Prof.

Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

ACIZII NUCLEICI

Compozitia chimica a acizilor nucleici

Acizii nucleici sunt substante macromoleculare, constituite din trei tipuri de substante chimice : baze azotate,
glucide(pentoze), radical fosforic .

Compus chimic ARN ADN

Baze azotate : Adenina(A), Guanina(G) Adenina, Guanina

- Purinice au un atom de
hidrogen la N9

- Pirimidinice au un atom de Citozina(C), Uracil(U) Citozina, Timina(T)

hidrogen la N3

Pentoza Riboza 2- dezoxiriboza

Acid fosforic Radical Radical

Elementul structural al unui acid nucleic il reprezinta nucleotida.

Nucleotida = baza azotata + pentoza +radical acid fosforic

Baza azotata N9/N3 + pentoza C1 = nucleozida + H2O

Nucleozida + radical acid fosforic la C3 sau C5 al pentozei = nucleotida + H2O

Fiecare acid nucleic contine patru tipuri de nucleotide.

Tipuri particulare de baze azotate :

- 5-metil-citozina : determina compactarea fibrelor de cromatina,avan rol in reglajul genetic

la nivelul fibrei de cromatina ;

- 5-hidroxi-metilcitozina: la bacteriofagii din grupul T de la Escherichia coli .

1
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Compozitia chimica :

1. Baze azotate 2. Pentoze

Intre nucleotide se stabilesc legaturi :

Intracatenare intre nucleotidele lantului polinucleotidic

- sunt legaturi covalente fosfodiesterice pe care le realizeaza radicalul fosfat cu pentozele

Intercatenare intre nucleotidele apartinand celor doua catene polinucleotidice; aceste legaturi
sunt legaturi de hidrogen

STRUCTURA PRIMARA SI SECUNDARA A ADN

Structura primara a acizilor nucleici (ADN).Un lant ( catena) polinucleotidic structura primara

Acizii nucleici sunt substante chimice macromoleculare cum masa moleculara de peste 10.000 daltoni, fiind
polimeri de nucleotide.Daltonul este o unitate moleculara, fiind a 12 parte din masa unui atom de carbon
(1,66 x 10-24 g.), aproximativ egal cu masa unui atom de hidrogen. Macromolecula de ADN de la :

- bacteriofagul x174 are masa moleculara de 1,7 x 106 daltoni, iar

- ADN-ul bacterian are o masa moleculara cuprinsa intre 4 x 106 si 5 x 106 daltoni.

2
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Structura primara a acizilor nucleici este o structura monocatenara si rezulta in urma polimerizarii
nucleotidelor. Polimerizarea este facilitata de structura chimica a elementelor componente si de legarea lor in
molecula de nucleotid.

Doua nucleotide alaturate se leaga prin intermediul unui radical acid fosforic. Acesta uneste pentozele a doua
nucleotide vecine in pozitiile C5- C3 sau C3 C5. Astfel , daca intr-o nucleotida radicalul acid fosforic este
legat de atomul C5 al pentozei, acesta se va lega de pentoza nucleotidei alaturate la atomul C3, cu eliminarea
unei alte molecule de apa. In acest fel rezulta lanturi de polinucleotide(catene). Caracteristica unei structuri
primare monocatenare este data de secventa(ordinea) nucleotidelor din catena de acid nucleic.

Structura primara este caracteristica pentru ARN-ul si ADN-ul de la unele virusuri (virusul x174,
geminivirusuri).

ADN structura secundara

1938. Rosalind Franklin, M.H.F. Wilkins prima difractie a ADN-ului

1949 Regula lui Chargraff : la toate organismele raportul : purine/ pirimidine este 1:1

Desi tipurile de nucleotide difera cantitativ de la o specie la alta , cantitatea de A = T si C = G

3
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

1953 Teoria dublului helix Francis Crick si James D. Watson, M.H.F.Wilkins. Ea corespunde tipului B de ADN,
prezent in regiunile cu eucromatina, care contin gene activ metabolic.

