UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR CLUJ-NAPOCA FACULTATEA DE HORTICULTUR

Metodologii de producere a seminelor de legume i flori

CAPITOLUL I 1.1. Obiectul i importana producerii de semine i material sditor la plantele horticole Producerea de semine i material sditor horticol este o disciplin derivat din ameliorarea plantelor horticole att n ceea ce privete obiectul de studiu ct i n privina metodelor de investigare. n mod concret, obiectul de studiu al acestei discipline, l constituie metodologia teoretic i practic de producere a seminelor i materialului sditor la plantele horticole. Faptul c producerea de semine i material sditor horticol este o disciplin derivat din ameliorarea plantelor horticole poate fi argumentat prin urmtoarele considerente: a) Producerea de semine i material sditor horticol are un obiect de studiu care, pentru plantele horticole, constituie nsi obiectul de studiu al ameliorrii (ex. producerea liniilor consangvinizate i a hibrizilor comerciali la varz, ceap, morcovi etc.); b) Majoritatea metodelor de investigare, folosite de aceast disciplin, sunt, de fapt, cele ale ameliorrii plantelor horticole; c) Bazele teoretice ale producerii de semine i material sditor horticol sunt furnizate de aceleai trei discipline biologice fundamentale (genetica, fiziologia i biochimia vegetal) care constituie bazele teoretice i ale ameliorrii plantelor; d) Anumite tipuri de material biologic cu care lucreaz producerea de semine i material sditor horticol sunt, de fapt, mprumutate din ameliorarea plantelor (de ex.: elit, linie, familie, linie consangvinizat, clon, hibrid etc.); e) Producerea de smn i material sditor are ca obiect al muncii cultivarul care este rezultatul unui proces de ameliorare. Deci producerea de semine i material sditor poate fi considerat ca o prelungire a procesului de ameliorare pe toat durata de timp ct cultivarul se afl n cultur. Chiar dac producerea de semine i material sditor horticol este o disciplin derivat din ameliorarea plantelor horticole, ea are o serie de caracteristici distincte ce o individualizeaz ca disciplin bine conturat, att ca obiective teoretice i practice, ct i ca mijloace i posibiliti de realizare a acestor obiective: a) Spre deosebire de ameliorarea plantelor, producerea de semine i material sditor nu tinde s creeze noi cultivaruri, ci doar s menin cultivarurile existente n cultur la un moment dat (respectiv structura genetic a acestora); b) Anumite metode de lucru ale acestei discipline (ex. selecia n mas negativ) preluate, n mod evident, de la ameliorarea plantelor, au primit, cu timpul, o utilizare aproape exclusiv n procesul de producere de semine i material sditor; c) Spre deosebire de ameliorarea plantelor la care caracterul teoretic i cel aplicativ au ponderi aproape egale, n producerea de semine i material sditor horticol partea aplicativ are o pondere covritor superioar celei teoretice; d) Producerea de semine i material sditor horticol opereaz cu cteva categorii biologice neutilizate n ameliorarea plantelor (ex. smn Prebaz, Baz, Certificat); Spre deosebire de ameliorarea plantelor, care este o disciplin creativ i n care, n procesul de obinere a noului rezultatul negativ poate avea valoare (ex. se stabilete c anumite soiuri sunt genitori slabi pentru caracteristicile urmrite), n producerea de semine i material sditor rezultatul muncii nu poate fi dect pozitiv, favorabil, n caz contrar el atrage dup sine eecul economic. Se poate deci afirma, fr teama de a grei, c producerea de semine i material sditor horticol este o disciplin biologic derivat din ameliorarea plantelor horticole, dar care are trsturi caracteristice n ceea ce privete obiectul de studiu i mijloacele de investigare, 5

trsturi ce o individualizeaz ca o disciplin distinct. Din aceste motive i inndu-se cont de pronunatul caracter aplicativ al acestei discipline, cunoaterea detaliat, de ctre viitorii specialiti horticoli, a metodologiei teoretice i tehnologice de producere a seminelor i materialului sditor horticol se impune ca o necesitate evident. 1.2. Scurt istoric Mrturiile cele mai vechi despre cultivarea plantelor atest faptul c, acum 5-6 mii de ani, cnd omul a trecut de la starea de culegtor nomad la acea de agricultor, a folosit pentru prima dat smna sau alte organe ale plantelor n vederea reproducerii acestora. Treptat aceast activitate, care s-a desfurat mult timp sub semnul empirismului, capt contururi mai bine definite tiinific, la nivelul cunotinelor fiecrei epoci. Sunt demne de amintit, n acest sens, preceptele elaborate de multe popoare sau personaliti ale antichitii privind modul de obinere i utilizare a seminelor i materialului sditor horticol. Un vechi proverb asirian, pstrat n biblioteca regelui Assurbanipal (668-626 .e.n.) atrage atenia asupra legturii directe ce exist ntre smn i nivelul produciei obinute spunnd: Dac smna pe care o semeni nu e bun nici recolta pe care o obii nu e bun. Gnditori cunoscui ai antichitii elene i romane (Terentius, Varro, Vergilius, Platon) au subliniat, n scrierile lor, necesitatea alegerii an de an a celei mai bune semine n vederea semnatului. Columella, ndrgostit de vin i via de vie scrie: Cnd strugurii s-au copt observai i marcai n vie butucii viguroi i ncrcai cu rod. La vremea plantrii, folosii coarde doar de la aceti butuci, numai s nu fie nici tineri nici btrni. Dup aproape 1200 de ani Albert Magnus reia aceast idee, artnd c, pentru nmulirea viei de vie, trebuie luate coarde de la butucii cei mai roditori, iar vestitul Olivier de Serres, pe la 1600, nota: Nu conteaz numele vielor ci calitile pe care acestea le au. Insistm mult asupra acestui punct pentru c o plant rea cost tot att de mult ca i una bun pentru a crete i a o ntreine. De aceea, trebuie s avem mare grij spre a nu face vre-o greeal atunci cnd plantm (via). Tot din aceast perioad de sfrit de Ev Mediu dateaz dovezi c n unele state germane arendaul era obligat, prin contract, s predea moierului (proprietarului), pe lng arend sau n cadrul acesteia, un anumit numr de snopi cu cele mai frumoase plante din lan sau, mai trziu, dup introducerea n cultur a porumbului, un anumit numr de tiulei, cei mai frumoi din lanul respectiv. De asemenea, tot prin contract, arendaul era obligat ca o bun parte a seminei pe care o folosea pentru semnat s o procure de la proprietarul pmntului (moier). Astfel de practici, chiar dac nu instituionale, s-au rspndit pe tot teritoriul Europei, inclusiv n Principatele Romne. Chiar mai trziu, la nceputul acestui secol, ranii romni opreau pentru smn cele mai frumoase plante din lan sau cei mai mari i mai frumoi tiulei de porumb. Dei empirice, astfel de metode de producere a seminelor i materialului sditor s-au dovedit eficiente, multe din vechile soiuri i populaii locale romneti de plante agricole i horticole pstrndu-se pn n zilele noastre cu caracteristicile lor de productivitate i calitate nemodificate. Sfritul secolului al XIX-lea i nceputul secolului XX marcheaz trecerea definitiv a activitii de producere de smn i material sditor din domeniul empirismului i diletantismului n cel al tiinelor biologice bine conturate. Majoritatea statelor pornite pe calea revoluiei industriale, elaboreaz legislaii adecvate care s stimuleze producerea seminelor i materialului sditor cu nalt valoare biologic, apte s contribuie substanial la obinerea unor recolte ct mai bogate. Revoluia tehnico-tiinific din ultimele patru-cinci decenii pune la dispoziia producerii de semine i material sditor noi instrumente teoretice i practice, nemaintlnite pn acum n acest domeniu de activitate. nmulirea prin microbutai sau prin butai verzi, 6

nmulirea meristematic, smna artificial, culturile de embrioni, nmulirea prin culturi de protoplati sunt doar cteva nouti de ultim or care adncesc caracterul tiinific al acestei discipline. 1.3. Importana producerii seminelor i materialului sditor horticol Importana producerii seminelor i materialului sditor horticol are att un caracter teoretic ct i unul practic. Caracterul teoretic al acestei activiti rezid n faptul c producerea de semine i material sditor horticol contribuie, prin mijloacele sale de investigare, la mbogirea patrimoniului de cunotine tiinifice ale omenirii. Importana practic a producerii de semine i material sditor horticol rezid n nsi rezultatele acestei activiti. Din cele mai vechi timpuri de cnd omul se ocup de agricultura i pn n prezent, perpetuarea de la un an la altul a multor specii de plante s-a fcut i se mai face nc prin semine. Dac valoarea acestora este sczut, nivelul produciilor realizate este, de asemenea, modest chiar i atunci cnd celelalte verigi tehnologice sunt maximalizate. Acelai lucru este valabil i pentru materialul sditor horticol. Prin urmare, n vederea realizrii unor producii ridicate i eficiente din punct de vedere economic, o prim condiie o reprezint calitatea seminelor i materialului sditor. Problema este cu att mai acut cu ct omenirea se confrunt cu o cretere exploziv a populaiei Globului. Astfel, dac n anul 1930 pe Terra existau 2 miliarde de oameni, n 1950 s-a ajuns la 3 miliarde, iar n 2006 la 6,5 miliarde. Anual creterea demografic este situat la aproximativ 80-90 milioane (practic, egal cu populaia unei ri cum este Mexicul), iar conform unui studiu recent, meninndu-se actualul ritm pe plan mondial, se poate ajunge n anul 2050 la 12 miliarde. Evident, indiferent de modul n care va evolua societatea, se pune problema asigurrii resurselor de hran ale omenirii, iar n acest sens, ca o condiie sine qua non, o agricultur performant nu poate fi conceput fr un sistem i o metodologie de obinere a materialului de semnat i plantat de cea mai bun calitate. Din aceste considerente, n marea majoritate a rilor lumii i, cu precdere, n cele cu agricultur avansat, producerea de semine i material sditor constituie activiti complexe, instituionale care urmresc realizarea urmtoarelor obiective: - obinerea de smn sau material sditor care s reproduc, n mod ct mai fidel, cultivarul cu toate caracteristicile sale valoroase; - obinerea de smn sau material sditor cu o vigoare, valoare cultural i stare fitosanitar corespunztoare standardelor n vigoare; - obinerea de smn sau material sditor n condiii de eficien economic ridicat i n cantiti care s satisfac necesitile productorilor (ageni economici, persoane fizice sau juridice). n unele momente ale istoriei dezvoltrii horticulturii mondiale importana practic a producerii de semine i material sditor a fost de-a dreptul salvatoare pentru anumite specii horticole. Este suficient s amintim, n acest sens, faptul c dup invazia filoxerei n Europa, viele nobile europene ar fi disprut probabil din cultur dac nu s-ar fi elaborat rapid tehnologii de producere a materialului sditor viticol prin altoire pe vie americane folosite ca portaltoi i care erau rezistente la atacul acestui duntor. Mai recent, cultura cpunului ar fi fost serios compromis din cauza bolilor virotice dac nu s-ar fi elaborat metode de producere a materialului sditor (stoloni) liber de viroze prin nmulire meristematic. Astfel de exemple arat, odat n plus, ct de esenial este aceast activitate pentru agricultura oricrei ri. Anumite soiuri de plante horticole, apreciate astzi i mult solicitate de consumatori, nici nu s-ar putea menine n cultur fr un sistem adecvat de producere a seminelor i materialului sditor (cpuni, via de vie european, garoafele, freeziile, hibrizii comerciali de tomate, morcovi, varz, ceap etc.). 7

n condiiile un agriculturi moderne, ecologice, producerea de semine i material sditor cu nalt valoare biologic reprezint o continuare fireasc i absolut necesar a lucrrilor de ameliorare. Ea ofer cultivatorilor un mijloc sigur, eficient i nepoluant de obinere a unor producii ridicate reprezentnd, din aceste puncte de vedere, o investiie deosebit de rentabil. Din punct de vedere strict didactic, disciplina de producere de smn i material sditor horticol cuprinde patru pri mari i anume: Bazele genetice ale producerii de smn i material sditor horticol, capitol n care se analizeaz cauzele ce duc la deteriorarea structurii genetice a unui cultivar i mecanismele genetice ce pot fi utilizate n vederea meninerii valorii biologice iniiale a cultivarurilor raionate. Metodologia producerii de semine i material sditor care, pe baza fundamentelor teoretice oferite de genetica, fiziologia, biochimia vegetal i ameliorarea plantelor horticole elaboreaz schemele metodologice cele mai adecvate pentru meninere nealterat a structurii genetice a oricrui cultivar supus procesului de nmulire. Tehnologia producerii de semine i material sditor scoate n eviden particularitile ce deosebesc o cultur obinuit legumicol, floricol, de una productoare de smn sau material sditor. Aceast parte a disciplinei se bazeaz, n bun msur, pe cunotinele acumulate la alte discipline horticole cum sunt legumicultura, floricultura, arboricultur ornamental, dendrologia, dar sub nici o form nu se poate limita doar la acestea. Controlul i certificarea culturilor pentru producerea de semine i material sditor este un capitol ce se ocup, n principal, cu metodologia de control aplicat culturilor de smn i material sditor, cu ntocmirea actelor de certificare, cu normele de control a seminelor i materialului sditor i cu legislaia intern i internaional ce guverneaz aceast activitate. 1.4. Bazele teoretice ale producerii de smn i material sditor i legturile interdisciplinare Teoria evoluionist, elaborat de Darwin, a fost punctul de plecare n nelegerea faptului c orice populaie de plante este, n mod continuu, supus transformrilor. Rezultatul acestor aciuni permanente ale factorilor evolutivi primordiali l constituie variabilitatea populaiilor sau, mai simplu spus, neidentitatea fenotipic i genotipic a indivizilor ce compun o populaie. Dup stabilirea conceptului de variabilitate de ctre Charles Darwin, n mod necesar s-a pus problema modului n care cultivarurile valoroase ar putea fi "sustrase" influenei modificatoare a mediului astfel nct ele s manifeste, an de an, caracteristicile lor iniiale. Au fost elaborate, aa cum s-a vzut n subcapitolul anterior, tehnici de obinere a unor semine sau a unui material sditor ct mai viguros, sntos i tipic pentru diferitele cultivaruri. nelegerea teoretic a mecanismelor care duc la apariia variabilitii precum i a acelora care mpiedic apariia ei a venit doar dup anul 1900, o dat cu redescoperirea legilor mendeliene ale ereditii i, apoi, prin fundamentarea de ctre Morgan a teoriei cromozomiale a ereditii. Este evident, deci, c pentru nelegerea modului de apariie a variabilitii i a modului cum poate fi mpiedicat sau contracarat aceast variabilitate, productorul de semine i material sditor horticol are absolut nevoie de aprofundate cunotine de genetic. Aceste cunotine i servesc, de asemenea, la nelegerea mecanismelor ce guverneaz transmiterea caracterelor valoroase de la o generaie la alta, aspect fundamental n producerea de semine i material sditor cu nalt valoare biologic. 8

Cultivarurile ce trebuiesc nmulite sunt, cel mai adesea, adaptate unor condiii de mediu specifice n care manifestarea nsuirilor valoroase este favorizat la maximum. Cu studiul acestor condiii de mediu se ocup ecologia, disciplin de care productorul de smn i material sditor se slujete n permanen. De cele mai multe ori, smna sau materialul sditor sunt produse ntr-un anumit moment i folosite n intervale de timp mai scurte sau mai lungi dup momentul producerii. Schimbrile ce au loc n semine, butai, plante mam etc., n timpul perioadei de pstrare, vernalizare, postmaturare, nrdcinare etc. pot spori substanial valoarea biologic a acestora sau, dimpotriv, o pot anula complet. nelegerea acestor procese vitale deosebit de importante nu este posibil fr cunotine adecvate de fiziologie vegetal. Aprofundarea acestor procese fiziologice majore i desluirea lor la nivelul celulei i a constituenilor ei chimici face obiectul unei alte discipline fundamentale de care productorul de smn i material sditor absolut nevoie, i anume biochimia vegetal. Elaborarea metodologiei teoretice i practice de conservare, prin anumite sisteme de reproducere, nmulire i selecie, a caracteristicilor valoroase ale unui cultivar poate fi realizat numai pe baza unor aprofundate cunotine de ameliorarea plantelor. Selecia conservativ, aplicat de productorul de smn i material sditor, va avea eficien maxim n pstrarea nsuirilor valoroase ale cultivarului numai atunci cnd va impune un pronunat efect stabilizator. Agrotehnica, legumicultura, floricultura, arboricultura i dendrologia sunt, de asemenea, discipline de specializare horticol a cror nsuire este indispensabil productorului de smn i material sditor. Modul de executare a lucrrilor solului, producerea rsadurilor, tehnica altoirii unor specii floricole sau de arbuti ornamentali sunt doar cteva exemple de domenii n care disciplinele tehnologice amintite anterior aduc contribuii extrem de valoroase de care productorul de smn i material sditor nu se poate lipsi. Disciplinele de protecia plantelor sunt indispensabile productorului de semine i material sditor, ntruct fr cunotine temeinice de fitopatologie i entomologie nu se pot obine producii semnificative economic i de bun calitate (valoare cultural, stare de sntate, lipsa organismelor duntoare etc.). Disciplinele economice ajut, de asemenea, productorul de smn i material sditor s evalueze rentabilitatea activitii sale, iar pe horticultor l ajut s-i vizualizeze economic eficiena investiiei pe care o fcut-o n smn sau material sditor. Se poate, deci, conchide c baza teoretic a producerii de semine i material sditor este reprezentat de genetica, fiziologia, biochimia vegetal alturi de ameliorarea plantelor. n afar de acestea, producerea de semine i material sditor este strns legat de alte discipline biologice sau tehno-horticole care o ajut n realizarea materialului de plantat n cantiti suficiente i cu caliti biologice superioare. 1.5. Organizarea producerii de semine i material sditor n Romnia Ca n toate rile cu o agricultur dezvoltat, i n Romnia producerea seminelor i a materialului sditor horticol este o activitate instituional, reglementat prin lege. Baza legal a producerii, folosirii i controlului calitii seminelor i a materialului sditor este asigurat de prevederile Legii nr. 266/2002 privind producerea, controlul calitii, comercializarea i folosirea seminelor i materialului sditor, precum i nregistrarea soiurilor de plante agricole.

