Variabilitatea: apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor.
Suportul material al ereditii: ADN. Structura i replicarea acestuia este similiar cu cea de la celulele eucariote.
Proporia de baze complementare este constant n cadrul unei specii. Raportul adenin-timin/guanin- citozin (AT/GC) servete drept criteriu taxonomic de baz n clasificarea modern a bacteriilor. I. Organizarea materialului genetic la bacterii Repliconi = formaiuni genetice ce se replic independent
codific informaiile absolut necesare supravieuirii speciei n condiii normale
organizarea supercoil sau supertwist a ADN (dublu spiralat spre dreapta i suprahelicat spre stnga) asigur mpachetarea economic a ADN i o configuraie optim activitii funcinale a ADN (replicare, transcripie, recombinare).
2. Formaiunile genetice extracromozomiale 2.1 Plasmidele : molecule circulare de ADN autonome, libere n citoplasm care se replic independent de cromozom
conjugative - se pot transfera singure la alte bacterii (plasmidele R)
neconjugative - care nu pot prsi ele nsi bacteria de origine, ci numai prin intermediul unui alt plasmid conjugativ sau a unui bacteriofag (de exemplu plasmidul care codific secreia de beta-lactamaz la S.aureus)
episomi, care se pot integra prin recombinare n cromozomul bacterian, pierzndu-i autonomia de replicare (plasmidul F sau factorul de fertilitate).
determinanii genetici eseniali ai plasmidelor codific informaiile legate de replicarea lor autonom determinanii accesori codific caractere fenotipice neeseniale supravieuirii celulei bacteriene n condiii naturale gene de transfer (tra), gene de rezisten la antibiotice (factorul R), gene de secreie a unor toxine etc.
Plasmide de interes medical A. Plasmidele de virulen poart determinanii genetici ai unor factori de virulen secreia de enterotoxina (termolabil i termostabil) factorul de colonizare la Escherichia coli, hemolizina la Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis i E.coli exfoliantina la S. aureus gena de invazivitate la Shigella B. Plasmidele R -de rezisten (Factorul R) sunt molecule circulare de ADN care constau n esen din dou regiuni genetice:
genele care codific rezistena la antibiotice R, unice sau multiple (prin aglomerarea mai multor gene de rezisten R, pe acelai plasmid, prin fenomenul transpoziiei repetate de material genetic)
genele FTR care confer plasmidului capacitatea de a se transfera
RTF R determinant Peste 90% din tulpinile de spital prezint o rezisten de tip plasmidic: familia Enterobacteriaceae, genurile:Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Providencia, Klebsiella, Serratia genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio, Yersinia, Pasteurella, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria, Bacteroides, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, Clostridium, i Corynebacterium. Plasmidele prezente la bacilii gram-negativi sunt mai mari dect cele evideniate la bacteriile gram-pozitive. C. Plasmidul F plasmid de de sex factor de fertilitate i conine genele de transfertra -se pot transmite prin conjugare- mediaz transferul de gene de la o celul donor la una receptor -n funcie de prezena factorului bacterii F- lipsite de factorul F, denumite celule femele i care sunt receptoare de material genetic, bacterii F+, masculine, care au factorul F+, autonom, ca plasmid n citoplasm i care sunt celule donoare, bacterii Hfr care au factorul F+ integrat n cromozom, de asemenea masculine, bacterii F care au factorul F+ ca plasmid autonom, dup ce acesta a fost integrat n cromozom i l-a prsit rupnd un fragment ADN din cromozom. 2.2 Bacteriofagii
virusuri care pazariteaz bacteriile Morfologie. un cap hexagonal alctuit dintr-un nveli proteic caracteristic virusurilor (capsida) i adpostete ADN un gt o prelungire numit picior (coad). Coada este un cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic asemntor miozinei i se termin cu o plac hexagonal ce conine o enzim de tipul lizozimului. De placa bazal se aprind 6 fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa bacteriei. Structura bacteriofagului Coa d Fibrele Placa bazal Cap, capsid Manon contractil Infecia celulei gazd cu bacteriofag Ataarea ireveversibil-prin existena unor receptori de perete specifici Adsorbia fagului Injectarea acidului nucleic Contracia manonului Tipuri de bacteriofagi Genomul fagic ptruns n celul duce la sinteza unor bacteriofagi identici cu cei din care a provenit ADN. ADN-ul se replic ribozomii bacterieni vor sintetiza proteinele capsidale i ale cozii Asamblarea noilor componente bacteriofagul prsete celula= bacteriofagi litici sau viruleni fagi care se multiplic n interiorul celulei gazd, lizeaz celula i elibereaz fagii progeni=ciclu litic lizogeni sau temperai: fagi care se integreaz n cromozomul celulei gazd dar care pot iniia oricnd un ciclu litic, expresia majoritii genelor fagice fiind reprimat : profag sau fag lizogen Consecinele lizogeniei profagul codific el nsui unele caractere pe care le dobndete bacteria lizogen. toxigeneza la bacilul difteric care este codificat de un profag ce se afl n cromozomul bacterian. Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina i sunt, deci, nepatogene, transducia- transmiterea de material genetic prin intermediul bacteriofagilor 2.3 Elemente genetice transpozabile Barbara Mc Clintock, 1931, 1952, 1983(gene sltree) Fragmentele de inserie (IS)
fragmente mici de ADN (fac parte in mod normal din plasmid/cromozom) cu limite structurale bine precizate se pot integra repetat n mai multe situsuri dintr-un genom. Transpozoni (Tn) Constau in 2 IS conin i alte gene dect cele ce codifica transpoziia Transpozaz ABCDEFG GFEDCBA IS IS Gene de rezisten IS IS Gene de rezisten II. Variabilitatea la bacterii Este o latur a geneticii -important n medicina practic Mutaia Transfer de material genetic Transformare Transducie Conjugare Transpoziie 1. Mutaia Modificri spontane ale genomului (modificri ale secvenei de nucleotide din gen)produse de : raze X, UV, ageni alchilani, etc. Punctiform afecteaz 1 nucleotid Inseria (adugare a sute de nucleotide) Deleia (pierdere ) Asigur: rezistena la chimioterapice, structur antigenic modificat, pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi, pierderea capacitii de sintez a unui metabolit Dpdv medical: one-step:rezistena brusc la AB multi-step:bacteria devine rezistent prin mutaii succesive 2. Transferul de material genetic 2.1 Transformarea Reprezint transferul de material genetic de la o celul donor la una receptor sub forma de ADN pur, eliberat fie prin liza celulei donor, fie prin extracie chimic 1928 - Fred Griffith. Streptococcus, Haemophilus, Bacillus, Neisseria, Salmonella se petrece nu numai ntre tulpinile aceleiai specii, ci i ntre specii diferite stare de competen - se modific structura peretelui celular, care devine mai poros, ncrcat electropozitiv, favoriznd legarea ADN-lui strin are loc n medii unde triesc mai multe specii bacteriene(colon) i sunt puse n libertate cantiti mai mari de de ADN Se practic azi n tehnici de inginerie genetic 2.2 Transducia : transfer de gene cromozomiale de la o celul bacterian la alta, mediat de bacteriofagi Transducia generalizat este mediat de fagii viruleni, litici, care dup ptrunderea n celula bacterian se multiplic i determin liza celulei gazd. n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se fragmenteaz ocazional: un fragment cu o dimensiune apropiat de cea a genomului fagic se integreaz n capsida bacteriofagului, n locul genomului fagic. aceti fagi pot ptrunde n alte celule bacteriene injectndu-le ADN-ul, ce provine de fapt din genomul celulei donoare. ADN-ul se va integra n cromozomul celulei receptoare prin recombinare, conferindu-i acesteia caractere noi: rezistena la chimioterapice, proprieti ce in de patogenitatea bacteriei etc Transducia specializat: mediat de fagii temperai. Dup ptrunderea n celula bacterian a ADN-lui bacteriofagului temperat, acesta se inser n cromozom prin recombinare sub forma de profag n anumite condiii are loc un proces de derepresie i genomul bacteriofagic prsete cromozomul bacterian devenind din nou autonom si iniiaz un ciclu litic cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa din acesta un fragment de ADN care va rmne legat de genomul bacteriofagic bacteriofagul va putea intra n alt celul integrndu-se n cromozomul acesteia tot sub forma de profag. Fragmentul provenit de la prima celul bacterian poate s codifice diferite caractere rezistena la antibiotice, secreia unor enzime, toxine etc., ce se vor manifesta fenotipic la noua bacterie gazd. 2.3 Conjugarea transferul de material genetic de la o bacterie donoare la una receptoare printr-un proces de mperechere, ce se realizeaz prin contactul direct dintre cele dou celule. Prin conjugare se pot transmite plasmide, precum i gene cromozomiale (prin intermediul factorului F+)
Factorul F+ poate fi situat pe: plasmid transfer conditionat de existenta genelor tra, responsabile de sinteza sex-pilului si transferul plasmidului sau pe cromozom-transfer de gene cromozomale. Aceste celule , care au factorul F integrat in cromozom, numite Hfr (frecenta mare a recombinarii genelor de la celula donoare cu cele de la celula receptoare).
