Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs Activitile fiziologice ale mitocondriei Ciclul Krebs Catabolismul celular are particularitatea de a elibera energia liber dintr-o substan (nutrient) n etape. Toate organismele i procur energia prin degradarea alimentelor (catabolism). Combustia alimentelor se face prin sute de reacii diferite, n schimb, eliberarea energiei se realizeaz doar n cadrul ctorva.

Procesul prin care sunt sintetizate substantele necesare organismului este numit anabolism. Energia eliberat astfel este transformat ntr-o form special de energie chimic i anume adenozintrifosfat (ATP), compus cu un nalt potenial de transfer al gruprii fosfat (bogat n energie). Energia potenial a dou legturi fosfatice ale ATP este reprezentat prin potenialul lor de hidroliz. F. Lipmann face o clasificare a legturilor astfel: 1- legturi bogate n energie- prin hidroliz degaj mai mult de 8.000cal/mol 2- legturi srace n energie elibereaz mai puin de 3.000 cal/mol.

ATP =adenozin trifosfat Contine 2 legturi cu energie mare i 1 legtur cu energie sczut

Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs

Low energy : G = -14,2 kJ mol 0' -1 High energy : G = -30.5 kJ mol
0' -1

Se cunosc ase tipuri de legturi bogate n energie, dintre care cinci sunt derivai fosforilai: Pirofosfat (notat PPi)

Trifosfat Acil-fosfat Enol-fosfat

Amidin-fosfat

n cursul catabolismului produsele de combustie sunt incomplet arse, aa c produsele terminale sunt diferitele forme ale acidului citric (acetil-coenzima A, acidul - cetoglutaric, acidul oxaloacetic). Procesul prin care au loc aceste lanturi de reactii ale catabolismului sunt denumite respiratie celular. Acesti trei compusi intr n cadrul ciclului tricarboxilic, care este etapa oxidrii terminale a tuturor alimentelor. Mitocondria este organitul la nivelul cruia se realizeaz aceste reactii complexe ale catabolismului. Izolarea primelor mitocondrii intacte de ctre G.E. Palade, care a stabilit structura lor electronomicroscopic, a permis studiul activitii multienzimatice ale acestui organit, denumit de D. Green cicloforaz, deoarece n mitocondrie are loc oxidarea substraturilor n cadrul ciclului Krebs i Lynen. Membrana intern i matricea, reprezint situsul tuturor reactiilor de oxidare a piruvatului i acizilor grasi la CO2 i H2O, precum i sinteza cuplat a ATP din ADP i Pi.

PPi+ H2O 2ADP + 2Pi

2Pi 2 ATP

Aceste procese complexe cuprind mai multe etape i pot fi subdivizate n trei grupuri de reacii, fiecare desfurndu-se n anumite compartimente ale mitocondriei. 1- Oxidarea piruvatului i a acizilor grai la CO2, cuplat cu reducerea transportorilor de electroni NAD+ i FAD, la NADH+ H+ i FADH2. Aceste reacii au loc la nivelul matricei mitocondriale. 2- Transferul electronilor de pe NADH + H+ i FADH2, la O2
2

Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs Aceste reactii sunt desfsurate la nivelul membranei interne si sunt cuplate cu generarea unui gradient electrochimic de protoni de o parte i de alta a acesteia. 3- Utilizarea energiei inmagazinate n gradientul transmembranar de protoni, pentru sinteza de ATP, de ctre ATP sintetaz aflat la nivelul membranei interne. Ultimele dou grupuri de reacii implic intervenia unor proteine complexe care sunt orientate asimetric n membrana mitocondrial intern. Cristele mitocondriale mresc mult suprafata, ceea ce crete capacitatea mitocondriei de a genera ATP. De exemplu, ntr-o mitocondrie din celulele hepatice, aria membranei interne este de cinci ori mai mare dect aria membranei externe, iar suprafata total a membranelor interne mitocondriale dintr-o celul, este de 15 ori mai mare dect aria membranei plasmatice. n celulele musculare cardiace i scheletice, mitocondriile conin de trei ori mai multe criste dect mitocondriile hepatice. Cristele mitocondriale din celulele diferitelor esuturi se pliaz n moduri foarte variate, dar semnificaia acestor diferene morfologice este nc inexplicabil. Ansamblul cunostintelor privind respiraia au fost integrate graie lucrrilor lui A. Szent-Gyrgyi , n teoria dublei activri. Prin dehidrogenarea substratului se pierd, datorit dehidrogenazelor, unul sau mai muli hidrogeni care imediat sunt activati. AH2 A+ 2H 2H+ + 2e-