Producerea, prelucrarea, controlul calitii, certificarea i comercializarea seminelor i materialului sditor se desfoar n ara noastr n conformitate cu legislaia i reglementrile internaionale, emise de: - U.E. (Uniunea European); - O.C.D.E. (Organizaia de Cooperare i Dezvoltare Economic); - I.S.T.A. (Asociaia Internaional pentru Controlul Seminelor); - U.P.O.V. (Uniunea Internaional pentru Protecia Creaiilor Vegetale). Pe teritoriul Romniei sunt admise producerea, comercializarea i folosirea seminelor i materialului sditor din soiurile nscrise n Registrul de Stat i publicate anual n Lista Oficial elaborat de Institutul de Stat pentru Testarea i nregistrarea Soiurilor (ISTIS). Soiurile din speciile cuprinse n cataloagele Comunitii Europene sau n catalogul unui stat membru al acesteia se echivaleaz cu soiurile nregistrate n Registrul de Stat i n Lista Oficial a soiurilor i hibrizilor de plante agricole cultivate n Romnia. Pe de alt parte, n ara noastr, protecia soiurilor de plante agricole este asigurat potrivit Legii nr. 64/1991 privind brevetele de invenie i Legii 255/1998 privind protecia noilor soiuri de plante. Oficiul de Stat pentru Invenii i Mrci (OSIM) acord protecie pentru un nou soi i elibereaz brevetul de soi, dac acesta este: a) nou; b) distinct; c) omogen; d) stabil; e) a primit un nume acceptat i nregistrat n Registrul Naional al Brevetelor de Soiuri Protejate. Producerea n vederea comercializrii, prelucrarea i comercializarea seminelor i materialului sditor se realizeaz de ctre ageni economici, persoane fizice sau juridice, nregistrai n acest scop i care au primit autorizaie eliberat de Ministerul Agriculturii, Pdurilor i Dezvoltrii Rurale (MAPDR), vizat anual, prin autoritile teritoriale de control i certificare a seminelor. Pentru a fi autorizai, agenii economici, persoane fizice sau juridice, trebuie s fac dovada c dispun de dotrile tehnico-materiale necesare i de personal cu pregtire i cunotine corespunztoare pentru activitatea solicitat, conform reglementarilor n vigoare, inclusiv cele privind carantina fitosanitara, dup caz. Producerea seminelor din categoriile biologice Prebaz i Baz revine persoanelor fizice sau juridice, specificate ca menintor n Registrul soiurilor de plante nregistrate (Registrul soiurilor) i publicate n Catalogul oficial al soiurilor si hibrizilor de plante de cultur din Romnia (Catalogul Oficial sau Lista Oficial), pentru anul respectiv. Regulile i normele tehnice privind producerea n vederea comercializrii, prelucrarea, controlul i certificarea calitii i comercializarea seminelor, precum i procedura de nregistrare, de supraveghere, monitorizare i acreditare a activitilor furnizorilor se aprob prin ordin al ministrului MAPDR, cu respectarea prevederilor legale i a reglementrilor organismelor internaionale la care Romnia este parte. Controlul, certificarea identitii i a calitii seminelor, nregistrarea, supravegherea, monitorizarea i acreditarea agenilor economici furnizori de semine n toate etapele producerii, prelucrrii i comercializrii se fac de ctre Inspecia Naional pentru Calitatea Seminelor (INCS), serviciu de specialitate din cadrul Ministerului Agriculturii, Pdurilor i Dezvoltrii Rurale, n conformitate cu regulile, normele tehnice i cu reglementrile internaionale n vigoare. n subordinea Inspeciei Naionale pentru Calitatea Seminelor (INCS) funcioneaz Inspectoratele teritoriale pentru Calitatea Seminelor i a Materialului Sditor (ICSMS) i Laboratorul Central pentru Calitatea Seminelor i a Materialului Sditor (LCCSMS), ca uniti cu personalitate juridic, finanate din venituri extrabugetare i alocaii acordate de la bugetul de stat, care rspund pentru documentele pe care le emit. Inspecia Naional pentru Calitatea Seminelor, prin unitile sale teritoriale (ICSMS i LCCSMS) nregistreaz, elibereaz i retrage autorizaiile de funcionare pentru agenii economici care efectueaz operaiuni de producere n vederea comercializrii, prelucrare i 10

comercializare a seminelor i materialului sditor, dup caz, pe teritoriul Romniei, urmrete i controleaz aplicarea de ctre agenii economici nregistrai a normelor tehnice pentru producerea, prelucrarea i comercializarea seminelor, stabilite mpreun cu Academia de tiine Agricole i Silvice Gheorghe Ionescu-Siseti, cu asociaiile profesionale i interprofesionale de profil. De asemenea, INCS efectueaz prin unitile subordonate i inspectorii aprobatori de stat care funcioneaz n cadrul ICSMS i LCCSMS controlul culturilor semincere, sub aspectul puritii biologice, a strii fitosanitare, valorii culturale, precum i a altor criterii ce constituie obiectul certificrii, n conformitate cu "Metodologia de control, n cmp, a culturilor pentru producerea seminelor i materialului sditor" aprobat de Ministerul Agriculturii, Pdurilor i Dezvoltrii Rurale. 1.6. Categorii de smn i material sditor produse n Romnia n sistemul producerii de semine i material sditor de legume i flori din ara noastr, se utilizeaz o terminologie specific, unele noiuni fiind utilizate n limbajul curent, fr s aib valoare oficial, n timp ce altele sunt reglementate prin acte oficiale. Astfel, n limbajul de specialitate, smn nseamn orice material biologic (reprezentat de semine, fructe, material sditor), produs prin orice metode de nmulire, destinat multiplicrii sau reproducerii unei plante agricole. Smna de soi, aparine unui soi sau hibrid comercial i a fost obinut conform unei metodologii de selecie tiinific, printr-o tehnologie specific i controlat. O astfel de smn este ntotdeauna nsoit de acte oficiale care i atest proveniena i valoarea biologic. Smn aparinnd unei categorii biologice, desemneaz o smn sau material sditor care s-a obinut ntr-o unitate specializat, prin aplicarea unei metodologii tiinifice i este nsoit de acte oficiale care-i certific proveniena, valoarea cultural, puritatea varietal, starea fitosanitar etc. i categoria la care este ncadrat n funcie de parametrii pe care-i prezint. Smna amelioratorului reprezint smna unui cultivar (soi omologat sau autorizat, linie consangvinizat, HS form parental) produs sub directa responsabilitate a unui ameliorator, pe baza aplicrii unei scheme oficiale de selecie conservativ; ea servete ca surs pentru nmulirea sau folosirea n continuare a cultivarului respectiv n procesul de producere de smn. Se poate numi i smna autorului i este o categorie ce apare la soiurile noi la care, la data omologrii, exist o anumit cantitate de smn produs direct de ctre cel ce a creat soiul (ntre 50-500 kg, n funcie de specie). Din aceast smn se constituie apoi toate verigile procesului de selecie conservativ (cmpul de alegere - CA, cmpul de selecie - CS etc.), respectiv categoriile biologice n conformitate cu schema oficial de selecie aplicat n producerea seminelor (PB I, PB II, B, C1, C2 etc.). De asemenea, aceast smn este folosit de ctre ISTIS n postcontrolul pe care-l execut n diferite verigi de nmulire ale soiului respectiv. Smna Prebaz I (PB I) este reprezentat de prima descenden rezultat din nmulirea seminelor liniilor (familiilor, clonelor) reinute n cmpul de selecie (CS). Unitatea de cercetare care produce CS garanteaz autenticitatea seminei. Se supune certificrii numai la anumite specii. Smna Prebaz II (PB II) este reprezentat de prima descenden rezultat din nmulirea (cultivarea) seminelor PB I. Se supune controlului i certificrii. Smna Baz (B) este reprezentat de prima descenden rezultat din nmulirea (cultivarea) seminelor PB II. Ca i categoriile anterioare, i Baza se supune certificrii. 11

Smna Certificat I i II este reprezentat de descendenele primelor dou generaii succesive de nmulire ale seminei Baz. Se supune controlului i certificrii. Smna liniei consangvinizate smna unor linii parentale ale hibrizilor simpli (forme parentale sau comerciali), produs i meninut dup o metodologie specific doar n unitile specializate de ameliorare (de regul, cele care au creat hibridul respectiv). Autenticitatea i valoarea biologic a acestei semine este garantat de ameliorator, la fel ca i n cazul seminei CS. Smna hibrid form parental este obinut prin ncruciarea (liber sau forat) a dou linii consangvinizate. Ea va fi utilizat pentru obinerea uneia din formele parentale n cmpul de hibridare pentru realizarea seminei hibride F1 comercial, dublu hibrid, dup urmtoarea schem de principiu: HS1 + HS2 F1HD (comercial). Aceast categorie biologic de smn se supune controlului i certificrii. Smna hibrid pentru producie (comercial) se obine n loturile de hibridare (artificial sau liber) n care au fost ncruciate: - dou linii consangvinizate smn comercial de HS; - doi hibrizi simpli smn comercial de HD; - un hibrid simplu i o linie smn comercial de HTL (hibrid trilineal); - o linie i un soi smn comercial de HSL (hibrid sortolineal). Plante mam (butai) reprezint un material biologic ce apare n procesul de producere de smn la plantele bienale. Ele sunt considerate la categoria biologic pe care a avut-o smna din care provin iar n anul urmtor, semincerii rezultai din aceste plante mam vor fi considerai la categoria biologic inferioar imediat urmtoare. Ex. smna plante mam seminceri PB II PB II B Din punct de vedere al dovezilor de autenticitate i valoare biologic (cultural) a seminelor, acestea pot fi: Smn certificat este acea smn care se obine din culturi care, n urma controalelor efectuate n cmp, au fost gsite corespunztoare n ceea ce privete autenticitatea, puritatea biologic, starea fitosanitar etc. n cazul hibrizilor, se produce n loturi de hibridare din smna de baz i este destinat producerii de recolt pentru consum uman, animal sau pentru industrializare; n cazul soiurilor, este produs direct din smna Baz (sau Prebaz, la cererea menintorului) pentru renmuliri sau pentru consum i satisface cerinele impuse de reglementrile n vigoare. Smna comercial nseamn smna care are identitate ca specie i corespunde condiiilor impuse de reglementrile n vigoare specificate pentru aceast smn. La plantele floricole i arbutii ornamentali care se nmulesc vegetativ (garoafe, lalele, crizanteme, trandafiri etc.) apar urmtoarele categorii de material biologic ce se supune controlului i certificrii. Clonul de soi este reprezentat de prima descenden vegetativ a unei singure plante elit, realizat n procesul de creare a unui soi cu nmulire vegetativ. nmulirile succesive ulterioare ale clonului de soi vor da natere clonilor de diferite categorii biologice, conform urmtoarei scheme: Clon de soi PB I PB II B C1 C2 n practica producerii de material sditor de legume i flori, cel mai adesea diferitelor categorii biologice sunt reprezentate de cloni obinui din: Ramuri altoi sunt obinute prin recoltarea lor din plantaii mam special nfiinate i meninute n acest scop sau din plantaii comerciale valoroase urmrite i verificate sub aspectul autenticitii soiului i a strii sale fitosanitare. Aceast categorie apare de regul, la trandafir, lmi, smochini i la alte plante ornamentale ce se nmulesc prin altoire.

12

Bulbii i bulbilii sunt obinui prin recoltarea lor din plantaii special nfiinate i meninute dup o anumit schem de selecie conservativ. Ei pot fi recoltaii i din plantaii industriale valoroase, dar n acest caz nu vor fi certificai. Butaii sunt reprezentai de fragmente de tulpin recoltate din plantaii mam special amenajate i meninute n acest scop, n conformitate cu o schem de selecie conservativ adecvat speciei respective. n funcie de categoria biologic a plantaiei mam, butaii pot fii: PB I, PB II, B, C1 sau C2.

CAPITOLUL II 2.1. Principalele caracteristici ale cultivarurilor Cultivarul, noiune cu un caracter general, cunoscut de la ameliorarea plantelor horticole, reprezint un ansamblu de indivizi cultivai care se caracterizeaz printr-o sum de nsuiri morfo-fiziologice relativ stabile i repetabile n ciclurile succesive de cultur, nsuiri ce l deosebesc de alte cultivaruri. n aceast definiie, destul de exhaustiv, sunt cuprinse, de fapt, trei din cele mai definitorii caracteristici ale cultivarului, i anume: - distinctibilitatea; - omogenitatea; - stabilitatea. Toate aceste trei caracteristici se realizeaz datorit unei anumite structuri genetice a cultivarului, deosebit de structurile genetice ale altor cultivaruri asemntoare i a echilibrului genetic n care se afl o astfel de structur la un moment dat. Distinctibilitatea (sau individualitatea) unui cultivar este dat de suma caracteristicilor sale care l definesc i l deosebesc de alte cultivaruri ale aceleiai specii. Foarte importani n definirea unui cultivar, sunt aa numiii markeri genetici. Acetia sunt, de fapt, caractere (morfologice, biochimice etc.) evidente, uor de observat (determinat) i care, de regul, se datoreaz unor gene majore, dominante sau recesive. Markerii genetici recesivi sunt cei mai valoroi deoarece fac posibil identificarea oricrei impurificri biologice aprute n descenden. Omogenitatea (sau uniformitatea) este legat de structura cultivarului, de msura n care indivizii ce-l compun sunt mai mult sau mai puin asemntori. Msura omogenitii unui cultivar este dat de variabilitatea populaiei ce-l reprezint, exprimat pentru una sau mai multe caracteristici. De regul, liniile consangvinizate, soiurile de plante autogame, soiurile de flori i arbuti ornamentali ce se nmulesc vegetativ, hibrizii comerciali (simpli sau dubli) sunt cultivaruri cu un grad mare de omogenitate, n timp ce soiurile plantelor alogame au o omogenitate mult mai relativ. Stabilitatea cultivarului este dat de nsuirea acestuia de a-i menine nemodificate caracteristicile sale (structura sa genetic) de-a lungul generaiilor succesive de nmulire. Stabilitatea mai mare sau mai mic a unui cultivar face procesul de producere de semine mai mult sau mai puin anevoios. n general, n producerea de semine i material sditor, termenul cultivar este sinonim cu soiul sau hibridul comercial i, conform Legii 266/2002, acesta reprezint un grup de plante aparinnd unui taxon botanic de cel mai jos rang cunoscut, care: a) se difereniaz clar de cele deja cunoscute prin cel puin un caracter distinct, precis i puin fluctuant, ce poate fi definit i descris, sau prin mai multe caractere a cror combinaie este de natur s dea calitatea de nou (distinctivitate); 13

b) este uniform pentru ansamblul caracterelor luate n considerare de reglementrile n vigoare privind uniformitatea soiurilor, cu excepia unui numr foarte redus de forme atipice, innd seama de particularitile de reproducere (uniformitate); c) este stabil n caracterele sale eseniale, adic n urma reproducerii sau multiplicrii succesive ori la sfritul fiecrui ciclu de reproducere, caracterele eseniale rmn aa cum au fost descrise iniial (stabilitate). Persoana fizic sau juridic indicat n Registrul soiurilor ca responsabil pentru meninerea unui soi cu structura genetic, respectiv caracteristicile avute la data nscrierii in Registrul soiurilor, poart numele de menintor. Menintorul poate fi amelioratorul soiului sau persoana creia amelioratorul i-a transferat acest drept printr-o tranzacie legal. 2.2. Principalele tipuri de cultivaruri la plantele horticole autogame i structura lor genetic La plantele horticole autogame exist urmtoarele tipuri de cultivaruri: - populaii i soiuri omogene; - soiuri neomogene (polimorfe); - soiuri multiliniale; - linii pure, forme parentale ale hibrizilor comerciali; - hibrizi comerciali. Soiurile i populaiile omogene ale speciilor autogame prezint un polimorfism nesemnificativ i de regul sunt obinute prin selecie individual efectuat ntr-un material iniial reprezentat de populaii sau soiuri vechi, autohtone sau strine. Aceste cultivaruri sunt alctuite dintr-un numr oarecare de biotipuri homozigote care-i pstreaz independena n procesul de nmulire sexuat. n acest fel, frecvena biotipurilor i deci frecvena genelor, n fiecare generaie de nmulire, rmn relativ constante dac nu intervin factori modificatori eseniali (mutaia, migraia, driftul genetic etc.). Datorit autopolenizrii continue, cultivarurile respective sunt din punct de vedere genetic apropiate de starea de homozigoie perfect. Soiurile neomogene sau polimorfe sunt obinute prin selecie individual repetat nceput ntr-un material iniial hibrid. Ele sunt alctuite din mai multe biotipuri homozigote, deosebite din punct de vedere morfologic i genetic semnificativ. Cu toate acestea, structura lor genetic este caracterizat printr-un anumit grad de heterozigoie rezidual. Pentru ca structura genetic a soiurile neomogene s fie conservat, trebuie ca proporia diferitelor biotipuri s fie pstrat n procesul producerii de smn. Soiurile multiliniale sunt alctuite din mai multe linii, asemntoare fenotipic, dar diferite n privina genelor de rezisten la diferite boli, obinute prin selecie efectuat ntr-un material iniial rezultat n urma ncrucirii unui soi (de regul, soi omogen) cu mai multe surse de rezisten la diferite boli i backcross (retroncruciare) pn la recuperarea fenotipului i ncorporarea n fiecare linie a genelor de rezisten dorite. Pentru ca soiul s-i menin particularitile individuale, este necesar ca proporia ntre diferite linii s fie meninut (Botez i Savatti, 1987). Liniile pure, forme parentale ale hibrizilor comerciali, sunt obinute prin selecie individual repetat anual (pedigree) iniiat ntr-un material biologic heterogen, creat de regul prin hibridare dirijat. Datorit autopolenizrii i seleciei continue, liniile pure au o structur genetic simpl, fiind alctuite dintr-un singur biotip homozigot, astfel c practic toate plantele liniei sunt identice genetic i prezint o uniformitate fenotipic deosebit (eventualele diferene dintre plantele liniei nu se datoreaz genotipului, ci factorilor de mediu). Datorit structurii lor genetice, liniile pure poart i numele de linii homozigote. 14

Hibrizii comerciali sunt obinui prin ncruciarea dirijat a unor linii parentale, dup ce n prealabil acestea au fost testate pentru capacitatea general i specific de combinare (CGC i CSC), constatndu-se c, ntr-o anumit formul (combinaie parental), asigur manifestarea unui intens efect heterozis la hibrizii F1. Spre deosebire de soiuri, datorit modului de obinere, hibrizii comerciali prezint o structur genetic puternic heterozigot (cu att mai mult cu ct, de regul, se ncrucieaz linii diferite din punct de vedere genetic, selecionate din populaii nenrudite), n schimb au o uniformitate fenotipic deosebit. Efectul heterozis sau vigoarea hibrid se manifest la acest tip de cultivaruri printr-un potenial biologic, respectiv o productivitate deosebit, uniformitate a caracterelor etc., fapt pentru care la multe specii horticole au ajuns s nlocuiasc soiurile sau s dein o pondere majoritar n sortiment. De exemplu, la tomatele cultivate n spaii protejate, se utilizeaz n exclusivitate hibrizi comerciali, acetia nlocuind n totalitate soiurile. 2.3. Cauzele care duc la deteriorarea structurii genetice a cultivarurilor speciilor horticole autogame Dup cum s-a vzut n subcapitolul anterior, la plantele horticole autogame cultivarurile (soiurile) sunt formate dintr-un numr oarecare de biotipuri homozigote ce-i pstreaz independena n procesul reproducerii sexuate. n acest caz, se poate afirma c la soiurile de plante autogame structura genetic a soiului este reprezentat tocmai de diferenele genotipice dintre biotipurile homozigote care se pstreaz constante de-a lungul generaiilor de nmulire sexuat. Cauzele care pot altera structura genetic a unui soi de plante autogame sunt acelea care, printr-un mecanism sau altul, permit apariia n cadrul soiului a unor biotipuri homozigote noi sau, dimpotriv, duc la dispariia din cadrul soiului a unui/unor biotipuri homozigote caracteristice acestuia. Cele mai importante cauze de acest fel sunt: a) Mutaia: modific structura genetic a unui cultivar de plante autogame, cel mai frecvent prin favorizarea apariiei, n cadrul soiului, a unor biotipuri noi inexistente anterior n soi. De exemplu, dac soiul este format doar din trei biotipuri homozigote AAbbcc, aaBBCC i aabbCC, mutaia recesiv a genei C, aprut n biotipul doi sau trei, va da natere heterozigoilor aaBBCc sau aabbCc. Prin autopolenizare continu proporia heterozigoilor va scdea pn la eliminare complet crescnd, n schimb, proporia homozigoilor. n cazul exemplului analizat, aceti homozigoi vor fi de urmtoarele tipuri: aaBBCC i aabbCC, existente i nainte n populaia soiului i aaBBcc sau aabbcc, biotipuri complet noi, inexistente n populaia soiului. Efectul mutaiei n schimbarea structurii genetice a unui soi de plante autogame depinde foarte mult de caracteristicile mutaiei: unic sau recurent (repetat), recesiv sau dominant, de penetran i expresivitatea genelor mutante i de valoare adaptiv a acestora, adic de msura n care selecia natural menine n populaia soiului o anumit mutant. n general se consider c, la soiurile plantelor horticole autogame, mutaiile dominante, cu o bun penetran i expresivitate i cu o capacitate adaptiv ridicat pot fi relativ uor eliminate din populaia soiului, n procesul de producere de smn prin selecia n mas negativ aplicat sub forma purificrilor biologice. Mutaiile recesive, care duc la apariia de biotipuri homozigote noi, pot fi i ele nlturate atunci cnd noul biotip se deosebete n mod radical, evident fenotipic de celelalte biotipuri ale soiului. Cnd ns diferenele aduse de noul biotip sunt mici, greu observabile, nlturarea unor astfel de biotipuri din populaia soiului, cu ajutorul purificrilor biologice, este extrem de anevoioas sau chiar imposibil. Ca o regul general se admite c, pentru evitarea impurificrilor genetice produse de mutanii la soiurile plantelor autogame, producerea de semine la aceste soiuri precum i 15