Conform acestui model, molecula de ADN este alcatuita din doua catene macromoleculare, antiparalele, cu
directie diferita de inaintare, rasucite in jurul unui ax comun, avand forma unei scari in spirala.

Cele 2 catene sunt antiparalele : la acelasi capat al dublului helix, o catena se termina cu gruparea 5- fosfat in
timp ce a doua catena se termina cu gruparea 3- OH.

Cele doua balustrade ale scarii sunt reprezentate printr-un schelet glucido-fosforic, iar treptele scarii sunt
reprezentate prin baze azotate intre care se stabilesc punti de hidrogen de natura electrostatica de tip
A=T,respectiv G=C si invers. Prin asezarea in interiorul moleculei a bazelor azotate si a puntilor de hidrogen,
acestea sunt protejate de actiunea diferitilor factori de mediu, asigurandu-se stabilitatea moleculei si implicit
a informatiei genetice, conferita de ordinea de nucleotide dintr-o catena. Datorita faptului ca pot exista numai
patru tipuri de legaturi de hidrogen, A=T, T=A, C=G, G=C, se asigura reproducerea cu mare fidelitate a
informatiei genetice in urma procesului de replicare.

4
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Pasul elicei (o rotatie completa a celor 2 catene in

jurul unui ax comun) este de 34.

Deoarece la un pas al elicei se afla 10 perechi de

nucleotide, distanta dintre doua perechi
alaturate de nucleotide este de 3,4.

Diametrul elicei, la tipul B este de 19.

Dublul helix prezinta rasucirea spre dreapta, fiind usor

asimetric si prezinta doua scobituri :
- scobitura mare
- scobitura mica
Acestea reprezinta locul unde actioneaza factorii mutageni.

Caracteristicile structurale finale ale ADN sunt datorate moleculelor de dezoxiriboza.Din

cauza aranjamentului opus al moleculelor de dezoxiriboza in cele 2 catene, si deoarece
dezoxiriboza se leaga de o pozitie excentrica a bazei azotate, intreaga molecula de ADN este
obligata sa se rasuceasca, sa se spiralizeze . Fiecare pereche succesiva de baze azotate se
intoarce cu 360 in directia acelor de ceasornic- rasucire dextrigira- iar dublul helix face un tur
complet de 3600 la fiecare 10 perechi de baze.

Stabilitatea fizica a structurii bicatenare a ADN este asigurata de :

- pe verticala , de puntile fosfodiesterice intracatenare

- pe orizontala , de puntile de hidrogen intercatenare

Sumar

1. Molecula de ADN este bicatenara

2. Catenele sunt antiparalele, complementare

3. Directia de inaintare a catenelor este 5 3

5
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

4. Catenele sunt rasucite in jurul unui ax comun = dublu helix

Tipuri de ADN. Caracteristicile moleculare ale diferitelor tipuri de ADN.

Tipul de ADN Directia de rotatie Perechi de baze Rotatia pe Diametrul moleculei

a moleculei pe pas de elice perechi baze

A dreapta 11 + 34,7 23
B dreapta 10 + 34,0 20
Z stanga 12 - 30 18
Tipul A este intalnit la concentratii saline mari si in cazul unei deshidratari partiale.

- in vivo in regiunile dublu catenare din molecula de ARN, unde prezenta grupei hidroxil-2

impiedica adoptarea formei B,

- duplexurile hibride AND-ARN(avand o catena de ADN si o catena complementara de ARN)

In structurile relativ compacte de ADN, similare formei A, perechea de baze azotate are o inclinatie de 200
fata de orizontala si sunt mai multe perechi de baze pe pas al elicei.

Tipul B reprezinta structura generala a macromoleculei de ADN in regiunile active metabolic. Aceasta
forma prezinta o scobitura principala mare si o scobitura mica. Diferentele dintre baze sunt de obicei usor de
evidentiat in scobitura principala, care reprezinta locul principal de contact pentru proteine, care leaga
specific secventele de ADN. Inclinatia fata de orizontala planului perechilor de baze este zero.