Oxigenul molecular este transformat n acest timp la oxigen activ de ctre citocromoxidaz, care-i d unul sau mai muli electroni provenii de la hidrogen i transportai de citocromi: O2 +2e2 O-

Hidrogenul si oxigenul se unesc si formeaz apa sau ap oxigenat (descompus de catalaz). Formarea apei este o puternic reactie metabolic care se realizeaz prin oxidarea hidrogenului. Etapele procesului de respiratie celular: 1- Glicoliza (reactii anaerobe la nivel citoplasmatic) Glucoza (6 molecule de C) este scindat n 2 molecule de lactat (3 molecule de C), producnd 2 molecule ATP: 2- Lactatul (C3H6O3) este convertit la piruvat care intr in mitocondrie (seriile reactiilor aerobe) rezultnd grupul acetil (CH3CO) care se combin cu coenzima A rezultnd acetil CoA, reacia este catalizat de piruvat dehidrogenaz, prezent n stare solubil n matricea mitocondrial.
3

Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs 3- Acetil coenzima A intr n ciclul Krebs (au loc o serie de reactii prin care se formeaz 2 CO2, iar energia realizat este transferat la 4 molecule purttoare de electroni Sinteza Acetil- CoA din piruvat

Piruvatul este generat n citosol prin glicoliz, apoi transportat prin membranele mitocondriale. Formarea Acetil-CoA este o reacie puternic exergonic i ireversibil. n ciuda aparentei sale simpliti, piruvat dehidrogenaza este una dintre cele mai complexe enzime cunoscute. Este o molecul mare de 30nm (aproape ct un ribozom), fiind un complex enzimatic format din 5 coenzime. Pentru a alimenta continuu reactia de formare a acetil Co A din glucoz, celula animal depoziteaz glucoza n citosol, sub form de glicogen. Glicogenul (polimer de glucoz) este coninut n granule citoplasmatice, sinteza i degradarea sa este strict reglat n funcie de necesiti. Cnd necesitile o cer, glicogenul este degradat, elibernd glucoza sub form de glucozo-1-fosfat. n continuare reaciile sunt cele mai sus amintite de formare a piruvatului. Sinteza Acetil-CoA din acizi grai Cantitativ, grsimile sunt mult mai importante dect glicogenul, dac ne referim la depozitele energetice ale unei celule. Aceasta deoarece oxidarea grsimilor n mitocondrii elibereaz cel puin de 6 ori mai mult energie dect aceeasi mas de glicogen n forma sa hidratat. Un organism uman adult poate depozita glicogen pentru doar o zi de activitate normal, fa de grsimi care ar ajunge pentru aproximativ o lun. Dac rezervorul nostru energetic ar fi reprezentat doar de glicogen, greutatea noastr ar trebui s creasc cu 30 kg. Marea majoritate a lipidelor sunt depozitate n esutul adipos , de unde sunt eliberate n snge pentru a fi preluate de celule. Necesitile cresc n perioadele dintre alimentaie. n mod obinuit, noaptea energia se obine prin mobilizarea grsimilor, astfel c, dimineaa, cea mai mare parte a acetil Co-A care intr n ciclul citric provine din acizi grasi. Dup alimentaie cea mai mare parte a acetil Co-A provine din glucoz ingerat, iar excesul de glucoz este folosit pentru completarea rezervelor de glicogen care au fost consumate, sau pentru sinteza de lipide. Oxidarea Acetil Co-A n ciclul Krebs Stadiul final al reaciilor de oxidare de oxidare a glucidelor i lipidelor este reprezentat de cilul Krebs sau ciclul Citric, care const dintr-un set complex de 9 reacii enzimatice Ciclul citric este rspunztor pentru oxidarea a 2/3 din totalitatea compuilor de carbon ai celulei, iar produi si majori sunt CO2 i NADH. CO2 este eliminat, iar NADH + H+ transfer electronii de nalt energie pe care-i poart, n lanul respirator, la captul acestui lan electronii sunt utilizai pentru a reduce O2 la H2O

Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs Aceste reacii constituie ceea ce este cunoscut sub numele de ciclul acizilor tricarboxilici, denumit i ciclul acidului citric, sau ciclul Krebs. Enzimele care opereaz n ciclul acizilor tricarboxilici sunt localizate n matricea mitocondrial, cu excepia succinat dehidrogenazei ce face parte integrant dintr-un complex proteic aparinnd membranei mitocondriale interne. Ciclul citric ncepe prin reacia dintre acetil Co-A, provenit din piruvat sau din acizii grai i un compus cu patru atomi de C (oxalacetatul), pentru a produce o molecul cu 6 atomi de C (acidul citric) Urmeaz alte 7 reacii enzimatice, 2 atomi de C sunt eliminai sub form de CO2, regenerndu-se n cele din urm oxalacetatul, care i reia ciclul. Cea mai important contribuie a ciclului Krebs este extracia electronilor de nalt energie prin oxidarea celor 2 atomi de C ai radicalului acetil. Aceti electroni tranzitoriu preluai de NADH i FADH2 (flavin adenin dinucleotid) sunt rapid transferai n lanil respirator de pe membrana intern mitocondrial. Majoritatea enzimelor ciclului krebs sunt hidrosolubile, fiind localizate n matricea mitocondrial. Sunt de asemenea localizate la nivelul membranei interne: succinat dehidrogenaza (reacia 7) i cetoglutarat dehidrogenaza (reacia 5). Transferul electronilor de la NADH + H+ i FADH2 la O2. Degradarea complet a glucozei are ca rezultat formarea 6 molecule de CO2, concomitent cu reducerea a 10 molecule de NAD la 10 NADH + H+ i a 2 FAD la 2 FADH2 Oxigenul molecular O2 este utilizat pentru a reoxida aceste coenzime reduse. La nceput coenzimele i transfer perechea de electroni la molecule acceptor situate n membrana intern a mitocondriei. Pierderea electronilor regenereaz forma oxidat a coenzimelor (NAD i FAD), reducnd acceptorul. Energia care se elibereaz prin oxidarea unei singure molecule de de NADH sau FADH2 dectre O2 este suficient pentru a sustine sinteza mai multor molecule de ATP. De aceea, oxidarea NADH i sinteza de ATP nu pot avea loc ntr-o singur reacie, ci transferul electronilor trept cu trept de la NADH la O2, prin intermediul proteinelor care formeaz lantul transportor de electroni. Protonii sunt pompatiprin membrana mitocondrial intern n spatiul intermembranar, generndu-se un gradient de concentraie protonic, n interior matricea devine negativ. Deplasarea protonilor prin membrana intern, n sensul gradientului de concentraie, napoi n matrice, se face prin punerea n miscare a unei enzime ATP-sintetaz. ATP- sintetaza este o protein membranar complex care realizeaz sinteza ATP din ADP i Pi (fosfat anorganic). Lantul transportor de electroni Au fost identificate trei complexe enzimatice, respiratorii implicate n transferul electronilor de la NADH +H+ la O2. 1. NADH-dehidrogenaza este cel mai mare complex enzimatic respirator, ea coninnd 22 de lanuri polipeptidice. Are rolul de a accepta electronii de la NADH i de a-i transfera prin intermediul unei molecule mici liposolubile (ubiquinona= coenzima Q) ctre complexul 2. 2. Complexul b-c1, este format din 8 lanuri polipeptidice i funcioneaz sub form de dimer. Complexul preia electronii de la ubiquinon i i transfer la citocromul c, o protein membranar periferic mobil

Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs 3. Citocrom- oxidaza (citocromul aa3)- complexul este tot un dimer, conine citocromi si atomi de Cu. Acest complex transfer electroni la O2. Citocromii, proteinele fier-sulf i atomii de cupru pot transporta doar cte un singur electron. NADH+H+ cedeaz ns, cte 2 electroni, iar fiecare molecul de O2 trebuie s primeasc 4 electroni pentru a produce ap. De aceea exist mai multe puncte de colectare a electronilor. Citocrom oxidaza colecteaz patru electroni pe care i transfer apoi la O2. Reacia la nivelul citocrom oxidazei consum 90% din oxigenul captat de celule. Toxicitatea foarte mare a cianurilor si a azidei, const din capacitatea acestora de a se lega la acest complex, blocnd astfel transportul electronilor.

Biologie celular i molecular C10

Activiti fiziologice ale mitocondriei- Ciclul Krebs