recunoaterea culturilor de smn vor fi ncredinate unor specialiti care cunosc foarte bine soiurile respective i sunt capabili s detecteze, prin observaie vizual sau teste simple i expeditive, apariia unor biotipuri noi, strine soiului i s indice nlturarea acestora prin purificri biologice. b) Migraia de gene sau contaminarea cu gene strine este o cale mai puin frecvent de deteriorare a structurii genetice a unui soi de plante autogame. Fenomenul apare, la acest tip de soiuri, n principal prin impurificri mecanice dar i prin polenizri strine ntmpltoare, deoarece autogamia perfect nu exist n natur. Toate speciile horticole autogame se caracterizeaz printr-un anumit nivel de alogamie rezidual, nivel ce poate crete considerabil atunci cnd plantele din cultivaruri diferite cresc una lng alta sau datorit unor cauze fiziologice. De exemplu, la tomate, specie prin excelen autogam, n verile calde i secetoase se manifest fenomenul de heterostilie (scoaterea stigmatului deasupra capionului format de garnitura anterelor), fenomen ce oblig florile plantelor respective la o polenizare strin. Astfel de fenomene pot aduce, n soiuri de plante autogame, nivele de alogamie ce pot depi 50% din flori. Din punct de vedere genetic, efectul migraiei de gene poate fi de dou tipuri: apariia de heterozigoi i apoi homozigoi noi n cadrul populaiei soiului (cnd migraia are loc prin polenizri strine ntmpltoare) sau, direct, apariia unui numr oarecare de biotipuri n populaia soiului (cnd migraia are loc prin impurificri mecanice). Efectul migraiei este direct influenat de anumite caracteristici ale populaiei receptoare precum i ale celei donoare de gene. Dac ntre cele dou tipuri de populaii exist diferene genotipice evidente, mari atunci i efectul migraiei de gene va fi mare. Pentru evitarea aciuni migraiei genelor ca factor de deteriorare a structurii genetice a unui soi este obligatorie respectarea distanelor de izolare att ntre soiuri (cca. 100 m) ct i ntre diferitele categorii biologice ale aceluiai soi (4 m). Impurificrile mecanice care, n procesul de producere de smn, sunt socotite greeli grosolane, vor fi cu desvrire evitate prin: folosirea de ambalaje (saci, pungi, cutii) exclusiv noi pentru categoriile superioare de smn (PB I, PB II, B); curirea extrem de atent a mainilor de semnat, recoltat, treierat, condiionat etc., cu jet de aer comprimat, mai ales atunci cnd mainile respective au fost folosite la recoltarea altor soiuri din aceiai specie. c) Efectul direcional al seleciei naturale se manifest ca o cauz a deteriorrii structurii genetice a soiurilor de plante autogame mai ales atunci cnd producerea seminelor la un astfel de soi se face n condiii de mediu schimbate. n astfel de condiii, anumite biotipuri ale soiului care, n condiii normale, sunt meninute ntr-o proporie sczut n populaie pot fi favorizate devenind preponderente n populaia soiului respectiv n dauna altor biotipuri. Uneori astfel de condiii de mediu schimbate pot duce chiar la dispariia total din cadrul soiului a unor biotipuri, alternndu-se astfel extrem de grav structura genetic a soiului respectiv. Efectul direcional al seleciei naturale nu trebuie neles doar ca o consecin a schimbrii mediului natural n care creste i se dezvolt soiul respectiv. Modificrile de agrotehnic pot avea i ele acelai efect deoarece, de regul, o agrotehnic rudimentar favorizeaz dezvoltarea biotipurilor extensive n dauna celor intensive. De ex., ntr-un soi de tomate de toamn, la care producerea de semine s-ar face n condiii de neirigare i o lips total de fertilizare, ar predomina biotipurile rustice, rezistente la secet i cu cerine reduse fa de elementele nutritive, alternndu-se astfel, n mod drastic structura genetic iniial a soiului. Evitarea efectelor negative ale seleciei naturale direcionale poate fi destul de uor realizat prin organizarea producerii de semine, pentru fiecare soi, n condiii de mediu ct mai apropiate de cele n care a fost creat i prin respectarea agrotehnicii indicate de creatorii soiului. 16

d) Driftul genetic (deriva genetic) este o schimbare ntmpltoare a frecvenei genelor dintr-un soi de plante autogame datorit tocmai populaiilor mici cu care se lucreaz n procesul de producere de semine. De ex., dac la alegerea elitelor, n vederea producerii de semine, din ntmplare s-a scpat extragerea de elite dintr-un anumit biotip al soiului, populaia descendent din aceste elite va avea o structur genetic diferit de cea a soiului iniial fiind lipsit de un biotip. n acest fel, baza genetic a soiului se restrnge modificnduse, de obicei n sens negativ, proprietile agroproductive ale acestuia. Pentru evitarea consecinelor driftului genetic se recomand ca, la extragerea de elite, cmpul de alegere s fie mprit n mod uniform n mai multe carouri, fiecare din acetia contribuind la fondul total de elite cu un numr aproximativ egal de plante. n acest fel, exist anse reduse ca, din ntmplare, un anumit biotip s fie scpat din vedere. De asemenea, numrul elitelor extrase va fi suficient de mare nct s permit fiecrui biotip s fie reprezentat de un numr de elite proporional cu ponderea lui n populaia soiului. n mod cu totul orientativ se consider obligatoriu, la soiurile plantelor horticole autogame, un numr minim de 500 de elite pentru a se evita apariia driftului genetic. e) Segregrile ntrziate pot s modifice structura genetic mai ales la soiurile polimorfe de plante autogame, soiuri ce au fost obinute prin selecie ntr-o populaie hibrid. diferenele mari existente ntre tipurile parentale folosite n hibridare fac posibil apariia unor segregri trzii, cu att mai trziu cu ct diferentele respective au fost mai mari. Efectele segregrilor ntrziate pot fi relativ uor nlturate prin purificri biologice atente care s nlture, din loturile productoare de smn, orice plant ce se abate de la biotipurile cunoscute ale soiului. 2.4. Principalele tipuri de cultivaruri la plantele horticole alogame i structura lor genetic La plantele horticole alogame exist urmtoarele tipuri de cultivaruri: - populaii i soiuri cu polenizare liber; - linii consangvinizate, forme parentale ale hibrizilor comerciali; - hibrizi comerciali; - soiuri sintetice. La plantele horticole alogame exist mai multe tipuri de cultivaruri cu structuri genetice distincte ceea ce face ca i modurile n care aceste structuri reacioneaz la factorii destabilizatori s fie diferite. Populaiile i soiurile cu polenizare liber, formate prin selecie n condiii de panmixie, au o structur genetic extrem de complex, heterogen. Ele sunt alctuite dintr-un amestec de indivizi heterozigoi i homozigoi n proporii ce se menin constante de la o generaie la alta de nmulire seminal, conform legii Hardy-Weinberg: p2AA + 2pqAa + q2aa = 1, n care p + q = 1, p = frecvena n populaie a alelei A i q = frecvena n populaie a alelei a. Deci, n condiii de panmixie i n lipsa unor factori modificatori eseniali, structura genetic complex a soiurilor de plante alogame cu polenizare liber se menine nemodificat de la o generaie la alta, frecvena genotipurilor din generaia descendent fiind determinat de frecvena genelor n populaia parental. Liniile consangvinizate sunt cultivaruri de plante alogame folosite pentru obinerea hibrizilor simpli (parentali sau comerciali). Ele sunt obinute prin autopolenizare forat i selecie timp de mai multe generaii, ceea ce le face s aib o structur genetic omogen, homozigot. Cu alte cuvinte, liniile consangvinizate sunt alctuite din indivizi identici, homozigoi, omogeni genotipic i fenotipic, manifestnd, de regul, fenomenul de depresiune de consangvinizare. Ele sunt similare liniilor pure de la plantele autogame, cu diferena c la 17

autogame autopolenizarea este modul natural de reproducere seminal, iar plantele nu sufer n urma autofecundrii continue i chiar dac se obin prin selecie ntr-un material iniial hibrid, n generaii avansate se poate ajunge la homozigoia complet. n schimb, la alogame, plantele sufer n urma autopolenizrii (care trebuie efectuat artificial, i de aceea se numete forat), i chiar dac se avanseaz n generaii consangvine, este extrem de greu s se ajung la o homozigoie deplin. Hibrizii comerciali F1 sunt obinui prin ncruciarea dirijat a unor linii consangvinizate sau a unor hibrizi simpli (pt HD). De regul, hibrizii comerciali au o structur genetic omogen, ns puternic heterozigot, ce nu se pstreaz n descendena seminal. De aceea, structura genetic a hibridului comercial va fi reconstituit n fiecare an prin producerea seminei hibride F1 n loturile de hibridare. Soiurile sintetice obinute prin ncruciarea liber (polycross) a mai mult de patru linii consangvinizate au o structur genetic mult mai heterogen dect cea a hibrizilor comerciali, asemntoare cu aceea a soiurilor cu polenizare liber strin. Ca i la acestea, prin polenizare liber (panmixie), structura genetic a soiului sintetic rmne neschimbat de la o generaie la alta de nmulire seminal, dac nu intervin factori modificatori. 2.5. Cauzele care pot deteriora structura genetic la cultivarurile de plante horticole alogame Cauzele ce pot deteriora structura genetic a cultivarurilor de plante alogame sunt, n linii mari, aceleai cu cele descrise la plantele autogame. Intensitatea efectului acestor cauze depinde de tipul de cultivar asupra cruia acetia acioneaz sau, cu alte cuvinte, de complexitatea structurii genetice ce este afectat. Mutaia are, i la cultivarurile plantelor alogame, aceleai efecte ca cele descrise la plantele autogame. La soiurile cu polenizare liber mutaia modific frecvena homozigoilor dominani, a heterozigoilor i a homozigoilor recesivi existeni n populaie la un anumit locus. nmulirea panmictic va face c, n generaiile urmtoare, aceast nou structur, modificat s se perpetueze n mod constant. La plantele alogame, eliminarea prin selecie a unei mutaii nu mai este att de simpl i de eficient ca i n cazul plantelor autogame, mai ales cnd mutaia este recesiv. Efectul seleciei, n reducerea frecvenei genelor dintr-o populaie alogam panmictic, va depinde de urmtoarele trei elemente: - presiunea de selecie; - tipul genei (dominant sau recesiv); - frecvena absolut a genei ce trebuie eliminat prin selecie. Presiunea de selecie (s) exprim numeric intensitatea seleciei ndreptat mpotriva genei ce trebuie eliminat i ea are valori ntre 0 i 1 sau (0-100%). 0 presiune de selecie 1 (100%) nseamn c toate genotipurile purttoare ale genei respective au fost eliminate iar o presiune de selecie "0" nseamn c nici unul din genotiputile purttoare ale genei respective nu a fost eliminat. Caracterul dominant sau recesiv al genei mpotriva creia este ndreptat selecia scurteaz sau prelungete timpul necesar eliminrii genei respective din populaie. Dac gena este dominant, ea va putea fi uor eliminat prin selecie, ntr-o singur generaie deoarece se manifest fenotipic la p2AA (indivizi homozogoi) i 2pqAa (indivizi heterozigoi). Dac gena mpotriva creia se efectueaz selecia este recesiv, eliminarea ei va dura un timp mai scurt sau mai ndelungat n funcie de valoarea coeficientului de selecie "s". Chiar cnd acesta are valoarea s=1, deci sunt eliminai toi indivizii homozigoi n gena respectiv (q2aa), gena tot mai rmne n populaie, n heterozigoi (2pqAa), care, prin polenizare liber, vor da din nou natere unei anumite proporii de homozigoi prelungind procesul de eliminare a genei recesive. Repetnd procesul de eliminare a genotipurilor homozigot recesive q2aa) 18

timp de n generaii, gena "a" se mai pstreaz n populaie ntr-o frecven foarte scsut datde formula: qo n care q0 = frecvena iniial a genei recesive qn = 1 + nqo Numrul de generaii necesar njumtirii frecvenei unei gene recesive ntr-o populaie panmictic este dat de relaia n =1/qo. Cu alte cuvinte, cu ct frecvena unei gene recesive este mai sczut cu att eliminarea prin selecie a genei respective este mai anevoioas. De aceste constatri trebuie inut neaprat cont atunci cnd se vorbete de impurificarea soiurilor alogame cu polenizare liber datorit mutaiei sau migraiei de gene. Revenind la mutaie i efectul ei asupra cultivarurilor de plante horticole, este de remarcat faptul c, n cazul hibrizilor comerciali, producerea unor mutaii nu afecteaz semnificativ structura genetic a acestora. Oricum, indiferent ct de drastice ar fi aceste modificri, ele se menin i se manifest doar un singur an, anul cultivrii hibridului comercial. Efectul mutaiei la liniile consangvinizate poate fi uor sesizat i nlturat prin aceleai "purificri biologice" indicate n cazul plantelor autogame. Migraia de gene, la cultivarurile plantelor alogame, se produce, n principal, prin polenizare strin, efectul ei fiind acela de deteriorare a structurii genetice a cultivarului. Din aceste motive, la cultivarurile speciilor alogame, distanele de izolare sunt mult mai mari (1500-8000 m) pentru verigile productoare de semine. Uneori aceste distane pot fi reduse, cnd n calea agentului impurificator exist obstacole naturale sau artificiale (dealuri, pduri, orae, perdele de protecie) dar numai cu acordul prealabil al inspectorului aprobator. Cele mai drastice efecte ale migraiei de gene se observ la liniile consangvinizate a cror homozigoie este deteriorat datorit infuziei de gene strine. Efectul direcional al seleciei naturale are cu adevrat importan doar n cazul soiurilor cu polenizare liber i a liniilor consangvinizate. n acest din urm tip de cultivar, cel mai adesea, se ajunge la diferenierea unor sublinii cu caracteristici distincte, deobicei inferioare liniei din care provin. Testarea permanent a capacitii generale i specifice de combinare a liniilor pune repede n eviden o eventual deteriorare a structurii lor genetice. Ca i la plantele autogame, efectele seleciei naturale direcionate pot fi evitate n producerea de semine la cultivarurile speciilor alogame prin respectarea tehnologiilor specifice i producerea de semine n condiii agro-pedologice optime pentru fiecare cultivar. La soiurile de plante alogame cu polenizare liber, driftul genetic are, cel mai adesea, efecte ce amintesc de depresiunea de consangvinizare. Fenomenul este uor de prevenit prin alegerea unui numr ct mai mare de elite care s reprezinte toate sau marea majoritate a biotipurilor homozigote i heterozigote ale soiului astfel nct structura genetic a acestuia s se menin nealterat n generaiile urmtoare. Segregarea ntrziat poate afecta semnificativ doar liniile consangvinizate insuficient omogenizate (homozigotate). Evitarea unor astfel de efecte este posibil prin obinerea de linii perfect homozigote cu ajutorul monoploizilor sau prin continuarea seleciei n procesul de meninere a liniei consangvinizate. 2.6. Cauzele care pot deteriora structura genetic a cultivarurilor cu nmulire vegetativ

Cultivarurile speciilor legumicole i floricole ce se nmulesc vegetativ (arbuti ornamentali, unele specii legumicole i floricole) au o structur genetic uniform, omogen care se menine constant, nealterat de-a lungul generaiilor de nmulire apomictic. Variabilitatea genetic a unor asemenea cultivarurilor, este practic, nul tocmai datorit
19

modului de nmulire i faptului c exist puine cauze ce pot deteriora structura genetic a unei populaii clonale. Mutaiile somatice ce apar n plantaiile furnizoare de ramuri altoi, butai, stoloni, marcote, drajoni, bulbi, bulbili, tuberculi etc., dac sunt folosite la obinerea materialului de plantat pot duce la alterarea vizibil a structurii genetice a soiurilor. Din fericire, eliminarea unor astfel de indivizi i, eventual, nlocuirea lor cu indivizi tipici soiului este relativ uoar i cu att mai ieftin cu ct se efectueaz mai devreme. De regul, o variabilitate somaclonal evident ntr-o plantaie de trandafir, lalele, garoafe, arbuti ornamentali etc., trdeaz defeciuni majore n procesul de producere a materialului sditor. La speciile floricole i legumicole amintite anterior, de o importan deosebit este producerea materialului sditor total liber de viroze sau liber de principalele boli virotice. De aceea, n plantaiile furnizoare de ramuri altoi (trandafir), butai (garoafe), bulbi (lalele), bulbili (usturoi) etc. se va urmri ca toi indivizii s fie liberi de viroze prin testri i retestri cu testeri ierboi, lemnoi sau serologic. Dei nu se refer direct la structura genetic a cultivarului, prezena unui singur individ virozat sau a unui individ pe care se gsesc afide, reduce n mod drastic valoarea cultivarului respectiv n procesul de producere a materialului sditor iar n unele cazuri o anuleaz complet. De aceea msurile agrotehnice i fitosanitare sunt absolut obligatorii. Amestecurile mecanice sunt greeli grosolane ce pot apare n procesul de producere a materialului sditor horticol. Astfel de amestecuri se pot produce n oricare din fazele procesului de producere a materialului sditor: altoire, plantare, depozitare. Evident, efectele amestecurilor mecanice asupra valorii biologice a soiurilor cu nmulire vegetativ sunt de-a dreptul dramatice, soiul respectiv fiind, practic, compromis prin astfel de greeli de producere a materialului sditor. Pentru evitarea amestecurilor mecanice, se vor lua msuri organizatorice adecvate, n sensul c se va lucra, la un moment dat, doar cu un singur cultivar (deci se va altoi, recolta butai, bulbi, bulbili etc. doar de la un singur soi). De asemenea, pstrarea materialului sditor (stratificare, n pungi, sculei, vrac etc.) se va face extrem de atent prin dubl etichetare, pentru a nu exista nici un dubiu asupra acestuia i a se evita amestecurile mecanice. n plus, cunoaterea de ctre cei ce lucreaz la producerea materialului sditor a unor caractere "tari" ale organelor vegetative pentru nmulirea culturilor, ajut la evitarea producerii unor amestecuri mecanice.
CAPITOLUL III PRINCIPALELE MECANISME GENETICE UTILIZATE N PRODUCEREA DE SEMINE I MATERIAL SDITOR HORTICOL 3.1. Autoincompatibilitatea

n esen, autoincompatibilitatea (autosterilitatea) const n negerminarea grunciorilor de polen cu o anumit structur genetic pe un stigmat cu o structur genetic identic. n funcie de natura aciunii de "inhibare" a germinrii grunciorilor de polen de ctre stigmat, autoincompatibilitatea poate fi: gametofitic i sporofitic. n procesul producerii seminelor la anumite cultivaruri, fenomenele de autoincompatibilitatea pot fi utilizate cu succes. Acest lucru este valabil pentru ambele tipuri de autoincompatibilitatea a cror utilizare, n obinerea de linii consangvinizate i hibrizi comerciali, a devenit n ultima vreme o tendin preponderent la anumite specii horticole cum sunt: salata, lptuca, macul, lalele, varza etc. 20

Schematic, modul de obinere a liniilor consangvinizate i a hibrizilor comerciali, pe baza autoincompatibilitii gametofitice este prezentat n fig. 3.1.1. Fenomenul de pseudocompatibilitate, care permite obinerea de semine din autopolenizrile S1S2 x S1S2 i S3S4 x S3S4, se datorete aciunii unor poligene precum i a unor condiii de mediu speciale. Principial, pseudocompatibilitatea const n realizarea germinrii polenului i fecundrii ovulului de ctre grunciorii de polen cu anumite alele S pe un stigmat ce poart, parial, aceleai alele S (de exemplu, polenul S1 germineaz pe stigmat S1S2). De regul, temperaturile ridicate (32-40C), radiaiile ionizate, unele substane chimice etc. pot favoriza, alturi de aciunea poligenelor amintite anterior, apariia pseudocompatibilitii.
P: Co: BC1 A S1S2 S1S1; S1S2; S1S2; S2S2 x A(S1S2) Izolarea homozigoilor Identificarea homozigoilor S1S1 x S2S2 linii consangvinizate S1S2 fr castrare B autopolenizare pe baz de pseudocompatibilitate S3S4 S3S3; S3S4; S3S4; S4S4 x B(S3S4) Izolarea homozigoilor Identificarea homozigoilor S3S3 x S4S4 S3S4

x
Hibrid comercial simplu S1S3; S1S4; S2S3; S2S4

Meninerea liniilor parentale se execut prin ncruciri SIB, bazate pe pseudocompatibilitate urmate de izolarea i identificarea homozigoilor