Tipul Z este singurul tip de AND cu rasucire spre stanga. Este o forma compacta, avand cele mai multe
perechi de baze pe o rotatie a moleculei. Numele provine de la forma in zigzag a catenei fosfo-glucidice.
Prezinta o singura scobitura. Este intalnit in polimerii care au secventa de baze azotate alterate

A fost intalnit in conditii in vitro, in unele cazuri neobisnuite , folosind concentratii ridicate de saruri.

Se pare ca este posibila existent unei tranzitii de la forma B la forma Z. In anumite conditii, o portiune din
molecula de ADN care prezinta dubletele G=C/C=G poate fi convertit la forma Z, pe cand alte regiuni raman in
forma clasica B, caracteristica celulelor vii.

In vitro, tipul Z este caracterizat prin existenta unor secvente de baze purinice si pirimidinice alaturate,
repetate.

6
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

tipul Z

Fenomenul de denaturare-renaturare.Hibrizii moleculari

Prin incalzirea unei solutii de ADN la o temperatura de 85 0C 950C sau prin mentinere la o concentratie
ridicata de saruri , legaturile de hidrogen dintre cele doua catene complementare se pot rupe. Procesul este
numit denaturare , rezultand ADN denaturat monocatenar.

Temperatura de denaturare difera de la o specie la alta, fiind dependenta de procentul de legaturi triple de
hidrogen si proportionala cu procentul acestora in molecula de ADN.

Daca solutia de ADN monocatenar este racita brusc, cele doua catene nu se mai reunesc, rezultand ADN
monocatenar

Renaturarea reprezinta capacitatea catenelor complementare de a reface dublul helix. Procesul are loc printr-
o racire treptata, lenta, care permite refacerea puntilor de hidrogen si reasocierea catenelor, rezultand ADN
renaturat.

Procesul de renaturare se petrece in doua etape :

O catena de ADN din solutie se imperecheaza cu alta catena la intamplare, formandu-se scurte
regiuni bicatenare ;

Regiunea de baze imperecheate se extinde de-a lungul moleculei, intreaga molecula devenind
bicatenara

7
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Hibridizarea implica refacerea unui dublu helix, pornind de la catene de ADN de origine diferita sau de la o
catena de ADN si o catena de ARN. Hibridizarea se poate realiza pe doua cai :

Hibridizare lichida atunci cand cele doua preparate de ADN monocatenar sunt amestecate in solutie ;

Hibridizare de filtru- prin imobilizare pe un filtru de hibridizare.

Pe baza unor experimente de hibridizare si stabilind procentul de realizare a secventelor dublu catenare, se
poate observa inrudirea dintre specii rol in stabilirea relatiilor filogenetice dintre specii- , fiind totodata o
metoda de lucru utilizata in tehnologia ADN- recombinat.

Denaturarea

TIPURI DE ARN, STRUCTURA SI FUNCTII

A fost descrisa existenta mai multor tipuri de ARN, care prezinta caracteristici structurale si functionale
diferite

Molecula de ARN

Este o macromolecula cu o structura primara monocatenara polinucleotidica

In anumite regiuni poate prezenta o structura bicatenara, datorita rasucirii catenei in jurul propriei
axe si formarii unor punti de hidrogen de tipul A=U, G=C si invers.

Moleculele de ARN nu pot avea dimensiuni foarte mari, deoarece cu cat creste numarul nucleotidelor cu
atat stabilitatea moleculei scade .

1. ARN viral constituie materialul genetic de la ribovirusuri, ca : VMT,virusul poliomielitei, virusul gripal,
HIV,virusul turbarii, stomatitei veziculare, unii bacteriofagi; la viroizi si la retrovirusuri, s.a.

Prezinta deobicei o forma lineara ; la virusul encefalomielitei soarecilor structura sa fiind circular. Marimea
si masa sa molecular sunt dependente de cantitatea de informatie genetica pe care o poseda.

8
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

2. ARN nuclear mic ( ARN-nm sau ARN-sn) a fost evidentiat in nucleii celulelor animale. ARN-nm
interactioneaza cu proteine specifice , formand mici particule nucleare ribonucleoproteice. Sinteza ARN-
nm se realizeaza cu ajutorul enzimei ARN polimeraza III .