Conjugarea la BGN
F+ F + Hfr F +
F -
F +
F -
F +
F +
F +
F +
Hf r F -
Hf r F -
Hf r F - Hf r F -
Transferul prin conjugare a plasmidelor la bacilii gram negativi- condiionat de prezena genelor de transfer tra incepe cu sinteza sex-pilului care va adera de receptori specifici prezeni pe peretele celular al bacteriei receptoare apoi - replicarea de transfer a plasmidului o caten parental de ADN va rmne n celula donor, iar a doua va trece n celula receptoare, pe tiparul lor sintetizndu-se catene complementare.
Dpdv medical importante sunt plasmidele conjugative de rezisten R. Proprieti: spectrul de gazde: circul ntre specii diferite. Acest transfer are loc i n laborator i n macroorganism. (s-a descris transferul de plasmide de la bacilul coli nepatogen la salmonele sau shigelle. Nu s-a observat ns transferul plasmidelor de la bacterii gram-negative la cele gram- pozitive); determinanii de rezisten R: caracteristici pentru plasmidele conjugative sunt determinanii de rezisten multipli. S- au evideniat astfel la tulpinile izolate din spital plasmide ce au factori de rezisten fa de toate chimioterapicele uzuale (ampicilina, cefalosporine, streptomicina, tetraciclina, cloramfenicol, kanamycina, gentamicina, sulfonamide). . Conjugarea la bacterii gram-pozitive
procese de mperechere i la bacteriile gram-pozitive Streptococcus, Streptomyces, Clostridium celula receptoare produce un peptid cu mol. mic (GM=1000 daltoni) care determin sinteza unor substane proteice de agregare de ctre celula donoare cu afinitate pentru unele substane adezive de pe suprafaa receptorului se produce astfel o legtur strns ntre receptor i donor cu formarea unei puni intercelulare care permite transferul de material genetic. 2.4. Transpoziia integrarea ntr-un genom al unui elemente genetic transpozabil din aceeai molecul de ADN sau din alta prezent n aceeai celul . Clasa I-transpoziia se face pe baza translocrii conservative(secvena se mut de la donor la receptor fr reduplicarea Tn) IS au n jur de 1000 baze i fac parte n mod normal din cromozom sau plasmide sunt prezente n mai multe copii i flancate la cele 2 capete ale aceleiai baze, dar n ordine invers Nu confer caracter nou celulei-pot produce modificri n expresia genelor Tn compui = 2 Is i delimiteaz determinani de rezisten sau alte caractere Clasa II Clasa III Inseria oricrei gene ntre dou elemente transpozabile face posibil transferul ei prin recombinare neomolog, n aceeai celul pe o molecul de ADN nenrudit structural. Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii, transpuneri de determinani genetici de pe un plasmid pe altul sau chiar fuzionarea stabil a unor repliconi complei, de pild a dou plasmide. Evoluia rezistenei la antibiotice a bacteriilor nu poate fi conceput astzi fr fenomenul de transpoziie. Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de formarea plasmidelor cu multirezisten, prin inserarea succesiv pe un plasmid a determinanilor genetici de rezisten situai ntre dou elemente transpozabile de pe alte plasmide. Ingineria genetic Existena vectorilor (plasmide, bacteriofagi i n ultimul timp descoperirea existenei unor transpozoni ce se pot transmite de la o celul bacterian la alta) permite transferul de gene celulei bacteriene, ceea ce consituie baza ingineriei genetice. Bacteria preferat a ingineriei genetice este E.coli, care n mod natural nu este capabil de transformare, dar creia prin clonare i s-au introdus n genom cei mai diveri determinani genetici provenind de la organisme ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i animalele. Prin aceast tehnic se introduc n genomul bacterian gene care codific sinteza unor substane ca, de exemplu, interferoni, insulin, STH etc., a cror obinere pe cale chimic ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare. Aplicaiile biotehnologiei moleculare n diagnosticul clinic Au permis apariia unei noi discipline: diagnosticul molecular reprezentnd utilizarea probelor de acizi nucleici n diagnosticul bolilor boli infecioase, neoplasme, boli ereditare O alt aplicaie : amprenta ADN - permite diferenierea indivizilor prin utilizarea unor fragmente minuscule de esut sau probe de snge