Fig. 3.1.1. Utilizarea autoincompatibilitii gametofitice n obinerea de hibrizi simpli comerciali (dup Taylor, 1985) Izolarea genotipurilor homozigote este posibil prin retroncruciarea fiecrui genotip obinut n urma autopolenizrii cu forma parental utilizat ca tat:
S1S1 S2S2 S1S2

x x x

S1S2 S1S2 S1S2

rezult semine rezult semine nu rezult semine

Dup izolarea genotipurilor homozigote, prin interncruciri dialele se determin exact tipul de homozigoie a fiecrei descendene:
S1S1 S2S2 S1S1 S2S2

x x x x

S1S1 S2S2 S2S2 S1S1

nu rezult semine nu rezult semine rezult semine rezult semine

21

O schem asemntoare poate fi realizat pentru utilizarea autoincompatibilitii gametofitice n obinerea hibrizilor dubli comerciali. Schema este aplicabil, cu precdere, acelor specii la care exist i posibilitatea nmulirii vegetative sau la care au fost puse la punct metode eficiente de micromultiplicare. Autoincompatibilitatea sporofitic este caracteristic unor specii legumicole i floricole (varz, ridiche, primula) i poate fi, relativ uor, folosit n procesul de creare a liniilor consangvinizate materne autoincompatibile n vederea folosirii acestora n producerea seminei comerciale hibride. La varz, deocamdat, acest mecanism este cel mai larg implicat n producerea hibrizilor comerciali. Spre deosebire de incompatibilitatea gametofitic, cea sporofitic duce la negerminarea polenului cu un anumit genotip pe un stigmat de un anumit genotip nu numai datorit genelor S ci i datorit genotipului sporofitului care induce autoincompatibilitatea. Deci, un stigmat cu genotipul ttss poate fi fecundat numai de polen ts provenit de la homozigoi recesivi pentru cei doi loci (tt ss). Dac polenul provine de la heterozigoi (Ts Ss; Tt ss) prezena alelei T la sporifit induce incompatibilitatea polenului chiar cnd el are genotipul ts. ntruct alela t este obligatorie n aceast stare, putem discuta acest tip de incompatibilitate doar prin prisma alelelor s. De regul, acest locus este polialelic, genotipurile homozigote (S1S1; S2S2 etc.) fiind total autoincompatibile. n procesul de creere a liniilor consangvinizate la varz, alele S ale acestui sistem se pot homozigota nc dup prima generaie de autopolenizare forat (C1) mpiedicnd consangvinizarea n continuare i meninerea liniei. Pentru a depi acest neajuns se aplic unele tehnici speciale care s permit, totui, executarea autopolenizrilor, i anume: a) Autopolenizarea n stadiu de buton floral are mari anse de reuit, n special la varz, specie la care mecanismul de incompatibilitate sporofitic devine operant doar n momentul deschiderii florilor. b) ndeprtarea stigmatului este o tehnic aplicat tot la varz. Autopolenizarea fragmentului de stil rmas dup ndeprtarea stigmatului duce la obinerea unui numr mic de semine. c) Modificarea mediului imediat al organelor reproductive. La varz i la primula, o atmosfer bogat n CO2 nsoit de temperaturi ridicate ale aerului pot favoriza autofecundarea plantelor autoincompatibile sporofitic.
3.2. Androsterilitatea

Spre deosebire de autoincompatibilitate, este definit ca incapacitatea unor plante de a produce gamei masculi funcionali. Ca i autoincompatibilitatea, i androsterilitatea poate fi folosit cu succes n obinerea hibrizilor comerciali simpli i dubli, fcnd inutile operaiunile de castrare a formelor materne (linii consangvinizate, hibrizi simpli). Dup cum se tie, n funcie de determinismul su genetic, androsterilitatea poate fi: nuclear (genic), citoplasmatic i genic-citoplasmatic. Folosirea, n producerea hibrizilor comerciali, a androsterilitii nucleare este destul de limitat tocmai datorit unor dificulti ce apar n cadrul acestui proces. Androsterilitatea nuclear este determinat exclusiv genic, de regul de o singur pereche de alele n stare recesiv (rr). Meninerea unei linii consangvinizate, androsteril genic, nu este posibil dect fie prin nmulire vegetativ, fie prin ncruciare continu cu o linie analoag androfertil heterozigot pentru gena respectiv.
A rr x A Rr

50 % A Rr 50% A rr + plante androferti le plante androsteri le

22

Rezult c atunci cnd o astfel de linie este folosit ca form matern este necesar eliminarea, din cadrul liniei, nainte de nflorit, a plantelor androfertile. Acest lucru este posibil numai dac androfertilitatea este linkat strns cu un caracter fenotipic uor vizibil n faza de plantul (marker genetic). La tomate unde utilizarea acestui tip de androsterilitate n obinerea hibrizilor comerciali a fost destul de rspndit pn nu demult, markerul genetic l constituia culoarea antocianat a plantelor a plantelor tinere. Dificultatea metodei const n faptul c, indiferent ct de strns ar fi nlnuite cele dou gene, crossing-over-ele pot face s apar plante nemarcate fenotipic i androfertile. Astfel, dac pentru exemplificare se reia ncruciarea anterioar, n descenden ar trebui s se obin 50% plante androfertile, antocianate, i 50% plante androsterile, verzi.
ra A ra androsteril verde

RA A ra androfertil antocianat

RA A ra androfertil antocianat 50%

ra A ra androsteril verde 50%

Cu toate acestea, chiar dac se elimin din linia mam toate plantele antocianate, nu exist certitudinea c n linia respectiv rmn doar plante androsterile (verzi) ce nu mai trebuie castrate. Aceasta, deoarece n urma crossing-over-ului, de la plantele RA/ra pot rezulta urmtorii gamei recombinai:
R a ----------X------r A

R a i r A

Deci, n linia androsteril, meninut prin ncruciare cu analogul androfertil heterozigot, datorit participrii unor gamei recombinai (Ra i rA), pot apare: A(ra/Ra)=antocianat, androfertil A(ra/ra)=verde, androsteril A(ra/rA)=antocianat, androsteril A(ra/Ra)=verde, androfertil

A (ra/ra) x A (Ra/ra) androsteril androfertil verde antocianat

Dac genotipurile ra/rA sunt eliminate nc din faza de plantul fiind considerate androfertile datorit culorii antocianice a plantelor, genotipurile ra/Ra au culoarea verde, iar la maturitate vor fi androfertile, ceea ce diminueaz sau chiar anualeaz complet valoarea liniei ca form matern pentru obinerea hibrizilor comerciali. Acesta este de fapt principalul motiv pentru care androsterilitatea genic este puin folosit n obinerea i producerea hibrizilor comerciali simpli i dubli. Androsterilitatea citoplasmatic este determinat exclusiv de factori ereditari extranucleari i se transmite predominant pe linie matern. Liniile androsterile citoplasmatice pot fi meninute prin ncruciarea continu cu omologi androfertili nerestauratori: A
S

Acest tip de androsterilitate poate fi utilizat n crearea i producerea hibrizilor comerciali la anumite plante legumicole la care producia este reprezentat de bulbi, rdcini, cpni, tulpini ngroate (ceap, morcovi, varz, gulii), specii la care androsterilitatea 23

hibrizilor nu are nici un fel de importan, deoarece, oricum acetia nu trebuie s produc smn. La speciile la care producia este reprezentat de fructe sau semine (ex. tomate, ardei), acest tip de androsterilitate poate fi folosit n producerea seminei comerciale hibride cu condiia ca, smna hibrid obinut s fie amestecat omogen cu o cantitate egal de smn obinut prin ncruciarea liniilor analoage androfertile ale hibridului respectiv, ncruciare realizat ntr-un cmp separat prin castrarea manual a liniei materne. Schematic procesul s-ar prezenta astfel: A
S

xB x B

F F

F1 AB S F1 AB F androfertil

A F castrare

amestec omogen 50%+50%, plantele AB F furniznd polen pentru ntreg lanul

Androsterilitatea nucleo-citoplasmatic este determinat att de factori ereditari nucleari ct i de plasmagene. Interaciunea celor dou tipuri factori ereditari se exprim prin faptul c alela dominant a genei R induce n mod automat fertilitatea citoplasmatic. Deci, genotipurile RR i Rr vor avea ntotdeauna citoplasm fertil F, fiind androfertile (restauratoare). Genotipurile rr pot avea att citoplasm fertil ( F rr ), caz n care sunt androfertile nerestauratoare, ct i citoplasm steril ( S rr ), caz n care sunt androsterile. Meninerea unei linii androsterile de acest fel se face prin ncruciarea ei continu cu o linie analoag androfertil, nerestauratoare:

rr

rr

A S rr (androsteril)

Detalii privind modul de utilizare a acestui tip de androsterilitate n producerea seminei hibride comerciale la diferite specii horticole se gsesc n subcapitolul Producerea seminei comerciale hibride la speciile horticole alogame.
3.3. Haploidia

Este fenomenul de apariie a unor plante care au, n celulele somatice (2n) un numr gametic de cromozomi (n). Fenomenul este astzi destul de larg utilizat n obinerea rapid de linii consangvinizate la unele specii agricole (porumb, sorg) n vederea crerii hibrizilor comerciali simpli i dubli. Principial, metodologia de obinerea a acestor linii perfect homozigote ar putea fi valabil i pentru speciile horticole alogame la care se cultiv hibrizi comerciali (ceap, varz, morcov etc.) i ea ar cuprinde urmtoarele faze: - obinerea monoploizilor (haploizilor adevrai) prin selecie n mutante naturale, mutante induse sau, mai nou, prin culturi de antere, ovule, grunciori de polen; - diploidizarea monoploizilor i obinerea liniilor dihaploide, perfect homozigote; - testarea capacitii generale i specifice de combinare a liniilor valoroase sub aspect fenotipic; - producerea seminei liniilor parentale (izolat n spaiu sau prin ncruciri SIB controlate); - producerea seminei comerciale hibride n loturile de hibridare. Etapele amintite anterior se pot realiza n 4-5 ani la speciile horticole anuale i n 7-9 ani la cele bienale. Procedeul clasic de obinere a liniilor consangvinizate, de testare a acestora i de realizare a hibrizilor comerciali dureaz 7-9 ani la speciile anuale i 11-13 ani la 24

cele bienale. Se poate lesne observa c utilizarea haploidiei n producerea de linii consangvinizate i hibrizi comerciali aduce cel puin dou avantaje notabile: - obinerea de linii perfect homozigote; - scurtarea considerabil a timpului de obinere a liniilor i hibrizilor comerciali. Cercetri recente efectuate la porumb (SAAD, ML, 1990) relev faptul, c cel puin la aceast specie, homozigoia perfect a liniilor dihaploide duce la o mai redus capacitate de adaptare a acestora i la scderea capacitii generale i specifice de combinare. Autorul conchide c, prezena n liniile parentale ale unui hibrid comercial a unei anumite proporii de heterozigoie rezidual asigur hibridului o mai mare plasticitate ecologic i performane superioare.
3.4. nmulirea celular i meristematic i importana lor n producerea de semine i material sditor horticol

nmulirea vegetativ in vitro este o metod care cunoate n ultimul timp, la plantele horticole, o utilizare de-a dreptul spectaculoas. La majoritatea speciilor horticole, prin cultura in vitro de celule i esuturi se obine, fr mari dificulti, calus din care, prin difereniere, pot fi regenerate plante ntregi. Fr a intra n amnunte tehnice (ele sunt, de fapt, obiectul de studiu al disciplinei de Micropropagri) vom arta c, dintre plantele horticole, cele ornamentale au fost primele la care s-au aplicat aceste cuceriri ale biologiei moderne ele rmnnd, i n continuare, principalul beneficiar al tehnicilor de micropropagare. ntr-un timp relativ scurt (10-15 ani), tehnicile de micropropagare au nceput s fie intens utilizate i la alte specii horticole neornamentale (cpun, legume, via de vie) precum i multe alte specii agricole. La speciile horticole ce se nmulesc prin semine, tehnicile de micropropagare, sub forma embrioculturii sau a culturii in vitro de celule i esuturi, se folosesc pentru realizarea urmtoarelor obiective ale producerii de semine:
3.4.1. nvingerea strii de laten a seminei. Starea de laten a seminelor se exteriorizeaz prin incapacitatea embrionului de a crete. Aceast incapacitate este determinat la speciile horticole, att de factori genetici ct i de interaciunea acestora cu anumite condiii de mediu (temperatur, lumin, concentraia n inhibitori endogeni etc.). La unele specii ornamentale, cum este Iris (I. pseudocorus, I. germanica), perioada de laten a seminelor dureaz civa ani ceea ce complic mult procesul de producere a seminelor din cultivarurile acestor specii. Cu ajutorul culturii de embrioni, n mai puin de un an, se obin plante, flori i smn. Experienele efectuate au dovedit c la specia Iris starea de laten este indus de prezena, n endospermul seminei, a unor inhibitori endogeni. Cultura de embrioni evit aciunea acestor inhibitori permind o nmulire rapid prin semine a speciei respective. Cultura de embrioni de semine de salat (Lactuca sativa), n condiii de ntuneric i n soluia osmotic de manitol, favorizeaz germinaia embrionilor. La aceast specie starea de laten a seminelor este indus de condiiile de lumin. Cultura de embrioni poate fi, de asemenea, unica soluie n obinerea de plante din semine care, din anumite motive, nu au ajuns s se maturizeze sau, chiar dac s-au maturizat, cu o extrem de slab capacitate de germinare. 3.4.2. nlturarea fenomenelor legate de sterilitatea triploizilor Embriocultura are o aplicabilitate larg la realizarea nmulirii prin semine a unor cultivaruri triploide, cunoscute ca sterile. De exemplu, marea majoritate a cultivarurilor actuale de bananier (Musa balbisiana) sunt triploide, fructele lor neavnd semine ci doar

25

cteva rudimente de semine care pot fi consumate odat cu pulpa fructului. Din aceste motive, cultivarurile respective se nmuleau, pn nu de mult, exclusiv pe cale vegetativ. COX (1969) a fost primul care a artat c, rudimentele de semine ale cultivarurilor triploide de bananier conin ambrioni viabili. Cultura pe medii nutritive adecvate a acestor embrioni permite nmulirea rapid, prin semine, a cultivarurilor respective. Metoda se aplic cu succes i n nmulirea masiv, prin semine, a unor specii horticole ornamentale triploide (Colocasia aesculentum, C. antiquorum) la care, pn nu demult, nmulirea era exclusiv vegetativ.
3.4.3. Testarea viabilitii seminelor. La pomii fructiferi, portaltoii generativi sunt o categorie de cultivaruri ce se obin exclusiv din smn. Foarte adesea este necesar s se cunoasc dinainte viabilitatea seminelor ce urmeaz a fi semnate n pepinier pentru a se putea afecta suprafeele de teren necesare producerii unui anumit numr de portaltoi. Cultura embrionilor imaturi, prelevai din semine ale plantelor mam alese la ntmplare, d informaii destul de precise asupra viabilitii seminelor (smburilor) cu cteva sptmni nainte de recoltarea i condiionarea acestora, facilitnd planificarea din timp a unor suprafee de teren adecvate i a unui volum de lucrri corespunztor. 3.4.4. Obinerea liniilor izogene. La speciile horticole la care cultivarurile sunt reprezentate prin hibrizi comerciali, obinerea unor linii cu un nalt grad de homozigoie i ntr-un timp ct mai scurt constituie obiective de cea mai mare nsemntate. Prin cultura in vitro de antere i microspori (grunciori de polen, ovule) a fost posibil obinerea de plante haploide care, prin dublarea numrului de cromozomi genereaz linii izogene, pure genetic. Liniile izogene de cromozomi sunt reprezentate prin populatii omogene n care toi indivizii au aceeai constituie genetic homozigot. Prin mijloacele ingineriei genetice, obinerea liniilor izogene este posibil n numai dou generaii n timp ce prin clasica metod a consangvinizrii ar fi fost necesare cel puin 6-8 generaii de autopolenizare forat. Meninerea liniilor izogene dihaploide poate fi uor realizat prin nmulire izolat n spaiu sau prin autopolenizarea forat a plantelor i evitarea total a infuziei de gene strine. La speciile horticole ce se nmulesc vegetativ, tehnicile de micropropagare au fost i sunt folosite i n prezent pentru realizarea urmtoarelor obiective: 3.4.5. nmulirea rapid a unor cultivaruri i specii. La plantele horticole, i cu precdere la cele ornamentale, exist multe specii care, dei se nmulesc vegetativ, procesul este dificil i de lung durat. Un exemplu clasic n acest domeniu este specia Cymbidium la care nmulirea prin pseudobulbi este destul de anevoioas i de lung durat. Folosind ca explanturi mugurii verzi de pe bulbii acestei specii se poate realiza, prin culturi in vitro o sporire considerabil a vitezei i ratei de nmulire la aceast specie. Chiar i la unele specii la care nmulirea vegetativ clasic este rapid i eficient sub aspectul ratei de multiplicare, culturile in vitro de esuturi i celule au provocat adevrate revoluii. Un exemplu n acest sens l constituie garoafele i crizantemele la care nmulirea prin butai este rapid i eficient. i totui, n ultima vreme, tehnicile de micropropagare ctig tot mai mult teren n nmulirea acestor specii mai ales datorit costului extrem de sczut de obinere a materialului sditor i ratei de multiplicare extrem de ridicat (1:100 fa de 1:4-5). 3.4.6. Obinerea de plante libere de viroze. Cultura in vitro de meristeme este una din cile care asigur obinerea, la scar industrial, a unor plante libere de viroze. Acest obiectiv este extrem de important mai ales la unele specii ornamentale (flori, arbuti ornamentali) la

26

care categoriile biologice superioare trebuie s fie total libere de boli virotice sau libere de principalele boli virotice. Noiunea de liber de viroze este utilizat aici n sens limitat, numai pentru virusurile pentru care planta este testat deoarece pe aceeai plant pot exista i alte virusuri, neidentificate. Principial, cultura in vitro de meristeme asigur obinerea unor plante libere de viroze datorit faptului c viteza de diviziune a meristemelor (viteza de producere a mitozelor) este adesea mai mare dect aceea de multiplicare a virusului. De aici rezult ca poriunile mici i foarte mici, prelevate din vrful meristemelor, au cele mai mari anse de a fi libere de viroze. Tratamentele termice i chimice aplicate plantei care va furniza meristemele necesare culturilor in vitro pot i ele s reduc procentul de explante afectate de virusuri. Aceast metod a ctigat, n ultima vreme tot mai mult teren, mai ales la acele specii la care prezena virusurilor constituie principalul factor limitativ att n producerea materialului sditor ct i n plantaiile de producie. Principala modalitate de verificare a prezenei virusurilor o constituie testul ELIZA (Enzyme Imuno Sorbent Assay) sau dozajul imunoenzimatic. Astfel, la cartof, prin prelevare de explanturi cu dimensiuni mai mici de 0,1 mm, 99% din plantele obinute sunt libere de toate virozele (KASSANIS i VARMA, 1967). n ultima vreme, cultura de meristeme la cartof se utilizeaz att pentru obinerea de plante libere de viroze ct i ca mijloc de stocare i distribuire, sub form clonal, a germoplasmei valoroase (ROCA, 1978). La cpun, cultura de meristeme pentru obinerea de plante libere de viroze se aplic nc din anul 1963 (MILLER). n momentul de fa, multiplicarea industrial i obinerea de plante libere de viroze, la cpun, se realizeaz prin culturi in vitro pe mediu bazal a unor meristeme prelevate de la plante ce au fost supuse unor tratamente termice de devirozare. n experienele lui LULLIN (1974), folosirea unor explanturi prelevate de la plante bolnave (virozate), netratate termic, a dus la obinerea a numai 28% din plantule perfect sntoase. Din aceste motive, retestarea plantulelor de cpun, obinute prin nmulire meristematic in vitro, privind absena bolilor virotice este absolut obligatorie. Tehnici asemnatoare de obinere a unui material sditor liber de viroze se aplic, n ultima vreme, la multe specii ornamentale afectate de astfel de boli, cum sunt cele din genurile: Dianthus, Chrysantemum, Fresia, Gladiolus etc. ncercri merituoase se fac, n ultimii ani, privind folosirea acestei metode de obinere a materialului sditor liber de viroze la pomii fructiferi. Experienele n curs de desfurare la ICDP Piteti, SCDP Cluj-Napoca, SCDP Bistria sunt ncurajatoare n acest sens i au ca principal scop extinderea metodei de deinere a materialului sditor liber de viroze cu ajutorul culturilor in vitro de meristeme urmate de micropropagarea i la alte specii horticole de interes economic major.