ARN-nm are rol important in functionarea nucleului : initierea sintezei proteice si maturarea ARN
mesager,in mentinerea stabilitatii segmentelor terminale cromozomale ( telomeri), stimuleaza sau inhiba
activitatea unor gene ( comutatori chimici).

3. ARN mesager (ARNm) se afla in celulele tuturor organismelor procariote si eucariote. Reprezinta 2 5 %
din cantitatea totala de ARN . Are rolul de a copia informatia genetica dintr-una din catenele moleculei de ADN
(de obicei din catena 3 5) si de a o transporta la locul sintezei proteice, pe suprafata ribozomilor.

Este sintetizat in procesul de trascriptie a informatiei genetice, cu ajutorul enzimei ARN polimeraza,
proces care reprezinta prima etapa a sintezei proteice.

Pe catena 3-5 a moleculei de ADN, codonul de initiere a procesului de transcriptie (respectiv a sintezei de
ARN) este TAC, iar codonul care marcheaza sfarsitul procesului de transcriptie poate fi unul din urmatorii
trei codoni ACT, ATT sau ATC (codonii STOP).

Marimea catenei de ARNm este dependenta de cantitatea de informatie genetica pe care o poseda. Cele
mai mari molecule de ARNm contin intre 500 si 1 000 de nucleotide. Existenta sa in timp este limitata, fiind
distrus la sfarsitul sintezei proteice.

Intre ARN-ul de la procariote si eucariote exista diferente privind marimea, numarul de gene si
componenta lor structurala .

La procariote ,molecula de ARNm contine de obicei informatia genetica pentru sinteza mai multor catene
polipeptidice (contine mai multe gene). ARN-m prezinta de obicei numai secvente informationale exoni-.
In plus el rezulta in urma procesului de transcriptie a informatiei ereditare.

La eucariote, ARNm contine informatia genetica pentru sinteza unei singure catene polipeptidice, deci
contine o singura gena. In urma procesului de transcriptie se formeaza un ARN precursor sau premesager.

9
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Acesta contine secvente informationale-exoni- si secvente non-informationale introni .Are loc procesul
de maturare al ARN. Acesta consta in eliminarea intronilor si asamblarea exonilor, cu ajutorul unor enzime
specifice (endonucleaze, ligaze). Procesul reprezinta un mecanism in reglajul genetic al sintezei proteice la
eucariote.

4. ARN de transport (ARNt) sau ARN solubil (ARNs) are rolul de a transporta aminoacizii la locul sintezei
proteice de pe suprafata ribozomului, in procesul de translatie a informatiei genetice (cea de a doua
etapa a sintezei proteice). Are masa moleculara mica (cca. 25.000) fiind format din 75-90 de nucleotide.

Are forma unei frunze de trifoi, fiind alcatuit din patru brate (regiuni bicatenare), trei dintre ele fiind
terminate cu bucle (regiuni monocatenare) si un ciot de marime variabila .

10
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Regiunile bicatenare sunt determinate de formarea unor punti de hidrogen de tip A=U si G=C.

Molecula de ARNt prezinta :

un ax central alcatuit din bratul acceptor de aminoacid (bratul fara bucla, avand o secventa
terminala asimetrica CCA) si bratul si bucla anticodon (are trei secvente mediane de nucleotide,
complementare cu secventa codon din molecula de ARNm). In acest fel, in fiecare celula exista
teoretic 64 tipuri de ARNt. Datorita acestei secvente complementare cu secventa codon din
ARNm, ARNt va recunoaste un anumit codon din constitutia ARNm.

Celelalte doua brate, T si D, in celula ve sunt rasucite in jurul axului central :

Sinteza ARNt este determinata de genele din molecula de ADN, aflate intr-un numar mare de
exemplare, fenomen numit amplificare genica. Numarul de gene implicate in sinteza de ARNt este de :

- 130 la Drosphila melanogaster

- 450 la Xenopus laevis amfibian

- 5 200 la Zea mays porumb

- 12 700 la Triticum aestivum grau

- 32 000 la Hyacinthus orientalis zambila

In mitocondrii se pot afla peste 20 de tipuri de ARNt, in timp ce in citoplasma celulelor eucariote numarul
tipurilor de ARNt poate sa varieze intre 40 si 60.

