Micropropagarea in vitro la speciile cu nmulire vegetativ

1. Terminologie
Agar produs extras din alge, utilizat pentru solidificarea mediilor de cultur
Auxine substane regulatoare de cretere, implicate n:
- alungirea celulei vegetale
- dominana apical
- iniierea rizogenezei (formrii rdcinilor)
Citochinine substane regulatoare de cretere, responsabile de:
- diviziunea celular
- diferenierea celulelor
- formarea de muguri
- eliminarea dominanei apicale a mugurelui terminal
Clon grup de indivizi descendeni dintr-un unic individ, fr fecundare, pe cale
vegetativ, identici d.p.v. genetic ntre ei i cu organismul mam
Explant fragment dintr-un organism (apex, organ sau fragment de organe), detaat de
locul de origine i care, prin cultivare, poate genera un organism nou
In vitro proces desfurat n condiii sterile i controlate de cultur, pe medii artificiale,
n recipieni de sticl sau plastic
Meristem esut vegetal tnr de la extremitatea organelor, n care celulele se nmulesc
continuu, asigurnd creterea organismelor
Mediu de cultur de baz mediu de control al unei culturi, cu compui organici i
anorganici de cretere de baz, fr regulatori de cretere i vitamine
Mediu de cultur totalitatea factorilor pt. supravieuirea explantului in vitro ,
regenerarea celular i evoluia sa n direcia propus (macroelemente, microelemente,
componente organice, regulatori de cretere, ap, stabilizatori osmotici i de pH,
antioxidani etc.)
Micropropagare propagarea sau nmulirea pe cale asexuat/vegetativ a plantelor in
vitro (micronmulire)
Plantul tulpini generat in vitroi nrdcinat ori embrionul germinat

2. Amenajarea i dotarea laboratorului de culturi in vitro

Condiii de mediu i faciliti:
- lipsa polurii
- spaii de aclimatizare (sere, solarii) amplasate n apropiere
- ap potabil, curent electric, gaz metan, evacuarea apei reziduale
- aer condiionat (nclzire, ventilare-aerisire)
- spaii interioare etaneizate, pardosite cu materiale ce pot fi splate i dezinfectate
Constructiv, laboratorul se amenajeaz pe un singur nivel i va avea delimitate 3 zone sau
spaii distincte:
- zona nesteril (spltor, depozite, camere pt autoclave, distilatoare ap, laborator
foto, birouri)
- zona steril (boxe sau nie aseptice cu flux de aer laminar, laborator de pregtire a
mediilor de cultur, camere frigorifice)
- zona de cretere i aclimatizare (rafturi climatizate, instalaii de iluminat etc)
Dotarea laboratorului: instalaii, mobilier, aparatur, materiale, instrumente i substane
chimice
- Aparatur: balane, agitatoare magnetice, plite electrice, bi marine, pH-metre,
microscoape, lupe binoculare, autoclave, distilatoare i bidistilatoare pentru ap,
main de splat sticlrie de laborator, frigidere, congelatoare, pipete, seringi, vase de
sticl/plastic, instrumente de laborator (stative, pensete, ace spatulate, anse, foarfece,
becuri de gaz, bidoane etc)
 - Etichete i markere speciale pentru vasele de cultur
- Substane chimice pentru prepararea mediilor de cultur, sterilizare etc:
- macroelemente (azotat de amoniu, sulfat de amoniu, clorur de calciu, azotat de
calciu, sulfat de magneziu, clorur de potasiu, azotat de potasiu)
- microelemente (acid boric, clorur de cobalt, sulfat de cupru, sulfat de mangan,
iodur de potasiu, molobdat de sodiu, sulfat de zinc, sulfat de fier, natri fier EDTA,
acid clorhidric, acid natriuetilendiaminotetraacetic)
- glucide i polialcooli (fructoz, zaharoz, glucoz, manitol, sorbitol)
- vitamine i aminoacizi (biotin, tiamin, riboflavin, glicin, acid ascorbic, acid
nicotinic, acid folic, piridoxin)
- regulatori de cretere (auxine: acid clorfenoxiacetic, acid 2,4 diclorfenoxiacetic,
acid -indolilacetic, acid indolilbutiric, acid -naftilacetic, acid -naftoxiacetic,
citochinine i gibereline: adenin, sulfat de adenin, 6-benziladenin, 6-
dimetilalilaminopurin, 6-furfurilaminopurin, zeatin, acid giberelinic)
- agar
- extract de drojdie
- hidrolizat de cazein
- crbune activ
3. Etapele tehnologiei de cultivare in vitro
- Alegerea materialului biologic donator de explante i sterilizarea acestuia
- Izolarea i prelevarea explantelor
- Inocularea i incubarea (transferarea pe mediul de cultur) explantelor
- Multiplicarea ntr-un numr variabil de cicluri a materialului biologic
- Aclimatizarea plantulelor (trecerea de la condiiile de mediu aseptice i total
controlate din laborator la condiii de ser sau solar)
4. Importana (avantajele) utilizrii culturilor in vitro
- Micromultiplicarea (clonarea) rapid, pe cale vegetativ, a plantelor
- Obinerea de material biologic liber de ageni patogeni (viroze etc)
- Introducerea rapid n cultur a soiurilor noi la speciile cu nmulire vegetativ
- Folosirea culturilor in vitro n ameliorare (
- Folosirea culturilor in vitro n fitopatologie
- Obinerea de haploizi i hibrizi somatici
- Obinerea de linii celulare cu randament sporit n sinteza unor produi metabolici
secundari (medicin)
- Obinerea organismelor modificate genetic (OMG)
- Crioconservarea culturilor in vitro
Bibliografie
Creu L., 2004 Culturi in vitro, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai.
Blidar C.F., Petru Vancea Adriana, 2006 Biotehnologie, Lucrri practice de
laborator, Universitatea din Oradea.