27

CAPITOLUL IV Metodologia producerii de semine i material sditor horticol 4.1. Metodologia producerii de semine la cultivarurile speciilor horticole autogame

Speciile horticole autogame, care se nmulesc prin semine, sunt n marea lor majoritate plante anuale (mazrea de grdin, fasolea pentru psti, tomatele, vinetele, castraveii, salata, ardeiul, dovlecelul) i doar foarte puin din acestea sunt bienale sau perene (unele specii ornamentale cum sunt: zarzrul, mlinul japonez etc.) La speciile horticole autogame, n momentul de fa exist patru categorii mari de cultivaruri la care este necesar cunoaterea metodologiei de producere a seminelor, i anume: soiuri omogene, soiuri polimorfe (neomogene), linii pure parentale componente ale hibrizilor comerciali i hibrizi comerciali. Baza teoretic a metodologiei de producere a seminelor la cultivarurile speciilor horticole autogame o constituie selecia conservativ care este o combinaie ntre selecia individual i selecia n mas. Spre deosebire de cazul cnd aceste metode sunt folosite n ameliorare, varianta conservativ a seleciei, folosit n producerea de semine, are menirea s pstreze nealterat structura genetic a cultivarurilor atta timp ct acestea sunt raionate n producie. Pornind de la acest obiectiv central, schemele metodologice elaborate pentru producerea seminelor la diferitele tipuri de cultivaruri horticole autogame sunt destul de asemntoare, diferenele dintre ele referindu-se cu precdere la prelungirea sau scurtarea procesului de selecie conservativ n vederea meninerii nealterat a structurii genetice a fiecrui tip de cultivar n parte.
4.1.1. Metodologia producerii de semine la soiurile omogene de plante horticole autogame

Soiurile omogene de plante horticole autogame cuprind un numr mic i foarte mic de biotipuri homozigote care-i pstreaz, n procesul reproducerii sexuate, un nalt grad de independen. Selecia conservativ aplicat n vederea producerii seminelor la acest tip de soiuri cuprinde urmtoarele verigi (cmpuri): a) Cmpul de alegere a elitelor; b) Cmpul de selecie a liniilor; c) Cmpul de producere a seminei Prebaz; d) Cmpul de producere a seminei Baz. Aceste verigi sunt absolut obligatorii pentru toate soiurile omogene de plante horticole autogame i presupun livrarea ctre fermele de producia a seminei Baz. n cazul cnd cantitatea de smn Baz produs nu satisface necesitile unitilor de producia se mai adaug una sau dou verigi de selecie i nmulire, astfel (v. fig. 4.1.1.1.): e) Producerea seminei Certificat I (C1); f) Producerea seminei Certificat II (C2). Cmpul de alegere servete, aa cum se poate bnui din denumire, la identificarea i extragerea elitelor n vederea iniierii procesului de selecie conservativ. Ca verig distinct a procesului de producere de smn, cmpul de alegere se constituie numai pentru soiurile noi, recent omologate i raionate, la care ntreaga producere de smn trebuie organizat de la nceput. La soiurile mai vechi, raionate, la care exist n diferite uniti toate verigile procesului de producere a seminelor, cmpul de alegere nu se mai constituie ca o verig distinct, funciile lui fiind preluate de cmpul de Prebaz n care alturi de producerea 28

seminei Prebaz, se execut i alegerea elitelor n vederea continurii procesului (v. fig. 4.1.1.1.). Pentru a permite o observare i alegere ct mai judicioas a plantelor, cmpul de alegere se seamn/planteaz la distane ceva mai mari dect culturile de producie. Aceasta este valabil, n principal, pentru acele specii i soiuri la care semnatul se face n rnduri dese (mazre, salat). Pentru o bun individualizare a plantelor se obinuiete ca, la aceste specii, semnarea cmpului de alegere s se fac n cuiburi distanate de 40/30 cm. Atunci cnd cmpul de alegere este reprezentat de cmpul de Prebaz, semnarea/plantarea acestuia se va face n conformitate cu normele specifice cmpului respectiv. Criteriile generale de alegere a elitelor sunt: tipicitatea, vigoarea plantelor, starea lor de sntate, gradul de ncrcare cu elemente de productivitate. Alegerea n cmp a elitelor se face pe baza observaiilor vizuale i continu n laborator pe baza unor msurtori i teste ct mai simple i mai expeditive. Smna fiecrei plante elit reinute se extrage, condiioneaz i pstreaz separat, n pungi de hrtie etichetate i n condiii ct mai adecvate care s nu i deterioreze facultatea germinativ. Numrul elitelor extrase va fi suficient de mare pentru a se evita apariia fenomenelor de drift genetic dar, n acelai timp, suficient de mic pentru a nu favoriza alegerea de elite netipice, nevaloroase. Alegerea elitelor se va face din ct mai multe puncte ale cmpului de alegere (20-30 de puncte) n fenofaze n care plantele exteriorizeaz n modul cel mai pregnant caracteristicile lor morfologice, fiziologice i de productivitate specifice soiului. Foarte adesea, la unele specii horticole autogame (tomate, ardei, castravei) nu se rein toate fructele de pe planta elit n vederea extragerii seminelor ci doar o parte din acestea, pe baza unor criterii particulare fiecrei specie. Cmpul de selecie a liniilor are menirea de a permite studiul valorii genetice a fiecrei elite pe baza comportrii descendentelor acestora (liniilor). n acest scop, cmpul de selecie va cuprinde n microparcele separate descendenele seminale ale tuturor elitelor reinute din ampul de alegere. Modul de nsmnare/plantare a cmpului de selecie difer de la o specie la alta dar, n general, aceasta se face n rnduri unice, lungi (3-20 m) i mai rar n microparcele de form dreptunghiular sau ptrat care s cuprind mai multe rnduri de plante. De regul lungimea rndului unic sau mrimea microparcelei ocupat de fiecare linie rezult din recomandrile fcute de ICDLF Vidra privind numrul minim de plante pe care trebuie s-l cuprind fiecare linie n cmpul de selecie. Selecia, n cmpul de selecie a liniilor, este interlinial, pe baza observaiilor vizuale i a unor msurtori i teste foarte simple de laborator. Observaiile vizuale vor fi efectuate n tot cursul perioadei de vegetaie n fenofazele n care plantele exteriorizeaz cel mai evident caracteristicile lor de soi. Criteriile generale de apreciere a liniilor sunt: uniformitatea, tipicitatea, starea de sntate a plantelor, vigoarea acestora, gradul de evideniere a elementelor de productivitate. Liniile care corespund acestor criterii se rein i se mai analizeaz nc odat n laborator n privina anumitor caracteristici cantitative i calitative ale plantelor, seminelor etc. dup care smna fiecrei linii este extras i condiionat, iar apoi amestecat cu smna celorlalte linii reinute. Amestecul de smn obinut prin unirea seminelor liniilor reinute constituie, n cadrul acestei scheme metodologice, smna Prebaz I (PB I) a soiului respectiv. Numrul descendenelor reinute n cadrul cmpului de selecie depinde direct de necesitile de extindere a soiului respectiv n producie. Nu de puine ori, n anii cu condiii foarte favorabile anumitor specii i soiuri, se prefer reinerea unui numr mare i foarte mare de descendene tipice, valoroase, cu mult peste necesitile de nmulire anual a soiului respectiv. Aceast deviere de la schem permite ca 2-3 ani consecutivi, eventual nefavorabili speciei/soiului la care se produce smn, s nu se mai organizeze cmpul de selecie a liniilor utilizndu-se n anii respectivi, n vederea constituirii seminei Prebaz I, smna 29

liniilor valoroase alese n anii foarte favorabili i reinut n rezerv. Dincolo de aceste avantaje strict organizatorice este demn de reinut faptul c, pe msur ce crete numrul de alegeri de elite i linii cresc i posibilitile de alterare a structurii genetice a unui soi. Din aceste motive, din punct de vedere metodologic, este recomandabil ca n perioada ct un soi se afl raionat n cultur (10-15 ani) s nu se fac mai mult de 3-5 extrageri de elite i selecii de descendente (linii). Dei n cmpul de selecie al liniilor selecia este, din punct de vedere metodologic, exclusiv interlineal totui nu se va omite aplicarea unei selecii intralineale atunci cnd este necesar. n liniile reinute ca tipice i valoroase vor putea fi eliminai eventualii indivizi cu vtmri mecanice produse de animale, atelaje sau maini, precum i cei la care numrul de fructe este extrem de mic, nereprezentativ, datorit aciunilor duntoare ale animalelor sau oamenilor. Cmpul de producere a Prebaz II (PB II) se nsmneaz cu smna Prebaz I. La speciile la care cultura se realizeaz prin rsad, cmpul de producere a Prebazei II se va planta cu rsad produs din smna Prebaz I. Semnatul/plantatul cmpului de producere a seminei Prebaz II se face diferit, n funcie de specie. La soiurile plantelor horticole autogame la care cultura de producie se realizeaz n rnduri dese (mazre, salat), cmpul de producere a Prebazei II se seamn/planteaz tot n rnduri dese ns n benzi late de 1,5-2,0 m, desprite prin drumuri de 0,4-0,6 m lime care s permit efectuarea purificrilor biologice. La speciile horticole autogame care se seamn/planteaz n rnduri rare (tomate, ardei, vinete) cmpul de producere a seminei Prebaz se va nfiina dup aceeai tehnic de semnat/plantat ca i cmpurile de producie. ncepnd cu aceast verig a procesului de producere de smn la soiurile autogame omogene, selecia individual este nlocuit cu selecia n mas negativ, efectuat sub forma purificrilor biologice. Numrul i momentul executrii acestor purificri biologice este indicat, pentru fiecare specie n parte, n metodologia de control, n cmp, a culturilor pentru producerea seminelor i materialului sditor. Aceeai metodologie indic i tipul de plante ce vor fi eliminate din lan cu ocazia purificrilor biologice dar, principial, se admite c aceste selecii n mas negative trebuie s duc la eliminarea din cmpul de producere a seminei Prebaz a tuturor plantelor strine soiului/speciei, netipice acestuia sub aspect morfologic, fiziologic i productiv, puternic atacate de boli sau duntori, cu serioase vtmri mecanice produse de animale, atelaje, maini sau oameni. Normele tehnice privind puritatea biologic a cmpurilor de producere a seminelor Prebaz la soiurile plantelor autogame prevd valori ridicate, cuprinse ntre 98-100% ceea ce accentueaz nc odat importana efecturii corecte i la timp a purificrilor biologice. La soiurile omogene de plante autogame, cmpul de producere a seminei Prebaz poate fi folosit, din momentul nfiinrii sale, i n calitate de cmp de alegere a elitelor conform schemei din figura 4.1.1.1. Avantajul unei astfel de metodologii rezid att n faptul c, organizatoric, se evit semnarea/plantarea unui cmp de alegere separat ct i n sigurana existenei, n cmpul de producere a Prebazei, a unei proporii foarte ridicate de plante tipice soiului, valoroase n care extragerea de elite se poate face cu eficien economic i biologic maxim. Recoltarea plantelor rmase dup purificrile biologice n cmpul de producerea Prebazei se face manual sau mecanic, n funcie de specie, n amestec. Smna extras i condiionat de la aceste plante va fi folosit la nfiinarea cmpului de producere a seminei Baz. Cmpul de producere a seminei Baz (B) se seamn/planteaz cu smna sau rsadul provenit din smna Prebaz. La majoritatea soiurilor speciilor horticole autogame, desimea de semnat/plantat, n acest cmp, este cea recomandat pentru culturile de producie. La 30

speciile cultivate n rnduri dese (mazre, salat) se poate practica i n aceast verig semnatul/plantatul n benzi delimitate de drumuri despritoare care s uureze accesul oamenilor pentru efectuarea purificrilor biologice. Acestea se execut n aceleai fenofaze i pentru aceleai impurificri ca i n cazul cmpului de producere a seminei Prebaz. Trebuie remarcat faptul c, n vederea certificrii seminei Baz, puritatea biologic a lanului, la soiurile speciilor autogame trebuie s fie identic cu cea a cmpului de producere a seminei Prebaz (98-100%). Plantele sau fructele plantelor din cmpul de Baz se recolteaz n amestec, smna extras i condiionat fiind distribuit n unitile de producie. n cazul cnd smna Baz produs nu este suficient pentru satisfacerea cerinelor unitilor de producie, procesul de selecie i nmulire poate continua cu urmtoarele verigi: Cmpul de producere a seminei Certificat I (C1), se seamn/planteaz cu smna sau rsadul provenit din smna Baz. Distana ntre rnduri i desimea plantelor la unitatea de suprafa sunt identice n aceast verig cu cele practicate n cultura pentru consum a soiurilor respective. Purificrile biologice sunt operaiuni obligatorii i n cmpul de producere a seminei Certificat I deoarece normele tehnice prevd bareme ridicate de puritate a lanului n vederea certificrii, dar mai sczute dect n cmpurile de producere a seminei Prebaz i Baz (94-98%). Recoltarea plantelor sau a fructelor plantelor din cmpul de producere a seminei C1 se face n amestec, smna extras i condiionat urmnd a fi distribuit unitilor de producie i/sau s serveasc cmpului de producere a seminei C2. Cmpul de producere a seminei Certificat II (C2) se nfiineaz cu smn/rsad provenit din smna C1. Distana de semnat i desimea plantelor la unitatea de suprafa sunt cele recomandate pentru culturile de consum la soiurile respective. Purificrile biologice continu i n aceast verig cu numrul i condiiile indicate pentru cmpurile PB II, B i C1, deoarece indicii de puritate biologic a lanului trebuie s fie cuprini, n cmpul de producere a seminei C2, ntre 90-96%, n funcie de specie. Smna obinut n cmpul C2 este condiionat i livrat unitilor de producie. Ea nu va fi folosit pentru nmulire dect n cazuri excepionale i doar cu avizul Ministerului Agriculturii, Pdurilor i Dezvoltrii Rurale.
4.1.2. Metodologia producerii de semine la soiurile polimorfe de plante horticole autogame

Soiurile polimorfe de plante horticole autogame cuprind un numr mare de biotipuri homozigote aflate ntr-o anumit proporie n populaia soiului, proporie ce reprezint nsi structura genetic a soiului respectiv i care trebuie meninut nealterat de-a lungul procesului de producere de smn. n acest scop, schema metodologic aplicat n producerea seminelor la soiurile polimorfe ale speciilor autogame cuprinde o verig suplimentar de selecie i nmulire comparativ cu schema aplicat soiurilor omogene. Aceasta tocmai pentru a face posibil perpetuarea soiului prin totalitatea biotipurilor sale cele mai valoroase sub toate aspectele: morfologic, fiziologic, al productivitii i calitii produciei (v. fig. 4.1.2.1.). Pn la nivelul cmpului de selecie a liniilor cele dou scheme metodologice sunt identice. n schema aplicat producerii de smn la soiurile polimorfe ale speciilor horticole autogame smna celor mai bune linii nu se amestec pentru a forma categoria de smn PB I, ci se continu selecia individual interlineal ntr-o verig suplimentar denumit cmp de control. Cmpul de control cuprinde cele mai valoroase linii reinute din cmpul de selecie a liniilor pe baza observaiilor vizuale i a testelor simple de laborator. n acest cmp fiecare linie va ocupa o microparcel ale crei dimensiuni vor fi corespunztoare pentru a putea cuprinde un anumit numr de plante indicat pentru aceast verig de ctre ICDLF Vidra. n 31

timpul perioadei de vegetaie liniile vor fi analizate vizual, iar la recoltare, datorit parcelelor mai mari ocupate de fiecare linie, se va aprecie i capacitatea de producie a acestora precum i principalii indici de calitate ai produciei. Semnarea/plantarea cmpului de control se face, de regul, n rnduri rare pentru toate speciile autogame pentru a se putea efectua observaii vizuale amnunite asupra tuturor plantelor liniei. Selecia, n aceast verig, este n continuare interlineal, reinndu-se n final doar acele linii care s-au remarcat prin tipicitate, vigoarea plantelor, stare de sntate i printro ridicat capacitate de producie dublat de o calitate corespunztoare a acesteia. Plantele/fructele liniilor reinute n cmpul de control se recolteaz/condiioneaz n amestec obinndu-se smna din categoria biologic PB I. n continuare procesul de producere a seminelor la soiurile polimorfe ale speciilor horticole autogame cuprinde aceleai verigi cu aceleai caracteristici ca i cele descrise detaliat la soiurile omogene.
4.1.3. Metodologia producerii de semine la liniile parentale ale hibrizilor comerciali de plante horticole autogame

Formele parentale ale hibrizilor comerciali de plante horticole autogame (tomate, ardei, vinete) sunt, cel mai adesea linii pure prin combinarea crora rezult hibrizi ce manifest fenomenul de heterozis. Producerea seminei la aceste linii pure forme parentale nu se deosebete, metodologic, de ceea ce s-a prezentat la soiurile omogene de plante horticole autogame (v. subcap. 4.1.1.). Cum ns o linie pur este format dintr-un singur biotip homozigot, selecia individual n vederea nmulirii acesteia este simplificat: o dat creat linia nu mai este necesar s se treac prin toate verigile iniiale (cmp alegere, cmp selecie, Prebaz I) ci linia este nmulit (meninut), izolat n spaiu, direct n cmpul de Prebaz n care, prin purificri biologice se elimin orice plant care se abate de la caracteristicile fenotipice ale liniei respective. Smna obinut n acest cmp servete la semnarea sau plantarea cmpului de hibridare n vederea obinerii seminei comerciale precum i la perpetuarea liniei prin cele mai viguroase, sntoase i mai productive plante ale sale. n cazul n care, datorit unor impurificri mecanice sau a infuziei de gene strine, n cmpul de nmulire a liniei se observ abateri mari i frecvente de la tipul acesteia, smna cmpului respectiv se elimin n ntregime, iar pentru producerea liniei se revine la rezerva de smn produs i nmulit de creatorul liniei. Fac excepie de la metodologia expus anterior liniile pure androsterile folosite ca forme parentale materne n producerea hibrizilor comerciali F1 la tomate i ardei precum i liniile ginoice de castravei utilizate n producerea hibrizilor ginoici, partenocarpici pentru cultura de ser. La tomate, folosirea androsterilitii genice pentru obinerea de linii materne androsterile este o metod bine pus la punct att din punct de vedere teoretic ct i practic. Androsterilitatea genic, la tomate, poate fi de urmtoarele tipuri: a) Provocat de seria alelic ms (male-sterile). n momentul de fa se cunosc 42 de alele ale acestui locus. Acest tip de androsterilitate se manifest fenotipic prin stamine de culoare i lungimi diferite de cele normale, anterele fiind complet lipsite de grunciori de polen sau coninnd grunciori de polen avortai. b) Provocat de seria alelic sl (stamenless) duce la lipsa total a anterelor sau la formarea unor rudimente de antere. c) Provocat de gena ps (positional sterile), caz n care anterele conin polen fertil, dar acestea nu se deschid pentru a-l elibera. d) Provocat de gena ex (exerted stigma), exteriorizat prin stil alungit care scoate stigmatul deasupra capionului format din garnitura anterelor, autofecundarea 32

natural fiind imposibil. Acest tip de androsterilitate are o manifestare fenotipic identic heterostiliei. Dintre aceste tipuri de sterilitate mascul, cel determinat de seria ms este n mod frecvent folosit pentru crearea de linii pure materne la tomate. Din seria alelic ms, gena ms35, localizat pe cromozomul 2, este linkat strns (1,7 uniti cross-over) cu locusul A/a care provoac absena/prezena culorii antocianate a plantelor tinere. n felul acesta exist un marker genetic uor de observat fenotipic n faza de plantul care permite eliminarea din linia matern a plantelor androfertile cu mult nainte de nflorirea acestora. Meninerea (nmulirea) liniei androsterile ms35a/ms35a se face prin ncruciarea permanent cu o liniei analoag androfertil (Ms35A/ms35a) heterozigot att pentru locusul androsterilitii ct i pentru cel al prezenei culorii antocianate la plantulele tinere (v. subcap. 3.6.). Procesul de recombinaii de tip Ms35a (lipsite de antocian i fertile), aprute n urma crossingoverelor dintre cei doi loci, este destul de sczut (% recombinaii Ms35a 1,7 = = 0,85%), aceste plante urmnd a fi eliminate din linia androsteril n momentul 2 nceperii nfloritului. n acest scop, la apariia primelor flori, toate plantele liniei androsterile vor fi controlate n privina modului n care manifest sterilitatea mascul.
Meninerea liniilor ginoice partenocarpice folosite n crearea hibrizilor comerciali F1 de castravei destinai culturii n sere

La castravei, o categorie aparte de linii o constituie cele partenocarpice ginoice folosite n crearea hibrizilor comerciali F1 destinai culturilor n sere, linii care formeaz n exclusivitate flori femele capabile s dea natere la fructe n lipsa fecundrii prin fenomenul de partenocarpie. Meninerea (nmulirea) acestor linii ginoice, partenocarpice este relativ simpl: prin tratamente cu soluii de giberelin sau de nitrat de argint, aplicate la o parte din plantele liniei n faza tnr, se induce formarea, pe plantele respective, a florilor mascule, productoare de polen. Manual, sau cu ajutorul insectelor polenizatoare se face polenizarea florilor femele, de la plantele netratate, cu polen de la florile mascule aprute pe plantele tratate. Seminele obinute n acest fel vor da natere exclusiv la plante ginoice, partenocarpice. Evident, ntreg procesul de meninere (nmulire) a unor astfel de linii se va desfura n sere compartimentate n care polenizarea efectuat de insecte poate fi controlat n sensul evitrii oricrei infuzii de gene strine.
4.1.4. Metodologia producerii de semine la hibrizii comerciali F1 ai plantelor autogame

La plantele horticole autogame, att legumicole ct i floricole, s-a generalizat folosirea hibrizilor comerciali F1 simpli. Producerea seminei hibride se face n loturi de hibridare n care cele dou linii parentale sunt ncruciate. Gradul de dificultate al acestei operaiuni depinde, n mare msur, de urmtoarele caracteristici ale liniilor parentale: androfertilitatea liniei materne, oblig efectuarea castrrii manuale sau chimice; lipsa de mobilitate a polenului liniei paterne (la tomate datorat morfologiei anterelor, la castravei datorat nveliului lipicios al grunciorilor de polen), oblig efectuarea manual a polenizrilor artificiale sau cu ajutorul insectelor polenizatoare n spaii perfect izolate pentru a preveni infuzia de gene strine; existena liniilor androsterile genic simplific mult procesul de obinere a seminelor comerciale hibride F1.