ARNt reprezinta aproximativ 15% din totalul ARN din celula.

11
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

5. ARN ribozomal(ARNr) constituie circa 85% din cantitatea totala de ARN din celula, fiind localizat in
ribozomi, unde este asociat cu proteinele.Cea mai mare parte din ARNr este sintetizata in nucleoli. Are o
masa moleculara de circa 5 x 105. ARNr masoara de la 100 pana la 3 000 de nucleotide.

Ribozomii sunt particule ribonucleoproteice (alcatuite din ARNr si proteine), de forma relativ sferica,
prezente la procariote si eucariote. Intre ribozomii de la procariote si eucariote exista unele diferente
privind constanta de sedimentare, masa moleculara si constitutia lor.

Se afla si in constitutia mitocondriilor si a cloroplastelor, organite celulare de origine endosimbionta.

Ribozomii din mitocondrii si cloroplaste prezinta caracteristici similare cu ribozomii de la procariote .

Ribozomii sunt formati din doua subunitati :subunitatea mare si subunitatea mica.Fiecare dina ceste
subunitati este compusa din molecule de ARNr si proteine. Ribozomii 80S(nu rezulta din simpla
insumare a componentelor sale) din celula eucariota sunt alcatuiti din :

- subunitatea mica ( 40S) : este compusa din ARNr 18S si aproximativ 30 proteine;

- subunitatea mare (60S unde S este unitate Svedberg utilizata in aprecierea greutatii moleculare dupa
care se fac separarile prin ultracentrifugare ) este compusa din : ARNr 5S, 5.8 S, 28S combinat cu
aproximativ 50 proteine .

In sinteza proteinelor tipurile de ARNr au functii specifice :

- ARNr 28S rol catalitic , intra in alcatuirea peptidiltransferazei , enzima implicata in sinteza proteica

- ARNr 18S - are rol de recunoastere intervenind in pozitionarea corecta a ARNm si a enzimelor

- ARNr are si rol structural deoarece arhitectura sa tridimensionala se constituie intr-o adevarata
schela de constructie pe care se asambleaza proteinele ribozomale.

Unitatea ribozomala prezinta trei locusuri (regiuni) : A, P si Ex :

ribozomul de la procariote.

12
 Prof. Carmencita Obreja Colegiul National Petru Rares

Locusul A (aminoacil) este locusul unde se ataseaza initial molecula de aminoacid, adusa de un ARNt a
carui secventa anticodon este complementara cu secventa codon a ARNm prezenta in dreptul acestui
locus.

Locusul P (polipeptid) este locusul unde are loc formarea unei legaturi dipeptidice intre doi aminoacizi
alaturati. Citirea informatiei genetica continuta in secventa de nucleotide a ARNm are loc in mod linear,
de la codonul de initiere la ultimul codon prin adaugarea unui aminoacid de catre fiecare codon. Atunci
cand ultimul codon al moleculei de ARNm (UAA, UGA sau UAG) ajunge in dreptul locusului Ex (exit) al
ribozomului , catena polipeptidica se desprinde de pe suprafata ribozomului.

6. Alte tipuri de ARN

ARN mnocatenar :

microARNs (miARNs) regleaza exprimarea ARNm ;

ARN nucleolar mic snoRNA-small nucleolar RNA;

XISTARN inactiveaza unul din cei doi cromozomi X din celulele vertebratelor de sex feminin .

ARN bicatenar :

double-stranded RNA sau dsRNA in genomul unor virusuri si in nucleul unor eucariote .

Ca si ADN, pentru a-si indeplini functiile , ARN formeaza punti de hidrogen intre bazele azotate din
anumite regiuni , constituind o structura secundara care imbraca forme ca bucle, cute interne
caracteristice , dupa care pot fi identificate anumite tipuri de ARN .

13