculelor. Mrirea concentraiei proteinei conduce i la mrirea viscozitii
soluiei (se mresc forele de coeziune ntre moleculele proteice).
Proteinele fibrilare sunt mai vscoase comparativ cu cele globulare.
Viscozitatea e dependent de:
temperatur- t0 - viscozitatea
prezena electroliilor (ex. srurile de Ca2+ mresc viscozitatea prin formarea punilor de Ca2+)
Proprieti osmotice
proteine fiind macromolecule nu difundeaz prin membrane semipermiabile, pe cnd micromoleculele trec prin
asemenea membrane. Acest proces e folosit n practic pentru purificarea soluiilor proteice de amestecuri
micromoleculare, numit dializ.
proprietatea de a forma geluri
Proteinele prezint coloizi liofili, i deci pot forma geluri. Particulele coloidale de protein interacioneaz ntre
ele i apare o structur reticular intern din care cauz viscozitatea soluiei crete. Formarea de gel se observ la
coagularea sngelui (formarea reelei de fibrin).
Xerogel
este gelul secat (uscat) - lipsit de ap.
se capt prin Secare liofil a soluiilor coloidale
Secarea liofil const n ndeprtarea apei n vid din soluia coloidal ngheat.
2
se pstreaz un timp mai ndelungat ceea ce prezint importan practic n industria de preparare a
medicamentelor de origine proteic.
Ex: deferite proteine (albumina, gama-globulinele i altele).
Datorit acestui fapt la trecerea unui curent electric n soluie, AA vor migra n mediu acid spre catod(-), iar n mediu
alcalin spre anod(+).
Punct izoelectric
- E ste o valoare a pH-ului la care suma sarcinilor pozitive este egal cu suma sarcinilor negative (migrarea proteinelor
sau a AA ntr-un cmp electric este nul)
- se noteaz pHi i este diferit pentru fiecare aminoacid sau protein.
n aceast form se exercit fore de atracie reciproce ntre gruprile COO- i - NH3+; are loc o
aglomerare a moleculelor din soluie i solubilitatea devine minim.
pHi
Pentrui AA neutri se afl ntre pH 6-7
Pentrui AA bazici se afl n mediu bazic
Pentrui AA acizi se afl n mediu acid
Sarcina proteinei
La un pH mai acid ca valoarea pHi proteina capt o sarcin pozitiv (cation) i migreaz spre catod(-);
la PH mai mare ca pHi proteina capt o sarcin negativ i migreaz spre anod(+)
Denaturarea proteinelor
este distrugerea nivelurilor superioare de organizare ale moleculei proteice (secundar, teriar, cuaternar) n afar de
structura primar cu pierderea proprietile fizico-chimice i biologice ale proteinei.
Agenii denaturani se mpart n fizici i chimici.
1. factorii fizici: mperatura, presiunea, radiaiile ultraviolete i ionizante.
2. factorii chimici : acizi, bazele, solvenii organici, detergenii, amidele, srurile metalelor grele.
3
Trsturile proteinei denaturate:
Renaturare (renativare).
(renativare).
- este restabilirea structurii i activitii biologice a proteinei la nlturarea agentului denaturant.
Cromatografie
Electroforeza
- este metoda de separare a particulelor ce posed sarcin (proteine) ntr-un cmp electric
Direcia migrrii Pr depinde de pH-ul mediului; Pr fiind electrolii amfoteri n mediul acid ele posed sarcin
pozitiv i se mic spre catod, n mediul bazic posed sarcin negativ migreaz spre anod.
Separarea Pr din serul sanguin La pH-ul 8,6 -8,9 n cmpul electric continuu Pr serului posed sarcina negativ i
vor migra spre anod cu o vitez care depinde n aceeai msur de mrimea sarcinii electrice i de masa molecular a
particulelor. n rezultat se separ
Albumine(care agung primele),apoi globulinele care se separ n fracii: 1, 2; i n final -globulinele.
Salifierea
- este metoda de precipitare a proteinelor din soluie la aciunea conentraiilor mari de sruri neutre (sulfatul de
amoniu, clorura de sodiu i al.)
- este un proces reversibil.
Mecanismul salifierii se reduce la dehidratare macromoleculelor proteice i nlturarea sarcinii electrice.
Asupra vitezei de precipitare a proteinelor prin salifiere acioneaz un ir de factori ca hidrofilitatea proteinei, masa
molecular, sarcina electric; de aceea salifiere diferitelor proteine are loc n concentraii diferite de sruri.
De exemplu, albuminele se precipit n soluie saturat de sulfat de amoniu, pe cnd globulinele - n soluie semisaturat
de aceeai sare.
Dializa proteinelor
4
Dializa (din grecete dialisis - separare) se numete procesul de separare a substanelor macromoleculare i soluiilor
coloidale de substane micromoleculare cu ajutorul membranelor semipermeabile (celofan, pergament, colodiu i al.);
Posednd un diametru mare moleculele proteice, coloizii, substanele macromoleculare nu pot trece prin porii acestor
membrane spre deosebire de substanele micromoleculare i sruri.