33

Castrarea manual a florilor liniei materne este modalitatea cea mai costisitoare de obinere a seminei comerciale hibride. La noi n ar metoda mai este nc folosit n producerea, n loturile de hibridare, a seminei comerciale hibride la tomate, ardei i castravei. Operaiunea prezint un nivel de dificultate ce va depinde direct de morfologia florii i biologia nfloritului la linia matern androfertil dar prezint o eficacitate biologic ridicat, de aproximativ 95%. Castrarea chimic este un procedeu mai recent folosit n cmpurile de hibridare la tomate atunci cnd linia matern este androfertil. n acest scop se utilizeaz acidul giberelic (AG3) sau alt gametocid (ex. FW450) aplicate prin pulverizare pe inflorescenele tinere. TAREGA i NUEZ (1981) au obinut, cu ajutorul acestor tratamente, urmtoarele procente de eficien a castrrii chimice: acidul giberelic (AG3), n concentraie 10-3M i 5x10-3M, o eficien de 95%; FW-450, n concentraie de 0,05%, o eficien de 70%. Se observ c eficiena acidului giberelic, folosit ca agent de castrare chimic a florilor de tomate, este practic identic celei obinute prin castrarea manual la aceast specie. Utilizarea liniilor androsterile ca forme parentale materne n loturile de hibridare pentru producerea seminei comerciale hibride F1, simplific foarte mult acest proces cu condiia ca respectivele linii s posede urmtoarele caracteristici: androsterilitatea s fie uor de recunoscut fenotipic nc n faza de plantul, fapt realizabil cu ajutorul unor markeri genetici; polenizarea florilor liniei androsterile s fie mai uor de realizat (manual sau de ctre insecte) graie unei morfologii adecvate a organelor sexuate femele ale florilor care s nu pun stigmatul ntr-o poziie ct mai accesibil; androsterilitatea s fie stabil (nu parial sau condiional) permind obinerea unei proporii de 100% semine hibride F1; fertilitatea femel a plantelor liniei androsterile s fie norm astfel nct s se obnin producii de semine ct mai ridicate. Obinerea seminei comerciale hibride F1, la castraveii ginoici i partenocarpici destinai culturii n ser se realizeaz, n principal prin dou metodologii: a) Linia ginoic mam este cultivat, n spaii izolate, n ser, intercalat cu linia ginoic patern. Acesteia din urm i se aplic tratamente cu soluii de giberelin sau nitrat de argint pentru a-i induce capacitatea de formare a florilor mascule productoare de polen. Polenizarea artificial propriu-zis este cel mai adesea executat manual i, mai rar, semiliber, efectuat controlat de insecte polenizatoare (albine) n spaii izolate care s nu permit infuzia de gene strine. Smna hibrid F1 recoltat de la linia ginoic va produce numai plante ginoice, partenocarpice. b) Linia matern este ginoic, partenocarpic dar ca liniei patern se folosete o liniei monoic normal. Ambele linii vor purta cele dou gene modificatoare care favorizeaz apariia florilor femele. Smna hibrid F1 recoltat de pe linia matern ginoic, va da natere la plante heterozigote pentru genele ce determin sexul florilor dar, datorit prezenei celor dou gene modificatoare, au o accentuat tendin de a forma numai flori femele. Schematic acest proces ar putea fi reprezentat astfel:

gg M1M1M2M2 Linie ginoic, partenocarpic

GG M1M1M2M2 Linie monoic, cu flori fertile

F1 Gg M1M1M2M2 Plante F1 monoice genotipic, femele fenotipic, datorit genelor modificatoare M1 i M2

34

De remarcat faptul c, metodologiile de obinere, meninere i utilizare a liniilor androfertile i androsterile n vederea obinerii de hibrizi comerciali F1 se utilizeaz n prezent i la alte specii horticole autogame cum sunt: Antirrhinum majus, Delphinium sp., Zinnia sp., etc.
4.2. Metodologia producerii de semine la cultivarurile speciilor horticole alogame

Speciile horticole alogame care se nmulesc prin semine sunt, n marea lor majoritate, plante anuale sau bienale (spanacul, ridichi de lun, sfecla roie, ceapa, varza, morcovul etc.) i mai rar plante perene (ceapa de arpagic, unele plante ornamentale Anemone sp.). Principalele categorii de cultivaruri existente n momentul de fa la speciile horticole alogame sunt: - populaiile vechi, cu polenizare liber; - soiuri cu polenizare liber; - liniile consangvinizate componente ale hibrizilor comerciali; - hibrizii comerciali F1. Trebuie remarcat faptul c nu sunt rare cazurile cnd aceeai specie este reprezentat n cultur prin dou sau chiar toate tipurile de cultivaruri enumerate anterior. Obiectivele producerii de smn la cultivarurile speciilor horticole alogame sunt identice cu cele prezentate la speciile autogame. Exist ns diferene marcante de biologie a polenizrii i de frecven a heterozigoilor ceea ce face ca la cultivarurile speciilor alogame baza teoretic a metodologiei producerii de semine s fie reprezentat, aproape n egal msur, de selecia conservativ, consangvinizare, hibridare i heterozis.
4.2.1. Metodologia producerii de semine la populaiile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame

Dintre speciile horticole alogame ale momentului de fa n ara noastr, ceapa i varza constituie dou exemple tipice de plante la care se cultiv populaii cu polenizare liber producndu-se smn n acest scop. Alturi de ele mai pot fi amintite cteva specii horticole ornamentale (albstrele, margarete etc.) la care ns producerea de semine are o pondere redus fiind realizat, cu precdere, n mod organizat n micile grdini de pe lng casele de la orae i sate. Metodologia producerii seminelor la populaiile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame se bazeaz, principial, nu pe selecia individual genotipic, ci pe selecia n mas negativ efectuat naintea nfloritului. Ea nu urmrete s perpetueze populaia doar prin cele mai reprezentative exemplare ale sale deoarece aceasta ar duce inevitabil la ngustarea bazei genetice a acesteia i la apariia depresiunii de consangvinizare. Scopul acestei metodologii este de a menine nealterat, de-a lungul generaiilor de nmulire, structura genetic extrem de complex a populaiei prin producerea seminei, n prima etap, n zona n care s-a format populaia i apoi pstrarea tipicitii acesteia, n toate verigile de nmulire, cu ajutorul seleciei n mas negativ executat nainte de nflorit i n condiii de strict izolare n spaiu. Din aceste motive metodologia cuprinde doar trei verigi la plantele anuale (ex. albstrele, margarete), patru verigi la cele bienale (varz) i ase verigi la speciile trienale (ceapa nmulit prin arpagic). Ea va fi descris n amnunt doar la plantele anuale urmnd a se accentua diferenele pentru celelalte tipuri de plante horticole alogame la care se mai produce nc smn din vechile (sau mai noile) populaii cu polenizare liber. Cmpul de producere a seminei Prebaz se seamn numai o dat la 3-5 ani, n funcie de necesitile de nmulire a populaiei respective, i este reprezentat de un lot semincer cultivat n arealul de origine al populaiei, n condiii de strict izolare n spaiu fa de alte 35

populaii, soiuri, varieti ale speciei respective. n cursul perioadei de vegetaie se execut selecia n mas negativ care trebuie s se ncheie nainte de nflorit. Smna recoltat de la plantele rmase va fi folosit n dou scopuri: a) pentru nfiinarea unui nou cmp de Prebaz n zona de origine a populaiei i b) pentru nsmnarea cmpului de producere a seminei Baz (v. fig. 4.2.1.1.) Obinuit, semnarea/plantarea cmpului de Prebaz se face n rnduri distanate (40-60 cm) pentru a uura accesul celor ce execut purificrile biologice. Cmpul de producere a seminei Baz se nfiineaz cu smn Prebaz II i poate fi amplasat i n alte zone dect cea de origine a populaiei respective. Izolarea n spaiu, modul de semnat/plantat i purificrile biologice sunt identice cu cele descrise la cmpul anterior. Smna obinut se recolteaz n amestec fiind folosit pentru nfiinarea cmpului de producere a seminei Certificat I (C1).

Cmpul de producere a seminei Prebaz

Cmpul de producere a seminei Baz

Cmpul de producere a seminei Certificat I Fig. 4.2.1.1. Schema metodologic de producere a seminelor la populaiile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame
Cmpul de producere a seminei Certificat I (C1) are aceleai caracteristici metodologice i tehnologice ca i cmpul de Baz reprezentnd, de fapt, o extindere a procesului de producere de smn de o asemenea manier nct s corespund necesitailor de smn ale unitilor de producie. Trebuie remarcat faptul c aceast schem este valabil i pentru producerea seminei la populaiile de usturoi la care ns termenul de smn trebuie nlocuit cu cei de usturoi. n acest caz selecia n mas negativ nu mai are nici o legtur cu nfloritul, ea executndu-se nainte de plantare prin alegerea celor mai tipice, sntoase i viguroase cpni de usturoi care s furnizeze materialul de plantat. La plantele horticole bienale la care nc se mai produce smn din populaii cu polenizare liber (ex. varz, populaiile de Poiana, de Ciuc, ceapa de ap, populaiile de Crasna, de Pericei, de Vinga, de Drti), schema metodologic cuprinde patru verigi, i anume: a) Cmpul de Prebaz plante mam n care, n tot timpul perioadei de vegetaie se fac purificri biologice pe baza caracterelor tari ale populaiei respective. b) Cmpul de producerea seminei Prebaz se planteaz cu materialul provenit din veriga anterioar n condiii de strict izolare n spaiu. Purificrile biologice se execut pn la nflorit bazndu-se pe caracterele fenotipice ale semincerilor. Smna recoltat n amestec se folosete o parte pentru nfiinarea verigii urmtoare iar o parte se ine n rezerv sau se folosete imediat pentru renfiinarea cmpului de Prebaz plante mam.

36

c) Cmpul de Baz plante mam se realizeaz prin plantarea cu rsad obinut din smna Prebaz i nu necesit izolare n spaiu. Purificrile biologice se execut n tot cursul perioadei de vegetaie pe baza caracteristicilor cpnilor. d) Cmpul de producere a seminei C1 se planteaz cu butaii obinui n cmpul de Baz, izolat n spaiu. Purificrile biologice se vor efectua pn la nflorit i vor fi bazate pe tipicitatea semincerilor, vigoarea i starea lor de sntate. Smna recoltat se condiioneaz i se livreaz unitilor de producie pentru nfiinarea loturilor productoare a verzei destinate consumului. n cazul populaiilor de ceap nmulite prin arpagic schema metodologic cuprinde ase verigi, i anume: cmpul de Prebaz arpagic; cmpul de Prebaz bulbi; cmpul de Prebaz seminceri; cmpul de Baz arpagic; cmpul de Baz bulbi; cmpul Certificat I seminceri. Purificrile biologice se execut, n principal, n cmpurile de producere a arpagicului i bulbilor, pe baza tipicitii acestora, a vigorii i strii de sntate. n cmpurile de seminceri purificrile biologice se vor baza, cu precdere pe vigoarea i starea de sntate a acestora i, dac este posibil, pe tipicitatea lor. Smna SE va fi folosit, o parte, pentru renfiinarea cmpului PB I arpagic. Cu toate c n ultima vreme se manifest o tendin accentuat de nlocuire a populaiilor vechi de plante horticole alogame cu soiuri sau hibrizi comerciali s-a considerat necesar prezentarea metodologiei de producere a seminei la aceast categorie de cultivaruri, deoarece, n condiiile existenei micii proprieti rneti, ea va fi ntlnit nc mult vreme n cultur.
4.2.2. Metodologia producerii de semine la soiurile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame

Speciile horticole alogame care sunt reprezentate n cultur prin cultivaruri de tipul soiurilor cu polenizare liber sunt: ridichea de lun, ridichea, ceapa, varza, morcovul, ptrunjelul, pstrnacul, elina, spanacul etc. Unele din aceste specii sunt anuale sau se comport n anumite condiii ca anuale (ridichea de lun, spanacul), altele sunt bienale (varza, morcovul, ptrunjelul, ceapa cultivat prin semnat direct i ceapa de ap), iar altele sunt trienale (ceapa cultivat prin arpagic). Obiectivele metodologiei producerii de semine la aceast categorie de cultivaruri ale plantelor horticole alogame vor viza meninerea nealterat a structurii genetice deosebit de complexe a acestor soiuri i evitarea efectelor legate de depresiunea de consangvinizare. Cu alte cuvinte, starea de heterozigoie accentuat a soiurilor cu polenizare liber de plante alogame este o condiie esenial a pstrrii vigorii i a capacitii lor de producie. Metodologia producerii de semine, la aceast categorie de cultivaruri difer n funcie de tipul plantei (anual, bienal, trienal). Principial ns, la toate aceste tipuri de plante, producerea seminei din soiurile cu polenizare liber se bazeaz pe selecia individual simpl combinat cu selecia n mas negativ executat sub forma purificrilor biologice care, n faza de seminceri, vor fi ncheiate pn la nflorit. Combinaia celor dou metode are un efect conservativ, stabilizator asupra structurii genetice complexe a cultivarului motiv pentru care ea a i fost denumit selecie stabilizatoare, denumire ce este sinonim seleciei conservative. n unele cazuri (la ridichi de lun), selecia individual este aplicat n varianta jumtate de smn iar n alte cazuri (spanac), selecia individual lipsete complet, 37

metodologia de producere a seminelor bazndu-se exclusiv pe selecia n mas pozitiv i negativ. Alturi de selecie, un principiu fundamental al metodologiei producerii de semine la soiurile cu polenizare liber ale plantelor horticole alogame l reprezint obligativitatea izolrii n spaiu n faza de seminceri pentru evitarea infuziei de gene strine. Nerespectarea acestui principiu duce n mod automat la respingerea de la certificare a lotului respectiv de producere de smn.
4.2.2.1. Metodologia producerii de semine la soiurile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame (anuale)

Dintre speciile horticole anuale la care cultivarurile sunt de tipul soiurilor cu polenizare liber, cele mai reprezentative sunt spanacul, conopida i ridichea de lun. Diferenele de metodologie de producere de smn, dintre aceste trei specii sunt date de faptul c spanacul este o plant dioic anual, conopida are flori hermafrodite iar ridichea, tot cu flori hermafrodite, are o faz de dezvoltare vegetativ distinct reprezentat prin rdcina ngroat i o faz de dezvoltare generativ reprezentat de seminceri. La conopid schema metodologic de producere a semine Baz este identic celei prezentate pentru soiurile autogame omogene (v. fig. 4.1.1.1.). Cmpul de alegere se va nfiina prin rsad obinut din smna de Baz a soiului respectiv sau, n caz c acesta lipsete, din cea mai bun provenien a soiului respectiv. Se prefer cultura foarte timpurie pentru a se putea face o corect alegere a elitelor n faza de cpn. afara tipicitii, vigorii i struii de sntate, elitele alese vor trebui s nu nfloreasc prea devreme sau prea trziu i s formeze cpni norma dezvoltate. La formarea silicvelor se face o triere a elitelor eliminndu-se plantele bolnave sau slab dezvoltate. Smna plantelor Baz se recolteaz separat. Numrul elitelor alese nu va depi 10% din totalul plantelor din cmpul de alegere. Cmpul de selecie cuprinde descendena familial a fiecrei elite. Selecia este preponderent interfamilial eliminndu-se n ntregime familiile netipice, neomogene, slab dezvoltate, puternic atacate de boli i duntori. Nu trebuie complet omis selecia intrafamilial (n mas, negativ) prin care, n liniile valoroase vor fi eliminate plantele distruse de maini, animale, atelaje, oameni. Smna familiilor reinute se recolteaz n amestec constituind categoria biologic Prebaz I. Cmpul de producere a semine Prebaz se planteaz cu rsad ct mai timpuriu obinut din smn PB I. n fazele de cpn i de seminceri se aplic selecia n mas negativ sub forma purificrilor biologice. Smna obinut se folosete pentru nfiinarea cmpului de Baz. Cmpul de PB II, o dat nfiinat, va servi i n calitate de cmp de alegere a elitelor evitndu-se nfiinarea anual a acestei verigi. Cmpul de producere a seminei Baz se planteaz cu rsad obinut din smn PB II, ct mai timpuriu cu putin. Purificrile biologice se execut n aceleai faze i pe baza acelorai criterii ca i n cmpul de PB II. Smna recoltat se condiioneaz i se livreaz unitilor de producie sau, n caz de nevoie, se folosete pentru nfiinarea cmpului de smn Certificat I (C1). Distana minim de izolare fa de alte soiuri de conopid sau alte cmpuri de seminceri ocupate de specii/subspecii ale genului Brassica va fi de 2000 m. La spanac, schema metodologic de selecie conservativ pentru producerea seminei Baz este asemntoare celei prezentate pentru soiurilor omogene ale plantelor horticole autogame. Singurele deosebiri le constituie faptul c, la iniierea procesului de producere de smn, sunt prevzute dou cmpuri de alegere iar dup cel de al doilea cmp de alegere nu urmeaz un cmp de selecie a familiilor aa cum reiese din fig.4.2.2.1.a. Aceasta nseamn c, la soiurile de spanac, metodologia producerii de semine nu se mai bazeaz pe selecia 38

individual, genealogic ci doar pe selecia n mas n cele dou variante ale sale: pozitiv n cmpurile de alegere i negativ n cmpurile de SE i E. Cmpul de alegere I se nfiineaz numai la iniierea procesului de selecie conservativ pentru un nou soi, semnarea lui fcndu-se cu smna de Baz a soiului sau cu cea mai bun provenien de smn din soiul respectiv. La alegerea elitelor, alturi de tipicitate i starea de sntate se mai iau n considerare urmtoarele criterii: portul frunzelor, forma i culoarea limbului foliar, lungimea i culoarea peiolilor frunzelor. Smna tuturor elitelor se recolteaz n amestec folosind la nfiinarea cmpului de alegere II. Cmpul de alegere II servete tot la extragerea elitelor, dei nici de data aceasta ele nu sunt urmrite, n continuare, individual. Criteriile de alegere a elitelor sunt cele descrise la veriga anterioar, smna acestora amestecndu-se i constituind categoria biologic PB I. Cmpurile de producere a seminelor Prebaz i Baz sunt, din punct de vedere metodologic, identice cu cele descrise la conopid. Evident, criteriile de efectuare a purificrilor biologice vor fi specifice spanacului aa cum s-a descris la cmpul de alegere I. Cmpul de Prebaz II, dup nfiinare, va servi i n calitate de cmp de alegere a elitelor. La ridichi de lun metodologia seleciei n vederea producerii seminei Baz se bazeaz pe faptul c este posibil, n condiiile de la noi, obinerea ntr-un singur an att a plantelor mam (rdcini) ct i a semincerilor. Mai mult, n condiiile din sudul rii cu toamne lungi i clduroase, este posibil obinerea, ntr-un singur an, a trei generaii de selecie: plantele mam n cultura de primvar timpuri, seminceri n cultura de var i din nou plante mam n cultur de toamn. restul zonelor rii o astfel de schem metodologic este posibil numai dac cultura de toamn se realizeaz n spaii protejate. Esenial rmne faptul c, datorit acestei particulariti biologice, la ridichi de lun selecia individual este aplicat n varianta jumtate de smn aa cum reiese din fig. 4.2.2.1.b. Conform schemei metodologice, n anul I pot fi realizate urmtoarele verigi: Cmpul de alegere (rdcini) se nfiineaz cu cea mai valoroas provenien a soiului respectiv. Semnatul se execut ca i pentru cultura de consum, n rnduri duble 2x12,5/45. La maturitatea de consum, se aleg plantele (rdcinile) cele mai tipice soiului ca form, culoare, precocitate, mrime a rdcinilor etc. Cmpul de alegere (seminceri) se obine prin plantarea rdcinilor Baz alese n veriga anterioar. n momentul nfloririi, alegerea elitelor n faza de seminceri se face pe baza culorii florilor, a vigorii plantei i a strii ei de sntate, smna fiecrei elite recoltndu-se separat. Cmpul de testare a familiilor (rdcini) se realizeaz prin semnarea individualizat (rnduri separate, microparcele) a seminelor fiecrei elite n toamna aceluiai an, n acest scop folosindu-se jumtate din smna elitelor reinute n faza de seminceri. Aprecierea familiilor va ine cont de criterii ca: omogenitate, tipicitate, stare de sntate, productivitate. Cmpul de selecie (rdcini) al anului II se nfiineaz n primvar din rezerva de smn a elitelor celor mai valoroase indicate de cmpul de selecie a familiilor organizat n veriga anterioar. Reiese c, datorit aplicrii variantei jumtate de smn, valoarea fiecrei elite este apreciat pe baza performanelor familiilor descendente att n cultur de primvar ct i n cultur de toamn. Rdcinile familiilor celor mai valoroase se amestec servind la plantarea, n acelai an, n cultur a cmpului de Prebaz seminceri. Cmpul de producere a seminei Prebaz al anului II va beneficia de selecii n mas negative bazate pe aspectul fenotipic al semincerilor, vigoarea i starea lor de sntate. n acest scop, plantarea se face n rnduri deprtate (80-120 cm) cu distane de 40-60 cm ntre butai pe rnd. Dup nfiinare el va servi i n calitate de cmp de alegere a elitelor evitnduse astfel nfiinarea periodic a unui cmp de alegere distinct. Cmpul de Baz (rdcini) se obine prin semnarea seminei Prebaz obinut n veriga anterioar. Semnatul se face la fel ca i pentru culturile de consum iar la atingerea maturitii tehnologice rdcinile se recolteaz aplicndu-se o selecie n mas negativ, pe 39

baza tipicitii, a vigorii i strii lor de sntate. Rdcinile reinute se planteaz imediat n cmpul de producere a seminei Baz. Cmpul de producere a seminei Baz (seminceri) se planteaz la fel ca i cmpul de Prebaz seminceri. Dup efectuarea purificrilor biologice smna plantelor rmase se recolteaz n amestec, se condiioneaz i se livreaz unitilor de producie.
4.2.2.2. Metodologia producerii de semine la soiurile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame, bienale

Speciile horticole alogame bienale care sunt reprezentate de cultivaruri de tipul soiurilor cu polenizare liber, constituie un grup important att ca numr ct i ca pondere economic n cadrul plantelor legumicole. Acestor specii le aparin un numr mare de soiuri de ceap cultivat prin semnat direct, morcov, ptrunjel, pstrnac, elin, ridichi de var, ridichi de iarn, sfecl roie, varz i gulii. Principiul metodologic al producerii de smn la aceste specii l constituie selecie conservativ care, aa cum s-a vzut anterior, este de fapt o combinaie ntre selecia individual, simpl i selecia n mas negativ. Acest principiu metodologic mbrac ns o form aparte n cazul plantelor horticole bienale, datorit n principal urmtoarelor cerine: necesitatea de a corespunde biologiei plantelor bienale care formeaz tulpini florifere, inflorescene i flori numai n al doilea an de via; necesitatea de a nu prelungi excesiv procesul de selecie conservativ pentru a nu ridica nejustificat preul de cost al seminelor i pentru a nu ntrzia prea mult ajungerea acestora n unitile de producie. Aceste cerine sunt ndeplinite de schema metodologic prezentat n fig. 4.2.2.2. Cmpul de alegere (seminceri) se realizeaz prin plantarea unui numr ct mai mare de plante mam (rdcini, bulbi, cpni etc.) obinute n anul anterior din smna de Baz a soiului respectiv sau din cea mai autentic provenien de smn pentru acel soi. Alegerea elitelor se va face pe baza unor criterii aplicabile semincerilor, caracteristice pentru fiecare specie. Drept criterii generale de alegere a elitelor rmn: vigoare i starea de sntate a plantelor, tipicitatea (dac poate fi apreciat), gradul de ncrcare cu fructe i semine. Recoltarea seminelor se face individual pentru fiecare Baz. Cmpul de selecie a familiilor (plante mam) se obine prin semnarea individualizat a seminei fiecrei elite. Dac soiul se cultiv prin rsad, producerea acestuia se va face separat pentru fiecare familie descenden. Modul de plantare/semnare trebuie astfel ales nct s permit o observare uoar i rapid a tuturor plantelor familiei. De regul acest lucru se realizeaz prin semnarea n rnduri duble lungi de 3-5 m a familiilor de ceap, morcov, ptrunjel, pstrnac etc. (2 x 15/45 cm) sau n rnduri simple, deprtate (50-80/25-40 cm) la varz, gulii, sfecl roie. n aceast faz, selecia este preponderent interfamilial, efectuat vizual pe baza unor caracteristici distincte ale plantelor mam ce compun familia ca: omogenitate, tipicitate, stare de sntate. Bulbii, rdcinile, cpnile familiilor reinute se recolteaz separat, pe familii. Dac e necesar, cu aceast ocazie se poate aplica o selecie n mas negativ intrafamilial, eliminndu-se din familiile reinute eventualele plante vtmate de animale, maini, oameni. Pstrarea plantelor mam ale familiilor se face fr msuri speciale atunci cnd plantarea lor urmeaz s se fac n toamn i prin nsilozare, stratificare, depozitare adecvat, atunci cnd plantarea lor se face abia n primvara anului urmtor. Cmpul de producere a seminei baza Prebaz (seminceri) se realizeaz prin plantarea, pe parcele individualizate, a plantelor mam aparinnd familiilor reinute din cmpul de selecie. De regul plantarea se face n rnduri distante i cu distane mai mari ntre plante pe rnd (80-100/25-40 cm) pentru a oferi semincerilor condiii optime de dezvoltare. La unele 40

specii (ceap) este adesea necesar instalarea unui sistem de susinere (palisare) pentru a evita frngerea i cderea tulpinilor florifere sub aciunea vntului, ploii, grindinei etc. Selecia n aceast faz rmne n continuare interfamilial, renunndu-se complet la familiile netipice, cu multe plante bolnave, cu o producie mic de smn etc. Selecia intrafamilail se aplic doar n cadrul familiilor reinute prin eliminarea unor plante vtmate sau distruse de animale, maini, atelaje sau oameni. Smna familiilor reinute se recolteaz separat pentru fiecare familie. Dup nfiinarea acestei verigi ea se folosete i calitate de cmp de alegere a elitelor seminceri fcnd astfel inutil plantarea anual/periodic a unui cmp de alegere distinct. Cmpul de Prebaz (plante mam) se realizeaz prin semnarea/plantarea rsadului obinut din smna PB II pentru fiecare familie reinut. Semnarea/plantarea se face n parcele mari dup aceeai schem ca i cea aplicat n culturile de consum. n timpul vegetaie i la recoltare se aplic o selecie interlineal bazat pe aceleai criterii ca i cele folosite n cmpul de selecie a familiilor (anul II, plante mam). La aceste criterii se adaug capacitatea de producie a familiilor i, eventual, calitatea produciei, elemente ce pot fi determinate suficient de exact datorit dimensiunilor mari ale parcelelor i numrului mare de plante obinute din fiecare familie. Bulbii, rdcinile, cpnile etc. familiilor reinute se vor planta n amestec, n toamna aceluiai an sau n primvara anului urmtor n cmpul de Baz seminceri. Cmpul de producere a seminei Baz (seminceri) se planteaz n rnduri rare i cu distane mari ntre plante pe rnd, ca i cmpul de PB II. n cursul perioadei de vegetaie, la nflorire i la recoltare se execut purificri biologice pe baza unor criterii specifice semincerilor dintre care ns nu vor lipsi: tipicitatea, vigoarea, producie de smn, starea de sntate. La speciile la care exist pericolul frngerii i cderii tulpinilor florifere se va executa palisarea rndurilor de plante. Smna recoltat de la plantele rmase dup efectuarea purificrilor biologice se condiioneaz i se livreaz unitilor de producie. n cazul n care apare necesar nc o nmulire a seminei aceasta se realizeaz printr-un ciclu de doi ani, i anume: anul VI cmpul de nmulirea I-a plante mam i anul VII cmpul de nmulirea I-a seminceri.
4.2.2.3. Metodologia producerii de semine la soiurile cu polenizare liber ale speciilor horticole alogame trienale

Dintre speciile horticole trienale care sunt reprezentate n cultur prin soiuri cu polenizare deschis, exemplul cel mai tipic l constituie ceapa nmulit prin arpagic. La aceast specie o serie de soiuri cu o rspndire apreciabil n cultur, se cultiv nc numai sau aproape numai prin arpagic (Wolska, De Macu, De Vinga, De Filiai) ceea ce face ca ajungerea plantelor la nflorire s se realizeze abia n cel de al treilea an de la semnarea seminei. Alturi de ceapa de arpagic o comportare trienal au i cteva specii florifere cum sunt: Lilium bulbiferum, L. auratum, L. regale care se nmulesc prin bulbili ce apar pe tulpin, la baza frunzelor. Bulbilii maturi plantai n rsadni sau ser dau natere la plante ce devin florifere abia dup trei ani de la plantare. Evident, schema din fig. 4.2.2.3. poate fi adaptat i pentru producerea seminelor la aceste specii ornamentale. Principial, schema metodologic de selecie conservativ pentru producerea seminei Baz la plantele trienale se bazeaz att pe selecia individual ct i pe selecia n mas negativ. Selecia individual se aplic pn n faza de Prebaz bulbi constnd n alegerea celor mai bune plante/familii indiferent c acestea se afl sub form de seminceri, arpagic sau bulbi. 41

Alegerea elitelor se practic o singur dat, n cmpul de alegere seminceri care se nfiineaz din bulbi produi n anul anterior din smna de Baz a soiului sau din cea mai bun provenien de smn la soiul respectiv. Criteriile de alegere a elitelor se vor referi, cu precdere, la aspectul fenotipic al semincerilor: vigoare, stare de sntate, productivitate i, dac este posibil, tipicitatea acestora. Procesul urmeaz apoi aceeai desfurare ca i n cazul soiurilor cu polenizare liber ale plantelor horticole bienale cu deosebirea c apar dou etape n plus de nmulire i selecie n faza de arpagic (anii II i V). ncepnd din anul II i pn n anul VI, selecia este preponderent interfamilial, eliminndu-se n fiecare an familiile netipice, neomogene, slab productive, puternic atacate de boli i duntori. Evident, aceste criterii vor fi aplicate n mod difereniat n funcie de faza n care se execut selecia interfamilial: seminceri, arpagic sau bulbi. n aceast perioad nu trebuie omis complet selecia intrafamilial prin care, din familiile reinute, vor fi eliminate, plantele, arpagicul sau bulbii cu vtmri mecanice, deformate, mncate de duntori, animale etc. Selecia individual cedeaz locul seleciei n mas abia n anul a VII-lea, n cmpul de Baz seminceri cnd, prin purificri biologice, se vor elimina plantele netipice, slab dezvoltate, atacate de boli, duntori, czute la pmnt etc. Pentru a favoriza efectuarea alegerii de elite, a seleciei interfamiliale i a purificrilor biologice, verigile prezentate n fig. 4.2.2.3. se vor semna/planta astfel: Cmpurile de seminceri (anii I, IV, VII) se vor planta la distane mari 80-100/20-30 cm, palisndu-se rndurile de plante pentru a evita cderea acestora. Cmpurile de arpagic (anii II, V, VII) se vor semna n straturi late de 1,5 m, n rnduri apropiate (12,5 cm) i la o densitate mare pentru a favoriza formarea unui arpagic cu diametrul cuprins ntre 7-25 mm. Norma de semnat: 80-120 kg/ha. Din familiile reinute, prin selecie intrafamilial se va elimina arpagicul ce nu se ncadreaz n limitele de diametru amintite anterior. Cmpurile de bulbi (anii III i VI) se planteaz manual sau mecanic, n rnduri distanate la 35 cm, fiecare familie ocupnd unul sau mai multe rnduri, n funcie de mrimea parcelei afectat unei familii.
4.2.3. Metodologia producerii de semine la liniile consangvinizate

n momentul de fa, att la noi n ar ct i pe plan mondial se manifest o tendin accentuat de extindere n cultur, la o serie de specii horticole alogame, a hibrizilor comerciali F1 simpli. Crearea acestor hibrizi necesit obinerea de linii consangvinizate parentale, linii la care smna trebuie produs n cantiti suficiente n fiecare an, pentru a se putea nsmna/planta loturile de hibridare. Acest lucru este valabil n special la ceap, varz, morcov i ridichi, plante legumicole la care n anumite ri (SUA, Olanda, Belgia, Frana) se cultiv aproape n exclusivitate doar hibrizi comerciali F1 simpli. Principalele obiective urmrite de procesul de producere de smn la liniile consangvinizate de plante horticole alogame sunt: -meninerea puritii genetice a liniei; -meninerea capacitii de fixare a sterilitii mascule sau de restaurare a acesteia; -meninerea autoincompatibilitii liniilor parentale, la unele specii cum este varza; -meninerea unei vigori adecvate avnd n vedere depresiunea de consangvinizare caracteristic acestor linii, vigoare care s asigure o producie de smn ct mai ridicat. Pentru atingerea acestor obiective, metodologia producerii de semine la liniile consangvinizate ale plantelor horticole alogame face apel la: autopolenizri, ncruciri SIB, controlul puritii genetice a descendenelor, selecia individual i selecia n mas negativ. 42

Schemele metodologice de producere a seminelor la liniile consangvinizate au un grad de generalizare destul de accentuat atunci cnd este vorba de linii androfertile i difer de la o specie la alta, atunci cnd sunt implicate linii androsterile, n funcie de tipul de androsterilitate folosit.
4.2.3.1. Metodologia meninerii i nmulirii liniilor consangvinizate androfertile ale plantelor horticole alogame

Datorit faptului c majoritatea plantelor horticole la care se afl n cultur cultivaruri de tipul liniilor consangvinizate sunt, de fapt, specii legumicole bienale (ceap, varz, morcovi), exemplificarea metodologiei de producere a seminelor la liniile consangvinizate androfertile se va face pe astfel de plante. Metodologia standard de meninere i nmulire a liniilor consangvinizate androfertile ale plantelor horticole alogame cuprinde cinci verigi care implic autopolenizri, ncruciri SIB, selecie interliniar i intraliniar i selecie n mas negativ executat n condiii de izolare n spaiu n fazele de seminceri (fig. 4.2.3.1.). a) Cmpul de verificare a puritii biologice i selecie (plante mam). Smna liniei, reprezentat de pliculee de semine rezultate din autopolenizarea plantelor n veriga a II-a, este semnat dup metoda o plant un rnd rezultnd un numr de 30-50 rnduri de plante (sublinii) ale aceleai linii. n timpul vegetaiei i la recoltare se verific plantele fiecrui rnd eliminndu-se n ntregime descendena (sublinia) care prezint cele mai slabe indici de netipicitate. Din fiecare descenden reinut se opresc cte 40-60 de bulbi. Acetia se planteaz n toamna aceluiai an sau se pstreaz pn n primvar n condiii de stratificare, nsilozare, depozitare adecvate. n general, se opresc 20-30 din cele mai bune descendente ale liniei. b) Cmpul de meninere a puritii biologice (semincere). Fiecare descenden se planteaz pe cte dou rnduri a cte 20 de plante, unul din rnduri fiind destinat autopolenizrii, iar cellalt ncrucirilor SIB cu plantele altei descendene conform schemei. Pentru a se putea realiza autopolenizrile i polenizrile SIB n pereche, distanele ntre rnduri i ntre plante pe rnd vor fi mari pentru a permite instalarea izolatorilor. Rndurile a dou descendene alturate destinate ncrucirilor SIB se planteaz mai apropiat pentru a permite introducerea celor dou plante pereche sub acelai izolator. Att autopolenizrile ct i ncrucirile SIB se execut prin introducerea sub izolator a insectelor polenizatoare (mute, bondari, albine etc.). c) cmpul de selecie a descendenelor SIB i nmulire (plante mam). nsmnarea se realizeaz tot dup metoda o plant un rnd n rnduri lungi de 3-20 m, distanate la 40 cm. Semnatul se face n perechi pe dou rnduri alturate n sensul c seminele a dou plante care au format o pereche SIB vor ocupa dou rnduri alturate. Dup cum reiese din cele expuse anterior, n aceast verig de nmulire a liniei se practic att selecia ntre sublinii ct i o selecie n interiorul subliniilor, n funcie de gradul de impurificare a acestora. d) Cmpul de nmulire izolat n spaiu (seminceri) va cuprinde un numr de microparcele egal cu numrul subliniilor reinute n veriga anterioar. Plantarea se face n rnduri distanate (80-100/20-30 cm), fiecare microparcel ocupnd un rnd sau o poriune de rnd n funcie de numrul plantelor mam din sublinia respectiv. ntreg cmpul se va amplasa izolat n spaiu, la cel puin 2000 m de orice ali seminceri ai speciei respective. n timpul vegetaiei, pn la nflorire, se vor elimina n ntregime subliniile n care peste 10% din plante (seminceri) nu sunt tipice liniei, iar n cele n care plantele netipice sunt sub 10% se vor efectua purificri biologice care s duc la eliminarea plantelor n cauz. Smna fiecrei sublinii se va recolta i batoza separat. 43

e) Cmpul de nmulire (plante mam). Smna fiecrei sublinii reinute n veriga anterioar se seamn/planteaz n parcele separate, metoda se de semnat/plantat fiind cea obinuit pentru culturile de consum. Mrimea parcelei va depinde de cantitatea de smn existent n fiecare sublinie. n timpul perioadei de vegetaie i mai ales la recoltare, se vor elimina n ntregime subliniile n care mai mult de 10% din plante (bulbi, cpni, rdcini) sunt netipice liniei. n subliniile cu mai puin de 10% plante netipice se vor efectua purificri biologice. Bulbii (rdcinile, cpnile) subliniilor reinute vor fi recoltai n amestec constituind materialul ce se va planta n lotul de hibridare, alturi de cealalt linie parental, n vederea obinerii seminei comerciale hibride F1. Trebuie remarcat faptul c verigile descrise n aceast metodologie standard pot fi dimensionate de o asemenea manier nct s asigure, n cmpul de nmulire izolat n spaiu (seminceri), o cantitate de smn suficient de mare pentru a face posibil producerea plantelor mam timp de 3-4 ani consecutivi, ceea ce ar duce la repetarea ntregului ciclu de cinci ani doar la intervale mari de timp cu efecte biologice i economice salutare.
4.2.3.2. Metodologia meninerii i nmulirii liniilor consangvinizate androsterile ale plantelor horticole alogame

Folosirea liniilor androsterile, ca partener matern n lotul de hibridare, n vederea obinerii seminei comerciale hibride F1 la plantele horticole constituie o cale de sporire considerabil a eficienei economice a ntregului proces. Dac metodologia de obinere a liniilor consangvinizate androsterile face obiectul de studiu al ameliorrii, meninerea i nmulirea acestora este cu siguran domeniul producerii de semine. Liniile androsterile folosite ca parteneri materni n formulele de hibridare trebuie s ndeplineasc o serie de cerine pentru ca utilizarea lor s fie uoar din punct de vedere tehnic i eficient din punct de vedere biologic i economic. Aceste cerine generale se aplic tuturor liniilor androsterile, indiferent de tipul de sterilitate mascul pe care l manifest: androsterilitatea liniei materne trebuie s fie stabil; androsterilitatea liniei trebuie s nu fie nlnuit cu caracteristici nedorite care s se manifeste ca linie sau s se trnsmit hibrizilor comerciali (ex. sterilitatea citoplasmatic de tip CMS Texas la porumb este nlnuit cu sensibilitatea la atacul de Helmintosporium sp., caracter ce se transmite la hibrizi); la speciile la care intereseaz producia de fructe i semine, androfertilitatea liniei materne androsteril trebuie s poat fi uor restaurat prin ncruciare cu partenerul fertil astfel c hibrizii comerciali s manifeste, la rndul lor, o fertilitate mascul deplin; fertilitatea femel a liniei androsterile trebuie s fie normal pentru ca prin polenizare cu polen de la partenerul androfertil s dea o cantitate ct mai mare de smn comercial hibrid; linia androsteril trebuie s manifeste o capacitate combinativ ridicat cu partenerul androfertil, care s se extriorizeze prin producii ridicate la hibrizii F1. Dintre tipurile de androsterilitate cunoscute, pentru obinerea liniilor mascule sterile la plantele horticole alogame cel mai frecvent este utilizat androsterilitatea geniccitoplasmatic (ceap, ridichi, morcovi, Helianthus petiolaris, H. debilis). Deocamdat, la aceast categorie de plante, androsterilitatea genic i cea exclusiv citoplasmatic nu sunt folosite n crearea de linii consangvinizate i, respectiv, hibrizi comerciali. n funcie de numrul genelor implicate n tipul de androsterilitate genicocitoplasmatic utilizat, meninerea i nmulirea liniilor androsterile se face n mod diferit. Astfel: 44

La ceap androsterilitatea este determinat de o singur gen nuclear (R/r) n interaciune cu plasmagenele (N/S). Genotipurile Srr sunt androsterile, dominanta alelei r avnd capacitatea de a restaura fertilitatea citoplasmatic astfel c genotipul NRR i NRr au ntotdeauna, citoplasma normal, fertil, fiind fenotipic mascul fertile. Genotipul Nrr este androsteril, dar nerestaurator. Meninerea i producerea de smn la linia androsteril se face dup procesul clasic: ncruciarea permanant cu linia analoag androfertil nerestauratoare: A S rr x A N rr A S rr (semine ce vor da natere la plante androsterile). Hibridarea, se execut, de regul, n sere compartimentate sau n cmp, sub izolatori, folosindu-se insecte polenizatoare pentru a realiza polenizarea (bondari, mute, albine). La morcovi androsterilitatea este tot genic-citoplasmatic ns produs de dou gene nucleare (una recesiv, aa, iar cealalt dominant, B_) n interaciunea cu citoplasma. Exist dou tipuri de androsterilitate, la morcov, care difer prin aspectul fenotipic i anume: Androsterilitatea petaloid, n care staminele sunt total absente fiind nlocuite de nite structuri asemntoare petalelor. n unele cazuri, la plantele purtnd acest tip de androsterilitate, petalele adevrate sunt mici, colorate n rou-violet n loc de alb. Androsterilitatea de tip antere brunificate n care anterele sunt normal dezvoltate, de culoare brunie, coninnd exclusiv grunciori de polen sterili. n obinerea de linii consangvinizate la morcovi primul tip de androsterilitate, cea petaloid, este cel mai des folosit. Citoplasma steril S trebuie s fie nsoit de genotipurile aa, BB sau Bb pentru a da natere la plante androsterile n timp ce genotipurile AA, bb sau Aa bb vor avea citoplasm normal N, fertil, fiind, de fapt restauratoare de fertilitate. Genotipurile aaB_ pot fi androfertile dac sunt nsoite de o citoplasm N (fertile nerestauratoare). Meninerea i producerea de semine la linia androsteril se face prin ncruciarea ei cu linia androfertil analoag restauratoare dup schema: aa BB S x aa BB N aa BB S (semine ce vor da natere la plante androsterile). Ca i la ceap, astfel de hibridri se execut n sere compartimentate sau n cmp, sub izolator, n ambele cazuri utilizndu-se insecte (mute, bondari) pentru realizarea unei polenizri semilibere. La ridichi, androsterilitatea este rezultatul interaciunii dintre o gen nuclear, aflat n stare homozigot (rfrf) i citoplasma steril S. Modelul de interaciune este asemntor celui descris la ceap, genotipurile RfRf i Rfrf fiind restauratoare de fertilitate fiind, deci, nsoite, ntotdeauna, de citoplasm normal N. Genotipul rfrf N este androfertil, nerestaurator. Producerea seminei la liniile androsterile se face prin ncruciarea cunoscut rfrf S x rfrf N rfrf S executat n compartimente izolate de ser sau sub izolatori mari, n cmp, cu ajutorul insectelor polenizatoare. La floarea soarelui ornamental determinismul androsterilitii seamn cu cel de la morcov cu deosebire c genele nucleare de stabilitate sunt ambele recesive. Deci genotipurile rf1 rf1 rf2 rf2 S sunt androsterile, rf1 rf1 rf2 rf2N sunt androfertile restauratoare, iar genotipurile Rf1_ _ _, _ _ Rf2 _ i Rf1_Rf2_ sunt parial sau total restauratoare fiind nsoite, ntotdeauna de citoplasm normal N. Producerea seminei la liniile androsterile se face, principal, dup aceeai schem ca cea descris la ceap i ridichi: rf1 rf1 rf2 rf2 S x rf1 rf1 rf2 rf2 N rf1 rf1 rf2 rf2 S (semine ce vor da natere exclusiv la plante androsterile.

45

4.2.3.3. Metodologia meninerii i nmulirii liniilor consangvinizate cu autoincompatibilitate sporofitic, la plantele horticole alogame

La unele specii de plante horticole alogame (Brassica oleracea, Raphanus sativus, Primula sp.) fenomenul de autoincompatibilitate sporifitic este deosebit de evident i el poate fi folosit n obinerea de linii consangvinizate materne care s nu necesite castrarea n cmpul de hibridare F1. O astfel de metodologie este caracteristic pentru varz. Incompatibilitatea sporofitic, dup cum se tir, este determinat nu de alelele proprii ale grunciorului de polen, ci de alelele sporifitului (planta care a produs grunciorii de polen). De regul, n acest mecanism de incompatibilitate este implicat un singur locus S cu dou sau mai multe alele, genotipurile homozigote (S1S1,S2S2 etc) fiind total autoincompatibile (androsterile). Tehnicile de crearea liniilor consangvinizate autoincompatibile sporofitic aparin n aceeai msur ameliorrii ct i producerii de semine deoarece ele sunt, de fapt, i tehnici de meninere i nmulire a liniilor respective. Dintre acestea, cele mai frecvent utilizate sunt: a) Autopolenizarea n stadiul de buton floral, n special la varz are mari anse de reuit deoarece, se pare c mecanismul de autoincompatibilitate sporofitic devine funcional abia o dat cu deschiderea florilor. b) ndeprtarea stigmatului este o tehnic aplicat tot la varz. Autopolenizarea fragmentului de stil rmas dup extirparea stigmatului duce la obinerea unui numr relativ mic de semine. c) Modificarea mediului imediat al organelor reproductive. Tot la varz, o atmosfer cu un coninut sporit n CO2 nsoit de temperaturi ridicate ale aerului favorizeaz autofecundarea formelor autoincompatibile. d) Tratamente aplicate organelor florale pot i ele s favorizeze autopolenizarea formelor autoincompatibile sporofitic i dintre aceste tratamente cele mai comune sunt urmtoarele: - iradierea stilurilor i tratamente hormonale aplicate florilor; - autopolenizarea stigmatelor supuse ocurilor termice sau electrice; - ndeprtarea exudatului stigmatului i nlocuirea lui cu un altul prelevat de la plante compatibile (care nu posed alelele S ale plantei ce trebuie autopolenizat). n practica meninerii i nmulirii liniilor consangvinizate autoincompatibile sporifitic se folosesc doar unele din aceste tehnici i anume: autopolenizarea n faz de buton floral; autopolenizarea florilor deschise, n condiii de izolare perfect i cu o umiditate relativ a aerului ridicat; nmulirea vegetativ, prin butai de tulpin i dezvoltarea mugurilor axilari; culturile de meristeme in vitro, care aduc cea mai ridicat rat de multiplicare a liniilor respective. n ceea ce privete autoincompatibilitatea gametofitic, dei este cea mai rspndit n natur, inclusiv la plantele horticole alogame, folosirea ei n crearea i meninerea liniilor consangvinizate cunoate, deocamdat, o arie mai restrns. Principalele specii horticole alogame la care se manifest fenomenul de incompatibilitate gametofitic sunt pomii fructiferi (mrul, prul, cireul, viinul, prunul), dar la acetia nu se lucreaz i probabil nici nu se va lucra vreodat cu linii consangvinizate n vederea crerii de hibrizi comerciali F1. La celelalte specii horticole alogame la care fenomenul este prezent (morcov, varz, ceap, mac, lalea etc.) folosirea lui n crearea de linii consangvinizate autoincompatibile este nerentabil economic i biologic, deoarece, la speciile respective, se cunosc i se folosesc mult mai lesnicios n acest scop alte fenomene genetice cum sunt: autoincompatibilitatea sporofitic (varz), androsterilitate genetic-citoplasmatic (morcov, ceap, ridichi etc.). Schema 46

general de folosire a autoincompatibilitii gametofitice n crearea, meninerea i utilizarea liniilor materne autoincompatibile, este aplicabil, n principal, la cteva specii autogame cum sunt: tomatele, gura leului, lptuca, fasole. La unele din aceste specii (tomate, salat, fasole) se cunosc forme androsterile genic i citoplasmatic, dar acestea nu pot fi folosite n crearea de linii materne deoarece la aceste specii polenizarea strin este asigurat exclusiv prin insecte colectoare de polen, florile fiind lipsite de nectar. Deci o linie matern androsteril nu este vizitat de insecte colectoare de polen, cu alte cuvinte se va produce smn hibrid numai dac va fi polenizat manual cu polenul liniei paterne ceea ce, evident ridic foarte mult costul seminei comerciale hibride. Acesta este unul din motivele pentru care, n ultima vreme, se ncearc tot mai mult, la aceste specii, obinerea de linii materne autoincompatibile gametofitic, linii ce nu ar necesita castrarea n lotul de hibridare i la care polenizarea strin cu polen de la linia patern ar fi asigurat de insectele colectoare de polen.
4.2.3.4. Metodologia meninerii i nmulirii liniilor consangvinizate androsterile ale plantelor horticole alogame cu ajutorul apomixiei

Anumite tipuri de nmulire apomictic pot fi folosite cu succes n vederea nmulirii i meninerii liniilor consangvinizate androsterile, evitndu-se astfel dou faze extrem de importante i de costisitoare ale producerii de smn la linia matern androsteril, i anume: nu mai este necesar crearea unei linii analoage androfertile (rfrf N ) nerestauratoare de fertilitate; pentru producerea seminei liniei materne androsterile nu mai sunt necesare ncruciri ntre acestea i linia omoloag androfertil nerestauratoare. Dintre multiplele tipuri de apomixie cunoscute, cel mai uor pot fi folosite: nmulirea vegetativ prin bulbili (ceap, praz) i micropropagarea in vitro prin culturi de meristeme. La praz, o metod relativ simpl de inducere a formrii bulbililor este aceea a izolrii vrfului de cretere a semincerilor n pungi de hrtie pergamentat, de culoare nchis. Inflorescenele formate n izolatoare vor conine un numr apreciabil de bulbili (Schweisguth, 1972). La ceap, inducerea formrii bulbililor poate fi realizat prin tierea pedunculilor florali (Andrew, 1975). Operaiunea se execut cu ajutorul unei foarfeci, nlturndu-se cea mai mare parte a butonilor florali, nainte ca membrana pergamentoas ce nvelete inflorescena s se deschid. Dup aceast operaie se nvelete n pungi de hrtie pergamentoas, recoltarea bulbililor fcndu-se n august. Bulbilii astfel obinui pot fi pstrai la frig (3-4C) sau se vor planta n paturi calde, n primul an, i n cmp, n cel de al doilea an, pentru a se realiza cultura de seminceri a liniei respective. Micropropagarea in vitro prin culturi de meristeme ctig tot mai mult teren n meninerea i nmulirea liniilor consangvinizate materne androsterile sau autoincompatibile. Metoda poate fi cu adevrat eficient pentru meninerea i nmulirea liniilor consangvinizate materne doar dac rspunde urmtoarelor cerine: micropropagarea s se poat realiza industrial, rapid i fr cheltuieli prea mari; aclimatizarea neoplantulelor s se fac uor i rapid, fr pierderi de plante; variabilitatea somaclonal ce nsoete micropropagarea in vitro s nu duc la obinerea unor plante ale liniei materne la care androsterilitatea a fost restaurat sau incompatibilitatea nlturat.

47

4.2.4. Metodologia producerii seminei comerciale hibride F1 la plantele horticole alogame

Principiul metodologic al producerii seminei comerciale hibride la plantele horticole alogame se bazeaz pe organizarea unor loturi de hibridare n care cele dou linii parentale sunt ncruciate forat, semiliber sau liber, smna hibrid recoltndu-se, de regul, exclusiv de pe linia matern. La plantele horticole alogame la care se cultiv hibrizii comerciali, nu se practic folosirea de linii materne androfertile sau autoincompatibile care s necesite castrare manual. Aceasta, deoarece la majoritatea acestor specii (ceap, praz, varz, morcovi, ridichi etc.) florile au dimensiuni mici i foarte mici, ceea ce face operaiunea de castrare la scara unui lot de hibridare extrem de dificil sau chiar imposibil de realizat. Castrarea chimic, pe de alt parte, este i ea dificil de realizat i nu ntotdeauna prezint o eficien biologic ridicat. Cel mai adesea, la aceste specii, linia matern component a hibridului comercial este fie androsteril, fie autoincompatibil, evitndu-se astfel necesitatea castrrii ei. Linia patern trebuie s fie androfertil restauratoare de fertilitate dac producia hibridului comercial este reprezentat de semine sau fructe sau cnd acesta urmeaz a fi folosit ca form parental patern ntr-un lot de hibridare cu un alt hibrid simplu n vederea obinerii seminei comerciale dublu-hibride F1 (HD), aa cum este cazul la ridichi. Dac producia hibridului comercial simplu este reprezentat de bulbi, rdcini, cpni etc., linia patern nu trebuie s fie neaprat androfertil restauratoare. Un alt principiu de baz n producerea seminei comerciale hibride l reprezint izolarea n spaiu. Loturile de hibridare, la plantele horticole alogame, vor fi izolate n spaiu la cel puin 1500-2000 m de orice alt cultivar al speciei respective sau ale unor specii nrudite cu care se poate ncrucia. Dei infuzia de gene strine, la acest nivel, nu are efectele dezastruoase pe care le-ar avea n cazul impurificrii liniilor este bine ca acest fenomen s fie totui evitat deoarece el influeneaz negativ mai ales uniformitatea plantelor la hibrizii F1 comerciali ceea ce duce la scderea cantitativ i deprecierea calitativ a produciei acestora. Exist mai multe modele metodologice de ncruciare n lotul de hibridare n funcie de tipul liniei materne: a) Linia matern este androsteril, genic i citoplasmatic, cu o singur gen pentru adrosterilitate (ex. ceap, ridichi) Linia rfrf S x RfRf N; (RfRf N); rfrf N linie Deoarece la hibrizii F1 de ceap i ridichi produsul principal este reprezentat de bulbi i, respectiv, de rdcini, ca linie patern poate fi folosit i o form androfertil nerestauratoare. Polenizarea plantelor liniei materne se face liber cu ajutorul insectelor. Smna hibrid F1 se recolteaz exclusiv de la plantele liniei materne. b) Linia matern este androsteril, genic i citoplasmatic, cu dou gene pentru adrosterilitate, ambele recesive (ex. floarea soarelui ornamental).
Rf1Rf1rf2rf2 N ; (Rf1rf1rf2rf2 N );

rf1rf1rf2rf2 S x

rf1rf1Rf2Rf2 N ; (rf1rf1Rf2rf2 N); Rf1Rf1Rf2Rf2 N etc. rf1rf1rf2rf2 N

48

Folosirea ultimului tip de linie patern (androfertil nerestauratoare) are, la hibrizii de floarea soarelui ornamental, un efect deosebit de favorabil: toate florile plantelor hibride vor fi sterile ceea ce duce la un aspect decorativ aparte i la prelungirea perioadei n care planta manifest efectul decorativ. c) Linia matern este androsteril, genic i citoplasmatic, cu dou gene pentru adrosterilitate, una recesiv i una dominant (ex. morcov). Linia matern: aaBB S (aaBb) S AABB S (AABb) S (AaBB) S (AaBb) S aabb S Linia patern: AAbb N (Aabb) N aaBB N etc. N

Parantezele ce nsoesc unele genotipuri semnific faptul c, dup mai multe generaii de consangvinizare pentru obinerea i meninerea liniei este puin probabil ca aceasta s fie heterozigot tocmai la locii pentru androsterilitate, dar teoretic, exist i aceast posibilitate. d) Linia matern este autoincompatibil sporifitic (ex. varz). Liniile de tipul S1S1 i S2S2, homozigote, sunt autoincompatibile dar intercompatibile. Obinerea hibridului simplu este uor de realizat prin plantarea, n lotul de hibridare n spaiu, a celor dou linii parentale autoincompatibile: Linia A: S1S1 x Linia B: S2S2 S1S2 smn comercial hibrid ce va da natere la plante autoincompatibile cu un procent foarte mic de plante compatibile. Acest lucru intereseaz mai puin sau deloc la varz unde hibrizii F1 sunt destinai doar produciei de cpni. De remarcat c smna comercial hibrid, conform acestei scheme metodologice, poate fi recoltat de pe plantele ambelor linii parentale aflate n lotul de hibridare.
4.2.4.1. Metodologia producerii seminei comerciale dublu hibrid F1 la plantele horticole alogame

La unele specii horticole alogame producerea seminei hibride F1 simple este destul de anevoioas tehnic i foarte costisitoare, economic. Este cazul n special la ridichi i la varz la care apar dificulti n obinerea seminei comerciale hibride F1 simple, datorit faptului c: liniile parentale materne, androsterile sau autoincompatibile, produc cantiti mici de semine prin polenizare cu polen de la linia patern, datorit depresiunii de consangvinizare care afecteaz puternic fertilitatea lor femel; este necesar un volum de material biologic foarte mare pentru a obine i a nmuli liniile consangvinizate materne; nmulirea liniilor consangvinizate materne autoincompatibile, la varz, se face prin metode complicate, cu un mare consum de manoper; costurile de producie ale seminei simplu hibride sunt adesea att de ridicate nct nu sunt acoperite de sporurile de producie i de calitate realizate de hibrizi. Din aceste motive, cu precdere la ridichi i varz, se impune, ca o soluie de surmontare a dificultilor amintite, recurgerea la hibrizi dubli F1 la care producerea de semine ar fi extrem de eficient datorit heterozisului pe care l-ar manifesta cele dou forme parentale (hibrizi simpli). 49

La ridichi, obinerea seminei dublu hibrid presupune existena a trei consangvinizate: androsterile, androfertile nerestauratoare i androfertile ncruciarea acestora se face conform schemei: P: Linia A Linia B Linia C x rfrf S rfrf N rfrf S fr castrare x fert.nerest. fr castrare HS AB rfrf S fr castrare

tipuri de linii restauratoare. Linia D Rfrf N androfert., restaurator

CD rfrf S androfertil, parial restaurator

HD

ABCD Rfrf N 50% + rfrf S 50% Smna comercial dublu hibrid va da natere la o populaie a cultivarului respectiv n care doar din indivizi sunt androfertili. La ridichi acest lucru nu are nici un fel de important deoarece hibrizii comerciali sunt destinai exclusiv produciei de rdcini. La varz, avnd n vedere c liniile parentale sunt autoincompatibile, schema de obinere a seminei comerciale dublu hibride ar fi urmtoarea: Linia B Linia C Linia D P: Linia A S1S1 S2S2 S3S3 S4S4 HS S1S2 S3S4 HD S1S3 + S1S4 + S2S3 + S2S4 Este clar c pentru obinerea de hibrizi dubli la aceast specie, pe baza formulei de mai sus, sunt necesare patru linii autoincompatibile, fiecare fiind homozigot ntr-o alt pereche de alele ale genei S. Loturile de hibridare vor fi izolate n spaiu, polenizarea fcndu-se liber de ctre insecte. Smna dublu hibrid, n cazul ridichilor, va fi recoltat exclusiv de pe rndurile cu HS matern n timp ce la varz ea poate fi recoltat de pe toate plantele lotului de hibridare.

50

51

52

53

54

55

56

57

58

Centre ISTIS

Organizarea ISTIS

59